Способ определения биологического возраста трупа

Изобретение относится к области медицины, а именно к судебно-медицинской экспертизе, криминалистике, и предназначено для определения биологического возраста трупа. В коре неповрежденного мозжечка трупа определяют расстояние между грушевидными нейронами, их высоту при расположении ганглионарного слоя по диаметру объектива с помощью гистологического исследования и процентное содержание иммунопозитивных грушевидных нейронов к белку S100 с помощью иммуногистохимического исследования. При расстоянии, равном 160-200 мкм, высоте, равной 40 мкм и более, и количестве иммунопозитивных грушевидных нейронов к белку S100 15% и менее делают вывод о биологическом возрасте трупа 20-30 лет. При расстоянии - 201-230 мкм, высоте - 38 мкм и менее и количестве иммунопозитивных грушевидных нейронов к белку S100 более 15% делают вывод о биологическом возрасте трупа 60-70 лет. Использование изобретения обеспечивает возможность определения биологического возраста трупа по одному фрагменту - мозжечку - с высокой точностью. 2 пр.

 

Изобретение относится к судебной медицине, а именно к судебно-медицинской экспертизе, криминалистике, и предназначено для определения биологического возраста трупа при фрагментации тела.

По литературным данным проблема судебно-медицинской идентификации личности всегда была объектом особого внимания, и значительную актуальность она приобретает в случаях массовых жертв при техногенных чрезвычайных ситуациях, сопровождающихся фрагментацией тел. Вследствие глубоких термических поражений кожи особые приметы (рубцы, татуировки) утрачивают свое диагностическое значение. При этом визуальное опознание погибшего зачастую невозможно (Баринов Е.Х., Щербаков В.В., Федулова М.В., Гончарова Н.Н. Идентификация личности при чрезвычайных ситуациях с массовыми человеческими жертвами / под ред. Ю.И. Пиголкина. - М.: «Медицинский информационно-аналитический центр», 2008. - 235 с.).

Известен способ определения биологического возраста трупа при длительной кровопотере по экспрессии иммуногистохимических маркеров Ki67, р53 и bcl-2 в базальном слое эпидермиса (Пиголкин Ю.И., Должанский О.В. Способ определения биологического возраста трупа при длительной кровопотере. - Патент на изобретение РФ №2013152075/15 от 25.11.2013).

Недостатки: необходимость исследования участков кожи в семи областях тела: шеи, груди, спины, ягодиц, передневнутренней поверхности бедра, передней поверхности предплечья и подошвенной поверхности стопы и невозможность использования способа при обширных повреждениях кожи либо отсутствии некоторых фрагментов тела.

Известен способ определения биологического возраста трупа при повторной кровопотере по экспрессии иммуногистохимических маркеров elastin, fibrillin, amyloid Р, vitronectin, fibulin-5 в сосочковом слое дермы неповрежденной кожи (Пиголкин Ю.И., Должанский О.В. Способ определения биологического возраста трупа при повторной кровопотере. - Патент на изобретение РФ №2013152076/15 от 25.11.2013).

Недостатки: необходимость исследования участков кожи в семи областях тела: шеи, груди, спины, ягодицы, передневнутренней поверхности бедра, передней поверхности предплечья и подошвенной поверхности стопы и невозможность использования способа при обширных повреждениях кожи либо отсутствии фрагментов тела.

Технический результат: возможность определения биологического возраста трупа по одному фрагменту - мозжечку - при высокой точности способа.

Поставленная задача решается способом определения биологического возраста трупа, заключающимся в том, что в коре полушарий неповрежденного мозжечка определяют расстояние между грушевидными нейронами, их высоту при расположении ганглионарного слоя по диаметру объектива и процентное содержание иммунопозитивных грушевидных нейронов к белку S100, и при расстоянии, равном 160-200 мкм, высоте, равной 40 мкм и более, и количестве иммунопозитивных грушевидных нейронов к белку S100 15% и менее делают вывод о биологическом возрасте трупа 20-30 лет; при расстоянии, равном 201-230 мкм, высоте, равной 38 мкм и менее, и количестве иммунопозитивных грушевидных нейронов к белку S100 более 15% делают вывод о биологическом возрасте трупа 60-70 лет.

