Способ диагностики врожденного иммунитета слизистых оболочек носа для обоснования выбора лечения детей с гипертрофией аденоидных вегетаций



Способ диагностики врожденного иммунитета слизистых оболочек носа для обоснования выбора лечения детей с гипертрофией аденоидных вегетаций

 


Владельцы патента RU 2623121:

Федеральное государственное автономное учреждение "Научный центр здоровья детей" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГАУ "НЦЗД" Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки мукозального иммунитета слизистой оболочки носа и носоглотки. В эпителиальных клетках слизистой оболочки полости носа определяют экспрессию генов рецептора врожденного иммунитета (TLR2) и противомикробного пептида (HBD2), и при соотношении показателя HBD2 к TLR2 меньше 0,1 диагностируют нарушение мукозального иммунитета, что является обоснованием хирургического метода лечения. Способ позволяет определить показания для хирургического лечения у пациентов с воспалительными заболеваниями ЛОР-органов. 1 табл., 4 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к оториноларингологии, и может быть использовано для оценки мукозального иммунитета слизистой оболочки носа и носоглотки.

Гипертрофия аденоидных вегетаций (АВ) у детей представляет серьезную медико-социальную проблему, обусловленную распространенностью этой патологии и широким кругом заболеваний, индуцированных гипертрофией и хроническим воспалением АВ. В структуре патологии ЛОР-органов гипертрофия АВ наблюдается у 20-50% детского населения [Богомильский М.Р., 2007], а в группе часто болеющих детей этот показатель достигает 70%. Аденотомии составляют основной объем хирургических вмешательств в детской оториноларингологии.

Однако, принимая во внимание тот факт, что в лимфоидной ткани носоглотки формируется мукозальный иммунитет ЛОР-органов, показания к хирургическому лечению поражений небных и глоточной миндалин значительно сужены. Гипертрофия лимфоидной ткани, возникающая как средство иммунной защиты при инфекции, очень часто и определяет вопрос об удалении аденоидов. В связи с этим необходима разработка и внедрение более точных диагностических тестов, позволяющих определить состояние мукозального иммунитета слизистой оболочки носоглотки с целью обоснованного выбора метода лечения гипертрофии АВ.

В настоящее время системе врожденного иммунитета отводится ключевая роль в защите слизистых оболочек от различных патогенов. Известно, что врожденный иммунитет является первой линией защиты организма от внешних патогенов и продуктов тканевой деструкции. Паттерн-распознающие рецепторы (в частности Toll-подобные рецепторы -TrRs) обеспечивают распознавание патогенов, а также индуцируют синтез эффекторных молекул, таких как цитокины, хемокины и противомикробные пептиды (ПМП). Бетта-дефензины продуцируются клетками слизистых оболочек и осуществляют защиту от патогенов. Анализ компонентов врожденного иммунитета (TrRs, ПМП) слизистой оболочки полости носа у детей с гипертрофией АВ имеет важное значение для оценки прогноза заболевания, дополнительного обоснования метода лечения.

Известен способ оценки состояния местного иммунитета слизистой оболочки полости носа в ринологической практике, включающий определение состояния местного иммунитета, при этом в носовом секрете определяют содержание лизоцима, sIgA, измеряют индекс авидности sIgA, рассчитывают индекс иммунного напряжения по формуле

где ИAsIgA - индекс авидности sIgA;

sIgA - содержание секреторного иммуноглобулина А, мг/л;

Liz - содержание лизоцима, мкг/мл;

100 - постоянный коэффициент для более наглядного отображения результатов,

и при значении ИИН 0,99±0,36 определяют высокую степень иммунного напряжения, 0,18±0,11 - низкую степень иммунного напряжения, при нормальном значении ИНН 0,45±0,15 (Патент РФ №2297633).

