Способ подготовки пробы для проведения иммунофлюоресцентного исследования при диагностике болезни хейли-хейли

Авторы патента:

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Владельцы патента RU 2624501:

Махнева Наталия Викторовна (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологи, и представляет собой способ подготовки пробы для проведения иммунофлюоресцентного исследования при диагностике болезни Хейли-Хейли, включающий размещение на предметном стекле криостатных срезов кожи лабораторного животного, нанесение на них типированной сыворотки больного, инкубацию при температуре 37,2°C во влажной камере в течение 45 мин, промывку срезов, отличающийся тем, что криостатные срезы кожи лабораторного животного предварительно обрабатывают 100% охлажденным ацетоном с температурой 4,0-6,0°C в течение 3-5 мин, затем высушивают в течение 2-3 мин при комнатной температуре, причем промывку срезов осуществляют в течение 3-5 минут. Осуществление изобретения позволяет повысить достоверность результатов диагностики. 3 пр., 4 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии и может быть использовано при диагностике болезни Хейли-Хейли.

Известен способ диагностики болезни Хейли-Хейли с использованием цитологического анализа мазков-отпечатков дна эрозий или пузырей. Заболевание диагностируется на основании обнаружения акантолитических клеток (Tzanck A. Le citodiagnostic immediate en dermatologic. Ann. Derm. Siph., 1948, 55, 205-218). При микроскопии мазков со свежих поражений кожи больных болезнью Хейли-Хейли, как правило, обнаруживаются акантолитические клетки.

Однако несмотря на достаточно высокую информативность этого метода, обнаружение акантолитических клеток еще не подтверждает диагноза болезни Хейли-Хейли, так как акантолитические клетки могут наблюдаться при аутоиммунной пузырчатке, истинной экземе, фолликулярном дискератозе Дарье и различных вирусных пузырьковых поражениях кожи.

В сомнительных случаях для подтверждения диагноза болезни Хейли-Хейли проводят гистологическое исследование биоптатов пораженной кожи (Ромейс В. Микроскопическая техника, 1954, 48-175). Объекты из патологически измененных тканей иссекают с захватом измененных и нормальных участков. Первым этапом обработки кусочков является фиксация с целью закрепления тканевых структур в том виде, какой они имели в момент иссечения кусочка ткани. Кусочки ткани толщиной 0,5-1,0 см фиксируют в 10-20% растворе формалина в течение 24-48 часов. После фиксации в формалине ткань можно сразу резать на замораживающем микротоме либо подвергать дальнейшей обработке для заливки в целлоидин или парафин. Результаты оцениваются с помощью светового микроскопа. Гистологическим признаком болезни Хейли-Хейли является надбазальный акантолиз с образованием щелей или пузырей, в полости которых находятся акантолитические клетки.

Недостатком при использовании этого метода является его сложность, длительность выполнения и существование сходных изменений при ряде других заболеваний кожи, например аутоиммунной пузырчатке, импетиго, вегетирующей пиодермии, болезни Дарье, многоформной экссудативной эритеме, которые не позволяет выявить исследуемый образец.

Наиболее близким является способ подготовки пробы для проведения иммунофлюоресцентного исследования при диагностике болезни Хейли-Хейли (Болезнь Хейли-Хейли и антитела к антигенам межклеточной связывающей субстанции эпидермиса. Махнева Н.В., Давиденко Е.Б., Черныш Е.С., Белецкая Л.В. VI Международный форум дерматовенерологов и косметологов, Москва, 20-22 марта 2013 г., с. 134), включающий нанесение типированной сыворотки больного на криостатные срезы лабораторного животного с последующей инкубацией при температуре 37,2°C в течение 45 мин во влажной камере, проведение иммунофлюоресцентного исследования для выявления циркулирующих IgG-антител к антигенам межклеточной связывающей субстанции (МСС) эпидермиса. В результате такой обработки выявляют IgG-антитела к антигенам МСС эпидермиса.

Недостатком этого способа является возможность получения недостоверных или отрицательных результатов ввиду вымывания белковых структур (антигенов) или их деградации в процессе проведения иммунологической реакции из исследуемой пробы.

Задачей предлагаемого изобретения является устранение указанных недостатков, повышение достоверности получаемых результатов при проведении исследований за счет выявления циркулирующих IgG-антител к антигенам МСС эпидермиса в ранней и доклинической диагностике путем предварительной обработки криостатных срезов кожи лабораторного животного ацетоном, что способствует стабилизации и демаскировки белкового компонента (антигена) эпидермиса.