Практически способ осуществляют гистологическим исследованием тканей (Саркисов Д.С., Перов Ю.Л. Микроскопическая техника. - М.: Медицина. - 1996. - С. 4-50, 339-445) следующим образом:

Исследуют участки коры мозжечка, например, в верхней полулунной дольке на вершине извилины в обоих полушариях.

Кусочки фиксируют в 10% растворе забуференного по Лилли формалина (рН-7,2) в течение 24 часов (Петров, С.В., Киясов А.П. Иммуногистохимическая диагностика опухолей человека: руководство для врачей-морфологов. - Казань, 1998. - 165 с.).

Материал промывают в проточной воде в течение 30 минут, а затем подвергают обезвоживанию и заливке в парафин по следующей схеме: спирт 60,0% - 2 часа, спирт 70,0% - 2 часа, спирт 96,0% - 2 часа, спирт 96,0% - 2 часа, спирт + ксилол (1:1) - 2 часа, ксилол + парафин (1:1) - 2 часа, парафин I 56° - 2 часа, парафин II 56° - 1 час.

Кусочки заливают в парафиновые блоки.

На ротационном микротоме изготавливают гистологические срезы толщиной 4-6 микрон.

Часть срезов окрашивают методом Ниссля (по Снесареву) (Хонин Г.А., Барашкова С.А., Семченко В.В. Морфологические методы исследования в ветеринарной медицине: Учебное пособие. - Омск: Омская областная типография, 2004. - С. 93-94). Приготавливают красящий раствор: 0,2 г тионина растирают в ступке, постоянно добавляя дистиллированную воду (100 мл). Доводят до кипения, тщательно перемешивают, фильтруют через мелкопористый фильтр.

Собранные в 96% спирте целлоидиновые срезы толщиной 8-9 мкм прогревают до появления пузырьков и охлаждают. Также прогревают и охлаждают срезы в красящем растворе. Промывают дистиллированной водой - 2-кратно.

Проводят через 96% спирт (под контролем микроскопа до исчезновения фонового окрашивания) - 2-кратно. Просветляют, заключают срезы. В результате ядра, ядерные структуры нейронов и глиальных клеток, тигроид (вещество Ниссля) окрашиваются в сине-фиолетовый цвет.

Количественный (морфометрический) анализ исследуемых гистологических образцов проводят с использованием программного пакета BioVision, version 4,0 (Австрия). Захват изображений обеспечивают использованием цифровой камеры для микроскопа САМ V200, Vision (Австрия). Размеры гистологических объектов выражают в мкм.

Морфометрический анализ включает измерение расстояния между грушевидными нейронами при расположении ганглионарного слоя по диаметру объектива (объектив ×10) и их высоту (объектив ×40). В каждом препарате проводят от 5 до 10 измерений, после чего вычисляют средние величины и стандартные отклонения для каждого случая, а также средние величины в группе.

Иммуногистохимические исследования выполняют по стандартным протоколам. Используют концентрированные первичные моноклональные мышиные антитела к S100 протеину клон 4С4.9 (Lab Vision США). Рабочее разведение 1:100. Система визуализации KP50L (Diagnostic BioSystems, USA). Парафиновые срезы наклеивают на предметные стекла с адгезивным полилизиновым покрытием (Thermo Scientific, Menzel-Glaser Polysine® Slides 25×75×1,0 mm, Gerhard Menzel GmbH).

С целью восстановления антигенных детерминант после формалиновой фиксации депарафинизированные срезы подвергают нагреванию: срезы помещают в 0,01 М цитратный буфер (рН-6,0) и кипятят в течение 20-30 минут, затем - в трис-буфер (рН-7,5) на 5 минут, обрабатывают 0,3% раствором перекиси водорода (пероксидазный блок), после чего проводят инкубацию с первичными антителами в течение 10-30 минут во влажной камере (Петров, СВ., Киясов А.П. Иммуногистохимическая диагностика опухолей человека: руководство для врачей-морфологов. - Казань, 1998. - 165 с.). Перед использованием концентрированные антитела разводят растворителем антител (Primary Antibody Diluent, Diagnostic BioSystems, USA) в титре 1:100, согласно инструкции фирмы-производителя антител. При проведении иммуногистохимических исследований используют позитивные контроли, рекомендованные фирмой-производителем.

