Способ подготовки криоконсервированных тромбоцитов для трансфузии



Способ подготовки криоконсервированных тромбоцитов для трансфузии
Способ подготовки криоконсервированных тромбоцитов для трансфузии
Способ подготовки криоконсервированных тромбоцитов для трансфузии
Способ подготовки криоконсервированных тромбоцитов для трансфузии
Способ подготовки криоконсервированных тромбоцитов для трансфузии
A01N1/02 - Консервирование тел людей или животных, или растений или их частей; биоциды, например дезинфектанты, пестициды, гербициды (препараты для медицинских,стоматологических или гигиенических целей A61K; способы или устройства для дезинфекции или стерилизации вообще, или для дезодорации воздуха A61L); репелленты или аттрактанты (приманки A01M 31/06; лекарственные препараты A61K); регуляторы роста растений (соединения вообще C01,C07,C08; удобрения C05; вещества, улучшающие или стабилизирующие состояние почвы C09K 17/00)

Владельцы патента RU 2623864:

Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы Научно-исследовательский институт скорой помощи имени Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения г. Москвы (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно производственной и клинической трансфузиологии, и предназначено для заготовки тромбоцитов длительного хранения, пригодных к трансфузии. Для подготовки криоконсервированных тромбоцитов для трансфузии осуществляют следующие этапы. Размораживают контейнеры, содержащие замороженные тромбоциты, нагреванием при температуре от 37 до 40°С в течение от 2 до 4 минут. Определяют концентрацию ДМСО в размороженных криоконсервированных тромбоцитах. Определяют объем плазмы или ресуспендирующего раствора, необходимого для введения в размороженные криоконсервированные тромбоциты для получения конечной концентрации ДМСО не более 0,5%, с последующим ресуспендированием размороженных тромбоцитов данным объемом плазмы, совместимой по системе АВО, или ресуспендирующим раствором при постоянном перемешивании в течение 8-12 минут со скоростью подачи плазмы или раствора 1-3 мл в минуту. Хранят размороженные тромбоциты до трансфузии не более 4 часов при температуре от 20 до 24°С и постоянном перемешивании. Использование изобретения позволяет повысить качество получаемых после размораживания криоконсервированных тромбоцитов. 7 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 табл., 2 пр.

 

Область, к которой относится изобретение

Изобретение относится к области медицины, а именно производственной и клинической трансфузиологии, и может быть использовано для заготовки тромбоцитов длительного хранения (до 24 месяцев), пригодных к трансфузии.

Уровень техники

Известен способ подготовки криоконсервировнных тромбоцитов для трансфузии, описанный в технологии криоконсервирования тромбоцитов в присутствии 10% ДМСО, предусматривающий отмывание тромбоцитов от ДМСО и разведение плазмой тромбоцитов после размораживания [Khuri S.F., Healey N., MacGregor H. et al. Comparison of the effects of transfusions of cryopreserved and liquid-preserved platelets on hemostasis and blood loss after cardiopulmonary bypass J Thorac Cardiovasc Surg 1999; 117: 172-84]. Однако данный способ не предусматривает оценку концентрации ДМСО в замороженных тромбоцитах, что часто приводит к значительному увеличению содержания в концентрате размороженных тромбоцитов активированных клеток.

Наиболее близким к заявляемому решению является способ подготовки криоконсервированных тромбоцитов для трансфузии, описанный в технологии криоконсервирования тромбоцитов с ДМСО и хранения клеток при -80°С [С. Robert Valery, Gina Rango, and Shukri Khuri Freezing human platelets with 6 percent dimethyl sulfoxide with removal of the supernatant solution before freezing and storage at -80°C without postthaw processing II Transfusion 2005; 45: 1890-1898]. Размораживание тромбоцитов проводится в водяной бане (Thermogenesis), при температуре 36°С в течение 5 минут. Размороженную суспензию тромбоцитов разводят 10-20 мл 0,9% раствора NaCl с целью уменьшения общей концентрации клеток, увеличения объема ТК, а также для уменьшения концентрации ДМСО в дозе размороженных тромбоцитов. Проверку качества тромбоцитов после размораживания криоконсервированных тромбоцитов (КТ) проводят по следующим параметрам: количество тромбоцитов (109/мл); рН, величину R-периода на тромбоэластограмме, агрегационную активность тромбоцитов (индукторы - 50 мкг/мл арахидоновой кислоты и 2 мкМ/л АДФ); продукцию тромбоксана В2 после стимуляции 50 мкг/мл арахидоновой кислоты и 2 мкМ/л АДФ; содержание аннексин-положительных тромбоцитов. Трансфузию размороженных КТ проводят через фильтр диаметром 170 микрон.

