Способ оценки содержания циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности



Способ оценки содержания циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности
Способ оценки содержания циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности
Способ оценки содержания циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности

 


Владельцы патента RU 2623879:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии" (RU)

Изобретение относится к медицине и к клинической биохимии и может быть использовано для оценки содержания циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности (цмЛПНП). Сущность способа: используют твердофазный лектин-иммуноферментный метод, основанный на связывании цмЛПНП с 100 мкл раствора агглютинина RCA120 в изотоническом фосфатном буфере (ИБФ) в концентрации 30 мкг/мл, иммобилизованного в лунках планшета, промывке лунок буферным раствором с бычьим сывороточным альбумином (БСА), содержащим 2 г/л БСА, внесении по 100 мкл меченных пероксидазой поликлональных антител 1 мкг/мл к белку аполипопротеину В, инкубировании 1 ч при комнатной температуре, внесении 100 мкл исследуемого образца крови в ИФБ, инкубировании в течение 2 ч при 20°С, промывке, проявлении цитратным буфером рН 4,5, содержащим ортофенилендиамин и перекись водорода, инкубировании 30 мин при 37°С, остановке реакции добавлением серной кислоты и количественной оценке цмЛПНП за счет измерения оптической плотности при длине волны 492 нм, что позволяет определять содержание цмЛПНП без их предварительного выделения. Изобретение обладает более высокой чувствительностью и воспроизводимостью и позволяет избирательно анализировать цмЛПНП, таким образом дает возможность точно и надежно измерять концентрацию цмЛПНП без предварительного выделения фракции ЛПНП. Способ является простым, доступным и быстрым в осуществлении, позволяет проводить скрининговые обследования с целью выявления наличия атеросклеротического процесса на доклинической стадии и при диспансеризации населения. 3 ил., 4 пр.

 

Изобретение относится к медицине и клинической биохимии и может быть использовано в лабораторной диагностике для определения циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности (цмЛПНП) с диагностическими и терапевтическими целями.

Одним из наиболее ранних проявлений атеросклеротического поражения является аккумуляция липидов клетками интимы артерий человека. Показано, что основным источником липидов являются липопротеиды низкой плотности (ЛПНП) [1-4]. Обнаруженные в крови человека модифицированные ЛПНП (мЛПНП), обладающие пониженным, по сравнению с нативными липопротеидами, содержанием сиаловой кислоты, были названы "десиалированными" ЛПНП. Именно десиалированные липопротеиды, в отличие от нативных, вызывают аккумуляцию липидов (в частности, эфиров холестерина) в клетках интимы артерий человека и макрофагах, т.е. являются атерогенными [5-6]. К настоящему времени убедительно экспериментально доказано существование в крови человека цмЛПНП, обладающих атерогенными свойствами [7-11]. Множественная модификация нативных ЛПНП может происходить в плазме крови и представляет собой каскад последовательных событий: десиалирование ЛПНП, появление способности вызывать накопление внутриклеточных липидов, потерю нейтральных липидов и фосфолипидов, уменьшение размера частиц, увеличение электроотрицательного заряда частиц, протекание процессов перекисного окисления липидов. Десиалирование ЛПНП осуществляется присутствующей в крови человека транс-сиалидазой, переносящей сиаловую кислоту между гликоконъюгатами липопротендов, гликопротеидов и ганглиозидов плазмы и клеток крови. Была также обнаружена повышенная предрасположенность десиалированных ЛПНП к окислению, которая является, скорее всего, следствием потери жирорастворимых витаминов, являющихся естественными антиоксидантами [8].

Таким образом, учитывая важную патогенетическую роль цмЛПНП в атеросклерозе, остается актуальной разработка наиболее информативных и в то же время относительно простых, доступных для клинических лабораторных исследований способов определения цмЛПНП. В настоящее время в лабораторной практике отсутствуют доступные для рутинных исследований реагенты и методы определения содержания атерогенных цмЛПНП в сыворотке крови человека. Более того, все ранее предложенные способы не учитывают как сложность фракционного состава ЛПНП, так и многофакторный, многостадийный характер их модификации, начальным звеном которой является именно процесс десиалирования.