Известен способ оценки экспрессии генов распознающих рецепторов врожденного иммунитета Toll-подобных рецепторов, противомикробного пептида HBD-2 в клетках слизистой оболочки полости носа у детей с гипертрофией аденоидных вегетаций. Уровень экспрессии исследуемых генов определялся в пробах, полученных из эпителиальных клеток слизистой оболочки полости носа методом полимеразной цепной реакции в реальном времени. Предложенный способ позволил оценить состояние системы врожденного иммунитета на уровне слизистой оболочки полости носа при различных заболеваниях ЛОР-органов и определить тактику лечения. Были обследованы 49 детей в возрасте от 2 до 8 лет с гипертрофией аденоидных вегетаций, группу сравнения составили 12 здоровых пациентов той же возрастной группы (Ковальчук Л.В., Рахманова И.В., Ганковская Л.В., Ганковский В.А. «Роль компонентов врожденного иммунитета в защите слизистой оболочки полости носа в норме и при гипертрофии аденоидных вегетаций». «Вестник оториноларингологии», изд. Медиа Сфера. Москва. 2011, №6, с. 73-75).

Известен способ оценки врожденного иммунитета, а именно Тоll-подобных рецепторов у детей с бронхиальной астмой, которой основан на измерении уровня экспрессии TLR2 и TLR9 на мононуклеарных клетках периферической крови методом проточной цитометрии. (High expression of Toll-like receptors 2 and 9 and Th1/Th2 cytokines profile in asthmatic children, Sánchez-Zauco N, Del Rio-Navarro B, Gallardo-Casas C, Del Rio-Chivardi J, Muriel-Vizcaino R, Rivera-Pazos C, Huerta-Yepez S, Cruz-López M, Maldonado-Bernal C. Allergy Asthma Proc. 2014 May-Jun; 35 (3):34-41). По данным исследования отмечается увеличение экспрессии рецепторов TLR2 и TLR9 у детей астматиков относительно группы здоровых детей.

Известен способ оценки врожденного иммунитета у детей с бронхиальной астмой, согласно которому в соскобах со слизистой полости носа с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени определяют уровень экспрессии генов Toll-подобных рецепторов TLR2, TLR9 и при одновременном повышении уровней экспрессии указанных генов, по меньшей мере, в 20 и 9 раз соответственно, по сравнению с их уровнем, установленным для здоровых детей, диагностируют нарушение врожденного иммунитета, приводящее к обострению бронхиальной астмы на фоне острой респираторной инфекции (Заявка на патент РФ №2016125181 от 24.06.2016 г.).

Известен способ оценки показателей врожденного иммунитета слизистой оболочки полости носа, основанный на измерении Toll-подобных рецепторов TLR2, TLR4, TLR9 и генов противомикробных пептидов HBD1, HBD2 и HNP1, участвующих в реализации врожденного иммунитета, у детей с гипертрофией аденоидных вегетаций II и III степени и здоровых детей. Пациентов разделили на 3 группы: тех, кому была показана консервативная терапия (группа I, 39 участников), тех, кому была произведена аденотомия (группа II, 38 участников), и контрольную группу (33 участника). В качестве клинического материала использовали соскоб эпителиальных клеток слизистой полости носа (группа I и контроль) и соскоб со слизистой глоточной миндалины (группа II). Достоверных различий в экспрессии генов по типу биологического материала не наблюдали. Уровни экспрессии изучаемых генов в группе I не отличались достоверно от показателей контрольной группы. В группе II было отмечено достоверное увеличение экспрессии генов TLR2 и TLR4 в 15,4 и 10,3 раза соответственно. Значительное увеличение уровней экспрессии генов TLR с одновременным снижением экспрессии генов противомикробных пептидов приводит к снижению защиты слизистых оболочек и может быть одной из причин развития аденоидитов и средних отитов. Это может быть дополнительным обоснованием хирургического метода лечения (М.Р. Богомильский, О.А. Свитич, В.А. Ганковский, И.В. Рахманова. Особенности врожденного иммунитета у здоровых детей и у детей с гипертрофией аденоидных вегетаций. ВЕСТНИК РГМУ 2015, №4, с. 24-27).

Недостатком способа является его трудоемкость, он требует большого количества дорогостоящих реактивов, анализ и интерпретация шести показателей для обоснования метода лечения гипертрофии АВ в клинике затруднительны.

Способ выбран нами в качестве прототипа.

Задачей заявляемого способа является разработка достоверного способа диагностики врожденного иммунитета слизистых оболочек носа, т.е. показателей мукозального иммунитета у детей с гипертрофией аденоидных вегетаций.

