Замещенные диаминокарбоксамидные и диаминокарбонитрильные производные пиримидинов, их композиции и способы лечения с их помощью
Изобретение относится к новому соединению формулы (I), или его фармацевтически приемлемой соли, или дейтерированной форме, обладающим активностью ингибитора JNK1 и JNK2. Соединения могут найти применение для лечения или профилактики фиброзных заболеваний печени или метаболического синдрома, которые приводят к развитию фиброзных заболеваний печени, таких как, например, неалкогольный стеатогепатит, стеатоз, цирроз, первичный склерозирующий холангит, первичный билиарный цирроз, гепатит, гепатоцеллюлярная карцинома или фиброз печени, связанный с хроническим или повторяющимся употреблением алкоголя, с инфекцией, с пересадкой печени или с поражением печени, вызванным приемом лекарственных средств, а также для лечения или профилактики интерстициального фиброза легких. В формуле (I)
R1 и R2 независимо представляют собой незамещенный C1-8алкил; C1-8алкил, замещенный одним или несколькими атомами галогена, гидрокси, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси или гидроксиC1-3алкилом; незамещенный насыщенный 3-7-членный моноциклоалкил или 5-8-членный бициклоалкил; замещенный насыщенный 3-7-членный моноциклоалкил или 5-8-членный бициклоалкил, где заместители выбраны из галогена, C1-6алкила, гидрокси, оксо, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкила, галогенC1-3алкила, галогенC1-3алкокси, гидроксиC1-3алкила, аминоC1-3алкила, O-циклопропила, NH2, NH(C1-3)алкила, N(C1-3алкил)2, С(О)-C1-3алкила, NHС(O)-C1-3алкила, С(О)NH2, С(О)NHC1-3алкила, С(О)N(C1-3алкил)2 и NHSO2(C1-3алкил)и пирролидила; незамещенный C1-3алкил-C3-6циклоалкил; 4-6-членный неароматический моноциклический гетероциклил, необязательно N-замещенный группой C1-3алкил-С(О) или необязательно замещенный C1-3алкилом, оксо или гидрокси, в котором гетероатомы выбраны из 1-2 атомов кислорода или 1 атома азота, или диоксаспиродеканил. 9 н. и 58 з.п. ф-лы, 3 табл., 62 пр.
В настоящем документе описаны некоторые диаминокарбоксамидные и диаминокарбонитрильные производные пиримидиновых соединений, композиции, содержащие эффективное количество таких соединений, и способы лечения или профилактики фиброзных заболеваний печени или состояний, лечение или профилактика которых возможны за счет ингибирования пути JNK, включающие введение эффективного количества таких диаминокарбоксамидных и диаминокарбонитрильных производных пиримидиновых соединений нуждающемуся в этом индивиду.
Область техники
Связь между патологическим фосфорилированием белка и следствием или причиной заболеваний была известна более 20 лет. Поэтому протеинкиназы стали очень важной группой мишеней для лекарственных средств. [См. Cohen, Nature, 1:309-315 (2002), Gaestel et al. Curr.Med.Chem. 14: 2214-223 (2007); Grimminger et al. Nat. Rev. Drug Disc. 9(12):956-970 (2010)]. Различные ингибиторы протеинкиназ были использованы в клинической практике для лечения широго спектра заболеваний, таких как рак и хронические воспалительные заболевания, включая ревматоидный артрит и псориаз. [См. Cohen, Eur. J. Biochem., 268:5001-5010 (2001); Protein Kinase Inhibitors for the Treatment of Disease: The Promise and the Problems, Handbook of Experimental Pharmacology, Springer Berlin Heidelberg, 167 (2005)].
JNK является повсеместно экспрессируемой серин/треонинкиназой, принадлежащей вместе с ERK (киназой, регулируемой внеклеточными сигналами) и p38, семейству митоген-активируемых протеинкиназ (MAPK). [Kyriakis JM, Sci. STKE (48):pe1 (2000); Whitmarsh AJ, et al. Sci. STKE (1):pe1 (1999); Schramek H, News Physiol. Sci. 17:62-7 (2002); Ichijo H, Oncogene 18(45):6087-93 (1999)]. MAPK являются важными медиаторами передачи сигналов от поверхности клетки к ядру, используя каскад фосфорилирования, для получения согласованного клеточного ответа на внешний раздражитель путем фосфорилирования выбранных внутриклеточных белков, включая факторы транскрипции. Кроме того, JNK также фосфорилирует неядерные белки, например, представителей семейств IRS-1 и Bcl-2. [Davis RJ, Trends Biochem. Sci. 9(11):470-473 (1994); Seger R et al., FASEB J.; 9(9):726-35 (1995); Fanger GR et al., Curr. Opin. Genet. Dev.; 7(1):67-74 (1997)].
Митоген-активируемая протеинкиназа (MAP) участвует в передачи сигналов к ядру клетки в ответ на внеклеточный раздражитель. Примеры киназ MAP от изомеров ERK p38 и JNK включают, но ими не ограничиваются, митоген-активируемую протеинкиназу 1 (ERK2), митоген-активируемую протеинкиназу 8 (JNK1), митоген-активируемую протеинкиназу 9 (MAPK9 или JNK2), митоген-активируемую протеинкиназу 10 (MAPK10 или JNK3) и митоген-активируемую протеинкиназу 14 (MAPK14 или p38alpha). Киназы MAP относятся к семейству пролин-направленных серин/треонинкиназ, которые опосредуют передачу сигнала от внеклеточных рецепторов или белков хит-шока, осмотического стресса, активных окислительных форм (ROS) или УФ-излучения. [См., Sridhar et al., Pharmaceutical Research, 17:11 1345-1353 (2000)]. Киназы MAP активируются путем фосфорилирования треонина и тирозина с помощью биспецифичных протеинкиназ, включая киназы MKK и MEKK, расположенных далее в сигнальном пути. Как было показано, клеточная пролиферация и дифференциация находятся под регуляторным контролем множества каскадов киназ MAP. [см. Sridhar et al., Pharmaceutical Research, 17:11 1345-1353 (2000)]. Сам по себе, путь киназ MAP играет роль при большом числе болезненных состояний. Например, было показано, что дефекты в активности киназ MAP приводят к патологической клеточной пролиферации и к возникновению злокачественных новообразований. [см., Hu et al., Cell Growth Differ. 11:191-200 (2000); и Das et al., Breast Cancer Res. Treat. 40:141 (1996)]. Более того, активность киназы MAP вовлечена в резистентность к инсулину, связанную с диабетом типа 2 [см., Virkamaki et al., J. Clin. Invest. 103:931-943 (1999)] и ожирением. Изменения в резистентности к инсулину может иметь прямое воздействие на метаболизм глюкозы и липидов в печени, что делает вклад в развитие стеатоза, который может прогрессировать до фиброза печени [Vallerie et al. Science Translational Medicine 2(60):1-7 (2010)].
Стеатоз может развиваться в присутствии либо насыщенной, либо ненасыщенной свободной жирной кислоты (FFA). FFA способствует стойкой активацию JNK в печени, а чрезмерная концентрация FFA может привести к апоптозу гепатоцитов. Сообщалось, что мыши JNK2 -/- частично защищены от стеатоза и апоптоза благодаря насыщенному FFA (например, стеариновая кислота), но защита не связана с ненасыщенным FFA [Malhi et al. J.Biol.Chem. 281:12093-12101 (2006)]. Мыши JNK1 -/- были защищены от вызываемого FFA поражения. Роль JNK1 и JNK2 была исследована у мышей, получавших корм с CDAA, у которых было отмечено прогрессирование стеатоза до сеатогепатита и затем до гепатофиброза [Kodama et al., Gastroenterology 137:1467-1477 (2009)]. Тогда как у обоих мышей, JNK1 -/- и JNK2 -/-, развивался стеатоз, мыши JNK1 -/-, но не мышы JNK2 -/-, проявляли значительную устойчивость в прогрессировании до гепатита и фиброза. Химерные мыши с делецией JNK1 -/-, ограниченной клетками костного мозга, также проявляли резистентность к гепатиту и фиброзу, связанными с активацией клеток Купфера в качестве ключевого запускающего фактора прогрессирования стеатоза. Безусловно, макрофаги JNK1 -/- не экспрессируют IL-1, IL-6, TNF и NO в ответ на LPS [Sanchez-Tillo et al., J Biol Chem. 282(17):12566-73 (2007)], а в клетках Купфера, полученных у мышей JNK1 -/- или у мышей дикого типа, и обработанные ингибитором JNK, SP600125, было отмечено снижение экспрессии TNF, IL-6, и IL-1 в ответ на LPS [Kodama et al., Gastroenterology 137:1467-1477 (2009)].
Знание всех лабиринтов путей протеинкиназ, и сложностей взаимосвязей и взаимодействий различных протеинкиназ и киназных путей является основной важной задачей при разработке фармацевтических средств, способных действовать в качестве модуляторов протеинкиназ, регуляторов или ингибиторов, которые оказывают эффективное действие на различные киназы или множество киназных путей. Таким образом, остается потребность в новых модуляторах киназы и, в частности, в модуляторах JNK.
Указание или обозначение любой ссылки в разделе 2 настоящего описания не должно быть истолковано так, что ссылка является ссылкой уровня техники.
Краткое описание
В настоящем описании раскрыты соединения следующей формулы (I):
и их фармацевтически приемлемые соли, таутомеры, изотопологи, стереоизомеры и пролекарства, где R1 и R2 определены в настоящем описании.
В настоящем описании раскрыты соединения следующее формулы (IB):
и их фармацевтически приемлемые соли, таутомеры, изотопологи, стереоизомеры и пролекарства, где R3 и R4 определены в настоящем описании.
Соединение формулы (I) или формулы (IB) или их фармацевтически приемлемая соль, таутомер, изотополог, стереоизомер или пролекарство (каждый обозначен в настоящем описании как “диаминопиримидиновое соединение”) может использоваться для лечения или профилактика фиброзных заболеваний печени, или диабета и/или метаболического синдрома, которые приводят к развитию фиброзных заболеваний печени, как описано в настоящем описании. В другом аспекте, диаминопиримидиновое соединение может использоваться для лечения или профилактики состояния, лечение или профилактика которого возможна путем ингибирования пути JNK, как описано в настоящем описании.
В одном из аспектов в настоящем описании раскрыты диаминопиримидиновые соединения, такие как, например, в таблицах 1, 2 и 3 (см. в конце описания).
В одном из аспектов в настоящем описании раскрыты фармацевтические композиции, содержащие эффективное количество диаминопиримидинового соединения, описанного в настоящем описании, и фармацевтически приемлемого носителя, эксципиента или наполнителя. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция подходит для перорального, парентерального, чрезслизистого, чрескожного введения или для местного применения.
В одном из аспектов в настоящем описании раскрыты способы лечения или профилактика фиброзных заболеваний печени, таких как неалкогольный стеатогепатит, стеатоз, цирроз печени, первичный склерозирующий холангит, первичный билиарный цирроз, гепатит, гепатоцеллюлярная карцинома и фиброз печени, связанный с хроническим или повторяющимся употреблением алкоголя, с инфекцией, с пересадкой печени или с поражением печени, вызванным приемом лекарственных средств, которые включают введение нуждающемуся индивиду эффективное количество диаминопиримидинового соединения, описанного в настоящем описании; и фармацевтически приемлемого носителя, эксципиента или наполнителя. В другом аспекте в настоящем описании раскрыты способы лечения или профилактики диабета или метаболического синдрома, которые приводят к развитию фиброзных заболеваний печени, таких как безалкогольный стеатогепатит, стеатоз, гепатит или цирроз, которые включают введение нуждающемуся индивиду эффективного количества диаминопиримидинового соединения. Кроме того, в настоящем описании предложены способы лечения или профилактики состояния, лечение или профилактика которого осуществляется за счет ингибирования пути JNK, которые включают введение нуждающемуся индивиду эффективного количества диаминопиримидинового соединения, описанного в настоящем описании; и фармацевтически приемлемого носителя, эксципиента или наполнителя.
В одном из аспектов в настоящем описании раскрыты способы ингибирования киназы, например, JNK1, JNK2 или обоих этих киназ, в клетке, экспрессирующей указанную киназу, которые включают приведение указанной клетки в контакт с эффективным количеством диаминопиримидинового соединения, описанного в настоящем описании.
В другом аспекте в настоящем описании раскрыты способы получения диаминопиримидиновых соединений, описанных в настоящем описании.
Эти варианты осуществления могут быть более понятны при отсылке к разделу «Подробное описание» и «Примеры», которые предназначены для иллюстрации неограниченных вариантов осуществления.
Подробное описание
Определения
“Алкильная” группа представляет собой насыщенную, частично насыщенную или ненасыщенную прямую или разветвленную цепь нециклических углеводородов с 1-10 атомами углерода, обычно, 1-8 углеродов или, в некоторых вариантах осуществления, 1-6, 1-4 или 2-6 или атомами углерода. Примеры алкильных групп включают -метил, -этил, -н-пропил, -н-бутил, -н-пентил и -н-гексил; при этом насыщенные разветвленные алкилы включают -изопропил, -втор-бутил, -изобутил, -трет-бутил, -изопентил, -неопентил, трет-пентил, -2-метилпентил, -3-метилпентил, -4-метилпентил, -2,3-диметилбутил и тому подобное. Примеры ненасыщенных алкильных группы, среди прочего, включают, но ими не ограничиваются, винил, аллил, -CH=CH(CH3), -CH=C(CH3)2, -C(CH3)=CH2, -C(CH3)=CH(CH3), -C(CH2CH3)=CH2, -C≡CH, -C≡C(CH3), -C≡C(CH2CH3), -CH2C≡CH, -CH2C≡C(CH3) и -CH2C≡C(CH7CH3). Алкильная группа может быть замещенной или незамещенной. Если для алкильных групп, описанных в настоящем описании, указано - “замещенные”, то они могут быть замещены любым заместителем или заместителями, которые можно найти в примерах соединений и в вариантах осуществлений, описанных в настоящем описании, а также, галогеном (хлор, йод, бром или фтор); алкилом; гидроксилом; алкокси; алкоксиалкилом; амино; алкиламино; карбокси; нитро; циано; тиолом; тиоэфиром; имином; имидом; амидином; гуанидином; енамином; аминокарбонилом; ациламино; фосфонато; фосфином; тиокарбонилом; сульфонилом; сульфоном; сульфонамидом; кетоном; альдегидом; сложным эфиром; мочевиной; уретаном; оксим; гидроксиламином; алкоксиамином; аралкоксиамином; N-оксидом; гидразином; гидразидом; гидразоном; азидом; изоцианатом; изотиоцианатом; цианатом; тиоцианатом; B(OH)2 или O(алкил)аминокарбонилом.
“Циклоалкильная” группа представляет собой насыщенную, частично насыщенную или ненасыщенную циклическую алкильную группу с 3-10 атомами углерода, имеющую единичное циклическое кольцо или множественные конденсированные или связанные мостиками кольца, которые могут быть необязательно замещены 1-3 алкильными группами. В некоторых вариантах осуществления циклоалкильные группы имеют 3-8 кольцевых членов, тогда как в других вариантах осуществления число кольцевых атомов углерода находится в диапазоне 3-5, 3-6 или 3-7. Такие циклоалкильные группы включают, в качестве примера, единичные кольцевые структуры, такие как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, 1-метилциклопропил, 2-метилциклопентил, 2-метилциклооктил, и тому подобное или множественные кольцевые структуры или кольцевые структуры, связанные мостиками, такие как 1-бицикло[1.1.1]пентил, бицикло[2.1.1]гексил, бицикло[2.2.1]гептил, бицикло[2.2.2]октил, адамантил и тому подобное. Примеры ненасыщенных циклоалкильных групп, среди прочего, включают циклогексенил, циклопентенил, циклогексадиенил, бутадиенил, пентадиенил, гексадиенил. Циклоалкильная группа может быть замещенной или незамещенной. Такие замещенные циклоалкильные группы включают, в качестве примера, циклогексанол и тому подобное.
“Арильная” группа представляет собой ароматическую карбоциклическую группу с 6-14 атомами углерода, имеющую единичное кольцо (например, фенил) или множественные конденсированные кольца (например, нафтил или антрил). В некоторых вариантах осуществления арильные группы содержат 6-14 углеродов, и в других - 6-12 или даже 6-10 атомов углерода в кольцевых частях групп. Конкретные примеры арилов включают фенил, бифенил, нафтил и тому подобное. Арильная группа может быть замещенной или незамещенной. Фраза “арильные группы” также включает группы, содержащие конденсированные кольца, такие как конденсированные ароматические-алифатические кольцевые системы (например, инданил, тетрагидронафтил и тому подобное).
“Гетероарильная” группа представляет собой арильную кольцевую систему, имеющую от одного до четырех гетероатомов в кольцевых атомах в гетероароматической кольцевой системе, где оставшиеся атомы представляют собой атомы углерода. В некоторых вариантах осуществления, гетероарильные группы содержат 3-6 кольцевых атомов, в других - 6-9 или даже 6-10 атомов в кольцевых частях групп. Подходящие гетероатомы включают кислород, серу и азот.В некоторых вариантах осуществления гетероарильная кольцевая система является моноциклической или бициклической. Неограничивающие примеры включают, но ими не ограничиваются, группы, такие как пирролил, пиразолил, имидазолил, триазолил, тетразолил, оксазолил, изоксазолил, бензизоксазолил (например, бензо[d]изоксазолил), тиазолил, пиролил, пиридазинил, пиримидил, пиразинил, тиофенил, бензотиофенил, фуранил, бензофуранил, индолил (например, индолил-2-онил или изоиндолин-1-онил), азаиндолил (пирролопиридил или 1H-пирроло[2,3-b]пиридил), индазолил, бензимидазолил (например, 1H-бензо[d]имидазолил), имидазопиридил (например, азабензимидазолил или 1H-имидазо[4,5-b]пиридил), пиразолопиридил, триазолопиридил, бензотриазолил (например, 1H-бензо[d][1.2.3]триазолил), бензоксазолил (например, бензо[d]оксазолил), бензотиазолил, бензотиадиазолил, изоксазолопиридил, тианафталенил, пуринил, ксантинил, аденинил, гуанинил, хинолинил, изохинолинил (например, 3,4-дигидроизохинолин-1(2H)-онил), тетрагидрохинолинил, хиноксалинил и хиназолинил.
“Гетероциклил” представляет собой ароматический (также обозначен как гетероарил) или неароматический циклоалкил, в котором от одного до четырех кольцевых атомов углерода независимо замещены гетероатомом из группы, состоящей из O, S и N. В некоторых вариантах осуществления гетероциклильные группы включают 3-10 членов кольца, тогда как другие группы имеют 3-5, 3-6 или 3-8 членов кольца. Гетероциклилы могут быть связаны с другими группами на любом атоме кольца (то есть, на любом атоме углерода или гетероатоме гетероциклического кольца). Гетероциклоалкильная группа может быть замещенной или незамещенной. Гетероциклильные группы включают ненасыщенные, частично насыщенные и насыщенные кольцевые системы, такие как, например, имидазолильные, имидазолинильные и имидазолидинильные (например, имидазолидин-4-он или имидазолидин-2,4-дионил) группы. Фраза гетероциклил включает конденсированные кольцевые типы, включая те, которые содержат конденсированные ароматические и неароматические группы, такие как, например, 1- и 2-аминотетралин, бензотриазолил (например, 1H-бензо[d][1,2,3]триазолил), бензимидазолил (например, 1H-бензо[d]имидазолил), 2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил и бензо[1,3]диоксолил. Фраза также включает полициклические кольцевые системы, связанные мостиками, содержащие гетероатом, такой как, но не ограничиваясь, хинуклидил. Характерные примеры гетероциклильной группы включают, но ими не ограничиваются, азиридинил, азетидинил, азепанил, оксетанил, пирролидил, имидазолидинил (например, имидазолидин-4-онил или имидазолидин-2,4-дионил), пиразолидинил, тиазолидинил, тетрагидротиофенил, тетрагидрофуранил, диоксолил, фуранил, тиофенил, пирролил, пирролинил, имидазолил, имидазолинил, пиразолил, пиразолинил, триазолил, тетразолил, оксазолил, изоксазолил, бензизоксазолил (например, бензо[d]изоксазолил), тиазолил, тиазолинил, изотиазолил, тиадиазолил, оксадиазолил, пиперидил, пиперазинил (например, пиперазин-2-онил), морфолинил, тиоморфолинил, тетрагидропиранил (например, тетрагидро-2H-пиранил), тетрагидротиопиранил, оксатианил, диоксил, дитианил, пиранил, пиридил, пиримидил, пиридазинил, пиразинил, триазинил, дигидропиридил, дигидродитиинил, дигидродитионил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил, гомопиперазинил, хинуклидил, индолил (например, индолил-2-онил или изоиндолин-1-онил), индолинил, изоиндолил, изоиндолинил, азаиндолил (пирролопиридил или 1H-пирроло[2,3-b]пиридил), индазолил, индолизинил, бензотриазолил (например, 1H-бензо[d][1,2,3]триазолил), бензимидазолил (например, 1H-бензо[d]имидазолил или 1H-бензо[d]имидазол-2(3H)-онил), бензофуранил, бензотиофенил, бензотиазолил, бензоксадиазолил, бензоксазинил, бензодитиинил, бензоксатиинил, бензотиазинил, бензоксазолил (то есть, бензо[d]оксазолил), бензотиазолил, бензотиадиазолил, бензо[1,3]диоксолил, пиразолопиридил (например, 1H-пиразоло[3,4-b]пиридил, 1H-пиразоло[4,3-b]пиридил), имидазопиридил (например, азабензимидазолил или 1H-имидазо[4,5-b]пиридил), триазолопиридил, изоксазолопиридил, пуринил, ксантинил, аденинил, гуанинил, хинолинил, изохинолинил (например, 3,4-дигидроизохинолин-1(2H)-онил), хинолизинил, хиноксалинил, хиназолинил, циннолинил, фталазинил, нафтиридинил, птеридинил, тианафталенил, дигидробензотиазинил, дигидробензофуранил, дигидроиндолил, дигидробензодиоксинил, тетрагидроиндолил, тетрагидроиндазолил, тетрагидробензимидазолил, тетрагидробензотриазолил, тетрагидропирролопиридил, тетрагидропиразолопиридил, тетрагидроимидазопиридил, тетрагидротриазолопиридил, тетрагидропиримидин-2(1H)-она и тетрагидрохинолинил. Характерные неароматические гетероциклильные группы не включают конденсированные кольцевые типы, которые содержат конденсированную ароматическую группу. Примеры неароматических гетероциклильных групп включают азиридинил, азетидинил, азепанил, пирролидил, имидазолидинил (например, имидазолидин-4-онил или имидазолидин-2,4-дионил), пиразолидинил, тиазолидинил, тетрагидротиофенил, тетрагидрофуранил, пиперидил, пиперазинил (например, пиперазин-2-онил), морфолинил, тиоморфолинил, тетрагидропиранил (например, тетрагидро-2H-пиранил), тетрагидротиопиранил, оксатианил, дитианил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил, гомопиперазинил, хинуклидил или тетрагидропиримидин-2(1H)-он. Характерные замещенные гетероциклильные группы могут быть моно-замещенными или замещенными более одного раза, например, но не ограничиваясь, пиридильные или морфолинильные группы, которые представляют собой 2-, 3-, 4-, 5- или 6-замещенные или дизамещенные различными заместителями, такими как перечисленные выше, группы.
“Циклоалкилалкильная” группа представляет собой радикал формулы: -алкил-циклоалкил, где алкил и циклоалкил такие, как определены выше. Замещенные циклоалкилалкильные группы могут быть замещены на алкильной, на циклоалкильной или и на алкильной и на циклоалкильной частях группы. Характерные циклоалкилалкильные группы включают, но ими не ограничиваются, метилциклопропил, метилциклобутил, метилциклопентил, метилциклогексил, этилциклопропил, этилциклобутил, этилциклопентил, этилциклогексил, пропилциклопентил, пропилциклогексил и тому подобное.
“Аралкильная” группа представляет собой радикал формулы: -алкил-арил, где алкил и арил определены выше. Замещенные аралкильные группы могут быть замещены на алкильной, на арильной или и на алкильной и на арильной частях группы. Характерные аралкильные группы включают, но ими не ограничиваются, бензильную и фенэтильную группы и конденсированные (циклоалкиларил)алкильные группы, такие как 4-этилинданил.
“Гетероциклилалкильная” группа представляет собой радикал формулы: -алкил-гетероциклил, где алкил и гетероциклил определены выше. Замещенные гетероциклилалкилные группы могут быть замещены на алкильной, на гетероциклильной или и на алкильной и на гетероциклильной частях группы. Характерные гетероциклилалкильные группы включают, но ими не ограничиваются, 4-этилморфолинил, 4-пропилморфолинил, фуран-2-илметил, фуран-3-илметил, пиридин-3-илметил, тетрагидрофуран-2-илэтил и индол-2-илпропил.
“Галоген” представляет собой фтор, хлор, бром или йод.
“Гидроксиалкильная” группа представляет собой алкильную группу, как описано выше, замещенную одной или несколькими гидроксигруппами.
“Алкокси” группа представляет собой -O-(алкил), где алкил определен выше.
“Алкоксиалкил” группа представляет собой -(алкил)-O-(алкил), где алкил определен выше.
“Амино”группа представляет собой радикал формулы: -NH2.
“Алкиламино”группа представляет собой радикал формулы: -NH-алкил или -N(алкил)2, где каждый алкил независимо определен выше.
“Карбокси”группа представляет собой радикал формулы: -C(O)OH.
“Аминокарбонильная” группа представляет собой радикал формулы: -C(O)N(R#)2, -C(O)NH(R#) или -C(O)NH2, где каждый R# независимо представляет собой замещенный или незамещенный алкил, циклоалкил, арил, аралкил, гетероциклил или гетероциклил, как определено в настоящем описании.
“Ациламино”группа представляет собой радикал формулы: -NHC(O)(R#) или -N(алкил)C(O)(R#), где каждый алкил и R# независимо определены выше.
“Сульфониламино”группа представляет собой радикал формулы: -NHSO2(R#) или -N(алкил)SO2(R#), где каждый алкил и R# определены выше.
Группа “мочевины” представляет собой радикал формулы: -N(алкил)C(O)N(R#)2, -N(алкил)C(O)NH(R#), –N(алкил)C(O)NH2, -NHC(O)N(R#)2, -NHC(O)NH(R#) или -NH(CO)NHR#, где каждый алкил и R# независимо определены выше.
Если для групп, описанных в настоящем описании, кроме алкильной группы, указано “замещенные”, то группы могут быть замещены любым подходящим заместителем или заместителями. Характерные примеры заместителей могут быть найдены в примерах соединений и в вариантах осуществления, раскрытых в настоящем описании, а также представляют собой галоген (хлор, йод, бром или фтор); алкил; гидроксил; алкокси; алкоксиалкил; амино; алкиламино; карбокси; нитро; циано; тиол; тиоэфир; имин; имид; амидин; гуанидин; енамин; аминокарбонил; ациламино; фосфонато; фосфин; тиокарбонил; сульфонил; сульфон; сульфонамид; кетон; альдегид; сложный эфир; мочевина; уретан; оксим; гидроксил амин; алкоксиамин; аралкоксиамин; N-оксид; гидразин; гидразид; гидразон; азид; изоцианат; изотиоцианат; цианат; тиоцианат; кислород (=O); B(OH)2, O(алкил)аминокарбонил; циклоалкил, который может быть моноциклическим, или конденсированным, или неконденсированным полициклическим (например, циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил) или гетероциклил, который может быть моноциклическим или конденсированным или неконденсированным полициклическим (например, пирролидил, пиперидил, пиперазинил, морфолинил или тиазинил); моноциклический, либо конденсированный, либо неконденсированный полициклический арил или гетероарил (например, фенил, нафтил, пирролил, индолил, фуранил, тиофенил, имидазолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, триазолил, тетразолил, пиразолил, пиридил, хинолинил, изохинолинил, акридинил, пиразинил, пиридазинил, пиримидил, бензимидазолил, бензотиофенил или бензофуранил) алкилокси; аралкилокси; гетероциклилокси; и гетероциклилалкокси.
Как используется в настоящем описании, термин “диаминопиримидиновое соединение” относится к соединениям формулы (I) и формулы (IB), а также к другим вариантам осуществления по настоящему изобретению. В одном из вариантов осуществления “диаминопиримидиновое соединение” представляет собой соединение, указанное в таблицах 1, 2 и 3. Термин “диаминопиримидиновое соединение” включает фармацевтически приемлемые соли, таутомеры, изотопологи, стереоизомеры, и пролекарства соединений по настоящему изобретению.
Как используется в настоящем описании термин “фармацевтически приемлемая(ые) соль(и)” относится к соли, полученной из фармацевтически приемлемой нетоксичной кислоты или основания, включая неорганическую кислоту и основание и органическую кислоту и основание. Подходящие фармацевтически приемлемые соли добавления основания соединений формулы (I) включают, но ими не ограничиваются, соли металлов, полученные из алюминия, кальция, лития, магния, калия, натрия и цинка или органических солей, полученных из лизина, N,N'-дибензилэтилендиамина, хлорпрокаина, холина, диэтаноламина, этилендиамина, меглумин (N-метилглюкамина) и прокаина. Подходящие нетоксические кислоты включают, но ими не ограничиваются, неорганические и органические кислоты, такие как уксусная, альгиновая, антраниловая, бензолсульфоновая, бензойная, камфорсульфоновая, лимонная, этенсульфоновой, муравьиная, фумаровая, фуроновая, галактуроновая, глюконовая, глюкуроновая, глюматовая, гликолиновая, бромистоводородная, хлористоводородная, изетионовая, молочная, малеиновая, яблочная, малеиновая, миндальная, метансульфоновая, муциновая, азотная, памовая, пантотеновая, фенилуксусная, фосфорная, пропионовая, салициловая, стеариновая, янтарная, сульфаниловой, серная, винная кислота и п-толуолсульфоновая кислота. Специфические нетоксические кислоты включают соляную, бромистоводородную, малеиновую, фосфорную, серную и метансульфоновую кислоты. Примеры специфических солей, таким образом, включают соли гидрохлорида и мезилата. Другие соли хорошо известны в данной области, см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th eds., Mack Publishing, Easton PA (1990) или Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th eds., Mack Publishing, Easton PA (1995).
Как используется в настоящем описании, если не указано иного, термин “пролекарство” обозначает диаминопиримидиновое соединение, которое может гидролизовать, окислять или другим образом реагировать в биологических условиях (in vitro или in vivo) с выходом активного соединения, в частности, диаминопиримидинового соединения или соединения формулы (I). Примеры пролекарств включают, но ими не ограничиваются, производные и метаболиты диаминопиримидинового соединения, которые включают биогидролизуемые группы, такие как биогидролизуемые амиды, биогидролизуемые сложные эфиры, биогидролизуемые карбаматы, биогидролизуемые карбонаты, биогидролизуемые уреиды и биогидролизуемые аналоги фосфата. В некоторых вариантах осуществления пролекарства соединений с карбоксильными функциональными группами представляют собой низшие алкильные эфиры карбоновой кислоты. Эфиркарбоксилаты обычно образуются путем этерификации любой группы карбоновой кислоты, присутствующей на молекуле. Пролекарства могут быть обычно получены с использованием хорошо известных способов, таких как способы, описанные Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6th ed. (Donald J. Abraham ed., 2001, Wiley) и Design и Application of Prodrugs (H. Bundgaard ed., 1985, Harwood Academic Publishers Gmfh).
Как используется в настоящем описании, если не указано иного, термин “стереоизомер” или “стереомерно чистые” обозначает стереоизомер диаминопиримидинового соединения, который по существу свободен от других стереоизомеров соединения. Например, стереомерно чистое соединение, имеющее один хиральный центр, будет по существу свободно от противоположного энантиомера соединения. Стереомерно чистые соединения, имеющее два хиральных центра, будут по существу свободны от других диастереомеров соединения. Как правило, стереомерно чистое соединение содержит более чем около 80% по массе одного стереоизомера соединения и менее чем около 20% по массе других стереоизомеров соединения, более чем около 90% по массе одного стереоизомера соединения и менее чем около 10% по массе других стереоизомеров соединения, более чем около 95% по массе одного стереоизомера соединения и менее чем около 5% по массе других стереоизомеров соединения или более чем около 97% по массе одного стереоизомера соединения и менее чем около 3% по массе других стереоизомеров соединения. Диаминопиримидиновые соединения могут иметь хиральные центры и могут существовать в виде рацематов, индивидуальных энантиомеров или диастереомеров, и их смесей. Все такие изомерные формы включены в рамки вариантов осуществления, описанных в настоящем описании, включая их смеси.
Применение стереомерно чистых форм таких диаминопиримидиновых соединений, а также применение смесей этих форм, включены в качестве вариантов осуществления, описанных в настоящем описании. Например, смеси, содержащие эквивалентные или неэквивалентные количества энантиомеров конкретного диаминопиримидинового соединения, могут использоваться в способах и композициях, описанных в настоящем описании. Эти изомеры могут быть ассиметрически синтезированы или растворены, используя стандартные подходы, такие как хиральные колонки или хиральные растворяющие агенты. См., например, Jacques, J., et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley-Interscience, New York, 1981); Wilen, S. H., et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, E. L., Stereochemistry of Carbon Compound (McGraw-Hill, NY, 1962); и Wilen, S. H., Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972).
Следует также отметить, что диаминопиримидиновые соединения могут включать изомеры E и Z или их смеси, и цис и транс изомеры или их смеси. В некоторых вариантах осуществления диаминопиримидиновые соединения выделяют либо в виде E, либо в виде Z изомера. В других вариантах осуществления диаминопиримидиновые соединения представляют собой смесь изомеров E и Z.
"Таутомеры" относятся к изомерным формам соединения, которые находятся в равновесии друг с другом. Концентрации изомерных форм зависят от окружения, в котором обнаруживается соединение, и могут отличаться в зависимости от, например, того является ли соединением твердым веществом или находится в органическом или водном растворе. Например, в водном растворе, пиразолы могут существовать в следующих изомерных формах, которые обозначены как таутомеры каждого:
.
Как хорошо понятно специалисту в данной области, большое разнообразие функциональных групп и других структур может иметь таутомеризм и все таутомеры соединений формулы (I) включены в рамки настоящего изобретения.
Следует также отметить, что диаминопиримидиновые соединения могут содержить неприродные пропорции атомных изотопов одного или нескольких атомов. Например, соединения могут быть помечены радиоактивной меткой с радиоактивным изотопом, таким как, например, тритий (3H), йод-125 (125I), сера-35 (35S) или углерод-14 (14C) или могут быть изотопически насыщенными, например, дейтерием (2H), углеродом-13 (13C) или азотом-15 (15N). Как используется в настоящем описании “изотополог” представляет собой изотопически насыщенное соединение. Термин “изотопически насыщенное” относится к атому, имеющему изотопическую композицию, отличную от природной изотопической композциии этого атома. “Изотопически насыщенное” может также относится к соединению, содержащему по меньшей мере один атом с изотопической композицией, отличной от природной изотопической композиции этого атома. Термин “изотопическая композиция” относится к количеству каждого изотопа, представленного для данного атома. Меченные радиоактивной меткой и изотопически насыщенные соединения могут использоваться в качестве терапевтических средств, например, противораковых и противоспалительных терапевтических средств, средств для исследований, например, реагентов для анализа связывания, и в качестве диагностических средств, например, визуализирующие средства in vivo. Подразумевается, что все изотопические варианты диаминопиримидиновых соединений, описанных в настоящем описании, являются ли они радиоактивными или нет, входят в рамки вариантов осуществления настоящего изобретения. В некоторых вариантах осуществления предложены изотопологи диаминопиримидиновых соединений, например, изотопологами являются диаминопиримидиновые соединения, насыщенные дейтерием, углеродом-13 или азотом-15.
“JNK” обозначает белок или его изоформу, экспрессируемый генами JNK1, JNK2 или JNK3 (Gupta, S., Barrett, T., Whitmarsh, A. J., Cavanagh, J., Sluss, H. K., Derijard, B. and Davis, R. J. The EMBO J. 15:2760-2770 (1996)).
“Лечение”, как используется в настоящем описании, обозначает улучшение, в целом или частично, течения расстройства, заболевания или состояния, или одного или нескольких симптомов, связанных с расстройством, заболеванием или состоянием или замедление или прекращение дальнейшего прогрессирования или ухудшения этих симптомов или облегчение или устранение собственно причин(ы) расстройства, заболевания или состояния. В одном из вариантов осуществления заболеванием является фиброз печени, такой как неалкогольный стеатогепатит, стеатоз (то есть, жировая дистрофия печени), цирроз, первичный склерозирующий холангит, первичный билиарный цирроз, гепатит, гепатоцеллюлярная карцинома или фиброз печени связан с хроническим или повторяющимся употреблением алкоголя (алкогольный гепатит), с инфекцией (например, вирусной инфекцией, такой как HCV), с пересадкой печени или с поражением печени, вызванным приемом лекарственных средств (например, ацетаминофеновая токсичность). В некоторых вариантах осуществления "лечение" означает улучшение, в целом или частично, течения расстройства, заболевания или состояния или симптомов, связанных с диабетом или метаболическим синдромом, которые приводят к развитию фиброза печени, таких как неалкогольный стеатогепатит, стеатоз (то есть, жировая дистрофия печени), гепатит или цирроз или замедление, прекращение дальнейшего прогрессирования или ухудшения этих симптомов. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения симптомом является желтуха. В другом варианте осуществления "лечение" означает улучшение, в целом или частично, растворойства, заболевания или состояния, или симптомов, связанных с состоянием, лечение или профилактика которого эффективна путем ингибирования пути JNK.
“Профилактика”, как используется в настоящем описании, обозначает способ задержки и/или предотвращения наступления, повтора или распространения, полностью или частично, расстройства, заболевания или состояния; исключение у индивида возможности приобретения расстройства, заболевания или состояния; или снижения у индивида риска приобретения расстройства, заболевания или состояния. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения заболеванием является фиброз печени или диабет или метаболический синдром, которые приводят к фиброзным заболеваниям печени, как описано в настоящем описании, или его симптомов. В другом, заболеванием является состояние, лечение или профилактика которого эффективна путем ингибирования пути JNK.
Термин “эффективное количество”, в контексте диаминопиримидинового соединения, обозначает количество, способное для осуществления лечения или профилактики расстройства, заболевания или состояния или его симптомов, описанного в настоящем описании.
Термин “индивид” включает животное, включая, но не ограничиваясь ими, животное, такое как корова, обезьяна, лошадь, овца, свинья, курица, индейка, перепел, кошка, собака, мышь, крыса, кролик или морская свинка, в одном из вариантов осуществления - млекопитающее, в еще одном варианте осуществления - человека. В одном из вариантов осуществления индивид является человеком с риском или подвергающемуся риску развития фиброзных заболеваний печени или диабета или метаболического синдрома, которые приводят к развитию фиброзных заболеваний печени, или состояние, лечение или профилактика которых эффективна путем ингибирования пути JNK, или их симптомов.
Диаминопиримидиновые соединения
В настоящем описании раскрыты соединения следующей формулы (I):
и их фармацевтически приемлемые соли, таутомеры, стереоизомеры, энантиомеры, изотопологи и пролекарства,
где:
R1 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил, замещенный или незамещенный алкилциклоалкил, или замещенный или незамещенный алкилгетероциклил, при условии, что R1 не является 1-аминоциклогексилом; и
R2 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный насыщенный циклоалкил, замещенный или незамещенный алкилциклоалкил, или замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения соединение формулы (I) не является:
2-(2-аминоэтиламино)-4-(метиламино)пиримидин-5-карбоксамидом
,
2-(2-аминопропиламино)-4-(циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамидом
,
2-(2-амино-2-оксоэтиламино)-4-(циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамидом
,
2-(2-аминоэтиламино)-4-(циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамидом
,
(S)-2-(2-аминопропиламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамидом
,
(R)-2-(1-амино-3-метил-1-оксобутан-2-иламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамидом
,
4-(циклопентиламино)-2-(метиламино)пиримидин-5-карбоксамидом
,
или 2-(1-ацетилпиперидин-4-иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамидом
.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, R1 не является
,
например,
В некоторых вариантах осуществления соединений формулы (I), R1 представляет собой разветвленный C1-8 алкил, например, R1 представляет собой изопропил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, изопентил, 2-метилпентил или трет-пентил. В других, R1 представляет собой изопропил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, 2,3-диметилбутил, изопентил, 2-метилпентил, неопентил, трет-пентил или 3-метилпентил. В других, R1 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, бицикло[1.1.1]пентил или бицикло[2.2.2]октил. В других, циклоалкил представляет собой циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, бицикло[1.1.1]пентил, бицикло[2.2.1]гептил или бицикло[2.2,2]октил. В некоторых таких вариантах осуществления циклоалкил замещен одним или несколькими галогеном, -(C1-4 алкил), -NR2, -(C0-3 алкил)OR, -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR(или -NRS(O)2R', где каждый R независимо представляет собой H или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, и каждый R(независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован. Например, циклоалкил замещен одним или несколькими метилом, этилом, трет-бутилом, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 или -NHSO2CH3. В других вариантах осуществления циклоалкил замещен одним или несколькими галогеном, -CF3, -(C1-4 алкил), -(C1-6 циклоалкил), -NR2, -(C0-3 алкил)OR, -(C0-3 алкил)ORʺ, -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR(или -NRS(O)2R', где каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, каждый R(независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, и каждый R” независимо представляет собой C1-6 циклоалкил, где циклоалкил необязательно фторирован. Например, циклоалкил замещен одним или несколькими метилом, этилом, трет-бутилом, циклопропилом, -CF3, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -O(циклопропил), -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 или -NHSO2CH3. В некоторых вариантах осуществления R1 является замещенным или незамещенным неароматическим гетероциклилом, например, пирролидинилом, тетрагидропиранилом, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканилом или пиперидилом. В других - неароматический гетероциклил представляет собой оксетанил, пирролидинил, тетрагидропиранил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил или пиперидил. В некоторых таких вариантах осуществления пиперидил замещен -C(O)R'или -C(O)OR', где R' представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован. Еще в одном варианте осуществления R1 представляет собой замещенный или незамещенный алкилциклоалкил, например, (C1-3алкил)циклопропил, (C1-3 алкил)циклобутил, (C1-3 алкил)циклопентил или (C1-3 алкил)циклогексил. В некоторых таких вариантах осуществления, R1 представляет собой -(CH2)циклопропил, -(CH2)циклобутил, -(CH2)циклопентил, -(CH2)циклогексил, -CH(CH3)циклопропил, -CH(CH3)циклобутил, -CH(CH3)циклопентил или -CH(CH3)циклогексил. В других - R1 представляет собой -(CH2)циклопропил, -CH(CH3)циклопропил, -CH(CH3)циклобутил,–CH(CH3)циклогексил или -C(CH3)2циклопропил. В других вариантах осуществления R1 представляет собой замещенный или незамещенный алкилгетероциклил, например, -(C1-4 алкил)тетрагидрофуранил, -(C1-4 алкил)диоксоланил, (C1-4 алкил)фуранил, (C1-3 алкил)тиофенил или -(C1-3 алкил)пиридил.
В некоторых вариантах осуществления соединений формулы (I) R1 выбран из разветвленного C1-8 алкила,
где
R3' представляет собой галоген, -CF3, -(C1-4 алкил), -(C1-6 циклоалкил), -NR2, -(C0-3 алкил)OR, -(C0-3 алкил)ORʺ, -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR(или -NRS(O)2R';
R4' представляет собой -C(O)R(или -C(O)OR';
каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован;
каждый R' независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован;
каждый Rʺ независимо представляет собой C1-6 циклоалкил, где циклоалкил необязательно фторирован; и
n равно 0-2.
В некоторых таких вариантах осуществления, R3' представляет собой метил, этил, трет-бутил, циклопропил, -CF3, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -O(циклопропил), -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 или -NHSO2CH3.
В некоторых вариантах осуществления, R2 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, например, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, трет-пентил, изопентил или 2-метилпентил. В других вариантах осуществления R2 представляет собой метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, 3-метилбутил, 2,3-диметилбутил, 3,3-диметилбутил, 2,3,3-триметилбутил, трет-пентил, изопентил, 3-пентил, 3-метилпентил, 2-метилпентил или 2,4-диметилпентил. В некоторых таких вариантах осуществления, R2 замещен одним или несколькими -(C1-4 алкил), -(C0-3 алкил)OR, -C(O)NR2 или -NRCOR', где каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, и каждый R' независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован. Например, R2 замещен одним или несколькими -OH или -CH3. В других вариантах осуществления, R2 замещен одним или несколькими -OH, -OCH3 или -CH3. В некоторых вариантах осуществления R2 замещен или незамещен циклоалкилом, например, R2 представляет собой циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил или циклооктил. В некоторых таких вариантах осуществления R2 замещен одним или несколькими -(C1-4 алкил), -(C0-3 алкил)OR, -(C0-3 алкил)C(O)NR2, -NR2 или -NRCOR', где каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, и каждый R' независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован. В других вариантах осуществления, R2 представляет собой циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, бицикло[1.1.1]пентил, бицикло[2.1.1]гексил или бицикло[2.2.1]гептил. В некоторых таких вариантах осуществления, R2 замещен одним или несколькими -CF3, -(C1-4 алкил), -(C1-6 циклоалкил), -(C0-3 алкил)OR, -(C0-3 алкил)C(O)NR2, -NR2 или -NRCOR', где каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, каждый R' независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, и где циклоалкил необязательно фторирован. В некоторых таких вариантах осуществления, R2 замещен одним или несколькими метилом, этилом, изопропилом, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3 или -NHC(O)CH2CH3. В других - R2 замещен одним или несколькими метилом, этилом, изопропилом, -циклопропилом, -CF3, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3 или -NHC(O)CH2CH3. В некоторых вариантах осуществления, R2 представляет собой замещенный или незамещенный алкилциклоалкил, например, замещенный или незамещенный (C1-3 алкил)циклопропил, (C1-3 алкил)циклобутил, (C1-3 алкил)циклопентил или (C1-3 алкил)циклогексил. Например, R2 представляет собой -(CH2)циклопропил, -(CH2)циклобутил, -CH(CH3)циклопропил, -CH(CH3)циклобутил, -CH(CH2CH3)циклопропил, -C(CH3)2циклопропил или -CH2CH2циклобутил. В некоторых вариантах осуществления R2 представляет собой замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил, например, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, пиперидил, пиперидинонил или 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил. В других - R2 представляет собой оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, пиперидил, пиперидинонил или 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил. В некоторых таких вариантах осуществления R2 замещен одним или несколькими -(C1-4 алкил), -(C0-3 алкил)OR или -C(O)R', где каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, и каждый R(независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован.
В некоторых вариантах осуществления соединений формулы (I), R2 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил,
,
где
R5' представляет собой -CF3, -(C1-4 алкил), -(C1-6 циклоалкил), -(C0-3 алкил)OR, -(C0-3 алкил)C(O)NR2, -NR2 или -NRCOR', где циклоалкил необязательно фторирован;
R6' представляет собой Н или -C(O)R';
каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован;
каждый R' независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован; и
n равно 0-2.
В некоторых таких вариантах осуществления R5' представляет собой метил, этил, изопропил, -циклопропил, -CF3, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3 или -NHC(O)CH2CH3. В некоторых вариантах осуществления, R6' представляет собой H или -C(O)CH3, -C(O)CH2CH3, -C(O)CH(CH3)2 или -C(O)CH2CH(CH3)2.
В некоторых таких вариантах осуществления R2, R1 представляет собой циклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими галогенами, -CF3, -(C1-4 алкил), -(C1-6 циклоалкил), -NR2, -(C0-3 алкил)OR, -(C0-3 алкил)ORʺ, -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR(или -NRS(O)2R', где каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, каждый R' независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, и каждый Rʺ независимо представляет собой C1-6 циклоалкил, где циклоалкил необязательно фторирован.
Другие варианты осуществления, приведенные в настоящем описании, включают комбинации одного или нескольких конкретных вариантов осуществления, указанных выше.
Характерные соединения формулы (I) представлены в таблице 1.
В некоторых вариантах осуществления соединение выбрано из таблицы 2.
В настоящем описании раскрыты соединения следующей формулы (IB):
и их фармацевтически приемлемые соли, таутомеры, стереоизомеры, энантиомеры, изотопологи и пролекарства,
где:
R3 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил, замещенный или незамещенный алкилциклоалкил или замещенный или незамещенный алкил-(неароматический гетероциклил); и
R4 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный циклоалкил или замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил.
В одном из вариантов осуществления соединение не является
4-(изопентиламино)-2-(3-(2-метилпиперидин-1-ил)пропиламино)пиримидин-5-карбонитрилом
(2S,2'S)-диметил 2,2'-(5-цианопиримидин-2,4-диил)бис(азанедиил)-бис(4-метилпентаноат)
(2S,2'S)-диэтил 2,2'-(5-цианопиримидин-2,4-диил)бис(азанедиил)-бис(3-метилбутаноат)
4-(циклогептиламино)-2-(3-(2-метилпиперидин-1-ил)пропиламино)пиримидин-5-карбонитрилом
4-(4-метилциклогексиламино)-2-(3-(2-метилпиперидин-1-ил)пропиламино)пиримидин-5-карбонитрилом
или
2-(3-(диэтиламино)пропиламино)-4-(4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрилом
В одном из вариантов осуществления соединений формулы (IB), R3 представляет собой разветвленный C1-8 алкил, например, R3 представляет собой изопропил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, изопентил, 2-метилпентил или трет-пентил. В других вариантах осуществления R3 представляет собой изопропил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, 2,3-диметилбутил, изопентил, 2-метилпентил, неопентил, трет-пентил или 3-метилпентил. В некоторых вариантах осуществления R3 представляет собой трет-бутил. В других вариантах осуществления, R3 представляет представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, бицикло[1.1.1]пентил или бицикло[2.2.2]октил. В некоторых таких вариантах осуществления R3 представляет собой циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, бицикло[1.1.1]пентил, бицикло[2.2.1]гептил или бицикло[2.2.2]октил. В некоторых вариантах осуществления R3 представляет собой циклобутил или циклогексил. В некоторых вариантах осуществления циклоалкил замещен одним или несколькими галогеном, -CF3, -(C1-4 алкил), -(C1-6 циклоалкил), -NR2, -(C0-3 алкил)OR, -(C0-3 алкил)OR”, -NRC(O)R', -C(O)R', -(C0-3 алкил)C(O)NR2, -C(O)OR' или -NRS(O)2R', где каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, и каждый R' независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, и каждый R” независимо представляет собой C1-6 циклоалкил, где циклоалкил необязательно фторирован. Например, циклоалкил замещен одним или несколькими метилом, этилом, трет-бутилом, циклопропилом, -CF3, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -O(циклопропил), -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 или -NHSO2CH3. В других вариантах осуществления, циклоалкил замещен одним или несколькими галогеном, -(C1-4 алкил), -NR2, -(C0-3 алкил)OR, -NRC(O)R', -C(O)R', -(C0-3 алкил)C(O)NR2, -C(O)OR(или -NRS(O)2R', где каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, и каждый R(независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован. Например, циклоалкил замещен одним или несколькими метилом, этилом, трет-бутилом, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -O(циклопропил), -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 или -NHSO2CH3. В некоторых вариантах осуществления циклоалкил замещен одним или несколькими метилом, -F, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCHF2, -OCH2CF3, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)N(CH3)2 или -C(CH3)2C(O)N(CH3)2. В других вариантах осуществления R3 представляет собой замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил, например, пирролидинил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил или пиперидил. В некоторых вариантах осуществления неароматический гетероциклил представляет собой оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, пиперидил, пиперидинонил или 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил. В некоторых вариантах осуществления R3 представляет собой тетрагидропиранил. В некоторых вариантах осуществления пиперидил замещен -C(O)R(или -C(O)OR', где R(представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован. В некоторых вариантах осуществления R3 представляет представляет собой замещенный или незамещенный алкилциклоалкил, например, (C1-3 алкил)циклопропил, (C1-3 алкил)циклобутил, (C1-3 алкил)циклопентил или (C1-3 алкил)циклогексил. В некоторых вариантах осуществления R3 представляет собой -(CH2)циклопропил, -(CH2)циклобутил, -(CH2)циклопентил, -(CH2)циклогексил, -CH(CH3)циклопропил, -CH(CH3)циклобутил, -CH(CH3)циклопентил или -CH(CH3)циклогексил. В других, R3 представляет собой -(CH2)циклопропил, -CH(CH3)циклопропил, -CH(CH3)циклобутил, -CH(CH3)циклогексил или -C(CH3)2циклопропил. В некоторых вариантах осуществления R3 представляет собой замещенный или незамещенный алкил-(неароматический гетероциклил), например, -(C1-4 алкил)тетрагидрофуранил или -(C1-4 алкил)диоксоланил.
В некоторых вариантах осуществления соединений формулы (IB) R3 выбран из разветвленного C1-8 алкила,
где
R3' представяет собой галоген, -CF3, -(C1-4 алкил), -(C1-6 циклоалкил), -NR2, -(C0-3 алкил)OR, -(C0-3 алкил)ORʺ, -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR(или -NRS(O)2R';
R4' представляет собой -C(O)R(или -C(O)OR';
каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован;
каждый R' независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован;
каждый Rʺ независимо представляет собой C1-6 циклоалкил, где циклоалкил необязательно фторирован; и
n равно 0-2.
В некоторых вариантах осуществления R3' представяет собой метил, этил, трет-бутил, циклопропил -CF3, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -O(циклопропил), -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 или -NHSO2CH3.
В некоторых вариантах осуществления соединений формулы (IB), R3 выбран из разветвленного C1-8 алкила,
где
R3' представляет собой галоген, -(C1-4 алкил), -NR2, -(C0-3 алкил)OR, -NRC(O)R', -C(O)R', -(C0-3 алкил)C(O)NR2, -C(O)OR(или -NRS(O)2R';
каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, каждый R(независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован; и
n равно 0-2.
В некоторых таких вариантах осуществления R3' представяет собой метил, этил, трет-бутил, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 или -NHSO2CH3.
В некоторых вариантах осуществления соединений формулы (IB), R4 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, например, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, изопентил, 2-метилпентил или трет-пентил. В некоторых вариантах осуществления, R4 представляет собой метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, 3-метилбутил, 2,3-диметилбутил, 3,3-диметилбутил, 2,3,3-триметилбутил, трет-пентил, изопентил, 3-пентил, 3-метилпентил, 2-метилпентил или 2,4-диметилпентил. В некоторых вариантах осуществления R4 представляет собой изопропил, изобутил, изопентил, трет-бутил или трет-пентил. В некоторых таких вариантах осуществления R4 замещен одним или несколькими -(C1-4 алкил), -(C0-3 алкил)OR, -C(O)NR2 или -NRCOR', где каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, и каждый R' независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован. Например, R4 замещен одним или несколькими -OH или -CH3. В некоторых других вариантах осуществления R4 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, бицикло[1.1.1]пентил, бицикло[2.1.1]гексил или бицикло[2.2.1]гептил. В некоторых вариантах осуществления R4 представляет собой циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил или бицикло[1.1.1]пентил. В некоторых вариантах осуществления R4 замещен одним или несколькими галогеном, -CF3, -(C1-4 алкил), -(C1-6 циклоалкил), -(C0-3 алкил)OR, -(C0-3 алкил)C(O)NR2, -NR2 или -NRCOR', где каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, каждый R' независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, и где циклоалкил необязательно фторирован. Например, R4 замещен одним или несколькими метилом, этилом, изопропилом, -циклопропилом, -CF3, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3 или -NHC(O)CH2CH3. В некоторых вариантах осуществления, R4 замещен одним или несколькими галогеном, -(C1-4 алкил), -(C0-3 алкил)OR, -(C0-3 алкил)C(O)NR2, -NR2 или -NRCOR', где каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, и каждый R(независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован. В некоторых таких вариантах осуществления R4 замещен одним или несколькими F, метилом, этилом, изопропилом, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCHF2, -OCH2CF3, -C(O)NH2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, -CH2C(O)NH2, -CH2C(O)NHCH3, -CH2C(O)N(CH3)2, -CH(CH3)C(O)NH2, -CH(CH3)C(O)NHCH3, -CH(CH3)C(O)N(CH3)2, -C(CH3)2C(O)NH2, -C(CH3)2C(O)NHCH3, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3 или -NHC(O)CH2CH3. В некоторых вариантах осуществления R4 замещен одним или несколькими метилом, этилом, -F, -CH2OH или -OH. В некоторых вариантах осуществления, R4 представляет собой замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил, например, оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, пиперидил, пиперидинонил или 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил. В некоторых вариантах осуществления R4 представляет собой тетрагидрофуранил или тетрагидропиранил. В некоторых таких вариантах осуществления R4 замещен одним или несколькими -(C1-4 алкил), -(C0-3 алкил)OR или -C(O)R', где каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, и каждый R' независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован.
В некоторых вариантах осуществления соединений формулы (IB), R4 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил,
где
R5' представляет собой -CF3, -(C1-4 алкил), -(C1-6 циклоалкил), -(C0-3 алкил)OR, -(C0-3 алкил)C(O)NR2, -NR2 или -NRCOR', где циклоалкил необязательно фторирован;
R6' представляет собой Н или -C(O)R';
каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован;
каждый R' независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован; и
n равно 0-2.
В некоторых таких вариантах осуществления R5(предствляет собой метил, этил, изопропил, -циклопропил, -CF3, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3 или -NHC(O)CH2CH3. В некоторых вариантах осуществления R6' представляет собой H или -C(O)CH3, -C(O)CH2CH3, -C(O)CH(CH3)2 или -C(O)CH2CH(CH3)2.
В некоторых вариантах осуществления соединений формулы (IB) R4 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил,
где
R5' представляет собой галоген, -(C1-4 алкил), -(C0-3 алкил)OR, -(C0-3 алкил)C(O)NR2, -NR2 или -NRCOR';
каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован;
каждый R' независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован;
и
n равно 0-2.
В некоторых таких вариантах осуществления R5' представляет собой F, метил, этил, изопропил, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCHF2, -OCH2CF3, -C(O)NH2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, -CH2C(O)NH2, -CH2C(O)NHCH3, -CH2C(O)N(CH3)2, -CH(CH3)C(O)NH2, -CH(CH3)C(O)NHCH3, -CH(CH3)C(O)N(CH3)2, -C(CH3)2C(O)NH2, -C(CH3)2C(O)NHCH3, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3 или -NHC(O)CH2CH3. В некоторых вариантах осуществления R5' представляет собой F, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCHF2, -OCH2CF3, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)N(CH3)2, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2.
В некоторых вариантах осуществления, где R4 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил, R3 представляет собой циклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими галогеном, -CF3, -(C1-4 алкил), -(C1-6 циклоалкил), -NR2, -(C0-3 алкил)OR, -(C0-3 алкил)ORʺ, -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR' или -NRS(O)2R', где каждый R независимо представляет собой Н или C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован, каждый R' независимо представляет собой C1-4 алкил, где алкил необязательно фторирован и каждый R” независимо представляет собой C1-6 циклоалкил, где циклоалкил необязательно фторирован.
Другие варианты осуществления включают комбинации одного или нескольких конкретных вариантов осуществления, указанных выше.
Характерные соединения формулы (IB) указаны в таблице 3.
Диаминопиримидиновые соединения, указанные в таблице 1, таблице 2 и таблице 3, анализировали в анализах ингибирования JNK, описанных в настоящем описании, и было показано, что они обладают активностью ингибиторов JNK. В одном из вариантов осуществления соединение диаминопиримидина является соединением, описанным в настоящем описании, где соединение с концентрацией 10 мкМ инигибирует JNK1 по меньшей мере на около 50% или более.
Способы получения диаминопиримидиновых соединений
Диаминопиримидиновые соединения могут быть получены, используя обычные способы органического синтеза и коммерчески доступные исходные вещества. В качестве примера, но не для ограничения, диаминопиримидиновые соединения формулы (I) могут быть получены как показано на схемах 1-9 ниже, а также в примерах, приведенных в настоящем описании. Следует отметить, что специалисту в данной области будет понятно, как модифицировать методики, приведенные на иллюстративных схемах, и примеры для получения целевых продуктов.
Схема 1
Как показано на схеме 1, соединения формулы (I), где R1 и R2 определены в настоящем описании, могут быть получены, начиная с соответствующим образом модифицированного 4-хлор-2-алкилтиопиримидинкарбоксилата (где каждый Rx независимо представляет собой C1-2 алкил), путем обработки R2NH2 при повышенной температуре (например, при 60-80°C) в органическом растворителе (например, этанол, метанол, изопропанол, ТГФ, NMP, ДМФ, ДМСО или диоксан), в присутствии основания (например, ДИЭА, ТЭА, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, карбонат цезия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат калия или фосфат калия). Гидролиз сложного эфира достигался путем обработки водным раствором основания, таким как, например, водный раствор гидроксида натрия, гидроксида калия или гидроксида лития, в сорастворителе, таком как этанол, метанол, изопропанол, ТГФ или диоксан. Образование амина сопровождалось реакцией с NH4Cl в присутствии связующего агента (такого как, например, HATU, CDI, HBTU, EDC, необязательно в сочетании с HOBt или этилхлорформиатом), в органическом растворителе, таком как NMP, ДМФ, ДМСО, диоксан, ТГФ, ДХМ или хлороформ, в присутствии основания (такого как ДИЭА, ТЭА или карбонат калия). Окисление алкилтиольной группы достигалось путем обработки в органическом растворителе (таком как, например, ацетон, ДХМ, NMP, ДМФ или хлороформ) оксидантом, таким как mCPBA, оксон, перекись водорода или 3-фенил-2-(фенилсульфонил)-1,2-оксазиридин. Полученную смесь сульфона (m=1) и сульфоксида (m=2) обрабатывали при повышенной температуре (например, 80-100°C) R1NH2 в растворителе (таком как, например, диоксан, ДМСО, NMP, ДМФ, ТГФ или вода) в присутствии органического основания, такого как ДИЭА, ТЭА, N-метилморфолин или 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, с получением соединений формулы (I).
Схема 2
Альтернативно, соединения формулы (I) могут быть получены, как показано на схеме 2 (где R1, R2 и Rx определены выше). Обработка алкил 2,4-дихлорпиримидин-5-карбоксилата с помощью NaSRx в органическом растворителе (например, ТГФ, ДХМ или диоксан) в присутствии катализатора (например, триэтилбензилхлорида аммония, тетрабутилхлорида аммония или тетрабутиламмония бромид), при охлаждении (например, при -10°C) давала смесь тиоалкиловых производных. Последующая обработка R1NH2 при повышенной температуре (например, 80°C) в органическом растворителе (например, диоксан, ТГФ, NMP, ДМФ, ДМСО, этанол, метанол или изопропанол), в присутствии основания (например, ДИЭА, ТЭА, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, карбонат цезия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат калия или фосфат калия) вводила боковую цепь R1. Гидролиз алкилового эфира, связывание с NH4Cl и окисление, как описано выше, давали смесь сульфоновых (m=1) и сульфоксидных (m=2) производных, которые при обработке R2NH2 в растворителе (таком как диоксан, NMP, ДМФ, ДМСО, ТГФ или вода), в присутствии органического основания (такого как ДИЭА, ТЭА, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен или N-метилморфолин), при повышенной температуре (например, 80-110°C), давали соединения формулы (I).