Известен способ определения мЛПНП [12], отличающийся тем, что, с целью упрощения определения за счет сокращения числа стадий, супернатант после первого центрифугирования крови инкубируют с красителем. После этого проводят электрофоретическое разделение липидов из фракций крови. Способ включает следующие процедуры: к 1 мл сыворотки крови добавляют 40 мл 8% ПЭГ-6000, инкубируют 1 ч при комнатной температуре и центрифугируют 40 мин при 2800 g. Часть полученного супернатанта повторно центрифугируют 40 мин при 25000 g. Осадок промывают 0,25 мл раствора преципитата после первого и второго центрифугирования и используют для электрофоретического исследования. Разделение проводят в геле агарозы на пластинах, при этом в пробах супернатанта после первого центрифугирования определяют модифицированные липопротеиды высокой плотности, а после второго центрифугирования модифицированные липопротеиды низкой и очень низкой плотности. Недостатком этого способа являются низкая избирательность метода по отношению как к ЛПНП в целом, так и к мЛПНП, а также трудоемкость и длительность проведения исследования.

Наиболее интенсивно разрабатываемыми методами определения мЛПНП являются иммуноферментные тесты с использованием моноклональных антител к мЛПНП [13].

Многостадийность, трудоемкость и длительность иммуноферментного теста, выявление только эпитопов, характерных для искусственно модифицированных ЛПНП (неспецифичность), а также высокая себестоимость реагентов затрудняют использование их в рутинных исследованиях.

Известен способ экспресс-определения атерогенности крови [14], который состоит в определении множественно модифицированных липопротеидов низкой плотности (ммЛПНП) в плазме крови человека путем обработки ее буфером, содержащим поливинилпирролидон 12600±2700, и последующей визуальной регистрации помутнения по сравнению с контрольной пробой. Наличие помутнения, обусловленного агрегацией ммЛПНП, свидетельствует об атерогенности крови.

Недостатком этого способа является то, что он выявляет только ммЛПНП, которые быстро элиминируются из кровотока при взаимодействии со скавенджер-рецепторами. К тому же ммЛПНП связываются с аутоантителами к ним с образованием иммунных комплексов, которые при ряде условий не агрегируются, и поэтому у некоторых больных с тяжелым атеросклерозом данный тест дает отрицательный результат.

Известен способ определения минимально модифицированных липопротеидов низкой плотности (Мм-ЛПНП) в сыворотке или плазме крови человека [15], который наиболее близок к заявляемому способу по существенным признакам и был выбран в качестве прототипа.

При его применении Мм-ЛПНП агрегируют из сыворотки или плазмы крови путем обработки буфером, содержащим поливинилпирролидон (ПВП) с мол. массой 12600±2700, при конечной концентрации ПВП от 11,3% до 14,2% в пробе. После инкубации в течение 10 мин измеряют светопоглощение в опытной и контрольной пробах, вычисляют разность и при величине разности более 10 ЕД констатируют атерогенность крови у обследуемого человека за счет повышенного уровня Мм-ЛПНП.

Этот способ также не лишен недостатков, указанных выше, акцентирован на анализе окисленных ЛПНП и не позволяет определить содержание в крови цмЛПНП.

Таким образом, существует потребность в способе определения, который лишен вышеуказанных недостатков и обеспечивает условия для выделения и количественного определения цмЛПНП.

Задача решается новым способом, который включает определение уровня цмЛПНП в плазме крови твердофазным лектин-иммуноферментным методом, основанным на связывании цмЛПНП с агглютинином RCA120, иммобилизованным в лунках планшета, с последующей их количественной оценкой с помощью пероксидаза-меченых анти-апоВ поликлональных антител.

Описание способа определения уровня цмЛПНП в плазме крови.