Однако данный способ подготовки КТ для трансфузии не предусматривает определение концентрации ДМСО в размороженном ТК; использует параметры агрегометрии, тромбоэластографии и проточной цитометрии, которые не отражают структурную целостность тромбоцитов, что не позволяет оценить сохранность (в %) биологически полноценных клеток в КТ после размораживания, что не позволяет произвести адекватный расчет требуемого количества тромбоцитов для конкретного пациента; для разведения размороженных тромбоцитов используется 0,9% раствор NaCl, не обладающий буферными свойствами, что приводит к закислению среды (рН=6.5-6.6) и повышает риск повреждения тромбоцитов; разведение размороженных ТК 0,9% раствором NaCl снижает конечную концентрацию ДМСО в ТК только до 3%, что является недостаточным для достижения концентрации, нетоксичной для тромбоцитов человека (0,5%); размороженная доза ТК обладает очень высокой осмолярностью (800-860 мОсмоль/л при физиологической норме 300-380 мОсмоль/л) и повышает риск развития у пациентов посттрансфузионных реакций.

Раскрытие изобретения

Задачей изобретения является разработка способа подготовки КТ для трансфузии, обеспечивающего получение безопасного гемокомпонента с высоким содержанием биологически полноценных тромбоцитов и его хранение при температуре 20-24°С в течение 4 часов без угрозы потери структурной или функциональной полноценности тромбоцитов.

Техническим результатом, на достижение которого направлено заявленное изобретение, является повышение качества получаемых после размораживания криоконсервированных тромбоцитов за счет комплекса используемых технологических операций, параметров и режимов, позволяющих сохранить гораздо большее число биологически полноценных тромбоцитов (в 1,5-1,8 раза по сравнению с технологией по прототипу), хранить размороженные ТК при комнатной температуре в течение 4 часов без угрозы потери структурной или функциональной полноценности тромбоцитов, получить осмолярность дозы ТК, соответствующей физиологической норме, не вызывающей развития у пациентов посттрансфузионных реакций.

Поставленная задача решается тем, что способ подготовки криоконсервированных тромбоцитов для трансфузии включает следующие этапы:

- размораживание контейнеров, содержащих замороженные тромбоциты, нагреванием при температуре от 37 до 40°С в течение от 2 до 4 минут;

- определение концентрации ДМСО в размороженных криоконсервированных тромбоцитах;

- определение объема плазмы или ресуспендирующего раствора, необходимого для введения в размороженные криоконсервированные тромбоциты для получения конечной концентрации ДМСО не более 0,5%, с последующим ресуспендированием размороженных тромбоцитов данным объемом плазмы, совместимой по системе АВО, или ресуспендирующим раствором при постоянном перемешивании в течение 8-12 минут со скоростью подачи плазмы или раствора 1-3 мл в минуту;

- хранение размороженных тромбоцитов до трансфузии не более 4 часов при температуре от 20 до 24°С и постоянном перемешивании.

Концентрацию ДМСО, как правило, определяют в аликвоте размороженных криоконсервированных тромбоцитов методом газовой хроматографии. Для этого может быть использован газовый хроматограф Shimadzu GC-17A (Япония) с пламенно-ионизационным детектором и автосамплером.

В качестве ресуспендирующего раствора могут быть использованы SSP, SSP+. В зависимости от концентрации ДМСО в криоконсервированные тромбоциты вводят плазму или ресуспендирующий раствор в соотношении от 1:9 до 1:19.

Перед ресуспендированием размороженные тромбоциты из контейнера, в котором они хранились в замороженном состоянии, переводят в аэрируемый контейнер из ПВХ с фталатным пластификатором, например контейнер для получения, транспортировки и хранения тромбоцитов: 994CF-E № ФСЗ 2011/09569, 2011-04-18 от Дельрус (Россия); производитель: Haemonetics Corporation (США).

После размораживания тромбоцитов оценивают их качество по следующим параметрам: объем от 180 до 220 мл, сохранность тромбоцитов не менее 75% от исходного (определенного перед замораживанием), сохранность тромбоцитов с гранулами и тромбоцитов с адгезивной активностью не менее 50% от исходного. Перед трансфузией конкретному пациенту производят расчет дозы размороженных тромбоцитов исходя из его антропометрических характеристик по следующей формуле: (2×1011 тромбоцитов на 1 м2 поверхности тела пациента или 0,7×1011 тромбоцитов на 10 кг веса пациента).

При этом после размораживания измеряют следующие параметры тромбоцитов: количество тромбоцитов, количество тромбоцитов с гранулами и количество адгезивно активных тромбоцитов. Данную информацию наносят на контейнер для последующего выбора контейнера с необходимыми параметрами для трансфузии конкретному пациенту в зависимости от его антропометрических характеристик.

Таким образом, поставленная задача решается за счет внедрения в процедуру метода количественного определения ДМСО в размороженных КТ; режимов размораживания и ресуспендирования КТ плазмой до концентрации тромбоцитов от 1,0×109/мл до 1,5×109/мл и снижения концентрации ДМСО до значения менее 0,5%, использования методов анализа структурной целостности и функциональной активности тромбоцитов и оценки сохранности биологически полноценных тромбоцитов после размораживания КТ.