Для решения поставленной задачи при подготовке пробы для проведения иммунофлюоресцентного исследования при диагностике болезни Хейли-Хейли, включающей размещение на предметном стекле криостатных срезов кожи лабораторного животного, нанесение на них типированной сыворотки больного, инкубацию при температуре 37,2°C во влажной камере в течение 45 мин, промывку срезов, предложено криостатные срезы кожи лабораторного животного предварительно обрабатывать 100% охлажденным ацетоном с температурой 4,0-6,0°C в течение 3-5 мин, затем высушивать в течение 2-3 мин при комнатной температуре, причем промывку срезов осуществлять в течение 3-5 минут.

На фиг. 1 представлена картина выявления циркулирующих IgG-антител к антигенам МСС эпидермиса на фиксированных криостатных срезах кожи теленка (пример 1); на фиг. 2 - к антигенам МСС эпидермиса на фиксированных криостатных срезах кожи мыши (пример 2); на фиг. 3 - к антигенам МСС волосяных фолликулов на фиксированных криостатных срезах кожи мыши (пример 2); фиг. 4 - к антигенам МСС эпидермиса на фиксированных криостатных срезах кожи кролика (пример 3).

Предлагаемый способ обеспечивает достоверную иммунофлюоресцентную диагностику болезни Хейли-Хейли. Это происходит за счет того, что при предлагаемой обработке ацетоном, который является химическим стабилизатором, сохраняется морфологическая структура белковых компонентов (антигенов), не происходит их вымывание, маскировка, деградация и другие изменения, которые могут происходить в нефиксированной ткани.

Способ осуществляется следующим образом.

Криостатные срезы кожи лабораторного животного толщиной, преимущественно, 5 мкм предварительно обрабатывали 100% охлажденным ацетоном с температурой 4,0-6,0°C в течение 3-5 мин, затем высушивали в течение 2-3 мин при комнатной температуре. Фиксированные криостатные срезы кожи лабораторного животного тщательно промывали физиологическим раствором с фосфатным буфером (PBS), pH 7,0-7,4, в течение 3-5 мин и наносили типированную сыворотку больного с последующей инкубацией при температуре 37,2°C во влажной камере в течение 45 мин. Далее срезы промывали в течение 3-5 мин PBS (pH 7,0-7,4), обрабатывали меченой сывороткой против IgG человека в течение 30 мин при комнатной температуре, вновь промывали 3-5 мин PBS и заключали под покровное стекло в 60% нейтральный глицерин. В последующем в люминесцентном микроскопе учитывали самое большое разведение, которое давало четкую положительную реакцию.

Наличие циркулирующих IgG-антител к антигенам МСС эпидермиса и/или волосяным фолликулам, гарантированно выявляемых при предлагаемой методике подготовки пробы, позволяло диагностировать болезнь Хейли-Хейли, а при их отсутствии исключить этот диагноз.

Эмпирическим путем установлено, что оптимальное время для проявления реакции является интервал от 3 мин до 5 мин. Использование меньшего времени предварительной обработки приводит к неполной фиксации антигена и его диффузии внутрь клетки и ткани; фиксация больше рекомендуемого времени (более 5 мин) приводит к гиперфиксации и грубым изменениям белковых компонентов (антигенов) ткани кожи. Высушивание фиксированных криостатных срезов менее 2 мин не позволяет достичь полного удаления воды фиксирующей смеси (ацетона) из срезов, более длительное время (более 3 мин) высушивания - полученный эффект не усиливает. С целью удаления избытка антител в тканях и исключения неспецифического свечения промывку фиксированных криостатных срезов PBS осуществляют в течение 3-5 мин. Использовать менее 3 мин нецелесообразно ввиду неполного удаления избытка антител и присутствия неспецифического окрашивания структур ткани, более 5 мин - полученный эффект не усиливает. Результатом такого проведения валидизации является демаскировка с сохранением белковой структуры антигена и получение достоверных диагностически ценных результатов.

Пример 1.

Обследована больная П., 40 лет. Больна около 20 лет (с 20-летнего возраста). Впервые после переохлаждения на коже под молочными железами появились пятна ярко-розового цвета. Высыпания имели тенденцию к слиянию, на поверхности которых возникали пузырьки, при вскрытии которых формировалась мокнущая поверхность. Диагностирован опоясывающий лишай. Проведена местная терапия раствором фукорцина и мазью «Ацикловир» без эффекта. Положительный эффект (полное разрешение высыпаний) достигнут с помощью топической терапии мазью «Лоринден А». Однако на протяжении всего последующего периода (в течение 20 лет) периодически появлялись подобные высыпания в период менструации. В 2006 году процесс принял генерализованный характер с захватом кожи в области боковых поверхностей туловища, спины и задней поверхности шеи. С предварительным диагнозом: распространенная истинная экзема пациентка госпитализирована в кожную клинику.