Схема 3
Соединения формулы (I) также могут быть получены как показано на схеме 3. Обработка алкил 2,4-дихлорпиримидин-5-карбоксилата с помощью R2NH2 в растворителе (например, этиловый эфир, ТГФ, ДХМ, толуол или метил трет-бутиловый эфир) в присутствии основания (например, ДИЭА, ТЭА, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, N-метилморфолин, бикарбонат натрия, карбонат цезия или фосфат калия) при низкой температуре (например, -70°C) обеспечивало введение боковой цепи R2. Разделение смеси региоизомеров и гидрирование оставшегося хлора в образце обеспечивает региомерное введение боковой цепи R2. Целевое региоизомерное соединение затем дополнительно модифицируют.Последующая обработка R1NH2 в органическом растворителе (например, ТГФ, NMP, ДМФ, ДМСО, диоксан, этанол, метанол или изопропанол) в присутствии основания (например, ДИЭА, ТЭА, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, N-метилморфолин, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат цезия или фосфат калия) при повышенной температуре (например, 70°C) обеспечивает введение боковой цепи R1. Гидролиз алкилового эфира и связывание с NH4Cl, как указано выше, дает соединения формулы (I).
Схема 4
На схеме 4 показан альтернативный способ синтеза соединений формулы (I). Обработка 2,4-дихлорпиримидин-5-карбонитрила с помощью R2NH2 в органическом растворителе (например, этанол, метанол, изопропанол или ТГФ) в присутствии основания (например, ДИЭА, ТЭА, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, N-метилморфолин, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат цезия или фосфат калия) при низкой температуре (например, -60°C) обеспечивала введение боковой цепи R2. Как указано выше, гидрирование оставшегося хлора обеспечивало региоизомерное введение R2. Последующая обработка R1NH2 в органическом растворителе (например, 1-бутанол, ТГФ, NMP, ДМФ, ДМСО, диоксан, этанол, метанол или изопропанол) в присутствии основания (например, карбонат цезия, карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, фосфат калия, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, N-метилморфолин, ДИЭА или ТЭА) при повышенной температуре (например, 120°C) обеспечивало введение бокой цепи R1 (получая, в некоторых случаях, если R1=R3 и R2=R4, соединения формулы (IB)). Преобразование нитрильной группы с помощью, например, каталитического пероксида, в присутствии водного раствора сильного основания, такого как гидроксид натрия или гидроксид калия, в растворителе, таком как, например, ДМСО, NMP, ДМФ, этанол или метанол, давало соединения формулы (I).
Схема 5
На схеме 5 показан еще один способ синтеза соединений формулы (I). Обработка 4-хлор-2-(алкилтио)пиримидин-5-карбонитрила с помощью R1NH2 в органическом растворителе (например, н-бутанол, NMP, ДМФ, ДМСО, диоксан или этанол) в присутствии основания (такого как, например, ДИЭА, ТЭА, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат цезия или фосфат калия) при температуре между 50°C и 90°C) обеспечивала введение боковой цепи R1. Преобразование карбонитрила до амида, например, путем обработки пероксидом (H2O2), в растворителе (таком как, например, ДМСО, NMP, ДМФ, этанол или метанол), в присутствии основания (такого как гидроксид натрия или гидроксида калия), и окисление (например, используя mCPBA, оксон, перекись водорода или 3-фенил-2-(фенилсульфонил)-1,2-оксазиридин, в растворителе, таком как ДХМ, NMP, ДМФ или ДМА), давали смесь сульфона (m=1) и сульфоксида (m=2), как указано выше, которая может быть обработана R2NH2 в растворителе, таком как (диоксан, ДМСО, NMP, ДМФ, ТГФ или н-бутанол) в присутствии основания (такого как ДИЭА, ТЭА, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен или N-метилморфолин), необязательно, при повышенной температуре (например, в пределах комнатной температуры до 130°C) с получением соединений формулы (I).
Схема 6
Соединения формулы (I) могут быть получены, как показано на схеме 6. Обработка 5-бром-2-хлор-4-(алкилтио)пиримидина с помощью R1NH2 в органическом растворителе (например, н-бутанол, NMP, ДМФ, ДМСО, диоксан или этанол) в присутствии основания (такого как, например, ДИЭА, ТЭА, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло-[5.4.0]ундец-7-ен, карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат цезия или фосфат калия), при температуре между 80°C и 100°C, обеспечивала введение боковой цепи R1. Введение карбонитрильной группы достигалось путем обработки цинком и дицианоцинком в растворителе (таком как ДМФ, ДМСО, NMP или ДМА) в присутствии катализатора, такого как Pd(O), при повышенной температуре (например, между 80°C-100°C). Как указано выше, преобразование амидной группы путем обработки пероксидом, а затем окисление до сульфона/сульфоксида, и обработка R2NH2 давала соединения формулы (I). Альтернативно, алкилтиогруппу сначала окисляли, а затем вводили боковую цепь R2, (получая в некоторых случаях, если R1=R3 и R2=R4 соединения формулы (IB)), и преобразование в амидную группу давало соединения формулы (I).
Альтернативно, диаминопиримидиновые соединения формулы (IB), где R3 и R4 определены в настоящем описании, могут быть получены, как показано на схемах 7, 8 и 9, как показано ниже, а также в примерах, приведенных в настоящем описании. Следует отметить, что специалисту в данной области будет понятно, как модифицировать методики, приведенные на иллюстративных схемах, и примеры для получения целевых продуктов.
Схема 7
Как показано на схеме 7, обработка 2,4-дихлорпиримидин-5-карбонитрила с помощью R4NH2 в органическом растворителе (например, этанол, метанол, изопропанол или ТГФ) в присутствии основания (например, ДИЭА, ТЭА, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, N-метилморфолин, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат цезия или фосфат калия) обеспечивало введение боковой цепи R4. Последующая обработка R3NH2 в органическом растворителе (например, 1-бутанол, ТГФ, NMP, ДМФ, ДМСО, диоксан, этанол, метанол или изопропанол) в присутствии основания (например, карбонат цезия, карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, фосфат калия, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, N-метилморфолин, ДИЭА или ТЭА) при повышенной температуре (например, 50°C-90°C) давала соединения формулы (IB).
Схема 8
Альтернативно, заместитель R3 вводят первым, а затем вводят заместитель R4 по существу теми же способами, как показано на схеме 8. В некоторых вариантах осуществления, связывание с R4NH2 осуществляли при температуре между комнатной и 110°C.
Схема 9
В третьем варианте способа соединения формулы (IB) могут быть получены, начиная с соответствующим образом модифицированного 4-хлор-2-алкилтиопиримидинкарбонитрила (где каждый Rx независимо представляет собой C1-2 алкил), путем обработки R4NH2 при повышенной температуре (например, 50°C-90°C) в органическом растворителе (например, н-бутанол, NMP, ДМФ, ДМСО или диоксан), в присутствии основания (например, ДИЭА, ТЭА, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат цезия или фосфат калия). Окисление алкилтиольной группы проводили обработкой в органическом растворителе (такие как, например, ДХМ, NMP, ДМФ или ДМА) оксидантом, таким как mCPBA, оксон, перекись водорода или 3-фенил-2-(фенилсульфонил)-1,2-оксазиридин. Полученную смесь сульфона (m=1) и сульфоксида (m=2) обрабатывали при комнатной температуре или повышенной температуре (например, 25°C-110°C) с помощью R3NH2 в растворителе (такие как, например, диоксан, ДМСО, NMP, ДМФ, ТГФ или н-бутанол) в присутствии органического основания, такого как ДИЭА, ТЭА, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, N-метилморфолин, с получением соединений формулы (IB).
В одном из аспектов представлены способы получения соединения формулы (I):
способы включают приведение в контакт соединения формулы (Ia)
c R1NH2 в растворителе, в присутствии органического основания,
где:
R1 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил, замещенный или незамещенный алкилциклоалкил, или замещенный или незамещенный алкилгетероциклил, при условии, что R1 не является 1-аминоциклогексилом;
R2 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный насыщенный циклоалкил, замещенный или незамещенный алкилциклоалкил, замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил;
Rx представляет собой C1-2 алкил; и
m равно 1 или 2.
В одном из вариантов осуществления соединением формулы (I) не является 2-(2-аминоэтиламино)-4-(метиламино)пиримидин-5-карбоксамид; 2-(2-аминопропиламино)-4-(циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид; 2-(2-амино-2-оксоэтиламино)-4-(циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид; 2-(2-аминоэтиламино)-4-(циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид; (S)-2-(2-аминопропиламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамид; (R)-2-(1-амино-3-метил-1-оксобутан-2-иламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамид; 4-(циклопентиламино)-2-(метиламино)пиримидин-5-карбоксамид; или 2-(1-ацетилпиперидин-4-иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид.
В одном из вариантов осуществления растворитель представляет собой диоксан, ДМСО, NMP, ДМФ, ТГФ или воду. В другом основанием является ДИЭА, ТЭА, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен или N-метилморфолин. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при повышенной температуре, например, от около 80°C до около 100°C.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (Ia):
способы включают окисление соединения формулы (Ib)
в растворителе путем обработки окислителем, выбранным из mCPBA, оксона, перекиси водорода или 3-фенил-2-(фенилсульфонил)-1,2-оксазиридина.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения растворитель представляет собой ацетон, ДХМ, NMP, ДМФ или хлороформ. В некоторых вариантах осуществления способ осуществляют при температуре между около 0°C и около 20°C.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (Ib):
способы включают приведение в контакт соединения формулы (Ic)
с NH4Cl в присутствии связующего агента и основания, в растворителе.
В некоторых вариантах осуществления растворителем является NMP, ДМФ, ДМСО, диоксан, ТГФ, ДХМ или хлороформ. В других - связывающий агент представляет собой HATU, CDI, HBTU, EDC/HOBt или этилхлорформиат, и основание представляет собой ДИЭА, ТЭА или карбонат калия.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (Ic)
способы включают приведение в контакт соединения формулы (Id)
с водным раствором основания в сорастворителе.
В некоторых вариантах осуществления водный раствор основания представляет собой водный раствор гидроксида натрия, гидроксида калия или гидроксида лития. В других вариантах осуществления сорастворитель представляет собой этанол, метанол, изопропанол, ТГФ или диоксан.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (Id)
способы включают приведение в контакт соединения формулы (Ie)
с R2NH2 в органическом растворителе в присутствии основания.
В некоторых вариантах осуществления органический растворитель представляет собой этанол, метанол, изопропанол, ТГФ, NMP, ДМФ, ДМСО или диоксан. В других - основание представляет собой ДИЭА, ТЭА, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, карбонат цезия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат калия или фосфат калия. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при повышенной температуре, например, от около 60°C до около 80°C.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (Ib)
способы включают приведение в контакт соединения формулы (If)
с пероксидом, в присутствии основания, в растворителе.
В некоторых вариантах осуществления, растворитель представляет собой ДМСО, NMP, ДМФ, этанол или метанол. В других - основание представляет собой гидроксид натрия или гидроксид калия.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (If)
способы включают приведение в контакт соединения формулы (Ig)
с R2NH2 в органическом растворителе, в присутствии основания.
В некоторых вариантах осуществления, органический растворитель представляет собой н-бутанол, NMP, ДМФ, ДМСО, диоксан или этанол. В других - основание представляет собой ДИЭА, ТЭА, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат цезия или фосфат калия. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при повышенной температуре, например, от около 50°C до около 90°C.
Кроме того, представлены способы получения соединения формулы (I):
способы включают приведение в контакт соединения формулы (IIa)
(IIa),
с R2NH2 в растворителе, в присутствии органического основания,
где:
R1 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил, замещенный или незамещенный алкилциклоалкил или замещенный или незамещенный алкилгетероциклил, при условии, что R1 не является 1-аминоциклогексилом;
R2 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный насыщенный циклоалкил, замещенный или незамещенный алкилциклоалкил, замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил;
Rx представляет собой C1-2 алкил; и
m равно 1 или 2.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения соединение формулы (I) не является 2-(2-аминоэтиламино)-4-(метиламино)пиримидин-5-карбоксамидом; 2-(2-аминопропиламино)-4-(циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамидом; 2-(2-амино-2-оксоэтиламино)-4-(циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамидом; 2-(2-аминоэтиламино)-4-(циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамидом; (S)-2-(2-аминопропиламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамидом; (R)-2-(1-амино-3-метил-1-оксобутан-2-иламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамидом; 4-(циклопентиламино)-2-(метиламино)пиримидин-5-карбоксамидом; или 2-(1-ацетилпиперидин-4-иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамидом.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения растворитель представляет собой диоксан, ДМСО, NMP, ДМФ, ТГФ или воду. В другом - основание представляет собой ДИЭА, ТЭА, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен или N-метилморфолин. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при повышенной температуре, например, от около 80°C до около 110°C.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (IIa):
(IIa),
способы, включающие окисление соединения формулы (IIb)
в растворителе путем обработки окислителем, выбранным из mCPBA, оксона, перекиси водорода или 3-фенил-2-(фенилсульфонил)-1,2-оксазиридина.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения растворитель представляет собой ацетон, ДХМ, NMP, ДМФ или хлороформ. В некоторых вариантах осуществления окисление осуществляют при низкой температуре, например, при около 0°C.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (IIb):
способы включают приведение в контакт соединения формулы (IIc)
с NH4Cl в присутствии связующего агента и основания, в растворителе.
В некоторых вариантах осуществления, растворитель представляет собой NMP, ДМФ, ДМСО, диоксан, ТГФ, ДХМ или хлороформ. В других - связывающий агент представляет собой HATU, CDI, HBTU, EDC/HOBt или этилхлорформиат, и основание представляет собой ДИЭА, ТЭА или карбонат калия.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (IIc)
способы включают приведение в контакт соединения формулы (IId)
с водным раствором основания, в сорастворителе.
В некоторых вариантах осуществления водный раствор основания представляет собой водный раствор гидроксида натрия, гидроксида калия или гидроксида лития. В других вариантах осуществления сорастворитель представляет собой этанол, метанол, изопропанол, ТГФ или диоксан.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (IId)
способы включают приведение в контакт соединения формулы (IIe)
с R1NH2 в органическом растворителе, в присутствии органического основания.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения органический растворитель представляет собой диоксан, ТГФ, NMP, ДМФ, ДМСО, этанол, метанол или изопропанол. В других - основание представляет собой ДИЭА, ТЭА, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, карбонат цезия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат калия или фосфат калия. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при повышенной температуре, например, от около 80°C до около 100°C.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (IIe)
способы включают приведение в контакт соединения формулы (IIf)
с NaSRx в органическом растворителе в присутствии катализатора.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения растворитель представляет собой ТГФ, ДХМ или диоксан. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения катализатором является триэтилбензилхлорид аммония, тетрабутилхлорид аммония или тетрабутиламмония бромид. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при охлаждении, например, при около -10°C.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (IIb):
способы включают приведение в контакт соединения формулы (IIg)
с пероксидом, в присутствии основания, в растворителе.
В некоторых вариантах осуществления, растворитель представляет собой ДМСО, NMP, ДМФ, этанол или метанол. В других - основание представляет собой гидроксид натрия или гидроксид калия.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (IIg)
способы включают приведение в контакт соединения формулы (IIh)
с цинком и дицианоцинком, в присутствии катализатора, в растворителе.
В некоторых вариантах осуществления катализатор представляет собой Pd(0). В некоторых вариантах осуществления растворитель представляет собой ДМФ, ДМСО, NMP или ДМА. В других - приведение в контакт осуществляют при повышенной температуре, например, при температуре между около 80°C и около 100°C.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (IIh)
способы включают приведение в контакт соединения формулы (IIi)
с R1NH2, в присутствии основания, в органическом растворителе.
В некоторых вариантах осуществления, органический растворитель представляет собой н-бутанол, NMP, ДМФ, ДМСО, диоксан или этанол. В других - основание представляет собой ДИЭА, ТЭА, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло-[5.4.0]ундец-7-ен, карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат цезия или фосфат калия. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при повышенной температуре, например, при температуре между около 80°C и около 100°C.
Также представлены способы получения соединения формулы (I):
способы включают приведение в контакт соединения формулы (IIIa)
с NH4Cl, в присутствии связующего агента и основания, в растворителе, где:
R1 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил, замещенный или незамещенный алкилциклоалкил, или замещенный или незамещенный алкилгетероциклил, при условии, что R1 не является 1-аминоциклогексилом; и
R2 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный насыщенный циклоалкил, замещенный или незамещенный алкилциклоалкил, замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения соединение формулы (I) не является 2-(2-аминоэтиламино)-4-(метиламино)пиримидин-5-карбоксамидом; 2-(2-аминопропиламино)-4-(циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамидом; 2-(2-амино-2-оксоэтиламино)-4-(циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамидом; 2-(2-аминоэтиламино)-4-(циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамидом; (S)-2-(2-аминопропиламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамидом; (R)-2-(1-амино-3-метил-1-оксобутан-2-иламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамидом; 4-(циклопентиламино)-2-(метиламино)пиримидин-5-карбоксамидом; или 2-(1-ацетилпиперидин-4-иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамидом.
В некоторых вариантах осуществления растворитель представляет собой NMP, ДМФ, ДМСО, диоксан, ТГФ, ДХМ или хлороформ. В других - связывающий агент представляет собой HATU, CDI, HBTU, EDC/HOBt или этилхлорформиат, и основание представляет собой ДИЭА, ТЭА или карбонат калия.
В некоторых таких вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (IIIa):
способы включают приведение в контакт соединения формулы (IIIb)
с водным раствором основания, в сорастворителе, где Rx представляет собой C1-2 алкил.
В некоторых вариантах осуществления водный раствор основания представляет собой водный раствор гидроксида натрия, гидроксида калия или гидроксида лития. В других вариантах осуществления сорастворитель представляет собой этанол, метанол, изопропанол, ТГФ или диоксан.
В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает получение соединения формулы (IIIb):
способ содержит приведение в контакт соединения формулы (IIIc)
с R1NH2 в присутствии органического основания, в органическом растворителе.
В некоторых вариантах осуществления органический растворитель представляет собой ТГФ, NMP, ДМФ, ДМСО, диоксан, этанол, метанол или изопропанол. В других - органическое основание представляет собой ДИЭА, ТЭА, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, N-метилморфолин, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат цезия или фосфат калия. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при повышенной температуре, например, около 70°C.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (IIIc)
способы включают приведение в контакт соединения формулы (IIId)
с R2NH2 в присутствии органического основания в растворителе.
В некоторых вариантах осуществления растворитель представляет собой этиловый эфир, ТГФ, ДХМ, толуол или метил трет-бутиловый эфир. В других - основание представляет собой ДИЭА, ТЭА, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, N-метилморфолин, бикарбонат натрия, карбонат цезия или фосфат калия. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при низкой температуре, например, около -70°C.
Также представлены способы получения соединения формулы (I):
способы включают приведение в контакт соединения формулы (IVa)
с каталитическим пероксидом, в присутствии водного раствора сильного основания, в растворителе, где:
R1 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил, замещенный или незамещенный алкилциклоалкил, или замещенный или незамещенный алкилгетероциклил, при условии, что R1 не является 1-аминоциклогексилом; и
R2 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный насыщенный циклоалкил, замещенный или незамещенный алкилциклоалкил, замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения соединение формулы (I) не представляет собой 2-(2-аминоэтиламино)-4-(метиламино)пиримидин-5-карбоксамид; 2-(2-аминопропиламино)-4-(циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид; 2-(2-амино-2-оксоэтиламино)-4-(циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид; 2-(2-аминоэтиламино)-4-(циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид; (S)-2-(2-аминопропиламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамид, (R)-2-(1-амино-3-метил-1-оксобутан-2-иламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамид; 4-(циклопентиламино)-2-(метиламино)пиримидин-5-карбоксамид; или 2-(1-ацетилпиперидин-4-иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид.
В некоторых вариантах осуществления, растворитель представляет собой ДМСО, NMP, ДМФ, этанол или метанол. В других - водный раствор сильного основания является таким, как гидроксид натрия или гидроксида калия.
В некоторых таких вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (IVa):
способы включают приведение в контакт соединения формулы (IVb)
с R1NH2 в присутствии основания, в органическом растворителе.
В некоторых вариантах осуществления, органический растворитель представляет собой 1-бутанол, ТГФ, NMP, ДМФ, ДМСО, диоксан, этанол, метанол или изопропанол. В других - основание представляет собой карбонат цезия, карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, фосфат калия, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, N-метилморфолин, ДИЭА или ТЭА. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при повышенной температуре, например, около 120°C.
В некоторых таких вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (IVb):
способы включают приведение в контакт соединения формулы (IVc)
с R2NH2 в присутствии основания, в органическом растворителе.
В некоторых вариантах осуществления, органический растворитель представляет собой этанол, метанол, изопропанол или ТГФ. В других - основание представляет собой ДИЭА, ТЭА, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, N-метилморфолин, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат цезия или фосфат калия. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при низкой температуре, например, около -60°C.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (IVa):
способы включают приведение в контакт соединения формулы (IVd)
с R2NH2 в присутствии основания, в органическом растворителе.
В некоторых вариантах осуществления, органический растворитель представляет собой ДХМ, NMP, ДМФ или ДМА. В других - основание представляет собой ДИЭА, ТЭА, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен или N-метилморфолин. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при температуре между комнатной температурой и около 130°C.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (IVd):
способы включают окисление соединения формулы (IIg)
в растворителе путем обработки окислителем, выбранным из mCPBA, оксона, перекиси водорода или 3-фенил-2-(фенилсульфонил)-1,2-оксазиридина.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения растворитель представляет собой ДХМ, NMP, ДМФ или ДМА. В некоторых вариантах осуществления окисление осуществляют при температуре от около 0°C до около комнатной температуры.
Также представлены способы получения соединения формулы (IB)
способы включают приведение в контакт соединения формулы (Va)
с R3NH2 в присутствии основания, в органическом растворителе, где
R3 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил, замещенный или незамещенный алкилциклоалкил или замещенный или незамещенный алкил-(неароматический гетероциклил); и
R4 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный циклоалкил или замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения соединение не представляет собой 4-(изопентиламино)-2-(3-(2-метилпиперидин-1-ил)пропиламино)пиримидин-5-карбонитрил; (2S,2'S)-диметил 2,2'-(5-цианопиримидин-2,4-диил)бис(азанедиил)бис(4-метилпентаноат); (2S,2'S)-диэтил 2,2'-(5-цианопиримидин-2,4-диил)бис(азанедиил)бис(3-метилбутаноат); 4-(циклогептиламино)-2-(3-(2-метилпиперидин-1-ил)пропиламино)пиримидин-5-карбонитрил; 4-(4-метилциклогексиламино)-2-(3-(2-метилпиперидин-1-ил)пропиламино)пиримидин-5-карбонитрил; или 2-(3-(диэтиламино)пропиламино)-4-(4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил.
В некоторых вариантах осуществления, органический растворитель представляет собой 1-бутанол, ТГФ, NMP, ДМФ, ДМСО, диоксан, этанол, метанол или изопропанол. В других - основание представляет собой карбонат цезия, карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, фосфат калия, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, N-метилморфолин, ДИЭА или ТЭА. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при повышенной температуре, например, от около 50°C до около 90°C.
В некоторых таких вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (Va):
способы включают приведение в контакт соединения формулы (Vb)
с R4NH2 в присутствии основания, в органическом растворителе.
В некоторых вариантах осуществления органический растворитель представляет собой этанол, метанол, изопропанол или ТГФ. В других - основание представляет собой ДИЭА, ТЭА, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, N-метилморфолин, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат цезия или фосфат калия. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при низкой температуре, например, от около -70°C до около 20°C.
Также представлены способы получения соединения формулы (IB)
способы включают приведение в контакт соединения формулы (VIa)
с R4NH2 в присутствии основания, в органическом растворителе, где
R3 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил, замещенный или незамещенный алкилциклоалкил, или замещенный или незамещенный алкил-(неароматический гетероциклил); и
R4 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения соединение не представляет собой 4-(изопентиламино)-2-(3-(2-метилпиперидин-1-ил)пропиламино)пиримидин-5-карбонитрил; (2S,2'S)-диметил 2,2'-(5-цианопиримидин-2,4-диил)бис(азанедиил)бис(4-метилпентаноат); (2S,2'S)-диэтил 2,2'-(5-цианопиримидин-2,4-диил)бис(азанедиил)бис(3-метилбутаноат); 4-(циклогептиламино)-2-(3-(2-метилпиперидин-1-ил)пропиламино)пиримидин-5-карбонитрил; 4-(4-метилциклогексиламино)-2-(3-(2-метилпиперидин-1-ил)пропиламино)пиримидин-5-карбонитрил; или 2-(3-(диэтиламино)пропиламино)-4-(4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил.
В некоторых вариантах осуществления, органический растворитель представляет собой 1-бутанол, NMP, ДМФ, ДМСО или диоксан. В других - основание представляет собой карбонат цезия, карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, фосфат калия, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, N-метилморфолин, ДИЭА или ТЭА. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при повышенной температуре, например, от около 25°C до около 110°C.
В некоторых таких вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (VIa):
способы включают приведение в контакт соединения формулы (Vb)
с R3NH2 в присутствии основания, в органическом растворителе.
В некоторых таких вариантах осуществления, органический растворитель представляет собой этанол, метанол, изопропанол или ТГФ. В других - основание представляет собой ДИЭА, ТЭА, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, N-метилморфолин, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат цезия или фосфат калия. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при низкой температуре, например, от около -70°C до около 20°C.
Представлены способы получения соединения формулы (IB)
способы включают приведение в контакт соединения формулы (VIIa)
с R3NH2 в присутствии основания, в органическом растворителе, где
R3 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил, замещенный или незамещенный алкилциклоалкил, или замещенный или незамещенный алкил-(неароматический гетероциклил);
R4 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8 алкил, замещенный или незамещенный циклоалкил или замещенный или незамещенный неароматический гетероциклил;
Rx представляет собой C1-2 алкил и
m равно 1 или 2.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения соединение не представляет собой 4-(изопентиламино)-2-(3-(2-метилпиперидин-1-ил)пропиламино)пиримидин-5-карбонитрил; (2S,2'S)-диметил 2,2'-(5-цианопиримидин-2,4-диил)бис(азанедиил)бис(4-метилпентаноат); (2S,2'S)-диэтил 2,2'-(5-цианопиримидин-2,4-диил)бис(азанедиил)бис(3-метилбутаноат); 4-(циклогептиламино)-2-(3-(2-метилпиперидин-1-ил)пропиламино)пиримидин-5-карбонитрил; 4-(4-метилциклогексиламино)-2-(3-(2-метилпиперидин-1-ил)пропиламино)пиримидин-5-карбонитрил; или 2-(3-(диэтиламино)пропиламино)-4-(4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения растворитель представляет собой диоксан, ДМСО, NMP, ДМФ, ТГФ или н-бутанол. В другом - основание представляет собой ДИЭА, ТЭА, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, N-метилморфолин. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при повышенной температуре, например, от около 25°C до около 110°C.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (VIIa):
способы включают окисление соединения формулы (VIIb)
в растворителе путем обработки окислителем, выбранным из mCPBA, оксона, перекиси водорода или 3-фенил-2-(фенилсульфонил)-1,2-оксазиридина.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, растворитель представляет собой ДХМ, NMP, ДМФ или ДМА. В некоторых вариантах осуществления окисление осуществляют при низкой температуре, например, при около 0°C.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают получение соединения формулы (VIIb)
способы включают приведение в контакт соединения формулы (VIIc)
с R4NH2 в органическом растворителе, в присутствии основания.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, органический растворитель представляет собой н-бутанол, NMP, ДМФ, ДМСО или диоксан. В другом, основание представляет собой ДИЭА, ТЭА, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат цезия или фосфат калия. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляют при повышенной температуре, например, от около 50°C до около 90°C.
Способы применения
Диаминопиримидиновые соединения могут использоваться в качестве фармацевтических средств для лечения, профилактики или улучшения состояний у животных и людей. Кроме того, диаминопиримидиновые соединения являются активными в отношении протеинкиназы, в частности, JNK1 и/или JNK2. Таким образом, в настоящем описании приведено большое число вариантов применения диаминопиримидиновых соединений, включая лечение или профилактику заболеваний, приведенных ниже. Способы по настоящему описанию включают введение эффективного количества одного или несколько соединений диаминопиримидина(ов) нуждающемуся в этом индивиду.
В одном из аспектов приведены способы ингибирования киназы в клетке, экспрессирующей указанную киназу, включают приведение в контакт указанную клетку с эффективным количеством диаминопиримидинового соединения. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения киназа представляет собой JNK1, JNK2 или их мутанты или изоформы, или их комбинация. Например, соединение диаминопиримидина представляет собой соединение таблицы 1, 2 или 3.
В другом аспекте представлены способы лечения или профилактики фиброзных заболеваний печени, таких как неалкогольный стеатогепатит, стеатоз (то есть, жировая дистрофия печени), цирроз, первичный склерозирующий холангит, первичный билиарный цирроз, гепатит, гепатоцеллюлярная карцинома или фиброз печени связан с хроническим или повторяющимся употреблением алкоголя (алкогольный гепатит), с инфекцией (например, вирусной инфекцией, такой как HCV), с пересадкой печени или с поражением печени, вызванным приемом лекарственных средств (например, ацетаминофеновая токсичность), включающие введение нуждающемуся в этом индивиду эффективного количества диаминопиримидинового соединения. В некоторых таких аспектах в настоящем описании приведены способы лечения или профилактики диабета или метаболического синдрома, которые приводят к развитию фиброзных заболеваний печени, таких как неалкогольный стеатогепатит, стеатоз (то есть, жировая дистрофия печени), цирроз, первичный склерозирующий холангит, первичный билиарный цирроз и гепатит, включающие введение нуждающемуся в этом индивиду эффективного количества диаминопиримидинового соединения.
В другом аспекте в описании представлены способы лечения или профилактики одного или нескольких заболеваний, выбранных из интерстициальный фиброз легких, системный склероз, склеродермия, хроническая нефропатия аллотрансплантата, отказ или опосредованной антителами волчанка, включающие введение нуждающемуся в этом индивиду эффективного количества диаминопиримидинового соединения. В некоторых таких вариантах осуществления, волчанкой является красная волчанка (такая как дискоидная форма красной волчанки или кожная форма красной волчанки) или системная волчанка.
В другом аспекте в описании представлены способы лечения или профилактики состояний, лечение или профилактика которых возможна путем ингибирования JNK1 и/или JNK2, способ включает введение нуждающемуся в этом индивиду эффективного количества диаминопиримидинового соединения. Примеры таких состояний включают ревматоидный артрит; ревматоидный спондилит; остеоартрит; астму, бронхит; аллергический ринит; хроническое обструктивное заболевание легких; кистозный фиброз; воспалительные заболевания кишечника; синдром раздраженного кишечника; слизистый колит; язвенный колит; заболевание Крона; болезнь Хантингтона; гепатит; панкреатит; нефрит; рассеянный склероз; красную волчанку, диабет типа II; ожирение; атеросклероз; рестеноз после ангиопластики; гипертрофию левого желудочка; инфаркт миокарда; инсульт; ишемические повреждения сердца, легких, кишечника, почек, печени, поджелудочной железы, селезенки и мозга; острое или хроническое отторжения трансплантанта органа; сохранение органа для трансплантации; органную недостаточность или потерю конечности (например, но ими не ограничиваясь, в результате ишемической реперфузии, серьезной травмы организма, автомобильной аварии, краш-синдрома или недостаточности трансплантата); реакцию «трансплант против хозяина»; шок от эндотоксина; полиорганную недостаточность; псориаз; ожог при воздействии огня, химических веществ или радиации; экзему; дерматит; пересадку кожи; ишемию; ишемические состояния, связанные с хирургией или травматическим повреждением (например, дорожно-транспортные происшествия, пулевое ранение или повреждение конечностей); эпилепсию; болезнь Альцгеймера; болезнь Паркинсона; иммунологический ответ на бактериальную или вирусную инфекцию; кахексию; ангиогенные и пролиферативные заболевания; солидную опухоль; и злокачственные новообразования различных тканей, такие как толстая кишка, прямая кишка, предстательная железа, печень, легкие, бронхи, поджелудочная железа, головной мозг, голова, шея, желудок, кожа, почки, шейка матки, кровь, гортань, пищевод, полость рта, глотка, мочевой пузырь, яичник или матка.
Фармацевтические композиции и пути введения
Диаминопиримидиновые соединения могут быть введены индивидууму перорально, местно или парентерально в удобной форме препаратов, такой как капсулы, микрокапсулы, таблетки, гранулы, порошок, троше, пиллюли, суппозитории, инъекции, суспензии, сиропы, пластыри, кремы, лосьоны, мази, гели, спреи, растворы и эмульсии. Подходящие составы могут быть получены широко используемыми способами, используя органические или неорганические добавки, такие как эксципиент (например, сахароза, крахмал, маннит, сорбит, лактоза, глюкоза, целлюлоза, тальк, фосфат кальция или карбонат кальция), связывающее средство (например, целлюлоза, метилцеллюлоза, гидроксиметилцеллюлоза, полипропилпирролидон, поливинилпирролидон, желатин, аравийская камедь, полиэтиленгликоль, сукроза или крахмал), дезинтегрирующее средство (например, крахмал, карбоксиметилцеллюлоза, гидроксипропилкрахмал, низко-замещеная гидроксипропилцеллюлоза, бикарбонат натрия, фосфат кальция или цитрат кальция), лубрикант (например, стеарат магния, безводная кремневая кислота, тальк или натрий лаурил сульфат), вкусовой агент (например, лимонная кислота, метанол, глицин или orange-порошок), консервант (например, бензоат натрия, бисульфат натрия, метилпарабен или пропилпарабен), стабилизатор (например, лимонная кислота, цитрат натрия или уксусная кислота), суспендирующий агент (например, метилцеллюлоза, поливинилпирролидон или алюминий стеарат), диспергирующий агент (например, гидроксипропилметилцеллюлоза), разбавитель (например, вода) и базисный воск (например, масло какао, медицинский вазелин или полиэтиленгликоль). Эффективное количество дииаминопиримидиновых соединений в фармацевтической композиции могут быть на уровне, который будет давать желаемый эффект; например, от около 0,005 мг/кг массы тела индивида до около 10 мг/кг массы тела индивида в лекарственной форме, как для перорального, так и для парентерального введения.
Доза вводимого индивиду диаминопиримидинового соединения находится в достаточно широком диапазоне и может быть оставлена на усмотрение медицинского работника. Главным образом, диаминопиримидиновые соединения могут вводиться индивиду от одного до четырех раз в день в дозе от около 0,005 мг/кг массы тела индивида до около 10 мг/кг массы тела индивида, но более высокие дозы могут точно изменяться в зависимости от возраста, массы тела и заболевания индивида и типа введения. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения доза составляет от около 0,01 мг/кг массы тела индивида до около 5 мг/кг массы тела индивида, около 0,05 мг/кг массы тела индивида до около 1 мг/кг массы тела индивида, около 0,1 мг/кг массы тела индивида до около 0,75 мг/кг массы тела индивида или около 0,25 мг/кг массы тела индивида до около 0,5 мг/кг массы тела индивида. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения одна доза рассчитывается на сутки. В каждом конкретном случае количество вводимого соединения диаминопиримидина будет зависеть от таких факторов как растворимость активного вещества, используемого состава и пути введения. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения местное применение обеспечивает внутриклеточное воздействие или концентрацию около 0,01-10 мкМ.
В еще одном варианте осуществления в описании представлены способы лечения или профилактики заболевания или расстройства, включающие введение от около 0,375 мг/день до около 750 мг/день, около 0,75 мг/день до около 375 мг/день, около 3,75 мг/день до около 75 мг/день, около 7,5 мг/день до около 55 мг/день или около 18 мг/день до около 37 мг/день диаминопиримидинового соединения нуждающемуся в этом индивиду.
В еще одном варианте осуществления в описании представлены способы лечения или профилактики заболевания или расстройства, включающие введение от около 1 мг/день до около 1200 мг/день, около 10 мг/день до около 1200 мг/день, около 100 мг/день до около 1200 мг/день, около 400 мг/день до около 1200 мг/день, около 600 мг/день до около 1200 мг/день, около 400 мг/день до около 800 мг/день или около 600 мг/день до около 800 мг/день диаминопиримидинового соединения нуждающемуся в этом индивиду. В конкретных вариантах осуществления способы, описанные в настоящем описании, включают введение 400 мг/день, 600 мг/день или 800 мг/день диаминопиримидинового соединения нуждающемуся в этом индивиду.
В еще одном варианте осуществления в описании представлены лекарственные формы, которые содержат от около 1 мг до 200 мг, от около 35 мг до около 1400 мг, от около 125 мг до около 1000 мг, от около 250 мг до около 1000 мг или от около 500 мг до около 1000 мг диаминопиримидинового соединения.
В конкретном варианте осуществления в описании представлены лекарственные формы, содержащие от около 100 мг или 400 мг диаминопиримидинового соединения.
В еще одном варианте осуществления в описании представлены лекарственные формы, которые содержат 1 мг, 5 мг, 10 мг, 15 мг, 20 мг, 30 мг, 35 мг, 50 мг, 70 мг, 100 мг, 125 мг, 140 мг, 175 мг, 200 мг, 250 мг, 280 мг, 350 мг, 500 мг, 560 мг, 700 мг, 750 мг, 1000 мг или 1400 мг диаминопиримидинового соединения.
Диаминопиримидиновое соединение может вводится один, два, три, четыре или более раз в день. В конкретном варианте осуществления дозы 600 мг или менее вводят одной дозой раз в день, а дозы более 600 мг вводят два раза в день в количестве, эквивалентном половине от общей дневной дозы.
Диаминопиримидиновое соединение может вводится перорально, учитывая удобство применения. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения при пероральном введении диаминопиримидиновое соединение вводят с едой или водой. В еще одном варианте осуществления соединение диаминопиримидина диспергируют в воде или соке (например, яблочный сок или апельсиновый сок) и вводят перорально в виде суспензии.
Соединение диаминопиримидина также можно вводить интрадермально, внутримышечно, внутрибрюшинно, подкожно, внутривенно, внутрикожно, интраназально, эпидурально, подъязычно, интрацеребрально, интравагинально, чрескожно, ректально, через слизистую оболочку, путем ингаляции или применять местно в уши, нос, глаза или на коже. Выбор пути введения оставляют за медицинским работником, и он может частично зависеть от области поражения.
В одном из вариантов осуществления в описании представлены капсулы, содержащие диаминопиримидиновое соединение без дополнительного носителя, эксципиента или наполнителя.
В еще одном варианте осуществления в описании представлены композиции, содержащие эффективное количество диаминопиримидинового соединения и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель, где фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель может содержать эксципиент, растворитель или их смесь. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения композиция является фармацевтической композицией.
Композиция может быть в виде таблетки, жевательной таблетки, капсулы, растворов, парентеральных растворов, троше, суппозиториев и суспензий, и тому подобное. Композиция может быть составлена так, чтобы содержать суточную дозу или подходящую часть суточной дозы, в лекарственной форме, которая может быть единичной таблеткой или капсулой или жидкостью в подходящем объеме. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения растворы получают из водорастворимых солей, таких как гидрохлорид. В целом, все композиции получают в соответствии с известными способами фармацевтической химии. Капсулы могут быть получены путем смешивания диаминопиримидинового соединения с подходящим носителем или разбавителем и наполнителем в соответствующем количестве смеси в капсулах. Обычные носители и разбавители включают, но ими не ограничиваются, инертные порошкообразные вещества, такие как крахмал различных видов, порошкообразную целлюлозу, особенно кристаллическую и микрокристаллическую целлюлозу, сахара, такие как фруктоза, маннит и сахарозу, муку зерновых и аналогичные съедобные порошки.
Таблетки могут быть получены путем прямой компрессии, путем влажного гранулирования или путем сухого гранулирования. Их составы помимо соединения обычно включают в себя разбавители, связывающие средства, лубриканты и дезинтегрирующие агенты. Обычные разбавители включают, например, различные виды крахмала, лактозу, маннит, каолин, фосфат кальция или сульфат кальция, неорганические соли, такие как хлорид натрия и порошковый сахар. Порошковые производные целлюлозы также могут быть использованы. Обычные связывающие средства для таблеток представляют собой вещества, такие как крахмал, желатин и сахара, такие как лактоза, фруктоза, глюкоза и тому подобное. Природные и синтетические воски также удобно использовать, включая акацию, альгинаты, метилцеллюлозу, поливинилпирролидин и тому подобное. Полиэтиленгликоль, этилцеллюлоза и воски также могут служить в качестве связующих средств. Полиэтиленгликоль, этилцеллюлоза и воска также могут служить в качестве связывающих агентов.
В составе таблетки может быть необходим лубрикант для защиты таблетки и перфорирования от прилипания в красителе. Лубрикант может быть выбран из таких скользких твердых веществ как тальк, магний и стеарат кальция, стеариновая кислота и безводные растительные масла. Таблеточные дезинтеграторы представляют собой вещества, которые набухают при увлажнении, для разрушения таблетки и высвобождения соединения. К ним относятся крахмалы, глины, целлюлозы, альгины и воска. В частности, кукурузный и картофельный крахмал, метилцеллюлоза, агар, бентонит, целлюлоза дерева, порошкообразная природная губка, катион-обменные смолы, альгиновая кислота, гуаровая камедь, мякоть цитрусовых и карбоксиметилцеллюлоза, например, так же может быть использован лаурилсульфат натрия. Таблетки могут быть покрыты сахаром в качестве подсластителя и герметика, или пленкообразующим защитным средством для изменения свойств растворения таблетки. Композиции также могут быть составлены в виде жевательных таблеток, например, используя в составе вещества, такие как манит.
Если желательно вводить диаминопиримидиновое соединение в виде суппозитория, то могут быть использованы обычные основы. Масло какао является традиционной основой суппозиториев, которое может быть модифицировано путем добавления воска для незначительного повышения точки плавления. Широко используются смешивающиеся в воде основы для суппозиториев, содержащие, в частности, полиэтиленгликоли различных молекулярных масс.
Благодаря подходящему составу эффект диаминопиримидинового соединения может быть отложен или пролонгирован. Например, могут быть получены и введены в состав таблетки или капсулы медленно-растворимые гранулы соединения диаминопиримидина, или в виде медленно высвобождающего имплантируемого средства. Методика также включает получение пилюль нескольких различных растворимых уровней и наполнение капсул смесью пилюль. Таблетки или капсулы могут быть покрыты пленкой, которая препятствует растворению в течение заранее спрогнозированного периода времени. Даже парентеральные препараты могут быть длительного действия за счет растворения или суспензирования соединения диаминопиримидина в жирных или эмульгированных носителях, которые облеспечивают медленное растворение в сыворотке крови.
ПРИМЕРЫ
Следующие примеры приведены в качестве иллюстрации, а не для ограничения. Соединения обозначены с помощью программы автоматического наименования от Chemdraw Ultra 9,0 (CambridgeSoft), которая генерирует систематические названия для химических структур, с поддержкой правил Кана-Ингольда-Прелога для стереохимии. Специалист в данной области может модифицировать методики, изложенные в иллюстративных примерах, для получения целевых продуктов.
Использовали следующие аббревиатуры:
| ДХМ | дихлорметан |
| ДЭА | диэтиламин |
| ДИЭА | N,N-диизопропилэтиламин |
| ДМА | N,N-диметилацетамид |
| ДМФ | N,N-диметилформамид |
| ДМСО | диметилсульфоксид |
| EDC | гидрохлорид этил-(N',N'-диметиламино)пропилкарбодиимида |
| ESI | ионизация электрораспылением |
| HATU | гексафторфосфат O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония |
| HOBt | 1-гидроксибензотриазол |
| ВЭЖХ | высокоэффективная жидкостная хроматография |
| HTRF | гомогенная разрешенная во времени флуоресценция |
| ЖХ-MS | жидкостная хроматография с масс-спектрометрией |
| mCPBA | мета-хлорпероксибензойная кислота |
| MC | Масс-спектрометрия |
| NMP | N-метилпирролидон |
| ЯМР | ядерно-магнитный резонанс |
| SFC | хроматография со сверхкритической подвижной фазой |
| TBTU | O-бензотриазол-1-ил-N,N,N',N'-тетра-метилуроний тетрафторборат |
| ТЭА | триэтиламин |
| ТФУ | трифторуксусная кислота |
| ТГФ | тетрагидрофуран |
| ТСХ | тонкослойная хроматография |
Синтез соединений
Пример 1: 4-((1R,3R)-3-гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
4-Хлор-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил. 2,4-Дихлорпиримидин-5-карбонитрил (1,2 г, 6,93 ммоль) в безводном этаноле (10 мл) и (1R,4R)-4-метоксициклогексанамин (893 мг, 6,93 ммоль) в безводном этаноле (10 мл) перемешивали при -60°С, затем по каплям добавляли ДИЭА (1,34 г, 10,4 ммоль). Смесь перемешивали при -60°С в течение 1,5 ч, затем при комнатной температуре в течение ночи. Летучие фракции удаляли и остаток очищали на силикагеле (элюируя 9,1%-25% этилацетатом в петролейном эфире и 3,2%-4,7% метанолом в ДХМ) с получением 2-х изомеров (идентифицированы как описано ниже), а именно 4-хлор-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (560 мг, 2,10 ммоль, выход 30%) в виде белого твердого вещества и 2-хлор-4-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (227 мг, 0,85 ммоль, выход 12%) в виде белого твердого вещества. MC(ESI): m/z 266,9 [M+1]+.
Идентификацию двух изомеров осуществляли путем характеристики дегалогенированного промежуточного продукта. Дегалогенирование двух фракций проводили следующим образом. 4-Хлор-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил (50 мг, 0,18 ммоль) и никель Ренея в сорастворителе ТГФ (10 мл) и водном растворе аммония (1 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода из баллона в течение ночи. Смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с обратной фазой (10%-40% ацетонитрил + 0,005% раствор аммония) с получением 5-(аминометил)-N-((1R,4R)-4-метоксициклогексил)пиримидин-2-амина (25 мг, 0,10 ммоль, выход 58%). 1H-ЯМР (CDCl3 300 МГц): δ ч./млн 8,23 (с, 2Н), 4,96 (д, J=10,0 Гц, 1Н), 3,85-3,73 (м, 1Н), 3,69 (с, 2Н), 3,34 (с, 3Н), 3,22-3,11 (м, 1Н), 2,15-2,04 (м, 4Н), 1,44-1,34 (м, 4Н); MC(ESI): m/z 236,9 [M+1]+.
Аналогично, 2-хлор-4-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил (50 мг, 0,18 ммоль) и никель Ренея в сорастворителе ТГФ (10 мл) и водном растворе аммония (1 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода из баллона в течение ночи. Смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с обратной фазой (10%-40% ацетонитрил + 0,005% раствор аммония) с получением 5-(аминометил)-N-((1R,4R)-4-метоксициклогексил)пиримидин-4-амина (30 мг, 0,12 ммоль, выход 66%). 1Н-ЯМР (CDCl3 300 МГц): δ ч./млн 8,46 (с, 1Н), 7,84 (с, 1Н), 7,25 (с, 1Н), 4,00-3,93 (м, 1Н), 3,79 (с, 2Н), 3,34 (с, 3Н), 3,23-3,14 (м, 1Н), 2,14-2,02 (м, 4Н), 1,48-1,22 (м, 4Н); MC(ESI): m/z 236,9 [M+1]+.
B. 4-((1R,3R)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил. Смесь 4-хлор-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (236 мг, 0,88 ммоль), (1R,3R)-3-аминоциклогексанола (151 мг, 1,32 ммоль; получен как описано в Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056 (2004)) и карбоната цезия (573 мг, 1,76 ммоль) в безводном н-бутаноле (20 мл) перемешивали при 120°С в атмосфере азота в течение 3 ч. Смесь разделяли между водой и ДХМ. Органические слои объединяли, концентрировали и очищали на силикагеле (элюируя 16%-50% этилацетатом в петролейном эфире и 3,2%-4,7% метанолом в ДХМ) с получением 4-((1R,3R)-3-гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (140 мг, 0,40 ммоль, выход 46%) в виде белого твердого вещества. MC(ESI): m/z 346,0 [M+1]+.
C. 4-((1R,3R)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. 4-((1R,3R)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил (140 мг, 0,40 ммоль) растворяли в ДМСО (10 мл) и добавляли при комнатной температуре десять капель насыщенного водного раствора гидроксида натрия и десять капель водного раствора перекиси водорода (30%). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 6 ч. Реакционную смесь разделяли между водой и ДХМ-изопропанолом (5:1). Органические слои объединяли, концентрировали и очищали на силикагеле (элюируя 50%-75% этилацетатом в петролейном эфире и 4,76%-9,1% метанолом в ДХМ) с получением 4-((1R,3R)-3-гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (103 мг, 0,28 ммоль, выход 70%) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (ДМСО-d6 400 МГц): δ ч./млн 9,00 (д, J=5,2 Гц, 1Н), 8,33 (с, 1Н), 7,54 (уш. с, 1Н), 7,00 (с, 1Н), 6,81 (с, 1Н), 4,47 (с, 1Н), 4,28 (с, 1Н), 3,81 (с, 1Н), 3,63 (с, 1Н), 3,22 (с, 3Н), 3,08 (с, 1Н), 1,98-1,54 (м, 8Н), 1,41-1,14 (м, 7Н); MC(ESI): m/z 363,9 [M+1]+.
Пример 2: 4-((1S,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 4-((1S,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил. Смесь 4-хлор-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (236 мг, 0,88 ммоль, синтез описан в настоящем описании), (1S,3S)-3-аминоциклогексанола (209 мг, 1,33 ммоль; получен, как описано в Tetrahedron: Asymmetry 15: 2051-2056 (2004)) и карбоната цезия (573 мг, 1,76 ммоль) в безводном н-бутаноле (20 мл) перемешивали при 120°С в атмосфере азота в течение 3 ч. Смесь разделяли между водой и ДХМ. Органические слои объединяли, концентрировали и очищали на силикагеле (элюируя 16%-50% этилацетатом в петролейном эфире и 3,2%-4,7% метанолом в ДХМ) с получением 4-((1S,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (140 мг, 0,40 ммоль, выход 46%) в виде белого твердого вещества. MC(ESI): m/z 346,1 [M+1]+.
В. 4-((1S,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. 4-((1S,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил (140 мг, 0,40 ммоль) растворяли в ДМСО (10 мл) и добавляли при комнатной температуре десять капель насыщенного водного раствора гидроксида натрия и десять капель водного раствора перекиси водорода (30%). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 6 ч. Реакционную смесь разделяли между водой и ДХМ-изопропанолом (5:1). Органические слои объединяли, концентрировали и очищали на силикагеле (злюируя 50%-75% этилацетатом в петролейном эфире и 4,76%-9,1% метанолом в ДХМ) с получением 4-((1S,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (102 мг, 0,28 ммоль, выход 70%) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (ДМСО-d6 400 МГц): δ ч./млн 9,01 (д, J=6,0 Гц, 1Н), 8,34 (с, 1Н), 7,56 (уш. с, 1Н), 7,02 (д, J=4,8 Гц, 1Н), 6,82 (с, 1Н), 4,48 (с, 1Н), 4,29 (с, 1Н), 3,81 (с, 1Н), 3,64 (с, 1Н), 3,23 (с, 3Н), 3,08 (с, 1Н), 2,01-1,55 (м, 8Н), 1,41-1,15 (м, 7Н); MC(ESI): m/z 363,9 [М+1]+.
Пример 3: 2-((1R,4S)-4-Этоксициклогексиламино)-4-((1S,2S)-2-гидроксициклопентиламино)пиримидин-5-карбоксамид
A. Трет-бутил-(1R,4R)-4-гидроксициклогексилкарбамат. К суспензии гидрохлорида (1R,4R)-4-аминоциклогексанола (25 г, 217 ммоль) в диоксане (200 мл) добавляли раствор гидроксида натрия (8,7 г, 217 ммоль) в воде (150 мл) при комнатной температуре, а затем добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (47 г, 270 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. После того как исходное вещество было израсходовано, летучие вещества удаляли, и остаток разбавляли водой. Твердое вещество собирали путем фильтрации и сушили, с получением трет-бутил-(1R,4R)-4-гидроксициклогексилкарбамата в виде белого твердого вещества (33 г, 0,15 моль, выход 92%). 1Н-ЯМР (ДМСО-d6, 300 МГц): δ ч./млн 6,65 (д, J=7,5 Гц, 1Н), 4,48 (д, J=3,0 Гц, 1Н), 3,14 (с, 1Н), 1,77 (м, 4H), 1,37 (с, 9Н), 1,14 (м, 4Н).
B. Трет-бутил-(1R,4R)-4-этоксициклогексилкарбамат. В раствор трет-бутил-(1R,4R)-4-гидроксициклогексилкарбамата (20 г, 93 ммоль) в безводном ТГФ (100 мл) порциями добавляли гидрид натрия (4 г, 100 ммоль, 60% в минеральном масле) в атмосфере азота при 0°С. Смесь нагревали при комнатной температуре и перемешивали в течение 30 мин. В смесь добавляли по каплям раствор йодоэтана (16 г, 102 ммоль) в безводном ТГФ (50 мл) при 0°С, и полученную смесь нагревали при 60°С в течение 15 ч. После этого смесь охлаждали при комнатной температуре и выливали в воду со льдом (100 мл). Водную месь экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3), и органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали на колонке с силикагелем (элюируя 5%-30% этилацетатом в петролейном эфире) с получением трет-бутил-(1R,4R)-4-этоксициклогексилкарбамата (3,7 г, 15 ммоль, выход 16%). 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц): δ ч./млн 6,70 (д, J=7,6 Гц, 1Н), 3,42 (кв, J=7,2 Гц, 2Н), 3,11-3,17 (м, 2Н), 1,92 (м, 2Н), 1,74 (м, 2Н), 1,37 (с, 9Н), 1,21 (м, 4Н), 1,07 (т, J=7,2 Гц, 3Н).
C. Гидрохлорид (1R,4R)-4-этоксициклогексанамина. Раствор трет-бутил-(1R,4R)-4-этоксициклогексилкарбамата (3,7 г, 15 ммоль) в метанольном растворе хлороводорода (2 М, 20 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь упаривали при пониженном давлении с получением гидрохлорида (1R,4R)-4-этоксициклогексанамина (2,7 г, выход 100%).
D. Гидрохлорид (1S,2S)-2-аминоциклопентанола. К раствору (1S,2S)-2-(бензилокси)циклопентанамина (4,5 г, 22 ммоль) и хлористоводородной кислоты (0,5 мл) в метаноле (100 мл) добавляли 10 масс. % палладия на активированном угле (500 мг). Смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода (40 фунт на кв. дюйм) в течение 24 ч. Катализатор отфильтровывали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением гидрохлорида (1S,2S)-2-аминоциклопентанола в виде белого твердого вещества (2,14 г, 15 ммоль, выход 93%).
Е. Этил-4-((1S,2S)-2-гидроксициклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат. Смесь этил-4-хлор-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (1,4 г, 6,0 ммоль), гидрохлорида (1S,2S)-2-аминоциклопентанола (0,7 г, 6,9 ммоль) и ДИЭА (1,0 г) в этаноле (20 мл) нагревали при 60°С в течение 15 ч. После охлаждения при комнатной температуре реакционный раствор концентрировали, и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюируя 0~10% этилацетатом в петролейном эфире) с получением этил-4-((1S,2S)-2-гидроксициклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (1,3 г, 4,37 ммоль, выход 73%) в виде белого твердого вещества. МС (ESI): m/z 298,5 [М+1]+.
F. 4-((1S,2S)-2-Гидроксициклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновая кислота. В раствор этил-4-((1S,2S)-2-гидроксициклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (1,3 г, 4,37 ммоль) в этаноле (15 мл) добавляли водный раствор гидроксида натрия (15 мл, 2 н), и смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. После того, как исходное вещество было израсходовано, реакционную смесь нейтрализовали насыщенным водным раствором лимонной кислоты. Твердые вещества собирали путем фильтрации и сушили с получением 4-((1S,2S)-2-гидроксициклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновой кислоты (1,0 г, 3,7 ммоль, выход 85%) в виде белого твердого вещества. МС (ESI): m/z 270,6 [М+1]+.
G. 4-((1S,2S)-2-Гидроксициклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. Смесь 4-((1S,2S)-2-гидроксициклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновой кислоты (1,0 г, 3,7 ммоль), хлорида аммония (0,989 г, 18,5 ммоль), HATU (2,25 г, 5,92 ммоль), ДИЭА (2,39 г, 18,5 ммоль) и 1-HOBt (0,80 г, 5,92 ммоль) в ДМФ (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли водой (15 мл), и водную смесь экстрагировали этилацетатом (20 мл × 3). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали в вакууме. Остаток очищали на колонке с силикагелем (элюируя 30-50% этилацетатом в петролейном эфире) с получением 4-((1S,2S)-2-гидроксициклопентиламино)-2-(метилтио)пирамидин-5-карбоксамида (800 мг, 2,98 ммоль, выход 81%) в виде белого твердого вещества. МС (ESI): m/z 269,4 [М+1]+.
Н. 4-((1S,2S)-2-Гидроксициклопентиламино)-2-(метилсульфонил)-пиримидин-5-карбоксамид. В смесь 4-((1S,2S)-2-гидроксициклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (800 мг, 2,98 ммоль) в ацетоне (10 мл) добавляли раствор пероксимоносульфата калия (4,66 г, 7,45 ммоль) в воде (10 мл), и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После того как исходное вещество было израсходовано, реакционную смесь разделяли между этилацетатом (20 мл) и водой (15 мл). Водный слой экстрагировали с этилацетатом (20 мл × 3). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали в вакууме с получением 4-((1S,2S)-2-гидроксициклопентиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (700 мг, 2,3 ммоль, выход 78%) в виде твердого вещества. МС (ESI): m/z 301,2 [М+1]+.
I. 2-((1R,4S)-4-Этоксициклогексиламино)-4-((1S,2S)-2-гидрокси-циклопентиламино)пиримидин-5-карбоксамид. Раствор 4-((1S,2S)-2-гидроксициклопентиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (700 мг, 2,3 ммоль), гидрохлорида (1R,4R)-4-этоксициклогексанамина (668 мг, 4,66 ммоль) и ДИЭА (600 мг, 4,66 ммоль) в диоксане (10 мл) нагревали при 80°С в течение 15 ч. После этого охлаждали при комнатной температуре, реакционную смесь концентрировали, и твердый остаток растворяли в этилацетате (20 мл). Органический раствор промывали водой и насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали в вакууме. Твердый остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с обратной фазой (40-75% ацетонитрил + 0,05% гидроксид аммония в воде, 7,5 мин) с получением 2-((1R,4S)-4-этоксициклогексиламино)-4-((1S,2S)-2-гидроксициклопентиламино)пиримидин-5-карбоксамида (320 мг, 0,88 ммоль, выход 38%, т.к. 126,0~126,6°С) в виде твердого вещества. 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц): δ ч./млн 9,02-8,93 (м, 1Н), 8,32 (д, J=9,2 Гц, 1Н), 7,60-7,51 (м, 1Н), 7,04 (д, J=7,2 Гц, 1Н), 6,88 (д, J=7,2 Гц, 1Н), 4,82 (с, 1Н), 3,99-3,89 (м, 3Н), 3,42 (кв, J=7,2 Гц, 2Н), 3,15 (с, J=6,0 Гц, 1Н), 2,10-2,06 (м, 1Н), 1,97-1,77 (м, 5Н), 1,66-1,60 (м, 2Н), 1,46 (с, 1Н), 1,28-1,18 (м, 5Н), 1,06 (т, J=7,2 Гц, 3Н); МС (ESI): m/z 364,3 [М+1]+.
Пример 4: 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-(метилкарбамоил)циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида
A. Этил-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат. Этил-4-хлор-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат (4,38 г, 18,82 ммоль) и (1S,3R)-3-аминоциклогексанол (2,276 г, 19,76 ммоль; полученный, как описано в Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056 (2004)) перед добавлением ДИЭА (4,93 мл, 28,2 ммоль) растворяли в этаноле (75 мл) и нагревали до 60°С. Через 2 часа ЖХ-МС показала, что масса целевого продукта имела доминирующий пик. Реакционную смесь переставали нагревать и концентрировали. Сырое вещество очищали на колонке 340G SNAP Biotage (20-100% этилацетат в гексане) с получением этил-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (5 г, 16,06 ммоль, 85% выход) в виде белой пены; МС (ESI) m/z 312,1 [М+1]+.
B. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновая кислота. Этил-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат (5 г, 16,06 ммоль) растворяли в этаноле (50 мл) предварительно добавляя раствор гидроксида натрия (2 M в воде, 20 мл, 40,0 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре. Через 30 мин ЖХ-МС показала в основном массу целевого продукта. Реакционную смесь нейтрализовали, добавляя насыщенный водный раствор лимонной кислоты. Полученный осадок фильтровали и сушили с получением 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновой кислоты (4,5 г, 15,88 ммоль, 99% выход) в виде белого твердого вещества; 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 13,21 (уш. с., 1Н), 8,44-8,54 (м, 2Н), 4,74 (д, J=3,90 Гц, 1Н), 3,97-4,12 (м, 1Н), 3,56 (д, J=3,12 Гц, 1Н), 2,46 (с, 3Н), 2,05-2,16 (м, 1Н), 1,84 (д, J=10,15 Гц, 1Н), 1,65-1,80 (м, 2Н), 1,11-1,36 (м, 4Н); МС (ESI) m/z 284,1 [М+1]+.
C. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновую кислоту (4,5 г, 15,88 ммоль) и HATU (9,06 г, 23,82 ммоль) растворяли в ДМФ (75 мл), оставляли перемешиваться в течение 5 мин при комнатной температуре, а затем добавляли хлорид аммония (4,25 г, 79 ммоль) и ДИЭА (13,87 мл, 79 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешивать при комнатной температуре в течение ночи. После того, как ЖХ-МС показала, что целевой продукт имел доминирующий пик, реакционную смесь разделяли между водой и этилацетатом. Перед сушкой над сульфатом натрия органический слой промывали один раз насыщенным солевым раствором, фильтровали и конденсировали. После сушки получали 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид (4,19 г, 14,84 ммоль, 93% выход) в виде практически белого твердого вещества; МС (ESI) m/z 283,2 [М+1]+.
D. 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид (302 мг, 1,070 ммоль) суспендировали в ДХМ (10 мл) и ацетоне (10 мл). Добавляли mCPBA (479 мг, 2,139 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 90 мин ЖХ-МС показала, что масса целевого продукта имела доминирующий пик. Реакционную смесь гасили, добавляя 10 мл 10% водного раствора тиосульфата натрия. После перемешивания в течение 5 минут реакционную смесь разделяли между этилацетатом и водой. Затем органический слой промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия и насыщенным солевым раствором. Объединенные водные слои три раза промывали этилацетатом, а затем органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и конденсировали. После сушки получали 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид (259 мг, 0,824 ммоль, 77% выход) в виде белого твердого вещества; МС (ESI) m/z 315,2 [М+1]+.
E. (1R,4R)-4-Амино-N-метилциклогексанкарбоксамид. Трет-бутил-(1R,4R)-4-(метилкарбамоил)циклогексилкарбамат (0,411 г, 1,603 ммоль) растворяли в ДХМ (5 мл), обрабатывали ТФУ (5,56 мл, 72,1 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. После этого растворитель удаляли под вакуумом, твердый остаток растворяли в ацетонитриле и помещали на колонку для твердофазной экстракции Phenomenex Strada-X-C и промывали 300 мл ацетонитрила. Целевое соединение высвобождалось из колонки с использованием 2 М аммония в метаноле. Раствор, содержащий целевое соединение, восстанавливали в вакууме с получением (1R,4R)-4-амино-н-метилциклогексанкарбоксамида (0,230 г, 1,475 ммоль, 92% выход); МС (ESI) m/z 157,0 [М+1]+.
F. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-(метилкарбамоил)циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид (0,231 г, 0,736 ммоль), (1R,4R)-4-амино-N-метилциклогексанкарбоксамид (0,230 г, 1,472 ммоль), ДИЭА (0,514 мл, 2,94 ммоль) и ДМСО (4 мл) объединяли и нагревали до температуры 100°С в течение 2 ч. Растворитель упаривали при пониженном давлении, остаток растворяли в минимальном количестве метанола, помещали на колонку с силикагелем и очищали (0-15% метанол, насыщенный аммиаком, в ДХМ) с получением 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-(метилкарбамоил)циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (0,106 г, 0,271 ммоль, 36,9% выход) в виде белого порошка; МС (ESI) m/z 391,2 [М+1]+; 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 9,10 (уш. с., 1Н), 8,33 (с, 1Н), 7,68 (уш. с., 1Н), 6,92-7,29 (м, 3Н), 4,67 (уш. с., 1Н), 3,87 (уш. с., 1Н), 3,41-3,71 (м, 2Н), 2,55 (д, J=4,30 Гц, 3Н), 1,66-2,16 (м, 9Н), 1,00-1,47(м, 8Н).
Пример 5: Гидрохлорид 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-(метиламино)циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида
А. Трет-бутил-(1R,4R)-4-(5-карбамоил-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-2-иламино)циклогексил(метил)карбамата. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид (0,397 г, 1,264 ммоль; синтез описан в настоящем описании), трет-бутил-(1R,4R)-4-аминоциклогексил-(метил)карбамат (0,577 г, 2,53 ммоль), ДИЭА (0,883 мл, 5,05 ммоль) и ДМСО (4 мл) объединяли и нагревали при температуре 100°С в течение 2 ч. Растворитель упаривали при пониженном давлении, остаток растворяли в минимальном количестве метанола, помещали на колонку с силикагелем и очищали (0-15% метанолом, насыщенном аммиаком, в ДХМ) с получением трет-бутил-(1R,4R)-4-(5-карбамоил-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-2-иламино)циклогексил(метил)карбамата (0,210 г, 0,455 ммоль, 36% выход) в виде белого порошка; МС (ESI) m/z 463,3 [М+1]+.
В. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-(метиламино)циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид гидрохлорид. Трет-бутил-(1R,4R)-4-(5-карбамоил-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-2-иламино)-циклогексил(метил)карбамат (0,150 г, 0,324 ммоль) растворяли в ДХМ (2 мл) и по каплям добавляли ТФУ (2 мл, 26,9 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа, а затем концентрировали при пониженном давлении. Твердый остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (5-40% ацетонитрил/вода, 20 мл/мин), получая указанное в заголовке соединение в виде соответствующей ТФУ-соли. Фракции, содержащие целевое соединение, концентрировали при пониженном давлении, твердый остаток растворяли в метаноле и добавляли хлористоводородную кислоту (4н в диоксане; 3 мл). Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении, процедуру повторяли дважды с получением гидрохлорида 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-(метиламино)циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (0,063 г, 0,158 ммоль, 48,7% выход). МС (ESI) m/z 363,5 [М+1]+; 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 9,94 (уш. с., 1Н), 8,83-9,01 (м, 1Н), 8,38-8,49 (м, 2Н), 8,15 (уш. с., 1Н), 7,64 (уш. с., 1Н), 3,96 (уш. с., 1Н), 3,69 (д, J=13,67 Гц, 2Н), 3,49 (д, J=11,32 Гц, 3Н), 2,97 (уш. с., 1Н), 2,52 (уш. с., 2Н), 1,69-2,17 (м, 7Н), 1,09-1,53 (м, 8Н).
Пример 6: 2-(4,4-Дифторциклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид (478 мг, 1,521 ммоль; синтез описанный в настоящем описании), гидрохлорид 4,4-дифторциклогексанамина (522 мг, 3,04 ммоль), ДИЭА (1,062 мл, 6,08 ммоль) и ДМСО (8 мл) объединяли в круглодонной колбе и нагревали при температуре 100°С в течение 1 ч. Реакционную смесь прекращали нагревать и конденсировали в вакууме. Сырое вещество очищали на колонке 100G SNAP Biotage (2-12% метанол, насыщенный аммонием, в ДХМ). Пиковые фракции объединяли и упаривали. Затем сушили в высоком вакууме с получением 2-(4,4-дифторциклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (325 мг, 0,880 ммоль, 58%) в виде слегка желтого порошка; 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,93 (д, J=7,42 Гц, 1Н), 8,36 (с, 1Н), 7,22 (уш. с., 1Н), 2,94-3,05 (м, 1Н), 1,64-2,21 (м, 14Н), 1,36-1,62 (м, 4Н), 0,92-1,33 (м, 3Н); МС (ESI) m/z 370,2 [М+1]+.
Пример 7: 4-((3S,5R)-5-Гидрокситетрагидро-2Н-пиран-3-иламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((3R,5S)-5-гидрокси-тетрагидро-2Н-пиран-3-иламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((3S,5S)-5-гидрокситетрагидро-2Н-пиран-3-иламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((3R,5R)-5-гидрокситетрагидро-2Н-пиран-3-иламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид.
А. 6-Гидрокси-2Н-пиран-3(6Н)-он. Фуран-2-илметанол (17,67 мл, 204 ммоль) растворяли в ДХМ (500 мл) и охлаждали до 0°С, а затем порциями добавляли 3-хлорпероксибензойную кислоту (68,5 г, 306 ммоль). Реакционную смесь медленно нагревали до комнатной температуры в течение 6 ч, все это время из раствора осаждался твердый осадок м-хлорбензойной кислоты. Раствор охлаждали до -78°С в течение 15 мин, и твердые вещества отфильтровывали. Фильтрат конденсировали с получением желтого твердого вещества. Сырое вещество очищали на колонке 340G SNAP Biotage (20-100% этилацетат в гексане). Пиковые фракции объединяли и упаривали с получением 6-гидрокси-2Н-пиран-3(6Н)-она (15,8 г, 138 ммоль, 67,9% выход) в виде бледно-желтого масла; 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 6,94-7,01 (м, 1Н), 6,18 (д, J=10,93 Гц, 1Н), 5,61-5,68 (м, 1Н), 4,56 (с, 1Н), 4,17 (с, 1Н), 3,61 (уш. с., 1Н).
B. 6-(трет-бутилдиметилсилилокси)-2Н-пиран-3(6Н)-она. 6-Гидрокси-2Н-пиран-3(6Н)-он (9 г, 79 ммоль) растворяли в ДХМ (250 мл), помещали в атмосферу азота и охлаждали до -78°С. Затем одной порцией добавляли 2,6-лутидин (13,78 мл, 118 ммоль), далее медленно добавляли трет-бутилдиметилсилилтрифторметансульфонат (21,74 мл, 95 ммоль). Реакционную смесь оставляли медленно нагреваться до 0°С в течение 4 ч. Реакционную смесь гасили, добавляя ~20 мл воды. После гашения раствор стал бледно желтым. После переноса в разразделительную воронку органическую фазу последовательно промывали раствором 10% лимонной кислоты и насыщенным солевым раствором. Затем органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и конденсировали с получением желтого масла. Сырое вещество очищали на колонке 340G SNAP Biotage (0-20% этилацетат в гексане) с получением 6-(трет-бутилдиметилсилилокси)-2Н-пиран-3 (6Н)-она (9,90 г, 43,4 ммоль, 55,0% выход) в виде желтого масла; 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 6,87 (дд, J=10,54, 3,12 Гц, 1Н), 6,08 (д, J=10,15 Гц, 1Н), 5,53 (д, J=3,12 Гц, 1Н), 4,51 (д, J=16,79 Гц, 1Н), 4,08 (д, J=16,79 Гц, 1Н), 0,92 (с, 9Н), 0,17 (с, 6Н).
C. 6-(трет-бутилдиметилсилилокси)-3,6-дигидро-2Н-пиран-3-ол. К охлажденному (-20°С) раствору 6-(трет-бутилдиметилсилилокси)-2Н-пиран-3(6Н)-она (9,9 г, 43,4 ммоль) и церия(III) хлориду гептагидрата (16,15 г, 43,4 ммоль) в метаноле (173 мл) порциями добавляли боргидрид натрия (1,640 г, 43,4 ммоль). При добавлении наблюдалось интенсивное пузырение. Затем смесь перемешивали в течение 30 мин при -20°С, реакционную смесь гасили ацетоном (~20 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Большинство летучих растворителей потом испарялось. Добавляли насыщенный солевой раствор, и взвесь переносили на разделительную воронку. Смесь три раза экстрагировали ДХМ (образовывалась жирная эмульсия). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и конденсировали с получением сырого 6-(трет-бутилдиметилсилилокси)-3,6-дигидро-2Н-пиран-3-ола (5,6 г, 24,31 ммоль, 56,1% выход) в виде желтовато-коричневого масла; 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 5,95 (дд, J=10,15, 2,34 Гц, 1Н), 5,75 (д, J=10,15 Гц, 1Н), 5,25 (с, 1Н), 4,15 (д, J=9,37 Гц, 1Н), 3,72-3,82 (м, 2Н), 1,74 (д, J=8,98 Гц, 1Н), 0,86-0,95 (м, 9Н), 0, 13 (с, 6Н).
D. 6-(трет-бутилдиметилсилилокси)-3,6-дигидро-2Н-пиран-3-илацетат. К раствору 6-(трет-бутилдиметилсилилокси)-3,6-дигидро-2Н-пиран-3-ола (13,3 г, 57,7 ммоль) и ТЭА (16,09 мл, 115 ммоль) в ДХМ (200 мл) добавляли уксусный ангидрид (27,2 мл, 289 ммоль), смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли метанол (~3 мл), и смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре, а затем добавляли воду и переносили на разделительную воронку. Органический слой промывали водой и насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и конденсировали. Сырое вещество очищали на колонке 340G SNAP Biotage (0-50% этилацетат в гексане) с получением 6-(трет-бутилдиметилсилилокси)-3,6-дигидро-2Н-пиран-3-ил ацетата (13,6 г, 49,9 ммоль, 86% выход) в виде бледно-желтого масла; 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 5,84-5,88 (м, 2Н), 5,26-5,28 (м, 1Н), 5,20-5,25 (м, 1Н), 3,84 (дд, J=6,25, 1,95 Гц, 2Н), 2,08 (с, 3Н), 0,91 (с, 9Н), 0,13 (д, J=1,17 Гц, 6Н).
E. 3,6-дигидро-2Н-пиран-3-илацетат. 6-(Трет-бутилдиметилсилилокси)-3,6-дигидро-2Н-пиран-3-илацетат (13,6 г, 49,9 ммоль) растворяли в ДХМ (250 мл), помещали в атмосферу азота и охлаждали до -30°С (сухой лед/ацетон, до достижения нужной температуры). Медленно с помощью шприца добавляют триэтилсилан (15,95 мл, 100 ммоль), а затем по каплям добавляли эфират трехфтористого бора (7,59 мл, 59,9 ммоль). Реакцию поддерживали в атмосфере азота и медленно нагревали. Через 1 ч реакционную смесь гасили добавлением насыщенного бикарбоната натрия. После переноса в разделительную воронку органический слой промывали водой и насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и конденсировали. Сырое вещество очищали на колонке 340G SNAP Biotage (0-80% этилацетат в гексане). Испарение чистых фракций давало 3,6-дигидро-2Н-пиран-3-ил ацетат (5,5 г, 38,7 ммоль, 77% выход) в виде бесцветного масла; 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 5,09 (дтт, J=5,73, 2,21, 2,21, 1,17, 1,17 Гц, 1Н), 4,19-4,28 (м, 1Н), 4,04-4,15 (м, 1Н), 3,89-3,98 (м, 1Н), 3,76-3,84 (м, 1Н), 2,10 (с, 3Н).
F. 3,6-Дигидро-2Н-пиран-3-ол. К раствору 3,6-дигидро-2Н-пиран-3-ил ацетата (5,5 г, 38,7 ммоль) в метаноле (130 мл) добавляли 10 капель 25% метоксида натрия в метаноле. Раствор оставляли перемешиваться при комнатной температуре. Через 30 мин ТСХ (10% этилацетат в гексане; окрашивание перманганатом) показала примерное соотношение исходного материала к продукту как 1:1. Добавляли еще 10 капель 25% метоксида натрия в метаноле. Через 30 мин ТСХ показала соотношение продукта к исходному материалу как ~3:1. Дополнительно добавляли 10 капель 25% метоксида натрия в метаноле. Еще через 30 минут ТСХ показала полное преобразование в продукт. Добавляли Amberlist 15 и перемешивание продолжали в течение 15 мин, а затем отфильтровывали. Растворитель упаривали с получением 3,6-дигидро-2Н-пиран-3-ола (3,8 г, 38,0 ммоль, 98% выход) в виде бесцветного масла; 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 5,90-6,02 (м, 2Н), 4,19 (дт, J=2,83, 1,51 Гц, 1Н), 4,15 (дт, J=2,83, 1,51 Гц, 1Н), 4,09 (кв, J=1,95 Гц, 1Н), 4,05 (кв, J=1,95 Гц, 1Н), 3,96-4,00 (м, 1Н), 1,92 (уш. с., 1Н).
G. 2Н-Пиран-3(6Н)-он. 3,6-Дигидро-2Н-пиран-3-ол (2,44 г, 24, 37 ммоль) растворяли в ДХМ (100 мл) и охлаждали до 0°С, а затем медленно добавляли периодинан Десса-Мартина (10,34 г, 24,37 ммоль). Реакционную смесь оставляли нагреваться при комнатной температуре в течение 5 ч. Затем реакционную смесь фильтровали через целит. После того как фильтрат концентрировали, сырое вещество очищали на колонке 100G SNAP Biotage (0-80% этилацетат в гексане) с получением 2Н-пиран-3(6Н)-она (2,33 г, 23,75 ммоль, 97% выход) в виде бесцветного масла; 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 7,07-7,17 (м, 1Н), 6,15-6,25 (м, 1Н), 4,39 (т, J=2,54 Гц, 2Н), 4,19 (с, 2Н).
H. Бензил 5-оксотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат. 2Н-пиран-3(6Н)-он (2,33 г, 23,75 ммоль), бензилкарбамат (4,31 г, 28,5 ммоль) и ДХМ (2,375 мл) добавляли в маленькую пробирку и энергично перемешивали. В густой сироп добавляли пентагидрат нитрата висмута(III) (1,728 г, 3,56 ммоль). Пробирку закрывали, и реакционную смесь энергично перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли ДХМ и фильтровали через слой целита. Фильтрат концентрировали и очищали на колонке 100G SNAP Biotage (10-100% этилацетат в гексане) с получением бензил 5-оксотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (4,35 г, 17,45 ммоль, 73,5% выход) в виде бледно-желтого масла; 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 7,28-7,41 (м, 5Н), 5,20-5,28 (м, 1Н), 5,05-5,15 (м, 2Н), 4,24-4,35 (м, 1Н), 4,01-4,06 (м, 1Н), 3,89-3,95 (м, 1Н), 3,80-3,87 (м, 1Н), 2,73 (д, J=5,47 Гц, 1Н), 2,64-2,71 (м, 1Н).
I. Бензил 5-гидрокситетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат. Бензил 5-оксотетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат (4,35 г, 17,45 ммоль) и церия (III) хлорид гептагидрат (6,50 г, 17,45 ммоль) растворяли в метаноле (100 мл), предварительно охладив до 0°С. Затем медленно добавляли боргидрид натрия (0,660 г, 17,45 ммоль). Наблюдалось интенсивное пузырение. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при 0°С в течение 30 мин, а затем гасили, добавляя ацетон (~3 мл), и перемешивали при комнатной температуре в течение дополнительных 30 мин. Затем реакционную смесь упаривали досуха. Вещество разделяли между ДХМ и водой, водный слой промывали ДХМ (5х). Органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и конденсировали с получением неочищенного бензил 5-гидрокситетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамата (2,5 г, 9,95 ммоль, 57,0% выход) в виде белого твердого вещества; 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 7,28-7,39 (м, 5Н), 5,90-6,06 (м, 1Н), 5,10 (д, J=4,29 Гц, 2Н), 3,59-3,97 (м, 6Н), 1,77-2,06 (м, 3Н); МС (ESI) m/z 252,1 [М+1]+.
J. 5-Аминотетрагидро-2Н-пиран-3-ол. Бензил 5-гидрокситетрагидро-2Н-пиран-3-илкарбамат (2,5 г, 9,95 ммоль) растворяли в ДХМ (20 мл) и метаноле (20,00 мл), а затем помещали катализатор (10% палладий на угле) и закрывали тройником. Колбу разряжали и продували водородом (3х), поддерживая атмосферу водорода при помощи баллона. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Как только вещество полностью преобразовывалось в продукт (определяли при помощи ЖХ-МС), реакционную смесь фильтровали через пад из целита, тщательно промывали ДХМ и метанолом. Фильтрат концентрировали с получением сырого 5-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-ола (1,13 г, 9,65 ммоль, 97% выход) в виде коричневого полимера. 1Н-ЯМР (400 МГц, DMCO-d6) δ ч./млн 4,28-4,66 (м, 2Н), 3,66 (ддд, J=10,93, 3,90, 1,56 Гц, 2Н), 3,44-3,55 (м, 1Н), 2,89-3,01 (м, 2Н), 2,81 (с, 1Н), 2,01-2,13 (м, 1Н), 1,22 (д, J=12,10 Гц, 1Н).
К. Этил-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат. (1R,4R)-4-метоксициклогексанамин (4,39 г, 34,0 ммоль), этил-2-хлор-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат (3,95 г, 16,98 ммоль), ДИЭА (5,93 мл, 34,0 ммоль) и 1,4-диоксан (100 мл) объединяли и нагревали при температуре 80°С в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали и конденсировали. Сырое вещество очищали на Biotage (20-80% этилацетат в гексане) с получением этил-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (3,1 г, 9,53 ммоль, 56% выход) в виде бледно-желтого твердого вещества; 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ ч./млн 8,60 (с, 0,35Н), 8,54 (с, 0,65Н), 8,05 (д, J=7,4 Гц, 0,64Н), 7,87 (д, J=8,2 Гц, 0,36Н), 4,22 (кв, J=7,0 Гц, 2Н), 3,69-3,90 (м, 1Н), 3,23 (с, 3Н), 3,00-3,20 (м, 1Н), 2,40 (с, 2Н), 2,38 (с, 1Н), 1,79-2,12 (м, 4Н), 1,09-1,44 ч./млн (м, 7Н); МС (ESI) m/z 326,3 [М+1]+.
L. 2-((1R,4R)-4-Метоксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоновая кислота. Этил-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат (3,1 г, 9,53 ммоль) растворяли в этаноле (60 мл), а затем добавляли водный раствор гидроксида натрия (2 М, 23,81 мл, 47,62 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре. Через 30 мин ЖХ-МС показала в основном массу целевого продукта. Реакционную смесь нейтрализовали, добавляя насыщенный водный раствор лимонной кислоты. Полученный осадок фильтровали и сушили с получением 2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоновой кислоты (2,76 г, 9,28 ммоль, 97% выход) в виде белого твердого вещества; 1Н-ЯМР (DMCO-d6, 400 МГц) δ ч./млн 12,59 (с, 1Н), 8,57 (с, 0,38Н), 8,50 (с, 0,62Н), 7,94 (д, J=7,4 Гц, 0,62Н), 7,77 (д, J=7,8 Гц, 0,38Н), 3,70-3,90 (м, 1Н), 3,23 (с, 3Н), 3,02-3,18 (м, 1Н), 2,37 (с, 2Н), 2,36 (с, 1Н), 1,83-2,09 (м, 4Н), 1,11-1,46 ч./млн (м, 4Н); МС (ESI) m/z 298,2 [М+1]+.
М. 2-((1R,4R)-4-Метоксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. 2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоновую кислоту (2,66 г, 8,94 ммоль) и HATU (5,10 г, 13,42 ммоль) растворяли в ДМФ (35 мл) и оставляли перемешиваться в течение 5 мин при комнатной температуре, а затем добавляли хлорид аммония (2,392 г, 44,7 ммоль) и ДИЭА (7,81 мл, 44,7 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 30 мин. ЖХ-МС показала массу целевого продукта как доминирующий, реакционную смесь разделяли между водой и этилацетатом. Органический слой промывали один раз насыщенным солевым раствором, а затем сушили над сульфатом натрия, фильтровали и конденсировали. Затем сушили с получением 2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (2,54 г, 8,57 ммоль, 96% выход) в виде белого твердого вещества; 1Н-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ ч./млн 8,41 (с, 1Н), 7,63 (д, J=7,0 Гц, 0,76Н), 7,45 (д, J=7,0 Гц, 0,24Н), 7,08 (уш. с., 1Н), 3,66-3,85 (м, 1Н), 3,23 (с, 3Н), 3,11 (уш. с., 1Н), 2,32 (с, 3Н), 1,81-2,11 (м, 4Н), 1,10-1,44 ч./млн (м, 4Н); МС (ESI) m/z 283,2 [М+1]+.
N. 2-((1R,4R)-4-Метоксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамид. 2-((1R,4R)-4-Метоксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид (3 г, 10,12 ммоль) растворяли в NMP (30 мл). Затем при 0°С порциями добавляли mCPBA (2,268 г, 10,12 ммоль), и реакционную смесь перемешивали, медленно повышая температуру реакции до комнатной температуры. Через 30 мин реакционную смесь разбавляли водой (200 мл), перемешивали в течение 10 мин, и полученное твердое вещество удаляли путем фильтрации. Фильтрат концентрировали в вакууме с получением 2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида в виде прозрачного, светло-желтого раствора в NMP (~25 мл). Этот сырой продукт использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 313,3 [М+1]+.
О. 4-((3S,5R)-5-Гидрокситетрагидро-2Н-пиран-3-иламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((3R,5S)-5-гидрокситетрагидро-2Н-пиран-3-иламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((3S,5S)-5-гидрокситетрагидро-2Н-пиран-3-иламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((3R,5R)-5-гидрокситетрагидро-2Н-пиран-3-иламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К 2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамиду (3,1 г, 9,92 ммоль) в NMP (25 мл)) добавляли сырой 5-аминотетрагидро-2Н-пиран-3-ол (1,15 г, 9,82 ммоль) в качестве раствора в NMP (20 мл). К суспензии добавляли ДИЭА (8,57 мл, 49,1 ммоль), и реакционную смесь нагревали до 100°С в течение ночи. Большую часть NMP удаляли упариванием при 70°С, твердый остаток разбавляли ДХМ и очищали на колонке 340G SNAP Biotage (0-15% метанола в ДХМ более 2000 мл). Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением 2,8 г (78%) вещества, который имел ~85% чистоту. Вещество растворяли в ДХМ и повторно очищали на колонке 340G SNAP Biotage (2-15% метанол, насыщенный аммиаком, в дихлорметане). Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением смеси из четырех продуктов (двух диастереомеров и соответствующих им энантиомеров; 1,95 г), >99% чистоты. Сырое вещество выделяли с помощью хиральной SFC, используя колонку AD-H с получением 4, обозначенных ПИК 1-ПИК 4, где ПИК 1 был первым элюированным соединением, а ПИК 4 был последним элюированным соединением.
ПИК 1: 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,41 (с, 1Н), 4,38 (уш. с., 1Н), 3,53-3,79 (м, 4Н), 3,24 (с, 3Н), 2,87-2,98 (м, 3Н), 1,89-2,07 (м, 4Н), 1,65-1,78 (м, 1Н), 1,19-1,43 (м, 4Н); МС (ESI) m/z 366,3 [М+1]+.
ПИК 2: 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,86-9,01 (м, 1Н), 8.35 (уш. с., 1Н), 6,91-7,18 (м, 1Н), 4,91-4,99 (м, 1Н), 3,49-4,13 (м, 4Н), 3,23 (с, 3Н), 2,85-3,15 (м, 3Н), 1,79-2,28 (м, 5Н), 1,08-1,41 (м, 5Н), 1,04 (д, J=6,25 Гц, 1Н); МС (ESI) m/z 366,3 [М+1]+.
ПИК 3: 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,86-9,02 (м, 1Н), 8,32-8,40 (м, 1Н), 6,88-7,20 (м, 1Н), 4,91-5,00 (м, 1Н), 3,49-4,15 (м, 5Н), 3,22 (с, 3Н), 2,79-3,14 (м, 3Н), 1,82 (с, 5Н), 1,12 (т, J=7,22 Гц, 6Н); МС (ESI) m/z 366,3 [М+1]+.
ПИК 4: 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,99-9,24 (м, 1Н), 8.36 (уш. с., 1Н), 6,79-7,20 (м, 2Н), 4,72-4,94 (м, 1Н), 4,17-4,46 (м, 1Н), 3,43-3,77 (м, 4Н), 3,23 (с, 4Н), 3,03-3,13 (м, 1Н), 2,73 (с, 1Н), 1,98 (уш. с., 6Н), 1,03-1,35 (м, 5Н); МС (ESI) m/z 366,3 [М+1]+.
Пример 8: 4-(3-Гидрокси-3-метилбутиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
A. 2-((1R,4R)-4-Метоксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)-пиримидин-5-карбоксамид. К перемешанному бесцветному раствору 2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (0,200 г, 0,675 ммоль; синтез описан в настоящем описании) в NMP (2 мл) порциями добавляли mCPBA (0,151 г, 0,675 ммоль) при 0°С. Затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч до завершения реакции по показаниям ЖХ-МС. Реакционную смесь разбавляли водой (20 мл) и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением 2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида (0,211 г, 100% выход) в виде белого липкого твердого вещества, которое использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 313,1 [М+1]+.
B. 4-(3-Гидрокси-3-метилбутиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К раствору 2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида (0,211 г, 0,675 ммоль) и ДИЭА (0,236 мл, 1,351 ммоль) в NMP (2 мл) добавляли 4-амино-2-метилбутан-2-ол (0,105 г, 1,013 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при 70°С. После завершения реакции по показаниям ЖХ-МС и ТСХ реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0%-15% метанола, насыщенного аммиаком в ДХМ). Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением 4-(3-гидрокси-3-метилбутиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (0,143 г, 60,2% выход, 95,8% чистый) в виде светло-желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,81-9,03 (м, 1Н), 8,32 (с, 1Н), 6,75-7,06 (м, 2Н), 4,28 (с, 1Н), 3,63-3,77 (м, 1Н), 3,39-3,52 (м, 2Н), 3,22 (с, 3Н), 3,02-3,11 (м, 1Н), 1,81-2,06 (м, 4Н), 1,57-1,67 (м, 2Н), 1,21-1,34 (м, 2Н), 1,16 (уш. с., 1Н), 1,13 (с, 8Н). МС (ESI) m/z 352,4 [М+1]+.
Пример 9: 4-((1R,2S)-2-(Гидроксиметил)циклопентиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((1S,2R)-2-(гидроксиметил)циклопентиламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
A. Этил-4-(цис-2-(гидроксиметил)циклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат. К перемешанному раствору этил-4-хлор-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (5,00 г, 21,49 ммоль) и цис-(2-аминоциклопентил)метанола (2,60 г, 22,56 ммоль) в этаноле (85 мл) добавляли ДИЭА (5,61 мл, 32,2 ммоль) и нагревали до 60°С в течение 2,5 ч. После завершения реакции по показаниям ЖХ-МС и ТСХ реакционную смесь охлаждали и концентрировали, затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-80% этилацетат/гексан). Фракции целевого продукта объединяли и концентрировали с получением этил-4-(цис-2-(гидроксиметил)циклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (6,4 г, 96% выход) в виде белого твердого вещества. МС (ESI) m/z 312,4 [М+1]+.
B. 4-(Цис-2-(гидроксиметил)циклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновая кислота. К перемешанному раствору этил-4-(цис-2-(гидроксилметил)циклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (6,4 г, 20,55 ммоль) в этаноле (100 мл) добавляли водный раствор гидроксида натрия (1 М, 51,4 мл, 51,4 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После завершения реакции по показаниям ЖХ-МС и ТСХ реакционную смесь концентрировали, разбавляли водой (100 мл), затем нейтрализовали при перемешивании с водным раствором лимонной кислоты (2 М, 51,4 мл, 103 ммоль). Полученный осадок фильтровали, промывали водой (2×50 мл) и сушили с получением 4-(цис-2-(гидроксиметил)циклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновой кислоты (5,6 г, 96% выход) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, DMCO-d6) δ ч./млн 13,17 (уш. с., 1Н), 8,71 (д, J=7,42 Гц, 1Н), 8,50 (с, 1Н), 4,49-4,60 (м, 2Н), 3,40-3,46 (м, 1Н), 3,32-3,39 (м, 2Н), 2,47 (с, 3Н), 2,22 (скст., J=6,87 Гц, 1Н), 1,95-2,04 (м, 1Н), 1,78 (квд, J=4,49, 8,00 Гц, 1Н), 1,66-1,72 (м, 1Н), 1,49-1,61 (м, 2Н). МС (ESI) m/z 284,3 [М+1]+.
С. 4-(Цис-2-(гидроксиметил)циклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. Белую суспензию 4-(цис-2-(гидроксиметил)циклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновой кислоты (5,6 г, 19,76 ммоль) и HATU (11,27 г, 29,60 ммоль) растворяли в ДМФ (79 мл) и перемешивали в течение 5 мин при комнатной температуре, а затем добавляли хлорид аммония (5,29 г, 99 ммоль) и ДИЭА (17,26 мл, 99 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем разбавляли водой (200 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×200 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (100 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаточное количество ДМФ удаляли, суспендируя белую суспензию в 200 мл воды и 200 мл гексана. Двухфазную смесь энергично перемешивали в течение 30 мин, фильтровали и промывали гексаном с получением 4-(цис-2-(гидроксилметил)циклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (4,50 г, 81% выход) в виде белого твердого вещества. МС (ESI) m/z 283,4 [М+1]+.
D. 4-(Цис-2-(гидроксиметил)циклопентиламино)-2-(метилсульфонил)-пиримидин-5-карбоксамид. К перемешанной суспензии 4-(цис-2-(гидроксиметил)-циклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (3,5 г, 12,40 ммоль) в ДХМ (62 мл) и ацетона (62 мл) добавляли mCPBA (5,56 г, 24,79 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Сырую реакционную смесь гасили, добавляя 75 мл 10% водного раствора тиосульфата натрия, перемешивали в течение 5 мин, а затем испаряли большую часть летучих растворителей. Вещество разделяли между этилацетатом (200 мл) и водой (200 мл), и объединенные органические слои промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия, а затем насыщенным солевым раствором. Объединенные водные слои затем промывали этилацетатом (3х), органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и конденсировали. После сушки в высоком вакууме получали 4-(цис-2-(гидроксиметил)циклопентиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид (1,2 г, 3,82 ммоль, 30,8% выход) в виде белоготвердого вещества. МС (ESI) m/z 315,2 [М+1]+.
Е. 4-((1R,2S)-2-(Гидроксиметил)циклопентиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((1S,2R)-2-(гидроксиметил)циклопентиламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешанной суспензии 4-(цис-2-(гидроксиметил)циклопентиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (1,2 г, 3,82 ммоль) и гидрохлорида (1R,4R)-4-метоксициклогексанамина (1,90 г, 11,46 ммоль) в диоксане (40 мл) добавляли ДИЭА (4 мл, 22,92 ммоль) и полученный раствор перемешивали при 100°С в течение 48 ч. Сырую реакционную смесь концентрировали, а затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0%-15% метанол, насыщенный аммиаком, в ДХМ). Фракции продукта были загрязнены, и целевой продукт осаждали и фильтровали из объединенных фракций с использованием ДХМ, метанола и воды с получением соединения, указанного в заголовке, в виде смеси двух энантиомеров (0,420 г, 30,3% выход) в виде белого твердого вещества. Сырое вещество разделяли на хиральной SFC, используя колонку AD-H, с получением 2 соединений, обозначенных как ПИК 1 и ПИК 2, где ПИК 1 был первым элюированным соединением, а ПИК 2 - вторым элюированным соединением.
ПИК 1. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 9,04-9,21 (м, 1Н), 8,31-8,39 (м, 1Н), 6,87-7,12 (м, 2Н), 4,33-4,46 (м, 2Н), 3,57-3,80 (м, 1Н), 3,35-3,44 (м, 1Н), 3,25-3,31 (м, 1Н), 3,23 (с, 3Н), 3,08 (т, J=8,20 Гц, 1Н), 2,09-2,23 (м, 1Н), 2,00 (д, J=11,71 Гц, 2Н), 1,80-1,94 (м, 3Н), 1,63-1,78 (м, 2Н), 1,50-1,61 (м, 2Н), 1,44 (уш. с., 1Н), 1,09-1,33 (м, 5Н); МС (ESI) m/z 364,5 [M+1]+.
ПИК 2. 1Н-ЯМР (400 МГц, DMCO-d6) δ ч./млн 9,03-9,18 (м, 1Н), 8,34 (уш. с., 1Н), 6,87-7,11 (м, 2Н), 4,32-4,48 (м, 2Н), 3,58-3,77 (м, 1Н), 3,35-3,45 (м, 1Н), 3,28 (дд, J=7,03, 10,15 Гц, 1Н), 3,22 (с, 3Н), 3,03-3,13 (м, 1Н), 2,09-2,25 (м, 1Н), 2,00 (д, J=8,59 Гц, 2Н), 1,81-1,95 (м, 3Н), 1,63-1,77 (м, 2Н), 1,51-1,60 (м, 2Н), 1,37-1,47 (м, 1Н), 1,09-1,33 (м, 5Н); МС (ESI) m/z 364,5 [М+1]+.
Пример 10: 4-((1R,3R)-3-Гидрокси-3-метилциклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((1R,3S)-3-гидрокси-3-метилциклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
A. (1S,3R)-3-(Дибензиламино)циклогексанол. К суспензии (1S,3R)-3-аминоциклогексанола (5 г, 43,4 ммоль; полученной как описано в Tetrahedron: Asymmetry 15: 2051-2056 (2004)) и бикарбонате натрия (12,03 г, 143 ммоль) в этаноле (100 мл) добавляли (хлорметил)бензол (15,01 мл, 130 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали до 75°С в течение ночи. После завершения реакции по показаниям ЖХ-МС и ТСХ реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали. Затем осадок растворяли в ДХМ (250 мл) и промывали водным раствором гидроксида натрия (1 н, 2×100 мл) и насыщенным солевым раствором (1×100 мл). Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом магния, концентрировали и очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0%-80% этилацетат в гексане) с выходом (1S,3R)-3-(дибензиламино)циклогексанола (11,70 г, 91%) в виде густого желтого масла. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 7,26-7,37 (м, 8Н), 7,17-7,22 (м, 2Н), 4,56 (д, J=4,30 Гц, 1Н), 3,57 (с, 4Н), 3,16-3,26 (м, 1Н), 2,41 (тт, J=3,17, 11,86 Гц, 1Н), 1,99-2,06 (м, 1Н), 1,72 (д, J=8,20 Гц, 2Н), 1,63-1,69 (м, 1Н), 1,18-1,28 (м, 2Н), 0,98 (т, 2Н); МС (ESI) m/z 296,4 [М+1]+.
В. (R)-3-(Дибензиламино)циклогексанон. Оксалил хлорид (2,70 мл, 30,9 ммоль) растворяли в сухом ДХМ (150 мл) и охлаждали до -78°С. В реакционную смесь по каплям добавляли ДМСО (4,78 мл, 67,3 ммоль) в сухом ДХМ (20 мл), и реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин при -78°С. Затем по каплям добавляли (1S,3R)-3-(дибензиламино)циклогексанол (8,287 г, 28,1 ммоль) в сухом ДХМ (100 мл), используя дополнительную воронку, и реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 15 мин. Затем добавляли ТЭА (19,55 мл, 140 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 1 ч. Баню из сухого льда удаляли, и реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь промывали насыщенным солевым раствором (100 мл), органический слой отделяли, сушили над сульфатом магния и концентрировали. При медленном добавлении диэтилового эфира к остатку примеси осаждались, и их удаляли фильтрацией. Добавление диэтилового эфира к фильтрату давало (R)-3-(дибензиламино)циклогексанон (6,05 г, 74%) в виде белого твердого вещества, которое собирали путем фильтрации и сушили. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 7,26-7,39 (м, 8Н), 7,17-7,25 (м, 2Н), 3,56-3,70 (м, 4Н), 2,71-2,81 (м, 1Н), 2,60-2,69 (м, 1Н), 2,25-2,42 (м, 2Н), 2,04-2,11 (м, 1Н), 1,88-1,99 (м, 2Н), 1,69-1,82 (м, 1Н), 1,18-1,33 (м, 1Н); МС (ESI) m/z 294,4 [М+1]+.
С. (3R)-3-(дибензиламино)-1-метилциклогексанол. К чистому бесцветному раствору (R)-3-(дибензиламино)циклогексанона (5,697 г, 19,42 ммоль) в сухом диэтиловым эфире (300 мл) осторожно по каплям добавляли раствор 3 М бромида метилмагния (8,09 мл, 24,27 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 15 мин и ледяную баню затем убирали. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После завершения реакции по показаниям ЖХ-МС и ТСХ мутный раствор осторожно выливали в насыщенный водный раствор хлорида аммония (250 мл). Слой эфира отделяли, и водный слой повторно экстрагировали эфиром (250 мл). Объединенные эфирные слои сушили над сульфатом магния концентрировали и очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0%-80% этилацетат в гексане) с выходом двух диастереомерных изомеров (3R)-3-(дибензиламино)-1-метилциклогексанола (изомер 1 и изомер 2). Изомер 1 (2,704 г, 45%) был получен в виде белого твердого вещества, а изомер 2 (1,866 г, 31%) в виде бесцветного масла, который по прежнему содержал небольшое количество примесей. Изомер 2 использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Изомер 1: 1Н-ЯМР (400 МГц, DMCO-d6) δ ч./млн 7,25-7,36 (м, 8Н), 7,15-7,21 (м, 2Н), 3,85 (с, 1Н), 3,55 (с, 4Н), 2,86 (тт, J=3,37, 12,06 Гц, 1Н), 1,70-1,81 (м, 2Н), 1,38-1,49 (м, 3Н), 1,32 (т, J=12,30 Гц, 1Н), 1,15-1,27 (м, 2Н), 1,12 (с, 3Н); МС (ESI) m/z 310,4 [М+1]+.
Изомер 2: МС (ESI) m/z 310,4 [М+1]+.
D. (3R)-3-Амино-1-метилциклогексанол. Раствор изомера 1 (2,704 г, 8,74 ммоль) в этаноле (50 мл) обрабатывали гидроксидом палладия на угле и перемешивали в баллоне, наполненном газом водородом в течение ночи. После завершения реакции по данным ЖХ-МС и ТСХ реакционную смесь фильтровали через пад из целита, и фильтрат концентрировали с выходом одного диастереомерного изомера (3R)-3-амино-1-метилциклогексанола (изомер 3, 0,856 г, 76%) в виде густого желтого масла. Изомер 3: 1Н-ЯМР (400 МГц, DMCO-d6) δ ч./млн 3,91 (уш. с., 1Н), 2,73-2,84 (м, 1Н), 1,61-1,72 (м, 2Н), 1,54 (тт, J=3,66, 13,13 Гц, 1Н), 1,34-1,47 (м, 2Н), 1,01-1,13 (м, 4Н), 0,86-0,93 (м, 1Н), 0,74-0,85 (м, 1Н); МС (ESI) m/z 130,2 [М+1]+.
Ту же процедуру, как описано выше, используя изомер 2 (1,823 г, 5,89 ммоль) в этаноле (25 мл), использовали для получения другого диастереомерного изомера (3R)-3-амино-1-метилциклогексанола (изомер 4, 0,162 г, 21%) содержащего небольшое количество примесей. Изомер 4 использовали без дополнительной очистки в следующей стадии.
E. 2-((1R,4R)-4-Метоксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешанному бесцветному раствору 2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (0,250 г, 0,843 ммоль; синтез описан в настоящем описании) в NMP (2 мл) порционно добавляли mCPBA (0,189 г, 0,843 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч до завершения реакции по данным ЖХ-МС. Реакционную смесь разбавляли водой (20 мл) и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением 2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида (0,263 г, 100% выход) в виде белого липкого твердого вещества, которое использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 313,1 [М+1]+.
F. 4-((1R,3R)-3-Гидрокси-3-метилциклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((1R,3S)-3-Гидрокси-3-метилциклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К раствору 2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида (0,263 г, 0,842 ммоль) и ДИЭА (0,294 мл, 1,684 ммоль) в NMP (3 мл) добавляли изомер 3 (0,163 г, 1,263 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при 70°С. После завершения реакции по данным ЖХ-МС и ТСХ реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0%-20% метанол, насыщенный аммиаком, в ДХМ). Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением одного диастереомерного изомера 4-((1R)-3-гидрокси-3-метилциклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (изомер 5, 0,265 г, 83% выход) в виде белого твердого вещества. Изомер 5: 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,79 (д, J=7,42 Гц, 1Н), 8,32 (с, 1Н), 6,76-7,05 (м, 2Н), 4,12-4,32 (м, 1Н), 4,07 (с, 1Н), 3,57-3,82 (м, 1Н), 3,23 (с, 3Н), 3,04-3,16 (м, 1Н), 1,81-2,05 (м, 6Н), 1,60-1,74 (м, 2Н), 1,42-1,54 (м, 2Н), 1,15-1,35 (м, 6Н), 1,12 (с, 4Н); МС (ESI) m/z 378,5 [М+1]+.
Ту же процедуру, как описано выше, с использованием изомера 4 (0,163 г, 1,263 ммоль), 2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида (0,263 г, 0,842 ммоль) и ДИЭА (0,294 мл, 1,684 ммоль) в NMP (3 мл), использовали для получения другого диастереомерного изомера 4-((1R)-3-гидрокси-3-метилциклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (изомер 6, 0,043 г, 14% выход) в виде белого твердого вещества. Изомер 6: 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,99 (д, J=4,69 Гц, 1Н), 8,32 (с, 1Н), 6,69-7,08 (м, 2Н), 4,45 (с, 1Н), 3,95-4,13 (м, 1Н), 3,59-3,71 (м, 1Н), 3,22 (с, 3Н), 3,04-3,16 (м, 1Н), 1,86-2,05 (м, 5Н), 1,62-1,83 (м, 2Н), 1,43-1,57 (м, 1Н), 1,23-1,40 (м, 5Н), 1,09-1,21 (м, 7Н); МС (ESI) m/z 378,5 [М+1]+.
Стереохимию отдельных изомеров можно было определить после повторения синтеза, используя (1S,3R)-3-амино-1-метилциклогексанол (полученный, как описано в настоящем описании), который давал изомер 6, а именно 4-((1R,3S)-3-гидрокси-3-метилциклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. Поэтому изомер 5 являлся 4-((1R,3R)-3-гидрокси-3-метилциклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамидом.
Пример 11: 2-((1R,4R)-4-Ацетамидоциклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
A. Трет-бутил-(1R,4R)-4-ацетамидоциклогексилкарбамат. К перемешанному раствору трет-бутил-(1R,4R)-4-аминоциклогексилкарбамата (1,0 г, 4,67 ммоль) в этилацетате (30 мл) одной порцией добавляли уксусный ангидрид (0,485 мл, 5,13 ммоль). Полученную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи при комнатной температуре. К смеси добавляли дополнительную порцию уксусного ангидрида (0,162 мл, 1,71 ммоль), и смесь продолжали перемешивать в течение еще одного часа при комнатной температуре. Реакционную смесь затем разбавляли дополнительной порцией этилацетата (50 мл) и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (50 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). Водные слои объединяли и экстрагировали 50 мл этилацетата. Объединенные этилацетатные слои сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением трет-бутил-(1R,4R)-4-ацетамидоциклогексилкарбамата (1,04 г, 4,06 ммоль, 87% выход) в виде твердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 7,66-7,74 (м, 1Н), 6,67-6,77 (м, 1Н), 3,40 (д, J=7,42 Гц, 1Н), 3,11-3,22 (м, 1Н), 1,65-1,82 (м, 7Н), 1,37 (с, 9Н), 1,16 (д, J=8,20 Гц, 4Н). МС (ESI) m/z 201,2 [M-tBu]+.
B. N-((1R,4R)-4-Аминоциклогексил)ацетамид 2,2,2-трифторацетат. К перемешанному раствору трет-бутил-(1R,4R)-4-ацетамидоциклогексилкарбамата (1,04 г, 4,06 ммоль) в ДХМ (25 мл) одной порцией добавляли ТФУ (25 мл). Полученную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 90 мин. Реакционную смесь концентрировали досуха. Полученное масло растирали в порошок с диэтиловым эфиром с получением твердых веществ, которые фильтровали, промывали дополнительной порцией диэтилового эфира и затем сушили в вакууме с получением N-((1R,4R)-4-аминоциклогексил)ацетамид 2,2,2-трифторацетата (1,07 г, 3,96 ммоль, 98% выход), который использовали без дополнительной очистки. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 7,82 (уш. с., 3Н), 3,42 (ддд, J=15,42, 7,61, 3,90 Гц, 1Н), 2,89-3,04 (м, 1Н), 1,87-1,95 (м, 2Н), 1,78-1,85 (м, 2Н), 1,77 (с, 3Н), 1,29-1,42 (м, 2Н), 1,11-1,25 (м, 2Н). МС (ESI) m/z 157,0 [М+1]+.
С. 2-((1R,4R)-4-ацетамидоциклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешанному раствору 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (190 мг, 0,604 ммоль; синтез описан в настоящем описании) и N-((1R,4R)-4-аминоциклогексил)-ацетамид 2,2,2-трифторацетата (245 мг, 0,907 ммоль) в ДМСО (3 мл) добавляли ДИЭА (0,317 мл, 1,813 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 100°С в течение ночи. Сырую реакционную смесь концентрировали, а затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-15% метанол в ДХМ). Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением 2-((1R,4R)-4-ацетамидоциклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (102 мг, 0,261 ммоль, 43,2% выход) в виде твердого вещества. 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,29 (с, 1Н), 7,69 (д, J=7,81 Гц, 1Н), 4,60 (уш. с., 1Н), 3,36-3,62 (м, 2Н), 2,00-2,17 (м, 1Н), 1,60-1,97 (м, 10Н), 0,93-1,35 (м, 10Н). МС (ESI) m/z 391,2 [М+1]+.
Пример 12А: 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((1R,3R)-3-гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((1S,3R)-3-гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((1S,3S)-3-гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. Трет-бутил-3-оксоциклогептилкарбамат. К перемешанной смеси циклогепт-2-енона (26,96 г, 245,0 ммоль) и трет-бутилкарбамата (28,7 г, 245 ммоль) в ДХМ (245 мл) добавляли висмута нитрат пентагидрат (22,79 г, 47,0 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (500 мл) и водой (300 мл), и двухфазную смесь фильтровали через пад из целита. Пад из целита тщательно промывали этилацетатом и водой, и слои фильтрата разделяли. Органический слой концентрировали до масла, которое очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-40% этилацетат в гексане). Фракции, содержащие продукт, концентрировали с получением соединения, указанного в заголовке (31,09 г, 137 ммоль, 55,9% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 6,92 (д, J=7,03 Гц, 1 Н), 3,60 (д, J=8,59 Гц, 1Н), 2,55-2,69 (м, 1Н), 2,26-2,45 (м, 2Н), 1,69-1,93 (м, 3Н), 1,44-1,61 (м, 2Н), 1,37 (д, J=5,08 Гц, 11Н). МС (ESI) m/z 228,5 [М+Н]+.
В. трет-бутил-(1R,3S)-3-гидроксициклогептилкарбамат, трет-бутил-(1R,3R)-3-гидроксициклогептилкарбамат, трет-бутил-(1S,3S)-3-гидроксициклогептилкарбамат, трет-бутил-(1S,3R)-3-гидроксициклогептилкарбамат. К раствору трет-бутил-3-оксоциклогептилкарбамата (31,09 г, 137 ммоль) в метаноле (454 мл) порциями добавляли боргидрид натрия (15,52 г, 410 ммоль) в течение более ~10 минут при перемешивании. Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре, а затем разбавляли водой (200 мл). Метанол удаляли в вакууме, и полученную водную смесь разбавляли еще 500 мл этилацетата и 100 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия. Слои разделяли, и водный слой снова экстрагировали 2×1000 мл этилацетата. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до масла, которое очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-50% этилацетат в гексане). Продукт, содержащий фракции, концентрировали с получением трет-бутил-3-гидроксициклогептилкарбамата (21,1 г, 92 ммоль, 67,3% выход). МС (ESI) m/z 230,3 [М+Н]+. Две предыдущие реакции повторяли, начиная с 9,52 г циклогепт-2-енона и с получением 9,27 г трет-бутил-3-гидроксициклогептилкарбамата. Две партии трет-бутил-3-гидроксициклогептилкарбамата затем объединяли. Объединенные вещества, 29,2 г, разделяли в 4 компонентных стереоизомера (два диастереомера и соответствующие им энантиомеры) с помощью препаративной хиральный SFC, используя несколько инъекций в 3 отдельные колонки. Первая колонка: ChiralPak IC-H, 250×30 мм I.D., изократический 15% этанол в СО2, 38°С. Вторая колонка: ChiralCel OJ-H, 250×30 мм I.D., изократический 10% изопропанол в CO2, 38°С. Третья колонка: ChiralPak AD-H, 250×50 мм I.D., изократический 20% изопропанол в СО2, 38°С. Разделенные изомеры характеризовали на колонке Phenomenex Lux Amylose-2, 250×4,6 мм I.D., изократический 15% этанол в СО2 (время пробега 10 мин) в аналитическом масштабе и обозначали как Промежуточный продукт 1 - Промежуточный продукт 4.
Промежуточный продукт 1: 5,4 г (23,55 ммоль, 18,5% выход из очистки SFC). Время удержания: 4,065 минуты.
Промежуточный продукт 2: 5,5 г (23,98 ммоль, 18,8% выход из очистки SFC). Время удержания: 3,019 минуты.
Промежуточный продукт 3: 7,2 г (31,34 ммоль, 24,6% выход из очистки SFC). Время удержания: 3,675 минуты.
Промежуточный продукт 4: 4,7 г (20,50 ммоль, 16,1% выход из очистки SFC). Время удержания: 3,263 минуты.
С. (1S,3R)-3-Аминоциклогептанол, (1R,3R)-3-аминоциклогептанол, (1S,3S)-3-аминоциклогептанол, (1R,3S)-3-аминоциклогептанол. 75 мг (0,327 ммоль) каждого вещества, которые соответствовали Промежуточному продукту 1 - Промежуточному продукту 4 из стадии В, независимо друг от друга растворяли в ДХМ (11,25 мл) и ТФУ (3,75 мл). Каждую реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи при температуре окружающей среды. Растворитель каждой реакционной смеси удаляли в вакууме, а затем каждую реакционную смесь растворяли в смеси 4н хлористоводородной кислоты в диоксане (5 мл) и метаноле (5 мл). Каждую реакционную смесь перемешивали в течение ночи при температуре окружающей среды. Каждую из 4 реакционных смесей (каждая содержала индивидуальный изомер 3-аминоциклогептанола) концентрировали при пониженном давлении и использовали без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 130,2 [М+Н]+ для каждого. Обозначение Промежуточный продукт 1 - Промежуточный продукт 4 сохраняли для целей отслеживания.
D. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((1R,3R)-3-гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((1S,3R)-3-гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((1S,3S)-3-гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К каждому концентрату (Промежуточный продукт 1 - Промежуточный продукт 4) со стадии С добавляли 2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид (53,7 мг,.1635 ммоль), NMP (2 мл) и ДИЭА (0,286 мл, 1,635 ммоль). Полученные 4 смеси перемешивали при 80°С в течение ночи. Реакционные растворы независимо друг от друга конденсировали при пониженном давлении, и продукты очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с обратной фазой (5-80% ацетонитрил + 0,1% трифторуксусная кислота в воде + 0,1% трифторуксусная кислота, в течение 30 мин). Фракции, содержащие продукт, концентрировали при пониженном давлении. Полученные твердые вещества независимо друг от друга растворяли в метаноле (5 мл), пропускали через трубку SPE с полимером Varian Stratospheres НСО3 для удаления ТФУ (0,9 ммоль бикарбонатного эквив.) и затем концентрировали при пониженном давлении с получением соединений, указанных в заголовке, в виде Пика 1 - Пика 4. Отдельные изомеры (Пик 1 - Пик 4) характеризовали на колонке 250×4,6 мм ChiralPak AD-H в аналитическом масштабе, I.D., изократический 40% метанол + 0,1% диэтиламин в СО2 (время пробега 10 минут).
ПИК 1: 10,3 мг (0,027 ммоль); 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 9,02 (д, J=6,64 Гц, 1 Н), 8,33 (с, 1Н), 7,04 (д, J=7,42 Гц, 1Н), 4,44 (уш. с., 1Н), 4,19 (уш. с., 1Н), 3,56-3,90 (м, 2 Н), 3,23 (с, 3Н), 3,09 (уш. с., 1Н), 1,04-2,11 (м, 18Н). МС (ESI) m/z 378,3 [М+Н]+. Время удержания: 2,534 минут.
ПИК 2: 30,0 мг (0,079 ммоль); 1H-ЯМР (400 МГц, DMCO-d6) δ ч./млн 8,95 (д, J=6,25 Гц, 1 Н), 8,33 (с, 1Н), 7,06 (д, J=7,03 Гц, 1Н), 4,46 (д, J=3,12 Гц, 1Н), 3,86-4,18 (м, 1Н), 3,48-3,81 (м, 2Н), 3,23 (с, 3Н), 3,09 (уш. с., 1Н), 1,06-2,16 (м, 18Н). МС (ESI) m/z 378,5 [М+Н]+. Время удержания: 3,848 минут.
ПИК 3: 22,0 мг (0,058 ммоль); 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 9,02 (д, J=7,03 Гц, 1Н), 8,33 (с, 1Н), 7,04 (д, J=7,03 Гц, 1Н), 4,45 (д, J=3,12 Гц, 1Н), 4,20 (уш. с., 1Н), 3,56-3,91 (м, 2Н), 3,23 (с, 3Н), 3,09 (уш. с., 1Н), 1,06-2,12 (м, 18Н). МС (ESI) m/z 378,5 [М+Н]+. Время удержания: 4,557 минут.
ПИК 4: 22,5 мг (0, 060 ммоль); 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,95 (д, J=6,64 Гц, 1Н), 8,33 (с, 1Н), 6,47-7,21 (м, 1Н), 4,46 (д, J=3,12 Гц, 1Н), 3,94 (уш. с., 1Н), 3,73 (уш. с., 2Н), 3,23 (с, 3Н), 3,09 (уш. c., 1Н), 1,04-2,18 (м, 18Н). МС (ESI) m/z 378,3 [М+Н]+. Время удержания: 2,607 минут.
Из химического сдвига протона при ~4,2 ч./млн в Пике 1 и Пике 3 по сравнению с ~3,94 ч./млн в Пиках 2 и 4, и также сдвига протона при ~9,02 ч./млн в Пик 1 и Пик 3 по сравнению с ~8,95 ч./млн Пиках 2 и 4, данные 1Н-ЯМР, представленные выше, были интерпретированы следующим образом: Пик 1 и Пик 3 являются энантиомерами. Пик 2 и Пик 4 являются энантиомерами.
Альтернативно, был использован путь хирального синтеза, как описано ниже.
Пример 12В: 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. Циклогепт-2-енол. К раствору циклогепт-2-енона (10 г, 91 ммоль) и церия(III) гептагидрата хлорида (33,8 г, 91 ммоль) в метаноле (45,5 мл) порциями добавляли боргидрид натрия (3,43 г, 91 ммоль) в течение 10 минутного периода при охлаждении на водяной бане. Реакционную смесь затем перемешивали в течение 2,5 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили, добавляя воду (45 мл) и затем экстрагировали пентаном (4×100 мл). Объединенные органические экстракты сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения, указанного в заголовке (8,30 г, 74,0 ммоль, 82% выход) в виде масла, которое использовали без дополнительной очистки. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 5,49-5,71 (м, 2Н), 4,66 (д, J=4,29 Гц, 1Н), 4,05-4,20 (м, 1Н), 1,07-2,14 (м, 8Н).
В. Циклогепт-2-енил метилкарбонат. К раствору циклогепт-2-енола (8,3 г, 74,0 ммоль) в ДХМ (227 мл) и пиридину (35,9 мл, 444 ммоль) добавляли метилхлороформиат (14,24 мл, 185 ммоль) при охлаждении на ледяной бане при температурном уровне Т<10°С. После завершения добавления реакционную смесь оставляли перемешиваться и нагреваться до температуры окружающей среды в течение ночи. Реакционную смесь промывали 2×150 мл 1 н водным раствором хлористоводородной кислоты. Объединенные промывки подвергали обратному экстрагированию 100 мл ДХМ. Объединенные слои ДХМ затем промывали 150 мл водным насыщенным раствором бикарбоната натрия, сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения, указанного в заголовке (11,95 г, 70,2 ммоль, 95% выход) в виде масла, которое использовали без дополнительной очистки. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 5,83 (дддд, J=11,81, 7,03, 5,17, 2,15 Гц, 1Н), 5,65 (д, J=11,71 Гц, 1Н), 5,17 (д, J=6,64 Гц, 1Н), 4,71 (д, J=4,30 Гц, 1Н), 3,69 (с, 2Н), 1,99-2,23 (м, 2Н), 1,79-1,94 (м, 2Н), 1,56-1,72 (м, 3Н), 1,34 (д, J=3,51 Гц, 1Н).
С. (R)-2-(Циклогепт-2-енил)изоиндолин-1,3-дион. Соль фталимида калия (19,59 г, 106 ммоль), димер хлорида аллилпалладия (0,477 г, 1,322 ммоль), (1S,2S)-(-)-1,2-диаминоциклогексан-N,N'-бис(2'-дифенилфосфинобензоил) (2,74 г, 3,97 ммоль), бромид тетрагексиламмония (50,6 г, 116 ммоль) и ДХМ (212 мл) объединяли в круглодонной колбе. Колбу промывали азотом и затем помещали на ультразвуковую баню на 10 минут. Затем в колбу одной порцией добавляли циклогепт-2-енилметилкарбонат (9,00 г, 52,9 ммоль), и полученную смесь перемешивали в атмосфере азота при температуре окружающей среды в течение ночи. Реакционную смесь гасили, добавляя 50 мл воды, и затем экстрагировали 3×100 мл диэтиловым эфиром. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до масла, которое медленно отвеждалось в течение ночи. Твердые вещества растирали в порошок с метанолом (50 мл), и фильтровали с получением 7,6 г сырого продукта. Сырой твердый продукт перекристаллизовывали из метанола и сушили в вакууме с получением соединения, указанного в заголовке (6,70 г, 27,8 ммоль, 52,5% выход), в виде твердого вещества, которое, как было определено с помощью аналитической хиральной хроматографией SFC (Phenomenex Lux Cellulose-4, 250×4,6 мм I.D., 5-50% изопропанол в CO2, 13 минутный градиент), имело % е.е. 97,2 (S изомер был получен аналогично стандартному, используя лиганд (1R,2R)-(-)-1,2-диаминоциклогексан-N,N'-бис(2'-дифенилфосфинобензоил). 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 7,41-8,22 (м, 4Н), 5,62-5,97 (м, 2Н), 4,77 (д, J=11,32 Гц, 1Н), 2,01-2,29 (м, 3Н), 1,87-2,00 (м, 1Н), 1,62-1,78 (м, 2Н), 1,45-1,61 (м, 1Н), 1,17-1,32 (м, 1Н). МС (ESI) m/z 242,3 [М+1]+.
D. 2-((1R,2S,3S)-2-Бром-3-гидроксициклогептил)изоиндолин-1,3-дион. К раствору (R)-2-(Циклогепт-2-енил)изоиндолин-1,3-диона (4,00 г, 16,58 ммоль) в хлороформе (40,0 мл) и этаноле (1,400 мл) добавляли N-бромсукцинимид (3,78 г, 21,22 ммоль) в виде твердого вещества в течение 5 минут при комнатной температуре. После того, как добавление было закончено, реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи в атмосфере азота. Затем добавляли дополнительную порцию N-бромсукцинимида (1,9 г) и 1,4 мл этанола, и смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи в атмосфере азота. К смеси добавляли третью порцию N-бромсукцинимида (1,0 г) и 1,4 мл дополнительную порцию этанола, и снова перемешивали при комнатной температуре в течение третьей ночи в атмосфере азота. Реакционную смесь затем концентрировали досуха. Полученное твердое вещество растирали в порошок с 25 мл свежего хлороформа. Твердые вещества фильтровали, промывали хлороформом, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении досуха. Добавляли ТГФ (40 мл) и 1 н хлористоводородную кислоту (вод.) (10 мл) к концентрированному фильтрату, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 90 минут. Раствор концентрировали при пониженном давлении для удаления ТГФ. Концентрат разбавляли 125 мл этилацетатом и 75 мл смеси 1:1 вода:насыщенный водный раствор бикарбоната натрия. Слои разделяли, и водный слой опять экстрагировали 75 мл этилацетата. Объединенные слои этилацетата промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением масла, которое очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-30% этилацетата в гексане). Фракции, содержащие целевой продукт, концентрировали при пониженном давлении до соединения, указанного в заголовке (3,9 г, 11,53 ммоль, 69,6% выход) в виде твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 7,88 (д, J=7,42 Гц, 4Н), 5,48 (д, J=5,47 Гц, 1Н), 4,73 (дd, J=10,54, 6,25 Гц, 1Н), 4,24-4,38 (м, 1Н), 3,91-3,99 (м, 1Н), 2,32 (уш. с., 1Н), 1,67-1,96 (м, 5Н), 1,40-1,60 (м, 2Н). МС (ESI) m/z 320,1 [М-18]+. Эксперимент COSY ЯМР и данные 1H-ЯМР, приведенные выше, использовали для проверки региохимии бромгидрина. NOE (посредством эксперимента NOESY) наблюдали между протонами на углероде аминогруппы и углероде гидроксильной группы. Это подтверждает cis расположение этих двух функциональных групп (транс расположение, которое лишено этой пространственной близости, не будет демонстрировать такой эффект).
Е. 2-((1R,3S)-3-Гидроксициклогептил)изоиндолин-1,3-дион. К раствору 2-((1R,2S,3S)-2-бром-3-гидроксициклогептил)изоиндолин-1,3-диона (4,2 г, 12,42 ммоль) в толуоле (69 мл) и метаноле (6,9 мл) добавляли трибутилолово гидрид (4,34 мл, 16,14 ммоль) через шприц в течение 10 минут в атмосфере азота, а затем - одной порцией 2,2'-азобис(2-метилпропаннитрил) (0,204 г, 1,242 ммоль). Реакционную смесь затем нагревали при кипячении с обратным холодильником в течение ночи в атмосфере азота. Реакционную смесь концентрировали досуха при пониженном давлении с получением твердого вещества, которое очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-50% этилацетат в гексане). Фракции, содержащие целевой продукт, концентрировали при пониженном давлении с получением соединения, указанного в заголовке (2,6 г, 10,03 ммоль, 81% выход) в виде твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 7,72-7,98 (м, 4Н), 4,58 (д, J=4,29 Гц, 1Н), 4,14 (уш. с., 1Н), 3,67 (дт, J=6,25, 3,90 Гц, 1Н), 2,24-2,40 (м, 1Н), 2,04-2,19 (м, 1Н), 1,81-1,95 (м, 2Н), 1,39-1,80 (м, 6Н). МС (ESI) m/z 259,9 [М+Н]+.