Определение количества ДМСО в размороженных КТ необходимо для расчета объема плазмы, используемой для ресуспендирования тромбоцитов, для снижения концентрации ДМСО до 0,5% и ниже. Количество ДМСО определяется газохроматографическим методом. На этапе пробоподготовки 100 мкл тромбоцитарной массы ресуспендируют 900 мкл метанола и 50 мкл 0,02% метанольного внутреннего стандарта диметилформамида, перемешивают на орбитальном шейкере 10 минут с частотой 120 об/мин. Центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 минут, декантируют надосадочную жидкость и помещают в виалу для проведения исследования на газовом хроматографе Agilent 6850 с пламенно-ионизационным детектором, испарителем для режимов работы со сбросом/без сброса и автоматическим дозатором. Колонка - HP-FFAP, 25 метров, диаметр - 0,32 мм, толщина фазы - 0,5 нм. Температура испарителя - 200°С, режим работы с постоянным давлением - 45 кПa, 1 мкл образца вводится с сбросом 1/15. Температурный режим печи - 70°С начальная температура, плато 3 мин, подъем температуры со скоростью 15°С/мин до 180°С, плато 10 мин. Температура детектора - 280°С, поток водорода - 40 мл/мин, поток воздуха - 300 мл/мин. Время удерживания диметилсульфоксида составляет 11,05 мин, диметилформамида - 8,12 мин.

Для оценки качества клеток в ТК на разных этапах криоконсервирования может быть использован разработанный ранее способ оценки морфофункционального статуса тромбоцитов человека [Патент РФ на изобретение №2485502 «Способ оценки морфофункционального статуса тромбоцитов человека», авторы Хубутия М.Ш., Макаров М.С., Хватов В.Б., Высочин И.В., Кобзева Е.Н., Боровкова Н.В., Конюшко О.И., 20.06.2013], основанный на витальном (прижизненном) окрашивании тромбоцитов флуорохромным красителем на основе трипафлавина и акридинового оранжевого с последующим их анализом во флуоресцентном микроскопе. Данный метод позволяет параллельно оценить структурную целостность и функциональную активность тромбоцитов независимо от их концентрации в пробе, в том числе - в бесплазменной среде. Таким образом, используя данный метод, появляется возможность оценить общее содержание биологически полноценных тромбоцитов в исследуемом ТК (109/мл), а также оценить сохранность таких клеток после разных процедур криоконсервирования. Проведенные исследования показывают, что биологически полноценными (с нормальной структурой и функциями) являются лишь те тромбоциты, в которых при витальном окрашивании отчетливо выявляются гранулы - не менее 3 гранул диаметром более 300 мкм на клетку во флуоресцентном микроскопе, яркость свечения клетки - не менее 40 фут-кандел (Макаров М.С., Кобзева Е.Н., Высочин И.В., Боровкова Н.В., Хватов В.Б. Морфофункциональный анализ тромбоцитов человека с помощью витального окрашивания // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2013. - №9. - С. 388-391). Следовательно, оценка содержания тромбоцитов с гранулами может быть использована для контроля качества клеток ТК до и после криоконсервирования.

При экспозиции богатой тромбоцитами плазмы (БоТП) с ДМСО в конечной концентрации от 0,5 до 20% при комнатной температуре было установлено, что в процессе контакта с ДМСО биологическая полноценность клеток БоТП снижается, параллельно с этим уменьшается содержание тромбоцитов с гранулами (табл. 1). Так, при 0,5% ДМСО содержание тромбоцитов с гранулами в БоТП практически не менялось в течение 2 часов при комнатной температуре, через 4 часа снижалось на 7-10%, через 20 часов - на 70%. При концентрации ДМСО от 1 до 20% динамика снижения числа тромбоцитов с гранулами была сходной в течение первых двух часов: через 1 час потеря тромбоцитов с гранулами составила 10-20%, через 2 часа - 40-50%, через 4 часа - от 60 до 80%, через 20 часов тромбоциты с гранулами в БоТП полностью отсутствовали. Еще более выраженной динамика снижения тромбоцитов с гранулами была при 10-20% ДМСО: через 2 часа потеря тромбоцитов с гранулами составила 55-65%, через 4 часа - 90-99%. Стоит особо отметить, что при концентрации ДМСО 5% и выше адгезивная активность тромбоцитов с гранулами падает гораздо быстрее, чем их содержание. Этот эффект становится выражен уже при концентрации ДМСО 2% и выше. При использовании 5% ДМСО после 30 мин экспозиции адгезивная активность тромбоцитов снижалась в среднем 2 раза (табл. 2). Таким образом, уже через 30 мин экспозиции БоТП с 5% ДМСО при комнатной температуре в среднем 50% тромбоцитов с гранулами не проявляли функциональной активности. Это указывает на то, что время контакта тромбоцитов с 5% ДМСО при комнатной температуре должно быть минимизировано. С другой стороны, при концентрации 0,3-0,5% ДМСО биологическая полноценность тромбоцитов практически не нарушается в течение нескольких часов. Следовательно, разведение размороженных ДМСО-содержащих ТК до концентрации 0,3-0,5% ДМСО позволит сохранить их структурную и функциональную полноценность в течение 4-6 часов после разморозки.

