Способ получения пневмококковых гипериммунных сывороток

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения пневмококковых гипериммунных сывороток. Для этого проводят гипериммунизацию кроликов антигеном, представляющим собой инактивированный формалином антиген плазмидосодержащего штамма пневмококка. Иммунизацию вакциной проводят в ушную вену, причем иммунизацию кроликов указанным антигеном проводят с интервалом между каждой инъекцией, затем у продуцента определяют иммуногенные свойства, забирают кровь с последующим отделением и консервированием полученной сыворотки. Для получения вакцины одной серии используют 16-часовую культуру, выращенную на полусинтетической питательной среде, клетки которой отделяют центрифугированием. Осадок ресуспендируют в физиологическом растворе и инактивируют прогреванием, затем клетки отмывают физиологическим раствором, содержащим 0,25% формалина, и готовят микробную взвесь, соответствующую 4×109 мкр.кл./мл, причем микробные клетки пневмококков перед иммунизацией еще раз отмывают. Иммунизацию вакциной проводят 3 раза в неделю в течение 4-х недель: первая неделя в дозах 1×108 мкр.кл./мл, вторая - 5×108 мкр.кл./мл, третья - 1×109 мкр.кл./мл и четвертая - 2×109 мкр.кл./мл, на пятой неделе берут кровь, получают сыворотку и проверяют ее активность в реакции агглютинации (РА), титр которой должен быть в пределах 1:3200-1:6400. Использование данного способа позволяет повысить специфическую активность сывороток за счет использования в приготовлении вакцин из микробных клеток каждого из серотипов пневмококка и схемы иммунизации кроликов. 2 пр., 1 табл.

 

Изобретение относится к медицинской иммунологии и может найти применение для производства высокоактивных, специфичных гипериммунных сывороток [A61K 39/40, C07K 16/12].

Известен патент RU 2203090 на Способ получения диагностической сыворотки с агглютининами к вирулентным иерсиниям (СВИ) путем гипериммунизации кроликов плазмидосодержащим (pYV+) штаммом Yersinia enterocolitica серовара ОЗ и последующей адсорбции бесплазмидными (pYV-) вариантами иерсинии, отличающийся тем, что для иммунизации кроликов антиген вводят внутривенно по схеме: 0,09-0,11 мл трехкратно с интервалом 2-3 дня и через 7-8 дней - еще 2 введения с интервалом 2-3 дня, а в качестве адсорбентов используют микробные массы референтных штаммов ГИСК 189 и ГИСК 207.

Недостатком решения является толерантность к КПС; кроме того, требуется этап адсорбции сывороток. Использование фенола может разрушать внутреннюю оболочку вен кролика и вызывать их тромбоз, что ограничивает время и количество полученной сыворотки.

В отличие от этого решения в заявленном изобретении сыворотку можно получать длительно, повторяя схему иммунизации. В нашем случае цель достигается иммунизацией целыми микробными клетками, отмытыми от излишков полисахарида, чтобы избежать возникновения толерантности к КПС; кроме того, отсутствует этап адсорбции сывороток, что упрощает схему.

Известен патент RU 2135210 на Способ получения диагностической сыворотки, включающий многократную иммунизацию животных-продуцентов авирулентным антигенным материалом в совокупности с иммуномодуляторами, забор крови и отделение сыворотки, отличающийся тем, что в качестве иммуномодуляторов используют тималин и циклофосфан, иммунизацию осуществляют пятикратно, антигенный материал вводят внутривенно, иммуномодулятор тималин - внутримышечно одновременно с инъекцией антигена, при этом циклофосфан вводят однократно с третьей инъекцией.

Недостатком решения является использование иммуномодуляторов и иммуносупрессоров, что усложняет и удорожает получение сывороток. Кроме того, использование иммуномодулятора и иммуносупрессора "истощает" иммунную систему, что ведет к отбраковке кроликов-продуцентов.

В заявленном изобретении предложена иммунизация целыми микробными клетками. Вводимая вакцина позволяет получать специфичные, высокоактивные сыворотки, без использования иммуномодуляторов и иммуносупрессоров.