Затем срезы трехкратно промывают в трис-буфере, после чего подвергают экспозиции с вторичными антителами (мышиные и кроличьи биотинилированные антитела) (Diagnostic BioSystems, USA) в течение 10 минут, промывают в трис-буфере, обрабатывают конъюгированным с пероксидазой стрептавидином в течение 10 минут и подвергают окрашиванию DAB+(3,3'-диаминобензидин) (Diagnostic BioSystems, USA) в течение 1-2 минуты, не допуская появления фонового окрашивания. Промывают в 2-3 порциях дистиллированной воды в течение 10-15 минут и докрашивают гематоксилином Майера. Срезы заключают в канадский бальзам и исследуют в проходящем свете микроскопа при увеличении ×400.

При просмотре препаратов на светооптическом уровне антиген-позитивные грушевидные нейроны идентифицируют по появлению коричневого окрашивания. Подсчитывают все грушевидные нейроны в срезе. Определяют процент иммунопозитивных клеток.

С помощью данных методов изучались ткани коры мозжечка, полученные при судебно-медицинском исследовании 240 трупов (120 лиц мужского пола и 120 лиц женского пола) в возрасте от 18 до 85 лет, не имеющих повреждений и патологических изменений мозжечка.

Проведенный статистический анализ установил, что расстояние между грушевидными нейронами, их высоту и иммуногистохимический маркер белок S100 можно использовать для определения биологического возраста трупа человека.

Примеры конкретного выполнения.

Пример 1.

Согласно акту судебно-медицинского исследования на месте происшествия были обнаружены фрагменты расчлененного трупа мужчины с ожоговой травмой лица и шеи III-IV степени. Ожоговая травма не позволяла определить биологический возраст трупа.

Следственные органы интересовал биологический возраст трупа.

При микроскопическом исследовании коры мозжечка выявили, что расстояние между грушевидными нейронами варьирует от 160 до 198 мкм, высота грушевидных нейронов при расположении ганглионарного слоя по диаметру объектива составляет от 42 до 54 мкм, а количество иммунопозитивных грушевидных нейронов к белку S100 составляет 8%.

На основании указанных признаков был сделан вывод, что расчлененные фрагменты трупа принадлежат лицу, биологический возраст которого составляет 20-30 лет (нормативные данные для этой возрастной группы включают: расстояние между грушевидными нейронами 160-200 мкм, высота грушевидных нейронов 40 мкм и более, количество иммунопозитивных грушевидных нейронов к белку S100 - 15% и менее).

Пример 2.

Согласно акту судебно-медицинского исследования в лесу был обнаружен труп мужчины с сочетанными повреждениями мягких тканей лица, костей лицевого отдела черепа и множественными открытыми ранами стенки грудной клетки. Травматическое повреждение мягких тканей лица и костей лицевого отдела черепа затрудняло определение возраста пострадавшего.

Следственные органы интересовали следующие вопросы: 1. Могли ли травма лица и ранения грудной клетки привести к смерти? 2. Биологический возраст трупа.

При микроскопическом исследовании коры мозжечка выявили, что расстояние между грушевидными нейронами варьирует от 201 до 227 мкм, высота грушевидных нейронов при расположении ганглионарного слоя по диаметру объектива составляет от 29 до 37 мкм, а количество иммунопозитивных грушевидных нейронов к белку S100 составляет 34%.

На основании указанных признаков был сделан вывод, что труп принадлежит лицу, биологический возраст которого составляет 60-70 лет (нормативные данные для этой возрастной группы включают: расстояние между грушевидными нейронами 201-230 мкм, высота грушевидных нейронов 38 мкм и менее, количество иммунопозитивных грушевидных нейронов к белку S100 - более 15%).

