Способ прогнозирования развития метастазов у больных раком желудка

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования вероятности развития метастазов в лимфоузлы у пациентов с диагнозом рак желудка. Осуществляют амплификацию фрагментов генетических локусов В2М, HV2 и CFLAR методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с помощью набора высокоспецифичных праймеров на матрице выделенной ДНК, проводят количественную интерпретацию результатов амплификации и расчет относительной копийности генов по формуле rC=2-(Ct(ген мишень)-Ct(B2M)), где rС - относительная копийность гена в опухолевой ткани, Ct - среднее значение сигналов флюоресценции, сравнивают полученные значения относительной копийности генов с прогностическими, и при значениях rСHV2<870 и rСCFLAR>0,40 прогнозируют отсутствие метастазов, а при значениях rСHV2>870 и rСCFLAR<0,40 прогнозируют развитие метастазов. Способ позволяет осуществить раннее прогнозирование развития метастазов у больных раком желудка. 2 пр., 1 табл.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к молекулярной биологии, онкологии, и может быть использовано для прогнозирования вероятности развития метастазов в лимфоузлы у пациентов с диагнозом рак желудка.

Рак желудка занимает одно из ведущих мест в общей структуре онкологических заболеваний в РФ: 8,2% у мужчин и 5,4% у женщин. В структуре смертности населения России от злокачественных новообразований рак желудка занимает второе место с показателем 10,7% или 30788 человек в 2014 году (Под редакцией А.Д. Каприна, В.В. Старинского, Г.В. Петровой// Злокачественные новообразования в России в 2014 году (см. заболеваемость и смертность), Москва, 2016). Метастазы возникают у 80-90% больных раком желудка, при этом выживаемость составляет 65% в случае ранней диагностики заболевания и менее 15% на поздних стадиях развития онкологического процесса (см. Takuji G., Yanagisawa A., Sasako М. Ono Н, Nakanishi Y., Shimoda Т., Kato Y. Incidence in lymph node metastasis from early gastric cancer: estimation with a large number of cases at two large centers.// Gastric Cancer. - 2000. - V. 3. - P. 219-225). Поэтому поиск потенциальных молекулярных маркеров, пригодных для ранней диагностики и прогнозирования тяжести течения этого заболевания является актуальной задачей.

Изменение копийности генов (Copy Number Variation или CNV) является одним из основных механизмов контроля раковой клеткой ключевых для выживания и малигнизации экспрессии генов. Копийность генов - вид генетического полиморфизма, возникающий в результате несбалансированных хромосомных перестроек, таких как делеции и дупликации. Результатом вариации может явиться снижение или повышение числа копий определенного гена, и, следовательно, пониженная или повышенная экспрессия продукта гена - белка или не кодирующей РНК. CNV представляют собой критические генетические события, которые способствуют развитию и прогрессированию злокачественных новообразований у человека (см. Кит О.И., Водолажский Д.И., Кутилин Д.С., Гудуева Е.Н. Изменение копийности генетических локусов при раке желудка// Молекулярная биология. - 2015. - Т. 49, №4. - С. 658-666).

Изменение числа копий митохондриальных генов (HV2), характерное для раковых клеток, отражает состояние биоэнергетики малигнизированных клеток (см. Scatena R. Mitochondria and cancer: a growing role in apoptosis, cancer cell metabolism and dedifferentiation.// Adv Exp Med Biol. - 2012. - V. 942. - P. 287-308). HV2 - локус D-петли митохондриальной ДНК (мтДНК), относящийся к регуляторным не кодирующим элементам, поэтому он обладает высокой изменчивостью. Копийность мтДНК в лейкоцитах крови определяли во многих исследованиях при различных видах рака, хотя вопрос о ценности показателя копийности мтДНК в лейкоцитах для диагностики и прогноза лечения опухолей желудка остается дискуссионным. Так, в широкомасштабном исследовании, включавшем в себя группы пациентов с раком желудка на различных стадиях и условно здоровых доноров, не было обнаружено значимой ассоциации между числом копий мтДНК в лейкоцитах и риском развития рака желудка, но, была показана достоверная корреляция данного показателя и прогрессии заболевания (см. Liao L.M. et al. Mitochondrial DNA Copy Number and Risk of Gastric Cancer: a Report from the Shanghai Women's Health Study // Cancer Epidemiol Biomarkers Prev; 2011, 20(9); 1944-9). Результаты другого исследования продемонстрировали достоверную ассоциацию копийности мтДНК с риском малигнизации тканей желудка (см. Fernfndes J. et al. Circulating Mitochondrial DNA Level, a Noninvasive Biomarker for the Early Detection of Gastric Cancer // Cancer Epidemiol Biomarkers Prev; 2014. 23(11); 2430-8).