Наиболее близким по существу и назначению к заявленному способу является способ получения диагностической агглютинирующей сыворотки к патогенным штаммам иерсиний (патент RU 2358764, A61K 39/40 от 20.06.2009 г.). Способ включает гипериммунизацию кроликов антигеном, представляющим собой инактивированный 0,4-0,6% формалином антиген плазмидосодержащего (pYV+) штамма Yersinia enterocolitica My 03R, в ушную краниальную вену. Иммунизацию кроликов указанным антигеном проводят четырехкратно в дозах: 290-310 млн кл./мл, 490-510 млн кл./мл, 0,99-1,1 млрд. кл./мл и 1,9-2,1 млрд. кл./мл, соответственно, с интервалом между каждой инъекцией 6-7 суток. Далее у продуцента определяют иммуногенные свойства, затем забирают кровь с последующим отделением и консервированием полученной сыворотки. Способ обеспечивает получение высококачественной агглютинирующей сыворотки, используемой для диагностики иерсиниоза у животных.

Недостатком прототипа является недостаточно высокая специфическая активность сывороток.

Задачей изобретения является повышение специфической активности диагностических сывороток, упрощение и снижение трудоемкости процесса их получения при высоком выходе целевого продукта.

Техническим результатом заявленного изобретения является повышение качества сывороток.

Указанный технический результат достигается за счет того, что заявлен способ получения пневмококковых гипериммунных сывороток, характеризующийся гипериммунизацией кроликов антигеном, представляющим собой инактивированный формалином антиген плазмидосодержащего штамма пневмококка, иммунизацию вакциной проводят в ушную вену, причем иммунизацию кроликов указанным антигеном проводят с интервалом между каждой инъекцией, затем у продуцента определяют иммуногенные свойства, забирают кровь с последующим отделением и консервированием полученной сыворотки, отличающийся тем, что для получения вакцины одной серии используют 16-часовую культуру, выращенную на полусинтетической питательной среде, клетки которой отделяют центрифугированием, осадок ресуспендируют в физиологическом растворе и инактивируют прогреванием, затем клетки отмывают физиологическим раствором, содержащим 0,25% формалина, и готовят микробную взвесь, соответствующую 4×109 мкр.кл./мл, причем микробные клетки пневмококков перед иммунизацией еще раз отмывают, иммунизацию вакциной проводят 3 раза в неделю в течение 4-х недель: первая неделя в дозах 1×108 мкр.кл./мл, вторая - 5×108 мкр.кл./мл, третья - 1×109 мкр.кл./мл и четвертая - 2×109 мкр.кл./мл, на пятой неделе берут кровь, получают сыворотку и проверяют ее активность в реакции агглютинации (РА), титр которой должен быть в пределах 1:3200-1:6400.

Поскольку иммунизирующая доза, вводимая за неделю, большая и при однократном введении может вызвать гибель животных, необходимо растягивать введение на неделю. В перерыве между иммунизациями происходит частичная элиминация антигена.

Считается, что за неделю после иммунизации происходит формирование антител в необходимом нам количестве.

Технический результат повышения качества сывороток достигается за счет использования изменений в приготовлении вакцин из микробных клеток каждого из серотипов пневмококка и схемы иммунизации кроликов.

Осуществление изобретения

Способ реализуется посредством того, что кроликов-продуцентов иммунизируют инактивированной микробной культурой по приведенной в таблице схеме:

Для получения вакцины одной серии используют 16-часовую культуру, выращенную на полусинтетической питательной среде. Клетки отделяют центрифугированием. Осадок ресуспендируют в физиологическом растворе и инактивируют прогреванием. Клетки отмывают физиологическим раствором, содержащим 0,25% формалина, и готовят микробную взвесь, соответствующую 4×109 мкр.кл./мл. Для стабилизации и интенсивного образования антител ограниченной гетерогенности микробные клетки пневмококков перед иммунизацией еще раз отмывают, во избежание развития толерантности под воздействием свободного полисахарида.