Техническим результатом осуществления поставленной задачи является выработка критериев оценки показателей мукозального иммунитета для обоснования выбора лечения.

Сущность изобретения состоит в том, что в эпителиальных клетках слизистой оболочки полости носа определяют экспрессию двух показателей врожденного иммунитета: генов рецептора врожденного иммунитета (TLR2) и генов противомикробного пептида (HBD2) и при соотношении показателя HBD2 к TLR2 меньше 0,1, выбирают хирургический метод лечения гипертрофии аденоидов, в противном случае проводят консервативное лечение.

Выбор этих показателей обусловлен тем, что TLR2 распознает широкий спектр различных патогенов. Бетта-дефенсин 2 (HBD2), синтез которого индуцируется при действии патогенов на TLR2, оказывает прямое противомикробное действие в слизистых оболочках носа. Для простоты оценки мукозального иммунитета предлагается определять коэффициент, который рассчитывается как соотношение количества копий гена HBD2 к количеству копий гена TLR2, и при значениях этого коэффициента, равных или меньшим 0,1, можно прогнозировать нарушение иммунной защиты слизистой ЛОР-органов, что служит важным критерием для обоснования хирургического метода лечения гипертрофии АВ.

Способ осуществляют следующим образом. Для изучения экспрессии генов TLR2 и HBD1 сначала получают эпителиальные клетки слизистой полости носа, затем выделяют из полученных клеток рибонуклеиновую кислоту (РНК), синтезируют на матрице РНК копию дезоксирибонуклеиновой кислоты (к ДНК) и проводят полимеразную цепную реакцию в режиме реального времени (ПЦР-РВ). Клетки слизистой полости носа получали с помощью цитощеточки типа D и отмывали от слизи культуральной средой Игла на центрифуге (1500 об/мин, 10 мин). Осадок, содержащий клетки слизистой полости носа, разбавляли культуральной средой Игла объемом 100 мкл и использовали в работе. К полученной суспензии добавляли по 100 мкл лизирующего буфера для выделения РНК. Выделение РНК проводили по стандартным протоколам. Для выделения РНК использовали наборы "Рибо-сорб" (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, АмплиСенс, РФ). Выделения РНК проводили строго по инструкции фирмы-производителя с добавлением RNA Stabilization Reagent (Qiagen, Германия). Полученные образцы нуклеиновых кислот хранили при температуре минус 70°С. Количество полученной РНК оценивали с помощью NanoDrop 2000 (Thermo Scientific). В реакции обратной транскрипции использовали 0,2 мкг РНК. Реакцию обратной транскрипции проводили с использованием наборов ОТ-1 (Синтол, РФ). Полученные образцы кДНК хранили при температуре минус 70°С. В качестве контроля прохождения реакции обратной транскрипции и для стандартизации метода использовали ПЦР-систему на определение экспрессии гена β-актина (Синтол, РФ). Полимеразную цепную реакцию в реальном времени ставили с использованием наборов реактивов для проведения ПЦР-РВ в присутствии SYBR Green I (Синтол, Россия) и специфических праймеров. В готовую смесь добавляли по 2 мкл кДНК, полученной при реакции обратной транскрипции. Условия прохождения ПЦР со специфическими праймерами к исследуемым генам были смоделированы с помощью программы VectorNTI 8,0 в соответствии с последовательностями мРНК, опубликованными в базе данных Gene Bank. Отрицательным контролем служила проба с реакционной смесью, не содержащая мРНК. ПЦР в реальном времени проводят на приборе ДТ-96 (ДНК-технология, РФ) по следующей схеме (94°С 15 с и 60°С 50 с) 40 циклов. Полученные результаты анализировали с помощью лицензированной программы, прилагающейся к прибору ДТ-96. Расчет количества копий TLR2 проводили относительно 1×106 копий β - актина.