Аполипопротеин В (ароА В) ЛПНП имеет два типа полисахаридных цепей, связанных N-гликозидной связью: олигоманнозидные и сиалированные биантенные. При этом сиаловая кислота содержится в цепях второго типа, где она является терминальным сахаром. Входящие в состав ЛПНП гликосфинголипиды также содержат терминальную сиаловую кислоту. Так как следующим за сиаловой кислотой остатком сахара в сиалированных биантенных цепях является галактоза, то десиалирование ЛПНП должно экспрессировать галактозу. Таким образом, десиалированные ЛПНП могут взаимодействовать с галактозоспецифичными лектинами. В способе используется агглютинин Ricinus communis (RCA 120), имеющий высокое сродство к терминальной бета-галактозе и низкое сродство к другим сахарным остаткам, входящим в состав полисахаридных цепей ЛПНП. Для определения уровня цмЛПНП в плазме крови используется твердофазный лектин-иммуноферментный метод, основанный на связывании модифицированных липопротеидов с RCA120, иммобилизованного в лунках планшета, с последующим их выявлением и количественной оценкой с помощью пероксидаза-меченых анти-апоВ поликлональных антител. В лунки вносят по 100 мкл раствора RCA120 в изотоническом фосфатном буфере в концентрации 30 мкг/мл и инкубируют в течение 2 ч при 37°С. Затем лунки промывают четыре раза в ИФБ, содержащем 2 г/л бычьего сывороточного альбумина (ИФБ/БСА), вносят по 100 мкл меченных пероксидазой поликлональных антител (1 мкг/мл) и инкубируют 1 ч при комнатной температуре. Затем лунки снова промывают раствором ИФБ/БСА и вносят 100 мкл исследуемого образца (плазмы крови) в ИФБ и инкубируют в течение 2 ч при 20°С. Последующее проявление проводят добавлением цитратного буфера, рН 4,5, содержащего ортофенилендиамин и перекись водорода, инкубируют 30 мин при 37°С. Реакцию останавливают добавлением серной кислоты. Оптическую плотность измеряют при длине волны 492 нм на многоканальном спектрофотометре. цмЛПНП могут быть измерены в интервале концентраций 20-800 нг/мл. При этом выделенные с помощью лектин-хроматографии нативные ЛПНП практически не связываются с RCA120 вплоть до концентраций 1 мг/мл.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами его осуществления.

Пример 1. Калибровочные кривые обработанных нейроминидазой ЛПНП, выделенных из крови больных цмЛПНП и нативных ЛПНП, представлены на рис. 1. Видно, что кривые обработанных нейраминидазой ЛПНП и цмЛПНП практически совпадают. Также видно, что данный метод может использоваться при определении концентрации цмЛПНП в сыворотке крови в диапазоне 20-800 г/л. При этом сиалированные (нативные) ЛПНП, выделенные с помощью лектиновой хроматографии, не связываются с RCA120 вплоть до концентрации 1 мг/мл.

Пример 2. На рис. 2 представлено сравнение данных определения цмЛПНП как в сыворотке, так и в цельной крови как больных сердечно-сосудистыми заболеваниями, так и здоровых лиц. Видно, что кривые практически совпадают при определении содержания цмЛПНП как в сыворотке, так и в крови. Можно сделать вывод, что компоненты крови практически не влияют на точность определения содержания цмЛПНП в ней в диапазоне концентраций 20-200 μг/л.

Пример 3. На рис. 3 представлены данные определения уровня цмЛПНП в сыворотке методами ИФА и лектиновой хроматографии. Видно, что данные, полученные этими методами, практически совпадают (коэффициент корреляции 0,96, р<0,005). Чувствительность метода ИФА составляет 5 нг цмЛПНП на 1 мл пробы.

Пример 4. Результаты определения уровня цмЛПНП в крови больных с документированным атеросклерозом. Измерение уровня цмЛПНП в крови 30-ти здоровых доноров показало, что их содержание варьирует от 12 до 105 мкг/мл (1,4-19,7% от общего уровня апоВ в сыворотке). Средняя концентрация составила 49+10 мкг/мл (7,1+1,7% от уровня апоВ). Уровень цмЛПНП в крови 30-ти пациентов с каротидным атеросклерозом составлял от 173 мкг/мл (14,0% от уровня апоВ в сыворотке) до 774 мкг/мл (56,5%) (в среднем 402+54 мкг/мл или 35,9+4,3%). Различие средних уровней содержания десиалированных ЛПНП в крови здоровых лиц и пациентов было статистически значимым (р<0,05).