Способ по изобретению позволяет определять биологический возраст человека и более объективно решать задачи, поставленные перед судебно-медицинским экспертом следственными органами.

Способ определения биологического возраста трупа путем исследования его тканей, отличающийся тем, что в коре неповрежденного мозжечка определяют расстояние между грушевидными нейронами, их высоту при расположении ганглионарного слоя по диаметру объектива с помощью гистологического исследования и процентное содержание иммунопозитивных грушевидных нейронов к белку S100 с помощью иммуногистохимического исследования, и при расстоянии, равном 160-200 мкм, высоте, равной 40 мкм и более, и количестве иммунопозитивных грушевидных нейронов к белку S100 15% и менее делают вывод о биологическом возрасте трупа 20-30 лет; при расстоянии, равном 201-230 мкм, высоте, равной 38 мкм и менее, и количестве иммунопозитивных грушевидных нейронов к белку S100 более 15% делают вывод о биологическом возрасте трупа 60-70 лет.



 

Похожие патенты:

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и касается способа выделения антилиганда, представляющего собой антитело или его антигенсвязывающий вариант, производное или фрагмент, каркасную молекулу со сконструированными вариабельными поверхностями; рецептор или фермент, к дифференциально-экспрессирующемуся целевому лиганду.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен способ для идентификации субъекта с депрессией или имеющего риск развития депрессии, который имел бы положительный эффект от или ответил на режим лечения, включающий фолат-содержащее соединение, где указанный субъект идентифицируется таким, как указанно выше при условии детекции в генотипах двух локусов наличия аллеля с тимином Т в положении 677 (в гене MTHFR) и аллеля с гуанином G в положении SNP2756 (в гене MTR).

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к клеточной инженерии, и может быть использовано для определения биологической активности IFN-γ. Получают линию клеток меланомы человека PiGAS с регистрационным номером ВКПМ Н-161 путем трансфекции родительской линии клеток меланомы человека MelP плазмидой pGAS(x6)-Luc//Neo, кодирующей репортерную конструкцию 6xGAS-Luc, состоящую из последовательности SEQ ID NO: 1, включающую 6 повторов сайта связывания транскрипционного фактора STAT-1, минимального промотора SV-40 и гена люциферазы светлячка Photinus pyralis (Luc), а также последовательности SEQ ID NO: 2, включающую ген устойчивости Neo к селективному антибиотику G418 под контролем своего конститутивного промотора PGK-1.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике в медицине неотложных состояний и к экспериментальной медицине, и может быть использовано для оценки степени тяжести любой этиологии у пациентов и лабораторных животных.

Настоящее изобретение относится к определению уровня маркерных пептидов в образце, полученном из физиологической жидкости субъекта, поступившего в отделение неотложной помощи с неспецифическими жалобами.
Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантации органов и клинической лабораторной диагностике, может быть использовано при ведении пациентов после трансплантации сердца для диагностики отторжения трансплантированного сердца.

Настоящее изобретение относится к способу стратификации терапии обморока у пациента путем определения уровня СТ-проЕТ-1 в образце жидкости организма указанного пациента, корреляции уровня СТ-проЕТ-1 со стратификацией терапии обморока, где пациентов стратифицируют в соответствии с их потребностью в кардиостимуляторе посредством определения уровня СТ-проЕТ-1.
Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для прогнозирования развития плацентарной недостаточности в первом триместре беременности у женщин после процедуры экстракорпорального оплодотворения.

Способ относится к области медицины, а именно к аллергологии в педиатрии, детской гастроэнтерологии, и может быть использован для диагностики аллергической энтеропатии, индуцированной белком коровьего молока у детей грудного возраста.