Клинические примеры осуществления способа

Пример 1. Ребенок А., 5 лет, поступил на прием к ЛОР-врачу с жалобами на затруднение носового дыхания, покашливание по утрам в течение года, храп в ночное время. Из анамнеза известно, что ребенок 2 раза перенес двусторонний острый средний катаральный отит, 1 раз двусторонний острый средний гнойный отит, ОРИ в сочетании с острым аденоидитом 4 раз за последний год. При ЛОР-осмотре: Носовое дыхание затруднено, слизистая оболочка носа розовая, средние носовые ходы свободны, в общих носовых ходах слизь. Миндалины II степени, стекает слизь из носоглотки, уши: AD et AS слуховые проходы широкие, свободные. МТ AD et AS бледные, просвечивает экссудат. Была произведена тимпанометрия, по результатам которой определялся тип «В» на оба уха, что указывало на наличие двустороннего экссудативного среднего отита. При проведении аудиограммы определяется двусторонняя кондуктивная тугоухость I степени. При диагностической эндоскопии носоглотки: В носоглотке определяется лимфоидная ткань, практически полностью прикрывающая просвет хоан. Лимфоидная ткань отечная, покрыта слизью. Глоточные устья слуховых труб не обозримы. Трубные валики обычных размеров. Был поставлен диагноз: Гипертрофия аденоидных вегетаций III степени с блоком глоточных устьев слуховых труб. Аденоидит. Двусторонняя кондуктивная тугоухость I степени. Двусторонний экссудативный средний отит. По предложенной методике определяли уровень экспрессии гена TLR2, который составил 77,625*103, и уровень генов противомикробного пептида (HBD2), который составил 0,302*103. Результат представлен в количестве копий к ДНК исследуемого гена по отношению к 1 млн количества копий гена актина.

Коэффициент соотношения HBD2/ TLR2=0,003890451.

По сравнению со средними показателями здоровых детей (таблица 1, пример 4) отмечено достоверное увеличение экспрессии генов TLR2 и снижение экспрессии противомикробного пептида HBD2, что свидетельствует о нарушении врожденного иммунитета слизистых оболочек, приводящего к частым ОРВИ, отитам. Это явилось еще одним обоснованием для назначения хирургического метода лечения. Рекомендовано: аденотомия под эндоскопическим контролем. После проведения оперативного лечения слух восстановился, тимпанограмма тип «А» с двух сторон, аудиограмма - слух в пределах нормы. Показатели врожденного иммунитета спустя 3 мес после оперативного вмешательства практически не отличались от показателей здоровых детей и составили для гена TLR2 1,1*103 и для HBD2 - 7,9*103. Коэффициент HBD2/ TLR2=7,2.

Пример 2. Ребенок К., 5 лет, поступил на прием к ЛОР-врачу с жалобами на затруднение носового дыхания в течение 4 месяцев, гнусавость. За последний год ребенок 4 раза перенес эпизоды ОРИ и аденоидита, дважды перенес острый средний катаральный отит. Ребенок посещает детский сад. При осмотре: носовое дыхание затруднено, слизистая розовая, в общих носовых ходах слизь, средние носовые ходы свободные, миндалины II степени, скудная слизь. Отоскопия: МТ AD et AS бледные, контурируются. Проведена тимпанометрия, по результатам которой определялся тип «А» на оба уха. Проведена диагностическая эндоскопия носоглотки: в носоглотке определяется лимфоидная ткань, на 1/2 прикрывающая просвет хоан. Лимфоидная ткань практически не отечная, скудная слизь. Глоточные устья слуховых труб обозримы. Был поставлен диагноз: Аденоиды II степени. Аденоидит, остаточные явления. Со слизистой полости носа был получен соскоб и методом ПЦР в реальном времени определена экспрессия генов TLR2 и HBD2. Уровень экспрессии гена TLR2 составил 2,188*103, гена HBD2 - 6,607*103. Результат представлен в количестве копий кДНК исследуемого гена по отношению к 1 млн количества копий гена актина. Коэффициент HBD2/ TLR2=3,01995172. Изменений в показателях врожденного иммунитета не выявлено. Больному назначено консервативное лечение.