При поступлении общее состояние больной удовлетворительное. Ведущие жалобы: высыпания на коже, сопровождающиеся зудом. При осмотре: процесс распространенный, подостровоспалительный, симметричный. Локализован на коже лица, задней поверхности шеи с переходом на кожу волосистой части головы, заушной области, спины, в области подмышечных впадин, под молочными железами и в складках живота. На коже лица, шеи, заушной области процесс представлен ярко-красными пятнами диаметром от 1 см до 10 см, без четких границ, неправильной формы. На коже под молочными железами отмечаются бляшки размером от 2,5 см до 10 см в диаметре, покрытые серозно-гнойными корками, на поверхности которых отмечаются глубокие извилистые трещины по типу «мозговых извилин». На коже живота - единичные бляшки ярко-розового цвета, покрытые серозно-гнойными корками, отмечаются очаги экскориации. На коже спины - пятна ярко-розового цвета на месте сдавления бюстгальтера; в области поясницы - крупная бляшка, поверхность которой представлена глубокими извилистыми трещинами, по периферии - мелкие эрозии. Феномены Никольского и Кебнера - отрицательные. Видимые слизистые оболочки интактны. Ногтевые пластины утолщены. Субъективно беспокоят зуд, болезненность в местах высыпаний.

Из анамнеза: наследственность отрицает.

Проводилась дифференциальная диагностика между распространенной истинной экземой, вульгарной пузырчаткой и болезнью Хейли-Хейли.

При цитологическом исследовании в мазках-отпечатках дна эрозий обнаружены акантолитические клетки. При гистологическом исследовании кожи с очага поражения обнаружены внутриэпидермальные супрабазальные пузыри с обилием акантолитических клеток в просвете. Это позволило исключить наличие у больной распространенной истинной экземы, но не позволило дифференцировать вульгарную пузырчатку и болезнь Хейли-Хейли.

Проведено исследование сыворотки больной по предлагаемому способу. При предварительной обработке криостатных срезов кожи лабораторного животного 100% охлажденным ацетоном с температурой 4,0°C в течение 5 мин с последующим высушиванием в течение 3 мин при комнатной температуре и промывкой в течение 5 мин были обнаружены циркулирующие IgG-антитела к антигенам МСС эпидермиса.

На основании полученных данных больной был выставлен диагноз: болезнь Хейли-Хейли.

Проведено лечение: гемодез 200,0 мл в/в капельно, флуконазол 150 мг/нед, ретинола пальмитат 150 тыс. Ед × 1 р/д, наружно: 0,25% раствор нитрата серебра, крем «Тридерм». Лечение с положительным эффектом: высыпания разрешились, сохранялись лишь единичные бляшки на коже в области задней поверхности шеи. В течение последующих 8 лет отмечалось волнообразное течение болезни со сменой периодов активного патологического процесса на его «затихание», применение топических глюкокортикостероидов приводило к положительному клиническому эффекту.

Пример 2.

Обследована больная П., 56 лет. Больна около 18 лет (с 38-летнего возраста). Впервые появились высыпания на коже волосистой части головы, в области подбородка, спины, верхних конечностей, сопровождающиеся зудом. Элементы были представлены пузырьками и пустулами. Неоднократно проводилось амбулаторное и стационарное лечение по месту жительства с диагнозом: себорейный дерматит. Проводимая терапия (антигистаминные и десенсибилизирующие препараты, местно: анилиновые красители) позволяла достичь незначительный положительный эффект. Весной 2008 г. процесс принял генерализованный характер, пациентка госпитализирована в кожную клинику МОНИКИ.

При поступлении общее состояние больной удовлетворительное. Ведущие жалобы: на высыпания на коже, сопровождающиеся зудом. При осмотре: патологический процесс носит распространенный, симметричный, подостровоспалительный характер. Локализован на коже в области спины, шеи, декольте, туловища, верхних конечностей и естественных складок (подмышечные впадины, под молочными железами, паховые складки). На коже спины патологический процесс представлен плоскими папулами розовато-синюшного оттенка, округлых очертаний и плотноватой консистенции. На коже живота отмечаются бляшки розовато-синюшного оттенка, размером от 7 до 20 см в диаметре неправильной формы, фестончатыми очертаниями и резкими границами. Бляшки имеют тенденцию к слиянию. Экскориации в местах расчесов. В области естественных складок - бляшки с эрозиями, мацерированной поверхностью, глубокими извилистыми трещинами и вегетациями между последними в виде низких гребешков, частично покрытых желтоватыми корками. По периферии бляшки окаймлены воспалительным ободком и бахромкой отслаивающегося эпидермиса. Симптом Никольского отрицательный. Феномен Кебнера - положительный. Видимые слизистые оболочки интактны.

