Средство с антитромботической активностью



Средство с антитромботической активностью

Владельцы патента RU 2627435:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук" (ФИЦ КНЦ СО РАН, КНЦ СО РАН) (RU)
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Гематологический научный центр" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ ГНЦ Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности, а именно к антитромботическому средству, которое может быть эффективным для профилактики и лечения тромботических состояний. Антитромботическое средство на основе сульфатированного целлюлозного материала представляет собой сульфат целлюлозы с молекулярной массой 116000 дальтон, полученный из частично гидролизованной целлюлозы соломы пшеницы сульфатированием хлорсульфоновой кислотой в пиридине. Средство по изобретению характеризуется высокой антитромботической и низкой геморрагической активностью. 1 табл., 3 пр.

 

Сердечно-сосудистые заболевания - главная причина смертности во всем мире; среди них тромбоэмболические осложнения, связанные с формированием тромба в сердечно-сосудистой системе. К формированию тромба приводят - застой крови, изменения в свертывании крови, повреждения сосудистой стенки и изменения в концентрациях лейкоцитов или тромбоцитов. Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для создания эффективного средства для профилактики и лечения у людей венозных тромбозов разного происхождения (тромбозы глубоких вен, инфаркты, инсульты).

Система гемостаза организма млекопитающих выполняет защитную функцию. Последовательная активация на фосфолипидных поверхностях (тканевый фактор на клетках или активированные тромбоциты) факторов свертывания крови, сопровождающаяся включением механизмов положительной и отрицательной обратной связи, приводит к образованию тромбина, при этом антикоагулянтная система ингибирует избыточную генерацию тромбина, а система фибринолиза обеспечивает лизис сгустка. Нарушение баланса прокоагулянтных и антикоагулянтных механизмов приводит к тромбозам или кровотечениям. При тромбозах в сосудах появляются сгустки крови, содержащие в основном фибрин-тромбоциты (артериальный тромбоз) или фибрин-эритроциты (венозный тромбоз) [1].

В настоящее время для профилактики и лечения тромбозов, наряду с другими лекарственными средствами, используют и антикоагулянты, обладающие и антитромботической активностью. Однако все современные антикоагулянты, независимо от механизма действия (прямые ингибиторы активности тромбина или активированного фактора X и активаторы антитромбина - препараты гепаринов, по структуре это сульфатированные полисахариды), обладают рядом побочных эффектов, основным из которых является способность вызывать кровотечения. Поиск новых соединений в дополнение к препаратам гепарина (нефракционированный гепарин с одинаковой антитромбин-опосредованной ингибиторной активностью против тромбина и фактора Ха; низкомолекулярные гепарины с меньшей, чем у нефракционированного гепарина, антитромбин-опосредованной ингибиторной активностью в отношении тромбина; синтетический пентасахарид - фондапаринукс - с высокой антитромбин-опосредованной ингибиторной активностью в отношении фактора Ха, без активности против тромбина), но с меньшей геморрагической активностью, осуществляют и в ряду сульфатированных полисахаридов растительного, животного происхождения, например среди морских беспозвоночных или водорослей, а также среди тканей наземных растений [2, 3]. Однако структурная неоднородность полисахаридов из водорослей затрудняет получение соединений с программируемой постоянной высокой активностью. Поэтому некоторые авторы выбирают в качестве субстанции для последующего химического модифицирования полисахариды с линейной структурой, выделенные из наземных растений [4]. Например, целлюлоза - это полисахарид, макромолекула которого построена из повторяющихся звеньев - остатков β-D- глюкопиранозы с общей формулой (С6Н10О5)n, являющийся самым распространенным органическим соединением, которое выделяют из травянистых и древовидных растений.

Наиболее близким по сущности и назначению к предлагаемому изобретению является антитромботическое средство - сульфат целлюлозы с молекулярной массой 80000 Да [5], полученный из частично гидролизованной целлюлозы пихты сульфатированием комплексом пиридина и хлорсульфоновой кислоты, гидролиз целлюлозы осуществляли по методике, описанной в патенте РФ №2203995 [6].