По сравнению с прототипом разработанный твердофазный лектин-иммуноферментный метод выделения и определения цмЛПНП обладает более высокой чувствительностью и воспроизводимостью и позволяет избирательно анализировать цмЛПНП. Таким образом, описываемый метод дает возможность точно и надежно измерять концентрацию цмЛПНП без предварительного выделения фракции ЛПНП. Использование простого, доступного и быстрого в осуществлении способа определения цмЛПНП в крови человека позволяет проводить скрининговые обследования с целью выявления наличия атеросклеротического процесса на доклинической стадии и при диспансеризации населения. Эта методика может быть использована в дальнейшем для рутинного определения содержания цмЛНП в крови для экспрессной диагностики атерогенеза при сердечно-сосудистых патологиях.

Литература

1. Ohlsson, L. Dairy products and plasma cholesterol levels. // Food. Nutr. Res. - 2010. - 54.

2. Forrester, J.S. Redefining normal low-density lipoprotein cholesterol: a strategy to unseat coronary disease as the nation's leading killer. // J. Am. Coll. Cardiol. - 2010. - Vol.56. - P. 630-636.

3. Feeman, W.E. Cholesterol guidelines. // Ann. Intern. Med. - 1989. - Vol.111. - P. 1047-1048.

4. Packard, C.J., Shepherd, J. Low density lipoprotein metabolism. // Prog. Clin. Biol. Res. - 1988. - Vol.255.- P. 117-123.

5. Tertov V.V., Bittolo-Bon G., Sobenin LA. et al. Naturally occurring modified low density lipoproteins are similar if not identical: more electronegative and desialylated lipoprotein subfractions. Exp Mol Pathol. 1995; 62(3): 166-172.

6. Tertov V.V., Orekhov A.N., Sobenin LA. и др. Carbohydrate composition of protein and lipid components in sialic acid-rich and -poor low density lipoproteins from subjects with and without coronary artery disease. J Lipid Res. 1993; 34(3): 365-375.

7. Orekhov A.N., Tertov V.V., Mukhin D.N. Desialylated low density lipoprotein - naturally occurring lipoprotein with atherogenic potency. Atherosclerosis. 1991; 86: 153-161.

8. Tertov V.V., Orekhov A.N., Sobenin LA. и др. Three types of naturally occurring modified lipoproteins induce intracellularlipid accumulation due to lipoprotein aggregation. Circ Res. 1992; 71: 218-228.

9. Harada L.M. Carvalho M.D., Passarelli M., Quintâo E.C. Lipoprotein desialylation simultaneously enhances the cell cholesterol uptake and impairs the reverse cholesterol transport system: in vitro evidences utilizing neuraminidase-treated lipoproteins and mouse peritoneal macrophages. Atherosclerosis. 1998; 139(1): 65-75.

10. Harada L.M. Carvalho M.D., Passarelli M., Quintâo E.C. Lipoprotein desialylation simultaneously enhances the cell cholesterol uptake and impairs the reverse cholesterol transport system: in vitro evidences utilizing neuraminidase-treated lipoproteins and mouse peritoneal macrophages. Atherosclerosis. 1998; 139 (1): 65-75.

11. Lindbohm N., Gylling H., Miettinen Т.Е., Miettinen T.A. Statin treatment increases the sialic acid content of LDL in hypercholesterolemic. Atherosclerosis. 2000; 151(2): 545-550.

12. Карпов P.C., Канская H.B., 1992. Способ определения модифицированных липопротендов крови (RU 1720015): СОЮЗ СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК (я)5 G01N 33/92, ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГКНТ СССР.

13. Virella G., Derrick MB., Pate V. et al. Development of capture assay for different modification of human low-density lipoprotein // Clinical and Diagnostic Lab. Immunol. - 2005. - V. 12, №1. - P. 68-75.

14. Шойбонов Б.Б., Баронец В.Ю., Панченко Л.Ф., Кубатиев А.А. Способ экспресс-определения атерогенности крови. Патент РФ №2437098 от 20.12.2011 г., Бюл. №35.