Ген CFLAR кодирует белок регулятор апоптоза и структурно похож на каспазу-8, тем не менее, у кодируемого белка отсутствует активность каспазы, и он действует как ингибитор апоптоза (см. Ili C.G., Brebi P., Tapia О., Sandoval A., Lopez J., Garcia P., Leal P., Sidransky D., Guerrero-Preston R., Roa J.C. Cellular FLICE-like inhibitory protein long form (c-FLIPL) overexpression is related to cervical cancer progression.// Int J Gynecol Pathol. - 2013. - V. 32(3). - P. 316-22).

Поэтому, в качестве маркеров для прогнозирования вероятности развития метастазов в лимфоузлы у пациентов с диагнозом рак желудка адекватно использование показателей относительной копийности генов HV2 и CFLAR.

Анализ патентных источников показал наличие близких по тематике изобретений:

1) «Способ прогнозирования продолжительности жизни онкологических больных после радикальных операций» (Заявка: 94005926/14, 10.02.1994). Сущностью способа является то, что на основе определения онкологических индексов - измерения антропометрических данных и характеристик опухоли, показателей общего и биохимического анализов крови.

2) «Способ прогнозирования метастазов у больных раком желудка» (Заявка: 2010132604/15, 03.08.2010). Сущностью способа является то, что на основе иммуногистохимического исследования, маркера пролиферативной активности Ki-67 и маркеров апоптоза р53, bcl-2 у больных раком желудка.

Описанные изобретения используют в анализе способы принципиально отличающиеся от нашего; обладающие меньшей чувствительностью или специфичностью, чем предлагаемый нами.

Изобретение «Способ прогнозирования развития метастазов у больных раком желудка по уровню копийности генов HV2 и CFLAR» является новым, так как данная панель генов ранее не использовалась для заявленного в способе технического результата.

Техническим результатом заявляемого изобретения является создание нового, простого в исполнении, не дорогостоящего и более точного способа оценки предрасположенности к развитию метастазов у больных раком желудка.

Заявляемый способ является экономически оправданным, осуществляется в условиях стандартной лаборатории молекулярной биологии, без использования специального дорогостоящего оборудования; обладает высокой чувствительностью и специфичностью, универсален, его осуществление возможно с операционными биоптатами (парафиновыми блоками), регистрацию результатов производят однократно в конце исследования, способ занимает менее 8 часов.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что геномную ДНК экстрагируют из операционных биоптатов тканей желудка и проводят амплификацию с высокоспецифичными праймерами для генов HV2 и CFLAR и В2М, анализируют первичные данные и вычисляют относительную копийность (rC) по формуле 2-ΔCt, где ΔCt=Ct(исследуемого гена) - Ct(B2M)). Затем сравнивают полученные значения rC с прогностическими значениями копийности, и при значениях rCHV2<870 и rCCFLAR>0,40 прогнозируют отсутствие метастазов (чувствительность 70%), а при значениях rCHV2>870 и rCCFLAR<0,40 прогнозируют развитие метастазов (чувствительность 65%).

Заявленный анализ основан на определении количества копий генов HV2 и CFLAR относительно референсного локуса В2М (β-2 микроглобин) в опухолевой ткани желудка, и последующем сравнении полученных значений с интервалом копийности rCHV2 и rCCFLAR характерным для развития метастазов или их отсутствия.