Наследственный анамнез: со слов больной подобными высыпаниями страдают мать (с 30-летнего возраста) и родной дядя (родной брат матери).

Проводилась дифференциальная диагностика между аутоиммунной пузырчаткой, вегетирующей пиодермией и болезнью Хейли-Хейли.

При цитологическом исследовании обнаружены акантолитические клетки. При гистологическом исследовании кожи с очага поражения - эпидермис с участками акантолиза и формированием щелевидных пространств в шиповатом слое, в просвете которых - единичные акантолитические клетки и нейтрофильные лейкоциты. Результаты цитологического и гистологического методов исследования не позволили с достоверностью провести дифференциальную диагностику с вышеуказанными заболеваниями.

Проведено исследование сыворотки больной по предлагаемому способу. При предварительной обработке криостатных срезов кожи лабораторного животного 100% ацетоном с температурой 6,0°C в течение 3 мин с последующим высушиванием в течение 2 мин при комнатной температуре и промывкой в течение 3 мин были обнаружены циркулирующие IgG-антитела к антигенам МСС эпидермиса и волосяных фолликулов.

На основании полученных данных больной был выставлен диагноз: болезнь Хейли-Хейли.

Проведено лечение: панангин 5,0 на 100,0 мл физиологического раствора в/в капельно, антигистаминные и седативные лекарственные средства, анилиновые красители и топические глюкокортикостероиды - с положительным клиническим эффектом.

В течение последующих 6 лет отмечалось волнообразное течение болезни со сменой периодов активного патологического процесса и его ремиссии. Учитывая маловыраженный положительный эффект от применение топических глюкокортикостероидов в 2010 году к лечению был присоединен системный глюкокортикостероид: преднизолон в дозе 40 мг/сут с последующим снижением дозы преднизолона до полной отмены. На фоне проводимого лечения отмечено полное разрешение высыпаний, отсутствие свежих высыпаний и зуда. На месте бывших высыпаний - участки гиперпигментации. На протяжении последних двух лет в лечении - масляный раствор ретинола пальмитат 150 тыс. Ед курсами и топическая терапия с применением мазей и кремов, содержащих глюкокортикостероиды, с положительным клиническим эффектом.

Пример 3.

Обследован больной П., 51 года, который является близким родственником (родной брат) больной П., 56 лет (пример 2), страдающей болезнью Хейли-Хейли с 38-летнего возраста. При осмотре (2010 год) жалоб нет, состояние удовлетворительное, кожные покровы и видимые слизистые оболочки свободны от высыпаний.

Проведено исследование сыворотки больного по предлагаемому способу. При предварительной обработки криостатных срезов кожи лабораторного животного 100% ацетоном с температурой 5,0°C в течение 5 мин с последующим высушиванием в течение 2 мин при комнатной температуре и промывкой в течение 4 мин в непрямом методе иммунофлюоресценции были обнаружены циркулирующие IgG-антитела к антигенам МСС эпидермиса.

Спустя 2 года после обследования у пациента появились клинические проявления болезни Хейли-Хейли на коже в области естественных складок (паховые складки и подмышечные впадины) и задней поверхности шеи. Лечение топическими глюкокортикостероидами имеет положительный эффект.

Предлагаемый способ применен у 20 больных, из них 15 больных болезнью Хейли-Хейли и 5 больных в контрольной группе разными кожными болезнями (буллезный пемфигоид, герпетиформный дерматит Дюринга, себорейная экзема, хроническая истинная экзема), а также у 2 здоровых лиц, близких родственников одной больной болезнью Хейли-Хейли. Всем больным болезнью Хейли-Хейли с помощью предлагаемого способа подтвержден диагноз. У здоровых лиц, близких родственников больной болезнью Хейли-Хейли, выявление циркулирующих IgG-антител к антигенам МСС эпидермиса позволило диагностировать доклиническую стадию болезни Хейли-Хейли. Ни в одном случае из контрольной группы присутствие антител к антигенам МСС эпидермиса и волосяных фолликулов не обнаружено.

Данный способ имеет большое значение для диагностики болезни Хейли-Хейли, особенно в случаях отсутствия в анамнезе наследственной предрасположенности и атипичных проявлений болезни с генерализацией патологического процесса по всему кожному покрову. С помощью данной методики подтверждена роль иммунной системы в патогенезе болезни Хейли-Хейли. Это позволяет своевременно провести эффективную адекватную терапию данного заболевания.