15. Шойбонов Б.Б. Способ определения минимально модифицированных липопротеинов низкой плотности в сыворотке или плазме крови человека. Патент РФ №2501013. Официальная публикация патента 10.12.2013.

Способ определения циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности (цмЛПНП) в плазме крови без выделения фракции ЛПНП, при котором используется твердофазный лектин-иммуноферментный метод, основанный на связывании цмЛПНП с 100 мкл раствора агглютинина RCA120 в изотоническом фосфатном буфере (ИБФ) в концентрации 30 мкг/мл, иммобилизованного в лунках планшета, промывке лунок буферным раствором с бычьим сывороточным альбумином (БСА), содержащим 2 г/л БСА, внесении по 100 мкл меченных пероксидазой поликлональных антител 1 мкг/мл к белку аполипопротеину В, инкубировании 1 ч при комнатной температуре, внесении 100 мкл исследуемого образца крови в ИФБ, инкубировании в течение 2 ч при 20°С, промывке, проявлении цитратным буфером рН 4,5, содержащим ортофенилендиамин и перекись водорода, инкубировании 30 мин при 37°С, остановке реакции добавлением серной кислоты и количественной оценке цмЛПНП за счет измерения оптической плотности при длине волны 492 нм, что позволяет определять содержание цмЛПНП без их предварительного выделения.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области анализа биологических проб. Способ анализа проб включает в себя анализ клинико-химических и иммунологических параметров, а также включает установку картриджей для реагентов в приемное устройство, установку сосуда для пробы в пробоприемник, определение клинико-химических и иммунологических параметров с применением измерительной кюветы, промывку или извлечение использованных измерительных кювет, извлечение использованных картриджей для реагентов и сосуда для проб.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов прогнозирования безрецидивной выживаемости у больных раком молочной железы. Сущность способа: определяют уровень экспрессии YKL-39 по технологии ТaqMan с помощью специфичных праймеров и пробы Sense 5’-aacaacaaggttatcatcaaggac-3’, AntiSense 5’-tttgggattcttggttttgag-3’, Probe FAM-5’-agtgaagtgatgctctaccagaccat-3’-BHQ1, далее проводят ПЦР-анализ экспрессии гена белка YKL-39, оценивают относительную экспрессию гена белка YKL-39 с помощью метода Pfaffl в условных единицах (УЕ) относительно гена рефери GAPDH, причем в качестве калибратора используют нормальную ткань молочной железы, в которой при проведении исследования аналогичным вышеописанному способом уровень экспрессии гена белка YKL-39 составляет 1 УЕ.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использован для выявления предраковых изменений в молочной железе. Для этого определяют концентрацию интерлейкина 8 (ИЛ-8) в супернатанте пробы клеток крови пациента, инкубированных с раково-эмбриональным антигеном (РЭА) и без РЭА.

Изобретение относится к области биохимии. Описаны антиген-связывающие фрагменты (Fab), селективно связывающиеся с ботулиническим нейротоксином С, в частности гуманизированные Fab.

Изобретение относится к аналитической химии и представляет собой способ проведения иммунохроматографического анализа. Предложенный способ проведения иммунохроматографического анализа отличается тем, что при изготовлении тест-полоски используют прозрачную подложку.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования течения онкологических заболеваний. В периферической крови больного определяют количество Т-лимфоцитов CD3+, 10*9/л, и их субпопуляций: лимфоцитов CD4+ и CD8+, 10*9/л, %, кроме того, вычисляют значение частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4+ на количество CD8+.

Изобретение относится к области медицины и касается способа ранней диагностики бронхиальной астмы у детей в возрасте 5 лет и младше. Сущность способа заключается в том, что проводят анализ данных анамнеза, оценку клинических симптомов, изучение аллергологического статуса, которое проводят с использованием общего анализа крови, в котором определяют уровень эозинофилов и уровень общего иммуноглобулина Е в сыворотке крови, проведение цитологического исследования индуцированной мокроты, для определения в ней процентного содержания эозинофилов.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования развития тяжелого поражения центральной нервной системы при клещевом энцефалите с помощью анализа ликвора, отличающийся тем, что в ликворе больного определяют уровень серотонина, при его значении более 20 нг/мл прогнозируют среднетяжелое поражение центральной нервной системы с развитием непаралитической менингеальной формы, менее 20 нг/мл - прогнозируют тяжелое поражение центральной нервной системы с формированием паралитических очаговых форм.