E. (1S,3R)-3-Аминоциклогептанол. 2-((1R,3S)-3-гидроксициклогептил)изоиндолин-1,3-дион (1800 мг, 6,94 ммоль) растворяли в метаноле (86,80 мл). К раствору добавляли гидразин моногидрат (0,354 мл, 7,29 ммоль), и полученную смесь перемешивали в течение ночи при кипячении с обратным холодильником. Добавляли дополнительную порцию 0,2 экв. (0,067 мл) гидразина, и смесь кипятили с обратным холодильником в течение второй ночи. Реакционную смесь концентрировали до объема нескольких миллилитров и фильтровали. Твердые вещества промывали 50 мл ДХМ и хлороформа, каждого, и полученный фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением соединения, указанного в заголовке (174 мг, 1,347 ммоль, 19,40% выход) в виде масла, которое использовали без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 130,2 [М+Н]+.
F. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К раствору 2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида (105 мг, 0,336 ммоль) в NMP (1 мл) добавляли (1S,3R)-3-аминоциклогептанол (87 мг, 0,672 ммоль) и ДИЭА (0,235 мл, 1,344 ммоль). Полученную смесь нагревали до 80°С в течение 4 часов и затем оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и твердый остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с обратной фазой (5-80% ацетонитрил + 0,1% ТФУ в воде + 0,1% ТФУ, в течение 30 минут). Фракции, содержащие продукт, концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество еще раз растворяли в метаноле (5 мл), пропускали через трубку SPE с полимером Varian Stratospheres НСО3 для удаления ТФУ (0,9 ммоль бикарбонат эквив..), и затем концентрировали при пониженном давлении. Твердый остаток растирали в порошок с ацетонитрилом и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения, указанного в заголовке (67 мг, 0,177 ммоль, 52,8% выход), в виде твердого вещества. 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,96 (д, J=5,86 Гц, 1Н), 8,33 (с, 1Н), 7,00-7,16 (м, 1Н), 4,46 (д, J=3,90 Гц, 1Н), 3,85-4,09 (м, 1Н), 3,56-3,81 (м, 2Н), 3,23 (с, 3Н), 2,97-3,15 (м, 1Н), 1,71-2,14 (м, 7Н), 1,51 (д, J=10,15 Гц, 11Н). МС (ESI) m/z 378,3 [М+Н]+.
Аналитическую хиральную SFC, используя колонку ChiralPak AD-H (250×4,6 мм I.D., изократический 40% метанол + 0,1% диэтиламин в СО2, время пробега 10 минут), использовали для установки взаимосвязи между единичным изомером, полученным в этом хиральном синтезе, и изомера, полученного предыдущим вариантом получения всех четырех стереоизомеров. Было обнаружено, что вещество, полученное этим путем хирального синтеза, имеет такое же время удержания (3,848 минут) как Пик 2 в примере 12А, таким образом:
ПИК 2 = 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид.
На основании данных 1Н-ЯМР было обнаружено, что Пик 2 и Пик 4 являются энантиомерной парой примера 12А, таким образом:
ПИК 4 = 4-((1S,3R)-3-гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид.
Кроме того, следует, что Промежуточный продукт 2, который использовали для получения Пика 2 в примере 12А, может быть затем определен как трет-бутил-(1R,3S)-3-гидроксициклогептилкарбамат, а Промежуточный продукт 4, который использовали для получения Пика 4 в примере 12А, может быть затем определен как трет-бутил-(1S,3R)-3-гидроксициклогептилкарбамат.
Для идентификации абсолютной стереохимии Промежуточного продукта 1 и Промежуточного продукта 3 (и, таким образом, абсолютной стереохимии Пика 1 и Пика 3) в примере 12А, осуществляли следующий эксперимент.
Реакция Мицунобу трет-бутил-(1R,3R)-3-гидроксициклогептилкарбамата с получением трет-бутил-(1R,3S)-3-гидроксициклогептилкарбамата.
А. Трет-бутил-(1R,3S)-3-гидроксициклогептилкарбамат. Промежуточный продукт 3 стадии В примера 12А растворяли в ТГФ (31, 700 мл). Смесь охлаждали до 0°С на ледяной бане в атмосфере азота и одной порцией добавляли сначала хлоруксусную кислоту (261 мг, 2,76 ммоль), а затем трифенилфосфин (723 мг, 2,76 ммоль). По каплям добавляли раствор диэтилазодикарбоксилата (0,437 мл, 2,76 ммоль), перед добавлением следующей капли ожидая исчезновения желтого цвета. После завершения добавления раствор перемешивали при 0°С в атмосфере азота в течение 3 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и полученное масло очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-40% этилацетат в гексане). Чистые фракции, содержащие продукт, объединяли и концентрировали при пониженном давлении и затем еще раз растворяли в метаноле (16 мл). К раствору добавляли карбонат натрия (186 мг, 1,755 ммоль), и полученную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 3 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении досуха. Твердый остаток разбавляли 50 мл смеси 1:1 вода:насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и 75 мл ДХМ. Слои разделяли, и водный слой опять экстрагировали 50 мл ДХМ. Объединенные слои ДХМ сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали, и концентрировали при пониженном давлении с получением вещества, которое имело идентичное время удержания в аналитической SFC, что и промежуточный продукт 2 стадии В в примере 12А, или трет-бутил-(1R,3S)-3-гидроксициклогептилкарбамат (417 мг, 1,818 ммоль, 72,5% выход), в виде твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 6,63-6,87 (м, 1Н), 4,44 (д, J=3,90 Гц, 1Н), 3,47-3,71 (м, 1Н), 0,99-1,98 (м, 19Н). МС (ESI) m/z 260,1 [М+1]+.
Промежуточный продукт 3 стадии В примера 12А таким образом был обозначен как трет-бутил-(1R,3R)-3-гидроксициклогептилкарбамат. Пик 3 стадии D, полученный из Промежуточного продукта 3 примера 12А, таким образом, был обозначен как 4-((1R,3R)-3-гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид.
Так как Пик 1 и Пик 3 являются энантиомерами по данным 1Н-ЯМР, как описано в примере 12А, Пик 1 может быть обозначен как 4-((1S,3S)-3-гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. Таким образом, Промежуточный продукт 1 стадии В примера 12А, который использовали для получения Пика 1 на стадии D примера 12А, может быть обозначен как трет-бутил-(1S,3S)-3-гидроксициклогептилкарбамат.
Пример 13: 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-((1S,4S)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид и 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-((1S,4S)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешанному раствору 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (440 мг, 1,400 ммоль; синтез описан в настоящем описании) и тригидрохлорид бис-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексанамина (529 мг, 2,099 ммоль) в ДМСО (6,964 мл) добавляли ДИЭА (0,978 мл, 5,60 ммоль). Полученную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи при 100°С. Сырую реакционную смесь концентрировали, очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-10% метанол/дихлорметан), и затем очищали хроматографией с обратной фазой на колонке с силикагелем (метанол/вода с модификатором 0,1% муравьиная кислота). Фракции, содержащие продукт, нейтрализовывали и концентрировали с получением 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (135 мг, 0,313 ммоль, 22,36% выход) в виде смеси 2 стереоизомеров. МС (ESI) m/z 432,2 [М+Н]+. Эту смесь отделяли, используя хиральную жидкостную хроматографию при сверхвысоких температурах (колонка AD-H), с получением 87,8 мг (0,203 ммоль) единичного, быстрее элюируемого стереоизомера (ПИК 1) и 24,2 мг (0,056 ммоль) второго единичного, медленнее элюируемого стереоизомера (ПИК 2).
Затем повторяли эту же последовательность реакций, используя (1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексанамин, который получали следующим образом.
(1R,4R)-4-(Бензиламино)циклогексанол. Смесь (1R,4R)-4-аминоциклогексанол (230 г, 2 моль), бензальдегид (212 г, 2 моль) и 
молекулярные сита в метаноле (2 л) кипятили с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 3 ч. Смесь охлаждали, используя баню лед-вода, и осторожно небольшими порциями добавяли боргидрид натрия (72 г, 2 моль). После завершения добавления реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель упаривали, и твердый остаток разделяли между дихлорметаном (2 л) и водой (1 л). Слой дихлорметана отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, и непосредственно использовали в следующей стадии.
Бензил бензил((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)карбамат. К раствору (1R,4R)-4-(бензиламино)циклогексанола, полученному в предыдущей стадии, в дихлорметане добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (1,5 л), и к этой двухфазной системе медленно добавляли бензилхлорформиат (358,2 г, 2,1 моль) при 0°С. После завершения добавления реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение еще одного часа, затем органическую фазу отделяли и упаривали. После концентрирования твердый остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-30% этилацетат в гексане) с получением соединения, указанного в заголовке в виде бесцветной жидкости (400 г, 1,18 моль, 59% выход для двух стадий). Обе стадии повторяли с получением общего количества 800 г бензил бензил((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)карбамата.
Бензил бензил((1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексил)карбамат. К раствору бензил бензил((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)карбамата (400 г, 1,18 моль) в хлороформе (2 л) добавляли 50% водный раствор фторборной кислоты (20 мл), и струю диазотрифторэтана (свежеполучен путем смешения гидрохлорида трифторэтанамина (1,6 кг, 11,8 моль) и NaNO2 (814 г, 11,8 моль) в воде (3 л) и затем барбатирования в реакционный раствор выше). Реакционную смесь контролировали ТСХ, и после завершения добавляли насыщенный водный раствор карбоната калия (300 мл). Слой хлороформа отделяли, концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией (0-10% этилацетат в гексане) с получением бензил бензил ((1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексил)карбамата (192 г, 0,456 моль, 38% выход). Эту реакцию повторяли с получением еще одной партии бензил бензил ((1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексил)карбамата (185 г, 0,439 моль).
(1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексанамин. К раствору бензил бензил((1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексил)карбамата (377 г, 0,89 моль) в этилацетате (2 л) добавляли 20% гидроксид палладия на угле (50 г), и смесь перемешивали в атмосфере водорода при давлении 55 фунтов на кв. дюйм в течение 24 ч при комнатной температуре. Катализатор удаляли путем фильтрации, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество растворяли в 2 н хлористоводородной кислоте (1,5 л), и раствор промывали метил-трет-бутиловый эфиром (300 мл × 5). Добавляли твердый карбонат калия, доводя рН выше 10. Продукт экстрагировали в дихлорметане (500 мл × 5). Объединенные органические фазы сушили и концентрировали при пониженном давлении. Твердый остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (10-30% метанол в дихлорметане) с получением (1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексанамина (115 г, 0,584 моль, 66% выход): 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 4,01 (кв, J=8,8 Гц, 2Н), 3,40-3,33 (м, 1Н), 2,56-2,53 (м, 1Н), 1,94-1,92 (м, 2Н), 1,75-1,72 (м, 2Н), 1,24-1,15 (м, 2Н), 1,08-0,97 (м, 2Н); МС (ESI) m/z 198,2 [М+1]+.
Используя промежуточный продукт выше было показано, что вещество, полученное как ПИК 1, соответствует 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамиду, тогда как вещество, полученное как ПИК 2, соответствует 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-((1S,4S)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамиду.
ПИК 1: 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,90 (д, J=6,25 Гц, 1Н), 8,34 (с, 1Н), 7,46-7,52 (м, 1Н), 7,07-7,17 (м, 1Н), 6,91 (дд, J=8,59, 2,73 Гц, 1Н), 4,60-4,76 (м, 1Н), 4,02 (кв, J=9,63 Гц, 2Н), 3,39-3,96 (м, 4Н), 0,92-2,24 (м, 16Н). 19F ЯМР (376 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн -76,47-72,01 (м, 3F). МС (ESI) m/z 432,0 [М+Н]+.
ПИК 2: 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-((1S,4S)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,90 (д, J=6,64 Гц, 1Н), 8,34 (уш. с., 1Н), 6,79-7,50 (м, 2Н), 4,64 (уш. с., 1Н), 4,00-4,12 (м, 2Н), 3,42 (д, J=4,69 Гц, 4Н), 0,91-2,25 (м, 16Н). 19F ЯМР (376 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн -73,63 (т, J=9,47 Гц, 3F). МС (ESI) m/z 432,0 [М+Н]+.
Пример 14: 2-((1R,4R)-4-(Дифторметокси)циклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. Метил-2-хлор-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксилат. К перемешанному раствору метил-2,4-дихлорпиримидин-5-карбоксилата (4,00 г, 19,32 ммоль) в ТГФ (85 мл) добавляли ДИЭА (3,37 мл, 19,32 ммоль). Полученную смесь охлаждали до -78°С на бане сухой лед/ацетон. Добавляли раствор (1S,3R)-3-аминоциклогексанола (2,448 г, 21,25 ммоль; полученный как описано в Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056(2004)) в 40 мл ТГФ на таком уровне, чтобы температура оставалась -78°С. Полученную смесь перемешивали при -78°С в течение 1 ч. Реакционную смесь затем концентрировали досуха и разбавляли 200 мл этилацетата и 75 мл смеси 1:1 воды и водного насыщенного раствора бикарбоната натрия. Слои разделяли и водный слой опять экстрагировали 100 мл этилацетата. Объединенные слои этилацетата промывали 50 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия, сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до масла, которое отверждалось при стоянии. Твердое вещество растирали в порошок в диэтиловом эфире (5 мл), фильтровали, промывали диэтиловым эфиром (5 мл) и сушили в вакууме с получением метил-2-хлор-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксилата (3,7 г, 12,95 ммоль, 67% выход), которое использовали без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 286,0 [М+1]+.
B. (1R,4R)-4-(Дибензиламино)циклогексанол. Гидрохлорид транс-4-аминоциклогексанола (25 г, 217 ммоль) суспендировали в ацетонитриле (500 мл). К суспензии добавляли бромид бензила (54,2 мл, 456 ммоль) и карбонат калия (120 г, 868 ммоль), и полученную смесь энергично перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтровали через пробку из целита, и пробку тщательно промывали ацетонитрилом. Фильтрат концентрировали с получением белого твердого вещества. Сырое твердое вещество очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-60% этилацетат в гексане). Очищенные фракции, содержащие продукт, объединяли и концентрировали с получением (1R,4R)-4-(дибензиламино)циклогексанола (25 г, 85 ммоль, 39,0% выход) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 7,26-7,36 (м, 8Н), 7,16-7,22 (м, 2Н), 4,43 (д, J=4,69 Гц, 1Н), 3,55 (с, 4Н), 3,27-3,33 (м, 1Н), 2,28-2,40 (м, 1Н), 1,69-1,88 (м, 4Н), 1,40 (квд, J=12,56, 2,93 Гц, 2Н), 0,89-1,05 (м, 2Н); МС (ESI) m/z 296,3 [М+1]+.
C. (1R,4R)-N,N-дибензил-4-(дифторметокси)циклогексанамин. (1R,4R)-4-(Дибензиламино)циклогексанол (5 г, 16,93 ммоль) и йодид меди(I) (0,645 г, 3,39 ммоль) растворяли в 170 мл ацетонитрила и нагревали до 45°С в атмосфере азота. К этой смеси добавляли раствор 2,2-дифтор-2-(фторсульфонил)уксусной кислоты (3,50 мл, 33,9 ммоль) в 30 мл ацетонитрила в течение 10 мин. После завершения добавления смесь перемешивали при 45°С в атмосфере азота в течение 1 ч. Затем через 10 минут добавляли дополнительную порцию реагента 2,2-дифтор-2-(фторсульфонил)уксусной кислоты (2,86 мл, 27,7 ммоль) в 30 мл ацетонитриле. Реакционную смесь перемешивали в течение дополнительного 1 часа при 45°С в атмосфере азота. Летучие компоненты затем удаляли упариванием, и твердый остаток разбавляли 175 мл этилацетатом и 75 мл смеси 1:1 воды и насыщенного водного раствора бикарбоната натрия. Полученную двухфазную смесь, содержащую твердые вещества, фильтровали через синтерированную стеклянную воронку Бюхнера. Слои фильтрата разделяли, и водный слой экстрагировали 50 мл этилацетатом. Объединенные слои этилацетата промывали 50 мл смеси 1:1 насыщенного хлорида натрия и воды, сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до масла. Сырое масло очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-30% этилацетат в гексане). Фракции, содержащие продукт, объединяли и концентрировали с получением (1R,4R)-N,N-дибензил-4-(дифторметокси)циклогексанамина (3,12 г, 9,03 ммоль, 53,4% выход) в виде масла, которое отверждалось до не совсем белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, DMCO-d6) δ ч./млн 7,26-7,38 (м, 8Н), 7,17-7,23 (м, 2Н), 6,66 (с, 1Н), 3,97 (т, J=4,49 Гц, 1Н), 3,57 (с, 4Н), 2,36-2,47 (м, 1Н), 1,98 (д, J=10,54 Гц, 2Н), 1,83 (д, J=12,10 Гц, 2Н), 1,49 (д, J=12,89 Гц, 2Н), 1,22 (д, J=12,49 Гц, 2Н). 19F ЯМР (376 МГц, ДМСО-d6) d ч./млн -79,28 (д, J=73,00 Гц, 2F). MC(ESI) m/z 346,1 [M+1]+.
D. (1R,4R)-4-(Дифторметокси)циклогексанамин. (1R,4R)-N,N-Дибензил-4-(дифторметокси)циклогексанамин (1,6 г, 4,63 ммоль) растворяли в этаноле (23 мл) в шейкерной колбе Парра и добавляли 20 масс% гидроксида палладия на угле (0,650 г, 0,926 ммоль). Контейнер разряжали, помещали на шейкерный аппарат Парра, и трясли в атмосфере водорода под давлением 50 фунт на кв. дюйм в течение ночи. Удаляли гидроксид палладия путем фильтрации через заранее увлажненную (этанолом) подушку из целита. Фильтровальную лепешку тщательно промывали этанолом. Фильтрат концентрировали до масла, которое растворяли в 100 мл этилацетата, сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до масла, которое отверждалось, с получением (1R,4R)-4-(дифторметокси)циклогексанамина (0,621 г, 3,76 ммоль, 81% выход). 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 6,46-6,93 (м, 1Н), 3,96 (с, 1Н), 2,52-2,59 (м, 1Н), 1,84-1,95 (м, 2Н), 1,68-1,79 (м, 2Н), 1,29-1,43 (м, 2Н), 1,01-1,14 (м, 2Н). 19F ЯМР (376 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн -78,93 (д, J=91,00 Гц, 2F). МС (ESI) m/z 166,2 [М+1]+.
Е. Метил-2-((1R,4R)-4-(дифторметокси)циклогексиламино)-4-((1R,3S)-3 гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксилат. К перемешиваемой смеси метил-2-хлор-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксилата (300 мг, 1,050 ммоль) и (1R,4R)-4-(дифторметокси)циклогексанамина (260 мг, 1,575 ммоль) в ДМСО (5 мл) добавляли ДИЭА (0,550 мл, 3,15 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 70°С в течение 1 ч. Сырую реакционную смесь концентрировали и затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-60% этилацетат в гексане). Фракции, содержащие продукт, объединяли и концентрировали с получением метил-2-((1R,4R)-4-(дифторметокси) циклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксилата (165 мг, 0,398 ммоль, 37,9% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,37-8,49 (м, 1Н), 8,06 (д, J=7,42 Гц, 1Н), 7,22-7,55 (м, 1Н), 6,49-6,94 (м, 1Н), 4,67-4,76 (м, 1Н), 3,75-4,10 (м, 2Н), 3,72 (с, 3Н), 3,43-3,69 (м, 2Н), 1,63-2,24 (м, 8Н), 1,08-1,54 (м, 8Н). MC(ESI) m/z 415,5 [M+1]+.
F. 2-((1R,4R)-4-(Дифторметокси)циклогексиламино)-4-((1R,3S)-3 гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоновая кислота. К перемешиваемому раствору метил-2-((1R,4R)-4-(дифторметокси)циклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксилата (170 мг, 0,410 ммоль) в метаноле (10 мл) одной порцией добавляли водный раствор гидроксида натрия (1 М, 3,075 мл, 3,075 ммоль). Полученную смесь оставляли перемешиваться при 50°С в течение 2 дней. Реакционную смесь концентрировали для удаления метанола, разбавляли дополнительной порцией воды (10 мл) и медленно добавляли водный раствор лимонной кислоты (2 М, 4,10 мл, 8,20 ммоль). Полученный осадок перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, фильтровали, и твердые вещества затем тщательно промывали водой. Твердые вещества сушили в вакууме с получением 2-((1R,4R)-4-(дифторметокси)циклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоновой кислоты (117 мг, 0,292 ммоль, 71,2% выход) в виде твердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 401,5 [М+1]+.
G. 2-((1R,4R)-4-(Дифторметокси)циклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемой суспензии 2-((1R,4R)-4-(дифторметокси)циклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоновой кислоты (117 мг, 0,292 ммоль) и HATU (167 мг, 0,438 ммоль) в ДМФ (2 мл) добавляли хлорид аммония (78 мг, 1,461 ммоль) и ДИЭА (0,255 мл, 1,461 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Сырую реакционную смесь концентрировали для удаления летучих компонентов и затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле (10-90% этилацетат (содержащий 10% метанол, насыщенный аммиаком) в гексане). Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением 2-((1R,4R)-4-(дифторметокси)циклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (35,3 мг, 0,088 ммоль, 30,2% выход) в виде твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,90 (д, J=6,64 Гц, 1Н), 8,34 (уш. с., 1Н), 6,50-7,14 (м, 2Н), 4,64 (уш. с., 1Н), 3,42-4,11 (м, 4Н), 0,87-2,23 (м, 16Н). 19F-ЯМР (376 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн -78,98 (д, J=110,82 Гц, 2F). МС (ESI) m/z 400,5 [М+1]+.
Пример 5: 4-((1R,3S)-3-Метоксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. Трет-бутил-(1R,3S)-3-гидроксициклогексилкарбамат. К перемешиваемому раствору (1S,3R)-3-аминоциклогексанола (1,0 г, 8,68 ммоль; получен как описано в Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056 (2004)) в диоксане (8,04 мл) добавляли ди-трет-бутил-дикарбонат (2,369 г, 10,85 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали, добавляли хлорид натрия (0,507 г, 8,68 ммоль), и полученный раствор разбавляли водой (20 мл) и гексан (20 мл). Суспензию энергично перемешивали в течение 20 минут, затем фильтровали и твердые вещества промывали гексаном и сушили в вакууме с получением трет-бутил-(1R,3S)-3-гидроксициклогексилкарбамата (1,7836 г, 8,28 ммоль, 95% выход) в виде не совсем белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 6,74 (д, J=8,20 Гц, 1Н), 4,58 (д, J=4,29 Гц, 1Н), 3,35-3,43 (м, 1Н), 3,11-3,27 (м, 1Н), 1,90 (д, J=11,32 Гц, 1Н), 1,68-1,78 (м, 1Н), 1,63 (д, J=3,12 Гц, 2Н), 1,37 (с, 9Н), 0,87-1,23 (м, 4Н); МС (ESI) m/z 216,3 [М+1]+.
В. Трет-бутил-(1R,3S)-3-метоксициклогексилкарбамат. К раствору трет-бутил-(1R,3S)-3-гидроксициклогексилкарбамата (1,78 г, 8,27 ммоль) в безводном ТГФ (8 мл) порциями добавляли гидрид натрия (0,230 г, 9,09 ммоль) в атмосфере азота при 0°С. Смесь нагревали при комнатной температуре и перемешивали в течение 30 мин. Раствор йодметана (0,824 мл, 13,23 ммоль) в безводном ТГФ (4 мл) по каплям добавляли к смеси при 0°С, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Сырую смесь гасили водой (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме, и затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-50% этилацетат в гексане). Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением трет-бутил-(1R,3S)-3-метоксициклогексилкарбамата (1,0686 г, 4,66 ммоль, 56,4% выход) в виде белого твердого вещества; МС (ESI) m/z 230,5 [М+1]+.
C. (1R,3S)-3-Метоксициклогексанамин трифторацетат. К раствору трет-бутил-(1R,3S)-3-метоксициклогексилкарбамата (1,0686 г, 4,66 ммоль) в безводном ДХМ (18,64 мл) добавляли ТФУ (3,59 мл, 46,6 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. После того как растворители удаляли в вакууме, и полученное твердое вещество растирали в порошок с этиловым эфиром (2×50 мл) с получением трифторацетата (1R,3S)-3-метоксициклогексанамина (1,133 г, 4,66 ммоль, 100% выход) в виде белого твердого вещества. Сырой продукт использовали без дальнейшей очистки в следующей стадии.
D. Этил-4-((1R,3S)-3-метоксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат. К перемешиваемому раствору этил-4-хлор-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (1,084 г, 4,66 ммоль) и трифторацетата (1R,3S)-3-метоксициклогексанамина (1,133 г, 4,66 ммоль) в этаноле (18,63 мл) добавляли ДИЭА (2,434 мл, 13,97 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 60°С в течение 17 ч. Реакционную смесь охлаждали, охлаждали при комнатной температуре и концентрировали. Сырое вещество очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-25% этилацетат в гексане), с получением этил-4-((1R,3S)-3-метоксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (1,4284 г, 4,39 ммоль, 94% выход) в виде прозрачного масла. МС (ESI) m/z 326,2 [М+1]+.
E. 4-((1R,3S)-3-Метоксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновая кислота. К перемешиваемому раствору этил-4-((1R,3S)-3-метоксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (1,4284 г, 4,39 ммоль) в этаноле (12,54 мл) добавляли водный раствор гидроксида натрия (1 н, 8,78 мл, 8,78 ммоль), и смесь перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали, разбавляли водой (50 мл) и затем нейтрализовывали при перемешивании с водным раствором лимонной кислоты (2 М, 5,49 мл, 10,97 ммоль). Остаток фильтровали, затем промывали водой (2×50 мл) и сушили с получением 4-((1R,3S)-3-метоксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновой кислоты (1,1679 г, 3,93 ммоль, 89% выход) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 13,22 (с, 1Н), 8,65 (д, J=7,03 Гц, 1Н), 8,51 (с, 1Н), 4,07-4,24 (м, 1Н), 3,29-3,33 (м, 1Н), 3,26 (с, 3Н), 2,46 (с, 3Н), 2,15 (д, J=12,10 Гц, 1Н), 1,63-1,88 (м, 3Н), 1,21-1,48 (м, 4Н); МС (ESI) m/z 298,1 [М+1]+.
F. 4-((1R,3S)-3-Метоксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. 4-((1R,3S)-3-Метоксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновую кислоту (1,1662 г, 3,92 ммоль) и HATU (2,237 г, 5,88 ммоль) перемешивали в ДМФ (7,84 мл) в течение 5 мин при комнатной температуре, затем при перемешивании добавляли хлорид аммония (1,049 г, 19,61 ммоль) и ДИЭА (3,42 мл, 19,61 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь выливали в воду (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные органические слои промывали водой (50 мл), насыщенным солевым раствором (25 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаточное количество ДМФ удаляли, суспендируя маслянистое твердое вещество в 100 мл воды и 100 мл гексана. Двухфазную суспензию энергично перемешивали в течение 30 мин, фильтровали и промывали гексаном с получением 4-((1R,3S)-3-метоксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (1,1081 г, 3,74 ммоль, 95% выход) в виде не совсем белого твердого вещества. МС (ESI) m/z 397,2 [М+1]+.
G. 4-((1R,3S)-3-Метоксициклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид. К раствору 4-((1R,3S)-3-метоксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (1,1081 г, 3,74 ммоль) в ДХМ (18,69 мл) и ацетона (18,69 мл) при комнатной температуре добавляли mCPBA (1,676 г, 7,48 ммоль) пятью партиями в течение 2 мин и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. К сырой реакционной смеси добавляли 10% водный раствор тиосульфата натрия (35 мл) и смесь перемешивали в течение 5 мин перед упариванием летучих растворителей. Вещество разделяли между этилацетатом и водой, и органический слой затем промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и затем насыщенным солевым раствором. Объединенные водные слои затем промывали этилацетатом (3х), органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и конденсировали. После сушки в высоком вакууме получали 4-((1R,3S)-3-метоксициклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид (0,9887 г, 3,01 ммоль, 81% выход) в виде белого твердого вещества. МС (ESI) m/z 329,3 [М+1]+.
H. 4-((1R,3S)-3-Метоксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемому раствору 4-((1R,3S)-3-метоксициклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (0,3 г, 0,914 ммоль) и (1R,4R)-4-метоксициклогексанамина (0,236 г, 1,827 ммоль) в ДМСО (0,914 мл) добавляли ДИЭА (0,637 мл, 3,65 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при 100°С в течение 17 ч. Сырую реакционную смесь концентрировали и затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-10% метанол в этилацетате). Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением 4-((1R,3S)-3-метоксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (0,155 г, 0,411 ммоль, 44,9% выход) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,95. (д, J=7,42 Гц, 1Н), 8,34 (с, 1Н), 7,01-7,17 (м, 1Н), 6,76-6,88 (м, 1Н), 3,51-4,07 (м, 2Н), 2,97-3,29 (м, 8Н), 1,63-2,42 (м, 8Н), 0,98-1,39 (м, 9Н); МС (ESI) m/z 378,4 [М+1]+.
Пример 16: 2-((1R,4R)-4-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. Гидрохлорид (1R,4R)-4-Амино-1-метилциклогексанола.
Раствор (1R,4R)-4-(дибензиламино)-1-метилциклогексанола (15,3 г, 49,4 ммоль; получен как описано в публикации международной заявки на патент РСТ WO2010/027500) в метаноле (137 мл) и этилацетате (137 мл) в 500 мл-овом сосуде Парра дегазировали путем барбатирования азота через раствор в течение 5 мин. К раствору добавляли гидроксид палладия на угле (6,94 г, 4,94 ммоль), и сосуд помещали на шейкер Парра на 6 дней при 3 атомсферах водорода. Сосуд удаляли из шейкера Парра, и суспензию затем фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали, твердый остаток растворяли в 50 мл метанола, подкисляли водным раствором хлористоводородной кислоты (6 М, 9,06 мл, 54,4 ммоль) и концентрировали с получением гидрохлорида (1R,4R)-4-амино-1-метилциклогексанола (8,31 г, 50,2 ммоль, 101% выход) в виде не совсем белого твердого вещества, которое использовали без дальнейшей очистки в следующей стадии.
B. Трет-бутил-(1R,4R)-4-гидрокси-4-метилциклогексилкарбамат. К перемешиваемому раствору гидрохлорида (1R,4R)-4-амино-1-метилциклогексанола (8,31 г, 50,2 ммоль) в водном растворе гидроксида натрия (1 н, 100 мл, 100 ммоль) добавляли ди-трет-бутил-дикарбонат (13,68 г, 62,7 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали и затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-100% этилацетат в гексане). Фракции продукта объединяли и концентрировали. Вещество содержало ~50% целевого продукта, как показано с помощью ЖХ-МС, поэтому вещество повторно дважды очищали на силикагеле, используя 0-50% этилацетат в гексане в качестве подвижной фазы. Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением трет-бутил-(1R,4R)-4-гидрокси-4-метилциклогексилкарбамата (2,2 г, 9,59 ммоль, 19,13% выход) в виде белого твердого вещества. МС (ESI) m/z 230,5 [М+1]+.
C. Трифторацетат (1R,4R)-4-амино-1-метилциклогексанола. К перемешиваемому раствору трет-бутил-(1R,4R)-4-гидрокси-4-метилциклогексилкарбамата (2,04 г, 8,90 ммоль) в ДХМ (44 мл) добавляли ТФУ (13,71 мл, 178 ммоль), и раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 22 ч. Реакционную смесь концентрировали, твердый остаток дважды растирали в порошок с этиловым эфиром с получением трифторацетата (1R,4R)-4-амино-1-метилциклогексанола (2,106 г, 8,66 ммоль, 97% выход) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 7,73 (уш. с., 3Н), 4,39 (уш. с., 1Н), 3,05 (д, J=3,51 Гц, 1Н), 1,27-1,97 (м, 8Н), 1,11 (с, 3Н); МС (ESI) m/z 130,2 [М+1]+.
D. 2-((1R,4R)-4-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемому раствору 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (0,432 г, 1,374 ммоль; синтез описан в настоящем описании) и трифторацетат (1R,4R)-4-амино-1-метилциклогексанола (0,435 г, 1,786 ммоль) в диоксане (2,75 мл) добавляли ДИЭА (0,718 мл, 4,12 ммоль), и полученный раствор перемешивали при 110°С в течение 23 ч. Сырую реакционную смесь концентрировали, и твердый остаток очищали ВЭЖХ (20-100% метанол в воде). Фракции продукта объединяли, концентрировали, и твердый остаток растирали в порошок с ацетонитрилом. Полученный осадок собирали с получением 2-((1R,4R)-4-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (0,0483 г, 0,133 ммоль, 9,67% выход) в виде не совсем белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,91 (д, J=6,64 Гц, 1Н), 8,34 (уш. с., 1Н), 6,56-7,26 (м, 1Н), 3,39-4,78 (м, 4Н), 2,54 (с, 3Н), 0,66-2,25 (м, 19Н); МС (ESI) m/z 364,5 [М+1]+.
Пример 17: 4-((1S,3S,4S)-3-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид; 4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид; 4-((1S,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид; 4-((1R,3S,4S)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 2-((1S,4S)-4-Гидрокси-4-метилциклогексил)изоиндолин-1,3-дион. К перемешиваемому раствору (1S,4S)-4-амино-1-метилциклогексанола (10 г, 77 ммоль; полученному как описано в публикации международной заявки на патент РСТ WO2010/027500) и карбоната калия (18,72 г, 135 ммоль) в воде (155 мл) при 0°С добавляли N-карбэтоксифталид (18,66 г, 85 ммоль), и раствор перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Мелкодисперсную суспензия фильтровали, еще раз суспендировали в 100 мл воды и снова фильтровали с получением 2-((1S,4S)-4-гидрокси-4-метилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона (11,413 г, 44,0 ммоль, 56,9% выход) в виде белого порошка. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 7,79-7,88 (м, 4Н), 4,11 (с, 1Н), 3,94 (с, 1Н), 2,51-2,56 (м, 1Н), 2,44-2,49 (м, 1Н), 1,56-1,70 (м, 2Н), 1,33-1,47 (м, 4Н), 1,13 (с, 3Н); МС (ESI) m/z 260,5 [М+1]+.
B. 2-(4-Метилциклогекс-3-енил)изоиндолин-1,3-дион. 2-((1S,4S)-4-Гидрокси-4-метилциклогексил)изоиндолин-1,3-дион (4,6568 г, 17,96 ммоль) и гидросульфат калия (4,89 г, 35,9 ммоль) объединяли и нагревали до 140°С в течение 20 мин. Реакции не наблюдалось, поэтому добавляли воду (11,22 мл) и серную кислоту (7,66 мл, 144 ммоль), и реакционную смесь нагревали до 100°С в течение 2 ч. Сырую суспензию охлаждали при комнатной температуре и выливали в 200 мл дробленного льда/воды, энергично перемешивали в течение 30 мин, затем фильтровали с получением сырого продукта в виде белого твердого вещества. Белое твердое вещество очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-10% этилацетат в гексане), и фракции продукта объединяли и концентрировали с получением 2-(4-метилциклогекс-3-енил)изоиндолин-1,3-диона (3,33 г, 13,80 ммоль, 77% выход) в виде белого твердого вещества. МС (ESI) m/z 242,0 [М+1]+.
C. 4-Метилциклогекс-3-енамин. К перемешиваемой суспензии 2-(4-метилциклогекс-3-енил)изоиндолин-1,3-диона (5,24 г, 21,72 ммоль) в метаноле (163 мл) и ДХМ (54,3 мл) добавляли гидразин гидрат (3,69 мл, 76 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч. К сырой суспензии добавляли 400 мл воды, и смесь перемешивали в течение 10 минут, затем экстрагировали ДХМ (4×400 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, затем концентрировали с получением 4-метилциклогекс-3-енамина (2,415 г, 21,72 ммоль, 100% выход) в виде светло-желтого масла. МС (ESI) m/z 112,2 [М+1]+.
D. Трет-бутил-4-метилциклогекс-3-енилкарбамат. К перемешиваемому раствору 4-метилциклогекс-3-енамина (2,415 г, 21,72 ммоль) и ТЭА (3,33 мл, 23, 89 ммоль) в ДХМ (43,4 мл) при 0°С добавляли ди-трет-бутил-дикарбонат (7,11 г, 32,6 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 3 дней при комнатной температуре. Сырую реакционную смесь концентрировали, затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-10% этилацетат в гексане). Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением трет-бутил-4-метилциклогекс-3-енилкарбамата (1,65 г, 7,81 ммоль, 36,0% выход) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 6,72 (д, J=7,42 Гц, 1Н), 5,26 (уш. с., 1Н), 3,35-3,49 (м, 1Н), 1,66-2,22 (м, 5Н), 1,60 (с, 3Н), 1,38 (с, 10Н); МС (ESI) m/z 212,4 [М+1]+.
Е. Трет-бутил-3-гидрокси-4-метилциклогексилкарбамат. К перемешиваемому раствору трет-бутил-4-метилциклогекс-3-енилкарбамата (1, 5844 г, 7,50 ммоль) в ТГФ (94 мл) при 0°С добавляли 1М комплекс боран ТГФ (33,7 мл, 33,7 ммоль). Раствор перемешивали при 0°С в течение 1 ч и затем при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь очень медленно гасили водой (40,5 мл, 2249 ммоль), разбавляли этанолом (39,8 мл, 682 ммоль) и подкисляли водным раствором гидроксида натрия (5 н, 37,5 мл, 187 ммоль). К перемешиваемой двухфазной смеси медленно добавляли перекись водорода (38,3 мл, 375 ммоль), и полученную смесь нагревали до 45°С в течение 20 ч. Сырую реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором сульфита натрия (70 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Сырой продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-100% этилацетат в гексане). Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением смеси четырех изомеров трет-бутил-3-гидрокси-4-метилциклогексилкарбамата (транс расположение 3-гидрокси и 4-метильной групп) (0,9608 г, 4,19 ммоль, 55,9% выход) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 6,60-6,85 (м, 1Н), 4,29-4,58 (м, 1Н), 3,35-3,80 (м, 1Н), 2,81-3,28 (м, 1Н), 1,20-1,96 (м, 14Н), 0,79-1,14 (м, 5Н); МС (ESI) m/z 230,5 [М+1]+.
F. Гидрохлорид 5-Амино-(транс)-2-метилциклогексанола. К энергично перемешиваемому метанолу (10,47 мл) при 0°С добавляли ацетилхлорид (0,893 мл, 12,57 ммоль). Раствор перемешивали в течение 30 мин, затем добавляли трет-бутил-3-гидрокси-4-метилциклогексил-карбамат (0,9608 г, 4,19 ммоль) и перемешивание продолжали в течение 22 ч при комнатной температуре. Сырую реакционную смесь концентрировали, и твердый остаток растирали в порошок с этиловым эфиром (2×50 мл) с получением гидрохлорида 5-амино-(транс)-2-метилциклогексанола (0,694 г, 4,19 ммоль, 100% выход) в виде белого твердого вещества. МС (ESI) m/z 112,2 [М+1]+.
G. 2-(Транс-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамид. К раствору 2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (1,24 г, 4,18 ммоль; синтез описан в настоящем описании) в NMP (12,30 мл) при 0°С порциями добавляли mCPBA (0,938 г, 4,18 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч, при этом обеспечивая медленное повышение температуры до комнатной. Реакционную смесь разбавляли водой (120 мл), перемешивали в течение 10 мин, и полученные твердые вещества удаляли путем фильтрации. Фильтрат концентрировали в вакууме при менее чем 30°С с получением 2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида (1,307 г, 4,18 ммоль, 100% выход) в виде белой суспензии в NMP (~10 мл). Эту сырую суспензию использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 313,5 [М+1]+.
Н. 4-((1S,3S,4S)-3-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((1S,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид, 4-((1R,3S,4S)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К сырой реакционной смеси (2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида (1,31 г, 4,19 ммоль) в NMP (10 мл) добавляли сырой гидрохлорид 5-амино-(транс)-2-метилциклогексанола (0,695 г, 4,19 ммоль) в виде раствора в NMP (15,00 мл). К суспензии добавляли ДИЭА (3,65 мл, 20,97 ммоль), и реакционную смесь нагревали до 100°С в течение 46 ч. NMP удаляли упариванием при 70°С, твердый остаток разбавляли ДХМ и очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-15% метанол в ДХМ). Фракции продукта объединяли, концентрировали, а затем повторно очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-10% метанол в ДХМ). Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением смеси четырех продуктов (два диастереомера и их соответствующие энантиомеры (1,665 г). ЯМР смеси: 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,35 (д, J=5,45 Гц, 1Н), 4,50-4,71 (м, 1Н), 4,34 (уш. с., 1Н), 3,53-3,69 (м, 1Н), 3,23 (с, 3Н), 3,03-3,19 (м, 2Н), 1,77-2,09 (м, 5Н), 1,65 (уш. с., 1Н), 1,07-1,39 (м, 13Н), 0,94 (д, J=6,49 Гц, 3Н); МС (ESI) m/z 378,0 [М+1]+. Сырое вещество отделяли хиральной SFC, используя колонку AD-H, с получением 4 соединений, обозначенным как Пик 1-Пик 4, где ПИК 1 является первым элюированным соединением и ПИК 4 является последним элюированным соединением. Стереохимию пиков 1-4 определяли способами, известными специалистам в данной области.
ПИК 1: 4-((1S,3S,4S)-3-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-((1R,4S)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. 0, 3482 г, 0,922 ммоль, 22% выход. 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,88 (д, J=6,64 Гц, 1Н), 8,34 (уш. с., 1Н), 7,07 (д, J=7,03 Гц, 1Н), 4,58 (д, J=5,08 Гц, 1Н), 4,10 (кв, J=5,08 Гц, 1Н), 3,51-3,92 (м, 1Н), 3,44 (дд, J=7,03, 5,08 Гц, 1Н), 3,23 (с, 3Н), 3,17 (д, J=5,47 Гц, 3Н), 3,09 (уш. с., 1Н), 2,98 (уш. с., 1Н), 2,55 (д, J=7,03 Гц, 1Н), 1,77-2,23 (м, 5Н), 1,66 (д, J=12,49 Гц, 1Н), 1,04-1,35 (м, 6Н), 0,94 (д, J=5,86 Гц, 3Н).
ПИК 2: 4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. 0,4146 г, 1,098 ммоль, 26,2% выход. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,88 (д, J=6,25 Гц, 1Н), 8,34 (уш. с., 1Н), 7,07 (д, J=7,03 Гц, 1Н), 4,57 (уш. с., 1Н), 4,11 (уш. с., 1Н), 3,50-3,67 (м, 1Н), 3,23 (с, 2Н), 3,17 (уш. с., 2Н), 3,03-3,13 (м, 1Н), 2,94-3,02 (м, 1Н), 2,89 (кв, J=7,16 Гц, 4Н), 1,60-2,22 (м, 4Н), 0,87-1,37 (м, 13Н).
ПИК 3: 4-((1S,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. 0,3145 г, 0, 833 ммоль, 19,9% выход. 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 9,25 (д, J=7,42 Гц, 1Н), 8,35 (уш. с., 1Н), 7,05 (д, J=6,64 Гц, 1Н), 6,76-6,92 (м, 1Н), 4,53 (д, J=3,90 Гц, 1Н), 4,32 (уш. с., 1Н), 4,03-4,17 (м, 1Н), 3,52-3,84 (м, 1Н), 3,40-3,50 (м, 1Н), 3,13-3,26 (м, 4Н), 3,00-3,12 (м, 1Н), 1,77-2,12 (м, 5Н), 1,10-1,69 (м, 9Н), 0,94 (д, J=6,64 Гц, 3Н).
ПИК 4: 4-((1R,3S,4S)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. 0,4715 г, 1,249 ммоль, 29,8% выход. 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 9,46-9,75 (м, 1Н), 8,35 (с, 1Н), 4,57 (уш. с., 1Н), 4,35 (уш. с., 1Н), 3,60-3,79 (м, 1Н), 3,23 (с, 4Н), 3,00-3,15 (м, 1Н), 2,87-2,99 (м, 1Н), 1,75-2,06 (м, 5Н), 1,06-1,73 (м, 11Н), 0,94 (д, J=6,25 Гц, 3Н).
Пример 18: 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 2-Циклогекс-2-енил-изоиндол-1,3-дион. К раствору 3-бромциклогексена (500 г, 3,12 ммоль) в ДМФ (2000 мл) добавляли фталимид калия (580 г, 3,12 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 ч. Реакционную смесь разбавляли водой (1000 мл), экстрагировали этилацетатом (3 раза), и объединенные органические слои концентрировали с получением 2-циклогекс-2-енил-изоиндол-1,3-дион (520 г, 2,30 моль) в виде серого твердого вещества.
B. 2-(2-Бром-3-гидроксициклогексил)изоиндол-1,3-дион. 2-Циклогекс-2-енил-изоиндол-1,3-дион (520 г, 2,30 моль) и N-бромсукцинимид (416 г, 2,35 моль) перемешивали в сорастворителе хлороформе (3000 мл) и этаноле (120 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Когда ВЭЖХ показала расход исходного вещества, реакционную смесь концентрировали с получением твердого остатка, который разбавляли раствором гидрохлорида (450 мл, 2,0 моль) и ТГФ (2000 мл), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали с получением сырого продукта. Сырой продукт промывали этанолом (2 раза) с получением 2-(2-бром-3-гидроксициклогексил)изоиндол-1,3-диона (400 г, 1,23 моль) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (CD3OD, 400 МГц): δ ч./млн 7,87 (м, 4Н), 4,70 (м, 1Н), 4,33 (м, 1Н), 3,70 (м, 1Н), 2,15 (м, 2Н), 1,88 (м, 2Н), 1,53 (м, 2Н).
C. 2-(3-Гидроксициклогексил)изоиндол-1,3-дион. К перемешанному раствору 2-(2-бром-3-гидроксициклогексил)изоиндол-1,3-диона (400 г, 1,23 моль) и 2,2'-азобис(2-метилпропионитрил) (20 г) в толуоле (4000 мл) и метаноле (400 мл) добавляли три-н-бутилолово гидрид (430 г, 1,48 моль), и реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 64 ч. Реакционную смесь концентрировали с получением сырого продукта. Сырой продукт промывали петролейным эфиром и этилацетатом (1:1) с получением 2-(3-гидроксициклогексил)изоиндол-1,3-диона (240 г, 0,98 моль) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (CD3OD, 400 МГц): δ ч./млн 7,82 (м, 4Н), 4,16 (м, 1Н), 3,63 (м, 1Н), 2,13 (м, 2Н), 1,98 (д, 2Н), 1,89 (м, 1Н), 1,68 (т, 1Н), 1,46 (м, 1Н), 1,31(м, 1Н).
D. (1S,3R)-2-(3-Гидроксициклогексил)изоиндол-1,3-дион и (1R,3S) 3-(1,3-диоксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)циклогексиловый эфир уксусной кислоты. Раствор 2-(3-гидрокси-циклогексил)изоиндол-1,3-диона (240 г, 0,98 моль) и липазы В (87 г) в ТГФ (3000 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 1~2 ч. Затем к раствору добавляли виниловый эфир уксусной кислоты (252 г, 2,88 моль), и реакционную смесь перемешивали при комн. темп, в течение 3~5 ч. Затем реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали с получением сырого продукта. Сырой продукт очищали на силикагеле (элюируя петролейным эфиром/этилацетатом = 10:1) с получением (1S,3R)-2-(3-гидроксициклогексил)изоиндол-1,3-диона (Rf=0,6, петролейный эфир/этилацетат = 3/1, 90 г, 0,37 моль, выход: 39%) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (CD3OD, 400 МГц): δ ч./млн 7,82 (м, 4Н), 4,16 (м, 1Н), 3,63 (м, 1Н), 2,13 (м, 2Н), 1,98 (м, 2Н), 1,89 (м, 1Н), 1,68 (м, 1Н), 1,46 (м, 1Н), 1,31(м, 1Н). (1R,3S) 3-(1,3-диоксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)циклогексиловый эфир уксусной кислоты (Rf=0,2, петролейный эфир/этилацетат=3/1, 110 г, 0,38 моль, выход: 39%) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (CD3OD, 400 МГц): δ ч./млн 7,83 (м, 4Н), 4,78 (м, 1Н), 4,23 (м, 1Н), 2,33 (м, 2Н), 2,13 (м, 2Н), 2,07 (м, 5Н), 1,95 (м, 1Н), 1,74 (м, 1Н), 1,46 (м, 1Н).
E. (1S,3R)-3-Аминоциклогексанол. К раствору (1S,3R)-2-(3-гидроксициклогексил)изоиндол-1,3-диона (90 г, 0,37 моль) в этаноле (1500 мл) добавляли гидразин (90 г, 1,8 моль), и реакционный раствор перемешивали при 100°С в течение 3 ч. Реакционный раствор фильтровали, и фильтрат концентрировали с получением (1S,3R)-3-аминоциклогексанола (25 г, 0,21 ммоль) в виде желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР (CD3OD, 400 МГц) δ ч./млн 3,54 (м, 1Н), 2,65 (м, 1Н), 2,12 (м, 1Н), 1,92 (м, 1Н), 1,89 (м, 2Н), 1,32 (м, 1Н), 1,06 (м, 2Н).
F. Этил-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат. К перемешиваемому раствору этил-4-хлор-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (4,38 г, 18,82 ммоль) и (1S,3R)-3-аминоциклогексанола (2,276 г, 19,76 ммоль) в этаноле (75 мл) добавляли ДИЭА (4,93 мл, 28,2 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 60°С в течение 2 ч, охлаждали и концентрировали, затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле (20-100% этилацетат/гексан). Фракцию целевого продукта объединяли и концентрировали с получением этил-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (5 г, 16,06 ммоль, 85% выход) в виде белой пены. МС (ESI) m/z 312,1 [М+1]+.
G. 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновая кислота. К перемешиваемому раствору этил-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (5 г, 16,06 ммоль) в этаноле (50 мл) добавляли 2М гидроксид натрия (20 мл, 40,0 ммоль). Перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь нейтрализовывали, добавляя насыщенную лимонную кислоту. Полученный осадок фильтровали и сушили с получением 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновой кислоты (4,5 г, 15,88 ммоль, 99% выход) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 13,21 (уш. с., 1Н), 8,44-8,54 (м, 2Н), 4,74 (д, J=3,90 Гц, 1Н), 3,97-4,12 (м, 1Н), 3,56 (д, J=3,12 Гц, 1Н), 2,46 (с, 3Н), 2,05-2,16 (м, 1Н), 1,84 (д, J=10,15 Гц, 1Н), 1,65-1,80 (м, 2Н), 1,11-1,36 (м, 4Н). МС (ESI) m/z 284,1 [М+1]+.
H. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновую кислоту (4,5 г, 15,88 ммоль) и HATU (9,06 г, 23,82 ммоль) растворяли в ДМФ (75 мл) и перемешивали в течение 5 мин при комнатной температуре перед добавлением хлорида аммония (4,25 г, 79 ммоль) и ДИЭА (13,87 мл, 79 ммоль). Реакционная смесь становилась желтой при добавлении основания. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 1 ч, затем разделяли между водой и этилацетатом. Органический слой промывали один раз насыщенным солевым раствором, затем сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (4,19 г, 14,84 ммоль, выход 93%) в виде не совсем белого твердого вещества. МС (ESI) m/z 283,2 [М+1]+.
I. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемой суспензии 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (302 мг, 1,070 ммоль) в ДХМ (10 мл) и ацетоне (10 мл) добавляли 3-хлорпероксибензойную кислоту (479 мг, 2,139 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Сырую реакционную смесь гасили, добавляя 10 мл 10% раствора тиосульфата натрия, перемешивали в течение 5 минут, затем разделяли между этилацетатом и водой. Органический слой промывали насыщенным бикарбонатом натрия и насыщенным солевым раствором. Объединенные водные слои экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (259 мг, 0,824 ммоль, 77% выход) в виде белого твердого вещества. МС (ESI) m/z 315,2 [М+1]+.
J. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемому раствору 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (0,178 г, 0,566 ммоль) и (1R,4R)-4-метоксициклогексанамин (0,146 г, 1,132 ммоль) в ДМСО (1,132 мл) добавляли ДИЭА (0,395 мл, 2,265 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 100°С в течение 17 ч. Сырую реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-15% метанол/этилацетат). Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (0,08 г, 0,220 ммоль, 38,9% выход) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1H-ЯМР (CD3OD, 400 МГц): δ ч./млн 8,29 (с, 1Н), 3,99-4,04 (м, 1Н), 3,76 (м, 1Н), 3,50-3,63 (м, 1Н), 3,37 (с, 3Н), 3,24 (м, 1Н), 3,23 (м, 1Н), 1,92-2,12 (м, 6Н), 1,83-1,87 (м, 1Н), 1,19-1,41(м, 8Н). МС (ESI) m/z 364,6 [М+1]+.
Пример 19: 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил
А. 4-Хлор-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил. (1R,4R)-4-Метоксициклогексанамин (6,37 г, 49,3 ммоль), 2,4-дихлорпиримидин-5-карбонитрил (6 г, 34,5 ммоль) и ДИЭА (9,03 мл, 51,7 ммоль) перемешивали в ТГФ (180 мл) при -10°С (баня соль лед) и перемешивали при той же температуре в течение 5 ч. Реакционную смесь перемешивали еще в течение ночи, при этом температура медленно поднималась до комнатной. Анализ реакционной смеси с помощью ЖХ/МС показал образование продуктов с соотношением около 3:7. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, разбавляли водой (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (2х). Объединенные органические слои промывали водой и насыщенным солевым раствором и сушили над сульфатом магния. Агент для сушки удаляли путем фильтрации, и раствор концентрировали. Полученную сырую смесь очищали с помощью флэш-хроматографии (0-20% этилацетат в гексане) с получением 4-хлор-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (5,79 г, 21,71 ммоль, 62,9% выход; 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц): δ ч./млн 8,74 (д, J=8,2 Гц, 1Н), 8,60-8,72 (м, 1Н), 3,58-3,80 (м, 1Н), 3,18 (д, J=2,0 Гц, 3Н), 2,97-3,12 (м, 1Н), 1,96 (д, J=10,9 Гц, 2Н), 1,83 (д, J=10,5 Гц, 2Н), 1,21-1,39 (м, 2Н), 1,06-1,22 (м, 2Н); МС (ES) m/z 267,2 [М+1]+) в виде белого твердого вещества и 2-хлор-4-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил (2,5 г, 9,37 ммоль, 27,2% выход; 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц): δ ч./млн 8,50 (с, 1Н), 8,31 (д, J=7,8 Гц, 1Н), 3,90 (дтд, J=11,6, 7,6, 4,1 Гц, 1Н), 3,19 (с, 3Н), 2,98-3,10 (м, 1Н), 1,98 (д, J=10,5 Гц, 2Н), 1,77 (д, J=11,3 Гц, 2Н), 1,36-1,54 (м, 2Н), 1,05-1,22 (м, 2Н). МС (ES) m/z 267,1 [М+1]+) в виде белого твердого вещества.
Региохимию разделенных изомеров подтверждали следующими экспериментами:
4-Хлор-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил (50 мг, 0,187 ммоль), диацетоксипалладий (42,1 мг, 0,187 ммоль) и формиат аммония (59,1 мг, 0,937 ммоль) в метаноле (1 мл) перемешивали при 70°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали при комнатной температуре, и фильтровали через пад из целита. Полученный раствор концентрировали и подвергали флэш-хоматографии (0-15% метанол в ДХМ) с получением 2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц; измеряли при комнатной температуре): δ ч./млн 8,66 (д, J=2,7 Гц, 1Н), 8,59 (д, J=3,1 Гц, 1Н), 8,22 (д, J=8,2 Гц, 1Н), 3,62-3,77 (м, 1Н), 3,18 (с, 3Н), 2,99-3,12 (м, 1Н), 1,90-2,02 (м, 2Н), 1,84 (д, J=10,5 Гц, 2Н), 1,21-1,37 (м, 2Н), 1,06-1,21 (м, 2Н).
1Н-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц; измеряли при 80°С): δ ч./млн 8,57 (уш. с., 1Н), 7,91 (д, J=7,0 Гц, 1Н), 3,68-3,85 (м, 1Н), 3,05-3,16 (м, 1Н), 3,02 (с, 3Н), 1,92-2,05 (м, 2Н), 1,87 (д, J=10,2 Гц, 2Н), 1,26-1,41 (м, 2Н), 1,11-1,26 (м, 2Н).
Тот же метод, описанный выше, использовали для 2-хлор-4-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила с получением 4-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц; измеряли при комнатной температуре): δ ч./млн 8,56 (д, J=15,2 Гц, 1Н), 7,74-7,91 (м, 1Н), 3,86-4,11 (м, 2Н), 3,19 (с, 3Н), 3,12 (д, J=5,1 Гц, 1Н), 1,92-2,04 (м, 2Н), 1,78 (д, J=10,5 Гц, 2Н), 1,35-1,52 (м, 2Н), 1,05-1,18 (м, 2Н). 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц; измерено при 80°С): δ ч./млн 8,53 (д, J=28,1 Гц, 1Н), 7,47 (уш. с., 1Н), 3,93-4,08 (м, 1Н), 3,16 (д, J=5,5 Гц, 1Н), 1,91-2,07 (м, 2Н), 1,84 (д, J=10,5 Гц, 2Н), 1,37-1,54 (м, 2Н), 1,10-1,21 (м, 2Н).
В. Гидрохлорид (1S,3R)-3-аминоциклогептанола. К энергично перемешиваемому метанолу (60 мл) при 0°С добавляли ацетилхлорид (5,11 мл, 72,0 ммоль), и полученную смесь оставляли перемешиваться в течение 30 мин. Добавляли трет-бутил-(1R,3S)-3-гидроксициклогептилкарбамат (5500 мг, 23,98 ммоль; синтез описан в настоящем описании), и полученную смесь затем перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении до масла, которое растирали с этиловым эфиром (100 мл) в течение ночи. Твердые вещества фильтровали, промывали диэтиловым эфиром и сушили при пониженном давлении в течение нескольких часов с получением гидрохлорида (1S,3R)-3-аминоциклогептанола (3780 мг, 22,82 ммоль, 95% выход) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 7,85 (уш. с., 3Н), 4,69 (д, J=7,42 Гц, 1Н), 3,64 (т, J=8,79 Гц, 1Н), 3,07-3,21 (м, 1Н), 2,05 (д, J=12,89 Гц, 1Н), 1,69-1,94 (м, 2Н), 1,28-1,68 (м, 7Н). МС (ESI) m/z 130,1 [М+1]+.
С. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил. К перемешиваемому раствору 4-хлор-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (200 мг, 0,750 ммоль) и гидрохлорида (1S,3R)-3-аминоциклогептанола (186 мг, 1,125 ммоль) в ДМФ (4 мл) добавляли ДИЭА (0,458 мл, 2,62 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 70°С в течение 4 ч и затем оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды в течение ночи. ДМФ удаляли при пониженном давлении и оставшееся твердое вещество очищали, используя хроматографию на силикагеле (0-50% этилацетат + 10% 7 н аммоний в метаноле в гексане) с получением 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (210 мг, 0,584 ммоль, 78% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,07-8,23 (м, 1Н), 7,06-7,61 (м, 2Н), 4,49-4,63 (м, 1Н), 4,00-4,27 (м, 1Н), 3,55-3,82 (м, 2Н), 3,23 (с, 3Н), 3,00-3,16 (м, 1Н), 1,07-2,08 (м, 18Н). МС (ESI) m/z 360,5 [М+1]+.
Пример 20: 2-((1R,4R)-4-Этоксициклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидрокси-3-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил
A. (1R,4R)-4-(тритиламино)циклогексанол. К охлажденному (0°С) раствору (1R,4R)-4-аминоциклогексанола (10 г, 87 ммоль) в ДХМ (250 мл) и ТЭА (11,2 г, 112 ммоль) добавляли тритил хлорид (24,2 г, 87 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Насыщенный водный бикарбонат натрия добавляли к гашенной реакционной смеси, и водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенные экстракты промывали солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия. Фильтрование и концентрирование в вакууме давало сырой продукт, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (50% этилацетат в ДХМ) с получением соединения, указанного в заголовке (24,8 г, 70 ммоль, 80% выход) в виде белого твердого вещества. МС (ESI) m/z 243,2 [М - 4-аминоциклогексанол]+.
B. (1R,4R)-4-Этокси-N-тритилциклогексанамин. К охлажденному (0°С) раствору (1R,4R)-4-(тритиламино)циклогексанола (15,0 г, 42 ммоль) в ДМФ (100 мл) добавляли гидрид натрия (3,4 г, 84 ммоль, 60% в минеральном масле) и этилйодид (7,2 г, 46 ммоль) при 0°С. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи в атмосфере азота. Насыщенный водный раствор хлорида аммония добавляли к гашенной реакционной смеси, и водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенные экстракты промывали насыщенным солевым раствором и сушили над безводным сульфатом натрия. Фильтрование и концентрирование в вакууме давало сырой продукт, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (5% этилацетат в петролейном эфире), с получением соединения, указанного в заголовке (11,9 г, 31 ммоль, 79% выход) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 7,56-7,54 (м, 6Н), 7,27-7,20 (м, 6Н), 7,18-7,14 (м, 3Н), 3,42-3,38 (кв, 2Н), 3,09-3,04 (м, 1Н), 2,25-2,21 (м, 1Н), 1,80-1,78 (м, 2Н), 1,38 (с, 1Н), 1,27-1,25 (м, 2Н), 1,10 (т, J=7,2 Гц, 3Н), 1,01-0,88 (м, 4Н); МС (ESI) m/z 243,2 [М-4-этоксициклогексанамин]+.
C. (1R,4R)-4-Этоксициклогексанамин. К охлажденному (0°С) раствору (1R,4R)-4-этокси-N-тритилциклогексанамина (13,1 г, 34 ммоль) в ДХМ (10 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (18 мл) при 0°С. Полученная смесь была темно красная. Добавляли триэтилсилан (5 мл) до обесцвечивания полученной смеси. Реакционную смесь перемешивали при 0°С дополнительные 15 минут. После удаления всех летучих веществ в вакууме, твердый остаток дополнительно сушили в высоком вакууме в течение 2 ч с получением сырого продукта в виде белого твердого вещества. Сырой продукт растворяли в этилацетате и водном растворе гидрохлорида (150 мл, 0,25 моль/л). Органический слой удаляли, и водный слой дважды промывали этилацетатом. Концентрирование водного слоя в высоком вакууме давало сырую соль гидрохлорида целевого амина (6,1 г, 34 ммоль, 100% выход) в виде белого твердого вещества, который использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 144,0 [М+Н]+.
D. 4-Хлор-2-((1R,4R)-4-этоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил. К охлажденному (-60°С) раствору (1R,4R)-4-этоксициклогексанамина (6,82 г, 37,9 ммоль) и 2,4-дихлорпиримидин-5-карбонитрила (6 г, 34,5 ммоль) в ТГФ (115 мл) по каплям добавляли ДИЭА (15,02 мл, 86 ммоль). Полученную смесь перемешивали при -60°С в течение 1 ч и затем оставляли нагреваться до комнатной температуры в течение ночи. Полученную смесь концентрировали, и твердый остаток очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (14% этилацетат в петролейном эфире). Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением 2-хлор-4-((1R,4R)-4-этоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (3,33 г, 11,86 ммоль, 34,4% выход) и 4-хлор-2-((1R,4R)-4-этоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил (5,5 г, 19,59 ммоль, 56,8% выход; 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,62-8,87 (м, 2Н), 3,61-3,86 (м, 1Н), 3,44 (дд, J=7,03, 2,34 Гц, 2Н), 3,12-3,26 (м, 1Н), 1,75-2,15 (м, 4Н), 1,13-1,44 (м, 4Н), 1,08 (тд, J=6,93, 1,76 Гц, 3Н); МС (ESI) m/z 281,1 [М+1]+) в виде белого твердого вещества. Региохимия главного изомера была подтверждена путем сравнения с протоновым спектром 4-хлор-2-((1R,4R)-4-метоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (синтез описан в настоящем описании).