Заявленный способ включает следующие приемы:

- выделение тотальной ДНК из тканевых проб или из парафиновых блоков с помощью метода фенол-хлороформной экстракции;

- определение относительной копийности генетических локусов методом ПЦР-РВ в присутствии красителя EVA-Green и специфичных праймеров на матрице выделенной ДНК;

- анализ первичных данных с помощью программного продукта амплификатора;

- расчет относительной копийности гена (rC) на основании соотношения сигналов, продуцируемых амплификатами изучаемой и референсной последовательностей,

- сравнением rC пробы с прогностическими значениями копийности rC стандарт, определенными для больных раком желудка с метастазами или без метастазов в лимфоузлах.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

На первом этапе отбираются образцы опухолевых тканей из операционного или биопсийного материала. Для транспортировки в лабораторию и хранения образцы замораживаются в жидком азоте.

Фрагменты ткани измельчаются скальпелем и/или ножницами, затем растираются в фарфоровых ступках в присутствии лизирующего SDS-содержащего буфера. К лизатам добавляется протеиназа К и инкубируется при t=56°C в течение 1 часа.

ДНК выделяется из прозрачного лизата тканей с использованием фенол-хлороформной экстракции (см. Корниенко И.В., Водолажский Д.И., Вейко В.П. и др. Подготовка биологического материала для молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел. - Ростов-н/Д: ООО Ростиздат, 2001).

Концентрация полученных препаратов ДНК измеряется на флюориметре. Для проведения ПЦР-РВ концентрацию ДНК в каждом образце нормализуют до 2нг/мкл.

Анализируемые последовательности генетических локусов амплифицируют в 25 мкл ПЦР-смеси, содержащей 10 нг геномной ДНК, 0,2 м М dNTPs, 2,5 мМ MgCl2, 1х-ый ПЦР-буфер, 1 е.а. ДНК-полимеразы Thermus aquaticus («Синтол», Россия), краситель SYBR@Green I (Invitrogen, США) и по 200нМ прямого и обратного праймеров для референсного гена (β-2 микроглобин) или гена-мишени. Прямые и обратные праймеры были разработаны для нуклеотидных последовательностей, содержащих интронные и экзонные участки генетических локусов, с использованием данных NCBI GenBank (таблица 1).

Для оптимизации ПЦР использовали только праймеры, которые обеспечивали специфичную амплификацию необходимого количества продукта и не образовывали между собой высокоэнергетических внутренних структур: шпилек и дуплексов. Оптимизировали такие параметры ПЦР, как концентрация MgCl2 и праймеров в ПЦР-смеси, соотношение прямых и обратных праймеров, количество циклов амплификации, время элонгации, денатурации и отжига праймеров. В результате оптимизации подобрали одинаковую температуру отжига праймеров для всех локусов.

В таблице 1 представлены выбранные последовательности прямого и обратного праймеров для ПЦР-РВ.

Количественную ПЦР-РВ амплификацию проводят на термоциклере, например, Bio-Rad CFX96 (USA), в соответствии с инструкциями производителя по следующей программе. Первичная денатурация: t=95°C в течение 3 мин 40 циклов: t=95°C в течение 10 с, t=58°C в течение 30 с, t=72°C в течение 15 с.

Относительную копийность генетических локусов определяют, последовательно рассчитывая среднее значение сигналов флюоресценции (Ct) по трем повторам и уровень копийности исследуемого локуса относительно референсного гена В2М, по формуле rC=2-ΔCt, где rC - относительная копийность гена, ΔCt - разность среднего Ct гена мишени и среднего Ct референсного гена: ΔCt=Ct(ген мишень) - Ct(B2M).

Работоспособность заявляемого способа подтверждается следующими клиническими примерами.

Пример №1. Больная Д., дата рождения 27.04.1942 г., госпитализирована в отделении абдоминальной онкологии №1 РНИОИ 19.11.2014 г. с верифицированным диагнозом рак желудка, ФГС 09.10.2014 Cancer субкардиального отдела желудка. Атрофический анацидный (РН-5,0) Нр-не ассоциированный гастрит. Дуоденит.

При СРКТ органов грудной клетки, брюшной полости и малого таза 02.10.2014 г. перигастральных, периинтестинальных образований не выявлено. Легочная ткань - с обеих сторон в легких диффузный пневмосклероз, что позволило предположить до операции стадию II, T3N×M0. 19.11.2014 г. Лапаротомия, гастрэктомия с расширенной лимфаденкэктомией. При макроскопическом исследовании в удаленном желудке обнаружена опухоль до 6 см в диаметре по малой кривизне, инфильтративно язвенного типа, увеличенные лимфоузлы вдоль левых желудочных сосудов (до 10).