Недостатком данного изобретения является невысокая антитромботическая активность сульфатированного полисахарида. Недостаток изобретения обусловлен видом растительного сырья, используемого для выделения целлюлозы, и недостаточной величиной молекулярной массы сульфата целлюлозы (80000 Да), что связано с жесткими условиями проведения частичного гидролиза исходной целлюлозы.

Известно, что антикоагулянтная активность полисахаридов зависит от ряда структурных параметров - степени сульфатирования, расположения функционально активных групп, плотности заряда, молекулярной массы сульфатов полисахаридов, с увеличением которой антикоагулянтная активность полисахаридов, полученных из растительного сырья, иногда увеличивается [7].

Задача изобретения - расширение ассортимента антитромботических средств на основе растительного полисахарида с высокой антитромботической активностью.

Технический результат - получено средство с высокой антитромботической активностью на основе химически модифцированной целлюлозы соломы пшеницы.

Технический результат достигается тем, что антитромботическое средство на основе сульфатированного целлюлозного материала представляет собой сульфат целлюлозы с молекулярной массой 116000 Да, полученный из частично гидролизованной целлюлозы соломы пшеницы путем сульфатирования хлорсульфоновой кислотой в пиридине.

В отличие от прототипа в предлагаемом изобретении при получении антитромботического средства частичный гидролиз целлюлозы соломы пшеницы осуществляют при температуре 100°C в течение 1 ч, в прототипе - более жесткие условия: температура 120°C, продолжительность гидролиза 2 ч.

Сульфатирование частично гидролизованной целлюлозы соломы пшеницы для получения антитромботического средства осуществляли по методике, описанной в патенте РФ №2426746 [8], следующим образом.

Целлюлозу, выделенную из соломы пшеницы, предварительно подвергали мягкому гидролитическому воздействию водного раствора состава: 6,4% перекиси водорода; 23,6% уксусной кислоты, 2%-ной серной кислоты, при гидромодуле, равном 10; температуре 100°C в течение 1 ч. Затем целлюлозу подвергали предварительному набуханию в среде пиридина не менее 12 ч. Подготовленную таким образом целлюлозу при 10-15°C добавляли к комплексу пиридина и хлорсульфоновой кислоты. Сульфатирование проводили при 80-85°C в течение 2-2,5 ч. Натриевую соль сульфата целлюлозы соломы пшеницы выделяли из реакционной массы путем декантации пиридина, нейтрализацией промытого ледяной водой вязкого остатка 6%-ным водным раствором гидроксида натрия до рН 8-9, декантацией от образовавшейся гелеобразной натриевой соли сульфата целлюлозы водного раствора, растворением соли в воде и высаживанием 3-кратным объемом этанола. В результате получали водорастворимую натриевую соль сульфата целлюлозы с содержанием основного вещества 98% (масс.), содержанием серы (ωs) 14,1% (масс.); степенью замещения (CЗs) 1,3 и молекулярной массой ММ 116000 Да. Установлено методом ЯМР 13С, что все гидроксильные группы целлюлозы при атоме углерода С6 замещены на сульфатные группы, а при атоме С2 - частично замещены на сульфатные группы.

Степень замещения в образцах находили по уравнению: CЗs=162⋅ωs/3200-ωs⋅103, где ωs - содержание серы, % [9]. Содержание серы определяли на элементном анализаторе Flash ЕА-1112 (Thermo Quest Italia).

ЯМР 13С спектры исходной и сульфатированной целлюлозы соломы пшеницы сняты при температуре 25°С с использованием спектрометра Bruker Avance III 600 МГц в D2O с привязкой к дейтериевому резонансу растворителя.

Молекулярно-массовое распределение (ММР) исследовали на хроматографе Agilent 1200с колонкой PL aguagel - ОН 40, 300⋅7,5; детектор рефтактометрический. В качестве растворителя и элюента использовали водный раствор 0,1 М LiNO3.