Результаты сравнения качества тромбоцитов в размороженных КТ, полученных с помощью технологии-прототипа и с помощью заявляемого способа, представлены в Таблице 3. Для оценки эффективности криоконсервирования решено было определять сохранность тромбоцитов с гранулами и сохранность их адгезивной активности. Было установлено, что заявляемый способ позволяет сохранить гораздо большее число биологически полноценных тромбоцитов (в 1,5-1,8 раза), чем технология-прототип. Размороженные КТ разводили плазмой. Объем размороженной плазмы составлял 90-100 мл, что позволяло развести КТ в 10 раз, снижая концентрацию ДМСО в ней до 0,4-0,6%. В то же время в прототипе концентрация ДМСО составляет 2,5-3%, осмолярность - более 800 мОсмоль/л, что является токсичным для тромбоцитов человека, при этом для дилюции КТ используется 0,9% раствор хлорида натрия, не обладающий буферными свойствами и не препятствующий закислению среды. В результате хранение размороженных ТК, полученных по технологии-прототипу, сопровождается выраженным снижением структурной и функциональной полноценности тромбоцитов. Так, через 1 час хранения в размороженных КТ адгезивная активность клеток снижается на 70%, через 2 часа - на 90%, через 4 часа - на 95-98% (рис. 1). Это указывает на неэффективность хранения ТК (в прототипе) при температуре от 20 до 24°С. Напротив, при разведении КТ плазмой (предлагаемая технология) адгезивная активность тромбоцитов снижается через 4 часа лишь на 10% (рис. 1). Таким образом, появляется возможность хранения размороженных КТ при комнатной температуре в течение 4 часов без угрозы потери структурной или функциональной полноценности тромбоцитов. Осмолярность полученной дозы КТ составляет 360-380 мОсмоль/л, что соответствует физиологической норме и не вызывает развития у пациентов посттрансфузионных реакций.

Краткое описание чертежей

Изобретение поясняется чертежами, где на фиг. 1 изображена динамика изменения адгезивной активности тромбоцитов в размороженных ТК, приготовленных с использованием технологии-прототипа и предложенной нами технологии.

Осуществление изобретения

Процесс подготовки криоконсервированных тромбоцитов для трансфузии включает следующие этапы:

1. Определение концентрации ДМСО.

Концентрацию ДМСО в криоконсервированных тромбоцитах определяют методом газовой хроматографии. Для хроматографирования применяют капиллярную колонку НР-FFAP фирмы Agilent Technologies (США) с полярной фазой (100% полиэтиленгликоль). Аликвоту криоконсервированных тромбоцитов в количестве 100 мл разводят 900 мкл метанола и 50 мкл метанольного раствора диметилформамида. Полученную смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 минут. Надосадок декантируют и переносят в количестве 1 мкл в хроматограф. Количественный анализ проводили по методу внутреннего стандарта, в качестве которого использовали диметилформамид. Для построения калибровочного графика зависимости площади пика ДМСО от его концентрации готовят контрольные смеси ТК с ДМСО в конечной концентрации последнего: 1,51; 3,02; 6,05; 30,25; 60,5 и 121 мкг/мл. Калибровочный график, составляемый по результатам анализа контрольных смесей, представляет собой прямую линию во всем диапазоне используемых концентраций. Концентрацию ДМСО в криоконсервированных тромбоцитах пересчитывают в % с учетом объема замороженных тромбоцитов и далее учитывают при расчете объема раствора для ресуспендирования тромбоцитов.

2. Размораживание тромбоцитов.

Замороженные тромбоциты, нагревают в программном размораживателе плазмы (например, Barkey Plasmatherm) при температуре от 37 до 40°С в течение от 2 до 4 минут.

3. Ресуспендирование размороженных тромбоцитов.

Плазму или разводящий раствор SAGM добавляют к размороженным тромбоцитам в соотношении от 1:9 до 1:19 при постоянном перемешивании в течение 10 минут. Объем разводящего раствора или плазмы зависит от концентрации ДМСО в исходных криоконсервированных тромбоцитах и рассчитывается для достижения конечной концентрации ДМСО в размороженных тромбоцитах не более 0,5%.

4. Хранение размороженных тромбоцитов.

Хранят размороженные тромбоциты при температуре от 20 до 24°С и постоянном перемешивании не более 4 часов до трансфузии.

Пример 1.

Для приготовления КТ к трансфузии использовали две равные части замороженного гемокомпонента: КТ №1 (прототип) и КТ №2 (разработка). Параметры качества криоконсервированных тромбоцитов представлены в таблице 4.