Пример 3. Ребенок С., 4 года, поступил на прием к ЛОР-врачу с жалобами на затруднение носового дыхания в течение 6 месяцев, храп в ночное время, кашель по утрам, периодически переспрашивает. Из анамнеза известно, что ребенок болел ОРИ и аденоидитом пять раз за последний год. Эпизоды острого среднего отита за последний год не отмечались. Ребенок посещает детский сад. При осмотре: носовое дыхание затруднено, слизистая розовая, средние носовые ходы свободны, в общих носовых ходах вязкая слизь. Миндалины II степени, по задней стенке глотки стекает слизь. МТ AD et AS бледные, втянутые. Проведена тимпанометрия, по результатам которой определялся тип «С» на оба уха. Ребенку была сделана диагностическая эндоскопия носоглотки: В носоглотке определяется лимфоидная ткань, на 2/3 прикрывающая просвет хоан. Лимфоидная ткань отечная, покрыта слизью. Глоточные устья слуховых труб прикрыты отечной лимфоидной тканью. Был поставлен диагноз: Острый аденоидит, двусторонний тубоотит, гипертрофия аденоидных вегетаций II-III степени. Со слизистой полости носа был получен соскоб и методом ПЦР определена экспрессия генов TLR2 и HBD2. Уровень экспрессии гена TLR2 составил 5,012*103, гена HBD2 - 2,754*103. Результат представлен в количестве копий кДНК исследуемого гена по отношению к 1 млн. кол-ва копий гена актина. Коэффициент HBD2/ TLR2=0,549540874. Больному назначено консервативное лечение.

Пример 4. Ребенок В., 5 лет, поступил на диспансеризацию к ЛОР-врачу. Активных жалоб не предъявляет. Спит с закрытым ртом. За последний год болел ОРИ 2 раза, при этом острых средних отитов, экссудативных средних отитов выявлено не было. При осмотре: носовое дыхание свободное, слизистая оболочка полости носа розовая, Общие и средние носовые ходы свободны. Миндалины II степени, без налетов и наложений. Задняя стенка глотки розовая, чистая. Отоскопия: МТ AD et AS бледные, контурируются. Проведена тимпанометрия, по результатам которой определялся тип «А» на оба уха. Проведена диагностическая эндоскопия носоглотки: В носоглотке определяется лимфоидная ткань, на 1/3 прикрывающая просвет хоан. Лимфоидная ткань не отечная. Глоточные устья слуховых труб обозримы. Трубные валики обычных размеров. Со слизистой полости носа был получен соскоб и методом ПЦР определена экспрессия генов TLR2 и HBD2. Уровень экспрессии гена TLR2 составил 1,175*103, уровень экспрессии гена HBD2 составил 19,50*103. Результат представлен в количестве копий кДНК исследуемого гена по отношению к 1 млн количества копий гена актина. Коэффициент HBD2/ TLR2=16,59586907. Нарушения в мукозальном иммунитете не выявлены. Был поставлен диагноз: здоров, аденоиды I степени.

Способ осуществляли на базе детской Морозовской больницы и «НЦЗД» МЗ РФ.

В таблице 1 представлены обобщенные данные экспрессии генов молекул врожденного иммунитета (TLR2 и HBD2) в слизистой оболочке носа у здоровых детей в возрасте от 3-х до 7-ми лет, детей с гипертрофией аденоидов II и III степени, которым показано консервативное лечение (группа I), у часто болеющих детей с гипертрофией лимфоидной ткани носоглотки, сопровождающейся частыми отитами и ОРВИ, которым показано хирургическое лечение (группа II).

Было выявлено, что у детей с аденоидами II-III, III степени, у которых отмечаются эпизоды ОРИ и аденоидитов более 6 раз за год острые средние, с экссудативными средними отитами, снижением слуха (группа II), отмечено резкое увеличение экспрессии гена распознающего рецептора TLR2, сочетается со сниженной экспрессией гена противомикробного пептида бета-дефензина - HBD2. Исследуемый коэффициент HBD2/ TLR2 у детей этой группы детей менее 0,1. В то время как в группе детей, которым показано консервативное лечение (группа I), этот коэффициент определяется в диапазоне от 0,1 до 10. У здоровых детей значения коэффициента более 10. Выявленный дисбаланс в распознающих и эффекторных молекулах врожденного иммунитета может быть одной из причин возникновения аденоидита, гипертрофии лимфоидной ткани носоглотки, которая, в свою очередь, может приводить к блоку глоточных устьев слуховых труб, средним отитам, а это, в свою очередь, является показанием для оперативного лечения.

Предлагаемый способ прост, доступен для применения в большинстве клиник и, несомненно, будет способствовать правильному ведению пациентов с воспалительными заболеваниями ЛОР-органов.