Специфические антикоагулянтные активности полученной субстанции сульфата целлюлозы (СЦ) оценивали по времени свертывания плазмы крови человека в коагулологических тестах активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ) и с использованием теста РеаКлот-Гепарин (НПО «Ренам», Москва). Для расчета антитромбиновой (aIIa) и антифактора Ха (аХа) активностей использовали калибровочные кривые Международного стандарта нефракционированного гепарина (НФГ).

Высокая антитромбиновая активность СЦ позволила провести оценку антитромботической активности. Исследование проводили с использованием лабораторных животных (крыс), которых получали из питомника РАМН «Столбовая2». Все опыты осуществляли с соблюдением «Правил для проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приказ Минздрава СССР от 12.08.1977 №755 «О мерах по дальнейшему совершенствованию организационных форм работы с использованием экспериментальных животных) и «Правил лабораторной практики» (приложение к Приказу Минздравсоцразвития России от 23 августа 2010 г. N 708н). В качестве препарата сравнения использовали Международный стандарт НФГ. Для оценки антитромботической активности использовали модель венозного тромбоза у крыс по S.Wessler [10]. С увеличением дозы СЦ и НФГ увеличивалась антитромботическая активность. Для достижения 50% ингибирование роста тромба СЦ требовалось в 2 раза больше, чем НФГ.

Изобретение поясняется следующими примерами.

Пример 1. Определение антитромбиновой активности субстанции СЦ. К смеси плазмы и АЧТВ-реагента (0,15 мл) (НПО "Ренам") добавляли раствор СЦ или НФГ (Международный стандарт) в конечных концентрациях 0,0005-0,0025 мкг/мл. Через 3 мин инкубирования при 37°C добавляли 0,02 мл 0,025 М раствора CaCl2 и на коагулометре «Минилаб 701-М» фиксировали время (сек) появления фибринового сгустка. Показано влияние разных концентраций СЦ на время свертывания плазмы человека в тесте АЧТВ. Сравнивая показания кривых СЦ концентрация-время свертывания плазмы в 15 независимых определениях с калибровочными кривыми НФГ, определяли антитромбиновую (aIIa) активность СЦ [10]; aIIa активность СЦ составила 93,8±1,0 ЕД/мг.

Пример 2. Определение антифактора Ха активности субстанции СЦ. К смеси плазмы и раствора фактора Ха (0,16 мл; тест РеаКлот-Гепарин, НПО "Ренам") добавляли СЦ или НФГ (Международный стандарт НФГ) в конечных концентрациях 0,0002-0,001 мкг/мл. Через 2 мин инкубирования при 37°C добавляли 0,02 мл 0,035 М раствора CaCl2 и на коагулометре «Минилаб 701-М» фиксировали время (сек) появления фибринового сгустка. Показано влияние СЦ на время свертывания плазмы человека в тесте РеаКлот-Гепарин. Сравнивая показания кривых СЦ концентрация-время свертывания плазмы в 15 независимых определениях с калибровочными кривыми НФГ, определяли антифактор Ха (аХа) активности СЦ [10]; аХа активность СЦ составила 9,9±0,6 ЕД/мг.