Е. (1S,3R)-3-(Дибензиламино)циклогексанол. К суспензии (1S,3R)-3-аминоциклогексанола (5 г, 43,4 ммоль; получен как описано в Tetrahedron: Asymmetry 15 (2004) 2051-2056) и бикарбоната натрия (12,03 г, 143 ммоль) в этаноле (100 мл) добавляли (хлорметил)бензол (15,01 мл, 130 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали при 75°С в течение ночи. После завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС и ТСХ, реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали. Твердый остаток затем растворяли в ДХМ (250 мл) и промывали водным раствором гидроксида натрия (1н, 2×100 мл) и насыщенным солевым раствором (2×100 мл). Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом магния, концентрировали и очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0%-80% этилацетат в гексане) с выходом (1S,3R)-3-(дибензиламино)циклогексанола (11,70 г, 91%) в виде густого желтого масла. 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 7,26-7,37 (м, 8Н), 7,17-7,22 (м, 2Н), 4,56 (д, J=4,30 Гц, 1Н), 3,57 (с, 4Н), 3,16-3,26 (м, 1Н), 2,41 (тт, J=3,17, 11,86 Гц, 1Н), 1,99-2,06 (м, 1Н), 1,72 (д, J=8,20 Гц, 2Н), 1,63-1,69 (м, 1Н), 1,18-1,28 (м, 2Н), 0,98 (т, 2Н); МС (ESI) m/z 296,4 [М+1]+.
F. (R)-3-(Дибензиламино)циклогексанон. Оксалилхлорид (3,81 мл, 43,6 ммоль) растворяли в сухом ДХМ (150 мл) и охлаждали до -78°С. В реакционную смесь по каплям добавляли ДМСО (6,75 мл, 95,0 ммоль) в сухом ДХМ (20 мл), и реакционную смесь перемешивали в течение 15 минут при -78°С. Затем по каплям добавляли (1S,3R)-3-(дибензиламино)циклогексанол (11,7 г, 39,6 ммоль) в сухом ДХМ (100 мл), используя вспомогательную воронку, и реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 15 минут. Затем добавляли ТЭА (27,6 мл, 198 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 1 ч. Баню с сухим льдом удаляли, и реакционную смесь оставляли нагреваться при комнатной температуре и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь промывали насыщенным солевым раствором (5×500 мл), органический слой отделяли, сушили над сульфатом магния и концентрировали с выходом (R)-3-(дибензиламино)циклогексанона (10,2 г, 88%) в виде коричневого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 7,26-7,39 (м, 8Н), 7,17-7,25 (м, 2Н), 3,56-3,70 (м, 4Н), 2,71-2,81 (м, 1Н), 2,60-2,69 (м, 1Н), 2,25-2,42 (м, 2Н), 2,04-2,11 (м, 1Н), 1,88-1,99 (м, 2Н), 1,69-1,82 (м, 1Н), 1,18-1,33 (м, 1Н); МС (ESI) m/z 294,4 [М+1]+.
G. (3R,5R)-N,N-Дибензил-1-оксаспиро[2.5]октан-5-амин и (3S,5R)-N,N-дибензил-1-оксаспиро[2.5]октан-5-амин. К желтому раствору (R)-3-(дибензиламино)циклогексанона (10,2 г, 34,8 ммоль) и йодиду триметилсульфония (14,90 г, 73,0 ммоль) в сухом ДМСО (260 мл) порциями добавляли трет-бутоксид натрия (6,68 г, 69,5 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи в атмосфере азота. После завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС и ТСХ, реакционную смесь гасили 1 л воды и экстрагировали этилацетатом (2×800 мл). Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, концентрировали и сушили с выходом смеси (3R,5R)-N,N-дибензил-1-оксаспиро[2.5]октан-5-амина и (3S,5R)-N,N-дибензил-1-оксаспиро[2.5]октан-5-амина (10,6 г, 99%) в виде желтого твердого вещества. Смесь использовали как таковую в следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 308,4 [М+1]+.
H. (1R,3R)-3-(Дибензиламино)-1-метилциклогексанол и (1S,3R)-3-(дибензиламино)-1-метилциклогексанол. К смеси твердого литий алюминий гидрида (95% LAH, 3,47 г, 87 ммоль) в ТГФ (230 мл) очень медленно добавляли прозрачный бледно-желтый раствор выше описанной смеси (3R,5R)-N,N-дибензил-1-оксаспиро[2.5]октан-5-амина и (3S,5R)-N,N-дибензил-1-оксаспиро[2.5]октан-5-амина (10,69 г, 34,8 ммоль) в ТГФ (230 мл) при 0°С в атмосфере азота. Температуру реакционной смеси поднимали до комнатной и затем нагревали при температуре 65°С в течение ночи в атмосфере азота. После завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС и ТСХ, реакционную смесь переносили в круглодонную колбу и затем разбавляли ТГФ (100 мл), охлаждали до 0°С и при перемешивании по каплям добавляли насыщенный водный раствор сульфата натрия до тех пор, пока реакционная смесь переставала пузыриться. Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и затем фильтровали через Целит в грубо сплавленной колбе в круглодонную колбу. Фильтрованную лепешку тщательно промывали ТГФ, и бесцветный фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученную сырую смесь очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0%-60% этилацетат в гексане) с выходом быстро элюируемого изомера (1R,3R)-3-(дибензиламино)-1-метилциклогексанола (5,5 г, 50%; 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 7,25-7,36 (м, 8Н), 7,15-7,21 (м, 2Н), 3,85 (с, 1Н), 3,55 (с, 4Н), 2,86 (тт, J=3,37, 12,06 Гц, 1Н), 1,70-1,81 (м, 2Н), 1,38-1,49 (м, 3Н), 1,32 (т, J=12,30 Гц, 1Н), 1,15-1,27 (м, 2Н), 1,12 (с, 3Н); МС (ESI) m/z 310,4 [М+1]+) в виде белого твердого вещества, и затем медленно элюируемого изомера (1S,3R)-3-(дибензиламино)-1-метилциклогексанола (5,1 г, 47%; 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 7,26-7,36 (м, 8Н), 7,16-7,23 (м, 2Н), 4,38 (с, 1Н), 3,49-3,63 (м, 4Н), 2,46 (д, J=8,98 Гц, 1Н), 1,67-1,80 (м, 2Н), 1,59 (д, J=9,76 Гц, 1Н), 1,33-1,47 (м, 2Н), 1,17-1,30 (м, 2Н), 0,98-1,13 (м, 1Н), 0,89 (с, 3Н); МС (ESI) m/z 310,4 [М+1]+) в виде густого желтого масла. Эксперимент COSY ЯМР и данные 1Н-ЯМР, приведенные выше, использовали для проверки региохимии аминоспиртов. Для медленно элюированного изомера NOE (посредством эксперимента NOESY) наблюдали между протонами на углероде аминогруппы гидроксильной группе и углероде метильной группе. Это подтверждает cis расположение этих двух функциональных групп (транс расположение, которое лишено этой пространственной близости, не будет демонстрировать такой эффект), которое в свою очередь подтверждает, что этот изомер (1S,3R)-3-(дибензиламино)-1-метилциклогексанол.
I. (1S,3R)-3-Амино-1-метилциклогексанол. Раствор (1S,3R)-3-(дибензиламино)-1-метилциклогексанола (5,0 г, 16,16 ммоль) в этаноле (150 мл) обрабатывали гидроксидом палладия на угле и перемешивали в баллоне, наполненном газообразным водородом, в течение ночи. После завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС, реакционную смесь фильтровали через пад из целита, и фильтрат концентрировали с выходом (1R,3R)-3-амино-1-метилциклогексанола (1,3 г, 62%) в виде густого желтого масла. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 2,87 (уш. с., 1Н), 1,64-1,74 (м, 1Н), 1,47-1,59 (м, 2Н), 1,21-1,40 (м, 4Н), 1,11-1,20 (м, 1Н), 1,02 (с, 3Н); МС (ESI) m/z 130,2 [М+1]+.
J. 2-((1R,4R)-4-Этоксициклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидрокси-3-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил. 4-Хлор-2-((1R,4R)-4-этоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил (350 мг, 1,247 ммоль), (1S,3R)-3-амино-1-метилциклогексанол (242 мг, 1,870 ммоль) и ДИЭА (0,327 мл, 1,870 ммоль) растворяли в ДМФ (3,5 мл) в завинчивающейся крышкой флаконе. Реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 4 ч. После завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС и ТСХ, реакционную смесь концентрировали и полученное твердое вещество очищали с помощью хроматографии на силикагеле, используя градиент 0-100% этилацетат в гексане. Фракции целевого продукта объединяли и концентрировали с получением 2-((1R,4R)-4-этоксициклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидрокси-3-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (0,356 г, 76% выход, 98,0% чистый) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,09-8,24 (м, 1Н), 7,28-7,63 (м, 2Н), 4,71-4,90 (м, 1Н), 4,21 (д, J=3,51 Гц, 1Н), 3,57-3,78 (м, 1Н), 3,43 (кв, J=7,03 Гц, 2Н), 3,11-3,23 (м, 1Н), 1,78-2,02 (м, 4Н), 1,48-1,74 (м, 5Н), 1,16-1,47 (м, 6Н), 1,11-1,16 (м, 4Н), 1,08 (т, 3Н); МС (ESI) m/z 374,5 [М+1]+.
Пример 21: 2-((1R,4R)-4-Этоксициклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил
А. 2-Хлор-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил и 4-хлор-2-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил. 2,4-Дихлорпиримидин-5-карбонитрил (900 мг, 5,17 ммоль) в безводном этаноле (5 мл) и (1R,3S)-3-аминоциклогексанол (624 мг, 5,43 ммоль; получен как описано в Tetrahedron: Asymmetry 15 (2004) 2051-2056) в безводном этаноле (5 мл) перемешивали при -60°С и по каплям добавляли затем ДИЭА (1,0 г, 7,75 ммоль). Смесь перемешивали при -60°С в течение 1 ч и затем при комнатной температуре в течение ночи. Летучие фракции удаляли, и твердый остаток очищали на силикагеле (элюируя 9,1%-33% этилацетатом в петролейном эфире) с получением 4-хлор-2-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (600 мг, 2,38 ммоль, выход 46%) в виде белого твердого вещества и 2-хлор-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (270 мг, 1,07 ммоль, выход 20%; 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,55 (с, 1Н), 8,46 (д, J=7,81 Гц, 1Н), 4,83 (д, J=3,90 Гц, 1Н), 3,95-4,11 (м, 1Н), 3,45-3,61 (м, 1Н), 1,93 (д, J=11,71 Гц, 1Н), 1,60-1,84 (м, 3Н), 1,03-1,50 (м, 4Н); МС (ESI) m/z 253,2 [М+1]+) в виде белого твердого вещества. Региохимия минорного региоизомера была подтверждена в стадии В ниже.
В. (1S,3R)-3-(5-(Аминометил)пиримидин-4-иламино)циклогексанол. К смеси 2-хлор-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (70 мг, 0,277 ммоль) и гидроксида аммония (500 мкл, 12,84 ммоль) в этаноле (4 мл) добавляли никель Ренея (16,26 мг, 0,277 ммоль). Полученную смесь разряжали и затем перемешивали в атмосфере водорода из баллона под давлением и температуре окружающей среды в течение ночи. Этанол удаляли в вакууме и оставшееся твердое вещество очищали, используя препаративную ВЭЖХ с обратной фазой (5-80% ацетонитрил + 0,1% ТФУ в воде + 0,1% ТФУ, в течение 30 мин). Фракции, содержащие продукт, концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество еще раз растворяли в метаноле (5 мл), пропускали через трубку SPE с полимером Varian Stratospheres НСО3 для удаления ТФУ (0,9 ммоль бикарбонат эквив.), и затем концентрировали при пониженном давлении с получением соединения, указанного в заголовке, в виде масла, которое использовали только для целей ЯМР. Региохимия была подтверждена присутствием двух различных ароматических пиков в спектре 1Н-ЯМР, и наблюдением сигнала NOE между С5 водородами метилена и лишь одним из этих ароматических пиков в спектре NOESY. 1H-ЯМР (400 МГц, DMCO-d6) δ ч./млн 8,32 (с, 1Н), 7,92 (с, 1Н), 7,32 (д, J=7,48 Гц, 1Н), 4,67 (д, J=3,87 Гц, 1Н), 3,88-4,01 (м, 1Н), 3,59 (с, 2Н), 3,49 (д, J=3,61 Гц, 1Н), 2,06-2,16 (м, 1Н), 1,99 (уш. с., 2Н), 1,81 (т, J=13,28 Гц, 2Н), 1,69 (дт, J=13,35, 3,51 Гц, 1Н), 1,01-1,35 (м, 4Н). МС (ESI) m/z 223,5 [М+1]+.
С. 2-((1R,4R)-4-Этоксициклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил. Смесь 2-хлор-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил (270 мг, 1,07 ммоль), гидрохлорида (1R,4R)-4-этоксициклогексанамина (289 мг, 1,60 ммоль; синтез описан в настоящем описании) и карбоната цезия (698 мг, 2,14 ммоль) в безводном н-бутаноле (10 мл) перемешивали при 80°С в течение 1 дня и затем при 120°С в течение 5 ч. Смесь экстрагировали между водой и ДХМ. Органический слой объединяли, концентрировали и очищали на силикагеле (элюируя 9,1%-33% этилацетатом в петролейном эфире) с получением 2-((1R,4R)-4-этоксициклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (202 мг, 0,56 ммоль, выход 52%) в виде белого порошка. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ ч./млн 8,11 (с, 1Н), 7,10 (с, 1Н), 6,95 (с, 1Н), 4,51 (д, J=3,6, 1H), 4,05 (с, 1H), 3,67 (с, 1H), 3,58-3,55 (м, 1H), 3,47 (кв, J=6,8, 2H), 3,24-3,19 (м, 1H), 2,00-1,90 (м, 5H), 1,73 (с, 3Н), 1,47-1,25 (м, 8Н), 1,10 (т, J=7,2, 3Н); MC(ESI): m/z 359,9 [М+1]+.
Пример 22: 2-(Циклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил
А. 2-(Циклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил. Раствор циклогексанамина (0,181 мл, 1,583 ммоль) в ДМСО (5 мл), 2-хлор-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (0,200 г, 0,791 ммоль; синтез описан в настоящем описании) и ДИЭА (0,276 мл, 1,583 ммоль) нагревали при 70°С в течение ночи. После завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС и ТСХ, реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры и концентрировали. Полученное сырое вещество очищали с помощью хроматографии на силикагеле, используя градиент 0%-70% этилацетата (содержащие 10% метанол, насыщенный аммиаком) в гексане. Фракцию целевого продукта объединяли и концентрировали с выходом 2-(циклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (0,220 г, 88% выход, 98,1% чистый) в виде светло-желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,08-8,21 (м, 1Н), 7,08-7,56 (м, 2Н), 4,74 (д, J=3,90 Гц, 1Н), 3,93-4,13 (м, 1Н), 3,44-3,77 (м, 2Н), 1,83-2,02 (м, 2Н), 1,65-1,82 (м, 6Н), 1,58 (д, J=14,84 Гц, 1Н), 1,32-1,45 (м, 2Н), 1,08-1,30 (м, 7Н); МС (ESI) m/z 316,4 [М+1]+.
Пример 23: 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил
A. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогептиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрил. К перемешиваемому раствору 4-хлор-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (0,4 г, 2,155 ммоль) и гидрохлорида (1S,3R)-3-аминоциклогептанола (0,428 г, 2,59 ммоль; синтез описан в настоящем описании) в ДМФ (3 мл) добавляли ДИЭА (1,126 мл, 6,46 ммоль) и перемешивали при 60°С в течение 1 ч.
ЖХ-МС показала завершение реакции. Реакционную смесь охлаждали при комнатной температуре и выливали в воду (50 мл). Суспензию перемешивали в течение пяти минут, затем фильтровали с получением 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогептиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (0,404 г, 1,451 ммоль, 67,4% выход) в виде не совсем белого твердого вещества; 1Н-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц): δ ч./млн 8,39 (с, 1Н), 8,00 (д, J=7,4 Гц, 1Н), 4,63 (д, J=3,9 Гц, 1Н), 4,21 (уш. с., 1Н), 3,74 (тд, J=8,5, 4,1 Гц, 1Н), 2,47 (с, 3Н), 1,66-1,97 (м, 5Н), 1,35-1,66 ч./млн (м, 5Н); МС (ESI) m/z 138,1 [М+1]+.
B. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогептиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрил (381 мг, 1, 369 ммоль) растворяли в NMP (7 мл). Затем порциями добавляли mCPBA (675 мг, 3,01 ммоль) при 0°С, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуры в течение 90 мин. В реакционную смесь добавляли (1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексанамин (0,405 г, 2,054 ммоль) (получен как описано в настоящем описании) и ДИЭА (0,956 мл, 5,48 ммоль) и перемешивали в течение 5 мин при комнатной температуре. Реакционную смесь дополнительно перемешивали при 80°С в течение 30 мин после чего ЖХ-МС показала завершение реакционную смесь. Реакционную смесь охлаждали при комнатной температуре и разбавляли водой (30 мл). Смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 4 ч, во время чего целевой продукт выпадал в осадок. Продукт фильтровали, и собранное твердое вещество промывали водой, затем гексанами и сушили в вакууме с получением 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)-циклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (0,444 г, 1,039 ммоль, 76% выход) в виде коричневого твердое вещество; 1Н-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц): δ ч./млн 8,08-8,22 (м, 1Н), 7,06-7,59 (м, 2Н), 4,51-4,60 (м, 1Н), 4,01-4,24 (м, 1Н), 3,54-3,78 (м, 2Н), 3,44 (кв, J=7,0 Гц, 2Н), 3,11-3,24 (м, 1Н), 1,88-2,05 (м, 4Н), 1,12-1,88 (м, 14Н), 1,08 ч./млн (т, J=7,0 Гц, 3Н); МС (ESI) m/z 374,2 [М+1]+.
Пример 24: 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил
A. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогептиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбонитрил. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогептиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрил (457 мг, 1,642 ммоль; синтез описан в настоящем описании) растворяли в NMP (10 мл). Затем порциями добавляли mCPBA (736 мг, 3,28 ммоль) при 0°С, и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. ЖХ-МС указала на расход исходного вещества и на образование сульфонового промежуточного продукт. Эту реакционную смесь переносили в следующую стадию без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 311,1 [М+1]+.
B. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил. К реакционной смеси из предыдущей стадии добавляли (1R,4R)-4-аминоциклогексанол гидрохлорид (0,374 г, 2,465 ммоль) и ДИЭА (1,435 мл, 8,22 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 1 ч, и затем реакционную смесь охлаждали при комнатной температуре. Растворитель упаривали при пониженном давлении, и полученное твердое вещество очищали флэш-хроматографией (0-10% метанол, насыщенный аммиаком в ДХМ) с получением 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогептиламино)-2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (0,250 г, 0,724 ммоль, 44,0% выход) в виде коричневого твердое вещество. 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,07-8,21 (м, 1Н), 7,05-7,55 (м, 2Н), 4,52-4,59 (м, 2Н), 4,02-4,25 (м, 1Н), 3,51-3,79 (м, 2Н), 3,35-3,42 (м, 1Н), 1,75-1,97 (м, 8Н), 1,39-1,70 (м, 6Н), 1,14-1,31 (м, 4Н); МС (ESI) m/z 346,1 [М+1]+.
Пример 25: 2-(4-Гидроксибицикло[2.2.2]октан-1-иламино)-4-(изопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
A. Диметилциклогексан-1,4-дикарбоксилат. К перемешанному раствору циклогексан-1,4-дикарбоновой кислоты (100 г, 0,58 моль) в безводном метаноле (800 мл) добавляли дихлорид серы (208 г, 1,75 моль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Раствор затем концентрировали, и твердый остаток выливали в воду. Смесь экстрагировали этилацетатом (3×200 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Концентрирование при пониженном давлении давало диметилциклогексан-1,4-дикарбоксилат (105 г, 0,53 моль, 90,5% выход), который использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.
B. Диметил-1-(2-хлорэтил)циклогексан-1,4-дикарбоксилат. К раствору диизопропиламина (88 мл, 0,62 моль) в безводном ТГФ (500 мл) добавляли н-бутиллитий (240 мл, 0,6 моль, 2,5 М раствор в гексане) в течение 20 минут при -78°С. Смесь перемешивали при 0°С в атмосфере азота в течение 30 мин. К смеси диметилциклогексан-1,4-дикарбоксилата (100 г, 0,5 моль) и гексаметилфосфорамид (360 мл, 2 моль) в безводном ТГФ (800 мл) добавляли диизопропиламин лития (свежеполученный выше) в течение 30 мин при -40°С. После перемешивания в течение 1 часа при этой температуре добавляли 1-бром-2-хлорэтан (42 мл, 0,5 моль) добавляли в течение 1 ч. Смесь перемешивали в течение 3 ч при -78°С, затем нагревали при комнатной температуре и перемешивали в течение ночи. В реакционную смесь добавляли водный раствор хлористоводородной кислоты (3 н, 420 мл), и смесь перемешивали в течение 10 мин. Растворитель удаляли упариванием при пониженном давлении. Водный слой экстрагировали этилацетатом (3×200 мл), и объединенные экстракты промывали насыщенным солевым раствором (2×300 мл) и сушили над сульфатом натрия. Концентрирование при пониженном давлении давало диметил-1-(2-хлорэтил)циклогексан-1,4-дикарбоксилат (116 г, 88% выход), который использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 3,72 (с, 3Н), 3,65 (с, 3Н), 3,46-3,42 (м, 2Н), 2,33-2,21 (м, 3Н), 2,05-1,85 (м, 4Н), 1,58-1,42 (м, 2Н), 1,25-1, 15 (м, 2Н).
С. Диметилбицикло[2.2.2]октан-1,4-дикарбоксилат. К раствору диизопропиламина (77 мл, 0,54 моль) в безводном ТГФ (500 мл) добавляли н-бутиллитий (210 мл, 0,53 моль, 2,5 М раствор в гексане) в течение 20 мин при -78°С. Затем смесь перемешивали при 0°С в атмосфере азота в течение 30 мин. К смеси диметил-1-(2-хлорэтил)циклогексан-1,4-дикарбоксилата (116 г, 0,44 моль) и гексаметилфосфорамида (317 мл, 1,7 моль) в безводном ТГФ (800 мл) добавляли диизопропиламин лития (свежеполученный выше) в течение 30 мин при -40°С. Смесь перемешивали в течение 2 ч при -78°С и затем перемешивали в течение ночи, оставляя нагреваться при комнатной температуре. В реакционную смесь добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония (200 мл), и смесь перемешивали в течение 10 мин. Растворитель удаляли упариванием при пониженном давлении. Водный слой экстрагировали этилацетатом (3×200 мл). Объединенные экстракты промывали насыщенным солевым раствором (2×300 мл) и сушили над сульфатом натрия. Концентрирование при пониженном давлении давало сырой продукт, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (10% этилацетат в петролейном эфире) с получением соединения, указанного в заголовке (58 г, 0,25 моль, 50% выход в двух стадиях). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 3,65 (с, 6Н), 1,81 (с, 12Н).
D. 4-(Метоксикарбонил)бицикло[2.2.2]октан-1-карбоновая кислота. Раствор диметилбицикло[2.2.2]октан-1,4-дикарбоксилата (58,0 г, 0,25 моль) в метаноле (600 мл) нагревали при кипячении с обратным холодильником. К этому раствору добавляли раствор гидроксида калия (9,8 г, 0,175 моль) в метаноле (100 мл) и воде (12 мл) в течение 30 минут. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 24 ч. Растворитель затем удаляли, и твердый остаток разбавляли водой. Водный раствор экстрагировали этилацетатом (2x200 мл) для восстановления исходного продукта (22,0 г), и водный слой подкисляли до рН 3, добавляя хлористоводородную кислоту. Образовывался осадок и его экстрагировали этилацетатом (3×300 мл). Объединенные экстракты промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением продукта, указанного в заголовке (30,0 г, 0,14 моль, 55% выход). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 3,65 (с, 3Н), 1,81 (s. 12Н); МС (ESI) m/z 211,3 [М-Н]-.
E. Метил-4-бромбицикло[2.2.2]октан-1-карбоксилат. К суспензии 4-(метоксикарбонил) бицикло[2.2.2]октан-1-карбоновой кислоты (11,0 г, 51,8 ммоль) в ацетоне (80 мл) добавляли 1М водный раствор гидроксида натрия (51,8 мл, 51,8 ммоль). Затем добавляли раствор нитрата серебра (8,8 г, 51,9 моль) в воде (10 мл). Образовавшийся осадок собирали путем фильтрации, промывали водой, ацетоном и диэтиловым эфиром и сушили в вакууме при 115°С в течение 4 ч. Полученное (4-(метоксикарбонил)-бицикло[2.2.2]октан-1-карбонилокси)серебро (15,3 г, 47,9 ммоль) суспендировали в гексане (125 мл), затем в реакционную смесь добавляли бром (7,7 г, 48,1 ммоль) в течение 30 минут при комнатной температуре. После завершения добавления реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение еще 30 минут. Реакционную смесь фильтровали для удаления твердого вещества, и фильтровальную лепешку промывали гексаном (4×150 мл). Объединенные органические фильтраты промывали насыщенным бикарбонатом натрия (2×150 мл) и насыщенным солевым раствором (200 мл), и затем сушили над сульфатом магния. Концентрирование в вакууме давало сырой продукт, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (5% этилацетат в петролейном эфире), с получением соединения, указанного в заголовке (4,2 г, 0,17 моль, 33% выход в двух стадиях). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 3,64 (с, 3Н), 2,27-2,20 (м, 6Н), 1,98-1, 94 (м, 6Н).
F. 4-Гидроксибицикло[2.2.2]октан-1-карбоновая кислота. Метил-4-бромбицикло[2.2.2]октан-1-карбоксилат (17,0 г, 69,0 моль) кипятили с обратным холодильником в водном растворе гидроксида натрия (1500 мл, 1%) в течение 24 ч. После охлаждения реакционный раствор подкисляли хлористоводородной кислотой (6 н, 100 мл) и экстрагировали диэтиловым эфиром (6×500 мл). Объединенные эфирные слои сушили над сульфатом магния и концентрировали с получением соединения, указанного в заголовке (10,4 г, 61,1 ммоль, 89% выход), которое использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 169,2 [М-Н]-.
G. Бензил 4-гидроксибицикло[2.2.2]октан-1-илкарбамат. К раствору 4-гидроксибицикло[2.2.2]октан-1-карбоновой кислоты (10,4 г, 61,1 ммоль) в диоксане (150 мл) добавляли ДИЭА (11,8 г, 91,5 ммоль), дифенилфосфорилазид (25 г, 91,5 ммоль) и бензиловый спирт (131 г, 1,22 моль). Смесь перемешивали при 80°С в течение ночи. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления диоксана и бензилового спирта (100°С, 2 мм рт. ст.). Твердый остаток очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (5% метанол в ДХМ) с получением продукта, указанного в заголовке (15,4 г, 54 ммоль, выход 91%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 7,35-7,30 (м, 5Н), 5,03 (с, 2Н), 4,55 (уш. с., 1Н), 2,01-1,95 (м, 6Н), 1,77-1,72 (м, 6Н); МС (ESI) m/z 276,3 [М+Н]+.
H. Гидрохлорид 4-аминобицикло[2.2.2]октан-1-ола. К раствору бензил 4-гидроксибицикло[2.2.2]октан-1-илкарбамата (14,8 г, 53 ммоль) в метаноле (200 мл) добавляли палладий на угле (0,5 г, 10%). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в атмосфере водорода (50 Фунт на кв. дюйм) в течение ночи и фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали, и твердый остаток добавляли к хлористоводородной кислоте в метаноле (10%, 50 мл). Смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем смесь снова концентрировали и добавляли ТГФ (20 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, и остаток собирали и сушили с получением продукта, указанного в заголовке (6,7 г, 36 ммоль, 70% выход). 1H-ЯМР (ДМСО-d6) δ 8,00 (с, 3Н), 4,48 (уш. с, 1Н), 1,76-1,80 (м, 6Н), 1,58-1,61 (м, 6Н). МС (ESI) m/z 142,1[М+1]+.
I. Этил-4-(изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат. Смесь этил-4-хлор-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (10 г, 43,0 ммоль), пропан-2-амина (4,21 мл, 49,4 ммоль) и ДИЭА (9,76 мл, 55,9 ммоль) в этаноле (140 мл) нагревали при 60°С в течение ночи. После охлаждения при комнатной температуре растворитель концентрировали при пониженном давлении, и добавляли воду. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом, и объединенные органические фазы сушили над сульфатом магния, фильтровали и упаривали с получением этил-4-(изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (10,10 г, 39,5 ммоль, 92% выход) в виде бесцветного масла. МС (ESI) m/z 256,1 [М+1]+.
J. 4-(Изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновая кислота. В круглодонной колбе растворяли этил-4-(изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат (10,97 г, 43,0 ммоль) в этаноле (150 мл), а затем добавляли водный раствор гидроксида натрия (1 М, 129 мл, 129 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре, и затем растворитель упаривали при пониженном давлении. Медленно добавляли водный раствор лимонной кислоты (2М, 129 мл, 258 ммоль), и полученную смесь перемешивали в течение 0,5 ч при комнатной температуре. Суспензию фильтровали, и твердые вещества дважды промывали водой (2×50 мл) и затем сушили в вакуумной печи при 45°С в течение ночи с получением 4-(изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновой кислоты (8,38 г, 36,9 ммоль, 86% выход); МС (ESI) m/z 228,4 [М+1]+.
K. 4-(Изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. 4-(Изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновую кислоту (8,38 г, 36,9 ммоль) и HATU (21,03 г, 55,3 ммоль) объединяли в 250 мл круглодонной колбе, а затем добавляли ДМФ (92 мл). После этого добавляли гидрохлорид аммония (9,86 г, 184 ммоль) и ДИЭА (32 мл, 184 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель концентрировали при пониженном давлении и добавляли воду (150 мл). Полученную суспензию фильтровали, промывали водой и сушили в высоком вакууме в течение ночи с получением 4-(изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (8 г, 35,4 ммоль, 96% выход); МС (ESI) m/z 227,4 [М+1]+.
L. 4-(Изопропиламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамид и 4-(изопропиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид. К раствору 4-(изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (641 мг, 2,8 ммоль) в NMP (6 мл) добавляли mCPBA (852 мг, 4,2 ммоль, чистота 85%) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем добавляли воду (25 мл), в которой растворяли суспензию в течение короткого промежутка времени с получением только еще одного жирного остатка, который отфильтровывали. Полученный фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением смеси, указанной в заголовке, в NMP, которую использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 243,3, 259,2 [М+1]+.
М. 2-(4-Гидроксибицикло[2.2.2]октан-1-иламино)-4-(изопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К раствору 4-(изопропиламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида и 4-(изопропиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида в NMP (из предыдущей стадии, 2,8 ммоль) добавляли гидрохлорид 4-аминобицикло [2.2.2]октан-1-ола (500 мг, 2,8 ммоль), ДИЭА (1,1 г, 8,4 ммоль) и нагревали при температуре 100°С в течение 3 дней. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении, и твердый остаток очищали с помощью препаративной тонкослойной хроматографии с получением финального продукта (74,1 мг, 8,2% выход). 1H-ЯМР (ДМСО-d6) δ ч./млн 8,88 (уш. с, 1Н), 8,31 (с, 1Н), 7,5-6,5 (уш. с, 2Н), 5,76 (с, 1Н), 4,25 (с, 1Н), 4,11 (уш. с, 1Н), 2,05-1,97 (м, 6Н), 1,61-1,54 (м, 6Н), 1,24-1,12(м, 6Н); МС (ESI) m/z 320,2 [М+Н]+; Чистота = 96,5% при 214 нм, Чистота = 97,7% при 254 нм.
Пример 26: 4-(Трет-бутиламино)-2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
A. Этил-4-(трет-бутиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат. Смесь этил-4-хлор-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (3 г, 12,89 ммоль), 2-метилпропан-2-амина (1,565 мл, 14,83 ммоль) и ДИЭА (2,93 мл, 16,76 ммоль) в этаноле (20 мл) нагревали при 60°С в течение ночи. После охлаждения при комнатной температуре, растворитель концентрировали при пониженном давлении и добавляли воду. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом, и объединенные органические фазы сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и упаривали с получением этил-4-(трет-бутиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (3,20 г, 11,86 ммоль, 92% выход) в виде бесцветного масла. МС (ESI) m/z 269,5 [М+1]+.
B. 4-(Трет-бутиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновая кислота. В круглодонной колбе в этаноле (40 мл) растворяли этил-4-(трет-бутиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат (3,2 г, 11,88 ммоль), а затем добавляли 1 М водный раствор гидроксида натрия (35,6 мл, 35,6 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и затем растворитель упаривали при пониженном давлении. После того, как медленно добавляли 2М водный раствор лимонной кислоты (35,6 мл, 71,3 ммоль), полученную смесь перемешивали в течение 0,5 ч при комнатной температуре. Суспензию фильтровали, и твердые вещества дважды промывали водой (2×50 мл), а затем сушили в вакуумой печи при 45°С в течение ночи с получением 4-(трет-бутиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновой кислоты (2,83 г, 11,73 ммоль, 99% выход). МС (ESI) m/z 242,3 [М+1]+.
C. 4-(Трет-бутиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. 4-(Трет-бутиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновую кислоту (2,83 г, 11,73 ммоль) и гексафтор-фосфат(V) 2-(3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-ил)-1,1,3,3-тетраметилизоурония (6,69 г, 17,59 ммоль) объединяли в 250 мл круглодонной колбе, а затем добавляли ДМФ (29 мл). После чего добавляли гидрохлорид аммония (3,14 г, 58,6 ммоль) и ДИЭА (10,21 мл, 58,6 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель концентрировали при пониженном давлении и добавляли воду (150 мл). Полученную суспензию фильтровали, промывали водой и сушили в высоком вакууме в течение ночи с получением 4-(трет-бутиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (2,54 г, 10,57 ммоль, 90% выход). МС (ESI) m/z 241,2 [М+1]+.
D. 4-(Трет-бутиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемому раствору 4-(трет-бутиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (0,6 г, 2,497 ммоль) в NMP (5 мл) добавляли mCPBA (0,839 г, 3,74 ммоль) при 0°С и перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение 1 ч. ЖХ-МС показала полное преобразование в целевой продукт. Реакционную смесь использовали в следующей реакции без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 273,2 [М+1]+.
E. 4-(Трет-бутиламино)-2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К раствору 4-(трет-бутиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида из предыдущей стадии добавляли ДИЭА (2,181 мл, 12,49 ммоль) и гидрохлорид (1R,4R)-4-аминоциклогексанола (0,568 г, 3,75 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение 16 ч. Растворитель упаривали при пониженном давлении, и полученное твердое вещество очищали, используя препаративную ВЭЖХ с обратной фазой (0-50% ацетонитрил + 0,1% ТФУ в воде + 0,1% ТФУ, в течение 30 мин). Фракции, содержащие продукт, концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество еще раз растворяли в метаноле (5 мл), пропускали через трубку SPE с полимером Varian Stratospheres НСО3 для удаления ТФУ (0,9 ммоль бикарбонат эквив.), и затем концентрировали при пониженном давлении с получением 4-(трет-бутиламино)-2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (0,350 г, 1,139 ммоль, 45,6% выход). 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ ч./млн 0,82-0,88 (м, 1Н) 1,14-1,30 (м, 5Н) 1,42 (с, 9Н) 1,85 (д, J=4,30 Гц, 4Н) 3,38 (уш. с, 1Н) 3,59 (д, J=7,42 Гц, 1Н) 4,54 (с, 1Н) 7,02 (д, J=7,81 Гц, 1Н) 8,32 (с, 1Н) 9,18 (с, 1Н); MC(ESI): m/z 308,1 [M+1]+.
Пример 27: 4-((1R,3R,4R)-3-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(изопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 4-((1R,3R,4R)-3-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрил. К перемешиваемому раствору 4-хлор-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (310 мг, 1,670 ммоль) и гидрохлорида (1R,2R,5R)-5-амино-2-метилциклогексанола (304 мг, 1,837 ммоль; синтез описан в настоящем описании) в ДМФ (2,4 мл), добавляли ДИЭА (0,873 мл, 5,01 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 60°С в течение 2 ч. ЖХ-МС показала, реакция завершена. Растворитель упаривали при пониженном давлении, и твердый остаток разбавляли 150 мл этилацетата и 50 мл воды. Слои разделяли, и водную фазу экстрагировали 75 мл этилацетатом. Объединенные этилацетатные слои промывали насыщенным солевым раствором (2×50 мл), сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до масла, которое отверждалось при отстаивании с получением 4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (418 мг, 1,503 ммоль, 90% выход). МС (ESI) m/z 279,3 [М+1]+.
B. 4-((1R,3R,4R)-3-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбонитрил. К раствору 4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (400 мг, 1,437 ммоль) в NMP (5 мл) добавляли mCPBA (805 мг, 3,59 ммоль) при 0°С, и реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Полученный раствор непосредственно использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 311,4 [М+1]+.
C. 4-((1R,3R,4R)-3-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(изопропиламино)пиримидин-5-карбонитрил. К раствору 4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбонитрила (446 мг, 1,437 ммоль) из предыдущей стадии добавляли пропан-2-амин (0,367 мл, 4,31 ммоль) и ДИЭА (1,004 мл, 5,75 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 4 ч, а затем оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды. Растворитель упаривали при пониженном давлении, и твердый остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-90% этилацетат в гексане) с получением 4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(изопропиламино)пиримидин-5-карбонитрила (381 мг, 1,317 ммоль, 92% выход). МС (ESI) m/z 290,2 [М+1]+.
D. 4-((1R,3R,4R)-3-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(изопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид. 4-((1R,3R,4R)-3-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(изопропиламино)пиримидин-5-карбонитрил (0,38 г, 1,313 ммоль) растворяли в ДМСО (5 мл). К этому раствору добавляли 50% водный раствор гидроксида натрия (0,103 мл, 1,970 ммоль) и 30% водный раствор перекиси водорода (0,101 мл, 0,985 ммоль) при комнатной температуре. Затем реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 1 ч. После этого реакционную смесь выливали в ледяную воду (15 мл), и полученную смесь перемешивали в течение 1 ч. Полученный осадок фильтровали и промывали водой с получением 4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(изопропиламино)пиримидин-5-карбоксамида (0,210 г, 0,683 ммоль, 52% выход). 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ ч./млн 0,94 (д, J=6,40 Гц, 4Н) 1,12 (д, J=5,91 Гц, 9Н) 1,65 (дд, J=13,29, 2,95 Гц, 1Н) 1,92 (уш. с., 1Н) 2,15 (уш. с., 1Н) 2,97 (уш. с., 1Н) 3,81-4,14 (м, 2Н) 4,55 (д, J=5,41 Гц, 1Н) 6,70-7,02 (м, 1Н) 8,34 (уш. с., 1Н) 8,92 (уш. с., 1Н); МС (ESI) m/z 308,0 [М+1]+.
Пример 28: 2-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 2-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил. К раствору 4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбонитрила (446 мг, 1,437 ммоль; синтез описан в настоящем описании) в NMP (5 мл) добавляли гидрохлорид бицикло[1.1.1]пентан-1-амина (258 мг, 2,155 ммоль; полученный в соответствии с Org. Lett., 13(17): 4746-4748 (2011)) и ДИЭА (1,255 мл, 7,18 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 4 ч и затем оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды. Растворитель упаривали при пониженном давлении, и твердый остаток очищали флэш-хроматографией (0-90% этилацетат в гексане) с получением 2-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (381 мг, 1,216 ммоль, 85% выход). MC(ESI): m/z 314,0 [M+1]+.
В. 2-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. 2-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил (0,38 г, 1,213 ммоль) растворяли в ДМСО (26,9 мл) и в этот раствор добавляли 50% водный раствор гидроксида натрия (0,097 мл, 1,213 ммоль) и 30% водный раствор перекиси водорода 0,137 мл, 1,213 ммоль) при комнатной температуре. Затем реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали при комнатной температуре и ее выливали в 50 мл ледяной воды. Белый осадок собирали на фильтровальной бумаге и дважды промывали водой. Остаток сушили с получением 2-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (0,269 г, 0,812 ммоль, 67% выход). 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц): δ ч./млн 0,94 (д, J=6,25 Гц, 3Н) 1,10-1,26 (м, 3Н) 1,68 (д, J=10,54 Гц, 1Н) 1,92 (д, J=10,93 Гц, 1Н) 2,06 (с, 6Н) 2,17 (д, J=9,76 Гц, 1Н) 2,46 (с, 1Н) 2,98 (уш. с., 1Н) 3,82-3,95 (м, 1Н) 4,63 (уш. с., 1Н) 7,16 (уш. С, 1Н) 7,77 (уш. с., 1Н) 8,11 (уш. с., 1Н) 8,33 (с, 1Н) 9,24 (уш. с., 1Н); MC(ESI): m/z 332,3 [M+1]+.
Пример 29: 4-((2-Циклопропилпропан-2-ил)амино)-2-(((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)амино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 4-((2-Циклопропилпропан-2-ил)амино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрил. К раствору 4-хлор-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (750 мг, 4,0 ммоль) в ДМФ (8 мл) добавляли 2-циклопропилпропан-2-амин (400 мг, 4,0 ммоль) и ДИЭА (1560 мг, 12,0 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 60°С в течение 2 ч. Добавляли воду, и смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением сырого продукта, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (0-30% этилацетат в петролейном эфире) с получением соединения, указанного в заголовке (665 мг, 2,68 ммоль, 66% выход) в виде белого твердого вещества. МС (ESI) m/z=249,2 [М+Н]+.
B. 4-((2-Циклопропилпропан-2-ил)амино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемому раствору 4-((2-циклопропилпропан-2-ил)амино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (665 мг, 2,68 ммоль) в ДМСО (4 мл) добавляли водный раствор перекиси водорода (0,162 мл, 30%) и водный раствор гидроксида натрия (2,2 мл, 6 моль/л) раствор. Полученную смесь перемешивали при 50°С в течение 12 мин, и затем добавляли воду. Целевой продукт фильтровали и сушили в вакууме с получением сырого продукта (392 мг, 1,47 ммоль, 55% выход) в виде белого твердого вещества. МС (ESI) m/z 267,3 [М+Н]+.
C. 4-((2-Циклопропилпропан-2-ил)амино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамид и 4-((2-циклопропилпропан-2-ил)амино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид. К охлажденному (0°С) раствору 4-((2-циклопропилпропан-2-ил)амино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (390 мг, 1,46 ммоль) в ТГФ (6 мл) порциями добавляли mPBA (447 мг, 2,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 0,5 ч при 0°С. Смесь концентрировали в вакууме и очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (2,5%-10% ДХМ в метаноле) с получением смеси 4-((2-циклопропилпропан-2-ил)амино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида и 4-((2-циклопропилпропан-2-ил)амино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (382 мг, 1,32 ммоль, 90% выход). МС (ESI) m/z 299,1 [М+Н]+ и 283,1 [М+Н]+.
D. 4-((2-Циклопропилпропан-2-ил)амино)-2-(((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)амино)пиримидин-5-карбоксамид. Смесь 4-((2-циклопропилпропан-2-ил)амино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида, 4-((2-циклопропилпропан-2-ил)амино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (191 мг, 0,66 ммоль), (1R,4R)-4-аминоциклогексанола (114 мг, 0,99 ммоль), ДИЭА (256 г, 1,98 ммоль) и NMP (5 мл) объединяли и нагревали при температуре 100°С в течение ночи. Полученную смесь концентрировали, и твердый остаток очищали ВЭЖХ (5-95% ацетонитрил в воде) с получением соединения, указанного в заголовке (129,5 мг, 0,39 ммоль, 59% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ ч./млн 8,96 (с, 1Н), 8,09 (с, 1Н), 5,38 (с, 2Н), 4,98-4,96 (м, 1Н), 3,79-3,77 (м, 1Н), 3,69-3,67 (м, 1Н), 2,14-2,11 (д, J=11,6 Гц, 2Н), 2,04-2,01 (м, 2Н), 1,48-1,41 (м, 4Н), 1,38 (с, 6Н), 1,32-1,22 (м, 2Н), 0,48-0,39 (м, 4Н); МС (ESI) m/z 334,3 [М+Н]+.
Пример 30: 4-Циклобутиламино-2-(((1R,4R)-4-метоксициклогексил)амино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 4-(Циклобутиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрил. К перемешиваемому раствору 4-хлор-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (2 г, 10,8 ммоль) в ДМФ (10 мл) добавляли ДИЭА (4,2 г, 32,4 ммоль) и циклобутанамин (2,3 г, 32,4 ммоль) при 0°С. Полученную смесь перемешивали при 60°С в течение 2 ч. Реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида натрия и экстрагировали этилацетатом три раза. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением сырого продукта. Сырой продукт очищали через колонку с силикагелем хроматографией (10% этилацетат в петролейном эфире) до получения целевого продукта в виде белого твердого вещества (1,7 г, 7,7 ммоль, 71% выход). МС (ESI) m/z=221,2[М+Н]+.
B. 4-(Циклобутиламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбонитрил и 4-(циклобутиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбонитрил. 4-(Циклобутиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрил (1,7 г, 7,7 ммоль) растворяли в ДХМ (30 мл) и охлаждали до 0°С. К этой смеси порциями добавляли mCPBA (4,6 г, 23 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. Полученную смесь выливали в насыщенный водный раствор бикарбоната натрия. Водный слой экстрагировали три раза ДХМ. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением смеси 4-(циклобутиламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбонитрила и 4-(циклобутиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбонитрила в виде желтого жирного масла (1,6 г сырой), который использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z=237,2/253,2 [М+Н]+.
C. 4-(Циклобутиламино)-2-(((1R,4R)-4-метоксициклогексил)амино)пиримидин-5-карбонитрил. К смеси 4-(циклобутиламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбонитрила и 4-(циклобутиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбонитрила (1,6 г, сырой) из предыдущей стадии добавляли (1R,4R)-4-метоксициклогексанамин (0,96 г, 7,4 ммоль), 1,4-диоксан (100 мл) и ДИЭА (4,3 г, 33,4 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 100°С в течение ночи. После удаления всех летучих растворителей при пониженном давлении, твердый остаток очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (33,3% этилацетат в петролейном эфире) с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества (1,3 г, 57% выход). МС (ESI) m/z=302,1 [М+Н]+.
D. 4-(Циклобутиламино)-2-(((1R,4R)-4-метоксициклогексил)амино)пиримидин-5-карбоксамид. К смеси 4-(циклобутиламино)-2-(((1R,4R)-4-метоксициклогексил)-амино) пиримидин-5-карбонитрила (700 мг, 2,3 ммоль) в ДМСО (8 мл) добавляли водный раствор перекиси водорода (1,3 г, 30%, 11,5 ммоль), а затем водный раствор гидроксида натрия (2 мл, 6 моль/л, 11,5 ммоль). Смесь перемешивали при 50°С в течение 0,5 ч, затем в реакционную смесь добавляли воду (30 мл), продукт собирали и сушили с получением целевого соединения (400 мг, 1,25 ммоль, 54% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 8,76 (с, 1Н), 8,11 (с, 1Н), 5,46 (с, 2Н), 5,01 (с, 1Н), 4,51-4,45 (м, 1Н), 3,83-3,81 (м, 1Н), 3,36 (с, 3Н), 3,21-3,16 (м, 1Н), 2,40-2,33 (м, 2Н), 2,15-1,96 (м, 6Н), 1,78 (с, 2Н), 1,43-1,20 (м, 4Н); МС (ESI) m/z=319,9 [М+Н]+).
Пример 31: 4-(Циклобутиламино)-2-(((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)амино)пиримидин-5-карбоксамид
A. 4-(Циклобутиламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбонитрил и 4-(циклобутиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбонитрил. 4-(Циклобутиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрил (889 мг, 4,04 ммоль; синтез описан в настоящем описании) растворяли в ДХМ (20 мл) и охлаждали до 0°С. К этой смеси порциями добавляли mCPBA (2,1 г, 12,1 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. Полученную смесь выливали в насыщенный водный раствор бикарбоната натрия. Водный слой экстрагировали три раза ДХМ. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением смеси 4-(циклобутиламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбонитрила и 4-(циклобутиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбонитрила в виде желтого масляного масла (893 мг сырой), которое использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z=237,2/253,2 [М+Н]+.
B. 4-(Циклобутиламино)-2-(((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)амино)пиримидин-5-карбонитрил. К смеси 4-(циклобутиламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбонитрила и 4-(циклобутиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбонитрила (424 мг, около 1,93 ммоль) из предыдущей стадии добавляли (1R,4R)-4-аминоциклогексанол (244 мг, 2,12 ммоль), 1,4-диоксан (50 мл) и ДИЭА (1,2 г, 9,65 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 100°С в течение ночи. После удаления всех летучих растворителей при пониженном давлении, твердый остаток очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (50% этилацетат в петролейном эфире) с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества (305 мг, 1,06 ммоль, 55,4% выход). МС (ESI) m/z=288,2 [М+Н]+.
С. 4-(Циклобутиламино)-2-(((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)амино)пиримидин-5-карбоксамид. К раствору 4-(циклобутиламино)-2-(((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-амино)пиримидин-5-карбонитрила (305 мг, 1,06 ммоль) в ДМСО (6 мл) добавляли водный раствор перекиси водорода (600,1 мг, 30%, 5,3 ммоль), а затем водный раствор гидроксида натрия (1 мл, 6 моль/л, 5,3 ммоль). Смесь перемешивали при 50°С в течение 0,5 ч, а затем добавляли воду, и смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Концентрирование при пониженном давлении давало сырой продукт, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (0-10% метанол в ДХМ) с получением соединения, указанного в заголовке (248,2 мг, 0,81 ммоль, 76,6% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 8,74 (с, 1Н), 8,12 (с, 1Н), 5,46 (уш. с, 2Н), 5,07-4,96 (м, 1Н), 4,53-4,43 (м, 1Н), 3,80-3,79 (м, 1Н), 3,70-3,65 (м, 1Н), 2,40-2,34 (м, 2Н), 2,15-1,97 (м, 6Н), 1,91-1,88 (с, 2Н), 1,55-1,19 (м, 4Н); МС (ESI) m/z=306,0 [М+Н]+.
Пример 32: 2-(трет-бутиламино)-4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
A. (R)-Трет-бутил-4-метилциклогекс-3-енилкарбамат и (S)-трет-бутил-4-метилциклогекс-3-енилкарбамат. К перемешиваемому раствору смеси (R)-4-метилциклогекс-3-енамина и (S)-4-метилциклогекс-3-енамина (40,2973 г, 359 ммоль; полученный как описано в J. Org. Chem. 1992, 57, 3454-3462) в этиловом эфире (498 мл) при 0°С по каплям добавляли раствор ди-трет-бутилдикарбоната (81 г, 362 ммоль) в этиловом эфире (100 мл) в течение 30 мин. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч, оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры в течение 4 ч и затем перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением сырого твердого вещество. Сырое твердое вещество растирали в порошок с гексаном (500 мл), перемешивали в течение 5 мин при 0°С, затем фильтровали и промывали гексаном (50 мл) с получением первой партии продукта (~55 г). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, растирали в порошок с гексаном, и остаток фильтровали с получением второй партии продукта (~15 г). Процесс повторяли с получением третьей партии продукта (4,25 г). Три партии объединяли с получением смеси (R)-трет-бутил-4-метилциклогекс-3-енилкарбамата и (S)-трет-бутил-4-метилциклогекс-3-енилкарбамата (74,25 г, 351 ммоль, 98% выход) в виде белого твердого вещества. 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 6,72 (д, J=7,42 Гц, 1Н), 5,26 (уш. с., 1Н), 3,35-3,47 (м, 1Н), 1,93 (уш. с., 5Н), 1,60 (с, 3Н), 1,32-1,44 (м, 10Н).
В. Трет-бутил-(1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексилкарбамат, трет-бутил-(1R,3S,4S)-3-гидрокси-4-метилциклогексилкарбамат, трет-бутил-(1S,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексилкарбамат, трет-бутил-(1S,3S,4S)-3-гидрокси-4-метилциклогексилкарбамат. К перемешиваемому раствору смеси (R)-трет-бутил-4-метилциклогекс-3-енилкарбамата и (S)-трет-бутил-4-метилциклогекс-3-енилкарбамата (13 г, 61,6 ммоль) в ТГФ (780 мл) при 0°С добавляли 1 М комплекс борана и ТГФ (277 мл, 277 ммоль). Раствор перемешивали при 0°С, оставляли нагреваться до комнатной температуры в течение 1 ч, и затем перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Реакционную смесь очень медленно гасили водой (330 мл), разбавляли этанолом (326 мл) и подкисляли 5 н водным раствором гидроксида натрия (308 мл, 1,54 моль). К перемешиваемой двухфазной смеси медленно добавляли 30% перекись водорода (316 мл, 3,08 моль), и полученную смесь нагревали до 45°С в течение 20 ч. Сырую реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором сульфита натрия (573 мл) и экстрагировали этилацетатом (4×1 л). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением сырого продукта. Вышеописанную реакцию повторяли 5 раз (используя 3×13 г и 2×11 г исходного продукта). Объединенные сырые продукты из 6 реакционных смесей очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-100% этилацетат в гексане). Фракции, содержащие продукт, объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением смеси трет-бутил-(1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексилкарбамата, трет-бутил-(1R,3S,4S)-3-гидрокси-4-метилциклогексилкарбамата, трет-бутил-(1S,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексилкарбамата и трет-бутил-(1S,3S,4S)-3-гидрокси-4-метилциклогексилкарбамата (55 г, 242 ммоль, 72% выход) в виде твердого вещества. 4 составляющие стереоизомеры удаляли с помощью препаративной хиральной SFC, используя множественный инъекции в серии из 3 раздельных колонок. Первая колонка: ChiralPak AD-H, 250×50 мм I.D., изократический 35% метанол в СО2. Вторая колонка: ChiralPak AD-H, 250×50 мм I.D., изократический 25% метанол в СО2. Третья колонка: ChiralPak AD-H, 250×50 мм I.D., изократический 15% этанол в СО2. Разделенные изомеры характеризовали на колонке ChiralPak AD-3 150×4,6 мм I.D., 5-40% метанол (с 0,05% диэтиламином) в СО2 (время пробега 15 мин) в аналитическом масштабе, и обозначали как Промежуточный продукт 1 - Промежуточный продукт 4.
Промежуточный продукт 1: 2,0 г (8,72 ммоль, 3,6% выход из очистки SFC). Время удержания: 4,77 мин. МС (ESI) m/z 252,1 [М+23]+.
Промежуточный продукт 2: 1,5 г (6,54 ммоль, 2,7% выход из очистки SFC). Время удержания: 5,08 мин. МС (ESI) m/z 252,1 [М+23]+.
Промежуточный продукт 3: 16,0 г (69,78 ммоль, 29,1% выход из очистки SFC). Время удержания: 5,48 мин. 1Н-ЯМР (400 МГц, DMCO-d6) δ ч./млн 6,64-6,86 (м, 1Н), 4,43-4,60 (м, 1Н), 3,10-3,29 (м, 1Н), 2,81-2,96 (м, 1Н), 1,84-2,01 (м, 1Н), 1,49-1,72 (м, 2Н), 1,37 (с, 9Н), 0,98-1,14 (м, 3Н), 0,76-0,96 (м, 4Н). МС (ESI) m/z 252,1 [M+23]+.
Промежуточный продукт 4: 18,5 г (80,68 ммоль, 33,6% выход из очистки SFC). Время удержания: 7,79 мин. МС (ESI) m/z 252,1 [М+23]+.
Низкомолекулярный рентгеноструктурный анализ кристаллической структуры был проведен для Промежуточного продукта 3, и, как было показано, структура представляла собой трет-бутил-(1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексилкарбамат. Рентгеноструктурный анализ был следующим. Монокристаллические рентгеновские дифракционные анализы проводились на дифрактометре Bruker Kappa APEX CCD, оснащенным Cu Kα радиацией (λ=1,5478). Кристаллы целевого соединения растили путем диффузии из паровой фазы гексана в растворе гексан/ТГФ. Безцветные кристаллы размером 0,21×0,05×0,03 мм устанавливали на Cryoloop с маслом Paratone. Данные собирали в потоке газообразного азота при 120(2)K, используя сканирование φ и 
. Расстояние от кристалла до детектора было 60 мм, используя время переменной экспозиции (2 с - 20 с) в зависимости от θ с шириной сканирования 1,0°. Сбор данных был завершен на 97,0% к 68,00° в θ. В общей сложности было собрано 9000 отражений, охватывающих индексы, -33<=h<=32, 31<=k<=30, -6<=1<=5. Было обнаружено, что 2554 отражений имеют независимую симметрию с Rint из 0,0602. Индексирование и измельчение элементарной ячейки кристалла указывало на ромбоэдрическую, гексагональную решетку. Было обнаружено, что пространственная группа представляет собой R3. Данные были интегрированы с помощью программного обеспечения Bruker SAINT и масштабированы с помощью программного обеспечения SADABS. Решение с помощью прямых методов (SHELXS) дало полную фазовую модель, соответствующую структуре трет-бутил-(1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексилкарбамат.
Все неводородные атомы были уточнены анизотропически с помощью полноматричного метода наименьших квадратов (SHELXL-97). Все атомы водородов были помещены в ходовую модель. Их позиции были ограничены относительно родительского атома, используя соответствующую команду HFIX в SHELXL-97.
C. (1R,2R,5R)-5-Амино-2-метилциклогексанол гидрохлорид. К энергично перемешиваемому метанолу (149 мл) при 0°С добавляли ацетилхлорид (15,87 мл, 223 ммоль), и полученную смесь перемешивали в течение 10 мин. К этому раствору добавляли трет-бутил-(1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексилкарбамат (17,08 г, 74,5 ммоль), и смесь перемешивали в течение 22 ч при комнатной температуре. Сырую реакционную смесь концентрировали и затем растирали в порошок с этиловым эфиром (2×300 мл) с получением гидрохлорида (1R,2R,5R)-5-амино-2-метилциклогексанола (12,2 г, 73,6 ммоль, 99% выход) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,02 (уш. с., 3Н), 4,77 (д, J=5,86 Гц, 1Н), 2,85-3,10 (м, 2Н), 2,03-2,21 (м, 1Н), 1,83 (д, J=11,71 Гц, 1Н), 1,65 (дд, J=13,47, 3,32 Гц, 1Н), 1,24 (кв, J=11,58 Гц, 2Н), 1,12 (дд, J=6,05, 3,32 Гц, 1Н), 0,82-1,03 (м, 4Н).
D. 5-Бром-N-трет-бутил-4-(метилтио)пиримидин-2-амин. К 5-бром-2-хлор-4-(метилтио)пиримидину (3 г, 12,53 ммоль) в диоксане (12,53 мл) добавляли 2-метилпропан-2-амин (7,93 мл, 75 ммоль). Смесь перемешивали при 100°С в течение ночи в герметично закрытом сосуде. Растворитель удаляли при пониженном давлении, и твердый остаток растворяли в 100 мл этилацетата и промывали 50 мл 1М водным раствором гидрофосфата натрия. Водный слой опять экстрагировали 50 мл этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением 5-бром-N-трет-бутил-4-(метилтио)пиримидин-2-амина (3,4 г, 12,31 ммоль, 98% выход) в виде твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,61-8,72 (м, 1Н), 8,08 (с, 1Н), 6,95-7,17 (м, 1Н), 2,48 (с, 2Н), 1,38 (с, 9Н). МС (ESI) m/z 276,0 [М+1]+и 278,2 [М+1]+.
Е. 2-(Трет-бутиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрил. 5-Бром-N-трет-бутил-4-(метилтио)пиримидин-2-амин (3400 мг, 12,31 ммоль), цинковую пыль (201 мг, 3,08 ммоль), цианид цинка (940 мг, 8,00 ммоль), 1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен (552 мг, 0,985 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладий (0) (564 мг, 0,616 ммоль) и ДМФ (20,5 мл) объединяли и нагревали при температуре 90°С в течение ночи в атмосфере азота. Реакционную смесь разбавляли 125 мл этилацетата и 50 мл воды и затем фильтровали через пад из целита. Слои фильтрата удаляли, и водный слой экстрагировали 75 мл этилацетата. Объединенные этилацетат слои промывали 2×50 мл насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до масла при пониженном давлении. Сырое масло очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-30% этилацетат/гексан) с получением 2-(трет-бутиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (2,26 г, 10,17 ммоль, выход 83%). 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,37-8,51 (м, 1Н), 7,85-8,10 (м, 1Н), 2,53-2,62 (м, 3Н), 1,41 (с, 9Н). МС (ESI) m/z 223,1 [М+1]+.
F. 2-(Трет-бутиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемому раствору 2-(трет-бутиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (0,6 г, 2,70 ммоль) в ДМСО (7 мл) добавляли 6М водный раствор гидроксида натрия (2,249 мл, 13,49 ммоль) и 30% водный раствор перекиси водорода (1,530 мл, 13,49 ммоль) при 0°С. Затем смесь перемешивали при 50°С в течение 15 мин. Реакционную смесь выливали в воду (40 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Концентрирование фильтрата при пониженном давлении давало сырой продукт, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (5% метанол в ДХМ) с получением 2-(трет-бутиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (0,462 г, 1,922 ммоль, 71,2% выход) в виде белого твердого вещества. МС (ESI) m/z 241,0 [М+1]+.
G. 2-(трет-бутиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемому раствору 2-(трет-бутиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (0,1 г, 0,416 ммоль) в хлороформе (12 мл) порциями добавляли 3-фенил-2-(фенилсульфонил)-1,2-оксазиридин (0,130 г, 0,499 ммоль). Полученный светло-желтый раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении с получением сырого продукта в виде белого твердого вещества. Добавляли этилацетат (1 мл), и взвесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Твердые вещества фильтровали, промывали этилацетатом и сушили в вакууме с получением 2-(трет-бутиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида (0, 092 г, 0,359 ммоль, 86% выход). МС (ESI) m/z 257,3 [М+1]+.
Н. 2-(трет-бутиламино)-4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемой суспензии 2-(трет-бутиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида (0,092 г, 0,359 ммоль) и гидрохлорида (1R,2R,5R)-5-амино-2-метилциклогексанола (0,065 г, 0,395 ммоль) в ДМФ (2 мл) добавляли N-этил-N-изопропилпропан-2-амин (0,157 мл, 0,897 ммоль), и реакционную смесь нагревали до 90°С в течение ночи. Сырую реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и затем твердый остаток добавляли в ледяную воду (20 мл). Полученную смесь энергично перемешивали в течение 1 ч и затем продукт фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением 2-(трет-бутиламино)-4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (0,074 г, 0,230 ммоль, 64,1% выход). 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,94 (уш. с., 1Н), 8,34 (с, 1Н), 6,69 (уш. с., 1Н), 4,59 (д, J=5,47 Гц, 1Н), 3,87 (уш. с., 1Н), 2,92-3,01 (м, 1Н), 2,14 (д, J=10,15 Гц, 1Н), 1,91 (д, J=11,71 Гц, 1Н), 1,67 (дд, J=13,28, 3,12 Гц, 1Н), 1,07-1,24 (м, 3Н), 0,91-0,99 (м, 4Н). МС (ESI) m/z 322,3 [М+1]+.