Если сыворотки при пробном кровопускании содержат большое количество антител, то кровопускания продолжают в течение последующих 2-3 недель, а затем делают 4-недельный перерыв. После этого иммунизацию повторяют, вводя по 2×109 мкр.кл. в мл в первую неделю 3 раза и в следующие 4 недели - 2 раза. Активность сывороток определяют в реакции агглютинации. Титр должен быть 1:3200-1:6400.

В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие режимы получения гипериммунных сывороток к штаммам пневмококка, принадлежащим к различным серотипам, аналогично заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию «новизна». Все режимы способа осуществимы в лабораторных и промышленных условиях, направлены на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».

Способ иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1.

Получают гипериммунную сыворотку к штамму пневмококка серотипа 19А следующим образом. 1500 мл 16-часовой культуры центрифугировали. Осадок микробных клеток ресуспендировали в 30 мл физиологического раствора и инактивировали прогреванием при 56°С. Клетки трижды отмывали физиологическим раствором, содержащим 0,25% формалина, и готовили микробную взвесь, соответствующую 4×109 мкр.кл./мл. Перед иммунизацией микробные клетки еще раз отмывали физраствором.

Иммунизацию кроликов вакциной проводили в ушную вену 3 раза в неделю, в течение 4-х недель в дозах 1×108, 5×108, 1×109 и 2×109 мкр.кл./мл. На пятой неделе у кроликов брали кровь, получали сыворотку и проверяли ее активность в РА. Средний титр антител в полученной сыворотке крови к S. pneumoniae серотип 19А в РА составил 1:6400.

Пример 2.

Получают гипериммунную сыворотку к штамму пневмококка серотипа 3 следующим образом. 1000 мл 16-часовой культуры центрифугировали. Осадок микробных клеток ресуспендировали в 20 мл физиологического раствора и инактивировали прогреванием при 56°С. Клетки трижды отмывали физиологическим раствором, содержащим 0,25% формалина, и готовили микробную взвесь, соответствующую 4×109 мкр.кл./мл. Перед иммунизацией микробные клетки еще раз отмывали физраствором.

Иммунизацию кроликов вакциной проводили в ушную вену 3 раза в неделю, в течение 4-х недель в дозах 1×108, 5×108, 1×109 и 2×109 мкр.кл./мл. На пятой неделе у кроликов брали кровь три раза, получали сыворотку и проверяли ее активность в РА. Средний титр антител в полученной сыворотке крови к S. pneumoniae серотип 3 в РА составил 1:3200.

Способ получения пневмококковых гипериммунных сывороток, характеризующийся гипериммунизацией кроликов антигеном, представляющим собой инактивированный формалином антиген плазмидосодержащего штамма пневмококка, иммунизацию вакциной проводят в ушную вену, причем иммунизацию кроликов указанным антигеном проводят с интервалом между каждой инъекцией, затем у продуцента определяют иммуногенные свойства, забирают кровь с последующим отделением и консервированием полученной сыворотки, отличающийся тем, что для получения вакцины одной серии используют 16-часовую культуру, выращенную на полусинтетической питательной среде, клетки которой отделяют центрифугированием, осадок ресуспендируют в физиологическом растворе и инактивируют прогреванием, затем клетки отмывают физиологическим раствором, содержащим 0,25% формалина, и готовят микробную взвесь, соответствующую 4×109 мкр.кл./мл, причем микробные клетки пневмококков перед иммунизацией еще раз отмывают, иммунизацию вакциной проводят 3 раза в неделю в течение 4-х недель: первая неделя в дозах 1×108 мкр.кл./мл, вторая - 5×108 мкр.кл./мл, третья - 1×109 мкр.кл./мл и четвертая - 2×109 мкр.кл./мл, на пятой неделе берут кровь, получают сыворотку и проверяют ее активность в реакции агглютинации (РА), титр которой должен быть в пределах 1:3200-1:6400.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биохимии, в частности к молекуле нуклеиновой кислоты, которая кодирует аминокислотную цепь, способную формировать димерный белок, и к указанному димерному белку.