Анализ результатов размороженных КТ показал, что предложенная технология криоконсервирования тромбоцитов по сравнению с прототипом обеспечивает значимо большую сохранность жизнеспособных клеток в размороженных ТК. Так, через 10 минут после размораживания криоконсервированных по предложенной технологии тромбоцитов содержание жизнеспособных клеток было больше, чем в прототипе в 2,5-3 раза, через 4 часа хранения при комнатной температуре - в 40 раз.

Пример 2.

Больной А, 65 лет

Диагноз: Расслаивающаяся аневризма грудного отдела аорты 2 типа.

Операция с использованием аппарата искусственного кровообращения (АИК) - протезирование грудного отдела аорты.

Состояние больного после операции. Кровопотеря за две операции - 2300 мл. После операции в течение первых суток сохраняется геморрагическое отделяемое по дренажам. Тромбоцитопения (концентрация тромбоцитов в крови больного) 59×109. Лейкопения (концентрация лейкоцитов в крови 3,5 тыс./мкл), анемия (гемоглобин 71 г/л и гематокрит 19,5%). Доля тромбоцитов с гранулами - 5%, адгезивная активность тромбоцитов - 3%, что говорит о выраженной тромбоцитопении и высоком риске кровотечения.

Тактика лечения. С учетом наличия у больного тромбоцитопении и выраженного геморрагического синдрома, развившихся после интраоперационной массивной кровопотери, для коррекции клеточного звена гемостаза проведена лечебная трансфузия тромбоцитного концентрата, размороженного после 9 месяцев криохранения и карантинизации.

Характеристика КТ. Общий объем - 200 мл, общее количество тромбоцитов - 2,4×1011, содержание тромбоцитов с гранулами - 0,84×1011, адгезивная активность тромбоцитов - 0,72×1011. Трансфузия - лечебная с учетом группы крови и фенотипа О (I) положительный.

Эффективность трансфузии.

После переливания ТК геморрагический синдром купирован. В крови больного концентрация тромбоцитов повысилась до 77×109/л через 1 час, и до 102×109/л через 24 часа после переливания ТК. Скорректированный прирост тромбоцитов составил через 1 час 16; через 24 часа - 38×109/л, что говорит о высокой эффективности трансфузии ТК. Больной экстубирован, моча светлая, геморрагический синдром купирован.

1. Способ подготовки криоконсервированных тромбоцитов для трансфузии, включающий:

размораживание контейнеров, содержащих замороженные тромбоциты, нагреванием при температуре от 37 до 40°C в течение от 2 до 4 минут;

определение концентрации ДМСО в размороженных криоконсервированных тромбоцитах;

определение объема плазмы или ресуспендирующего раствора, необходимого для введения в размороженные криоконсервированные тромбоциты для получения конечной концентрации ДМСО не более 0,5%, с последующим ресуспендированием размороженных тромбоцитов данным объемом плазмы, совместимой по системе АВО, или ресуспендирующим раствором при постоянном перемешивании в течение 8-12 минут со скоростью подачи плазмы или раствора 1-3 мл в минуту;

хранение размороженных тромбоцитов до трансфузии не более 4 часов при температуре от 20 до 24°C и постоянном перемешивании.

2. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что концентрацию ДМСО определяют в аликвоте размороженных криоконсервированных тромбоцитов методом газовой хроматографии.

3. Способ по п. 2, характеризующийся тем, что концентрацию ДМСО в криоконсервированных тромбоцитах определяют на газовом хроматографе Shimadzu GC-17А с пламенно-ионизационным детектором и автосамплером.

4. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что в качестве ресуспендирующего раствора используют SAGM.

5. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что ресуспендирование размороженных тромбоцитов осуществляют при объемных соотношениях плазмы/раствора и размороженных тромбоцитов от 1:9 до 1:19.

6. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что перед трансфузией размороженных тромбоцитов конкретному пациенту рассчитывают дозу исходя из его антропометрических характеристик: 2×1011 тромбоцитов на 1 м2 поверхности тела пациента или 0,7×1011 тромбоцитов на 10 кг веса пациента.

7. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что после размораживания тромбоцитов оценивают их качество по следующим параметрам: объем от 180 до 220 мл, сохранность тромбоцитов не менее 75% от исходного, сохранность тромбоцитов с гранулами и тромбоцитов с адгезивной активностью не менее 50% от исходного.

8. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что перед ресуспендированием размороженные тромбоциты из контейнера, в котором они хранились в замороженном состоянии, переводят в аэрируемый контейнер из ПВХ с фталатным пластификатором.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины, а именно к трансфузиологии, и предназначено для заготовки замороженных тромбоцитов. Для замораживания тромбоцитов осуществляют отбор исходного тромбоцитного концентрата (ТК) с концентрацией тромбоцитов от 1×109/мл до 1,5×109/мл, содержащего функционально активные тромбоциты.

Изобретение относится к области медицины, а именно к трансфузиологии, и предназначено для заготовки тромбоцитов длительного хранения. Осуществляют отбор исходного тромбоцитного концентрата (ТК) с концентрацией 1×109/мл-1,5×109/мл, содержащих 40-70% тромбоцитов с гранулами и тромбоциты с адгезивной активностью 40-70%.