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунохимии, а именно к способу получения материала для биологического связывания с помощью сорбирующих колонок. Сущность изобретения заключается в том, что разработан способ получения селективного иммуносорбента для удаления антител - IgG к десмоглеину 3 типа из сыворотки крови больных пузырчаткой с использованием твердофазного носителя, заключающийся в том, что для его получения рекомбинантый человеческий десмоглеин 3 типа (Dsg3) иммобилизируют путем ковалентного связывания с твердофазным носителем, в качестве которого применяют агарозный сорбент, несущий на своей поверхности N-гидроксисукцинимидные группы: NHS-активированную агарозу.

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии, и может быть использовано для оценки гиперчувствительности по высвобождению гистамина из лейкоцитов цельной крови.

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологи, и представляет собой способ подготовки пробы для проведения иммунофлюоресцентного исследования при диагностике болезни Хейли-Хейли, включающий размещение на предметном стекле криостатных срезов кожи лабораторного животного, нанесение на них типированной сыворотки больного, инкубацию при температуре 37,2°C во влажной камере в течение 45 мин, промывку срезов, отличающийся тем, что криостатные срезы кожи лабораторного животного предварительно обрабатывают 100% охлажденным ацетоном с температурой 4,0-6,0°C в течение 3-5 мин, затем высушивают в течение 2-3 мин при комнатной температуре, причем промывку срезов осуществляют в течение 3-5 минут. Осуществление изобретения позволяет повысить достоверность результатов диагностики. 3 пр., 4 ил.

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования вероятности развития метастазов в лимфоузлы у пациентов с диагнозом рак желудка. Осуществляют амплификацию фрагментов генетических локусов В2М, HV2 и CFLAR методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с помощью набора высокоспецифичных праймеров на матрице выделенной ДНК, проводят количественную интерпретацию результатов амплификации и расчет относительной копийности генов по формуле rC=2-(Ct(ген мишень)-Ct(B2M)), где rС - относительная копийность гена в опухолевой ткани, Ct - среднее значение сигналов флюоресценции, сравнивают полученные значения относительной копийности генов с прогностическими, и при значениях rСHV2<870 и rСCFLAR>0,40 прогнозируют отсутствие метастазов, а при значениях rСHV2>870 и rСCFLAR<0,40 прогнозируют развитие метастазов. Способ позволяет осуществить раннее прогнозирование развития метастазов у больных раком желудка. 2 пр., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогинекологии, и может быть использовано для прогноза возникновения рецидива у больных раком вульвы. Для этого в ткани больных раком вульвы иммуногистохимическим методом полуколичественно оценивают экспрессию маркеров ангиогенеза - CD34, апоптоза - р53, пролиферативной активности - Ki-67. При значении Ki-67 в пределах 80-90%, р53 в пределах 66,3-76,5%, CD34 в пределах 5,16-5,78% прогнозируют короткую ремиссию. При значении Ki-67 в пределах 7,6-9,8%, р53 в пределах 11,4-17%, CD34 в пределах 2,82-3,68% прогнозируют длительную ремиссию. Использование данного изобретения позволяет прогнозировать наступления короткой или длительной ремиссии у больных раком вульвы и позволяет на основе прогностических факторов оценивать эффективность лечения рака вульвы. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к авиакосмической медицине, и может быть использовано для оценки оптимального уровня компенсаторно-приспособительных и адаптационных возможностей организма космонавтов в условиях космического полета. Способ включает получение препарата хромосом, его окрашивание и определение цитогенетических показателей, при значении в пределах 18,0-20,6 условных единиц показателя (дозы) активных рибосомных генов оценивают уровень компенсаторно-приспособительных и адаптационных возможностей организма космонавта как оптимальный. Изобретение обеспечивает возможность использовать для оценки один универсальный показатель в условиях космического полета при повышении достоверности оценки, в том числе непосредственно на борту пилотируемого космического аппарата, а также для прогноза необходимости проведения дополнительных реабилитационных процедур в период реадаптации космонавтов к земной гравитации после окончания космических полетов. Оно также может найти широкое применение при первичном отборе кандидатов в космонавты, а также на этапах предварительной диагностики профпригодности лиц опасных профессий, для прогнозирования их профессионального долголетия, оценки рисков развития заболеваний, вызванных вредными условиями профессиональной деятельности, прогноза их течения и исхода. 3 пр., 4 табл.