Изобретение относится к области медицины, а именно к области гастроэнтерологии и онкологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития аденокарциномы желудка.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к мутеинам белка липокалина, а также к полученным на их основе специфично связывающимся терапевтическим или диагностическим белкам, направленным против гепсидина, и может быть использовано в медицине. Получают мутеин липокалина, по меньшей мере на 90% идентичный последовательности белка, выбранной из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-14. Изобретение позволяет получить мутеин липокалина, способный связываться с гепсидином с аффинностью, определенной по константе диссоциации (KD), равной приблизительно 10 нМ или менее. 19 н. и 54 з.п. ф-лы, 12 ил., 11 пр.
Изобретение относится к офтальмологии и предназначено для прогнозирования интраоперационных геморрагических осложнений при тяжелой форме пролиферативной диабетической ретинопатии. Сущность способа: проводят определение уровня VEGF-A в сыворотке крови и при его концентрации, равной или более 300 пг/мл, прогнозируют интраоперационные геморрагические осложнения. Способ обеспечивает возможность разработки дифференцированной дооперационной тактики подготовки пациента к хирургическому вмешательству, направленной на снижение риска интраоперационных геморрагических осложнений у пациентов группы риска. 4 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, и может быть использовано при обследовании больных для прогнозирования развития нефросклероза у детей с хроническим пиелонефритом. Сущность способа: в крови больного определяют уровень гомоцистеина и при его значении больше 7 мкмоль/л у детей до 10 лет и 9 мкмоль/л у детей старше 10 лет прогнозируют высокий риск развития склеротических изменений в почечной ткани. Предложенный способ позволяет прогнозировать развитие склеротических изменений в ткани почек у детей с хроническим пиелонефритом, что позволит в максимально ранние сроки назначать нефропротективную терапию тем пациентам, которые в ней нуждаются. В свою очередь, вовремя начатая и адекватная нефропротекция будет способствовать замедлению прогрессирования хронической болезни почек. Изобретение позволяет более точно прогнозировать развитие нефросклероза у детей, а также не подвергать больных дополнительному забору крови и инвазивным методам диагностики, не требует дополнительного инвазивного вмешательства, использования дорогостоящей аппаратуры и радиофармпрепарата и может быть выполнено в амбулаторных условиях. 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине и касается способа стимуляции выработки эритропоэтина клетками костного мозга in vitro. Для этого CD4+-клетки костного мозга культивируют в СO2-инкубаторе при 37°С, 5% СО2 и 100% влажности воздуха в течение 24 часов. Инкубацию осуществляют в культуральной среде следующего состава: 90% среды RPMI-1640, 10% ЭТС, 280 мг/л L-глутамина, 50 мг/л гентамицина, 50 мкМ ингибитора фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K). Способ обеспечивает повышение выработки эритропоэтина за счет стимулирующего действия ингибитора PI3K на секреторную функцию CD4+-клеток. 1 табл., 1 пр.

Группа изобретений относится к способу калибровки составного анализа, включающему: добавление калибровочного реагента, включающего по меньшей мере две различные связывающие молекулы, где каждая молекула обладает способностью специфичного связывания с агентом захвата и способностью связываться с детектирующей молекулой и где по меньшей мере две из связывающих молекул имеют различные специфичности и присутствуют в различных концентрациях, добавление детектирующей молекулы, детектирование связанной детектирующей молекулы, создание калибровочной кривой, включающей ряд калибровочных точек/интервалов. Также группа изобретений относится к набору реагентов и составной аналитической системе. Применение группы изобретений позволяет повысить точность результатов благодаря системной вариабельности систематических анализов в течение времени. 4 н. и 16 з.п. ф-лы, 7 ил., 4 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначено для прогнозирования необходимости проведения лазерной коагуляции при ретинопатии недоношенных. Для прогнозирования необходимости лазерной коагуляции при ретинопатии недоношенных осуществляют определение массы тела новорожденного, индекс трансаминаз, представляющий собой отношение уровня аспартатаминотрансферазы к уровню аланинаминотрасферазы (АСТ/АЛТ), и количество белка быстрой фазы. При массе тела новорожденного менее 1364 грамм, индексе трансаминаз выше 0,52 и количестве белка быстрой фазы выше 9,9 мг/л прогнозируют необходимость применения лазерной коагуляции. Использование изобретения позволяет своевременно провести лазерную коагуляцию аваскулярных зон сетчатки, обеспечивая тем самым дальнейшее развитие глаза, стабилизацию зрительных функций и повышение качества жизни недоношенных детей. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ диагностики немалиновой миопатии, при котором у пациента с клинической картиной врожденной миопатии осуществляют забор биоптата скелетной поперечнополосатой мышечной ткани, проводят иммуногистохимическое выявление фактора, индуцируемого гипоксией 1-альфа (HIF-1α), для чего готовят гистологические образцы-срезы, наносят на них усилитель флуоресцентного сигнала, далее на срезы наносят белок-блокатор для уменьшения фонового неспецифического окрашивания, затем срезы инкубируют с поликлональными антителами кролика к белку HIF-1α, после промывки наносят на срезы соответствующие вторичные флуоресцентные антитела, покрывают фотозащитным реагентом и проводят люминесцентную микроскопию, а при выявлении локусов округлой и/или овальной формы красной окраски диаметром 3-5 мкм под оболочкой мышечного волокна диагностируют немалиновую миопатию. Техническим результатом изобретения является повышение надежности диагностики немалиновой миопатии. 2 ил., 2 пр.