По данным патоморфологического исследования после операции №88480-483/14 G2 аденокарцинома с изъязвлением инвазией всей толщи стенки желудка и подлежащей жировой ткани; 88494-503 в 1 из 10 лимфоузлов-метастаз аденокарциномы. Таким образом, степень распространения процесса, согласно классификации TNM соответствовала T3N1M0.

Результаты оценки копийности целевых генов в биоптате у данной пациентки: rCHV2=921,2 (находится в границах прогностического интервала развития метастазов rCHV2(прогност)>870) и rCCFLAR=0,19 (находится в границах прогностического интервала развития метастазов rCCFLAR(прогност)<0,40).

Пример №2. Больная Ш., дата рождения 08.09.1940 г., госпитализирована в отделении абдоминальной онкологии №1 РНИОИ 30.06.2015 г. с верифицированным диагнозом рак желудка. ФГДС 17.06.2015 рак антрального отдела желудка, гистологическое исследование №3284 малодифференцированная аденокарцинома. КТ брюшной полости и забрюшинного пространства 23.06.2015 КТ-признаки диффузных изменений паренхимы печени по типу стеатоза, хронического холецистита, густой желчи в полости желчного пузыря, хронического панкреатита, признаков метастатического поражения не выявлено, что позволило предположить до операции стадию II, T3N×M0.

02.07.2015 была выполнена операция: дистальная субтотальная резекция желудка по Бильрот 2 с расширенной лимфаденэктомией. При макроскопическом исследовании в удаленной части желудка обнаружена опухоль в выходном отделе до 6 см в диаметре, инфильтративно-язвенного типа, на разрезе - белесоватого цвета, в большом и малом сальнике увеличенных лимфоузлов не выявлено. По данным патоморфологического исследования после операции №53119-121/15 G2-3 аденокарцинома с инвазией в клетчатку. 53122-7/15 метастазов опухоли в лимфоузлах нет. Таким образом, степень распространения процесса, согласно классификации TNM соответствовала T4aN0M0.

Результаты оценки копийности целевых генов в биоптате у данной пациентки: rCHV2=481,9 (находится в границах прогностического интервала отсутствия метастазов rCHV2(прогност)<870) и rCCFLAR=0,59 (находится в границах прогностического интервала отсутствия метастазов rCCFLAR(прогност)>0,40)

Предлагаемым способом было осуществлено прогнозирование вероятности развития метастазов у 30 пациентов с диагностированным раком желудка.

Технико-экономическая эффективность изобретения. «Способ прогнозирования развития метастазов у больных раком желудка по уровню копийности генов HV2 и CFLAR» позволяет с высокой точностью прогнозировать течение такого заболевания как рак желудка. Заявляемый способ является экономически оправданным для уточнения особенностей течения заболевания и дает возможность скорректировать тактику лечения, осуществляется в условиях стандартной лаборатории молекулярной биологии, без использования специального дорогостоящего оборудования; обладает высокой чувствительностью и специфичностью, универсален, его осуществление возможно с операционными биоптатами, способ занимает менее 8 часов.

Способ прогнозирования развития метастазов у больных раком желудка, включающий получение ДНК из операционного материала опухолевой ткани пациента, отличающийся тем, что осуществляют амплификацию фрагментов генетических локусов В2М, HV2 и CFLAR методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с помощью набора высокоспецифичных праймеров на матрице выделенной ДНК, проводят количественную интерпретацию результатов амплификации и расчет относительной копийности генов по формуле

rC=2-(Ct(ген мишень)-Ct(B2M)), где

rC - относительная копийность гена в опухолевой ткани,

Ct - среднее значение сигналов флюоресценции,

сравнивают полученные значения относительной копийности генов с прогностическими, и при значениях rCHV2<870 и rCCFLAR>0,40 прогнозируют отсутствие метастазов, а при значениях rCHV2>870 и rCCFLAR<0,40 прогнозируют развитие метастазов.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологи, и представляет собой способ подготовки пробы для проведения иммунофлюоресцентного исследования при диагностике болезни Хейли-Хейли, включающий размещение на предметном стекле криостатных срезов кожи лабораторного животного, нанесение на них типированной сыворотки больного, инкубацию при температуре 37,2°C во влажной камере в течение 45 мин, промывку срезов, отличающийся тем, что криостатные срезы кожи лабораторного животного предварительно обрабатывают 100% охлажденным ацетоном с температурой 4,0-6,0°C в течение 3-5 мин, затем высушивают в течение 2-3 мин при комнатной температуре, причем промывку срезов осуществляют в течение 3-5 минут.