Пример 33: 2-(Циклопропиламино)-4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 2-(Циклопропиламино)-4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил. К раствору 4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбонитрила (362 мг, 1,166 ммоль; синтез описан в настоящем описании) в NMP (5,832 мл), добавляли циклопропанамин (0,485 мл, 7,00 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 5 ч в герметически закрытом сосуде и затем оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении до масла, которое очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-60% этилацетат/гексан) с получением 2-(циклопропиламино)-4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (265 мг, 0,922 ммоль, 79% выход) в виде твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 6,99-8,32 (м, 3Н), 4,54 (д, J=5,08 Гц, 1Н), 3,85-4,13 (м, 1Н), 2,80-3,03 (м, 1Н), 2,58-2,75 (м, 1Н), 1,50-2,08 (м, 3Н), 1,03-1,42 (м, 3Н), 0,88 (д, J=6,25 Гц, 4Н), 0,29-0,68 (м, 4Н). МС (ESI) m/z 288,1 [М+1]+.
В. 2-(Циклопропиламино)-4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. 2-(Циклопропиламино)-4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил (265 мг, 0,922 ммоль) растворяли в ДМСО (9,222 мл). К раствору добавляли 10 капель 50% водного раствора гидроксида натрия, а затем 10 капель 30% водного раствора перекиси водорода при комнатной температуре. Полученную реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 2 ч и затем медленно добавляли в 60 мл ледяной воды. Полученный остаток перемешивали в течение 30 мин, фильтровали и промывали водой. Твердые вещества сушили в вакуумной печи в течение ночи при 45°С с получением 2-(циклопропиламино)-4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (229 мг, 0,750 ммоль, 81% выход). 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,73-8,95 (м, 1Н), 8,18-8,42 (м, 1Н), 7,17-7,37 (м, 1Н), 4,39-4,62 (м, 1Н), 3,75-3,99 (м, 1Н), 2,81-3,06 (м, 1Н), 2,53-2,74 (м, 1Н), 2,09-2,34 (м, 1Н), 1,82-2,05 (м, 1Н), 1,50-1,69 (м, 1Н), 0,99-1,24 (м, 3Н), 0,81-0,98 (м, 4Н), 0,50-0,67 (м, 2Н), 0,26-0,47 (м, 2Н). МС (ESI) m/z 306,3 [М+1]+.
Пример 34: 2-(Трет-бутиламино)-4-((1R,3R)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 4,4-Диметилциклогекс-2-енол. Боргидрид натрия (5,03 г, 133 ммоль) порциями добавляли к перемешанному раствору 4,4-диметилциклогекс-2-енона (15,0 г, 121 ммоль) в метаноле (403 мл) на водяной бане. После завершения добавления раствор оставляли перемешиваться в атмосфере азота при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляли водой (150 мл) и большую часть метанола удаляли при пониженном давлении. Водный слой экстрагировали этилацетатом (2×200 мл). Объединенные этилацетатные экстракты сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до масла при пониженном давлении с получением 4,4-диметилциклогекс-2-енола (13,4 г, 106 ммоль, 88% выход). 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 5,41-5,57 (м, 1Н), 5,24-5,42 (м, 1Н), 4,61 (д, J=5,47 Гц, 1Н), 3,82-3,99 (м, 1Н), 1,65-1,83 (м, 1Н), 1,21-1,59 (м, 3Н), 0,93 (д, J=15,23 Гц, 6Н).
В. 2-(4,4-Диметилциклогекс-2-енил)изоиндолин-1,3-дион. Трифенилфосфин с полимерной подложкой (32,7 г, 106 ммоль), изоиндолин-1,3-дион (17,19 г, 117 ммоль) и 4,4-диметилциклогекс-2-енол (13,4 г, 106 ммоль) объединяли и добавляли ТГФ (197 мл). Смесь перемешивали и охлаждали до 0°С, затем по каплям добавляли диизопропилазодикарбоксилат (21,09 мл, 107 ммоль) в течение 2 мин. Реакционную смесь перемешивали и оставляли медленно нагреваться до температуры окружающей среды в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали и затем концентрировали до желтого твердого вещества при пониженном давлении. Добавляли этилацетат (200 мл), и полученные твердые вещества снова отфильтровывали. Фильтрат этилацетата промывали водой (100 мл), водный слой экстрагировали этилацетатом (100 мл), объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали, и концентрировали до масла, которое очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-20% этилацетат/гексан) с получением 2-(4,4-диметилциклогекс-2-енил)изоиндолин-1,3-диона (11,59 г, 45,4 ммоль, 42,8% выход) в виде масла. 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 7,84 (с, 4Н), 5,51-5,62 (м, 1Н), 5,43 (д, J=10,15 Гц, 1Н), 4,59-4,74 (м, 1Н), 2,14-2,30 (м, 1Н), 1,67-1,81 (м, 1Н), 1,44-1,68 (м, 2Н), 1,09 (с, 3Н), 1,01 (с, 3Н); МС (ESI) m/z 256,2 [М+1]+.
С. Смесь 2-((1R,2S,3S)-2-бром-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона, 2-((1S,2R,3R)-2-бром-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона, 2-((1R,2R,3R)-3-бром-2-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона, 2-((1S,2S,3S)-3-бром-2-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона. К раствору 2-(4,4-диметилциклогекс-2-енил)изоиндолин-1,3-диона (11,59 г, 45,4 ммоль) в хлороформе (110 мл) и этаноле (3,83 мл) добавляли N-бромсукцинимид (10,34 г, 58,1 ммоль) в виде твердого вещества в течение нескольких мин при температуре окружающей среды. После того, как добавление было закончено, реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи в атмосфере азота. Реакционную смесь промывали 1 М водным раствором тиосульфата натрия (100 мл). Водный слой экстрагировали хлороформом (100 мл), и объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до масла. К этому маслу добавляли 150 мл ТГФ (150 мл) и 1 н. водный раствор хлористоводородной кислоты (30 мл). Полученную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч. ТГФ удаляли при пониженном давлении и оставшийся водный слой разбавляли этилацетатом (150 мл) и 75 мл смесью 1:1 вода:насыщенный водный раствор бикарбоната натрия. Слои разделяли и водный слой снова экстрагировали водным раствором этилацетата (75 мл). Объединенные этилацетатные слои промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до масла, которое очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-25% этилацетат/гексан) с получением смеси 2-((1R,2S,3S)-2-бром-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона, 2-((1S,2R,3R)-2-бром-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона, 2-((1R,2R,3R)-3-бром-2-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-дион и 2-((1S,2S,3S)-3-бром-2-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона (11,4 г, 32,4 ммоль, 71,3% выход). МС (ESI) m/z 374,5 [М+1]+и 376,5 [М+1]+.
D. Смесь 2-((1R,3R)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона и 2-((1S,3S)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона. Смесь 2-((1R,2S,3S)-2-бром-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона, 2-((1S,2R,3R)-2-бром-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона, 2-((1R,2R,3R)-3-бром-2-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона и 2-((1S,2S,3S)-3-бром-2-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона (5,7 г, 16,18 ммоль) растворяли в толуоле (90 мл) и метаноле (9 мл). К раствору добавляли гидрид трибутилолова (5,66 мл, 21,04 ммоль) в течение 10 мин через шприц в атмосфере азота, а затем азобисизобутиронитрил (0,266 г, 1,618 ммоль) одной порцией. Смесь оставляли перемешиваться при кипячении с обратным холодильником в атмосфере азота в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением твердого вещества, которое очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-50% этилацетат/гексан), получая смесь 2-((1R,3R)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона и 2-((1S,3S)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона (0,9 г, 3,29 ммоль, 20,35% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 7,82 (с, 4Н), 4,51-4,80 (м, 1Н), 3,80-4,03 (м, 2Н), 2,84-3,11 (м, 1Н), 1,49-1,67 (м, 3Н), 1,37-1,47 (м, 1Н), 1,22-1,35 (м, 1Н), 1,13 (с, 3Н), 0,80-0,93 (м, 3Н). МС (ESI) m/z 274,0 [М+1]+. Для смеси продуктов был проведен низкомолекулярный рентгеноструктурный анализ кристаллической структуры. Рентгеноструктурный анализ был следующим. Монокристаллические рентгеновские дифракционные анализы проводились на дифрактометре Bruker Kappa APEX-II CCD, оснащенным Mo Kα радиацией (λ=0,71073 
). Кристаллы растили путем диффузии из паровой фазы пентана в растворе DCM. Безцветные кристаллы размером 0,25×0,20×0,05 мм устанавливали на Cryoloop с маслом Paratone. Данные собирали в потоке газообразного азота при 90(2)K, используя сканирование ϕ и 
. Расстояние от кристалла до детектора было 60 мм, время экспозиции 20 с на каркас, используя ширину сканирования 0,5°. Сбор данных был завершен на 100% к 25,00° в θ. В общей сложности было собрано 10827 отражений, охватывающих индексы, -21<=h<=12, -7<=k<=8, -28<=l<=29. Было обнаружено, что 2892 отражений имеют независимую симметрию с Rint из 0, 0821. Индексирование и измельчение элементарной ячейки кристалла указывало на ромбоэдрическую, гексагональную решетку. Было обнаружено, что пространственная группа представляет собой Pbcn. Данные были интегрированы с помощью программного обеспечения Bruker SAINT и масштабированы с помощью программного обеспечения SADABS. Решение с помощью прямых методов (SHELXS) дало полную фазовую модель, соответствующую структуре смеси энантиомерной пары 2-((1R,3R)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона и 2-((1S,3S)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона.
Все неводородные атомы были уточнены анизотропически с помощью полноматричного метода наименьших квадратов (SHELXL-97). Все атомы водородов были помещены в ходовую модель. Их позиции были ограничены относительно родительского атома, используя соответствующую команду HFIX в SHELXL-97.
Е. Смесь (1R,5R)-5-амино-2,2-диметилциклогексанол гидрохлорида и (1S,5S)-5-амино-2,2-диметилциклогексанол гидрохлорида. К смеси 2-((1R,3R)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона и 2-((1S,3S)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексил)изоиндолин-1,3-диона (1,1 г, 4,02 ммоль) в этаноле (50 мл) добавляли гидразин гидрат (0,195 мл, 4,02 ммоль). Полученный раствор оставляли перемешиваться при кипячении с обратным холодильником в течение ночи в атмосфере азота. Реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды и затем рН подкисляли до <2, добавляя концентрированный водный раствор хлористоводородной кислоты. Остаток отфильтровывали, промывали этанолом и затем полученный фильтрат концентрировали до 20 мл при пониженном давлении. Добавляли эквивалентный объем воды, и эту смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 15 мин. Твердые вещества отфильтровывали, промывали водой, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением твердого вещества, которое сушили в вакуумной печи в течение нескольких часов с получением смеси гидрохлорида (1R,5R)-5-амино-2,2-диметилциклогексанола и гидрохлорида (1S,5S)-5-амино-2,2-диметилциклогексанола (835 мг, 4,65 ммоль, 115% выход), которое использовали без дополнительной очистки. 1Н-ЯМР (400 МГц, DMCO-d6) δ ч./млн 7,87-8,21 (м, 3Н), 2,98-3,23 (м, 1Н), 2,75-3,02 (м, 1Н), 1,49-1,92 (м, 2Н), 1,26-1,47 (м, 3Н), 0,96-1,16 (м, 1Н), 0,48-0,93 (м, 6Н).
F. 2-(Трет-бутиламино)-4-((1R,3R)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид и 2-(трет-бутиламино)-4-((1S,3S)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемой суспензии 2-(трет-бутиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида (375 мг, 1,46 ммоль) и смеси гидрохлорида (1R,5R)-5-амино-2,2-диметилциклогексанола и гидрохлорида (1S,5S)-5-амино-2,2-диметилциклогексанола (342 мг, 1,902 ммоль) в ДМФ (4,877 мл) добавляли ДИЭА (0,767 мл, 4,39 ммоль), и реакционную смесь нагревали до 90°С в течение ночи. Сырую реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и затем очищали, используя полипрепаративную ВЭЖХ с обратной фазой (5-80% ацетонитрил + 0,1% ТФУ в воде + 0,1% ТФУ, в течение 30 мин). Фракции, содержащие продукт, концентрировали при пониженном давлении и еще раз растворяли в смеси этилацетата (125 мл) и насыщенного водного раствора бикарбоната натрия (50 мл). Слои удаляли, и водный слой экстрагировали этилацетатом (75 мл). Объединенные этилацетатные слои сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество еще раз растворяли в метаноле (5 мл), пропускали через трубку SPE с полимером Varian StratoSpheres НСО3 для удаления ТФУ (0,9 ммоль бикарбонат эквив.), и затем концентрировали при пониженном давлении с получением масла, которое растирали в порошок с диэтиловым эфиром и еще раз концентрировали с получением твердых веществ. Твердые вещества сушили в течение нескольких часов в вакуумной печи при 45°С с получением смеси 2-(трет-бутиламино)-4-((1R,3R)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида и 2-(трет-бутиламино)-4-((1S,3S)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (373 мг, 1,112 ммоль, 76% выход).
G. Разделение SFC смеси 2-(трет-бутиламино)-4-((1R,3R)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида и 2-(трет-бутиламино)-4-((1S,3S)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида. Смесь энантиомеров 2-(трет-бутиламино)-4-((1R,3R)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида и 2-(трет-бутиламино)-4-((1S,3S)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (373 мг) разделяли с помощью препаративной хиральный SFC, используя колонку ChiralPak AD-H, 250×30 мм I.D. с изократическим 32% этанолом + 0,1% гидроксидом аммония в СО2 градиенте при скорости потока 50 мл/мин. Изомер, элюированный быстрее, был обозначен как пик 1 и 155 мг (0,462 ммоль) было получено. Изомер, элюированный медленнее, был обозначен как пик 2 и 170,0 мг (0,502 ммоль) было получено. Пик 1: 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,82-9,11 (м, 1Н), 8,34 (с, 1Н), 6,50-6,82 (м, 1Н), 4,40-4,72 (м, 1Н), 3,72-4,01 (м, 1Н), 3,01-3,25 (м, 1Н), 1,83-1,99 (м, 1Н), 1,65-1,81 (м, 1Н), 1,37 (с, 13Н), 0,89-0,95 (м, 3Н), 0,72-0,88 (м, 3Н). МС (ESI) m/z 336,2 [М+1]+. Пик 2: 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,95 (с, 1Н), 8,34 (с, 1Н), 6,68 (с, 1Н), 4,52 (д, J=4,9 Гц, 1Н), 3,86 (с, 1Н), 3,15 (дт, J=11,3, 4,6 Гц, 1Н), 1,90 (д, J=11,9 Гц, 1Н), 1,72 (с, 1Н), 1,40 (с, 1Н), 1,36 (с, 9Н), 1,34-1,05 (м, 3Н), 0,91 (с, 3Н), 0,82 (с, 3Н). МС (ESI) m/z 336,2 [М+1]+. С помощью сравнения силы SAR с аналогичными соединениями с известной абсолютной стереохимией, как приведено в настоящем описании, Пик 1 был обозначен как 2-(трет-бутиламино)-4-((1S,3S)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. Пик 2 был обозначен как 2-(трет-бутиламино)-4-((1R,3R)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид.
Пример 35: 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(изопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. Этил-4-(изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат. Этил-4-хлор-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат (900 г, 3,87 моль), этанол (12 л), ДИЭА (876 мл, 5,05 моль) и изопропиламин (379 мл, 4,45 моль) объединяли, и смешивали при температуре окружающей среды в течение 4 ч. Добавляли дополнительную порцию количества изопропиламина (50 мл, 0,59 моль), и смесь перемешивали в течение ночи при температуре окружающей среды. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и сырой продукт разбавляли водой (2 л). Водный слой экстрагировали хлороформом (2×3 л). Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением этил-4-(изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (1042 г, 4,08 моль, >100% выход, загрязнен следовыми количествами ДИЭА) в виде светло-коричневого масла, которое использовали без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 256,4 [М+1]+.
В. 4-(Изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновая кислота. Этил-4-(изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат (1042 г, 4,08 моль, >100%, загрязнен следовыми количествами ДИЭА) растворяли в этаноле (10 л), и к полученному раствору добавляли 2М водный раствор гидроксида натрия (3,87 л, 7,74 моль). Полученную смесь перемешивали в течение ночи при температуре окружающей среды и затем концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество разбавляли 2 л воды и затем промывали метил-трет-бутиловым эфиром (2×1,2 л). рН водного слоя подкисляли до рН 4,2-4,5 с помощью 2н водного раствора хлористоводородной кислоты. Полученные твердые вещества собирали путем фильтрации, промывали водой (2 л) и гексаном (2 л) и затем сушили в течение ночи в вакуумной печи при 45°С с получением 4-(изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновой кислоты (848 г, 96,5% выход в течение 2 стадий) в виде не совсем белого твердого вещества. МС (ESI) m/z 228,1 [М+1]+.
C. 4-(Изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. К раствору 4-(изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновой кислоты (180 г, 0,792 моль) и HOBt (123 г, 0,911 моль) в безводном ТГФ (6,9 л) по каплям добавляли смесь EDC (174,6 г, 0,911 моль) в ацетонитриле (3,7 л) при температуре окружающей среды. Смесь перемешивали в течение 1 ч при температуре окружающей среды и затем по каплям добавлял водный раствор гидроксид аммония (989 мл, 28-30% концентрировали, 10 экв.) в течение 30 мин. Полученную смесь нагревали при аккуратном кипячении с обратным холодильником в течение 3 ч и затем концентрировали при пониженном давлении. Оставшееся твердое вещество разбавляли насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (5 л) и затем экстрагировали дважды этилацетатом (9 л и 2 л, соответственно). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (4 л), водой (4 л), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 4-(изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (171,2 г, 95,5% выход) в виде твердого вещества. МС (ESI) m/z 227,4 [М+1]+.
D. 4-(Изопропиламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемому раствору 4-(изопропиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (170 г, 0,751 моль) в хлороформе (22 л) порциями добавляли 3-фенил-2-(фенилсульфонил)-1,2-оксазиридин (235,6 г, 0,902 моль), и полученный раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Добавляли дополнительную порцию 3-фенил-2-(фенилсульфонил)-1,2-оксазиридина (19,6 г, 0,075 моль), и смесь затем перемешивали в течение ночи при температуре окружающей среды. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении с получением сырого продукта в виде белого твердого вещества. Твердые вещества насыщали этилацетатом (1,5 л) при температуре окружающей среды в течение 1 ч, фильтровали, промывали этилацетатом (250 мл) и сушили в вакуумной печи в течение ночи при 45°С с получением 4-(изопропиламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида (167,7 г, 92% выход) в виде белого твердого вещества. МС (ESI) m/z 243,2 [М+1]+.
Е. 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(изопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид. Смесь (1R,4R)-4-аминоциклогексанола (262,4 г, 2,278 моль) и безводный ДМФ (79 мл) нагревали до 100°С. К этой смеси порциями добавляли 4-(изопропиламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамид (157,7 г, 0,651 моль). Полученную смесь оставляли перемешиваться в атмосфере азота при 110°С в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления ДМФ. К оставшемуся твердому веществу добавляли воду (2 л), и смесь экстрагировали этилацетатом (3×2 л). Объединенные органические экстракты промывали водой (2×2 л), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении до тех пор, пока оставшийся объем не достигал 500 мл. Полученное вещество фильтровали и промывали этилацетатом (800 мл). Продукт сушили при 45°С в вакуумной печи в течение ночи. Продукт растирали в порошок с водой (2,1 л) в течение 4,5 ч при 50°С, фильтровали и затем сушили при 45°С в вакуумной печи в течение ночи с получением 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(изопропиламино)пиримидин-5-карбоксамида (134 г, 70% выход); 1H-ЯМР (499 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,71-9,01 (м, 1Н), 8,33 (уш. с., 1Н), 7,42-7,70 (м, 1Н), 6,67-7,12 (м, 2Н), 4,51 (д, J=3,94 Гц, 1Н), 3,98-4,25 (м, 1Н), 3,51-3,77 (м, 1Н), 3,34-3,41 (м, 1Н), 1,82 (уш. с., 4Н), 1,06-1,33 (м, 10Н). МС (ESI) m/z 294,1 [М+1]+.
Пример 36: (1R,4R)-4-(5-циано-4-((1R,3S)-3-гидрокси-3-метилциклогексиламино)пиримидин-2-иламино)-N,N-диметилциклогексанкарбоксамид
А. трет-бутил-(1R,4R)-4-(диметилкарбамоил)циклогексилкарбамат. Смесь (1R,4R)-4-(трет-бутоксикарбониламино)циклогексанкарбоновой кислоты (7,5 г, 30,8 ммоль), EDC (20,09 г, 105 ммоль), HOBt (16,05 г, 105 ммоль) в NMP (60 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли раствор диметиламина (46,2 мл, 92 ммоль) (2,0 М в ТГФ), и реакционную смесь перемешивали в течение 2 дней. Добавляли воду и этилацетат, и фазы разделяли. Органическую фазу дважды промывали насыщенным водным раствором карбоната калия, а затем 1М водным раствором хлористого водорода и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали, и растворитель упаривали с получением целевого продукта (5,8 г, 19,3 ммоль, 96% выход). МС (ESI) m/z 271,4 [М+1]+.
B. Гидрохлорид (1R,4R)-4-амино-N,N-диметилциклогексанкарбоксамида. Трет-бутил-(1R,4R)-4-(диметилкарбамоил)циклогексилкарбамат (8,27 г, 30,6 ммоль) растворяли в диоксане (110 мл) и добавляли хлористоводородную кислоту (38,5 мл, 1267 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч, добавляли толуол, и растворитель упаривали с получением продукта (6,0 г, 29,0 ммоль, 95% выход). 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,22 (уш. с., 3Н), 3,01 (с, 3Н), 2,86-2,98 (м, 1Н), 2,79 (с, 3Н), 1,93-2,04 (м, 2Н), 1,72 (д, J=7,81 Гц, 2Н), 1,31-1,48 (м, 4Н). МС (ESI) m/z 171,4 [М+1]+.
C. (1R,4R)-4-(5-Бром-4-(метилтио)пиримидин-2-иламино)-N,N-диметилциклогексанкарбоксамид. К перемешиваемой суспензии 5-бром-2-хлор-4-(метилтио)пиримидина (1,5 г, 6,26 ммоль) в этаноле (7,5 мл) добавляли гидрохлорид (1R,4R)-4-амино-N,N-диметилциклогексанкарбоксамида (1,618 г, 7,83 ммоль) и ДИЭА (3,28 мл, 18,79 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 80°С в течение ночи. Этанол удаляли при пониженном давлении и оставшееся твердое вещество очищали, используя хроматографию на силикагеле (0-90% этилацетат в гексане) с получением (1R,4R)-4-(5-бром-4-(метилтио)пиримидин-2-иламино)-N,N-диметилциклогексанкарбоксамида (1085 мг, 2,91 ммоль, 46,4% выход). МС (ESI) m/z 373,0 [М+1]+, 375,2 [М+1]+.
D. (1R,4R)-4-(5-Циано-4-(метилтио)пиримидин-2-иламино)-N,N-диметилциклогексанкарбоксамид. (1R,4R)-4-(5-Бром-4-(метилтио)пиримидин-2-иламино)-N,N-диметилциклогексанкарбоксамид (500 мг, 1,339 ммоль), цинковая пыль (21,90 мг, 0,335 ммоль), цианид цинка (102 мг, 0,871 ммоль), 1,1'-бис-(дифенилфосфино)-ферроцен (60,0 мг, 0,107 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладий (0) (61,3 мг, 0,067 ммоль), и N,N-диметилацетамид (2,178 мл) объединяли, и полученную смесь перемешивали и нагревали при температуре 90°С в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (125 мл) и водой (50 мл) и фильтровали через пад из Целита. Фильтрат слои удаляли, и водный слой экстрагировали этилацетатом (75 мл). Объединенные этилацетатные слои промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до масла при пониженном давлении. Масло очищали используя хроматографию на силикагеле (0-10% метанол в ДХМ) с получением (1R,4R)-4-(5-циано-4-(метилтио)пиримидин-2-иламино)-N,N-диметилциклогексанкарбоксамид (400 мг, 1,252 ммоль, 93% выход) в виде твердого вещества. МС (ESI) m/z 320,2 [М+1]+.
E. (1R,4R)-4-(5-Циано-4-(метилсульфонил)пиримидин-2-иламино)-N,N-диметилциклогексанкарбоксамид. К раствору (1R,4R)-4-(5-циано-4-(метилтио)пиримидин-2-иламино)-N,N-диметилциклогексанкарбоксамида (400 мг, 1,252 ммоль) в NMP (6,261 мл) при 0°С добавляли mCPBA (702 мг, 3,13 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при 0°С и затем при температуре окружающей среды в течение ночи. Раствор затем использовали непосредственно в следующей стадии без дополнительной очистки, предполагая теоретический выход (1R,4R)-4-(5-циано-4-(метилсульфонил)пиримидин-2-иламино)-N,N-диметилциклогексанкарбоксамида (440 мг, 1,25 ммоль, 100% выход). МС (ESI) m/z 352,3 [М+1]+.
F. (1R,4R)-4-(5-Циано-4-((1R,3S)-3-гидрокси-3-метилциклогексиламино)пиримидин-2-иламино)-N,N-диметилциклогексанкарбоксамид. К раствору (1R,4R)-4-(5-циано-4-(метилсульфонил)пиримидин-2-иламино)-N,N-диметилциклогексанкарбоксамида (440 мг, 1,252 ммоль) в NMP (6,261 мл) добавляли гидрохлорид (1S,3R)-3-амино-1-метилциклогексанола (259 мг, 1,565 ммоль) и ДИЭА (1,312 мл, 7,51 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 4 ч и затем оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды в течение ночи. Сырую реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали, используя полупрепаративную ВЭЖХ с обратной фазой (5-60% ацетонитрил + 0,1% ТФУ в воде + 0,1% ТФУ, в течение 30 мин). Фракции, содержащие продукт, концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество еще раз растворяли в метаноле (5 мл), пропускали через трубки SPE с полимером Varian StratoSpheres НСО3 для удаления ТФУ (0,9 ммоль бикарбонатного эквививалента на трубку), концентрировали при пониженном давлении и сушили в течение ночи в вакуумной печи при 45°С с получением (1R,4R)-4-(5-циано-4-((1R,3S)-3-гидрокси-3-метилциклогексиламино)пиримидин-2-иламино)-N,N-диметилциклогексанкарбоксамида (138 мг, 0,345 ммоль, 27,5% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,11 (с, 1Н), 7,58 (д, J=7,81 Гц, 2Н), 4,70-5,01 (м, 1Н), 4,12-4,42 (м, 2Н), 3,52-3,79 (м, 1Н), 3,00 (с, 3Н), 2,79 (с, 3Н), 1,21-2,07 (м, 16Н), 1,03-1,20 (м, 3Н). МС (ESI) m/z 401,5 [М+1]+.
Пример 37: 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(трет-пентиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 2-(Метилтио)-4-(трет-пентиламино)пиримидин-5-карбонитрил. 4-Хлор-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрил (500 мг, 2,69 ммоль) растворяли в ДМФ (5 мл), добавляли 2-метилбутан-2-амин (0,378 мл, 3,24 ммоль) и ДИЭА (1,411 мл, 8,08 ммоль), и реакционную смесь нагревали при 70°С в течение ночи. ЖХ-МС показала, что масса целевого продукта имела доминирующий пик и исходного продукта не оставалось. Реакционную смесь охлаждали и разделяли между этилацетатом и водой. Органический слой промывали один раз насыщенным солевым раствором, а затем сушили над сульфатом магния, фильтровали и конденсировали. Сырое вещество очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-80% этилацетат в гексане в течение 1650 мл; 40 мл/мин). Фракции продукта объединяли, упаривали и сушили в высоком вакууме с получением 2-(метилтио)-4-(трет-пентиламино)пиримидин-5-карбонитрила (359 мг, 1,519 ммоль, 56,4% выход) в виде белого твердого вещества; МС (ESI) m/z 236,9 [М+1]+.
В. 2-(Метилсульфонил)-4-(трет-пентиламино)пиримидин-5-карбонитрил. 2-(Метилтио)-4-(трет-пентиламино)пиримидин-5-карбонитрил (350 мг, 1,481 ммоль) растворяли в NMP (5 мл), и охлаждали до 0°С, а затем порциями добавляли mCPBA (664 мг, 2,96 ммоль). Реакционную смесь поддерживали при 0°С и оставляли медленно нагреваться при комнатной температуре. Через 2 ч ЖХ-МС показала целевой продукт в виде доминантного пика и отсутствие исходного продукта. Сырую реакционную смесь непосредственно использовали в следующей стадии, предполагая теоретический выход сульфона; МС (ESI) m/z 269,2 [М+1]+.
С. 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(трет-пентиламино)пиримидин-5-карбонитрил. К сырой реакционной смеси из предыдущей стадии добавляли гидрохлорид (1R,4R)-4-аминоциклогексанола (269 мг, 1,775 ммоль) и ДИЭА (1,034 мл, 5,92 ммоль). Реакционную смесь затем нагревали при температуре 70°С в течение ночи. ЖХ-МС показала доминирующим целевой продукт и отсутствие исходного продукта. Реакционную смесь охлаждали и затем разделяли между этилацетатом и водой. Органический слой промывали один раз насыщенным солевым раствором, а затем сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрация при пониженном давлении. Вещество очищали с помощью полупрепаративной ВЭЖХ (5-80% ацетонитрил + 0,1% ТФУ в воде + 0,1% ТФУ). Фракции продукта объединяли и концентрировали при пониженном давлении до объема <5 мл. Вещество затем нейтрализовывали насыщенным бикарбонатом натрия и экстрагировали этилацетатом (2х). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество растворяли в метаноле и промывали через трубку SPE с полимером Varian StratoSpheres PL-НСО3, элюируя метанолом. Упаривание растворителя при пониженном давлении давало 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(трет-пентиламино)пиримидин-5-карбонитрил (200 мг, 0,659 ммоль, 45% выход) в виде белого твердого вещества; 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,07-8,24 (м, 1Н), 7,24-7,63 (м, 1Н), 5,67-5,95 (м, 1Н), 4,56 (д, J=4,69 Гц, 1Н), 3,35-3,60 (м, 2 Н), 1,74-1,96 (м, 6Н), 1,09-1,43 (м, 10Н), 0,72-0,86 (м, 3Н); МС (ESI) m/z 304,1 [М+1]+.
D. 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(трет-пентиламино)пиримидин-5-карбоксамид. 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(трет-пентиламино)пиримидин-5-карбонитрил (141 мг, 0,465 ммоль) растворяли в ДМСО (3 мл) и добавляли 10 капель 50% водного раствора гидроксида натрия и 10 капель 30% водного раствора перекиси водорода при комнатной температуре. Реакционную смесь затем нагревали при температуре 50°С. Через 30 мин ЖХ-МС показала целевой продукт в виде доминантного пика и отсутствие исходного продукта. Реакционную смесь охлаждали и медленно добавляли к ~50 мл ледяной воды. Полученное вещество оставляли перемешиваться в течение 3 ч, а затем фильтровали и сушить в высоком вакууме при 60°С в течение ночи. Получали 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(трет-пентиламино) пиримидин-5-карбоксамид (125 мг, 0,389 ммоль, 84% выход); 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 9,14 (с, 1Н), 8,31 (с, 1Н), 7,00 (д, J=7,81 Гц, 1Н), 4,53 (д, J=4,29 Гц, 1Н), 3,38 (д, J=3,51 Гц, 2Н), 1,74-1,92 (м, 6Н), 1,36 (с, 7Н), 1,13-1,31 (м, 4Н), 0,80 (т, J=7,42 Гц, 3Н); МС (ESI) m/z 322,0 [М+1]+.
Пример 38: 4-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
A. Этил-4-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат. Смесь этил-4-хлор-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилата (200 г, 0,86 моль), гидрохлорида бицикло[1.1.1]пентан-1-амина (171 г, 1,11 моль; получен в соответствии с Org. Lett., 13(17): 4746-4748 (2011)) и ДИЭА (278 г, 2,15 моль) в этаноле (2,4 л) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения реакции, растворители концентрировали при пониженном давлении с получением сырого продукта, который разбавляли водой (1 л). Водный слой экстрагировали хлороформом (2×1 л), и объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором и сушили над безводным сульфатом натрия. Упаривание растворителей давало целевое соединение (231 г, 0,83 моль, 96% выход) в виде светло-коричневого масла, которое было загрязнено следовыми количествами ДИЭА. Этот продукт использовали в следующей реакции без дополнительной очистки; 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 8,61 (с, 2Н), 4,30 (кв, J=7,2 Гц, 2Н), 2,54 (с, 3Н), 2,51 (с, 1Н), 2,20 (с, 6Н), 1,35 (т, J=7,2 Гц, 3Н).
B. 4-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновая кислота. Этил-4-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксилат (120 г, 0,43 моль) растворяли в этаноле (1,5 л), а затем добавляли водный раствор гидроксида натрия (530 мл, 1,06 моль, 2М), и полученную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После этого растворитель упаривали при пониженном давлении (температура бани <42°С). Смесь разбавляли 500 мл воды и промывали трет-бутилметиловым эфиром (2×500 мл). Водный слой обрабатывали водным раствором хлористоводородной кислоты (2н) до рН 4,2-4,5. Полученные твердые вещества собирали путем фильтрации, а затем промывали водой (500 мл) и гексаном (500 мл). Влажную лепешку сушили при пониженном давлении в течение ночи при 45°С, с получением целевого соединения (108 г, 0,43 моль, 100% выход) в виде не совсем белого твердого вещества (116 мг, 0,365 ммоль, 54,7% выход); 1H-ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ ч./млн 8,52 (с, 1Н), 2,55 (с, 3Н), 2,52 (с, 1Н), 2,24 (с, 6Н).
С. 4-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемому раствору 4-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоновой кислоты (108 г, 0,43 моль) и HOBt (67 г, 0,49 моль) в безводном ТГФ (4 л) по каплям добавляли смесь EDC (94 г, 0,49 моль) в ацетонитриле (2 л) при комнатной температуре. Затем реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре, по каплям добавляли водный гидроксид аммония (600 мл, 28-30% концентрировали, 10 экв.) в течение 30 мин, а затем смесь нагревали до аккуратного кипения с обратным холодильником в течение 3 ч (60±5°С). После этого все растворители удаляли при пониженном давлении, оставшуюся пасту/твердое вещество разбавляли насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2 л), и полученную суспензию фильтровали с получением целевого соединения (100 г, 0,4 моль, 93% выход) в виде не совсем белого рыхлого твердого вещества; MC(ESI): m/z 251,1 [M+1]+.
D. 4-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемому раствору 4-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (76 г, 0,304 моль) в хлороформе (7 л) добавляли 3-фенил-2-(фенилсульфонил)-1,2-оксазиридин (143 г, 0,547 моль, 1,8 экв.), и полученный светло-желтый раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении с получением сырого продукта в виде белого твердого вещества, который разбавляли этилацетатом (1,5 л), и взвесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Полученную суспензию фильтровали, промывали этилацетатом и сушили в вакууме с получением целевого соединения (73 г, 0,274 моль, 90% выход) в виде белого твердого вещества; MC(ESI): m/z 267,0 [M+1]+.
E. 4-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. Смесь (1R,4R)-4-аминоциклогексанола (151,4 г, 1,314 моль) и безводного ДМФ (500 мл) нагревали при ~100°С. К этой смеси порциями добавляли 4-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамид (100 г, 0,376 моль) в атмосфере азота, и реакционную смесь перемешивали при 110°С в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до ~45°С, и ДМФ удаляли при пониженном давлении с последующим добавлением воды (500 мл) и этилацетата (500 мл). Полученный белую взвесь фильтровали и промывали этилацетатом (50 мл). Твердое вещество сушили при 55°С в вакууме в течение 48 ч с получением 100 г сырого продукта. Для удаления следовых количеств органического растворителя сырой продукт суспендировали в воде (1 л) и перемешивали в течение 4,5 ч, поддерживая внутреннюю температуру при 50±1°С. Взвесь фильтровали при 45-50°С и промывали водой (50 мл). Влажную лепешку сушили в вакууме при 45-50°С в течение 48 ч с получением целевого соединения (92 г, 0,289 моль, 77% выход); 1H-ЯМР (CD3OD, 400 МГц): δ ч./млн 8,26 (с, 1Н), 3,79 (м, 1Н), 3,56-3,58 (м, 1Н), 2,47 (с, 1Н), 2,18 (с, 6Н), 1,98-2,06 (м, 4Н), 1,32-1,39 (м, 4Н); MC(ESI): m/z 318,1 [M+1]+.
Пример 39: 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
A. (1R,4R)-4-(5-Бром-4-(метилтио)пиримидин-2-иламино)-циклогексанол. 3-Литровая 3-горлая круглодонная колба была снабжена температурным контроллером J-KEM, механической мешалкой и трубкой для подачи азота. Колбу наполняли 5-бром-2-хлор-4-(метилтио)пиримидином (100 г, 417,5 ммоль), (1R,4R)-4-аминоциклогексанолом (76,4 г, 663,4 ммоль) и этанолом (1 л). Добавляли ДИЭА (109 мл, 626,3 ммоль), и смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником в течение ночи. ТСХ (1:1 гексан/этилацетат) анализ через 20 ч показал завершение реакции. Реакционную смесь оставляли охлаждаться при комнатной температуре. Добавляли воду (300 мл), и постепенно образовывался осадок. Твердое вещество фильтровали и промывали водой с получением 111,7 г белого твердого вещества. Фильтрат экстрагировали этилацетатом (3×300 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали до полутвердого вещества. С полутвердым веществом образовывали взвесь в 1:1 гексане/этилацетате и фильтровали с получением дополнительной порции 12,1 г белого твердого вещества. Две партии объединяли с получением 123,8 г (93%) (1R,4R)-4-(5-бром-4-(метилтио)пиримидин-2-иламино)циклогексанола в виде белого твердого вещества. МС (ESI) m/z 318, 320 [М+1]+.
В. 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрил. 2-Литровая 3-горлая круглодонная колба была снабжена температурным контроллером J-КЕМ, механической мешалкой и трубкой для подачи азота. Колбу наполняли атмосферой азота с (1R,4R)-4-(5-бром-4-(метилтио)пиримидин-2-иламино)циклогексанолом (123,8 г, 389 ммоль), цианидом цинка (29,2 г, 249 ммоль), цинковой пылью (6,36 г, 97 ммоль) и N,N-диметилацетамидом (478 мл). Добавляли трис(дибензилиденацетон)дипалладий (0) (17,8 г, 0,05 экв.) и 1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен (17,25 г, 0,08 экв.), и смесь очищали азотом. Реакционную смесь нагревали до 100°С в течение ночи. ТСХ (2:1 этилацетат/гексан) анализ через 17 ч указал на завершение реакции. Реакционную смесь оставляли охлаждаться при комнатной температуре и разбавляли этилацетатом (2 л). Смесь фильтровали через короткий пад из Целита, и пад промывали этилацетатом (3×400 мл). Объединенные органические слои промывали водой (1 л) и солевым раствором (400 мл), сушили над сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали для удаления большей части растворителя, и образовывался бежевый осадок. Твердые вещества фильтровали и промывали этилацетатом (2×50 мл) с получением 55 г (54%) 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила в виде бежевого твердого вещества. МС (ESI) m/z 265 [М+1]+.
C. 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбонитрил и 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбонитрил. К перемешанному бесцветному раствору 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (0, 700 г, 2,65 ммоль) в NMP (10 мл) добавляли mCPBA (1, 306 г, 5,83 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч до завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС. Реакционную смесь переносили в следующую стадию без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 281,4 [М+1]+и 297,2 [М+1]+.
D. 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбонитрил. К реакционной смеси 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбонитрила и 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбонитрила из предыдущей стадии добавляли ДИЭА (2,78 мл, 15,89 ммоль) и гидрохлорид 1-метилциклопропанамина (0,627 г, 5,83 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение 16 ч. После завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС и ТСХ, реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью хроматографии на силикагеле, используя градиент 0%-80% этилацетата в гексане. Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением 2-((1S,4S)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбонитрила (0,147 г, 19% выход) в виде светло-желтого твердого вещества. МС (ESI) m/z 288,2 [М+1]+.
Е. 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид. 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбонитрил (0,225 г, 0,783 ммоль) растворяли в ДМСО (15 мл). В реакционную смесь добавляли гидроксид натрия (50% масс, 175 мкл, 0,783 ммоль) и 30% перекись водорода (175 мкл, 1,543 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 1 ч. После завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС и ТСХ, реакционную смесь охлаждали при комнатной температуре и выливали в 300 мл ледяной воды. Водный слой экстрагировали 20% изопропанолом в хлороформе (×3), и объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали. Сырую смесь очищали хроматографией с обратной фазой на силикагеле, используя градиент 0%-90% метанол в воде. Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамида (0,181 г, 76% выход); 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 9,10 (с, 1Н), 8,33 (с, 1Н), 7,06 (д, J=7,42 Гц, 1Н), 4,53 (д, J=4,30 Гц, 1Н), 3,59-3,70 (м, 1Н), 3,35-3,46 (м, 1Н), 1,96 (д, J=9,76 Гц, 1Н), 1,85 (д, J=9,76 Гц, 2Н), 1,40 (с, 3Н), 1,20-1,34 (м, 4Н), 0,81-0,89 (м, 1Н), 0,58-0,71 (м, 4Н); МС (ESI) m/z 306,4 [М+1]+.
Пример 40: 4-((R)-1-Циклопропилэтиламино)-2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. 2-Литровая 3-горлая круглодонная колба была снабжена температурным контроллером J-КЕМ, механической мешалкой и трубкой для подачи азота. Колбу наполняли 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрилом (54 г, 204,3 ммоль; синтез описан в настоящем описании) и ДМСО (270 мл), и раствор охлаждали до 0°С. К реакционной смеси медленно добавляли гидроксид натрия (170 мл, 1021 ммоль, 6 М в воде) и раствор перекиси водорода (99 мл, 1021 ммоль, 35% в воде). Наблюдалась экзотермическая реакции до 30°С. Реакционную смесь нагревали до 50°С в течение 15 мин. ТСХ (10% метанол/этилацетат) анализ указал на завершение реакции. Смесь охлаждали до 10°С, разбавляли водой (800 мл) и перемешивали в течение 10 мин. Смесь фильтровали с получением 18 г сырого твердого вещества. Для восстановления большего количества продукта, фильтрат экстрагировали этилацетатом (18×250 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (75 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением 33 г сырого твердого вещества. Сырое твердое вещество объединяли и очищали на силикагеле, элюируя 0-15% метанолом/этилацетатом с получением 26 г не совсем белого твердого вещества. Образовывали взвесь твердого вещества в ацетонитриле и фильтровали с получением 19,5 г (33%) 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида в виде не совсем белого твердого вещества; МС (ESI) m/z 283,3 [М+1]+.
B. 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамид и 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемому желтому раствору 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (0,400 г, 1,42 ммоль) в NMP (5 мл) добавляли mCPBA (0,635 г, 2,83 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч до завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС. Реакционную смесь переносили в следующую стадию без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 298,0 [М+1]+ и 315,1 [М+1]+.
C. 4-((R)-1-Циклопропилэтиламино)-2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К реакционной смеси 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида и 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида из предыдущей реакции добавляли ДИЭА (1,56 мл, 8,95 ммоль) и (R)-1-циклопропилэтанамин (0,254 г, 2,98 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение 16 ч. После завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС и ТСХ, реакционную смесь концентрировали и очищали хроматографией с обратной фазой на силикагеле, используя градиент 0%-90% метанола в воде. Целевые фракции очищали снова с помощью хроматографии на силикагеле, используя градиент 0%-15% метанола, насыщенного аммонием в ДХМ, а затем с помощью полупрепаративной ВЭЖХ с обратной фазой (0-50% ацетонитрил + 0,1% ТФУ в воде + 0,1% ТФУ, в течение 30 мин). Фракции, содержащие продукт, концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество еще раз растворяли в метаноле (5 мл), пропускали через трубки SPE с полимером Varian StratoSpheres НСО3 для удаления ТФУ (0,9 ммоль бикарбонатный эквивалент на трубку), и затем концентрировали при пониженном давлении с получением 4-((R)-1-циклопропилэтиламино)-2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (0,104 г, 22% выход); 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,87-9,10 (м, 1Н), 8,32 (уш. с., 1Н), 6,68-7,02 (м, 1Н), 4,51 (д, J=3,94 Гц, 1Н), 3,52-3,72 (м, 2Н), 3,36 (уш. с., 1Н), 1,82 (уш. с., 4Н), 1,12-1,32 (м, 8Н), 0,95 (д, J=6,89 Гц, 1Н), 0,25-0,50 (м, 3Н), 0,10-0,23 (м, 1Н); МС (ESI) m/z 320,1 [М+1]+.
Пример 41: 4-((1R,3R,4R)-3-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
A. 5-Бром-N-(1-метилциклопропил)-4-(метилтио)пиримидин-2-амин. К перемешиваемой суспензии 5-бром-2-хлор-4-(метилтио)пиримидина (1,0 г, 4,18 ммоль) в этаноле (6,0 мл) добавляли гидрохлорид 1-метилциклопропанамин (0,674 г, 6,26 ммоль) и ДИЭА (2,188 мл, 12,53 ммоль). Смесь перемешивали при 90°С в течение 16 ч. После завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС и ТСХ, реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью хроматографии на силикагеле, используя градиент 0%-20% этилацетата в гексане. Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением 5-бром-N-(1-метилциклопропил)-4-(метилтио)пиримидин-2-амина (0,665 г, 58% выход) в виде белого твердого вещества. МС (ESI) m/z 276,2 [М+1]+.
B. 2-(1-Метилциклопропиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрил. Черную суспензию 5-бром-N-(1-метилциклопропил)-4-(метилтио)пиримидин-2-амина (0,665 г, 2,425 ммоль), цинка (0,040 г, 0,606 ммоль), цианида цинка (0,185 г, 1,577 ммоль), 1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцена (0,109 г, 0,194 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладия (0) (0,111 г, 0,121 ммоль) и N,N'-диметилацетамида (6 мл) промывали азотом и нагревали при температуре 90°С в течение 16 ч. После завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС и ТСХ, реакционную смесь разбавляли 125 мл этилацетат и 50 мл воды и фильтровали через пад из Целита. Слои фильтрата удаляли, и водный слой экстрагировали 75 мл этилацетата. Объединенные этилацетатные слои промывали 2×50 мл насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до масла. Сырое масло очищали с помощью хроматографии на силикагеле, используя градиент 0%-30% этилацетата в гексане. Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением 2-(1-метилциклопропиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (0,449 г, 84% выход) в виде светло-желтого твердого вещества. МС (ESI) m/z 221,2 [М+1]+.
C. 2-(1-Метилциклопропиламино)-4-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбонитрил. К перемешанному бесцветному раствору 2-(1-метилциклопропиламино)-4-(метилтио)-пиримидин-5-карбонитрила (0,449 г, 2,04 ммоль) в NMP (6 мл) добавляли mCPBA (1,142 г, 5,10 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч до завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС. Реакционную смесь переносили в следующую стадию без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 253,3 [М+1]+.
D. 4-((3R,4R)-3-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбонитрил. К реакционной смеси 2-(1-метилциклопропиламино)-4-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбонитрила из предыдущей стадии добавляли ДИЭА (2,14 мл, 12,22 ммоль) и гидрохлорид (1R,2R,5R)-5-амино-2-метилциклогексанола (0,371 г, 2,241 ммоль; синтез описан в настоящем описании). Реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение 16 ч. После завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС и ТСХ, реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью хроматографии на силикагеле, используя градиент 0%-60% этилацетата в гексане. Фракции продукта объединяли и концентрировали с получением 4-((3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбонитрила (0,185 г, 30% выход) в виде светло-желтого твердого вещества. МС (ESI) m/z 302,1 [M+1]+.
Е. 4-((1R,3R,4R)-3-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид. 4-((3R,4R)-3-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбонитрил (0,181 г, 0,601 ммоль) растворяли в ДМСО (6 мл). Добавляли десять капель 50% водного раствора гидроксида натрия (0,047 мл, 0,901 ммоль) и десять капель 30% водного раствора перекиси водорода при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 1 ч. После завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС и ТСХ, реакционную смесь охлаждали при комнатной температуре и выливали в 300 мл ледяной воды. Водный слой экстрагировали 20% iPrOH/хлороформ (×3), и объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали. Сырую смесь очищали с помощью полупрепаративной ВЭЖХ с обратной фазой (0-50% ацетонитрил + 0,1% ТФУ в воде + 0,1% ТФУ, в течение 30 мин). Фракции, содержащие продукт, концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество еще раз растворяли в метаноле (5 мл), пропускали через трубки SPE с полимером Varian StratoSpheres НСО3 для удаления ТФУ (0,9 ммоль бикарбонатный эквивалент на трубку), и затем концентрировали при пониженном давлении с получением 4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамида (0,069 г, 36% выход); 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,79-8,92 (м, 1Н), 8,28-8,39 (м, 1Н), 7,32-7,48 (м, 1Н), 4,56 (с, 1Н), 3,83-3,97 (м, 1Н), 2,89-3,08 (м, 1Н), 2,18-2,31 (м, 1Н), 1,97-2,08 (м, 1Н), 1,61-1,74 (м, 1Н), 1,35 (с, 4Н), 1,05-1,26 (м, 1Н), 0,94 (д, J=6,64 Гц, 5Н), 0,66 (с, 3Н), 0,54 (уш. с., 3Н); МС (ESI) m/z 320,2 [М+1]+.
Пример 42: 4-(Трет-бутиламино)-2-((1R,4R)-4-циклопропоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
A. 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексил)изоиндолин-1,3-дион. К перемешанному раствору изобензофуран-1,3-диона (90 г, 0,6 моль) и (1R,4R)-4-аминоциклогексанола (70 г, 0,6 моль) в толуоле (250 мл) и ДМФ (250 мл) перемешивали при 130°С в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали при комнатной температуре, добавляли воду, и продукт фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества, который использовали в следующей стадии без дополнительной очистки (119 г, 0,48 моль, выход: 81%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 7,84-7,79 (м, 2Н), 7,72-7,68 (м, 2Н), 4,18-4,10 (м, 1Н), 3,80-3,73 (м, 1Н), 2,40-2,29 (квд, J1=3,4 Гц, J2=130 Гц, 2Н), 2,12-2,09 (дд, J=6,2 Гц, 2Н), 1,78-1,74 (дд, J=6,6 Гц, 2Н), 1,49-1,39 (квд, J1=3,3 Гц, J2=125 Гц, 2Н).
B. 2-((1R,4R)-4-(Винилокси)циклогексил)изоиндолин-1,3-дион. Палладий ацетат (11 г, 0,048 моль) в этоксиэтене (500 мл) перемешивали при 0°С в течение 15 мин, а затем добавляли раствор 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)изоиндолин-1,3-диона (118 г, 0,48 моль) в этоксиэтане (1000 мл). Смесь перемешивали при 60°С в течение 3 дней. После чего смесь охлаждали при комнатной температуре, фильтровали и промывали этилацетатом. Полученный фильтрат концентрировали с получением сырого продукта, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (16,7%-25% этилацетат в петролейном эфире) с получением соединения, указанного в заголовке в виде белого твердого вещества (80 г, 0,29 моль, выход: 61%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 7,84-7,80 (м, 2Н), 7,72-7,68 (м, 1Н), 6,37-6,32 (дд, J=6,4 Гц, 1Н), 4,34-4,30 (дд, J=1,2 Гц, 1Н), 4,20-4,12 (м, 1Н), 4,04-4,02 (дд, J=2,0 Гц, 1Н), 3,89-3,81 (м, 1Н), 2,40-2,29 (квд, J1=3,4 Гц, J2=130,6 Гц, 2Н), 2,21-2,17 (дд, J=64 Гц, 2Н), 1,82-1,78 (дд, J=64 Гц, 2Н), 1,53-1,43 (квд, J1=33 Гц, J2=126,6 Гц, 2Н).
С. 2-((1R,4R)-4-Циклопропоксициклогексил)изоиндолин-1,3-дион. К перемешиваемой смеси диэтилового эфира (100 мл) и гидроксида калия (2,5 н, 50 мл) добавляли 1-нитрозомочевину (38 г, 0,37 моль) при 0°С. Через 15 мин эфирную фазу собирали и осторожно добавляли к смеси 2-((1R,4R)-4-(винилокси)циклогексил)изоиндолин-1,3-диона (10 г, 36,9 ммоль) и ацетата палладия (826 мг, 3,69 ммоль) в диэтиловом эфире (100 мл) и ДХМ (100 мл). Полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 0,5 ч. Процедуру восстановления и добавления эфирного раствора диазометана затем повторяли три раза. После того, как реакция завершалась, твердое вещество в реакционной смеси отфильтровывали, фильтрат собирали и концентрировали с получением сырого продукта, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (25% этилацетат в петролейном эфире, затем 33% этилацетат в петролейном эфире) с получением 2-((1R,4R)-4-циклопропоксициклогексил)изоиндолин-1,3-диона (9,3 г, 32,6 ммоль, выход: 88%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 7,84-7,79 (м, 2Н), 7,72-7,67 (м, 1Н), 4,18-4,09 (м, 1Н), 3,56-3,48 (м, 1Н), 3,37-3,33 (м, 1Н), 2,38-2,27 (квд, J1=3, 6 Гц, J2=130,6 Гц, 2Н), 2,21-2,18 (дд, J=6,4 Гц, 1Н), 1,79-1,76 (дд, J=6,4 Гц, 2Н), 1,50-1,33 (квд, J1=35 Гц, J2=126 Гц, 2Н), 0,60-0,56 (м, 2Н), 0,50-0,46 (м, 2Н).
D. (1R,4R)-4-Циклопропоксициклогексанамин. Смесь 2-((1R,4R)-4-циклопропоксициклогексил)изоиндолин-1,3-диона (30 г, 0,10 моль) и гидрата гидразина (18,9 г, 0,31 моль) в метаноле (600 мл) нагревали при 80°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали при комнатной температуре и фильтровали. Фильтрат собирали и концентрировали с получением сырого продукта, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (3,33% метанол в ДХМ) с получением (1R,4R)-4-циклопропоксициклогексанамина в виде желтого масла (10 г, 64,5 ммоль, выход: 61%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 3,40-3,28 (м, 2Н), 2,72-2,65 (м, 1Н), 2,06-2,03 (дд, J=3,8 Гц, 2Н), 1,88-1,85 (дд, J=6,2 Гц, 2Н), 1,34-1,24 (квд, J1=28 Гц, J2=123,3 Гц, 2Н), 1,19-1,09 (квд, J1=28 Гц, J2=123,3 Гц, 2Н), 0,56-0,51 (м, 2Н), 0,49-0,44 (м, 2Н); MC(ESI) m/z=156,1 [M+1]+.
E. 4-(Трет-бутиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешанному раствору 4-(трет-бутиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (0,500 г, 2,081 ммоль; синтез описан в настоящем описании) в NMP (6 мл) добавляли mCPBA (0,933 г, 4,16 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч до завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС. Реакционную смесь переносили в следующую стадию без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 273,2 [М+1]+.
F. 4-(трет-бутиламино)-2-((1R,4R)-4-циклопропоксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К реакционной смеси 4-(трет-бутиламино)-2-(метилсульфонил)-пиримидин-5-карбоксамида из предыдущей стадии добавляли ДИЭА (1,5 мл, 8,33 ммоль) и (1R,4R)-4-циклопропоксициклогексанамин (0,485 г, 3,12 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение 16 ч. После завершения реакции, на что указывала ЖХ-МС и ТСХ, реакционную смесь медленно добавляли к ~70 мл ледяной воды. Этот продукт фильтровали, промывали водой, а затем минимальным количеством этанола и диэтилового эфира, а затем сушили с получением соединения, указанного в заголовке, 4-(трет-бутиламино)-2-((1R,4R)-4-циклопропоксициклогексиламино)-пиримидин-5-карбоксамида (0,214 г, 30% выход); 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 9,18 (с, 1Н), 8,32 (с, 1Н), 7,02-7,08 (м, 1Н), 3,57-3,67 (м, 1Н), 3,30 (т, J=2,93 Гц, 1Н), 1,99-2,09 (м, 2Н), 1,85-1,94 (м, 2Н), 1,41 (с, 11Н), 1,28 (уш. с., 5Н), 0,37-0,46 (м, 4Н); МС (ESI) m/z 348,3 [М+1]+.
Пример 43: 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил
А. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил. 2-Хлор-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил (240 мг, 0,950 ммоль; синтез описан в настоящем описании), гидрохлорид (1R,4R)-4-аминоциклогексанола (216 мг, 1,425 ммоль) и карбонат цезия (619 мг, 1,899 ммоль) суспендировали в 1,4-диоксане (10 мл) и нагревали при температуре 80°С в течение 3 ч. ЖХ-МС показала, что масса целевого продукта имела доминирующий пик и исходный продукт отсутствовал. Реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (10-100% этилацетат в гексане, затем 0-15% метанол в ДХМ) с получением соединения, указанного в заголовке (159 мг, 0, 480 ммоль, 50,5% выход); 1Н-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ ч./млн 8,06-8,24 (м, 1Н), 7,09-7,57 (м, 2Н), 4,74 (д, J=4,3 Гц, 1Н), 4,48-4,63 (м, 1Н), 3,89-4,16 (м, 1Н), 3,34-3,74 (м, 3Н), 1,53-2,09 (м, 8Н), 0,99-1,51 ч./млн (м, 8Н); МС (ESI) m/z 332,1 [М+1]+.
Пример 44: 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил
А. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил. К перемешиваемому раствору 2-хлор-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (113 мг, 0,447 ммоль; синтез описан в настоящем описании) и (1R,4R)-4-(2,2,2-трифторэтокси)циклогексанамина (150 мг, 0,761 ммоль; синтез описан в настоящем описании) в ДМСО (6,0 мл) добавляли ДИЭА (0,156 мл, 0,895 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 3 дней. ДМСО удаляли при пониженном давлении и оставшееся твердое вещество очищали, используя хроматографию на силикагеле (0-40% этилацетат + 10% 7 н аммония в метаноле в гексане) с получением соединения, указанного в заголовке (156 мг, 0,378 ммоль, 84,6% выход). 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,03-8,29 (м, 1Н), 7,10-7,62 (м, 2Н), 4,74 (д, J=3,90 Гц, 1Н), 4,05 (кв, J=9,37 Гц, 3Н), 3,36-3,82 (м, 3Н), 1,55-2,13 (м, 8Н), 1,00-1,50 (м, 8Н). 19F ЯМР (376 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн -73,64 (т, J=9,19 Гц, 3F). МС (ESI) m/z 414,2 [М+1]+.
Пример 45: 2-((1R,4R)-4-(Дифторметокси)циклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил
А. 2-((1R,4R)-4-(Дифторметокси)циклогексиламино)-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрил. К перемешиваемому раствору 2-хлор-4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбонитрила (100 мг, 0,396 ммоль; синтез описан в настоящем описании) и (1R,4R)-4-(дифторметокси)циклогексанамина (131 мг, 0,791 ммоль; синтез описан в настоящем описании) в ДМСО (4,0 мл) добавляли ДИЭА (0,138 мл, 0,791 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. ДМСО удаляли при пониженном давлении, и оставшееся твердое вещество очищали, используя хроматографию на силикагеле (5-40% этилацетат + 10% метанол, насыщенный аммиаком в гексане) с получением соединения, указанного в заголовке (130 мг, 0,340 ммоль, 86,0% выход). 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,08-8,25 (м, 1Н), 7,12-7,62 (м, 2Н), 6,47-6,94 (м, 1Н), 4,74 (д, J=4,29 Гц, 1Н), 3,88-4,18 (м, 2Н), 3,41-3,85 (м, 2Н), 1,01-2,11 (м, 16Н). 19F ЯМР (376 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн -79,21--78,76 (м, 2 F). МС (ESI) m/z 382,3 [М+1]+.
Пример 46: 4-(Трет-бутиламино)-2-(4-гидроксибицикло[2.2.1]гептан-1-иламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. Циклопентан-1,3-дикарбоновая кислота. 22-Литровая 3-горлая круглодонная колба была снабжена температурным контроллером J-KEM, механической мешалкой и трубкой для подачи азота. Колбу наполняли норборненом (200 г, 2,123 моль), этилацетатом (1,95 л) и ацетонитрилом (1,95 л). Реакционную смесь охлаждали до 5°С, используя баню с ацетоном/сухим льдом. Одной порцией добавляли трихлорид рутения (9,69 г, 46,72 ммоль), а затем медленно добавляли суспензию периодата натрия (1,816 кг, 8,707 моль) в воде (2,925 л) в течение 30 мин. Реакция медленно становилась экзотермической и ее контролировали для поддержания температуры между 10°С и 15°С. Через 90 мин реакционная смесь внезапно густела до точки, когда перемешивание было затруднено, и реакция быстро становилась экзотермической до 39°С (для контроля экзотермической реакции в охлаждающую баню добавляли большое количество сухого льда). Реакционную смесь оставляли охлаждаться до 20°С, баню сухой лед/ацетон удаляли, и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Твердые вещества удаляли путем фильтрации через пад из целита, и фильтрат концентрировали до твердого вещества, которое растирали в порошок с гексаном (2 л), фильтровали и промывали гексаном (2x500 мл) с выходом 195 г (58%) циклопентан-1,3-дикарбоновой кислоты. 1Н-ЯМР (500 Гц, DMCO-d6) δ ч./млн 12,07 (с, 2Н), 2,66-2,73 (м, 2Н), 2,06-2,12 (м, 1Н), 1,85-1,89 (м, 1Н), 1,72-1,85 (м, 4Н).
В. Диметилциклопентан-1,3-дикарбоксилат. 5-литровая 3-горлая круглодонная колба была снабжена механической мешалкой, температурным контроллером J-KEM и парциальным конденсатором. Колбу наполняли циклопентан-1,3-дикарбоновой кислотой (357 г, 2,262 моль) и метанолом (1,75 л). Раствор охлаждали до 7°С, используя баню лед/вода. По каплям добавляли концентрированную серную кислоту (70 мл) в течение 30 мин, что давало экзотермический эффект до 12°С. Реакционную смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником и перемешивали в течение 16 ч, после чего ТСХ анализ (10% метанол/этилацетат) указал, что реакция была завершена. Реакционную смесь концентрировали, еще раз растворяли в метил-трет-бутиловом эфире и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2×150 мл) и солевым раствором (2×150 мл). Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Полученное прозрачное масло растворяли в гексане (2 л) и обрабатывали 2 н водным раствором гидроксида натрия (950 мл) до рН ~10. Слои удаляли, и водный слой экстрагировали гексаном (4×1 л). Органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением 360 г (100%) диметилциклопентан-1,3-дикарбоксилата в виде прозрачного масла. 1Н-ЯМР (500 Гц, CDCl3) δ ч./млн 3,67 (с, 6Н), 2,75-2,83 (м, 2Н), 2,20-2,26 (м, 1Н), 2,05-2,12 (м, 1Н), 1,90-2,0 (м, 4Н).