Использование способа позволяет решить важную практическую задачу в определении тактики и методов лечения различных воспалительных заболеваний ЛОР-органов, что весьма важно в практическом отношении и основано на конкретных показателях.

Способ диагностики врожденного иммунитета слизистых оболочек носа для обоснования выбора лечения детей с гипертрофией аденоидных вегетаций, включающий определение экспрессии Toll-подобных рецепторов и генов противомикробных пептидов, участвующих в реализации врожденного иммунитета, отличающийся тем, что в эпителиальных клетках слизистой оболочки полости носа определяют экспрессию генов рецептора врожденного иммунитета (TLR2) и противомикробного пептида (HBD2), и при соотношении показателя HBD2 к TLR2 меньше 0,1 диагностируют нарушение мукозального иммунитета, что является обоснованием хирургического метода лечения.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования плацентарной недостаточности при повреждающем действии цитомегаловирусной инфекции на содержание общего холестерола в третьем триместре гестации.

Изобретение относится к медицине и предназначено для определения степени риска развития отдаленных метастазов у больных раком ободочной кишки. Проводят исследование молекулярных характеристик в опухоли ободочной кишки и в неизмененной ткани: X1 - химотрипсинподобная активность протеасом в опухоли, ⋅103 Ед/мг белка; Х2 - химотрипсинподобная активность протеасом в неизмененной ткани, ⋅10 Ед/мг белка; Х3 - общая кальпаиновая активность в опухоли, ⋅10 Ед/мг белка; Х4 - общая кальпаиновая активность в неизмененной ткани, ⋅10 Ед/мг белка; учитывают Х5 - возраст пациентов, после чего рассчитывают значения Y1 и Y2 по дискриминантным уравнениям:Y1=0,039*X1+0,126*X2+0,775*X3-0,083*X4-0,040*X5-23,51; и Y2=0,015*X1+0,115*X2+0,509*X3-0,026*X4-0,026*X5-13,84, и при Y1>Y2, пациента относят к группе с низким риском развития отдаленных метастазов; при Y1<Y2 - к группе с высоким риском развития отдаленных метастазов рака ободочной кишки.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способа прогнозирования степени вероятности полной регрессии при проведении неоадъювантной химиотерапии у пациенток с трижды негативным молекулярно-генетическим субтипом рака молочной железы.

Изобретение относится к области медицины, а именно производственной и клинической трансфузиологии, и раскрывает способ морфофункционального анализа тромбоцитов, пригодных для криоконсервирования.
Изобретение относится к медицине и предназначено для определения показаний к местному и/или системному противогерпетическому лечению центральных бактериальных язв роговицы с затяжным течением.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для подбора режима интенсивности аэробных тренировок в реабилитации больных с хронической сердечной недостаточностью.
Изобретение относится к медицине и предназначено для профилактики фетоплацентарной недостаточности (ФПН) у беременных с хронической болезнью почек (ХБП). Назначают антиагрегантное средство в профилактической дозе.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству. Способ диагностики преэклампсии у беременных с хронической болезнью почек (ХБП) заключается в том, что в крови беременной определяют растворимую fms-подобную тирозинкиназу и плацентарный фактор роста, вычисляют отношение первой величины ко второй и при величине этого отношения более 20 во втором триместре беременности и при величине этого отношения более 65 в третьем триместре беременности диагностируют преэклампсию.

Группа изобретений относится к области взятия и стабилизации цельной крови или ее компонентов. Устройство для сбора и стабилизации цельной крови или ее компонента содержит первый конец и второй конец и по меньшей мере одну внутреннюю стенку, образующую резервуар.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для количественного определения ацетилсалициловой кислоты и ее основного метаболита салициловой кислоты в плазме крови человека.