Изобретение относится к медицине и к клинической биохимии и может быть использовано для оценки содержания циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности (цмЛПНП).

Изобретение относится к области анализа биологических проб. Способ анализа проб включает в себя анализ клинико-химических и иммунологических параметров, а также включает установку картриджей для реагентов в приемное устройство, установку сосуда для пробы в пробоприемник, определение клинико-химических и иммунологических параметров с применением измерительной кюветы, промывку или извлечение использованных измерительных кювет, извлечение использованных картриджей для реагентов и сосуда для проб.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов прогнозирования безрецидивной выживаемости у больных раком молочной железы. Сущность способа: определяют уровень экспрессии YKL-39 по технологии ТaqMan с помощью специфичных праймеров и пробы Sense 5’-aacaacaaggttatcatcaaggac-3’, AntiSense 5’-tttgggattcttggttttgag-3’, Probe FAM-5’-agtgaagtgatgctctaccagaccat-3’-BHQ1, далее проводят ПЦР-анализ экспрессии гена белка YKL-39, оценивают относительную экспрессию гена белка YKL-39 с помощью метода Pfaffl в условных единицах (УЕ) относительно гена рефери GAPDH, причем в качестве калибратора используют нормальную ткань молочной железы, в которой при проведении исследования аналогичным вышеописанному способом уровень экспрессии гена белка YKL-39 составляет 1 УЕ.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использован для выявления предраковых изменений в молочной железе. Для этого определяют концентрацию интерлейкина 8 (ИЛ-8) в супернатанте пробы клеток крови пациента, инкубированных с раково-эмбриональным антигеном (РЭА) и без РЭА.

Изобретение относится к области биохимии. Описаны антиген-связывающие фрагменты (Fab), селективно связывающиеся с ботулиническим нейротоксином С, в частности гуманизированные Fab.

Изобретение относится к аналитической химии и представляет собой способ проведения иммунохроматографического анализа. Предложенный способ проведения иммунохроматографического анализа отличается тем, что при изготовлении тест-полоски используют прозрачную подложку.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования течения онкологических заболеваний. В периферической крови больного определяют количество Т-лимфоцитов CD3+, 10*9/л, и их субпопуляций: лимфоцитов CD4+ и CD8+, 10*9/л, %, кроме того, вычисляют значение частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4+ на количество CD8+.