Способ подготовки пробы для проведения иммунофлюоресцентного исследования при диагностике болезни Хейли-Хейли, включающий размещение на предметном стекле криостатных срезов кожи лабораторного животного, нанесение на них типированной сыворотки больного, инкубацию при температуре 37,2°C во влажной камере в течение 45 мин, промывку срезов, отличающийся тем, что криостатные срезы кожи лабораторного животного предварительно обрабатывают 100% охлажденным ацетоном с температурой 4,0-6,0°C в течение 3-5 мин, затем высушивают в течение 2-3 мин при комнатной температуре, причем промывку срезов осуществляют в течение 3-5 минут.

Изобретение относится к медицине и к клинической биохимии и может быть использовано для оценки содержания циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности (цмЛПНП).

Способ анализа пробы // 2623873

Изобретение относится к области анализа биологических проб. Способ анализа проб включает в себя анализ клинико-химических и иммунологических параметров, а также включает установку картриджей для реагентов в приемное устройство, установку сосуда для пробы в пробоприемник, определение клинико-химических и иммунологических параметров с применением измерительной кюветы, промывку или извлечение использованных измерительных кювет, извлечение использованных картриджей для реагентов и сосуда для проб.

Способ прогнозирования безрецидивной выживаемости у больных раком молочной железы // 2623869

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов прогнозирования безрецидивной выживаемости у больных раком молочной железы. Сущность способа: определяют уровень экспрессии YKL-39 по технологии ТaqMan с помощью специфичных праймеров и пробы Sense 5’-aacaacaaggttatcatcaaggac-3’, AntiSense 5’-tttgggattcttggttttgag-3’, Probe FAM-5’-agtgaagtgatgctctaccagaccat-3’-BHQ1, далее проводят ПЦР-анализ экспрессии гена белка YKL-39, оценивают относительную экспрессию гена белка YKL-39 с помощью метода Pfaffl в условных единицах (УЕ) относительно гена рефери GAPDH, причем в качестве калибратора используют нормальную ткань молочной железы, в которой при проведении исследования аналогичным вышеописанному способом уровень экспрессии гена белка YKL-39 составляет 1 УЕ.

Способ выявления предраковых изменений в молочной железе // 2623857

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использован для выявления предраковых изменений в молочной железе. Для этого определяют концентрацию интерлейкина 8 (ИЛ-8) в супернатанте пробы клеток крови пациента, инкубированных с раково-эмбриональным антигеном (РЭА) и без РЭА.

Участок связывания антигена (fab), в том числе гуманизированный fab, против ботулинического нейротоксина с (варианты), способ получения fab с использованием дрожжей, способ и набор для детекции ботулинического нейротоксина с // 2623157

Изобретение относится к области биохимии. Описаны антиген-связывающие фрагменты (Fab), селективно связывающиеся с ботулиническим нейротоксином С, в частности гуманизированные Fab.

Способ проведения иммунохроматографического анализа с высокой степенью выявления маркера // 2623075

Изобретение относится к аналитической химии и представляет собой способ проведения иммунохроматографического анализа. Предложенный способ проведения иммунохроматографического анализа отличается тем, что при изготовлении тест-полоски используют прозрачную подложку.

Способ прогнозирования течения онкологических заболеваний // 2622756

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования течения онкологических заболеваний. В периферической крови больного определяют количество Т-лимфоцитов CD3+, 10*9/л, и их субпопуляций: лимфоцитов CD4+ и CD8+, 10*9/л, %, кроме того, вычисляют значение частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4+ на количество CD8+.

Способ диагностики бронхиальной астмы у детей младшего возраста // 2622019

Изобретение относится к области медицины и касается способа ранней диагностики бронхиальной астмы у детей в возрасте 5 лет и младше. Сущность способа заключается в том, что проводят анализ данных анамнеза, оценку клинических симптомов, изучение аллергологического статуса, которое проводят с использованием общего анализа крови, в котором определяют уровень эозинофилов и уровень общего иммуноглобулина Е в сыворотке крови, проведение цитологического исследования индуцированной мокроты, для определения в ней процентного содержания эозинофилов.

Способ прогнозирования тяжелого поражения центральной нервной системы при клещевом энцефалите // 2622016

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования развития тяжелого поражения центральной нервной системы при клещевом энцефалите с помощью анализа ликвора, отличающийся тем, что в ликворе больного определяют уровень серотонина, при его значении более 20 нг/мл прогнозируют среднетяжелое поражение центральной нервной системы с развитием непаралитической менингеальной формы, менее 20 нг/мл - прогнозируют тяжелое поражение центральной нервной системы с формированием паралитических очаговых форм.