Изобретение относится к медицине и касается способа комплексной оценки эффективности полихимиотерапии у больных с рецидивной лимфомой Ходжкина, заключающегося в том, что до начала лечения и после проведения трех противорецидивных курсов полихимиотерапии исследуют развернутую протеинограмму в комплексе с оценкой морфоструктуры сыворотки крови методами клиновидной и краевой дегидратации и при появлении дефектных форм сферолитов, нарушении агрегации макро- и микросферолитов, трансформации анизоморфонов злокачественного роста вплоть до скелетирования остаточных структур крупных сферолитов, формировании нормотипов фаций с радиальной и частично радиальной симметрией трещин, восстановлении системы концентрационных волн в краевой зоне фаций, при нормализации показателей белкового обмена режим полихимиотерапии признают эффективным и полихимиотерапию продолжают по той же схеме, в обратном случае выполняют смену схемы лечения с заменой применяемых цитостатиков. Изобретение обеспечивает своевременную комплексную оценку эффективности противоопухолевого химиотерапевтического лечения у больных с рецидивной лимфомой Ходжкина для определения дальнейшей тактики лечения. 2 ил., 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и касается способа оценки тяжести состояния больного и риска летального исхода по уровню фенилмолочной кислоты в крови. Сущность способа заключается в том, что в крови больных количественно определяют концентрацию фенилмолочной кислоты (ФМК). Состояние больных определяют как стабильно тяжелое в случаях, если уровень ФМК в крови повышен не более чем 2 раза от среднего физиологического значения (риск летального исхода <25%). Крайне тяжелое состояние определяют в случаях, если уровень ФМК в крови повышен в 2-3 раза (риск летального исхода 25-50%). Предельно тяжелое - в случаях, если уровень ФМК в крови повышен более чем в 3 раза (риск летального исхода >50%). Использование способа позволяет с высокой точностью оценить тяжесть состояния больного и риск летального исхода. 2 пр., 2 ил.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования гематогенного метастазирования при инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы у пациенток с плохим ответом на неоадъювантную химиотерапию, согласно которому осуществляют исследование инфильтративного компонента новообразования на светооптическом уровне, отличающийся тем, что проводят морфологическое исследование строения ткани опухоли и в ходе гистологической оценки инфильтративного компонента новообразования определяют альвеолярные, тубулярные, трабекулярные, солидные структуры и дискретные группы опухолевых клеток, и при наличии альвеолярных структур прогнозируют высокий риск гематогенного метастазирования. Изобретение обеспечивает упрощение способа при сохранении точности и информативности. 2 табл., 2 пр., 1 ил.

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования достоверности динамики фиброза печени у пациентов с ХГС, генотипом 1, не ответивших на двухкомпонентную противовирусную терапию пегилированными интерферонами и рибавирином. Определяют групповую принадлежность крови в сочетании с исследованием полиморфизма гена IL28B, при этом в 100% случаев отмечалось прогрессирование фиброза печени у пациентов с группой крови Аβ (II) и одно- или двухнуклеотидной заменой цитозина на тимин (С>Т) в локусе rs 12979860 и одно- или двухнуклеотидной заменой тимина на гуанин (T>G) в локусе rs 8099917 гена IL28B. Способ позволяет провести отбор пациентов для безинтерфероновой терапии, что исключает отрицательную динамику фиброза печени у данной категории пациентов и снижает затраты на лечение. 4 табл.

Изобретение относится к диагностике, а именно к способу диагностики крови на наличие паразитарных заболеваний по изменению лейкограммы после ультразвукового воздействия, включающему: воздействие на образцы крови, помещенные в термостатируемую кювету, бегущей модулированной ультразвуковой волной; обработку образцов крови в абсолютно одинаковых условиях; поддержание постоянной температуры образцов в кюветах с проточным охлаждением и анализ морфологического состояния клеток методами световой микроскопии; при начале гемолиза эритроцитов через 18-30 с, уменьшении количества лимфоцитов в 1,7-3,5 раза, а сегментоядерных нейтрофилов в 1,5-4,0 раза, деформации и разрушении ядер и изменении структуры цитоплазмы, ее вакуолизации, а также при ядерном сдвиге влево диагностируют наличие паразитарного заболевания. Вышеописанный способ позволяет быстро и эффективно диагностировать наличие паразитарных заболеваний. 11 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к ветеринарии, и может быть использовано для биохимического определения активности протеолитических ферментов в крови. Способ включает использование препарата энтерокиназы, инкубирование с последующей фотометрией. В качестве препарата энтерокиназы используют надосадочную жидкость, полученную следующим образом: при убое животных или птиц берут соскоб слизистой оболочки 12-перстной кишки, предварительно промытый холодным физиологическим раствором, смешивают с раствором Рингера в соотношении 1:10 и гомогенизируют до однородной консистенции. После этого центрифугируют при 5000 об/мин в течение пяти минут и отбирают надосадочную жидкость, полученный препарат энтерокиназы добавляется к плазме крови в следующих соотношениях, мл: плазма крови 2,0-3,0, препарат энтерокиназы 0,1-0,2. Содержимое пробирки в количестве 0,1 мл инкубируют субстратом в течение 5 минут, результат учитывают при фотометрии с длиной волны 450 нм по количеству гидролизованного субстрата ферментативной реакции и расчету протеолитической активности. Использование данного способа позволяет определять активность протеолитических ферментов в плазме крови для изучения состояния поджелудочной железы. 2 табл., 1 ил.