Изобретение относится к хиназолин-4-оновым соединениям формулы (I’) или их фармацевтически приемлемым солям, обладающим свойствами ингибирования дезубихитинирующего фермента.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству для лечения воспалительных заболеваний пародонта и слизистой оболочки полости рта. Средство содержит в качестве действующего вещества сангвиритрин в количестве 0,5 мас.% и масляный экстракт цветков календулы и травы тысячелистника, взятых в соотношении 1:1, в количестве 5 мас.%, а в качестве мазевой основы - гидроксиэтилцеллюлозу в количестве 2 мас.%, глицерин в количестве 3 мас.%, кремофор RH-40 в количестве 1 мас.%, натрия сахаринат в количестве 0,5 мас.%, масло мятное в количестве 0,1 мас.% и воду очищенную в количестве до 100 мас.%.

Группа изобретений относится к медицине и касается фармацевтической композиции для вакцинации против инфекционной болезни, аллергии или аллергического заболевания, аутоиммунного заболевания, или рака или опухолевого заболевания, содержащей комплекс полимерного носителя и переносимого вещества, по меньшей мере один белковый или пептидный антиген.
Изобретение относится к медицине и биотехнологии и касается способа получения иммуноглобулиновых препаратов, очищаемых от примесей солями металлов из экстрактов осадка Б (III фракции по Кону).

Изобретение относится к области органической химии, а именно к стабильной твердой дисперсии (5-фтор-2-метил-3-хинолин-2-илметилиндол-1-ил)-уксусной кислоты (Соединения 1), содержащей аморфную (5-фтор-2-метил-3-хинолин-2-илметилиндол-1-ил)-уксусную кислоту (Соединение 1) или ее фармацевтически или ветеринарно приемлемую соль и полимер, выбранный из поливинилпирролидона (ПВП), поливинилпирролидон-винилацетатного сополимера (ПВП-ВА), гидроксипропилметилцеллюлозы (ГПМЦ) и гипромеллозы ацетата-сукцината (ГГГМАЦС) и их смесей.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к способу получения алкалоидов кубышки желтой (Nuphar lutea (L.), обладающих антимикробной активностью.

Изобретение относится к области медицины, а именно к ветеринарии и иммунологии, и может быть использовано для получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки. Для этого проводят иммунизацию кроликов разовой дозой штамма В.

Изобретение относится к медицине и представляет собой нанокомпозит нуль-валентного серебра, обладающий одновременно антимикробными свойствами и противоопухолевой активностью в виде стабильных водорастворимых порошков, сохраняющий свои свойства в течение длительного времени, содержащий в качестве стабилизатора наночастиц природный биоконъюгат арабиногалактана с флавоноидами, с размером наночастиц серебра 1.7-90.0 нм и их содержанием в композите - 1.3-17.5%.

Изобретение относится к области клеточной биотехнологии и биофармакологии, конкретно к получению препарата на основе стволовых клеток, выделенных из ткани селезенки свиней, для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных.

Изобретение относится к биохимии. Описано выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к получению энтеросорбента для направленной сорбции холерного экзотоксина. Энтеросорбент для направленной сорбции холерного экзотоксина, полученный путем иммобилизации методом адсорбции антитоксического противохолерного иммуноглобулина G, выделенного из сыворотки крови животных, иммунизированных холерным токсином, на микрочастицах размером 200-300 нм предварительно подготовленного кислоторастворимого хитозана в соотношении 0,08-0,1:1.