Способ получения селективного иммуносорбента для удаления антител-igg к десмоглеину 3 типа из сыворотки крови больных пузырчаткой // 2622005

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунохимии, а именно к способу получения материала для биологического связывания с помощью сорбирующих колонок. Сущность изобретения заключается в том, что разработан способ получения селективного иммуносорбента для удаления антител - IgG к десмоглеину 3 типа из сыворотки крови больных пузырчаткой с использованием твердофазного носителя, заключающийся в том, что для его получения рекомбинантый человеческий десмоглеин 3 типа (Dsg3) иммобилизируют путем ковалентного связывания с твердофазным носителем, в качестве которого применяют агарозный сорбент, несущий на своей поверхности N-гидроксисукцинимидные группы: NHS-активированную агарозу.

Способ прогнозирования развития метастазов у больных раком желудка // 2624505

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования вероятности развития метастазов в лимфоузлы у пациентов с диагнозом рак желудка. Осуществляют амплификацию фрагментов генетических локусов В2М, HV2 и CFLAR методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с помощью набора высокоспецифичных праймеров на матрице выделенной ДНК, проводят количественную интерпретацию результатов амплификации и расчет относительной копийности генов по формуле rC=2-(Ct(ген мишень)-Ct(B2M)), где rС - относительная копийность гена в опухолевой ткани, Ct - среднее значение сигналов флюоресценции, сравнивают полученные значения относительной копийности генов с прогностическими, и при значениях rСHV2<870 и rСCFLAR>0,40 прогнозируют отсутствие метастазов, а при значениях rСHV2>870 и rСCFLAR<0,40 прогнозируют развитие метастазов. Способ позволяет осуществить раннее прогнозирование развития метастазов у больных раком желудка. 2 пр., 1 табл.

Способ прогнозирования длительности ремиссии у больных раком вульвы // 2624508

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогинекологии, и может быть использовано для прогноза возникновения рецидива у больных раком вульвы. Для этого в ткани больных раком вульвы иммуногистохимическим методом полуколичественно оценивают экспрессию маркеров ангиогенеза - CD34, апоптоза - р53, пролиферативной активности - Ki-67. При значении Ki-67 в пределах 80-90%, р53 в пределах 66,3-76,5%, CD34 в пределах 5,16-5,78% прогнозируют короткую ремиссию. При значении Ki-67 в пределах 7,6-9,8%, р53 в пределах 11,4-17%, CD34 в пределах 2,82-3,68% прогнозируют длительную ремиссию. Использование данного изобретения позволяет прогнозировать наступления короткой или длительной ремиссии у больных раком вульвы и позволяет на основе прогностических факторов оценивать эффективность лечения рака вульвы. 2 табл., 2 пр.

Способ оценки уровня компенсаторно-приспособительных и адаптационных возможностей организма космонавтов // 2624860

Изобретение относится к области медицины, а именно к авиакосмической медицине, и может быть использовано для оценки оптимального уровня компенсаторно-приспособительных и адаптационных возможностей организма космонавтов в условиях космического полета. Способ включает получение препарата хромосом, его окрашивание и определение цитогенетических показателей, при значении в пределах 18,0-20,6 условных единиц показателя (дозы) активных рибосомных генов оценивают уровень компенсаторно-приспособительных и адаптационных возможностей организма космонавта как оптимальный. Изобретение обеспечивает возможность использовать для оценки один универсальный показатель в условиях космического полета при повышении достоверности оценки, в том числе непосредственно на борту пилотируемого космического аппарата, а также для прогноза необходимости проведения дополнительных реабилитационных процедур в период реадаптации космонавтов к земной гравитации после окончания космических полетов. Оно также может найти широкое применение при первичном отборе кандидатов в космонавты, а также на этапах предварительной диагностики профпригодности лиц опасных профессий, для прогнозирования их профессионального долголетия, оценки рисков развития заболеваний, вызванных вредными условиями профессиональной деятельности, прогноза их течения и исхода. 3 пр., 4 табл.