Пример 3. Антитромботическую активность СЦ оценивали, моделируя венозный тромбоз по Wessler S. и др. [11] у 55 крыс самцов Wistar массой 180-350 г. Для наркоза крысам внутрибрюшинно вводили нембутал в дозе 60 мг/кг. Растворы СЦ в дозах 1, 3 и 5 мг/кг вводили в левую яремную вену (препарат сравнения НФГ вводили в дозах 1 и 1,5 мг/кг), а через 15 мин - активированную стеклом сыворотку человека. Затем перевязывали нитью участок противоположной вены, не использованной для введения антикоагулянтов, через 15 мин вырезали перевязанный участок вены и извлекали содержимое в небольшую емкость. Эффективность антитромботической активности оценивали: 1) в баллах от 0 (тромба нет) до 4 (один большой тромб) по форме тромба, извлеченного из перевязанного участка вены; 2) по концентрации белка в гомогенате тромба, измеренной по Лоури; содержание белка в испытуемой пробе устанавливали по калибровочной кривой, построенной с раствором фибриногена человека (Sigma Aldrich). С увеличением дозы СЦ снижались: форма тромбов с 2,00±0,49 до 0,10±0,10 баллов и концентрация белка в гомогенатах тромбов с 1,19±0,17 до 0,02±0,02 мг/мл (табл. 1). Отмечали достоверные различия формы тромбов между показаниями при введении физиологического раствора и СЦ, начиная с дозы 3 мг/кг.

Преимуществом заявляемого средства в сравнении с прототипом является большая на 10 ЕД/мг антитромбиновая активность и меньшая в 2 раза аХа активность, что может привести к меньшей геморрагической активности при внутривенном введении сульфата целлюлозы крысам.

Список литературы

1. Nakamura М., Yamada N., Ito М. Current management of venous thromboembolism in Japan: Current epidemiology and advances in anticoagulant therapy. // J Cardiol., 2015. - 66(6). - 451-459.

2. P.A. Perspective on the use of sulfated polysaccharides from marine organisms as a source of new antithrombotic drugs. // Mar Drugs. - 2015. - 13(5). - 2770-2784.

3. K., Kovac Besivic E., Njksic H. et al. Anticoagulant activity of some Artemisia dracunculus leaf extracts // Bosn J Basic Med Sci. - 2015. - 15(2). - 9-14.

4. Ehmann H.M., Mohan Т., Koshanskaya M. et al. Design of anticoagulant surfaces based on cellulose nanocrystals // Chem. Commun. (Camb.). 2014.- 50 (86). - P. 13070-13072.

5. Патент РФ №2571555. Антитромботическое средство из целлюлозы пихты сибирской // Кузнецова С.А., Дрозд Н.Н., Савчик Е.Ю., Мифтахова Н.Т., Васильева Н.Ю., Макаров В.А., Кузнецов Б.Н. Опубл. 20.12.2015.

6. Патент РФ №2203995. Способ получения микрокристаллической целлюлозы // Данилов В.Г., Яценкова О.В., Кузнецова С.А., Кузнецов Б.Н. Опубл. 10.05.2003.

7. Arata P., Quintana I., Canelon D. et al. Chemical structure and anticoagulant activity of highly pyruvylated Chemical structure and anticoagulant activity of highly pyruvylated sulfated galactans from tropical green seaweeds of the order Bryopsidales // Carbohydr Polym. 2015. - 122. - P. 376-386.

8. Патент РФ №2426746. Способ получения сульфатированной целлюлозы // Васильева Н.Ю., Кузнецова С.А., Кузнецов Б.Н., Скворцова Г.П., Данилов В.Г. Опубл. 20.08.2011.

9. Торлопов М.А. Получение порошковых материалов деструкцией целлюлозы кислотами Льюиса и их модификация. Сульфатирование порошковых материалов, полученных деструкцией целлюлозы кислотами Льюиса // М.А. Торлопов, С.В. Фролова // Химия растительного сырья. - 2008. - №3. - С 63-67.

10. Макаров В.А., Спасов А.А., Плотников М.Б., Чернышева Г.А., Блозерская Г.М., Васильева Т.М., Дрозд Н.Н. и др. // Методические указания по изучению фармакологических веществ, влияющих на гемостаз. С. 453-479 // Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая // Под ред. А.Н. Миронова.- М.: Гриф и К. 2012. - 944 с.

11. Wessler S., Reimer S.M., Sheps М.С. Biologic assay of a thrombosis-inducing activity in human serum // J. Appl Physiol 1959. - V.14. - №1. - P. 943-946.