Изобретение относится к физиологии, криобиологии и медицине, а именно к созданию раствора для консервирования клеточных взвесей. Раствор для консервирования клеточных взвесей содержит пектин каллуса раувольфии змеиной, глицерин, трилон Б и воду для инъекций.

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Композиция гербицида содержит водный настой натуральной хны в концентрации от 14 до 18% мас.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и биотехнологии, в частности к способу консервирования биологических материалов. Способ консервации биологических материалов включает иммобилизацию их на сухом носителе с последующим высушиванием.

Изобретение относится к средству для борьбы с грибковыми заболеваниями растений формулы где R1=Me, R2=Ph; R1=R2=Ph; R1=R2=OMe. 1 табл..

Изобретение относится к способу получения 3-[(фенилсульфанил)метил]пентан-2,4-диона формулы (1) Сущность способа заключается во взаимодействии смеси формальдегида и тиофенола с 2,4-пентандиом с участием катализатора NiCl2⋅6H2O при мольном соотношении формальдегид:тиофенол:2,4-пентандион:NiCl2⋅6H2O=1:1:1:(0,03-0,07) в смеси растворителей CHCl3-С2Н5ОН (1:1, об.), при комнатной температуре (~20°C) и атмосферном давлении в течение 6-8 ч.

Изобретение относится к устройствам для витрификации биообъектов. Автономное устройство для витрификации биообъектов с использованием криогенного хладагента имеет коаксиальную конструкцию, включающую цилиндрический корпус, внутри которого установлена цилиндрическая аксиально удлиняемая опора, конец которой соединен с цанговым зажимом, обеспечивающим фиксацию трубки контейнера с биообъектами, пусковую пружину, которая взаимодействует с цилиндрической опорой и обеспечивает перемещение контейнера с биообъектами в сосуд с криогенным хладагентом через его горловину, цилиндрический теплоизоляционный экран с подвижной крышкой, защитный дисковый экран, фиксируемый на наружных выступах цилиндрического корпуса, и расположенную в верхней части устройства управляющую кнопку.

Изобретение относится к криобиологии и медицине. Для получения мультипотентных стромальных клеток (МСК) из криозамороженных тканей фетоплацентарного комплекса (пуповины, плодной части плаценты, амниона) пуповину и плаценту, полученные в ходе операции кесарева сечения, в течение не более 24 часов транспортируют в культуральную лабораторию, где их нарезают на фрагменты толщиной не более 10 мм и выдерживают в течение 20-25 минут в криопротекторной среде на основе аутоплазмы, полученной из пуповинной крови, либо фосфатно-солевого буфера рН=7,4, дополненного тестированным человеческим альбумином до 15 г/л, содержащей 1,5 моль/л пропандиола и 0,1 моль/л сахарозы.
Изобретение относится к области медицины, преимущественно к нормальной и патологической анатомии, зоологии и эмбриологии. Для восстановления ранее фиксированных и бальзамированных анатомических препаратов используют 1-10%-ный раствор бензоата натрия.

Изобретение относится к медицине. Криоконсервирование ГСК крови проводят поэтапно. Первоначально проводят смешивание криозащитного 10% раствора криопротектора ДМСО с концентратом ядросодержащих клеток в эластичной упаковке и холодовую адаптацию приготовленной клеточной взвеси в течение 10 мин при температуре 4±1°С, замораживание биообъекта от +4±1°С до -80÷-196°С осуществляют в режиме быстрой двухступенчатой программы. На первом этапе замораживания осуществляют холодовую адаптацию при температуре -26÷-30°С с продолжительностью выдерживания 25 мин, при втором этапе биообъект быстро переносят в хранилище с температурой -80÷-196°С. Хладагентом на этапах смешивания клеточной взвеси с криоконсервантом и холодовой адаптации гемопоэтических стволовых клеток является гранулированный теплоноситель из сухих обеззараженных термогранул Lab Armor с заданной температурой +4±1°С и -28±2°С соответственно. Предлагаемый способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток обеспечивает повышение стерильности и количества морфологически сохранных ядерных клеток. 1 табл.

Изобретение относится к консервации клеток биологических образцов при помощи криогенного охлаждения. Устройство сверхбыстрого охлаждения биологических образцов до криогенных температур с использованием линейного электропривода возвратно-поступательного движения включает расположенный в зоне с температурой окружающей среды линейный электропривод, содержащий коаксиально расположенные неподвижный индуктор и подвижный якорь, обеспечивающий при помощи направляющего штыря прерываемое паузами перемещение контейнера с биологическим образцом, выполненный из теплоизоляционного материала охлаждающий сосуд, на передней стенке которого выполнено проходное отверстие для контейнера, а внутри расположен патрубок с распылителем на конце, обеспечивающий направленный поток жидкого криогенного хладагента, струи которого воздействуют на контейнер с биологическим образцом, нагревательное устройство, смежно расположенное с охлаждающим сосудом, и герметизируемый сосуд с жидким криогенным хладагентом, в верхней части которого расположены вентиль, стравливающий избыточное давление, и соединенный с охлаждающим сосудом при помощи теплоизолированного патрубка. Изобретение позволяет повысить скорость охлаждения биологического образца. 7 з.п. ф-лы, 30 ил.