Иммуноферментная тест-система для серологической диагностики анаэробной энтеротоксемии животных и контроля напряженности поствакцинального иммунитета // 2625031

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и касается иммуноферментной тест-системы для серологической диагностики анаэробной энтеротоксемии сельскохозяйственных животных, вызываемой бактериями Clostridium perfringens (Cl. perfringens), а также контроля напряженности поствакцинального иммунитета. Представленная иммуноферментная тест-система содержит специфические антигены штаммов Cl. perfringens №28 (тип А), №1 (тип В), №392 (тип С), №213 (тип D), полученные озвучиванием бактериальных клеток на ультразвуковом дезинтеграторе, последующим осаждаем эндотоксина сульфатом аммония и диализом против водопроводной воды. Антигены представляют собой специфический белок в концентрации 8-10 мкг/см3, адсорбированный на поверхности полистироловых лунок в карбонатно-бикарбонатном буфере. Также набор содержит контрольную положительную сыворотку, полученную к антигенам Clostridium perfringens типов А, В, С, D с активностью в ИФА 1:6400-1:12800, контрольную отрицательную сыворотку, конъюгат антивидовой, калий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двухзамещенный, натрий хлористый, хромоген (ортофенилендиамин), перекись водорода, стоп-реагент и панели для постановки реакции иммуноферментного анализа. Тест-система позволяет проводить диагностику анаэробной энтеротоксемии у животных и определить напряженность поствакцинального иммунитета. 2 табл., 5 пр.

Способ прогнозирования рецидивирования сарком мягких тканей // 2625035

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении сарком мягких тканей для прогнозирования возникновения рецидива. Для этого с помощью проточной цитофлюориметрии проводят определение процентного содержания T-regs(CD3+CD4+CD25+CD127dim) лимфоцитов от количества CD3+CD4+клеток в гомогенатах образцов опухолевой ткани и в ткани линии резекции после хирургического удаления опухоли. При значении этого показателя выше 11,1% в ткани опухоли и 7,1% в ткани линии резекции прогнозируют развитие рецидива саркомы. Использование данного способа позволяет прогнозировать возникновение рецидива при лечении сарком мягких тканей путем определения процентного содержания лимфоцитарной субпопуляции T-regs(CD3+CD4+CD25+CD127dim), поскольку данная популяция клеток влияет на развитие противоопухолевых иммунных реакций. 2 пр., 1 табл.

Способ прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии по массе cd4+лимфоцитов селезенки // 2625036

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии. Для этого после удаления селезенки определяют ее массу. В гистологических срезах лимфоидного органа после иммуногистохимического окрашивания морфометрически подсчитывают количество CD4+ Т-лимфоцитов и вычисляют их массу по формуле: М=m×D/100%, где М - масса CD4+ Т-лимфоцитов (г), m - масса селезенки (г), D - количество CD4+ Т-клеток (%). При значениях массы CD4+ Т-лимфоцитов более и равной 5,4 г констатируют благоприятное течение апластической анемии, а при менее 5,4 г устанавливают неблагоприятное течение заболевания. Использование данного способа в практической гематологии позволяет прогнозировать течение апластической анемии после спленэктомии, независимо от тяжести заболевания, что дает возможность дифференцированно подходить при назначении терапии. 3 пр.

Способ определения вида эндометриоидных образований яичников // 2625751

Изобретение относится к области медицины, к лабораторной диагностике в гинекологии и касается способа определения вида эндометриоза яичника. Способ включает анализ транскриптома эндометриоидной ткани очага эндометриоза яичника путем проведения исследования экспрессии гена TIMP1, при превышении экспрессии гена TIMP1 относительно гена выше 0,5 о.е. относят пациенток к группе с железисто-кистозным типом эндометриоза яичников, если меньше или равно 0,5 о.е. - к группе с кистозным вариантом эндометриоза яичников. Изобретение обеспечивает повышение эффективности диагностики и позволяет осуществить персонализированный подход к лечению пациенток с эндометриозом яичников. Предлагаемый маркер обладает специфичностью - 73%, чувствительностью - 83%, AUC=0,82. 4 пр.

Способ отбора терапевтических средств // 2625771

Настоящее изобретение касается способа предварительной оценки, будет ли терапевтическое средство, выбранное из группы полипептид, антитело или иммуноадгезин, иметь необходимую скорость выведения у яванского макака, человека. Сущность способа заключается в том, что наносят покрытие с баскуловирусными частицами (BV) на микротитрационный планшет. Далее проводят контактирование терапевтического средства с BV и проводят измерение уровня связывания терапевтического средства с BV. Также проводят измерение связывания терапевтического средства с микротитрационным планшетом без BV. Показатель BV рассчитывают из среднего значения, полученного в анализах связывания, в которых измеряют уровень связывания терапевтического средства с BV, деленного на среднее значение, полученное в анализах связывания, в которых измеряют уровень связывания терапевтического средства без BV. Показатель BV выше 5 указывает на повышенную вероятность того, что терапевтическое средство будет иметь быструю скорость выведения, при этом быстрая скорость выведения выше 12 мл/кг/день, а показатель BV ниже 5 указывает на повышенную вероятность того, что терапевтическое средство будет иметь необходимую скорость выведения. Использование способа позволяет выявлять антитела, у которых наблюдается быстрое выведение из организма. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 12 ил., 1 табл., 12 пр.