Изобретение относится к области хранения образцов биологического материала, а именно к твердофазным носителям иммобилизации и хранения биологических образцов. Твердофазный носитель для иммобилизации и хранения образцов, содержащих нуклеиновые кислоты, представляет собой пористую целлюлозную основу, обработанную композицией, содержащей детергент, слабое основание, хелатообразующий агент и дисахарид. Изобретение обеспечивает увеличение срока хранения образцов при комнатной температуре без разрушения нуклеиновых кислот, а также позволяет осуществить стерилизационную обработку носителя от «примесной» ДНК или РНК без потери свойств носителя. 13 з.п. ф-лы, 4 табл., 4 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторному исследованию биологической жидкости (супернатанта, плазмы или сыворотки крови), и может быть использовано для определения оптимального для конкретного больного моноэндоцеллюлярного криоконсерванта для хранения клеток при -80°С. Способ характеризуется проведением сравнительного исследования зональных структур высушенных капель супернатантов с различными криоконсервантами, замороженными до температуры минус 80°С, а также до и спустя определенные интервалы времени после испытания на модели трансфузии in vitro. При аналогичности структуропостроения центральных, срединных и краевых зон контрольного и опытного микробиопрепаратов примененный криоконсервант оценивают как оптимальный для конкретного больного. Способ позволяет проводить индивидуальный скрининг криоконсерванта на раннем доклиническом этапе проявления критического расстройства гомеостаза субъекта криопротекторного генеза. 1 табл.

Изобретение относится к диагностике, а именно к способу оценки фибринолитической активности слезной жидкости. Способ оценки фибринолитической активности слезной жидкости включает отбор слезы из нижнего конъюнктивального свода глаз, титрование анализируемой слезной жидкости путем проведения серии из двукратных разведений с помощью буферного раствора, добавление к полученным образцам латексного реагента, содержащего мышиные моноклональные антитела к Д-димеру фибрина, далее смесь перемешивают, регистрируют реакцию агглютинации в пробе при наибольшей величине разведения и рассчитывают концентрацию Д-димера по формуле:С(Д-димер)=200×d, нг/мл,где С - концентрация Д-димера (нг/мл), d - наибольшая величина разведения, 200 - чувствительность реагента, при этом концентрацию Д-димера 3200 нг/мл считают пороговой для подтверждения повышения активности системы фибринолиза слезной жидкости для оценки фибринолитической активности слезной жидкости с использованием в качестве маркера концентрацию Д-димера в слезной жидкости в слезной жидкости. Вышеописанный способ позволяет эффективно проводить оценку фибринолитической активности слезной жидкости. 2 пр.

Способ относится к медицине и предназначен для выбора тактики лечения острых кишечных инфекций у детей раннего возраста. При выявлении в остром периоде заболевания интоксикационного синдрома и уровня сывороточной мочевины 2 ммоль/л и ниже определяют дисбиоз кишечника, протекающий с метаболической эндотоксемией на фоне избыточного размножения протеолитических кишечных бактерий, и назначают проведение дезинтоксикационной терапии. При выявлении воспалительного синдрома и уровня мочевины более 2 ммоль/л определяют дисбиоз кишечника, протекающий с дефицитом функциональной активности микрофлоры, и назначают антибактериальное лечение. Способ позволяет повысить точность и обоснованность выбора предлагаемого лечения. 1 пр., 1 табл., 1 ил.
Наверх