Изобретение относится к области медицины и касается способа ранней диагностики бронхиальной астмы у детей в возрасте 5 лет и младше. Сущность способа заключается в том, что проводят анализ данных анамнеза, оценку клинических симптомов, изучение аллергологического статуса, которое проводят с использованием общего анализа крови, в котором определяют уровень эозинофилов и уровень общего иммуноглобулина Е в сыворотке крови, проведение цитологического исследования индуцированной мокроты, для определения в ней процентного содержания эозинофилов.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования развития тяжелого поражения центральной нервной системы при клещевом энцефалите с помощью анализа ликвора, отличающийся тем, что в ликворе больного определяют уровень серотонина, при его значении более 20 нг/мл прогнозируют среднетяжелое поражение центральной нервной системы с развитием непаралитической менингеальной формы, менее 20 нг/мл - прогнозируют тяжелое поражение центральной нервной системы с формированием паралитических очаговых форм.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогинекологии, и может быть использовано для прогноза возникновения рецидива у больных раком вульвы. Для этого в ткани больных раком вульвы иммуногистохимическим методом полуколичественно оценивают экспрессию маркеров ангиогенеза - CD34, апоптоза - р53, пролиферативной активности - Ki-67. При значении Ki-67 в пределах 80-90%, р53 в пределах 66,3-76,5%, CD34 в пределах 5,16-5,78% прогнозируют короткую ремиссию. При значении Ki-67 в пределах 7,6-9,8%, р53 в пределах 11,4-17%, CD34 в пределах 2,82-3,68% прогнозируют длительную ремиссию. Использование данного изобретения позволяет прогнозировать наступления короткой или длительной ремиссии у больных раком вульвы и позволяет на основе прогностических факторов оценивать эффективность лечения рака вульвы. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к авиакосмической медицине, и может быть использовано для оценки оптимального уровня компенсаторно-приспособительных и адаптационных возможностей организма космонавтов в условиях космического полета. Способ включает получение препарата хромосом, его окрашивание и определение цитогенетических показателей, при значении в пределах 18,0-20,6 условных единиц показателя (дозы) активных рибосомных генов оценивают уровень компенсаторно-приспособительных и адаптационных возможностей организма космонавта как оптимальный. Изобретение обеспечивает возможность использовать для оценки один универсальный показатель в условиях космического полета при повышении достоверности оценки, в том числе непосредственно на борту пилотируемого космического аппарата, а также для прогноза необходимости проведения дополнительных реабилитационных процедур в период реадаптации космонавтов к земной гравитации после окончания космических полетов. Оно также может найти широкое применение при первичном отборе кандидатов в космонавты, а также на этапах предварительной диагностики профпригодности лиц опасных профессий, для прогнозирования их профессионального долголетия, оценки рисков развития заболеваний, вызванных вредными условиями профессиональной деятельности, прогноза их течения и исхода. 3 пр., 4 табл.

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и касается иммуноферментной тест-системы для серологической диагностики анаэробной энтеротоксемии сельскохозяйственных животных, вызываемой бактериями Clostridium perfringens (Cl. perfringens), а также контроля напряженности поствакцинального иммунитета. Представленная иммуноферментная тест-система содержит специфические антигены штаммов Cl. perfringens №28 (тип А), №1 (тип В), №392 (тип С), №213 (тип D), полученные озвучиванием бактериальных клеток на ультразвуковом дезинтеграторе, последующим осаждаем эндотоксина сульфатом аммония и диализом против водопроводной воды. Антигены представляют собой специфический белок в концентрации 8-10 мкг/см3, адсорбированный на поверхности полистироловых лунок в карбонатно-бикарбонатном буфере. Также набор содержит контрольную положительную сыворотку, полученную к антигенам Clostridium perfringens типов А, В, С, D с активностью в ИФА 1:6400-1:12800, контрольную отрицательную сыворотку, конъюгат антивидовой, калий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двухзамещенный, натрий хлористый, хромоген (ортофенилендиамин), перекись водорода, стоп-реагент и панели для постановки реакции иммуноферментного анализа. Тест-система позволяет проводить диагностику анаэробной энтеротоксемии у животных и определить напряженность поствакцинального иммунитета. 2 табл., 5 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении сарком мягких тканей для прогнозирования возникновения рецидива. Для этого с помощью проточной цитофлюориметрии проводят определение процентного содержания T-regs(CD3+CD4+CD25+CD127dim) лимфоцитов от количества CD3+CD4+клеток в гомогенатах образцов опухолевой ткани и в ткани линии резекции после хирургического удаления опухоли. При значении этого показателя выше 11,1% в ткани опухоли и 7,1% в ткани линии резекции прогнозируют развитие рецидива саркомы. Использование данного способа позволяет прогнозировать возникновение рецидива при лечении сарком мягких тканей путем определения процентного содержания лимфоцитарной субпопуляции T-regs(CD3+CD4+CD25+CD127dim), поскольку данная популяция клеток влияет на развитие противоопухолевых иммунных реакций. 2 пр., 1 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии. Для этого после удаления селезенки определяют ее массу. В гистологических срезах лимфоидного органа после иммуногистохимического окрашивания морфометрически подсчитывают количество CD4+ Т-лимфоцитов и вычисляют их массу по формуле: М=m×D/100%, где М - масса CD4+ Т-лимфоцитов (г), m - масса селезенки (г), D - количество CD4+ Т-клеток (%). При значениях массы CD4+ Т-лимфоцитов более и равной 5,4 г констатируют благоприятное течение апластической анемии, а при менее 5,4 г устанавливают неблагоприятное течение заболевания. Использование данного способа в практической гематологии позволяет прогнозировать течение апластической анемии после спленэктомии, независимо от тяжести заболевания, что дает возможность дифференцированно подходить при назначении терапии. 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, к лабораторной диагностике в гинекологии и касается способа определения вида эндометриоза яичника. Способ включает анализ транскриптома эндометриоидной ткани очага эндометриоза яичника путем проведения исследования экспрессии гена TIMP1, при превышении экспрессии гена TIMP1 относительно гена выше 0,5 о.е. относят пациенток к группе с железисто-кистозным типом эндометриоза яичников, если меньше или равно 0,5 о.е. - к группе с кистозным вариантом эндометриоза яичников. Изобретение обеспечивает повышение эффективности диагностики и позволяет осуществить персонализированный подход к лечению пациенток с эндометриозом яичников. Предлагаемый маркер обладает специфичностью - 73%, чувствительностью - 83%, AUC=0,82. 4 пр.