Изобретение относится к области химии, а именно к аналитической химии, электрохимии и биохимии, и предназначено для идентификации пептидов и выявления аминокислотных замен в их структурах. Для осуществления способа на печатный графитовый электрод наносят аликвоту 60-100 мкл 50 мкМ раствора пептида в буферном растворе. Регистрируют квадратно-волновую вольтамперограмму окисления в области от 0 до 1,5 В (отн. Ag/AgCl). Измеряют потенциалы максимумов и высоты полученных сигналов окисления аминокислотных остатков - пиков или волн и фиксируют результаты. По различию в положении потенциалов максимумов сигналов окисления и их интенсивности, зная аминокислотные последовательности для группы исследуемых пептидов или имея базу данных, полученную ранее, проводят идентификацию пептидов. При сравнении результатов относительно контроля - «нормального» пептида, констатируют аминокислотную замену. Использование изобретения обеспечивает электрохимическую идентификацию пептидов и выявление в их структуре аминокислотных замен. 1 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и предназначено для оценки ранних проявлений неблагоприятного побочного действия кортикостероидных препаратов на метаболические процессы в организме ребенка при терапии нефротического синдрома. Выполняют биохимический анализ крови с определением уровня глюкозы (Агл) и амилазы (Аам) в сыворотке крови ребенка. Вычисляют индекс массы тела (Аимт). Рассчитывают коэффициент модификации Мимт – индекса массы тела, Мгл – глюкозы и Мам – амилазы по формулам: Затем рассчитывают на их основании индекс метаболических реакций (ИМР) по формуле: При значениях ИМР ≥ 16,5 ед. судят о неблагоприятных побочных реакциях кортикостероидных препаратов на метаболические процессы в организме ребенка, рекомендуют соответствующую фармакологическую коррекцию. Изобретение позволяет контролировать безопасность фармакотерапии при изменении дозы кортикостероидов либо на фоне корригирующей терапии. 9 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии и иммунологии, и может быть использовано для диагностики аллергии. Для этого осуществляют подготовку пробы биологического материала (копрофильтрат) с последующей спектрофотометрией при 405 нм. При этом берут утреннюю пробу фекалий в количестве 1 г, растворяют ее в 9 мл фосфатно-солевого буфера с 0,05% Твином 20 (ФСБТ) рН=7,2. Затем перемешивают до однородной консистенции. После чего центрифугируют в течение 10-20 мин при 3500 об/мин. Отбирают надосадочную жидкость и проводят иммуноферментный анализ на наличие аллергенспецифических IgE-антител к пищевым аллергенам с последующей спектрофотометрией. При определении оптической плотности 0,15 ед. оптической плотности и более диагностируют аллергию к конкретному аллергену. А при определении оптической плотности менее 0,15 ед. диагностируют отсутствие аллергии к конкретному аллергену. Изобретение позволяет повысить точность диагностики пищевой аллергии на 10-12%. 3 пр.
Наверх