С. Диметилбицикло[2.2.1]гептан-1,4-дикарбоксилат. 22-литровая 3-горлая круглодонная колба была снабжена температурным контроллером J-KEM, механической мешалкой, трубкой для подачи азота и вспомогательной воронкой. Колбу промывали азотом, затем наполняли безводным ТГФ (5 л) и диизопропиламином (731 мл, 5,219 моль). Раствор охлаждали до -20°С, используя баню сухой лед/ацетон. Перемешиваемую смесь медленно обрабатывали 1,6 М н-бутиллитием в гексане (3,02 л, 4,833 моль) через канюлю в течение 1 ч, поддерживая температуру между -20°С и -27°С. Реакционную смесь охлаждали до -40°С и медленно добавляли гексаметилфосфорамид (2,7 л, 16,317 моль) через капельную воронку в течение 40 мин. Реакционную смесь охлаждали до -73°С и диметилциклопентан-1,3-дикарбоксилат (360 г, 1,933 моль), растворенный в безводном ТГФ (2 л), медленно добавляли через дополнительную воронку в течение 2 ч. Реакционную смесь нагревали до -10°С и перемешивали при той же температуре в течение 30 мин, затем охлаждали до -70°С и обрабатывали 1-бром-2-хлорэтаном (267 мл, 3,209 моль) через дополнительную воронку в течение 4 ч. Реакционную смесь оставляли медленно нагреваться при комнатной температуре в течение 12 ч и затем гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония (2 л) в течение 90 мин. Реакционную смесь разбавляли гексаном (2 л), слои удаляли, и водный слой дополнительно экстрагировали гексаном (3×2 л). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (2×1 л), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали до коричневого масла. Сырой продукт очищали на силикагеле (0-10% этилацетат/гексан). Фракции, содержащие продукт, концентрировали почти досуха и разбавляли гексаном. Полученные кристаллические твердые вещества фильтровали и промывали гексаном (200 мл) с получением чистого продукта в виде прозрачного кристаллического твердого вещества. Дополнительные порции продукта получали из фильтрата аналогичным образом. Все порции продукта объединяли с получением 208 г (51%) диметилбицикло[2.2.1]гептан-1,4-дикарбоксилата в виде прозрачного кристаллического твердого вещества. 1Н-ЯМР (500 Гц, CDCl3) δ ч./млн 3,68 (с, 6Н), 2,03 (д, J=6,4 Гц, 4Н), 1,90 (с, 2Н), 1,67 (д, J=7,0, 4Н).
D. 4-(Метоксикарбонил)бицикло[2.2.1]гептан-1-карбоновая кислота. 12-Литровая 3-гордая круглодонная колба была оснащена механической мешалкой, температурным контроллером J-KEM и 250 мл-овой дополнительной воронкой. Колбу наполняли диметилбицикло[2.2.1]гептан-1,4-дикарбоксилатом (208 г, 980 ммоль) и ТГФ (6,7 л). Полученный раствор охлаждали до 15°С, используя баню лед/вода. Осадки гидроксида натрия (39,2 г, 980 ммоль) растворяли в метаноле (400 мл) и медленно добавляли к перемешиваемому раствор в течение 30 мин. После завершения добавления белое твердое вещество начинало осаждаться. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч когда ТСХ анализ (100% этилацетат) указал на около 90% преобразование. Реакционную смесь концентрировали досуха, получали взвесь в гексане (2 л), фильтровали и промывали гексаном (2×400 мл). Полученную соль карбоксилата натрия переносили в 3-литровую 3-горлую круглодонную колбу, оснащенную механической мешалкой, растворяли в воде (1 л) и медленно обрабатывали 2 н. водным раствором хлористоводородной кислоты (430 мл) при 10°С до рН~4. Жирную суспензию разбавляли этилацетатом (1 л) и переносили в делительную воронку. Слои удаляли, и водный слой дополнительно экстрагировали этилацетатом (2×500 мл), промывали насыщенным солевым раствором (200 мл), сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением 170 г (87%) 4-(метоксикарбонил)бицикло[2.2.1]гептан-1-карбоновой кислоты. 1Н-ЯМР (500 Гц, ДМСО-d6) δ ч./млн 12,21 (с, 1Н), 3,60 (с, 3Н), 1,91 (д, J=6,7 Гц, 4Н), 1,75 (с, 2Н), 1,56-1,62 (м, 4Н).
Е. 4-(Бензилоксикарбониламино)бицикло[2.2.1]гептан-1-карбоновая кислота. 2-Литровая 3-горлая, круглодонная колба была оснащена механической мешалкой, температурным контроллером J-КЕМ, парциальным конденсатором и трубкой для подачи азота. Колбу наполняли 4-(метоксикарбонил)бицикло[2.2.1]гептан-1-карбоновой кислотой (100 г, 0,504 моль) и безводным толуолом (500 мл). Колбу охлаждали до 10°С и медленно добавляли ДИЭА (175 мл, 1,008 моль) в течение 5 мин с получением среднего экзотермического эффекта до 14°С. В реакционную смесь медленно добавляли азид дифенилфосфония (130 мл, 0,605 моль). Смесь нагревали до около 60°С когда начиналось выделение газа. Реакционную смесь быстро выделяла большое количество газа и давала экзотермический эффект при кипячении с обратным холодильником. Реакционную смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником (110°С) в течение 2 ч, затем охлаждали до 50°С и медленно обрабатывали бензиловым спиртом (104 мл, 1,008 моль) в течение 5 мин. Реакционную смесь снова нагревали до 110°С и перемешивали в течение 40 ч. Реакционную смесь концентрировали до масла в вакууме, растворяли в этилацетате (2 л), промывали насыщенным солевым раствором (500 мл) и слой насыщенного солевого раствора экстрагировали этилацетатом (2×400 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали до сырого масла, которое перенесли в 5-литровую 3-горлую круглодонную колбу, оснащенную механической мешалкой, температурным контроллером J-KEM и трубкой для подачи азота. Колбу наполняли метанолом (2 л). Смесь охлаждали до 10°С и обрабатывали 2 н. гидроксидом натрия (500 мл) в течение 5 мин с получением экзотермического эффекта до 16°С. Реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 20 ч, когда ТСХ анализ (20% метанол/этилацетат) указал на завершение реакции. Реакционную смесь охлаждали при комнатной температуре, и метанол удаляли в вакууме. При охлаждении реакционную смесь подкисляли, используя 2 н. хлористоводородную кислоту (480 мл) до рН 2-3. Водную смесь экстрагировали, используя этилацетат (2 л, затем 500 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (400 мл), сушили над сульфатом натрия, и концентрировали с получением сырого продукта в виде коричневого масла. Сырой продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле (20-100% этилацетат/гексан), получая 132 г (91%) 4-(бензилоксикарбониламино)-бицикло[2.2.1]гептан-1-карбоновой кислоты. 1H-ЯМР (500 Гц, ДМСО-d6) δ ч./млн 12,12 (с, 1Н), 7,56 (с, 1Н), 7,34-7,38 (м, 4Н), 7,28-7,32 (м, 1Н), 4,98 (с, 2Н), 1,80-1,93 (м, 4Н), 1,79 (С, 2Н), 1,64 (т, J=9,1 Гц, 2Н), 1,57 (т, J=8,8 Гц, 2Н).
F. 4-Аминобицикло[2.2.1]гептан-1-карбоновая кислота. 2-литровую бутылку Парра наполняли 4-(бензилоксикарбониламино)бицикло[2.2.1]гептан-1-карбоновой кислотой (105 г, 363 ммоль), метанолом (500 мл), 0,8 н хлористоводородной кислотой (500 мл) и 10% палладием на угле (38,6 г, 18,15 ммоль, 50% увлажнение водой). Реакцию проводили в шейкере Парра в водороде под давлением 30 gpsi в течение 10 ч когда ТСХ анализ (10% метанол/этилацетат) указал на завершение реакции. Катализатор удаляли путем фильтрации через короткую пробку из целита, и пробку тщательно промывали водой (4×100 мл). Фильтрат концентрировали с получением 4-аминобицикло[2.2.1]гептан-1-карбоновой кислоты (56,3 г, 100%) в виде влажного белого твердого вещества, которое использовали в следующей стадии без дополнительной очистки; МС (ESI) m/z 156,2 [М+1]+.
G. 4-Гидроксибицикло[2.2.1]гептан-1-карбоновая кислота. 2-Литровая 3-гордая круглодонная колба была оснащена механической мешалкой, парциальным конденсатором, температурным контроллером J-KEM, и трубкой для подачи азота. Колбу наполняли 4 аминобицикло[2.2.1]гептан-1-карбоновой кислотой (56,3 г, 363 ммоль) и 10% водным раствором уксусной кислоты (340 мл). Реакционную смесь охлаждали до 10°С и медленно обрабатывали в течение 45 мин нитратом натрия (75,0 г, 1,088 моль) в воде (125 мл) через дополнительную воронку. Наблюдалось значительное выделение газа, и реакционную смесь перемешивали при 65°С в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до 5°С и медленно обрабатывали в течение 30 мин гидроксидом калия (183 г, 3,265 моль) в метаноле (400 мл) через дополнительную воронку. Реакционную смесь перемешивали при 65°С в течение 5 ч, когда ТСХ анализ (10% метанол/этилацетат) указал на завершение реакции. Реакционную смесь концентрировали для удаления метанола, и оставшуюся водную смесь экстрагировали этилацетатом (2×400 мл). Водный слой подкисляли до рН 3, используя концентрированную хлористоводородную кислоту (210 мл) при охлаждении на бане лед/вода. Полученные твердые вещества (загрязнения) фильтровали и промывали водой (2×30 мл). Фильтрат экстрагировали этилацетатом (10×400 мл), сушили над сульфатом натрия и концентрировали досуха с получением 53 г (94%) 4-гидроксибицикло[2.2.1]гептан-1-карбоновой кислоты; МС (ESI) m/z 155,2 [М-1]-.
Н. Бензил 4-гидроксибицикло[2.2.1]гептан-1-илкарбамат. 3-Литровая 3-горлая круглодонная колба была оснащена механической мешалкой, температурным контроллером J-KEM, трубкой для подачи азота и 125 мл дополнительной воронкой. Колбу промывали азотом и наполняли 4-гидроксибицикло[2.2.1]гептан-1-карбоновой кислотой (53 г, 339 ммоль) и безводным толуолом (350 мл). Реакционную смесь охлаждали до 10°С и обрабатывали бензиловым спиртом (175 мл, 1,695 моль). Реакционную смесь затем медленно обрабатывали ДИЭА (118 мл, 678 ммоль) и азидом дифенилфосфония (87,7 мл, 407 ммоль). Реакционную смесь медленно нагревали до 50°С, когда начиналось выделение газа. Нагревающий кожух удаляли, и реакционная смесь медленно давала экзотермический эффект до 75°С при значительном выделении газа. Реакционную смесь нагревали до 110°С и перемешивали в течение 20 ч, когда ТСХ анализ (10% метанол/этилацетат) указал на завершение реакции. Реакционную смесь концентрировали для удаления растворителя и разделяли между этилацетатом (1,2 л) и насыщенным солевым раствором (700 мл). Органический слой сушили над сульфатом натрия, концентрировали и очищали с помощью хроматографии на силикагеле (20-60% этилацетат/гексан) с получением 61 г (69%) бензил 4-гидроксибицикло[2.2.1]гептан-1-илкарбамата; МС (ESI) m/z 260,1 [М-1]-.
I. Гидрохлорид 4-аминобицикло[2.2.1]гептан-1-ола. 2-Литровую бутылку Парра наполняли бензил 4-гидроксибицикло[2.2.1]гептан-1-илкарбаматом (61 г, 233 ммоль), метанолом (400 мл) и водой (200 мл). Бутылку Парра промывали азотом и наполняли 10% палладием на угле (25 г, 11,65 ммоль, 50% увлажнение водой). Реакцию проводили в водороде под давлением 30 gpsi на шейкере Парра в течение 3 ч, когда ТСХ анализ (15% метанол/ДХМ с 2% гидроксидом аммония) указал на завершение реакции. Реакционную смесь фильтровали через пробку из целита и концентрировали для удаления метанол. Полученную водную смесь обрабатывали 2 н. хлористоводородной кислотой (115 мл) до достижения рН 1-2. Водную смесь экстрагировали, используя этилацетат (5×400 мл) для удаления загрязнения. Водную смесь концентрировали досуха и сушили в вакуумной печи при 40°С в течение ночи с получением 36,91 г (97%) гидрохлорида 4-аминобицикло[2.2.1]гептан-1-ола; МС (ESI) m/z 128,1 [М+1]+.
J. 4-(Трет-бутиламино)-2-(4-гидроксибицикло[2.2.1]гептан-1-иламино)пиримидин-5-карбоксамид. 4-(Трет-бутиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид (0,165 г, 0,606 ммоль; синтез описан в настоящем описании), гидрохлорид 4-аминобицикло[2.2.1]гептан-1-ола (0,105 г, 0,644 ммоль) и ДИЭА (0,337 мл, 1,931 ммоль) перемешивали в ДМФ (8 мл) и нагревали при температуре 90°С в течение ночи. Растворитель упаривали, и твердый остаток очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (0-10% метанол в этилацетате) с получением целевого продукта. (41 мг, 0,127 ммоль, 21%). 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 9,43 (уш. с., 0Н) 8,32 (с, 1Н) 7,07 (уш. с., 1Н) 4,88 (уш. с., 1Н) 1,94-2,14 (м, 2Н) 1,61-1,87 (м, 6Н) 1,49-1,60 (м, 2Н) 1,42 (с, 9Н). МС (ESI) m/z 320,0 [М+1]+.
Пример 47: 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(3-метилбицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 3-Метилбицикло[1.1.1]пентан-1-карбоновая кислота. К раствору 1-йод-3-метилбицикло[1.1.1]пентана (1,62 г, 7,79 ммоль; полученный в соответствии с Eur. J. Org. Chem. 1137-1155 (2000)) в диэтиловом эфире (26 мл), добавляли раствор трет-бутиллития (9,16 мл, 15,57 ммоль, 1,7 М в пентане) в течение периода 40 мин при -78°С. После перемешивания реакционной смеси в течение 1 ч при этой температуре, газообразный диоксид углерода пробулькивали через реакционную смесь в течение 5 мин, и затем смесь оставляли нагреваться при комнатной температуре. Реакционную смесь экстрагировали дважды 5% водным раствором бикарбоната натрия. Объединенные водные фазы подкисляли до рН 2-3 концентрированной хлористоводородной кислотой при 0°С, насыщали хлоридом натрия и экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенные органические фазы сушили, затем упаривали растворитель при пониженном давлении, очищали колоночной хроматографией (0-20% этилацетат в гексане) с получением 3-метилбицикло[1.1.1]пентан-1-карбоновой кислоты (0,5 г, 3,96 ммоль, 50,9% выход); 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 12,21 (с, 1Н), 1,82 (с, 6Н), 1,14 (с, 3Н).
В. Трет-бутил-3-метилбицикло[1.1.1]пентан-1-илкарбамат. Азид дифенилфосфония (0,340 мл, 1,577 ммоль) по каплям добавляли к раствору 3-метилбицикло[1.1.1]пентан-1-карбоновой кислоты (0,199 г, 1,577 ммоль) и ТЭА (0,220 мл, 1,577 ммоль) в сухом трет-бутаноле (6 мл). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч и затем нагревали при кипячении с обратным холодильником в течение 24 ч. Растворитель упаривали при пониженном давлении, и твердый остаток экстрагировали три раза трет-бутилметиловым эфиром. Объединенную органическую фазу промывали насыщенным водным раствором бикарбоаната натрия и сушили над безводным сульфатом магния. После фильтрации и упаривания растворителя при пониженном давлении, твердый остаток очищали колоночной хроматографией (0-5% этилацетат в гексане) с получением трет-бутил-3-метилбицикло[1.1.1]пентан-1-илкарбамата (0,111 г, 0, 563 ммоль, 35,7% выход); 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 1,74 (с, 6Н), 1,36 (с, 9Н), 1,17 (с, 3Н).
C. 3-Метилбицикло[1.1.1]пентан-1-амин гидрохлорид. К раствору трет-бутил-3-метилбицикло[1.1.1]пентан-1-илкарбамата (0,1 г, 0,507 ммоль) в этилацетате (10 мл) добавляли хлористоводородную кислоту (0,760 мл, 3,04 ммоль, 4 M в диоксане) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь концентрировали, полученные твердые вещества промывали диэтиловым эфиром и полученную суспензию фильтровали с получением гидрохлорида 3-метилбицикло[1.1.1]пентан-1-амина (0,04 г, 0,299 ммоль, 59,1% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,59 (уш. с., 3Н), 1,84 (с, 6Н), 1,22 (с, 3Н).
D. 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(3-метилбицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемой суспензии 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида (0,25 г, 0,838 ммоль; синтез описан в настоящем описании) и гидрохлорида 3-метилбицикло-[1.1.1]пентан-1-амина (0,123 г, 0,922 ммоль) в ДМФ (3 мл) добавляли ДИЭА (0,366 мл, 2,095 ммоль), и реакционную смесь нагревали до 80°С в течение ночи. Сырую реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и затем ледяную воду (20 мл) добавляли к твердому остатку. Полученную смесь энергично перемешивали в течение 1 ч и затем образовавшийся осадок фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(3-метилбицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)пиримидин-5-карбоксамида (0,222 г, 0,670 ммоль, 80% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-dg) δ ч./млн 1,15-1,31 (м, 7Н), 1,81-1,93 (м, 4Н), 1,98 (с, 6Н), 3,35-3,44 (м, 1Н), 3,54-3,63 (м, 1Н), 4,56 (д, J=4,29 Гц, 1Н), 7,12 (д, J=7,81 Гц, 1Н), 8,35 (с, 1Н), 9,35 (с, 1Н); МС (ESI) m/z 332,4 [М+1]+.
Пример 48: 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-(4-метилтетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-(4-метилтетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)пиримидин-5-карбоксамид. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид (0,740 г, 2,354 ммоль; синтез описан в настоящем описании), гидрохлорид 4-метилтетрагидро-2Н-пиран-4-амин (0,892 г, 5,88 ммоль), ДИЭА (1, 645 мл, 9,42 ммоль) и NMP (20 мл) объединяли и нагревали в течение 1 ч при 180°С в микроволновой печи. Растворитель концентрировали при пониженном давлении, и твердый остаток очищали колоночной хроматографией (0-10% метанол в ДХМ) с получением 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(4-метилтетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)пиримидин-5-карбоксамида (88 мг, 0,252 ммоль, 10,70% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,96 (уш. с., 1Н), 8,35 (с, 1Н), 6,76 (уш. с., 1Н), 4,65 (д, J=4,69 Гц, 1Н), 3,56 (дд, J=3,32, 6,83 Гц, 4Н), 3,40-3,47 (м, 1Н), 2,20-2,29 (м, 2Н), 2,10 (д, J=10,93 Гц, 1Н), 1,76-1,89 (м, 2Н), 1,66-1,73 (м, 1Н), 1,50-1,59 (м, 2Н), 1,39 (с, 3Н), 1,16-1,26 (м, 1Н), 1,03-1,12 (м, 3Н). МС (ESI) m/z 350,4 [М+1]+.
Пример 49: 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-[(2Н3)метилокси]циклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. (1R,4R)-4-[(2Н3)метилокси]-N-тритилциклогексанамин. К раствору (1R,4R)-4-(тритиламино)циклогексанолу (2,34 г, 6,55 ммоль) в сухом ТГФ (15 мл) добавляли гидрид натрия (524 мг, 13,1 ммоль, 60% в минеральном масле) при 0°С. После того как полученную смесь перемешивали в течение 30 минут при 0°С в атмосфере азота, по каплям добавляли раствор йодо(2Н3) метана (1,0 г, 6,89 ммоль) в ТГФ (5 мл) при 0°С. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи в атмосфере азота, затем выливали в ледяную воду и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали в вакууме с получением сырого продукта, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (5% этилацетат в петролейном эфире) с получением соединения, указанного в заголовке (2,0 г, 5,35 ммоль, 83% выход) в виде белого твердого вещества. МС (ESI) m/z 375,0 [М+1]+.
B. (1R,4R)-4-[(2Н3)Метилокси]циклогексанамин. К охлажденному (0°С) раствору (1R, 4R)-4-[(2Н3) метилокси]-N-тритилциклогексанамина (2,0 г, 5,35 ммоль) в ДХМ (10 мл) добавляли ТФУ (3 мл) при 0°С. Полученная смесь была темно-красной. Добавляли триэтилсилан (0,4 мл) до тех пор, пока полученная смесь не становилась бесцветной. Реакционную смесь перемешивали при 0°С дополнительные 15 мин. После удаления всех летучих растворителей в вакууме, твердый остаток дополнительно сушили в высоком вакууме в течение 2 ч с получением сырого продукта в виде белого твердого вещества. Сырой продукт растворяли в этилацетате и добавляли водный раствор гидрохлорида (20 мл, 0,25 моль/л). Органический слой удаляли, и неорганический слой промывали этилацетатом дважды. К неорганическому слою добавляли водный раствор аммония (2 мл), и смесь перемешивали в течение 15 мин. Концентрирование в вакууме давало сырой продукт в виде белого твердого вещества (706 мг, 5,35 ммоль, 100% выход). МС (ESI) m/z 133,0 [М+1].
C. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-((1R,4R)-4-[(2Нз)метилокси]циклогексанамино)пиримидин-5-карбоксамид. Смесь 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (160 мг, 0,5 ммоль; синтез описан в настоящем описании), (1R,4R)-4-[(2Н3)метилокси]-циклогексанамина (132 мг, 1,0 ммоль), ДИЭА (194 мг, 1,5 ммоль) и NMP (1 мл) объединяли и нагревали при температуре 80°С в течение ночи. Растворитель упаривали при пониженном давлении, и твердый остаток очищали колоночной хроматографией (0-15% метанол в ДХМ) с получением целевого продукта в виде белого порошка (120 мг, 0,33 ммоль, 63% выход). 1Н-ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ ч./млн 8,17 (с, 1Н), 3,93-3,87 (м, 1Н), 3,64 (с, 1Н), 3,50 (д, J=6,0 Гц, 1Н), 3,13 (с, 1Н), 2,22 (с, 1Н), 2,06-1,72 (м, 7Н), 1,29-0,99 (м, 8Н); МС (ESI) m/z 367,3 [М+1]+.
Пример 50: 4-(Трет-бутиламино)-2-((1S,4S)-4-гидрокси-4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 4-(Трет-бутиламино)-2-((1S,4S)-4-гидрокси-4-метилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. 4-(Трет-бутиламино)-2-(метилсульфонил) пиримидин-5-карбоксамид (0,110 г, 0,404 ммоль; синтез описан в настоящем описании), (1S,4S)-4-амино-1-метилциклогексанол (0,055 г, 0,429 ммоль; полученный в соответствии с международной публикации заявки на патент РСТ WO 2010027500) и ДИЭА (0,225 мл, 1,287 ммоль) перемешивали в ДМФ (5 мл) и нагревали при температуре 90°С в течение ночи. Растворитель упаривали, и твердый остаток очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (0-10% метанол в этилацетате) с получением целевого продукта. (37 мг, 0,115 ммоль, 27%). 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 9,08-9,23 (м, 1Н) 8,25-8,37 (м, 1Н) 6,89-7,06 (м, 1Н) 3,97-4,04 (м, 1Н) 3,46-3,62 (м, 1Н) 1,48-1,71 (м, 6Н) 1,40 (с, 9Н) 1,19-1,36 (м, 2Н) 1,10 (с, 4Н). МС (ESI) m/z 322,4 [М+1]+.
Пример 51: 4-((1R,3R)-3-Гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)-2-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 2-(1-Метилциклопропиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемому раствору 2-(1-метилциклопропиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (0,653 г, 2,96 ммоль, синтез описан в настоящем описании) в ДМСО (8 мл) добавляли 6 н водный раствор гидроксида натрия (2,470 мл, 14,82 ммоль) и 30% водный раствор перекиси водорода (1,873 мл, 16,52 ммоль) при 0°С. Затем смесь перемешивали при 50°С и в течение 20 минут и затем разбавляли 100 мл этилацетат и 30 мл воды. Слои удаляли, и водный слой опять экстрагировали 50 мл этилацетата. Объединенные этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до твердых веществ, которые сушили в вакуумной печи при 45°С с получением 2-(1-метилциклопропиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (305 мг, 1,280 ммоль, 43,2% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,31-8,54 (м, 1Н), 7,80-8,07 (м, 1Н), 6,97-7,77 (м, 1Н), 2,39 (уш. с., 3Н), 1,37 (с, 3Н), 0,52-0,79 (м, 4Н). МС (ESI) m/z 239,0 [М+1]+.
B. 2-(1-Метилциклопропиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемому раствору 2-(1-метилциклопропиламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (305 мг, 1,280 ммоль) в хлороформе (25,6 мл) порциями добавляли 3-фенил-2-(фенилсульфонил)-1,2-оксазиридин (502 мг, 1,920 ммоль). Полученный светло-желтый раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении с получением сырого продукта в виде белого твердого вещества. Добавляли этилацетат (10 мл), и взвесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, фильтровали, промывали этилацетатом и сушили в вакуумной печи в течение нескольких часов с получением 2-(1-метилциклопропиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида (242 мг, 0,952 ммоль, 74,4% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,35-8,90 (м, 2Н), 7,88-8,14 (м, 1Н), 7,28-7,59 (м, 1Н), 2,74 (с, 3Н), 1,32-1,46 (м, 3Н), 0,68-0,84 (м, 2Н), 0,50-0,70 (м, 2Н). МС (ESI) m/z 255,0 [М+1]+.
C. 4-((1R,3R)-3-Гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)-2-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемой суспензии 2-(1-метилциклопропиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида (242 мг, 0,952 ммоль), и смеси гидрохлорида (1R,5R)-5-амино-2,2-диметилциклогексанола и гидрохлорида (1S,5S)-5-амино-2,2-диметилциклогексанола (222 мг, 1,237 ммоль, синтез описан в настоящем описании) в ДМФ (4,543 мл) добавляли ДИЭА (0,499 мл, 2,85 ммоль), и реакционную смесь нагревали до 90°С в течение ночи. Сырую реакционную смесь выливали в 50 мл ледяной воды. Получали взвесь полученных твердых веществ в течение ~1 ч, фильтровали, промывали водой и сушили в течение нескольких часов в вакуумной печи при 45°С с получением смеси 4-((1R,3R)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)-2-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамида и 4-((1R,3R)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)-2-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамида (169 мг, 0,507 ммоль, 53,3% выход). Это вещество отделяли с помощью препаративной хиральной SFC, используя колонку ChiralPak AD-H, 250×30 мм I.D. с изократическим 40% этанолом + 0,1% гидроксид аммония в СО2 градиент при скорости потока 60 мл/мин и при 38°С. Изомер, который элюировался быстрее, был обозначен как Пик 1 и было получено 49 мг (0,147 ммоль). Изомер, который элюровался медленнее, был обозначен как пик 2 и было получено 51 мг (0,153 ммоль). Пик 1: 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,71-9,02 (м, 1Н), 8,21-8,43 (м, 1Н), 7,03-7,54 (м, 1Н), 4,44-4,58 (м, 1Н), 3,81-3,99 (м, 1Н), 3,07-3,25 (м, 1Н), 1,74-2,08 (м, 1Н), 1,35 (с, 8Н), 0,87-0,97 (м, 3Н), 0,77-0,86 (м, 3Н), 0,62-0,70 (м, 2Н), 0,47-0,59 (м, 2Н). МС (ESI) m/z 334,2 [М+1]+. Пик 2: 1Н-ЯМР (400 МГц, DMCO-d6) δ ч./млн 8,72-9,00 (м, 1Н), 8,18-8,46 (м, 1Н), 7,12-7,60 (м, 1Н), 4,38-4,61 (м, 1Н), 3,76-3,98 (м, 1Н), 3,04-3,26 (м, 1Н), 1,75-2,10 (м, 1Н), 1,35 (с, 8Н), 0,92 (с, 3Н), 0,82 (с, 3Н), 0,61-0,72 (м, 2Н), 0,47-0,60 (м, 2Н). МС (ESI) m/z 334,2 [М+1]+. С помощью сравнения силы SAR с аналогичными соединениями с известной абсолютной стереохимией, как приведено в настоящем описании, Пик 1 был обозначен как 4-((1S,3S)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)-2-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид. Пик 2 был обозначен как 4-((1R,3R)-3-Гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)-2-(1-метилциклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид.
Пример 52: 4-(Бицикло[1.1.1]пентан-2-иламино)-2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
A. 2-Фенилбицикло[1.1.1]пентан-2-ол. Перемешиваемый раствор циклобутил(фенил)метанона (3,0 г, 18,8 ммоль) в 800 мл бензола облучали 1000 В ртутной лампой в течение 48 ч при комнатной температуре в атмосфере азота. Раствор концентрировали, и твердый остаток (3,1 г) очищали колоночной хроматографией (10%-25% этилацетат в петролейном эфире) с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества (0,9 г, 5,6 ммоль, выход: 30%). 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ ч./млн 7,41-7,28 (м, 5Н), 3,04 (с, 2Н), 2,82 (дд, J1=10,2 Гц, J2=2,4 Гц, 1Н), 2,09 (с, 1Н), 1,78 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 1,50 (д, J=3,3 Гц, 1Н), 1,33 (дд, J1=9,9, J2=3,3 Гц, 1Н).
B. 2-Фенилбицикло[1.1.1]пентан-2-ил ацетат. К перемешиваемому раствору 2,7 г (16,8 ммоль) 2-фенилбицикло[1.1.1]пентан-2-ола в пиридине (15 мл) при 0°С по каплям добавляли ацетилхлорид (1,5 мл, 21,0 ммоль) в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали в течение 0,5 ч при 0°С и в течение 1 ч при комнатной температуре. Раствор выливали на лед и дважды экстрагировали 50 мл диэтилового эфира. Объединенные растворы диэтилового эфира промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным водным раствором сульфата меди. После сушки над безводным сульфатом магния, раствор концентрировали, и сырой продукт очищали колоночной хроматографией (0-5% этилацетат в петролейном эфире) с получением целевого продукта (2,7 г, 13,4 ммоль, выход: 80%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 7,47-7,26 (м, 5Н), 3,31 (с, 2Н), 2,43 (дд, J1=10,4 Гц, J2=2,8 Гц, 1Н), 1,95 (с, 3Н), 1,80 (д, J=2,8 Гц, 1Н), 1,66 (д, J=3,2 Гц, 1Н), 1,49 (дд, J1=10,4, J2=3,2 Гц, 1Н).
С. 2-Фенилбицикло[1.1.1]пентан. Раствор 2-фенил-бицикло [1.1.1] пентан-2-ил ацетата (2,7 г, 13,4 моль) в 50 мл безводного эфира помещали в трехгорлую колбу. Колбу охлаждали до -78°С, и добавляли 150 мл жидкого аммония. К перемешиваемой смеси небольшими кусочками добавляли натрий (0,62 г, 27,0 ммоль) в течение 10 минут. Перемешивание продолжали до выделения синего цвета. Реакционную смесь гасили путем добавления насыщенного водного раствора хлорида аммония (5 мл), и растворитель оставляли упариваться в течение ночи. К твердому остатку добавляли пентан (40 мл), и раствор промывали 30 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия, сушили над безводным сульфатом магния и затем концентрировали. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией (100% пентан) с получением целевого соединения в виде бесцветной жидкости (1,8 г, 12,5 ммоль, выход: 93%). 1Н-ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ ч./млн 7,40-7,21 (м, 5Н), 3,48 (д, J=6,9 Гц, 1Н), 2,81 (с, 2Н), 2,20 (дд, J1=9,9 Гц, J2=2,7 Гц, 1Н), 2,00 (д, J=2,1 Гц, 1Н), 1,94-1,85 (м, 2Н).
D. Бицикло[1.1.1]пентан-2-карбоновая кислота. Смесь 2-фенилбицикло[1.1.1]пентана (2,8 г, 19,4 ммоль), оксида рутения(IV) (0,1 г, 0,75 ммоль), периодата натрия (41,5 г, 194 ммоль), воды (155 мл), перхлорметана (110 мл) и ацетонитрила (110 мл) перемешивали в течение 4 дней. К смеси добавляли ДХМ (200 мл), и твердые вещества удаляли путем фильтрации. Маточную жидкость подщелачивали водным раствором гидроксида натрия (1 М), и органический раствор удаляли при пониженном давлении. Неорганический слой с твердым осадком экстрагировали диэтиловым эфиром (100 мл × 2), и водную фазу подкисляли водным раствором хлористоводородной кислоты (2 М) до рН<3, затем экстрагировали диэтиловым эфиром (100 мл × 5). Органические слои объединяли и концентрировали с получением сырой кислоты в виде желтой жидкости. Затем сырой продукт очищали колоночной хроматографией (10% этилацетат в петролейном эфире) с получением 400 мг (3,57 ммоль, выход: 18%) целевого продукта. 1Н-ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ ч./млн 2,97 (д, J=7,5 Гц, 1Н), 2,82 (с, 2Н), 2,49 (дд, J1=7,2 Гц, J2=3,3 Гц, 1Н), 1,92 (дд, J1=7,2 Гц, J2=3,3 Гц, 1Н), 1,79-1,76 (м, 2Н).
E. Гидрохлорид бицикло[1.1.1]пентан-2-амина. К перемешиваемому раствору бицикло[1.1.1]пентан-2-карбоновой кислоты (1,0 г, 8,9 ммоль) в безводном толуоле (25 мл) и 2-метилпропан-2-оле (5 мл) добавляли ДИЭА (2,3 г, 17,8 ммоль) и дифенилфосфоразидат (2,9 г, 10,7 ммоль). Смесь нагревали при 90°С в течение 16 ч в атмосфере азота. Затем реакционную смесь концентрировали, и твердый остаток очищали колоночной хроматографией (10% этилацетат в петролейном эфире) с получением сырого трет-бутилбицикло[1.1.1]пентан-2-илкарбамата. Сырой продукт растворяли в 15 мл раствора хлористоводородной кислоты (1 М в метаноле), и раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Раствор концентрировали, и твердый остаток суспендировали в 50 мл диэтилового эфира. Смесь перемешивали в течение 15 мин, и осадки собирали и сушили с получением соединения, указанного в заголовке (350 мг, выход: 33%). 1Н-ЯМР (ДМСО-d6) δ ч./млн 8,58 (уш. с, 3Н), 3,35 (с, 1Н), 2,62 (с, 2Н), 2,60-2,57 (м, 1Н), 1,90 (т, J=5,0 Гц, 1Н), 1,79 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 1,50 (дд, J1=10,0 Гц, J1=2,8 Гц, 1Н).
F. 4-(Бицикло[1.1.1]пентан-2-иламино)-2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. Смесь 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (300 мг, 0,95 ммоль; синтез описан в настоящем описании), гидрохлорида бицикло[1.1.1]пентан-2-амина (220 мг, 1,84 ммоль) и ДИЭА (300 мг, 2,33 ммоль) в NMP (3 мл) нагревали при 100°С в течение 16 ч. Полученную смесь дважды очищали путем препаративной высокоэффективной жидкой хроматографии (5-80% ацетонитрил в воде) с получением сырого продукта (105 мг), который перекристаллизовывали из хлороформа, с получением целевого соединения (85,2 мг, 0,27 ммоль, выход: 28%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ ч./млн: 8,33 (с, 1Н), 4,19 (д, J=6,8 Гц, 1Н), 3,77-3,74 (м, 1Н), 3,60-3,57 (м, 1Н), 2,67 (с, 2Н), 2,54 (дд, J1=9,6 Гц, J2=3,2 Гц, 1Н), 2,07-1,88 (м, 6Н), 1,66 (д, J=9,6 Гц, 1Н), 1,39-1,34 (м, 4Н); МС (ESI) m/z 318,1 [М+Н]+.
Пример 53: 2-((S)-Втор-бутиламино)-4-(((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексил)амино)пиримидин-5-карбоксамид
A. 4-((1R,3R,4R)-3-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. 4-((1R,3R,4R)-3-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрил (0,335 г, 1,203 ммоль; синтез описан в настоящем описании) растворяли в ДМСО (3 мл). Затем при комнатной температуре добавляли водный раствор гидроксида натрия (1,003 мл, 6 М, 6,02 ммоль) и водный раствор перекиси водорода (0,682 мл, 6,02 ммоль, 30%). Затем реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали при комнатной температуре, и ее выливали в 100 мл ледяной воды. Белый осадок собирали и дважды промывали водой. Твердое вещество сушили с получением 4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метил-циклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (0,260 г, 0,877 ммоль, 72,9% выход); МС (ESI) m/z 297,7 [М+1]+.
B. 4-((1R,3R,4R)-3-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид. 4-((1R,3R,4R)-3-Гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид (315 мг, 1,063 ммоль) растворяли в NMP (4 мл) и охлаждали до 0°С, а затем порциями добавляли mCPBA (476 мг, 2,126 ммоль). Через 1 ч 75 мл ледяной воды непосредственно добавляли к реакционной смеси, и взвесь оставляли перемешиваться в течение 2 ч, а затем отфильтровывали белый осадок. Фильтрат затем конденсировали при пониженном давлении для удаления воды. Раствор NMP непосредственно использовали в следующей стадии, предполагая количественное преобразование в целевой продукт; МС (ESI) m/z 329,4 [М+1]+.
С. 2-((S)-Втор-бутиламино)-4-(((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексил)амино)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемой суспензии 4-((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (0,2 г, 0,609 ммоль) в ДМФ (3 мл) добавляли (S)-(+)-втор-бутиламин (0,305 мл, 3,05 ммоль), и реакционную смесь нагревали до 90°С в течение ночи. Сырую реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и затем очищали, используя полупрепаративную ВЭЖХ с обратной фазой (5-75% метанол + 0,1% муравьиную кислоту в воде + 0,1% муравьиную кислоту, в течение 26 мин). Фракции, содержащие продукт, концентрировали при пониженном давлении, и полученное твердое вещество еще раз растворяли в метаноле (5 мл), пропускали через трубку SPE с полимером Varian StratoSpheres НСО3 для удаления муравьиной кислоты (0,9 ммоль бикарбонатный эквив.), и затем концентрировали при пониженном давлении с получением 2-((S)-втор-бутиламино)-4-(((1R,3R,4R)-3-гидрокси-4-метилциклогексил)амино)пиримидин-5-карбоксамида (0,129 г, 0,402 ммоль, 66% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 0,80-1,24 (м, 15Н) 1,35-1,45 (м, 1Н) 1,54 (уш. с., 1Н) 1,66 (д, J=12,89 Гц, 1Н) 1,92 (уш. с., 1Н) 2,14 (уш. с., 1Н) 2,97 (уш. с., 1Н) 3,71-3,99 (м, 1Н) 4,55 (д, J=5,86 Гц, 1Н) 6,96 (уш. с., 1Н) 8,34 (с, 1Н) 8,90 (уш. с., 1Н); МС (ESI) m/z 322,5 [М+1]+.
Пример 54: 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(1-метилциклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(1-метилциклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К смеси 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида и 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (всего 1,414 ммоль; синтез описан в настоящем описании) в NMP (18 мл) добавляли гидрохлорид 1-метилциклобутанамина (0,189 г, 1,556 ммоль) и ДИЭА (0,988 мл, 5,66 ммоль). Полученный раствор нагревали при 100°С в течение ночи. Добавляли этилацетат и воду в реакционную смесь, и полученные слои удаляли. Слой этилацетата сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали, и концентрировали при пониженном давлении до масла, которое очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-20% метанол в ДХМ) с получением 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(1-метилциклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамида (0,193 г, 0,604 ммоль, 42,7% выход). 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 9,13 (с, 1Н) 8,33 (с, 1Н) 7,57 (уш. с., 1Н) 7,01 (д, J=7,81 Гц, 2Н) 4,53 (д, J=4,69 Гц, 1Н) 3,58 (уш. с., 1Н) 2,32 (д, J=10,54 Гц, 2Н) 1,94-2,11 (м, 2Н) 1,84 (д, J=5,08 Гц, 6Н) 1,52 (с, 3Н) 1,05-1,36 (м, 4Н). МС (ESI) m/z 320,1 [М+1]+.
Пример 55: 4-(Бицикло[2.1.1]гексан-1-иламино)-2-(((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)амино)пиримидин-5-карбоксамид
A. 2-Метилбицикло[2.2.1]гептан-2-ол. К раствору бицикло[2.2.1]гептан-2-она (25 г, 0,23 моль) в диэтиловом эфире (250 мл) добавляли раствор бромид метилмагния в ТГФ (3 моль/л, 90 мл, 0,27 моль) в течение 1 ч при 0°С. Реакционную смесь перемешивали еще 30 мин, нагревая при комнатной температуре. Затем реакционную смесь гасили 40 мл насыщенного водного раствора хлорида аммония. Полученную смесь экстрагировали диэтиловым эфиром (3×80 мл). Органические слои объединяли и концентрировали с получением целевого продукта (26 г, 0,205 моль, выход: 90%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 2,20 (с, 1Н), 2,01 (с, 1Н), 1,94 (с, 1Н), 1,61-1,49 (м, 3Н), 1,34-1,20 (м, 7Н).
B. 1-Метилбицикло[2.2.1]гептан-2-ол. К раствору 2-метил-бицикло[2.2.1]гептан-2-ола (26 г, 0,20 моль) в уксусной кислоте (50 г, 0,83 моль) добавляли 1 мл серной кислоты. Смесь кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч и затем концентрировали при пониженном давлении. Твердый остаток выливали в 100 мл воды. Полученную смесь экстрагировали этилацетатом (3×50 мл), и объединенные экстракты промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (100 мл), насыщенным солевым раствором (100 мл) и затем сушили над безводным сульфатом натрия. Удаление растворителя давало 1-метилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил ацетат (31 г, 0,173 моль, выход: 89%) в виде бесцветного масла, который использовали без дополнительной очистки.
Смесь 1-метилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил ацетата (31 г, 0,17 моль) и водного раствора гидроксида натрия (5%, 250 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 2 ч. После этого охлаждали при комнатной температуре, реакционную смесь экстрагировали диэтиловым эфиром (3×100 мл), и объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и концентрировали с получением целевого соединения (21 г, 0,167 моль, выход: 82%), который использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 3,47-3,46 (м, 1Н), 2,16-2,14 (м, 1Н), 1,81-1,75(м, 1Н), 1,57-1,52(м, 1Н), 1,43-1,30(м, 3Н), 1,15(уш. с, 3Н), 1,01-0,97(м, 2Н).
С. Метиленбицикло[2.2.1]гептан-1-ил трифторметансульфонат. К раствору оксалил дихлорида (31,75 г, 0,25 моль) в ДХМ (300 мл) добавляли при -78°С в следующем порядке ДМСО (19,5 г, 0,25 моль), раствор 1-метилбицикло[2.2.1]гептан-2-ола (21 г, 0,167 моль) в ДХМ (50 мл), и затем триэтиламин (50 г, 0,5 моль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем выливали в 200 мл воды. Полученную смесь экстрагировали ДХМ (2×100 мл). Объединенные экстракты промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (50 мл), насыщенным солевым раствором (50 мл) и сушили над безводным сульфатом натрия. Концентрирование при пониженном давлении давало сырой метилбицикло[2.2.1]гептан-2-он, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (10% этилацетат в петролейном эфире) с получением 12,4 г (0,10 моль, выход: 60%) этого соединения.
К раствору метилбицикло[2.2.1]гептан-2-она (26 г, 0,209 моль) и 2,6-ди-трет-бутил-4-метилпиридина (64 г, 0,315 моль) в ДХМ (300 мл) по каплям добавляли трифторметансульфоновый ангидрид (88 г, 0,315 моль) в ДХМ (50 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Смесь выливали в воду, и экстрагировали ДХМ (2×100 мл). Объединенные экстракты промывали 10% раствором хлористоводородной кислоты (3×100 мл), насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (50 мл), насыщенным солевым раствором (50 мл) и сушили над сульфатом натрия. Концентрирование при пониженном давлении давало сырой продукт, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (100% н-пентан) с получением целевого продукта (7,6 г, 0,03 моль, 14%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ ч./млн 5,15 (уш. с, 1Н), 4,89 (уш. с, 1Н), 2,51-2,39 (м, 2Н), 2,26-2,17 (м, 2Н), 2,12-2,05 (м, 2Н), 1,99-1,85 (м, 2Н), 1,53-1,50 (м, 1Н).
D. 2-Оксобицикло[2.2.1]гептан-1-ил трифторметансульфонат. Раствор метиленбицикло[2.2.1]гептан-1-ил трифторметансульфоната (7,6 г, 0,03 моль) в метаноле (100 мл) охлаждали до -40°С и через реакционную смесь пропускали струю озона. Когда цвет смеси становился синим, озон убирали, пропуская через раствор струю аргона в течение 10 мин. К смеси добавляли диметилсульфид (5 мл), и реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуре. Полученную смесь выливали в воду и экстрагировали ДХМ (2×40 мл). Объединенные экстракты промывали насыщенным солевым раствором (100 мл) и сушили над безводным сульфатом натрия. Раствор концентрировали при пониженном давлении с получением сырого продукта, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (10% этилацетат в петролейном эфире) с получением целевого продукта (4,6 г, 18,1 ммоль, выход: 60%) в виде желтоватого масла. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 2,73 (уш. с, 1Н), 2,44-2,34 (м, 2Н), 2,26-2,13 (м, 4Н), 2,06-2,02 (м, 1Н), 1,70-1,66 (м, 1Н).
E. Бицикло[2.1.1]гексан-1-карбоновая кислота. Смесь 2-оксобицикло[2.2.1]гептан-1-ил трифторметансульфоната (4,6 г,18,1 ммоль) в 600 мл этанол/вода (60% масс/масс) и ТЭА (3,7 г, 36,2 ммоль) нагревали при 130°С в течение 100 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении, и твердый остаток выливали в водный раствор хлористоводородной кислоты (1 моль/л, 150 мл) и экстрагировали диэтиловым эфиром (3×100 мл). Объединенные экстракты промывали насыщенным солевым раствором (100 мл) и сушили над безводным сульфатом натрия. Раствор концентрировали при пониженном давлении с получением сырого продукта, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (10% этилацетат в петролейном эфире) с получением целевого продукта (1,00 г, 8,09 ммоль, выход: 45%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 2,47-2,45(м, 1Н), 1,94-1,90 (м, 4Н), 1,79-1,74 (м, 2Н), 1,37-1,35 (м, 2Н).
F. Бензил бицикло[2.1.1]гексан-1-илкарбамат. К раствору бицикло[2.1.1]гексан-1-карбоновой кислоты (1,0 г, 8,09 ммоль) в диоксане (20 мл) добавляли ДИЭА (2,5 г, 12,4 ммоль), дифенилфосфорилазид (3,1 г, 11,2 ммоль) и фенилметанол (1,5 г, 14,2 ммоль). Смесь перемешивали при 80°С в течение ночи в атмосфере азота и концентрировали при пониженном давлении. Твердый остаток очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (10% этилацетат в петролейном эфире) с получением целевого продукта (1,2 г, 5,2 ммоль, выход: 65%). МС (ESI) m/z=231,2 [М+Н]+.
G. Бицикло[2.1.1]гексан-1-амин гидрохлорид. К раствору бензил бицикло[2.1.1]гексан-1-илкарбамата (1,2 г, 5,2 ммоль) в метаноле (30 мл) добавляли палладий на угле (10%, 0,1 г). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в атмосфере водорода (50 фунт на кв. дюйм) в течение ночи и фильтровали через целит. К фильтрату добавляли раствор хлористоводородной кислоты (10% в метаноле, 20 мл). Смесь концентрировали, и твердый остаток суспендированный в ТГФ (20 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Остаток собирали и сушили с получением целевого продукта (550 мг, 4,13 ммоль, выход: 79%). 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,73 (уш. с, 3Н), 2,4 (уш. с, 1Н), 1,71-1,69 (м, 6Н), 1,32-1,31 (м, 2Н). МС (ESI) m/z=98,2 [М+Н]+.
H. 4-(Бицикло[2.1.1]гексан-1-иламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрил. К перемешанному раствору 4-хлор-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (427 мг, 2,3 ммоль) в 1,4-диоксане (10 мл) добавляли ДИЭА (890 мг, 6,9 ммоль) и гидрохлорид бицикло[2.1.1]гексан-1-амин (320 мг, 2,4 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 60°С в течение 2 ч. Реакционную смесь выливали в насыщенный солевой раствор и затем экстрагировали этилацетатом (20 мл) три раза. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением сырого продукта, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (15% этилацетат в петролейном эфире) с получением целевого продукта (502 мг, 2,0 ммоль, 89% выход). МС (ESI) m/z=247,2 [М+1]+.
I. 4-(Бицикло[2.1.1]гексан-1-иламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. К раствору 4-(бицикло[2.1.1]гексан-1-иламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (502,0 мг, 2,0 ммоль) в ДМСО (5 мл) добавляли водный раствор перекиси водорода (1,2 г, 30%, 10,2 ммоль) и водный раствор гидроксида натрия (1,7 мл, 6 моль/л, 10,2 ммоль) при 0°С. Смесь перемешивали при 50°С в течение 15 мин и затем гасили, добавляя воду (30 мл). Сформировавшееся твердое вещество собирали и сушили в вакууме с получением целевого продукта (500 мг, 1,9 ммоль, 93% выход). МС (ESI) m/z=265,3 [М+1]+.
J. 4-(Бицикло[2.1.1]гексан-1-иламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамид и 4-(бицикло[2.1.1]гексан-1-иламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид. К раствору 4-(бицикло[2.1.1]гексан-1-иламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (500 мг, 1,9 ммоль) в ТГФ (10 мл) при 0°С порциями добавляли mCPBA (490 мг, 2,8 ммоль). Через 1 ч, реакционную смесь концентрировали. Полученное сырое вещество очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (5-10% метанол в ДХМ) с получением 510 мг желаемой смеси. МС (ESI) m/z=281,3, 297,3 [М+1]+.
К. 4-(Бицикло[2.1.1]гексан-1-иламино)-2-(((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)амино)пиримидин-5-карбоксамид. К смеси 4-(бицикло[2.1.1]гексан-1-иламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида и 4-(бицикло[2.1.1]гексан-1-иламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (200 мг, около 0,71 ммоль) и (1R,4R)-4-аминоциклогексанол (123,3 мг, 1,02 ммоль) в NMP (10 мл) добавляли ДИЭА (183,0 мг, 1,42 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 100°С в течение ночи. Реакционную смесь очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением целевого продукта (187,3 мг, 0,56 ммоль, 72% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ ч./млн 8,29 (с, 1Н), 3,77 (м, 1Н), 3,60 (м, 1Н), 2,43 (с, 1Н), 2,07-1,93 (м, 8Н), 1,79-1,77 (м, 2Н), 1,60 (с, 2Н), 1,41-1,35(м, 4Н). МС (ESI) m/z=332,2 [М+Н]+.
Пример 56: 4-(1-Этилциклопентиламино)-2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. Этилциклопент-3-енкарбоксилат. К перемешанному раствору циклопент-3-енкарбоновой кислоты (10 г, 89,3 ммоль) в безводном этаноле (30 мл) добавляли дихлорид серы (15,9 г, 134 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем концентрировали. Твердый остаток выливали в воду. Полученную смесь экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали, и твердый остаток очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (2,5% этилацетат в петролейном эфире) с получением целевого продукта (6,7 г, 47,9 ммоль, выход=54%) в виде желтого масла, которое использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 5,66 (с, 2Н), 4,18-4,10 (м, 2Н), 3,16-3,05(м, 1Н), 2,66 (с, 2Н), 2,63 (с, 2Н), 1,29-1,24 (т, J=9,4, 3Н).
B. Этил-1-этилциклопент-3-енкарбоксилат. К раствору диизопропиламина (10 мл, 72 ммоль) в безводном ТГФ (50 мл) добавляли н-бутиллитий (29 мл, 72 ммоль, 2,5 М раствор в гексане) в течение 20 мин при -78°С. Смесь перемешивали при 0°С в атмосфере азота в течение 1 ч. Свежеполученный диизопропиламидлитий добавляли к смеси этилциклопент-3-енкарбоксилата (6,7 г, 47,9 ммоль) в безводном ТГФ (50 мл) в течение 20 минут при -78°С. Через еще 1 час при этой темературе добавляли йодэтан (11,2 г, 72 ммоль) в течение 20 мин. Затем смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония. Водный слой экстрагировали эфиром (3×100 мл). Объединенные органические слои промывали разбавленной хлористоводородной кислотой (1н), затем промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Концентрирование давало соединение, указанное в заголовке (7 г, сырой), который использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 5,60 (с, 2Н), 4,21-4,12 (м, 2Н), 2,92-2,84 (м, 2Н), 2,31-2,25 (м, 2Н), 1,75-1,67 (м, 2Н), 1,29-1,24 (м, 3Н), 0,88-0,82 (м, 3Н).
C. 1-Этилциклопент-3-енкарбоновая кислота. Раствор этил-1-этилциклопент-3-енкарбоксилата (3,5 г, 20,8 ммоль) и водного раствора гидроксида натрия (20,8 мл, 2 моль/л) в метаноле (30 мл) перемешивали при 80°С в течение 2 ч и затем концентрировали. Твердый остаток выливали в воду, и экстрагировали эфиром (3×100 мл). Водный слой подкисляли 4 моль/л водным раствором хлористоводородной кислоты до рН<3, и экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Концентрирование при пониженном давлении давало сырой продукт, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (5% этилацетат в петролейном эфире) с получением соединения, указанного в заголовке (1,9 г, 13,6 ммоль, 65,5% выход). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 5,61 (с, 2Н), 2,91 (д, J=14,8, 2Н), 2,32 (д, J=14,4, 2Н), 1,78-1,72 (м, 2Н), 0,92-0,88 (т, J=7,4, 3Н).
D. Бензил (1-этилциклопент-3-ен-1-ил)карбамат. К раствору 1-этилциклопент-3-енкарбоновой кислоты (1,9 г, 13,6 ммоль) в диоксане (30 мл) добавляли ДИЭА (5,3 г, 41 ммоль), дифенилфосфорилазид (4,5 г, 16,3 ммоль) и бензиловый спирт (2,2 г, 20,4 ммоль). Смесь перемешивали при 80°С в течение ночи и затем концентрировали при пониженном давлении. Твердый остаток очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (2,5% этилацетат в петролейном эфире) с получением продукта, указанного в заголовке (1,3 г, 5,3 ммоль, выход: 39%). МС (ESI) m/z=246,2 [М+1]+.
E. Гидрохлорид 1-этилциклопентанамин. К раствору бензил (1-этилциклопент-3-ен-1-ил)карбамата (1,3 г, 5,3 ммоль) в метаноле (20 мл) добавляли палладий на угле (130 мг, 10%). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в атмосфере водорода в течение ночи. Раствор хлористоводородной кислоты (20 мл, 1 моль/л в метаноле) добавляли в реакционную смесь, и реакционную смесь фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением сырого продукта (900 мг), который использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z=114,2 [М+Н]+.
F. 4-(1-Этилциклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрил. К перемешиваемому раствору 4-хлор-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (984 мг, 5,3 ммоль) в ДМСО (10 мл) добавляли ДИЭА (2,1 г, 15,9 ммоль) и 1-этилциклопентанамин гидрохлорид (900 мг, сырой). Полученную смесь перемешивали при 60°С в течение 2 ч. Реакционную смесь выливали в воду и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением сырого продукта. Сырой продукт очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (5% этилацетат в петролейном эфире) с получением целевого продукта в виде желтого масла (830 мг, 3,2 ммоль, 53,5% выход). МС (ESI) m/z=263,2 [М+Н]+.
G. 4-(1-Этилциклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешанному раствору 4-(1-этилциклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (830 мг, 3,2 ммоль) в ДМСО (10 мл) добавляли водный раствор перекиси водорода (1,8 г, 30%, 16 ммоль), и водный раствор гидроксида натрия (2,7 мл, 6 моль/л, 16 ммоль) при 0°С. Смесь перемешивали при 50°С в течение 15 мин и разбавляли водой. Смесь экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Концентрирование при пониженном давлении давало сырой продукт, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (5% метанол в ДХМ) с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества (800 мг, 2,9 ммоль, 90% выход). МС (ESI) m/z=281,2 [М+1].
H. 4-(1-Этилциклопентиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид. При 0°С к раствору 4-(1-этилциклопентиламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (800 мг, 2,9 ммоль) в ТГФ (30 мл) порциями добавляли mCPBA (873 мг, 4,3 ммоль). Через 1 ч, реакционную смесь концентрировали, и полученный сырой очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (5% метанол в ДХМ) с получением целевого продукта (800 мг, 2,56 ммоль, 90% выход). МС (ESI) m/z=313,2 [М+1]+.
I. 4-(1-Этилциклопентиламино)-2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К смеси 4-(1-этилциклопентиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид (200 мг, 0,64 ммоль) и (1R,4R)-4-аминоциклогексанол (115 мг, 1 ммоль) в NMP (10 мл) добавляли ДИЭА (255 мг, 1,98 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 100°С в течение ночи. Реакционную смесь очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением целевого продукта (117,0 мг, 0,34 ммоль, выход 51%). 1H-ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ ч./млн 8,17 (с, 1Н), 3,66 (с, 1Н), 3,46 (с, 1Н), 2,06-2,04 (м, 2Н), 1,98-1,89 (м, 6Н), 1,66-1,58 (м, 6Н), 1,26-1,24 (м, 4Н), 1,77-0,73 (т, J=7,2 Гц, 3Н); МС (ESI) m/z=348, 2 [М+1]+.
Пример 57: 4-(((1R,3S)-3-Гидроксициклогексил)амино)-2-((4-метоксибицикло[2.2.2]октан-1-ил)амино)пиримидин-5-карбоксамид
А. Диметил-1-(2-хлорэтил)циклогексан-1,4-дикарбоксилат. К перемешиваемому раствору циклогексан-1,4-дикарбоновой кислоты (100 г, 0,58 моль) в безводном метаноле (800 мл) добавляли дихлорид серы (208 г, 1,75 моль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем концентрировали при пониженном давлении. Твердый остаток выливали в воду. Полученную смесь экстрагировали этилацетатом (200 мл ×3). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Концентрирование давало сырой диметилциклогексан-1,4-дикарбоксилат (105 г, 0,53 моль, выход 90,5%) который использовали без дополнительной очистки.
К раствору диизопропиламина (88 мл, 0,62 моль) в безводном ТГФ (500 мл) добавляли н-бутиллития (240 мл, 0,6 моль, 2,5 М раствор в гексане) в течение 20 мин при -78°С. Смесь перемешивали при 0°С в атмосфере азота в течение 30 мин.
К вышеописанной смеси сырого диметилциклогексан-1,4-дикарбоксилата (100 г, 0,5 моль) и гексаметилфосфорамиде (360 мл, 2 моль) в безводном ТГФ (800 мл) добавляли свежеполученный раствор диизопропиламида лития (получение описано выше) в течение 30 мин при -40°С. После перемешивали в течение 1 ч при этой температуре, добавляли 1-бром-2-хлорэтан (42 мл, 0,5 моль) в течение 1. Смесь перемешивали в течение 3 ч при -78°С и затем перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили путем добавления водного раствора хлористоводородной кислоты (3 н, 420 мл). Растворитель удаляли при пониженном давлении. Водный слой экстрагировали этилацетатом (200 мл × 3). Объединенные экстракты промывали насыщенным солевым раствором (2×300 мл) и сушили над сульфатом натрия. Концентрирование давало соединение, указанное в заголовке (116 г, выход 88%), который использовали в следующей стадии без дополнительной очистки; 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 3,72 (с, 3Н), 3,65 (с, 3Н), 3,46-3,42 (м, 2Н), 2,33-2,21 (м, 3Н), 2,05-1,85(м, 4Н), 1,58-1,42 (м, 2Н), 1,25-1,15(м, 2Н).
В. Диметилбицикло[2.2.2]октан-1,4-дикарбоксилат. К раствору диизопропиламина (77 мл, 0,54 моль) в безводном ТГФ (500 мл) добавляли н-бутиллитий (210 мл, 0,53 моль, 2,5 М раствор в гексане) в течение 20 мин при -78°С. Смесь перемешивали при 0°С в атмосфере азота в течение 30 мин.
К смеси диметил-1-(2-хлорэтил)циклогексан-1,4-дикарбоксилата (116 г, 0,44 моль) и гексаметилфосфорамида (317 мл, 1,7 моль) в безводном ТГФ (800 мл) добавляли свежеполученный диизопропиламид лития (получен как описано выше) в течение 30 мин при -40°С. Смесь перемешивали в течение 2 ч при -78°С и затем перемешивали в течение ночи, оставляя нагреваться при комнатной температуре. В реакционную смесь добавляли насыщенный водный раствор хлорид аммония (200 мл), и смесь перемешивали в течение 10 мин. Летучие растворители удаляли упариванием при пониженном давлении. Водный слой экстрагировали этилацетатом (3×200 мл), и объединенные экстракты промывали насыщенным солевым раствором (300 мл × 2) и сушили над сульфатом натрия. Концентрирование при пониженном давлении давало сырой продукт, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (10% этилацетат в петролейном эфире) с получением соединения, указанного в заголовке (58,0 г, 0,25 моль, выход 50% в течение двух стадий). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ ч./млн 3,65 (с, 6Н), 1,81 (с, 12Н).
С. 4-(Метоксикарбонил)бицикло[2.2.2]октан-1-карбоновая кислота. Раствор диметилбицикло[2.2.2]октан-1,4-дикарбоксилата (58,0 г, 0,25 моль) в метаноле (600 мл) нагревали при кипячении с обратным холодильником, и затем добавляли раствор гидроксида калия (9,8 г, 0,175 моль) в метаноле (100 мл) и воду (12 мл) в течение 30 мин. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 24 ч и концентрировали. Твердый остаток разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом (200 мл × 2) для восстановления некоторого количества исходного продукта (22,0 г). Полученный водный слой подкисляли до рН=3, добавляя хлористоводородную кислоту и экстрагировали этилацетатом (300 мл × 3). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением продукта, указанного в заголовке (30,0 г, 0,14 моль, выход 55%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 3,65 (с, 3Н), 1,81 (с, 12Н); МС (ESI) m/z=211,3 [М-Н]-.
D. Метил-4-бромбицикло[2.2.2]октан-1-карбоксилат. К суспензии 4-(метоксикарбонил)бицикло[2.2.2]октан-1-карбоновой кислоты (11,0 г, 51,8 ммоль) в ацетоне (80 мл) добавляли водный раствор гидроксида натрия (1 М, 51,8 мл, 51,8 ммоль), и раствор нитрата серебра (8,8 г, 51,9 моль) в воде (10 мл). Образовавшийся остаток собирали путем фильтрации, промывали водой, ацетоном и диэтиловым эфиром и сушили в вакууме при 115°С в течение 4 ч. Полученное ((4-(метоксикарбонил)-бицикло[2.2.2]октан-1-карбонил)окси)серебро (15,3 г, 47,9 ммоль) суспендированный в гексане (125 мл), с последующим добавлением брома (7,7 г, 48,1 ммоль) в течение 30 мин при комнатной температуре. После завершения добавления реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение еще 30 мин. Реакционную смесь фильтровали для удаления твердого вещества, и фильтровальную лепешку промывали гексаном (150 мл × 4). Объединенные органические фильтраты промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (150 мл × 2) и насыщенным солевым раствором (200 мл), затем сушили над сульфатом магния. Концентрирование при пониженном давлении давало сырой продукт, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (5% этилацетат в петролейном эфире) с получением соединения, указанного в заголовке (4,2 г, 0,17 моль, 33% выход в течение две стадии). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ ч./млн 3,64 (с, 3Н), 2,27-2,20 (м, 6Н), 1,98-1,94 (м. 6Н).
E. 4-Гидроксибицикло[2.2.2]октан-1-карбоновая кислота. Метил-4-бромбицикло [2.2.2]октан-1-карбоксилат (17,0 г, 69,0 ммоль) кипятили с обратным холодильником в 1,5 л 1% водного раствора гидроксида натрия в течение 24 ч. После охлаждения реакционный раствор подкисляли хлористоводородной кислотой (6 н, 100 мл) и экстрагировали диэтиловым эфиром (6×500 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и концентрировали с получением соединения, указанного в заголовке, (10,4 г, 61,1 ммоль, выход: 89%), который использовали в следующей стадии без дополнительной очистки; МС (ESI) m/z=169,2 [М-Н]-.