Настоящее изобретение касается способа предварительной оценки, будет ли терапевтическое средство, выбранное из группы полипептид, антитело или иммуноадгезин, иметь необходимую скорость выведения у яванского макака, человека. Сущность способа заключается в том, что наносят покрытие с баскуловирусными частицами (BV) на микротитрационный планшет. Далее проводят контактирование терапевтического средства с BV и проводят измерение уровня связывания терапевтического средства с BV. Также проводят измерение связывания терапевтического средства с микротитрационным планшетом без BV. Показатель BV рассчитывают из среднего значения, полученного в анализах связывания, в которых измеряют уровень связывания терапевтического средства с BV, деленного на среднее значение, полученное в анализах связывания, в которых измеряют уровень связывания терапевтического средства без BV. Показатель BV выше 5 указывает на повышенную вероятность того, что терапевтическое средство будет иметь быструю скорость выведения, при этом быстрая скорость выведения выше 12 мл/кг/день, а показатель BV ниже 5 указывает на повышенную вероятность того, что терапевтическое средство будет иметь необходимую скорость выведения. Использование способа позволяет выявлять антитела, у которых наблюдается быстрое выведение из организма. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 12 ил., 1 табл., 12 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и патоморфологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики опухолей аногенитальных маммароподобных желез. Для этого определяют принадлежность опухоли к группе опухолей АМПЖ, локализацию опухоли в коже и её расположение в коже. При её расположении в дерме или в эпидермисе или при наличии связи опухоли дермы с эпидермисом определяют её доброкачественность или злокачественность. После этого определяют гистологический рисунок и архитектонику опухоли и их сходство с опухолями молочной железы. При расположении опухоли в эпидермисе, ее злокачественности и при наличии педжетоидного гистологического рисунка исследуемой опухоли и ее архитектонике, сходной с маммарной болезнью Педжета, дополнительно определяют наличие или отсутствие злокачественных опухолей других органов, распространяющихся на эпидермис и при отсутствии экспрессии Uroplakin-III, PSA, S100, р63, а также отсутствии злокачественных опухолей других органов, распространяющихся на эпидермис, диагностируют первичную экстраммамарную болезнь Педжета. При расположении опухоли в дерме или при наличии связи опухоли дермы с эпидермисом, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой итрадуктальной папилломы молочной железы, диагностируют папиллярную гидраденому. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой фиброаденомы молочной железы, диагностируют фиброаденому маммароподобных желез (МПЖ). При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой аденозной опухоли молочной железы, диагностируют аденозную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой лактирующей аденомы молочной железы, диагностируют лактирующую аденому МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой доброкачественной филоидной опухоли молочной железы, диагностируют доброкачественную филоидную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой злокачественной филоидной опухоли молочной железы, диагностируют злокачественную филоидную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой дуктальной карциномы in situ молочной железы, диагностируют дуктальную аденокарциному in situ аногенитальных МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей с архитектоникой неспецифицированной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие неспецифицированной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют дуктальную аденокарциному МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей с архитектоникой тубуло-лобулярной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие тубуло-лобулярной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют тубуло-лобулярную карциному МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей, с архитектоникой аденокистозной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие аденокистозной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют аденокистозную карциному МПЖ.. При расположении опухоли в эпидермисе и дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке в дерме и педжетоидном гистологическом рисунке в эпидермисе и архитектонике, схожей с архитектоникой инвазивной карциномы молочной железы и маммарной болезни Педжета, дополнительно оценивают отсутствие или наличие инвазивной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют экстрамаммарную болезнь Педжета, вторичную к инвазивной карциноме АМПЖ. Способ обеспечивает диагностически значимые клинико-морфологические критерии и их комбинации для дифференциальной диагностики опухолей АМПЖ при повышении чувствительности, специфичности и точности проводимой дифференциальной диагностики. 6 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины и биологии, в частности к исследованиям таких канцерогенных веществ, как нитрозамины, модифицирующие апоптоз у детей, проживающих в неблагоприятных условиях среды обитания. Сущность изобретения: производят отбор пробы крови у ребенка и определяют в пробе наличие нитрозамина - нитрозодиметиламина (НДМА), в тех пробах крови пациентов, где установлено наличие НДМА, извлекают мононуклеарные клетки и с использованием метода проточной цитометрии определяют количество белка р53. Также у указанного ребенка отбирают пробу буккального эпителия и осуществляют выделение из указанной пробы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК). Затем на детектирующем амплификаторе с использованием ПЦР проводят генотипирование полиморфизма, используя в качестве праймера участок ДНК Arg72Pro (rs1042522) гена ТР53, путем исследования его аллельного состояния, устанавливая при этом для гена ТР53 одно из следующих его состояний: гетерозиготное, или нормальное гомозиготное, или патологическое гомозиготное. И если одновременно установлено наличие патологического гомозиготного или гетерозиготного генотипов Arg72Pro гена ТР53, снижение в крови содержания р53 в 1,5 и более раз, по отношению к нижней границе физиологической нормы для детей. При наличии в крови НДМА оценивают процесс апоптоза у ребенка под влиянием нитрозаминов как замедленный. Изобретение обеспечивает точность оценки влияния нитрозаминов на апоптоз с возможностью в последующем судить о развитии иммунодефицитных и иммунопролиферативных состояний населения уже на ранних стадиях. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования риска развития быстрорастущей миомы матки, заключающийся в том, что исследуют ультразвуковые параметры матки с подсчетом количества миоматозных узлов, методом краевой дегидратации менструальных выделений (МВ) определяют наличие параллельных и волокнистых структур и рассчитывают коэффициент Р: где z рассчитывают по формуле:z=b1×x1+b2×x2+b3×х3+а,где b1 - коэффициент, равный 2,172; x1 - волокнистые структуры в MB: наличие «2»; отсутствие «1»; b2 - коэффициент, равный 2,238; x2 - параллельные структуры в MB: наличие «2»; отсутствие «1»; b3 - коэффициент, равный 1,568; x3 - количество узлов; а - константа, равная –10,915; и при значении Р>0,5 дополнительно методом иммуноферментного анализа исследуют уровни лигандов APRIL и TRAIL, и при значении APRIL более 11,1 нг/мл, TRAIL менее 22,5 пг/мл прогнозируют риск развития быстрорастущей миомы матки. Изобретение обеспечивает повышение точности прогнозирования. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования вероятности развития метастазов в лимфоузлы у пациентов с диагнозом рак желудка. Осуществляют амплификацию фрагментов генетических локусов В2М, HV2 и CFLAR методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с помощью набора высокоспецифичных праймеров на матрице выделенной ДНК, проводят количественную интерпретацию результатов амплификации и расчет относительной копийности генов по формуле rC2--Ct), где rС - относительная копийность гена в опухолевой ткани, Ct - среднее значение сигналов флюоресценции, сравнивают полученные значения относительной копийности генов с прогностическими, и при значениях rСHV2<870 и rСCFLAR>0,40 прогнозируют отсутствие метастазов, а при значениях rСHV2>870 и rСCFLAR<0,40 прогнозируют развитие метастазов. Способ позволяет осуществить раннее прогнозирование развития метастазов у больных раком желудка. 2 пр., 1 табл.

Наверх