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии. Добавка для стимулирования спермы содержит неорганический пирофосфат (PPi) в количестве примерно между 1 мкМ и примерно 200 мкМ. Добавление PPi в среды для оплодотворения in vitro людей/животных (IVF) улучшает долю оплодотворения; добавление PPi в разбавитель семени для искусственного осеменения (AI) сельскохозяйственных животных может улучшить долю забеременевших; кроме того, ооциты млекопитающих, созревающие in vitro в среде, содержащей PPi, приобретают улучшенный потенциал оплодотворения и развития, в то время как эмбрионы, культивируемые в среде, дополненной PPi, имеют улучшенное развитие до бластоцистов. 9 н. и 11 з.п. ф-лы, 25 ил., 10 пр.
Изобретение относится к биотехнологии и регенеративной медицине. Предложен способ обработки липоаспирата. Способ включает добавление 0,25% раствора кетотифена в дозе 1 мл раствора на 20 мл липоаспирата до стадии отмывки липоаспирата. Изобретение обеспечивает повышение жизнеспособности клеточной фракции жировой ткани. 1 пр.

Группа изобретений относится к биотехнологии, а именно к буферным жидким композициям, предназначенным для хранения препаратов ДНК в жидком виде, а также для пропитки пористых носителей, используемых для сбора и хранения биологического материала. Композиции включают 0,5-4% N-лаурилсаркозина, 5-20 мМ ЭДТА, 30-200 мМ Трис (гидроксиметил) аминометана, 0,04-0,4% NaN3, а также эффективное количество антибактериального препарата и/или фунгицида, который представляет собой дифеноконазол, и воду. Антибактериальный препарат выбран из пефлоксацина, офлоксацина и кларитромицина. Композиции обладают усиленным противомикробным действием, не вызывают потерю композицией ДНК стабилизирующих свойств на протяжении 15, 30 и 60 минут инкубирования при +80°С по сравнению с водными растворами противомикробных препаратов с аналогичной концентрацией. 5 н. и 25 з.п. ф-лы, 5 ил., 8 табл., 4 пр.

Изобретение относится к механической обработке костных образцов in vitro и может быть использовано в научных исследованиях в биологии и медицине при изготовлении биологических имплантатов с возможностью дальнейшего хранения в "тканевых банках". Способ механической обработки костного образца in vitro включает механическую обработку с использованием стерильной рабочей жидкости и последующую стерилизацию и консервацию полученных образцов. Сначала осуществляют стерилизацию костного образца озоновоздушной смесью с концентрацией озона 5÷10 мг/л в течение 10÷12 минут, затем механическую обработку проводят режущими инструментами в рабочей жидкости, в качестве которой используют стерильный, охлажденный до температуры +(4÷6)°С раствор Рингера с содержанием сангвиритрина в концентрации 0,01% в пересчете на активное вещество. После этого полученные образцы повторно стерилизуют озоновоздушной смесью аналогичным образом. Предлагаемый способ механической обработки костных образцов обеспечивает достижение 100% стерилизации костных образцов при сохранении их остеоиндуктивных свойств после механической обработки, сохранность морфологических и биопластических свойств стерилизуемых объектов, сокращение трудоемкости и времени подготовки имплантатов к их клиническому использованию и образцов для различных физико-химических исследований. 2 ил., 2 табл., 7 пр.