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и касается иммуноферментной тест-системы для серологической диагностики анаэробной энтеротоксемии сельскохозяйственных животных, вызываемой бактериями Clostridium perfringens (Cl. perfringens), а также контроля напряженности поствакцинального иммунитета. Представленная иммуноферментная тест-система содержит специфические антигены штаммов Cl. perfringens №28 (тип А), №1 (тип В), №392 (тип С), №213 (тип D), полученные озвучиванием бактериальных клеток на ультразвуковом дезинтеграторе, последующим осаждаем эндотоксина сульфатом аммония и диализом против водопроводной воды. Антигены представляют собой специфический белок в концентрации 8-10 мкг/см3, адсорбированный на поверхности полистироловых лунок в карбонатно-бикарбонатном буфере. Также набор содержит контрольную положительную сыворотку, полученную к антигенам Clostridium perfringens типов А, В, С, D с активностью в ИФА 1:6400-1:12800, контрольную отрицательную сыворотку, конъюгат антивидовой, калий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двухзамещенный, натрий хлористый, хромоген (ортофенилендиамин), перекись водорода, стоп-реагент и панели для постановки реакции иммуноферментного анализа. Тест-система позволяет проводить диагностику анаэробной энтеротоксемии у животных и определить напряженность поствакцинального иммунитета. 2 табл., 5 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении сарком мягких тканей для прогнозирования возникновения рецидива. Для этого с помощью проточной цитофлюориметрии проводят определение процентного содержания T-regs(CD3+CD4+CD25+CD127dim) лимфоцитов от количества CD3+CD4+клеток в гомогенатах образцов опухолевой ткани и в ткани линии резекции после хирургического удаления опухоли. При значении этого показателя выше 11,1% в ткани опухоли и 7,1% в ткани линии резекции прогнозируют развитие рецидива саркомы. Использование данного способа позволяет прогнозировать возникновение рецидива при лечении сарком мягких тканей путем определения процентного содержания лимфоцитарной субпопуляции T-regs(CD3+CD4+CD25+CD127dim), поскольку данная популяция клеток влияет на развитие противоопухолевых иммунных реакций. 2 пр., 1 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии. Для этого после удаления селезенки определяют ее массу. В гистологических срезах лимфоидного органа после иммуногистохимического окрашивания морфометрически подсчитывают количество CD4+ Т-лимфоцитов и вычисляют их массу по формуле: М=m×D/100%, где М - масса CD4+ Т-лимфоцитов (г), m - масса селезенки (г), D - количество CD4+ Т-клеток (%). При значениях массы CD4+ Т-лимфоцитов более и равной 5,4 г констатируют благоприятное течение апластической анемии, а при менее 5,4 г устанавливают неблагоприятное течение заболевания. Использование данного способа в практической гематологии позволяет прогнозировать течение апластической анемии после спленэктомии, независимо от тяжести заболевания, что дает возможность дифференцированно подходить при назначении терапии. 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, к лабораторной диагностике в гинекологии и касается способа определения вида эндометриоза яичника. Способ включает анализ транскриптома эндометриоидной ткани очага эндометриоза яичника путем проведения исследования экспрессии гена TIMP1, при превышении экспрессии гена TIMP1 относительно гена выше 0,5 о.е. относят пациенток к группе с железисто-кистозным типом эндометриоза яичников, если меньше или равно 0,5 о.е. - к группе с кистозным вариантом эндометриоза яичников. Изобретение обеспечивает повышение эффективности диагностики и позволяет осуществить персонализированный подход к лечению пациенток с эндометриозом яичников. Предлагаемый маркер обладает специфичностью - 73%, чувствительностью - 83%, AUC=0,82. 4 пр.