Антитромботическое средство на основе сульфатированного целлюлозного материала, отличающееся тем, что оно представляет собой сульфат целлюлозы с молекулярной массой 116000 Да, полученный из частично гидролизованной целлюлозы соломы пшеницы путем сульфатирования хлорсульфоновой кислоты в пиридине.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к новым производным бензимидазола общей формулы I, где (Ia) R = н-пропил, (Iб) R = аллил, обладающим антиагрегантными и антиоксидантными свойствами. Технический результат - получены новые производные бензимидазола, полезные при лечении инфаркта миокарда и инсульта.

Изобретение относится к области молекулярной биологии, медицины и ветеринарии и может быть использовано для лизиса (растворения) образовавшихся в кровеносных сосудах сгустков крови (тромбов), нарушающих нормальную циркуляцию крови и угрожающих жизни, предотвращения (профилактики) образования тромбов.

Изобретение относится к области медицины и фармакологии, а именно к антикоагулянту. Антикоагулянт, содержащий гепарин с активностью 80-120 МЕ/г, аргинин, лейцин, взятые при определенном соотношении.

Изобретение относится к ранее не известному гидрохлориду 6-амино-9-[(3R)-1-(2-бутиноил)-3-пирролидинил]-7-(4-феноксифенил)-7,9-дигидро-8Н-пурин-8-она и его кристаллической форме.

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии и коагулологии, и касается ослабления нарушений свертывания крови. Для этого вводят фармацевтическую композицию, включающую эффективное количество альфа-токотриеноловой изоформы природного витамина Е в количестве, достаточном для снижения агрегации тромбоцитов, опосредуемой арахидоновой кислотой.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения больных с тромбозами венозного русла нижних конечностей. Для этого дополнительно к стандартной терапии острого тромбоза вен нижних конечностей (антикоагулянты, антиагреганты, противовоспалительные препараты) перорально назначают препарат Тромбовазим.

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и касается лечения или профилактики тромбообразования или эмболии. Для этого вводят эффективное количество соединения , или его фармацевтически приемлемой соли, где R представляет собой водород или ацетил.

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии. Предложено применение рекомбинантного штамма бактерий Bacillus subtilis ТВ-06 ВКПМ В-11978 в качестве продуцента глутамилэндопептидазы - вещества с тромболитическими и антикоагулянтными свойствами.

Изобретение относится к области медицины и фармакологии и касается антикоагулянта, содержащего, мас.%: аргинин 20,0-24,0, лейцин 28,0-30,0, гепарин с активностью 80-120 МЕ/г – остальное.

Изобретение относится к соединениям (7aS,2′S)-2-оксоклопидогрела и его фармацевтически приемлемым солям, которые могут быть представлены следующими формулами: для лечения или профилактики тромбоэмболии и/или сердечно-сосудистых заболеваний.

Изобретение относится к косметической промышленности и представляет собой композицию для личной гигиены, включающую косметически приемлемую основу, первое поверхностно-активное вещество, содержащее лаурилсульфат натрия и второе поверхностно-активное вещество, которое имеет следующую структуру: ,где каждый а имеет значение от 1 до 110, b имеет значение от 16 до 70 и, по крайней мере, одна R группа представляет собой SO3, а другая R группа представляет собой SO3 или водород.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для лечения очаговой склеродермии. Для этого на очаги поражения воздействуют низкоэнергетическим лазерным излучением инфракрасного диапазона частотой следования импульсов - 1500 Гц, длительностью импульса 110-160 нс, импульсной мощностью 4-6 Вт/имп, по 1-3 минут на поле.