Изобретение относится к фармакологии, а именно к препарату для стимуляции противоопухолевого иммунитета или терапии онкологических заболеваний. Препарат для стимуляции противоопухолевого иммунитета или терапии онкологических заболеваний, характеризующийся тем, что в качестве основного компонента содержит смесь нативных или инактивированных корпускулярных антигенов, полученных, по меньшей мере, из трех культуральных штаммов бледной трепонемы, относящихся к разным антигенным группам возбудителя.
Представленная группа изобретений касается способа получения концентрата культуры клеток бруцелл из штамма Brucella abortus 19 для приготовления бруцеллезных антигенов, способа получения концентрата клеток бруцелл из штамма Brucella abortus 19 для получения сыворотки бруцеллезной диагностической, способа получения единого бруцеллезного антигена РА, РСК и РДСК, способа получения бруцеллезного антигена для роз-бенгал пробы (РБП), способа получения бруцеллезного антигена для кольцевой реакции (КР) с молоком, способа получения сыворотки бруцеллезной диагностической, тест-системы для диагностики бруцеллеза животных в РА, РСК и РДСК, тест-системы для диагностики бруцеллеза животных в РБП и тест-системы для диагностики бруцеллеза животных в КР с молоком.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к противоопухолевому средству. Противоопухолевое средство, представляющее собой рекомбинантный циклофилин А человека в виде раствора в фосфатном буфере, является продуцентом штамма Escherichia coli (BL21(DE3)Gold/pETCYPopti, депонированного во Всероссийской Коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИ Генетика, регистрационный номер В-11983 от 18 июля 2014 г.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложено выделенное моноклональное антитело, которое связывается с белком РВР2а или РВР5.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для защиты птиц от болезни Ньюкастла. Способ включает введение in ovo во время последней четверти периода инкубации эффективной иммунизирующей дозы иммуногенной композиции непосредственно в эмбрион.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к антителу или его функциональному фрагменту, направленным против эпитопа стафилококка золотистого, а также к их применению для обнаружения стафилококка золотистого.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к способу анализа еx-vivo, будет ли больной раком субъект отвечать терапевтически на способ лечения. Для этого от пациента получают биологический образец, выбранный из группы, состоящей из образца общей крови, плазмы или сыворотки.
Изобретение относится к области ветеринарии к диагностике инфекционных болезней, а именно бруцеллеза. Способ изготовления бруцеллезной диагностической сыворотки включает однократное введение смеси антигена (100 млрд м.к.

Изобретение относится к биохимии. Описаны полностью человеческие антитела, которые связываются либо с токсином А, либо с токсином В Clostridium difficile, или как с токсином А, так и с токсином В. Также описаны композиции, содержащие указанные антитела, и способам их применения. Антитела по настоящему изобретению пригодны для нейтрализации токсинов из С. difficile, таким образом, обеспечивая средства лечения заболевания и симптомов, связанных с инфекцией С. difficile, в том числе средство для лечения диареи или псевдомембранозного колита, вызванного С. difficile. Антитела также могут ограничивать тяжесть и/или продолжительность основного заболевания или могут ограничивать количество, продолжительность и/или тяжесть рецидивов или обострений заболевания, объясняемого присутствием С. difficile. Антитела по настоящему изобретению также могут быть пригодны для диагностики инфицирования С. difficile. 9 н. и 25 з.п. ф-лы, 5 ил., 10 табл., 11 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения пневмококковых гипериммунных сывороток. Для этого проводят гипериммунизацию кроликов антигеном, представляющим собой инактивированный формалином антиген плазмидосодержащего штамма пневмококка. Иммунизацию вакциной проводят в ушную вену, причем иммунизацию кроликов указанным антигеном проводят с интервалом между каждой инъекцией, затем у продуцента определяют иммуногенные свойства, забирают кровь с последующим отделением и консервированием полученной сыворотки. Для получения вакцины одной серии используют 16-часовую культуру, выращенную на полусинтетической питательной среде, клетки которой отделяют центрифугированием. Осадок ресуспендируют в физиологическом растворе и инактивируют прогреванием, затем клетки отмывают физиологическим раствором, содержащим 0,25 формалина, и готовят микробную взвесь, соответствующую 4×109 мкр.кл.мл, причем микробные клетки пневмококков перед иммунизацией еще раз отмывают. Иммунизацию вакциной проводят 3 раза в неделю в течение 4-х недель: первая неделя в дозах 1×108 мкр.кл.мл, вторая - 5×108 мкр.кл.мл, третья - 1×109 мкр.кл.мл и четвертая - 2×109 мкр.кл.мл, на пятой неделе берут кровь, получают сыворотку и проверяют ее активность в реакции агглютинации, титр которой должен быть в пределах 1:3200-1:6400. Использование данного способа позволяет повысить специфическую активность сывороток за счет использования в приготовлении вакцин из микробных клеток каждого из серотипов пневмококка и схемы иммунизации кроликов. 2 пр., 1 табл.

Наверх