Настоящее изобретение касается способа предварительной оценки, будет ли терапевтическое средство, выбранное из группы полипептид, антитело или иммуноадгезин, иметь необходимую скорость выведения у яванского макака, человека. Сущность способа заключается в том, что наносят покрытие с баскуловирусными частицами (BV) на микротитрационный планшет. Далее проводят контактирование терапевтического средства с BV и проводят измерение уровня связывания терапевтического средства с BV. Также проводят измерение связывания терапевтического средства с микротитрационным планшетом без BV. Показатель BV рассчитывают из среднего значения, полученного в анализах связывания, в которых измеряют уровень связывания терапевтического средства с BV, деленного на среднее значение, полученное в анализах связывания, в которых измеряют уровень связывания терапевтического средства без BV. Показатель BV выше 5 указывает на повышенную вероятность того, что терапевтическое средство будет иметь быструю скорость выведения, при этом быстрая скорость выведения выше 12 мл/кг/день, а показатель BV ниже 5 указывает на повышенную вероятность того, что терапевтическое средство будет иметь необходимую скорость выведения. Использование способа позволяет выявлять антитела, у которых наблюдается быстрое выведение из организма. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 12 ил., 1 табл., 12 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и патоморфологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики опухолей аногенитальных маммароподобных желез. Для этого определяют принадлежность опухоли к группе опухолей АМПЖ, локализацию опухоли в коже и её расположение в коже. При её расположении в дерме или в эпидермисе или при наличии связи опухоли дермы с эпидермисом определяют её доброкачественность или злокачественность. После этого определяют гистологический рисунок и архитектонику опухоли и их сходство с опухолями молочной железы. При расположении опухоли в эпидермисе, ее злокачественности и при наличии педжетоидного гистологического рисунка исследуемой опухоли и ее архитектонике, сходной с маммарной болезнью Педжета, дополнительно определяют наличие или отсутствие злокачественных опухолей других органов, распространяющихся на эпидермис и при отсутствии экспрессии Uroplakin-III, PSA, S100, р63, а также отсутствии злокачественных опухолей других органов, распространяющихся на эпидермис, диагностируют первичную экстраммамарную болезнь Педжета. При расположении опухоли в дерме или при наличии связи опухоли дермы с эпидермисом, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой итрадуктальной папилломы молочной железы, диагностируют папиллярную гидраденому. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой фиброаденомы молочной железы, диагностируют фиброаденому маммароподобных желез (МПЖ). При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой аденозной опухоли молочной железы, диагностируют аденозную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой лактирующей аденомы молочной железы, диагностируют лактирующую аденому МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой доброкачественной филоидной опухоли молочной железы, диагностируют доброкачественную филоидную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой злокачественной филоидной опухоли молочной железы, диагностируют злокачественную филоидную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой дуктальной карциномы in situ молочной железы, диагностируют дуктальную аденокарциному in situ аногенитальных МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей с архитектоникой неспецифицированной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие неспецифицированной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют дуктальную аденокарциному МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей с архитектоникой тубуло-лобулярной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие тубуло-лобулярной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют тубуло-лобулярную карциному МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей, с архитектоникой аденокистозной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие аденокистозной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют аденокистозную карциному МПЖ.. При расположении опухоли в эпидермисе и дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке в дерме и педжетоидном гистологическом рисунке в эпидермисе и архитектонике, схожей с архитектоникой инвазивной карциномы молочной железы и маммарной болезни Педжета, дополнительно оценивают отсутствие или наличие инвазивной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют экстрамаммарную болезнь Педжета, вторичную к инвазивной карциноме АМПЖ. Способ обеспечивает диагностически значимые клинико-морфологические критерии и их комбинации для дифференциальной диагностики опухолей АМПЖ при повышении чувствительности, специфичности и точности проводимой дифференциальной диагностики. 6 ил., 3 пр.
Наверх