Способ дифференциальной диагностики опухолей аногенитальных маммароподобных желез // 2626123

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и патоморфологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики опухолей аногенитальных маммароподобных желез. Для этого определяют принадлежность опухоли к группе опухолей АМПЖ, локализацию опухоли в коже и её расположение в коже. При её расположении в дерме или в эпидермисе или при наличии связи опухоли дермы с эпидермисом определяют её доброкачественность или злокачественность. После этого определяют гистологический рисунок и архитектонику опухоли и их сходство с опухолями молочной железы. При расположении опухоли в эпидермисе, ее злокачественности и при наличии педжетоидного гистологического рисунка исследуемой опухоли и ее архитектонике, сходной с маммарной болезнью Педжета, дополнительно определяют наличие или отсутствие злокачественных опухолей других органов, распространяющихся на эпидермис и при отсутствии экспрессии Uroplakin-III, PSA, S100, р63, а также отсутствии злокачественных опухолей других органов, распространяющихся на эпидермис, диагностируют первичную экстраммамарную болезнь Педжета. При расположении опухоли в дерме или при наличии связи опухоли дермы с эпидермисом, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой итрадуктальной папилломы молочной железы, диагностируют папиллярную гидраденому. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой фиброаденомы молочной железы, диагностируют фиброаденому маммароподобных желез (МПЖ). При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой аденозной опухоли молочной железы, диагностируют аденозную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой лактирующей аденомы молочной железы, диагностируют лактирующую аденому МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой доброкачественной филоидной опухоли молочной железы, диагностируют доброкачественную филоидную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой злокачественной филоидной опухоли молочной железы, диагностируют злокачественную филоидную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой дуктальной карциномы in situ молочной железы, диагностируют дуктальную аденокарциному in situ аногенитальных МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей с архитектоникой неспецифицированной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие неспецифицированной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют дуктальную аденокарциному МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей с архитектоникой тубуло-лобулярной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие тубуло-лобулярной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют тубуло-лобулярную карциному МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей, с архитектоникой аденокистозной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие аденокистозной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют аденокистозную карциному МПЖ.. При расположении опухоли в эпидермисе и дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке в дерме и педжетоидном гистологическом рисунке в эпидермисе и архитектонике, схожей с архитектоникой инвазивной карциномы молочной железы и маммарной болезни Педжета, дополнительно оценивают отсутствие или наличие инвазивной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют экстрамаммарную болезнь Педжета, вторичную к инвазивной карциноме АМПЖ. Способ обеспечивает диагностически значимые клинико-морфологические критерии и их комбинации для дифференциальной диагностики опухолей АМПЖ при повышении чувствительности, специфичности и точности проводимой дифференциальной диагностики. 6 ил., 3 пр.

Способ оценки влияния нитрозаминов на апоптоз у детей, проживающих в неблагоприятных условиях среды обитания // 2626516

Изобретение относится к области медицины и биологии, в частности к исследованиям таких канцерогенных веществ, как нитрозамины, модифицирующие апоптоз у детей, проживающих в неблагоприятных условиях среды обитания. Сущность изобретения: производят отбор пробы крови у ребенка и определяют в пробе наличие нитрозамина - нитрозодиметиламина (НДМА), в тех пробах крови пациентов, где установлено наличие НДМА, извлекают мононуклеарные клетки и с использованием метода проточной цитометрии определяют количество белка р53. Также у указанного ребенка отбирают пробу буккального эпителия и осуществляют выделение из указанной пробы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК). Затем на детектирующем амплификаторе с использованием ПЦР проводят генотипирование полиморфизма, используя в качестве праймера участок ДНК Arg72Pro (rs1042522) гена ТР53, путем исследования его аллельного состояния, устанавливая при этом для гена ТР53 одно из следующих его состояний: гетерозиготное, или нормальное гомозиготное, или патологическое гомозиготное. И если одновременно установлено наличие патологического гомозиготного или гетерозиготного генотипов Arg72Pro гена ТР53, снижение в крови содержания р53 в 1,5 и более раз, по отношению к нижней границе физиологической нормы для детей. При наличии в крови НДМА оценивают процесс апоптоза у ребенка под влиянием нитрозаминов как замедленный. Изобретение обеспечивает точность оценки влияния нитрозаминов на апоптоз с возможностью в последующем судить о развитии иммунодефицитных и иммунопролиферативных состояний населения уже на ранних стадиях. 1 табл., 2 пр.