Группа изобретений относится к биотехнологии, в частности к усовершенствованному способу изготовления альгинатного гидрогеля с применением липазы, субстрата, гидролизуемого липазой, альгината и карбоната, высвобождающего двухвалентные катионы. Способ получения альгинатного гидрогеля включает смешивание раствора, содержащего липазу, с раствором, содержащим субстрат, гидролизуемый липазой, представляющий собой соединение формулы I: где R1, R2 и R3 независимо друг от друга являются одинаковыми или различными и представляют собой линейную или разветвленную С1-С12-алкил карбонильную цепь. Причем раствор, содержащий указанную липазу, или раствор, содержащий указанный субстрат, также содержит альгинат и карбонат, высвобождающий двухвалентные катионы. Полученный гидрогель пригоден для иммобилизации биологических материалов, предпочтительно сперматозоидов. Изобретения позволяют лучше контролировать скорость реакции гелеобразования, количество образованной кислоты и, соответственно, конечное значение pH в геле. 4 н. и 15 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к способу консервации донорской крови. При консервации эритроцитов для последующей трансфузии осуществляют этапы: a. получение эритроцитарной массы; b. помещение указанной эритроцитарной массы в контейнер, где указанный контейнер является проницаемым для газов и по существу содержит эритроцитарную массу; c. удаление кислорода из эритроцитарной массы во время нахождения эритроцитарной массы в контейнере, где указанный кислород удаляют из эритроцитарной массы и указанного контейнера путем диффузии указанного кислорода через указанный контейнер; d. воздействие на указанную эритроцитарную массу, находящуюся в контейнере, системой газов путем диффузии указанной системы газов через указанный контейнер и взаимодействия с указанной эритроцитарной массой в указанном контейнере, где указанная система газов включает ксенон, где указанную стадию воздействия на указанную эритроцитарную массу указанной системой газов осуществляют после указанной стадии удаления кислорода из указанной эритроцитарной массы, где указанный ксенон в указанной системе газов находится в концентрации, которая является большей, чем концентрация ксенона, которая встречается в природе в земной атмосфере, и с. поддержание указанной эритроцитарной массы, которую подвергали воздействию системы газов, при температуре, которая является выше точки замерзания указанной эритроцитарной массы и до температуры 30°С, где указанная эритроцитарная масса может содержаться в указанном контейнере в течение по меньшей мере 42 дней без значительной утраты качества эритроцитов таким образом, что указанная эритроцитарная масса в указанном контейнере может быть использована для указанной последующей трансфузии. Изобретение позволяет повысить качество консервируемой эритроцитарной массы. 16 з.п. ф-лы, 2 ил.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к ветеринарии, и касается ветеринарной композиции для точечного наружного нанесения с целью лечения или предотвращения паразитарных инфекций или инвазий у животного. Композиция содержит: (a) комбинацию четырех активных агентов, содержащую i. два местно-действующих активных агента, где один из местно-действующих активных агентов является фипронилом, а другой из местно-действующих активных агентов является регулятором роста насекомых; и ii. два системно-действующих активных агента, где один из системно-действующих активных агентов явлется празиквантелом, а второй из системно-действующих активных агентов является авермектиновым или милбемициновым активным агентом; и (b) фармацевтически приемлемый носитель, содержащий глицеролформаль, диметилизосорбид или их комбинацию. Также предложен способ лечения или предотвращения паразитарных инвазий или инфекций у животного. Группа изобретений обеспечивает уничтожение, контроль и предотвращение паразитарных инфекций и инвазий у животного. 2 н. и 19 з.п. ф-лы, 1 ил., 7 табл., 5 пр.
Изобретение относится к области консервации биологических объектов, в частности нервных тканей палеонтологических объектов, и может быть использовано в палеонтологии и музейном деле. Способ позволяет зафиксировать головной мозг ископаемого позднеплейстоценового млекопитающего без извлечения из полости черепа. Производят стабилизацию головного мозга путем проточной фиксации в фиксирующем растворе, основанном на 10% формалине, который вливают в полость черепа через отверстие, проделанное в затылочной кости и твердой мозговой оболочке. Локализацию места перфорации твердой мозговой оболочки определяют при помощи томографического объемного сканирования, по результатам которого определяют место, в котором твердая мозговая оболочка и место дислокации головного мозга наиболее удалены друг от друга. Фиксирующий раствор подается в полость черепа капельно, при этом сам череп помещается в емкость с фиксирующим раствором, который его полностью покрывает. На момент начала погружения черепа в фиксирующую жидкость, головной мозг находится в замороженном состоянии. Процесс фиксации происходит при комнатной температуре. Предлагаемый способ фиксации головного мозга ископаемого позднеплейстоценового млекопитающего при помощи фиксирующего раствора, основанного на 10% формалине, обеспечивает стабилизацию головного мозга при его постепенном оттаивании, сохраняя его целостное состояние, пригодное для дальнейшего научного изучения и экспонирования в музеях. 2 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области медицины, а именно производственной и клинической трансфузиологии, и предназначено для заготовки тромбоцитов длительного хранения, пригодных к трансфузии. Для подготовки криоконсервированных тромбоцитов для трансфузии осуществляют следующие этапы. Размораживают контейнеры, содержащие замороженные тромбоциты, нагреванием при температуре от 37 до 40°С в течение от 2 до 4 минут. Определяют концентрацию ДМСО в размороженных криоконсервированных тромбоцитах. Определяют объем плазмы или ресуспендирующего раствора, необходимого для введения в размороженные криоконсервированные тромбоциты для получения конечной концентрации ДМСО не более 0,5, с последующим ресуспендированием размороженных тромбоцитов данным объемом плазмы, совместимой по системе АВО, или ресуспендирующим раствором при постоянном перемешивании в течение 8-12 минут со скоростью подачи плазмы или раствора 1-3 мл в минуту. Хранят размороженные тромбоциты до трансфузии не более 4 часов при температуре от 20 до 24°С и постоянном перемешивании. Использование изобретения позволяет повысить качество получаемых после размораживания криоконсервированных тромбоцитов. 7 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 табл., 2 пр.

Наверх