F. Метил-4-гидроксибицикло[2.2.2]октан-1-карбоксилат. К раствору 4-гидроксибицикло[2.2.2]октан-1-карбоновой кислоты (14 г, 82,4 ммоль) в метаноле (300 мл) добавляли концентрированную серную кислоту (1 мл). Смесь кипятили с обратным холодильником в течение 10 ч и затем концентрировали. Осадок растворяли в воде (100 мл), и смесь экстрагировали этилацетатом (200 мл × 2). Объединенные органические фазы промывали насыщенный водным раствором гидрокарбоната натрия (100 мл), насыщенным солевым раствором (100 мл) и сушили над сульфатом натрия. Концентрирование давало соединение, указанное в заголовке (14,5 г, выход 96%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 3,64 (с, 3Н), 1,96-1,89 (м, 6Н), 1,69-1,64 (м, 6Н).
G. Метил-4-метоксибицикло[2.2.2]октан-1-карбоксилат. К раствору метил-4-гидроксибицикло[2.2.2]октан-1-карбоксилата (8,9 г, 48 ммоль) в безводном ТГФ (150 мл) при -78°С добавляли н-бутиллитий (23 мл, 57,5 ммоль, 2,5 М раствор в гексане) в течение 30 мин, а затем медленно добавляли йодметан (14 г, 98 ммоль). Смесь перемешивали при 60°С в течение 3 ч и гасили, добавляя насыщенный водный раствор хлорида аммония (50 мл).
Полученный раствор концентрировали, и твердый остаток экстрагировали этилацетатом (150 мл × 2). Органические слои объединяли и промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом магния и затем концентрировали. Твердый остаток очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (10% этилацетат в петролейном эфире) с получением продукта, указанного в заголовке (6,5 г, 67%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 3,64 (с, 3Н), 3,18 (с, 3Н), 1,95-1,89 (м, 6Н), 1,70-1,65 (м, 6Н).
H. 4-Метоксибицикло[2.2.2]октан-1-карбоновая кислота. Метил-4-метоксибицикло[2.2.2]октан-1-карбоксилат (6,5 г, 33 ммоль) кипятили с обратным холодильником в водном растворе гидроксида натрия (5%, 150 мл) в течение 2 ч. После охлаждения реакционный раствор подкисляли раствором хлористоводородной кислоты (6 н, 50 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 мл × 2). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и концентрировали с получением соединения, указанного в заголовке (5,9 г, 32 ммоль, выход 97%), которое использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z=183,2 [М-Н]-.
I. Бензил (4-метоксибицикло[2.2.2]октан-1-ил)карбамат. К раствору 4-метоксибицикло[2.2.2]октан-1-карбоновой кислоты (5,9 г, 32 ммоль) в диоксане (80 мл) добавляли ДИЭА (8,3 г, 64,2 ммоль), дифенилфосфорилазид (13,2 г, 48 ммоль) и фенилметанол (17,3 г, 160 ммоль). Смесь перемешивали при 80°С в течение ночи и затем концентрировали при пониженном давлении. Твердый остаток очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (5% метанол в ДХМ) с получением целевого продукта. (9 г, 31 ммоль, выход 96%). МС (ESI) m/z=290,2 [М+Н]+.
J. 4-Метоксибицикло[2.2.2]октан-1-амин гидрохлорид. К раствору бензил (4-метоксибицикло[2.2.2]октан-1-ил)карбамата (9 г, 31 ммоль) в метаноле (150 мл) добавляли палладий на угле (0,5 г, 10%). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в атмосфере водорода (50 фунт на кв. дюйм) в течение ночи и затем фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Твердый остаток растворяли в растворе хлористоводородной кислоты (10% в метаноле, 50 мл) и перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Смесь концентрировали, и полученное твердое вещество суспендировали в ТГФ (20 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, и остаток собирали и сушили с получением целевого продукта (3,8 г, 20 ммоль, выход: 68%). 1Н-ЯМР (400 МГц, DMS-d6) δ ч./млн 8,14 (уш. с, 3Н), 3,04 (с, 3Н), 1,83-1,80 (м, 6Н), 1,68-1,64 (м, 6Н); МС (ESI) m/z=156,1[М+1]+.
К. 4-((1R,3S)-3-Гидроксициклогексиламино)-2-(4-метоксибицикло[2.2.2]октан-1-иламино)пиримидин-5-карбоксамид. К раствору 4-((1R,3S)-3-гидроксициклогексиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (1,2 г, 3,8 ммоль; синтез описан в настоящем описании) и гидрохлорида 4-метоксибицикло[2.2.2]октан-1-амина (600 мг, 3,1 ммоль) в NMP (12 мл) добавляли ДИЭА (1,03 г, 8 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 130°С при микроволновом облучении в течение 3 ч. Полученную смесь очищали хроматографией с обратной фазой на колонке с получением целевого продукта (230 мг, 0,6 ммоль, 15,5% выход). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 8,70 (уш. с., 1Н), 8,08 (с, 1Н), 5,40 (уш. с., 2Н), 5,01 (уш. с, 1Н), 3,99-3,96 (м, 1Н), 3,75-3,70 (м, 1Н), 3,19 (с, 3Н), 2,37-2,34 (м, 1Н), 2,15-2,11 (м, 6Н), 1,99-1,97 (м, 2Н), 1,90-1,86 (м, 1Н), 1,80-1,76 (м, 6Н), 1,38-1,22 (м, 4Н). МС (ESI) m/z=390,2[М+1]+.
Пример 58: 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(3-(трифторметил)бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 2-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексиламино)-4-(3-(трифторметил)бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)пиримидин-5-карбоксамид. К 5 мл NMP раствора (2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (445 мг, 1,416 ммоль)) добавляли гидрохлорид 3-(трифторметил)бицикло[1.1.1]пентан-1-амина (266 мг, 1,416 ммоль) и ДИЭА (0,494 мл, 2,83 ммоль). Реакционную смесь затем нагревали при температуре 90°С в течение ночи. ЖХ-МС показала, что масса целевого продукта имела доминирующий пик. Сырую реакционную смесь очищали непосредственно на полупрепаративной ВЭЖХ (способ: 5-80% ацетонитрил + 0,1% ТФУ в воде + 0,1% ТФУ). Фракции продукта объединяли и упаривали при пониженном давлении до объема <5 мл. Вещество затем нейтрализовывали насыщенным бикарбонатом натрия и экстрагировали этилацетатом (2х). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. Полученное твердое вещество растворяли в метаноле и промывали через колонку StratoSpheres SPE PL-НСО3 MP-Resin, элюируя метанолом. Упаривание растворителя при пониженном давлении давало 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(3-(трифторметил)бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)пиримидин-5-карбоксамид. Вещество очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-10% метанол в ДХМ в течение 1650 мл; 40 мл/мин). Фракции продукта объединяли и упаривали досуха с получением 2-((1R,4R)-4-гидроксициклогексиламино)-4-(3-(трифторметил)бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)пиримидин-5-карбоксамида (135 мг, 0,35 ммоль, 24,8% выход); 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 9,54 (с, 1Н), 8,41 (с, 1Н), 7,57-7,86 (м, 1Н), 7,26-7,32 (м, 1Н), 6,91-7,17 (м, 1Н), 4,60 (д, J=4,29 Гц, 1Н), 3,49-3,73 (м, 1Н), 3,35-3,46 (м, 1Н), 2,38 (с, 6Н), 1,86 (д, J=11,32 Гц, 4Н), 1,26 (уш. с., 4Н); МС (ESI) m/z 386,0 [М+1]+.
Пример 59: 4-(Трет-бутиламино)-2-(((1R,3S)-3-гидроксициклогексил)амино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 4-(Трет-бутиламино)-2-(((1R,3S)-3-гидроксициклогексил)амино)пиримидин-5-карбоксамид. К смеси 4-(трет-бутиламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (250 мг, 0,918 ммоль; синтез описан в настоящем описании) и (1S,3R)-3-аминоциклогексанола (138 мг, 1,2 ммоль; полученный как описано в Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056 (2004)) в NMP (10 мл) добавляли ДИЭА (374 мг, 2,9 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 100°С в течение ночи. Реакционную смесь очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением целевого продукта (212,2 мг, 0,69 ммоль, выход 75%). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч./млн 8,86 (уш. с, 1Н), 8,12 (с, 1Н), 5,53 (уш. с, 3Н), 3,93-3,91 (м, 1Н), 3,88-3,82 (м, 1Н), 2,27-2,25 (м, 1Н), 1,92-1,85 (м, 3Н), 1,47 (с, 9Н), 1,42-1,25 (м, 4Н); МС (ESI) m/z=308,2 [М+1]+.
Пример 60: 4-(Бицикло [1.1.1] пентан-1-иламино)-2-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)амино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 4-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрил. К перемешанному раствору 4-хлор-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (3,0 г, 16 ммоль) в ДМСО (20 мл) добавляли ДИЭА (6,2 г, 48 ммоль) и гидрохлорид бицикло[1.1.1]пентан-1-амина (1,9 г, 16 ммоль; полученный в соответствии с Org. Lett., 13(17): 4746-4748 (2011)). Полученную смесь перемешивали при 60°С в течение 2 ч и затем выливали в воду. Смесь экстрагировали этилацетатом, и объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением сырого продукта, который очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (10% этилацетат в петролейном эфире) с получением целевого продукта (3,5 г, 14,9 ммоль, 93% выход). МС (ESI) m/z=233,2 [М+1]+.
B. 4-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилтио)-пиримидин-5-карбоксамид. К раствору 4-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (3,45 г, 14,9 ммоль) в ДМСО (15 мл) добавляли водный раствор перекиси водорода (8,4 г, 30%, 74,5 ммоль) и водный раствор гидроксида натрия (12,4 мл, 6 моль/л, 74,5 ммоль) при 0°С. Смесь перемешивали при 50°С в течение 15 мин и затем гасили, добавляя воду (30 мл). Сформировавшееся твердое вещество собирали и сушили в вакууме с получением целевого продукта (3,5 г, 14,0 ммоль, 94% выход). МС (ESI) m/z=251,2 [М+1]+.
C. 4-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилсульфинил)-пиримидин-5-карбоксамид и 4-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид. mCPBA (4,3 г, 21 ммоль) порциями добавляли к раствору 4-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (3,5 г, 14 ммоль) в ТГФ (40 мл) при 0°С. Ход реакции контролировали с помощью тонкослойной хроматографии. Через 1 ч реакционную смесь концентрировали. Полученный сырой продукт очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (5% метанол в ДХМ) с получением 3,1 г смеси, указанной в заголовке. МС (ESI) m/z=267,2 [М+1]+/283,2 [М+1]+.
D. 4-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)амино)пиримидин-5-карбоксамид. К смеси 4-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида, 4-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (300 мг) и гидрохлорида тетрагидро-2Н-пиран-4-амина (181,5 мг, 1,32 ммоль) в NMP (10 мл) добавляли ДИЭА (426 мг, 3,3 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 100°С в течение ночи. Затем реакционную смесь очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением целевого продукта (221,3 мг, 0,73 ммоль, выход 67%) в виде желтого порошка. 1Н-ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ ч./млн 8,19 (с, 1Н), 3,95-3,88 (м, 3Н), 3,44-3,38 (м, 2Н), 2,40 (с, 1Н), 2,09 (с, 6Н), 1,88-1,85 (м, 2Н), 1,55-1,45 (м, 2Н); МС (ESI) m/z=304,2 [М+1]+.
Пример 61: 4-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(((1R,3S)-3-гидроксициклогексил)амино)пиримидин-5-карбоксамид
А. 4-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамид и 4-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамид. 3-Хлорбензопероксидную кислоту (4,27 г, 21 ммоль) порциями добавляли к раствору 4-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (3,50 мг, 14 ммоль, синтез описан в настоящем описании) в ТГФ (40 мл) при 0°С. Полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 1 ч и затем концентрировали при пониженном давлении до масла, которое очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (5% метанол в ДХМ) с получением 310 мг смеси 4-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида и 4-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида в виде желтого твердого вещества. МС (ESI) m/z=267,2 [М+1]+/283,2 [М+1]+.
В. 4-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(((1R,3S)-3-гидроксициклогексил)амино)пиримидин-5-карбоксамид. К смеси 4-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида и 4-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-2-(метилсульфонил)пиримидин-5-карбоксамида (300 мг) и (1S,3R)-3-аминоциклогексанола (152 мг, 1,32 ммоль; получен как описано в Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056 (2004)) в NMP (10 мл) добавляли ДИЭА (426 мг, 3,3 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 100°С в течение ночи. Реакционную смесь очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением целевого продукта (230, 2 мг, 0,73 ммоль, выход 66%). 1H-ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ ч./млн 8,29 (с, 1Н), 3,91-3,89 (м, 1Н), 3,69-3,62 (м, 1Н), 2,50 (с, 1Н), 2,29-2,25 (м, 1Н), 2,20 (с, 6Н), 1,97-1,83 (м, 3Н), 1,41-1,21 (м, 4Н); МС (ESI) m/z=318,2 [М+1]+.
Пример 62: 2-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-((1R,3R)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
A. N-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-ил)-5-бром-4-(метилтио)пиримидин-2-амин. К перемешиваемому раствору 5-бром-2-хлор-4-(метилтио)пиримидина (1,0 г, 4,18 ммоль) в NMP (10,0 мл) добавляли гидрохлорид бицикло[1.1.1]пентан-1-амина (749 мг, 6,26 ммоль, получен в соответствии с Org. Lett., 13(17): 4746-4748 (2011)) и ДИЭА (2,19 мл, 12,53 ммоль). Смесь перемешивали при 100°С в течение 16 ч, и затем растворитель удаляли при пониженном давлении. Твердый остаток разбавляли в 100 мл этилацетата и 50 мл 1 М водном растворе гидрофосфата натрия. Слои удаляли, и водный слой экстрагировали 50 мл этилацетата. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением N-(бицикло[1.1.1]пентан-1-ил)-5-бром-4-(метилтио)пиримидин-2-амина (1250 мг, 4,37 ммоль, 105% выход) в виде твердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки. МС (ESI) m/z 286,0 [М+1]+и 288,0 [М+Н]+.
В. 2-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрил. N-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-ил)-5-бром-4-(метилтио)пиримидин-2-амин (1250 мг, 4,37 ммоль), цинковую пыль (71,4 мг, 1,092 ммоль), цианид цинка (333 мг, 2,84 ммоль), 1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен (196 мг, 0,349 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладий (0) (200 мг, 0,218 ммоль) и ДМА (8,35 мл) объединяли и нагревали в течение ночи при 90°С в атмосфере азота. Реакционную смесь разбавляли 125 мл этилацетата и 50 мл воды и фильтровали через пад из Целита. Слои фильтрата удаляли, и водный слой экстрагировали 75 мл этилацетата. Объединенные этилацетатные слои промывали 2×50 мл насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до масла. Сырое масло очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0%-30% этилацетат в гексане). Фракции, содержащие продукт, объединяли и концентрировали с получением 2-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (566 мг, 2,436 ммоль, 55,8% выход) в виде твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,81-9,08 (м, 1Н), 8,31-8,57 (м, 1Н), 2,55-2,63 (м, 3Н), 2,11 (с, 7Н). МС (ESI) m/z 233,3 [М+1]+.
C. 2-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемому раствору 2-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбонитрила (566 мг, 2, 436 ммоль) в ДМСО (7 мл) добавляли 6 М водный раствор гидроксида натрия (2,030 мл, 12,18 ммоль) и 30% водный раствор перекиси водорода (1,381 мл, 12,18 ммоль) при 0°С. Смесь затем перемешивали при 50°С в течение 30 мин и затем выливали в ледяную воду (50 мл). Твердые вещества, которые образовывались, перемешивали на ледяной бане в течение 30 мин, фильтровали, промывали водой и затем сушили в вакуумной печи в течение ночи при 45°С с получением 2-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (410 мг, 1,638 ммоль, 67,2% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,41 (с, 1Н), 7,03-8,34 (м, 2Н), 2,43-2,48 (м, 1Н), 2,35 (уш. с., 3Н), 2,09 (с, 6Н). МС (ESI) m/z 251,3 [М+1]+.
D. 2-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемому раствору 2-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-(метилтио)пиримидин-5-карбоксамида (410 мг, 1,638 ммоль) в хлороформе (39,0 мл) порциями добавляли 3-фенил-2-(фенилсульфонил)-1,2-оксазиридин (514 мг, 1,965 ммоль). Полученный светло-желтый раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение двух ночей в атмосфере азота. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением сырого продукта в виде белого твердого вещества. К этим твердым веществам добавляли этилацетат (15 мл), и взвесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, фильтровали, промывали этилацетатом и сушили в вакуумной печи в течение нескольких часов с получением 2-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида (397 мг, 1,491 ммоль, 91% выход) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,67-9,14 (м, 2Н), 7,93-8,11 (м, 1Н), 7,41-7,54 (м, 1Н), 2,68-2,79 (м, 3Н), 2,43-2,48 (м, 1Н), 2,02-2,21 (м, 6Н). МС (ESI) m/z 267,0 [М+1]+.
Е. 2-(Бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-((1R,3R)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. К перемешиваемой суспензии 2-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-(метилсульфинил)пиримидин-5-карбоксамида (397 мг, 1,491 ммоль) и смеси гидрохлорида (1R,5R)-5-амино-2,2-диметилциклогексанола и гидрохлорида (1S,5S)-5-амино-2,2-диметилциклогексанола (348 мг, 1,938 ммоль, синтез описан в настоящем описании) в ДМФ (4,88 мл) добавляли ДИЭА (0,78 мл, 4,47 ммоль), и реакционную смесь нагревали до 90°С в течение ночи. Сырую реакционную смесь выливали в 60 мл ледяной воды. Получали взвесь полученного твердого вещества в течение ~1 ч, фильтровали, промывали водой и сушили в течение нескольких часов в вакуумной печи при 45°С с получением смеси 2-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-((1R,3R)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида и 2-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-((1S,3S)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (481 мг, 1,392 ммоль, 93% выход). Это вещество отделяли с помощью препаративной хиральный SFC, используя колонку ChralPak AD-H, 250×30 mm I.D. с изократическим 40% этанолом + 0,1% гидроксидом аммония в СО2 градиент при скорости потока 120 мл/мин и при 38°С. Изомер, который элюировался быстрее, был обозначен как Пик 1 и было получено 132 мг (0,382 ммоль). Изомер, который элюировался медленнее, был обозначен как Пик 2 и было получено 120 мг (0,349 ммоль).
Пик 1: 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,85-9,12 (м, 1Н), 8,14-8,44 (м, 1Н), 7,63-7,90 (м, 1Н), 4,47-4,63 (м, 1Н), 3,76-3,96 (м, 1Н), 3,08-3,23 (м, 1Н), 2,43 (с, 1Н), 2,04 (с, 6Н), 1,87-1,99 (м, 1Н), 1,66-1,83 (м, 1Н), 1,04-1,47 (м, 4Н), 0,92 (с, 3Н), 0,82 (с, 3Н) МС (ESI) m/z 346,3 [М+1]+.
Пик 2: 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ ч./млн 8,88-9,07 (м, 1Н), 8,25-8,45 (м, 1Н), 7,57-7,90 (м, 1Н), 4,46-4,59 (м, 1Н), 3,78-3,96 (м, 1Н), 3,09-3,22 (м, 1Н), 2,35-2,47 (м, 1Н), 2,04 (с, 6Н), 1,87-1,99 (м, 1Н), 1,66-1,80 (м, 1Н), 1,37-1,48 (м, 1Н), 1,12-1,34 (м, 3Н), 0,88-0,94 (м, 3Н), 0,71-0,86 (м, 3Н). МС (ESI) m/z 346,3 [М+1]+.
С помощью сравнения силы SAR с аналогичными соединениями с известной абсолютной стереохимией, как приведено в настоящем описании, Пик 1 был обозначен как 2-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-((1S,3S)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид. Пик 2 был обозначен как 2-(бицикло[1.1.1]пентан-1-иламино)-4-((1R,3R)-3-гидрокси-4,4-диметилциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид.
Анализы
Биохимические анализы
А. Флуоресцентные анализы с разрешением во времени Анализ JNK1. 384-луночные флуоресцентные анализы с разрешением во времени использовали для контроля активности JNK1. Анализ JNK1 проводили в следующем аналитическом буфере: 50 мМ HEPES, 10 мМ MgCl2, 1 мМ EGTA, 2 мМ DTT и 0,01% Tween 20. Для инициирования реакции 100 нМ ULight™-меченного пептида 4ЕВР1 (Perkin-Elmer) и 5 мкМ АТФ перемешивали вместе с 500 пМ JNK1 (Carna Biosciences) с получением общего объема 20 мкл в каждой лунке. Аналитический планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч и останавливали, используя смесь 30 мМ EDTA и 4 нМ Eu-anti-4EBP1, добавляя 20 мкл останавливающего раствора в каждую лунку. Планшет считывали на считывателе Perkin-Elmer Envision Reader.
Анализ JNK2. 384-луночные флуоресцентные анализы с разрешением во времени использовали для контроля активности JNK2. Анализ JNK2 проводили в следующем аналитическом буфере: 50 мМ HEPES, 10 мМ MgCl2, 1 мМ EGTA, 2 мМ DTT и 0,01% Tween 20. Для инициирования реакции 100 нМ ULight™-меченого пептида 4ЕВР1 (Perkin-Elmer) и 5 мкМ АТФ перемешивали вместе с 500 пМ JNK2 (Carna Biosciences) с получением общего объема 20 мкл в каждой лунке. Аналитический планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч и останавливали, используя смесь 30 мМ EDTA и 4 нМ Eu-anti-4EBP1, добавляя 20 мкл останавливающего раствора в каждую лунку. Планшет считывали на считывателе Perkin-Elmer Envision Reader.
B. Каскадные анализы Z'-LYTE®
Анализ JNK1. Каскадный киназный анализ JNK1 Z'-LYTE® проводили в следующем буфере: 50 мМ HEPES при рН 7,5, 0,01% BRIJ-35, 10 мМ MgCl2, 1 мМ EGTA и 1 мМ DTT. Получали 10 мкл киназной реакционной смеси, содержащей 1,81-7,25 нг JNK1, 25 нг неактивного МАРКАРК2, 100 мкМ АТФ и 2 мкМ Ser/Thr 04 пептида. Аналитическую смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем к реакционной смеси добавляли 5 мкл развивающего реагента A (Invitrogen, PV3295) в разведении 1:512 и инкубировали при комнатной температуре в течение еще одного часа. Данные затем считывали на флуоресцентном планшет-ридере и анализировали.
Анализ JNK2. Каскадный киназный анализ JNK2 Z'-LYTE® проводили в следующем буфере: 50 мМ HEPES при рН 7,5, 0,01% BRIJ-35, 10 мМ MgCl2, 1 мМ EGTA и 2 мМ DTT. Получали 10 мкл киназной реакционной смеси, содержащей 0,38-1,5 нг JNK2, 100 нг неактивного МАРКАРК2, 100 мкМ АТФ и 2 мкМ Ser/Thr 04 пептида. Аналитическую смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем к реакционной смеси добавляли 5 мкл развивающего реагента A (Invitrogen, PV3295) в разведении 1:512 и инкубировали при комнатной температуре в течение еще одного часа. Данные затем считывали на флуоресцентном планшет-ридере и анализировали.
C. Радиоактивные анализы
Анализ JNK1. Радиоактивный анализ киназы JNK осуществляли в 96-луночном формате с конечным объемом 100 мкл. Конечная концентрация анализа составила 6,6 мкМ АТФ (3-кратный АТФ Km), 2,64-5 мкг/мл JNK1 и 100 мкг/мл cJUN. JNK1 разбавляли в следующем буфере для разведения (20 мМ HEPES рН 7,6, 0,1 мМ EDTA, 2,5 мМ MgCl2, 0,004%(масс/об) Triton Х100, 2 мкг/мл Леупептид, 20 мМ В-глицерин фосфат, 0,1 мМ Na3VO4 дитиотреитол) и затем предварительно смешивали с cJun, разведенным в субстратном буфере (20 мМ HEPES рН 7,6, 50 мМ NaCl, 0,1 мМ EDTA, 2,5 мМ MgCl2, 0,05% (масс/об) Triton Х100). Смесь JNK1/cJun (85 мкл) добавляли в ингибитор (5 мкл), разбавленный в 100% ДМСО, с получением конечной концентрации ДМСО в анализе 5% (об./об.). Смесь фермента, субстрата и ингибитора оставляли уравновешиваться при комнатной температуре в течение 15 минут. Реакцию начинали, добавляя 10 мкл 10Х АТФ в киназном буфере (130 мМ MgCl2, 6 мМ дитиотреитол, 150 мМ паранитрофенилфосфат, 100 мкКю/мл γ-[33Р]-АТФ). Реакции оставляли осуществляться на 60 минут, а затем осаждали белок посредством трихлоруксусной кислоты (7,2% конечного ТСА). Через 30 минут инкубирования с ТСА, реакционные продукты собирали на стеклянном микрофильтре для 96-луночных плашек (Millipore MAHF CIH60), используя Packard Filtermate. Остаток промывали фосфатным солевым буфером и количество фосфата, встроенное в cJun количественно определяли с помощью сцинциографического счетчика, используя Packard Topcount-NXT. Все анализы проводили в условиях, при которых встраивание фосфата было линейным относительно времени и концентрации фермента. Значения IC50 рассчитывали как концентрацию ингибитора, при которой фосфорилирование c-Jun уменьшалось на 50% от контрольной величины.
Анализ JNK2. Анализ осуществляли в 96-луночном формате с конечным объемом 100 мкл. Конечная концентрация анализа составила 6,6 мкМ АТФ (3-кратный АТФ Km), 0,2-0,53 мкг/мл JNK2 и 100 мкг/мл cJUN. JNK2 разбавляли в следующем буфере для разведения (20 мМ HEPES рН 7,6, 0,1 мМ EDTA, 2,5 мМ MgCl2, 0,004% (масс/об) Triton Х100, 2 мкг/мл Леупептид, 20 мМ В-глицерин фосфат, 0,1 мМ Na3VO4 дитиотреитол) и затем предварительно смешивали с cJun, разведенным в субстратном буфере (20 мМ HEPES рН 7,6, 50 мМ NaCl, 0,1 мМ EDTA, 2,5 мМ MgCl2, 0,05% (масс/об) Triton Х100). Смесь JNK2/cJun (85 мкл) добавляли в ингибитор (5 мкл), разбавленный в 100% ДМСО, с получением конечной концентрации ДМСО в анализе 5% (об./об.). Смесь фермента, субстрата и ингибитора оставляли уравновешиваться при комнатной температуре в течение 15 минут. Реакцию начинали, добавляя 10 мкл 10Х АТФ в киназном буфере (130 мМ MgCl2, 6 мМ дитиотреитол, 150 мМ паранитрофенилфосфат, 100 мкКю/мл Y-[33Р]-АТФ). Реакции оставляли осуществляться на 60 минут, а затем осаждали белок посредством трихлоруксусной кислоты (7,2% конечного ТСА). Через 30 минут инкубирования с ТСА, реакционные продукты собирали на стеклянном микрофильтре для 96-луночных плашек (Millipore MAHF CIH60), используя Packard Filtermate. Остаток промывали фосфатным солевым буфером и количество фосфата, встроенное в cJun количественно определяли с помощью сцинциографического счетчика, используя Packard Topcount-NXT. Все анализы проводили в условиях, при которых встраивание фосфата было линейным относительно времени и концентрации фермента. Значения IC50 рассчитывали как концентрацию ингибитора, при которой фосфорилирование c-Jun уменьшалось на 50% от контрольной величины.
Клеточные анализы
Анализ RAW2 64.7 фосфо-cJun в цельной клетке. Клетки RAW264.7 были приобретены от American Tissue Culture Collection и поддерживались в среде для роста, состоящей из 90% высокоглюкозной среде Игла, модифицированной по методу Дульбекко (Invitrogen), 10% бычьей фетальной сыворотки (Hyclone) и 2 мМ L-глютамина (Invitrogen). Все клетки культивировали при 37°С в 95% воздухе и 5% СО2. Клетки помещали с плотностью 1,0×105 клеток на лунку в 96-луночный планшет в 120 мкл среды для роста. Маточный раствор соединения диаминопиримидина (30 мМ) серийно разбавляли ДМСО, затем разбавляли в среде для роста и добавляли в каждую лунку в виде 10х концентрированного раствора в объеме 15 мкл, смешивали и оставляли инкубироваться с клетками. Носитель соединения (ДМСО) поддерживали при конечной концентрации 0,2% во всех лунках. Через 30 минут клетки активировали липополисахаридом (ALEXIS Biochemicals) в конечной концентрации 25 нг/мл. Липополисахарид добавляли как 10х концентрированный раствор в среде для роста и добавляли в объеме 15 мкл на лунку. Плашки с клетками культивировали в течение 1 ч, затем клеточную среду удаляли. Уровень белка c-Jun, который фосфорилировался на серине в положении 63, измеряли в соответствии с инструкциями производителя для набора для лизиса Kit-Phospho-c-Jun (Ser 63) для проведения цельноклеточного анализа (Meso Scale Discovery) за исключением того, что концентрация NaCl в буфере для лизиса был выше конечной концентрации 350 мМ. Значения IC50 рассчитывали как концентрацию соединения диаминопиримидина при котором уровень фосфорилированного белка c-Jun уменьшался на 50% сигнального окна. Конкретные соединения таблицы 1, 2 и 3 имели значение IC50 от 0,01-30 мкМ в этом анализе.
Анализ продукции IL-2 Т-клетками Jurkat. Т-клетки Jurkat (клон Е6-1) были приобретены от American Tissue Culture Collection и поддерживались в среде для роста, состоящей из среды RPMI 1640, содержащей 2 мМ L-глутамина (Mediatech) с 10% бычьей фетальной сывороткой (Hyclone) и пенницилин/стрептомицин. Все клетки культивировали при 37°С в 95% воздухе и 5% СО2. Клетки помещали с плотностью 1,0×105 клеток на лунку в 96-луночный планшет в 120 мкл среды для роста. Маточный раствор соединения диаминопиримидина (20 мМ) разбавляли в среде для роста и добавляли в каждую лунку в виде 10х концентрированного раствора в объеме 15 мкл и оставляли прединкубироваться с клетками в течение 30 мин. Носитель соединения (диметилсульфоксид) поддерживали при конечной концентрации 0,2% во всех образцах. Через 30 минут клетки активировали РМА (форболмиристатацетат; конечная концентрация 50 нг/мл) и РНА (фитогемагглютинин; конечная концентрация 1 мкг/мл). РМА и РНА добавляли как 10х концентрированный раствор, полученный в среде для роста, и добавляли в объеме 15 мкл на лунку. Плашки с клетками культивировали в течение 6 ч. Клетки осаждали центрифугированием и среду удаляли и хранили при -20°С. Аликвоты среды анализировали в соответствии с инструкциями производителя набора Human IL-2 Tissue Culture (Meso Scale Discovery). Значения IC50 рассчитывали как концентрацию соединения диаминопиримидина при котором продукция IL-2 уменьшалась на 50% сигнального окна. Конкретные соединения таблицы 1, 2 и 3 имели значение IC50 от 0,01-10 мкМ в этом анализе.
Модели на животных
Анализ pcJun и in vivo продукция TNF-α, индуцированная LPS у крысы или мыши. Самцы крыс CD или мышей C57Bl/6 получали от Charles River Laboratories, возраст 7 недель или 20 г веса, соответственно, оставляли для аклиматизации за неделю до применения. У крыс латеральную хвостовую вену канюлировали чрезкожно 22-gage катетерной иглой под дыхательным наркозом изофлураном и 20 мкг LPS (Е. Coli 055:BS) и катетеры промывали 2,5 мл/кг нормальным солевым раствором для инъекций. У мышей 1 мг/кг LPS (Е. Coli 055:BS) в солевом растворе вводили внутрибрюшино в объеме 200 мкл. Животным вводили соединение диаминопиримидина пероральным гаважем 15-180 мин до инъекции LPS. Кровь собирали путем кардиальной пункции через 90 минут или 2 часа после введения LPS у крыс и мышей, соответственно, и печень и эпидидимальный жир выделяли для анализа pcJun, используя Mesoscale Discovery Platform. Плазму, получали, используя пробирки для разделения с литий-гепарином и замораживали при -80°С перед проведением анализа. Уровни TNF-α определяли, используя набор для специфического TNF-α ELISA для крыс или мышей (Mesoscale Discovery). Печень и эпидидимальный жир гомогенизировали и подвергали действию ультразвука в буфере для лизиса Mesoscale, определяли состав белка (набор для определения белка ВСА) и уровни pcJun измеряли (Mesoscale Discovery). Значения ED50 рассчитывали как дозу соединения диаминопиримидина при которой уровни TNF-α или pcJun снижались до 50% от контрольной величины. Конкретные соединения таблицы 1, 2 и 3 имели значение ED50 от 30-100 мг/кг в этом анализе.
Холинодефицитная аминокислотая добавка индуцировала неалкогольный стеатогепатит (NASH) на моделях крысы. Самцов крыс Wistar получали от Charles River Laboratories, возраст 7 недель, оставляли для акклиматизации за неделю до использования. Крыс кормили холинодефицитной L-аминокислотной добавкой (CDAA) (Dyets Inc) в течение до 12 недель. Крысам вводили соединение диаминопиримидина пероральным гаважем один или два раза в день, начиная с момента ведения добавки в течении между 2 и 12 неделями. В момент завершения исследования кровь собирали путем сердечной пункции и выделяли печень и эпидидимальный жир. Ткань печени подвергали гистологии и количество стеатоза или фиброза количественно определяли по окрашиванию Н&Е (гематоксилин и эозин) или красным picro Sirius. Функцию печени исследовали анализом ферментов печени, например, ALT и AST в плазме и сыворотке. Кроме того, уровни фосфо-cJun в печени количественно определяли с помощью IHC, как описано Ma F. et. al. Lab Invest.; 89 (4): 470-84 (2009). Значения ED50 рассчитывали как дозу соединения диаминопиримидина при которой фиброз, стеатоз, ферменты печени и/или уровни p-cJun снижались на 50% от контрольной величины. Конкретные соединения таблицы 1, 2 и 3 имели или, как было показано, имели значение ED50 от 30-100 мг/кг в этом анализе.
Модель фиброза при лигировании желчных протоков. Самцов мышей BALB/c (22-24 г) приобретали от Charles River Laboratories, и оставляли акклиматизироваться в течение одной недели перед хирургическим вмешательством. Анастетик катамин (80-100 мг/кг)/ксилазин (8 мг/кг), вводимые в.в., использовали для хирургического вмешательства по лигированию желчных протоков. Абдоминальный разрез давал доступ к желчному протоку, который лигировали двумя 6,0 швами из шелка, наложенными рострально на желчный проток, связывая его с кишечником. Для закрытия брюшной стенки и кожи использовали 3-0 викрильный шов. После операции мышам ежедневно вводили 1 мл раствор Рингера с лактатом подкожно, а также корм в течение всего исследования. Тестируемые соединения вводили пероральным гаважем начиная со на следующий день после хирургического вмешательства. Исследования останавливали на 14 день после перевязки желчного протока. Кровь собирали пункцией сердца и сыворотку выделяли для клинического анализа функции печени (ALT, AST и билирубин). Ткань печени собирали и обрабатывали гистологически, окрашивали Н&Е (гематоксилином и эозином) или красным picro Sirius, и использовали для оценки количества воспаления, перипортальной гиперплазии, некроза и фиброза, вызванного перевязкой желчного протока хирургическим вмешательством. Кроме того, уровни фосфо-cJun в печени количественно определяли с помощью IHC, как описано Ma F. et. al. Lab Invest.; 89(4):470-84 (2009). Некоторые соединения из таблицы 1, 2 и 3 показывают или, как будет показано, статистически значимое ингибирование воспаления, перипортальной гиперплазии, некроза, фиброза и/или уровней фосфо-cJun в дозах 10-300 мг/кг QD или BID.
Модель фиброза с тетрахлоридом углерода. Самцов мышей C57BL/6, полученных из Harlan, весом 22-24 г по прибытии оставляли акклиматизироваться в течение одной недели перед использованием. Фиброз создавали внутрибрюшной инъекцией CCl4 (0,75 мл/кг) в минеральном масле (15% об/об CCl4 в минеральном масле) 3 раза в неделю. Животным вводили соединение диаминопиримидина пероральным гаважем за 1 час до первой инъекции CCl4 и затем ежедневно или дважды в день до конца исследования, 28 дней спустя. По окончании исследования кровь собирали путем пункции сердца, и выделяли печень. Ткань печени подвергали гистологиии и количество стеатоза или фиброза количественно определяли после окрашинваия Н & Е (гематоксилин и эозин) или красным picro Sirius. Функцию печени оценивали анализом ферментов печени, например, ALT и AST в плазме или сыворотке. Кроме того, уровни фосфоро-cJun в печени количественно оценивали IHC, как описано Ma F. et. al. Lab Invest; 89(4):470-84 (2009). Некоторые соединения таблицы 1, 2 и 3 показывают, или могут показать статистически значимое ингибирование воспаления, перипортальной гиперплазии, некроза, уровней фиброза и/или фосфоро-cJun в дозах 10-300 мг/кг QD или BID.
Кожная модель с блеомицином: Самцы или самки мышей DBA/2 получали от Harlan, вес 22-24 г по прибытию, и оставляли акклиматизироваться в течение одной недели перед использованием. Фиброз кожи вызывали подкожной инъекцией блеомицина (0,5 мг/мл в общем объеме 100 мкл) через день в течение 6 недель в определенных областях верхней части спины. Животным вводили соединение диаминопиримидина путем перорального гаважа за 1 час до первой инъекции блеомицина, а затем ежедневно или дважды ежедневно до конца исследования, 3 или 6 недели спустя. По окончании исследования кровь собирали путем пункции сердца и снимали кожу. Кожу подвергали гистологическому анализу и количество определяли толщину дермы после окрашивания Н&Е (гематоксилином и эозином). Некоторые соединения таблицы 1, 2 и 3 показали статистически значимое ингибирование толщины кожи в дозах 10-300 мг/кг QD или BID.
Модель легких с блеомицином: Самцов мышей C57BL/6 получали из Charles River Laboratories, и животных оставляли для акклиматизации не менее чем на 5 дней. Животных дежали при 12-часовом цикле свет/темнота и в возрасте примерно 8 недель в начале исследования. Мышей подвергали легкой анестезии изофлураном и открывали трахею. На день 0, инъецировали блеомицин (30 мкл, 0,05 Ед) в трахею. После инъекции блеомицина рану закрывали, используя клипсы, и животных оставляли восстановливаться. Преднизолон (положительный контроль, дозу вводили внутрибрюшинно), носитель (перорально) или соединение диаминопиримидина (перорально) вводили от 30 мин до 2 ч перед введением блеомицина (профилактическая модель) или через 4 дня после введения блеомицина (терапевтическая модель). Дозу с носителем или соединением диаминопиримидина вводили дважды ежедневно на протяжении всего исследования, дозу преднизалона вводили один раз в день. Мыши находились под ежедневным наблюдением для обнаружения побочных последствий введения тестируемого вещества, в том числе влияния на массу тела. Мышей умерщвляли на 13 день. Осуществляли бронхоальвеолярный лаваж, используя 1 мл физиологического раствора забуференного фосфатом (PBS) и анализировали общее число лейкоцитов. Результаты выражены в виде общего числа полученных клеток. Макрофаги, эозинофилы, нейтрофилы, лимфоциты количественно анализировали в анализах BALF. Доли легких обрабатывали для гистологического исследования, окрашивая Н&Е (гематоксилин и эозин) или трихром TUNEL. Срезы с трихромом оценивали на тяжесть фиброза, как описано ранее (Ashcroft et al. J. Clin. Pathol. 41:467-470 (1988)). Некоторые из соединений Таблицы 1, 2 и 3 могут показать статистически значимое ингибирование фиброза легких при дозах 10-300 мг/кг QD или BID.
Модель волчанки: Самок мышей NZB/NZW F1 получали от Jackson Laboratories между 4-12 недельным возрастом по прибытии, и оставляли акклиматизироваться в течение одной недели перед использованием и развитием спонтанного SLE-подобного заболевания. Животным вводили соединение диаминопиримидина путем перорального гаважа в начале исследования и затем ежедневно или дважды ежедневно до конца исследования вплоть до 6 месяцев. Кровь собирали в течение всего исследования и сыворотку выделяли для измерения возникновения двухцепочечной ДНК стандатным методом ELISA и протеинмочевины в моче. Некоторые из соединений таблицы 1, 2 и 3 показали статистически значимое ингибирование протеинмочевины или двухцепочечной ДНК при дозе 10-300 мг/кг QD или BID.
Модель UUO фиброза почек: Самцов крыс CD-IGS получали от Charles River Laboratories, вес приблизительно 150-160 г, и оставляли акклиматизироваться в течение одной недели до начала исследования. Крыс анастезировали кетамином/ксилазином, и хирургическую область стерилизовали 70% этанолом и бетадином. Мочеточник открывали через срединный разрез и лигировали дважды, используя 5,0 шелковую нитью на расстоянии 1 см друг от друга и разрезали между лигированием. Разрез закрывали, используя 3,0 шелковую нить, и животных оставляли восстановливаться. Животным вводили соединение диаминопиримидина с помощь перорального гаважа за 1 час до перевязки мочеточника и затем ежедневно или дважды ежедневно до конца исследования через 7 дней. По окончании исследования кровь собирали путем пункции сердца и почки выделяли. Почки подвергали гистологическому и морфологическому анализу и количество фиброза количественно оценивали после окрашивания Н&Е (гематоксилином и эозином), красным picro Sirius или окрашиванием альфа-актина гладких мышц. Некоторые из соединений таблицы 1, 2 и 3 показали статистически значимое ингибирование фиброза или окрашивания альфа-актина гладких мышц при дозах 10-300 мг/кг QD или BID.
Таблицы активности
Каждое соединение в таблице 1, 2 и 3 терсировали в одном или нескольких биохимических анализах JNK1 и была обнаружена активность, как указано в настоящем описании, всех соединений с IC50 ниже 10 мкМ в анализе, некоторых соединений с IC50 ниже 200 нМ (уровень активности D), некоторых с IC50 между 200 нМ и 800 нМ (уровень активности С), некоторых с IC50 между 800 нМ и 1 мкМ (уровень активности В), и других с IC50 между 1 мкМ и 10 мкМ (уровень активности А).
Было процитировано некоторое количество ссылок, описание которых включено в настоящее описании в качестве ссылки в полном объеме.
1. Соединение формулы (I)
,
или его фармацевтически приемлемая соль, или дейтерированная форма,
где
R1 и R2 независимо представляют собой
незамещенный C1-8алкил;
C1-8алкил, замещенный одним или несколькими атомами галогена, гидрокси, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси или гидроксиC1-3алкилом;
незамещенный насыщенный 3-7-членный моноциклоалкил или 5-8-членный бициклоалкил;
замещенный насыщенный 3-7-членный моноциклоалкил или 5-8-членный бициклоалкил, где заместители выбраны из галогена, C1-6алкила, гидрокси, оксо, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкила, галогенC1-3алкила, галогенC1-3алкокси, гидроксиC1-3алкила, аминоC1-3алкила, O-циклопропила, NH2, NH(C1-3)алкила, N(C1-3алкил)2, С(О)-C1-3алкила, NHС(O)-C1-3алкила, С(О)NH2, С(О)NHC1-3алкила, С(О)N(C1-3алкил)2 и NHSO2(C1-3алкил) и пирролидила;
незамещенный C1-3алкил-C3-6циклоалкил;
4-6-членный неароматический моноциклический гетероциклил, необязательно N-замещенный группой C1-3алкил-С(О) или необязательно замещенный C1-3алкилом, оксо или гидрокси, в котором гетероатомы выбраны из 1-2 атомов кислорода или 1 атома азота; или
диоксаспиродеканил,
при условии, что R1 не является 1-аминоциклогексилом;
при условии, что соединение не является
4-(циклопентиламино)-2-(метиламино)пиримидин-5-карбоксамидом или
2-(1-ацетилпиперидин-4-иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамидом.
2. Соединение по п. 1, где R1 является разветвленным C1-8алкилом, необязательно замещенным одним или несколькими атомами галогена, гидрокси, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси или гидроксиC1-3алкилом.
3. Соединение по п. 2, где R1 является изопропилом, втор-бутилом, изобутилом, трет-бутилом, 2,3-диметилбутилом, изопентилом, 2-метилпентилом, неопентилом, трет-пентилом или 3-метилпентилом, необязательно замещенным одним или более атомами галогена, гидрокси, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси или гидроксиC1-3алкилом.
4. Соединение по п. 1, где R1 представляет собой
незамещенный насыщенный 3-7-членный моноциклоалкил или 5-8-членный бициклоалкил, или
замещенный насыщенный 3-7-членный моноциклоалкил или 5-8-членный бициклоалкил, где заместители выбраны из галогена, C1-6алкила, гидрокси, оксо, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкила, галогенC1-3алкила, галогенC1-3алкокси, гидроксиC1-3алкила, аминоC1-3алкила, O-циклопропила, NH2, NH(C1-3)алкила, N(C1-3алкил)2, С(О)-C1-3алкила, NHС(О)-C1-3алкила, С(О)NH2, С(О)NHC1-3алкила, С(О)N(C1-3алкил)2, NHSO2(C1-3алкил) и пирролидила.
5. Соединение по п. 4, где R1 представляет собой циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, бицикло[1.1.1]пентил, бицикло[2.2.1]гептил или бицикло[2.2.2]октил, необязательно замещенный галогеном, C1-6алкилом, гидрокси, оксо, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси, гидроксиC1-3алкилом, аминоC1-3алкилом, O-циклопропилом, NH2, NH(C1-3)алкилом, N(C1-3алкил)2, C(O)-C1-3алкилом, NHС(O)-C1-3алкилом, С(О)NH2, С(О)NHC1-3алкилом, С(О)N(C1-3алкил)2, NHSO2(C1-3алкил) или пирролидилом.
6. Соединение по п. 4, где R1 замещен одним или несколькими галогеном, C1-6алкилом, гидрокси, оксо, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси, гидроксиC1-3алкилом, аминоC1-3алкилом, О-циклопропилом, NH2, NH(C1-3)алкилом, N(C1-3алкил)2, С(О)-C1-3алкилом, NHС(О)-C1-3алкилом, С(О)NH2, С(О)NHC1-3алкилом, С(О)N(C1-3алкил)2, NHSO2(C1-3алкил) или пирролидилом.
7. Соединение по п. 4, где R1 замещен одним или несколькими метилом, этилом, трет-бутилом, -F, -ОН, -ОСН3, -OCHF2, -OCF3, ОСН2СН3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -О(циклопропил), -CH2OH, -СН2ОСН3, -С(СН3)2ОН, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 или -NHSO2CH3.
8. Соединение по п. 1, где R1 представляет собой 4-6-членный неароматический моноциклический гетероциклил, в котором гетероатомы выбраны из 1-2 атомов кислорода или 1 атома азота, необязательно N-замещенный группой C1-3алкилС(О),
или диоксаспиродеканил.
9. Соединение по п. 8, где гетероциклил представляет собой оксетанил, пирролидинил, тетрагидропиранил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил или пиперидил, необязательно N-замещенный группой C1-3алкилС(О).
10. Соединение по п. 9, где пиперидил является N-замещенным группой C1-3алкилС(О).
11. Соединение по п. 1, где R1 представляет собой незамещенный C1-3алкил-C3-6циклоалкил.
12. Соединение по п. 11, где R1 представляет собой (C1-3 алкил)циклопропил, (C1-3алкил)циклобутил, (C1-3алкил)циклопентил или (C1-3алкил)циклогексил.
13. Соединение по п. 11, где R1 представляет собой -(CH2)циклопропил, СН(СН3)циклопропил, -СН(CH3)циклобутил, -СН(CH3)циклогексил или -С(CH3)2циклопропил.
14. Соединение по п. 1, где R2 представляет собой незамещенный C1-8алкил или C1-8алкил, замещенный одним или несколькими атомами галогена, гидрокси, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси или гидроксиC1-3алкилом.
15. Соединение по п. 14, где R2 представляет собой метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, 3-метилбутил, 2,3-диметилбутил, 3,3-диметилбутил, 2,3,3-триметилбутил, трет-пентил, изопентил, 3-пентил, 3-метилпентил, 2-метилпентил или 2,4-диметилпентил, необязательно замещенный одним или несколькими атомами галогена, гидрокси, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси или гидроксиC1-3алкилом.
16. Соединение по п. 14, где R2 замещен одним или несколькими атомами галогена, гидрокси, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси или гидроксиC1-3алкилом.
17. Соединение по п. 14, где R2 замещен одним или несколькими -ОН, -ОСН3 или -СН3.
18. Соединение по п. 1, где R2 представляет собой незамещенный насыщенный 3-7-членный моноциклоалкил или 5-8-членный бициклоалкил; или
замещенный насыщенный 3-7-членный моноциклоалкил или 5-8-членный бициклоалкил, где заместители выбраны из галогена, C1-6алкила, гидрокси, оксо, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкила, галогенC1-3алкила, галогенC1-3алкокси, гидроксиC1-3алкила, аминоC1-3алкила, O-циклопропила, NH2, NH(C1-3)алкила, N(C1-3алкил)2, С(О)-C1-3алкила, NHС(О)-C1-3алкила, С(О)NH2, С(О)NHC1-3алкила, С(О)N(C1-3алкил)2, NHSO2(C1-3алкил) или пирролидила.
19. Соединение по п. 18, где R2 представляет собой циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, бицикло[1.1.1]пентил, бицикло[2.1.1]гексил или бицикло[2.2.1]гептил, необязательно замещенный галогеном, C1-6алкилом, гидрокси, оксо, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси, гидроксиC1-3алкилом, аминоC1-3алкилом, O-циклопропилом, NH2, NH(C1-3)алкилом, N(C1-3алкил)2, C(O)-C1-3алкилом, NHС(O)-C1-3алкилом, С(О)NH2, С(O)NHC1-3алкилом, С(O)N(C1-3алкил)2, NHSO2(C1-3алкил) и пирролидилом.
20. Соединение по п. 18, где R2 замещен одним или несколькими галогеном, C1-6алкилом, гидрокси, оксо, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси, гидроксиC1-3алкилом, аминоC1-3алкилом, O-циклопропилом, NH2, NH(C1-3)алкилом, N(C1-3алкил)2, С(О)-C1-3алкилом, NHС(O)-C1-3алкилом, С(О)NH2, С(O)NHC1-3алкилом, С(O)N(C1-3алкил)2, NHSO2(C1-3алкил) или пирролидилом.
21. Соединение по п. 18, где R2 замещен одним или несколькими метилом, этилом, изопропилом, -CF3, -СН2ОН, -ОН, -ОСН3, -ОСН2СН3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3 или -NHC(О)СН2СН3.
22. Соединение по п. 1, где R2 представляет собой незамещенный C1-3алкил-C3-6циклоалкил.
23. Соединение по п. 22, где R2 представляет собой незамещенный (C1-3алкил)циклопропил, (C1-3алкил)циклобутил, (C1-3 алкил)циклопентил или (C1-3алкил)циклогексил.
24. Соединение по п. 22, где R2 представляет собой -(СН2)циклопропил, -(СН2)циклобутил, -СН(СН3)циклопропил, -СН(СН3)циклобутил, -СН(СН2СН3)циклопропил, -С(СН3)2циклопропил или -СН2СН2циклобутил.
25. Соединение по п. 1, где R2 представляет собой 4-6-членный неароматический моноциклический гетероциклил, в котором гетероатомы выбраны из 1-2 атомов кислорода или 1 атома азота, необязательно N-замещенный группой C1-3алкилС(О), или
диоксаспиродеканил.
26. Соединение по п. 25, где R2 представляет собой оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, пиперидил, пиперидинонил, необязательно N-замещенный группой C1-3алкилС(О) или необязательно замещенный C1-3алкилом, оксо или гидрокси, или где R2 представляет собой незамещенный 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил.
27. Соединение по п. 25, где R2 является N-замещенным группой C1-3алкилС(О).
28. Соединение по п. 18, где R1 представляет собой замещенный насыщенный 3-7-членный моноциклоалкил или 5-8-членный бициклоалкил, где заместители выбраны из галогена, C1-6алкила, гидрокси, оксо, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкила, галогенC1-3алкила, галогенC1-3алкокси, гидроксиC1-3алкила, аминоC1-3алкила, О-циклопропила, NH2, NH(C1-3)алкила, N(C1-3алкил)2, С(О)-C1-3алкила, С(О)NH2, NHС(O)-C1-3алкила, С(О)NHC1-3алкила, С(О)N(C1-3алкил)2, NHSO2(C1-3алкил) или пирролидила.
29. Соединение по п. 1, обладающее свойствами ингибитора JNK1, которое ингибирует по меньшей мере около 50% активности JNK1 при концентрации 10 мкМ.
30. Соединение, где соединение представляет собой
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
или
.
31. Соединение, где соединение представляет собой
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
или
.
32. Соединение формулы (IB)
,
или его фармацевтически приемлемая соль, или дейтерированная форма,
где
R3 и R4 независимо представляют собой:
незамещенный C1-8 алкил;
C1-8алкил, замещенный одним или несколькими атомами галогена, гидрокси, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси или гидроксиC1-3алкилом;
незамещенный насыщенный 3-7-членный моноциклоалкил или 5-8-членный бициклоалкил;
замещенный насыщенный 3-7-членный моноциклоалкил или 5-8-членный бициклоалкил, где заместители выбраны из галогена, C1-6алкила, гидрокси, оксо, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкила, галогенC1-3алкила, галогенC1-3алкокси, гидроксиC1-3алкила, O-циклопропила, NH2, NH(C1-3)алкила, N(C1-3алкил)2, С(О)-C1-3алкила, NHС(О)-C1-3алкила, С(О)NHC1-3алкила, С(О)N(C1-3алкил)2 и NHSO2(C1-3алкил);
незамещенный C1-3алкил-C3-6циклоалкил;
4-6-членный неароматический моноциклический гетероциклил, в котором гетероатомы выбраны из 1-2 атомов кислорода или 1 атома азота; или
диоксаспиродеканил.
33. Соединение по п. 32, где R3 является разветвленным C1-8алкилом, необязательно замещенным одним или несколькими атомами галогена, гидрокси, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси или гидроксиC1-3алкилом.
34. Соединение по п. 33, где R3 является изопропилом, втор-бутилом, изобутилом, трет-бутилом, 2,3-диметилбутилом, изопентилом, 2-метилпентилом, неопентилом, трет-пентилом или 3-метилпентилом, необязательно замещенным одним или несколькими атомами галогена, гидрокси, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси или гидроксиC1-3алкилом.
35. Соединение по п. 32, где R3 представляет собой
незамещенный насыщенный 3-7-членный моноциклоалкил или 5-8-членный бициклоалкил, или
замещенный насыщенный 3-7-членный моноциклоалкил или 5-8-членный бициклоалкил, где заместители выбраны из галогена, C1-6алкила, гидрокси, оксо, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкила, галогенC1-3алкила, галогенC1-3алкокси, гидроксиC1-3алкила, O-циклопропила, NH2, NH(C1-3)алкила, N(C1-3алкил)2, С(О)-C1-3алкила, NHС(О)-C1-3алкила, С(О)NHC1-3алкила, С(О)N(C1-3алкил)2 и NHSO2(C1-3алкил).
36. Соединение по п. 34, где R3 представляет собой циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, бицикло[1.1.1]пентил, бицикло[2.2.1]гептил или бицикло[2.2.2]октил, необязательно замещенный галогеном, C1-6алкилом, гидрокси, оксо, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси, гидроксиC1-3алкилом, O-циклопропилом, NH2, NH(C1-3)алкилом, N(C1-3алкил)2, C(O)-C1-3алкилом, NHC(О)-C1-3алкилом, С(О)NHC1-3алкилом, С(О)N(C1-3алкил)2 или NHSO2(C1-3алкил).
37. Соединение по п. 34, где R3 представляет собой замещенный насыщенный 3-7-членный моноциклоалкил или 5-8-членный бициклоалкил, где заместители выбраны из галогена, C1-6 алкила, гидрокси, оксо, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкила, галогенC1-3алкила, галогенC1-3алкокси, гидроксиC1-3алкила, О-циклопропила, NH2, NH(C1-3)алкила, N(C1-3алкил)2, С(О)-C1-3алкила, NHС(O)-C1-3алкила, С(О)NHC1-3алкила, С(О)N(C1-3алкил)2 и NHSO2(C1-3алкил).
38. Соединение по п. 37, где R3 замещен одним или несколькими метилом, этилом, трет-бутилом, -CF3, -F, -ОН, -ОСН3, -OCHF2, -OCF3, -ОСН2СН3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -О-(циклопропил), -СН2ОН, -СН2ОСН3, -С(СН3)2ОН, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 или -NHSO2CH3.
39. Соединение по п. 32, где R3 представляет собой 4-6-членный неароматический моноциклический гетероциклил, в котором гетероатомы выбраны из 1-2 атомов кислорода или 1 атома азота, необязательно N-замещенный группой C1-3алкилС(О).
40. Соединение по п. 39, где гетероциклил представляет собой оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, пиперидил, пиперидинонил или 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил, необязательно N-замещенный группой C1-3алкилС(О).
41. Соединение по п. 32, где R4 представляет собой незамещенный C1-8алкил, или C1-8алкил, замещенный одним или несколькими атомами галогена, гидрокси, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси или гидроксиC1-3алкилом.
42. Соединение по п. 40, где R4 представляет собой метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, 3-метилбутил, 2,3-диметилбутил, 3,3-диметилбутил, 2,3,3-триметилбутил, трет-пентил, изопентил, 3-пентил, 3-метилпентил, 2-метилпентил или 2,4-диметилпентил, необязательно замещенный одним или несколькими атомами галогена, гидрокси, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси или гидроксиC1-3алкилом.
43. Соединение по п. 32, где R4 представляет собой
незамещенный насыщенный 3-7-членный моноциклоалкил или 5-8-членный бициклоалкил, или
замещенный насыщенный 3-7-членный моноциклоалкил или 5-8-членный бициклоалкил, где заместители выбраны из галогена, C1-6алкила, гидрокси, оксо, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкила, галогенC1-3алкила, галогенC1-3алкокси, гидроксиC1-3алкила, O-циклопропила, NH2, NH(C1-3)алкила, N(C1-3алкил)2, С(О)-C1-3алкила, NHС(О)-C1-3алкила, С(О)NHC1-3алкила, С(О)N(C1-3алкил)2 и NHSO2(C1-3алкил).
44. Соединение по п. 43, где R4 представляет собой циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, бицикло[1.1.1]пентил, бицикло[2.1.1]гексил или бицикло[2.2.1]гептил, необязательно замещенный галогеном, C1-6алкилом, гидрокси, оксо, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси, гидроксиC1-3алкилом, О-циклопропилом, NH2, NH(C1-3)алкилом, N(C1-3алкил)2, C(O)-C1-3алкилом, NHС(О)-C1-3алкилом, С(О)NHC1-3алкилом, С(О)N(C1-3алкил)2 или NHSO2(C1-3алкил).
45. Соединение по п. 43, где R4 замещен одним или несколькими галогеном, C1-6алкилом, гидрокси, оксо, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкилом, галогенC1-3алкилом, галогенC1-3алкокси, гидроксиC1-3алкилом, О-циклопропилом, NH2, NH(C1-3)алкилом, N(C1-3алкил)2, С(О)-C1-3алкилом, NHС(О)-C1-3алкилом, С(О)NHC1-3алкилом, С(О)N(C1-3алкил)2 или NHSO2(C1-3алкил).
46. Соединение по п. 43, где R4 замещен одним или несколькими метилом, этилом, изопропилом, -CF3, -СН2ОН, -ОН, -ОСН3, -ОСН2СН3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3 или -NHC(О)СН2СН3.
47. Соединение по п. 32, где R4 представляет собой 4-6-членный неароматический моноциклический гетероциклил, в котором гетероатомы выбраны из 1-2 атомов кислорода или 1 атома азота.
48. Соединение по п. 47, где R4 представляет собой оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, пиперидил или пиперидинонил.
49. Соединение по п. 43, где R3 представляет собой замещенный насыщенный 3-7-членный моноциклоалкил или 5-8-членный бициклоалкил, где заместители выбраны из галогена, C1-6алкила, гидрокси, оксо, C1-3алкокси, C1-3алкоксиC1-3алкила, галогенC1-3алкила, галогенC1-3алкокси, гидроксиC1-3алкила, О-циклопропила, NH2, NH(C1-3)алкила, N(C1-3алкил)2, C(О)-C1-3алкила, NHС(О)-C1-3алкила, С(О)NHC1-3алкила, С(О)N(C1-3алкил)2 и NHSO2(C1-3алкил).
50. Соединение по п.32, обладающее свойствами ингибитора JNK1, которое ингибирует по меньшей мере около 50% активности JNK1 при концентрации 10 мкМ.
51. Соединение, где соединение представляет собой
,
,
,
,
,
,
,
или
.
52. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью ингибитора JNK1 и JNK2, содержащая эффективное количество соединения по п. 1, 30, 31, 32 или 51, или его фармацевтически приемлемой соли, или дейтерированной формы и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или носитель.
53. Способ ингибирования одной или нескольких JNK1 или JNK2 киназ в клетке, экспрессирующей указанную киназу, включающий приведение в контакт указанной клетки с эффективным количеством соединения по п. 1, 30, 31, 32 или 51, или его фармацевтически приемлемой соли, или дейтерированной формы.
54. Способ лечения или профилактики фиброзных заболеваний печени или метаболического синдрома, которые приводят к развитию фиброзных заболеваний печени, опосредованных действием JNK1 и/или JNK2 киназы, где способ включает введение нуждающемуся индивиду эффективного количества соединения по п. 1, 30, 31, 32 или 51.
55. Способ по п. 54, где фиброзное заболевание печени представляет собой неалкогольный стеатогепатит, стеатоз, цирроз, первичный склерозирующий холангит, первичный билиарный цирроз, гепатит, гепатоцеллюлярную карциному или фиброз печени, связанный с хроническим или повторяющимся употреблением алкоголя, с инфекцией, с пересадкой печени или с поражением печени, вызванным приемом лекарственных средств.
56. Способ по п. 54, где фиброзное заболевание печени представляет собой неалкогольный стеатогепатит, стеатоз, гепатит или цирроз.
57. Соединение по п. 30, где соединение представляет собой
,
или его фармацевтически приемлемая соль, или дейтерированная форма.
58. Соединение по п. 30, где соединение представляет собой
,
или его фармацевтически приемлемая соль, или дейтерированная форма.
59. Соединение по п. 30, где соединение представляет собой
,
или его фармацевтически приемлемая соль, или дейтерированная форма.
60. Соединение по п. 30, где соединение представляет собой
,
или его фармацевтически приемлемая соль, или дейтерированная форма.
61. Соединение по п. 30, где соединение представляет собой
,
или его фармацевтически приемлемая соль, или дейтерированная форма.
62. Соединение по п. 30, где соединение представляет собой
,
или его фармацевтически приемлемая соль, или дейтерированная форма.
63. Соединение по п. 30, где соединение представляет собой
,
или его фармацевтически приемлемая соль, или дейтерированная форма.
64. Соединение по п. 30, где соединение представляет собой
,
или его фармацевтически приемлемая соль, или дейтерированная форма.
65. Соединение по п. 30, где соединение представляет собой
,
или его фармацевтически приемлемая соль, или дейтерированная форма.
66. Соединение по п. 30, где соединение представляет собой
,
или его фармацевтически приемлемая соль, или дейтерированная форма.
67. Способ лечения или профилактики интерстициального фиброза легких, опосредованного активностью JNK1 и JNK2, где способ включает введение нуждающемуся индивиду эффективного количества соединения по п. 1, 30, 31, 32, 51 или 57-66.