Изобретение относится к медицине, в частности к способу получения гранул, полученным распылительной сушкой гранулам, ароматизированному продукту и отдушенному продукту.
Изобретение относится к композиции, содержащей (i) комплекс (четырехосновный цинк)-(аминокислота или триалкилглицин)-галогенид, который представляет собой комплекс четырехосновный цинк-лизин-хлорид, комплекс четырехосновный цинк-аргинин-хлорид, комплекс четырехосновный цинк-глицин-хлорид или комплекс четырехосновный цинк-триметилглицин-хлорид и (ii) цистеин в свободной или в орально или косметически приемлемой солевой форме, для уничтожения бактерий, снижения потоотделения, уменьшения запаха тела, лечения или уменьшения частоты возникновения акне, обеспечения белого осадка, уменьшения или ингибирования кислотной эрозии эмали, чистки зубов, уменьшения бактериально-продуцируемых биопленки и зубного налета, уменьшения воспаления десен, ингибирования зубного кариеса и образования кариозных полостей, и уменьшения гиперчувствительности дентина, причем комплекс (четырехосновный цинк)-(аминокислота или триалкилглицин)-галогенид получают путем смешения предшественников в водном растворе, где предшественники представляют собой четырехосновный хлорид цинка, источник аминокислоты и источник хлорида, где часть источника хлорида может быть источником аминокислоты или хлористоводородной кислотой.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для лечения местно-распространенного рака молочной железы с опухолевыми изъязвлениями кожи.
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой препарат для нанесения на поверхность кожи для лечения костных наростов, головных болей и болей в сердце, состоящий из скипидара в количестве 5 мл, формалина 40% в количестве 50 мл, отличающийся тем, что дополнительно содержит 96%-ный раствор спирта этилового в количестве 45 мл.

Изобретение относится к области нанотехнологии и пищевой промышленности. Способ получения нанокапсул сухого экстракта топинамбура характеризуется тем, что в качестве оболочки нанокапсул используется конжаковая камедь, в качестве ядра - сухой экстракт топинамбура, причем нанокапсулы получают путем перемешивания смеси конжаковой камеди в бутаноле с 0,01 г препарата Е472с в качестве поверхностно-активного вещества на магнитной мешалке, последующего добавления сухого экстракта топинамбура в смесь, осаждения 10 мл бутилхлоридом, затем полученную суспензию нанокапсул отфильтровывают, промывают бутилхлоридом и сушат, при этом соотношение ядро : оболочка составляет 1:3, 1:1 или 1:5 или 5:1.

Изобретение относится к пищевой и фармацевтической промышленности, в частности к диетической композиции для нормализации микрофлоры кишечника. Предлагается диетическая композиция для нормализации микрофлоры кишечника на основе смеси пребиотиков, включающих в качестве мономерных веществ кислоту лимонную, в качестве димерных веществ дисахариды, в качестве полимерных веществ инулин, камедь природного происхождения; пектин, экстракты растений и ароматизатор, при этом композиция содержит в качестве экстрактов растений экстракт листьев стевии, водные экстракты побегов каллизии душистой и коры ивы белой, дополнительно композиция содержит глюкозамин, а в качестве дисахарида изомальт, при определенном соотношении компонентов.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству для лечения заболеваний кожи и слизистых оболочек, для местного применения, обладающему противовоспалительным, антибактериальным, противовирусным, ранозаживляющим, противогрибковым действием.
Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии и гигиене, и может быть использовано для приготовления фрикционной зубной пасты. Для этого используют порошкообразное абразивное вещество и раствор с отбеливающими и моющими веществами.
Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для лечения кандидозного глоссита. Для этого на область поражения апплицируют лекарственное средство, содержащее пектин с нуль-валентным серебром, метилцеллюлозу и воду для инъекций.

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности, а именно к антитромботическому средству, которое может быть эффективным для профилактики и лечения тромботических состояний. Антитромботическое средство на основе сульфатированного целлюлозного материала представляет собой сульфат целлюлозы с молекулярной массой 116000 дальтон, полученный из частично гидролизованной целлюлозы соломы пшеницы сульфатированием хлорсульфоновой кислотой в пиридине. Средство по изобретению характеризуется высокой антитромботической и низкой геморрагической активностью. 1 табл., 3 пр.

Наверх