Способ диагностики периода инфекционного заболевания, вызванного вирусом varicella zoster у детей

Изобретение относится к медицине, а именно к вирусологии, и может быть использовано для диагностики периода инфекционного процесса, вызванного вирусом ветряной оспы. Сущность способа: исследуемую сыворотку одновременно вносят в лунки двух стрипов, иммобилизованных антигеном вируса varicella zoster, инкубируют в течение 50-55 минут, затем один стрип обрабатывают однократно водным раствором 6 М мочевины в течение 15 минут, после чего оба стрипа промывают и вносят в них конъюгат специфических моноклональньгх антител к IgG антителам человека, инкубируют в течение 30 минут, после промывания окрашивают водным раствором хромогена 10-15 минут при комнатной температуре, реакцию останавливают раствором 0,5 М серной кислоты, определяют оптическую плотность с помощью спектрофотометра, проводят расчет индекса авидности по формуле:

и при уровне ИА менее 45% и до 50% диагностируют острый период, при более 50% ИА и менее 65% - раннюю паст-инфекцию, при ИА 65% и более 70% - поздний период заболевания. Способ является эффективным и информативным для диагностики периода инфекционного заболевания, вызванного вирусом varicella zoster у детей, с помощью которого возможно устанавливать острую инфекцию, активацию хронической персистирующей инфекции, а также высокий протективный иммунитет, что оказывается решающим фактором при установлении этиологии заболевания и выборе адекватной терапевтической тактики. 3 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к вирусологии, и может быть использовано для диагностики периода инфекционного процесса, вызванного вирусом ветряной оспы.

Ветряная оспа - это инфекционное заболевание, вызываемое вирусом varicella zoster, относящимся к семейству герпесвирусов альфа-типа и передающимся воздушно-капельным путем. Заболевание проявляется, в основном, папулезно-везикулярной сыпью на коже, повышением температуры, интоксикацией. Являясь нейротропным, вирус ветряной оспы может также поражать нервную систему и вызывать развитие тяжелых патологий. Значимость ветряной оспы важна в связи с возможным развитием хронической рецидивирующей формы инфекции - опоясывающего лишая, частота которого может достигать 60-70 человек на 100000 переболевших ветряной оспой. Особенно риску развития тяжелых форм и осложненного течения ветряной оспы подвергаются лица с Т-клеточным иммунодефицитным ссостоянием, взрослые, а также дети первого года жизни и дети старшего школьного возраста. Современный эпидемический процесс ветряной оспы характеризуется тенденцией «повзросления» инфекции. Увеличивается вероятность заболевания беременных и, следовательно, риск внутриутробного заражения новорожденных. Иммунологические предпосылки описанных возрастных особенностей клиники ветряной оспы изучены недостаточно. Эти современные наблюдения диктуют необходимость расширения лабораторных методов для углубленной диагностики периода инфекционных заболеваний, вызванных вирусом ветряной оспы, с целью прогнозирования тяжести и исходов заболевания, а также установления периода инфекционного процесса для проведения своевременной адресной терапии.

В настоящее время известен способ диагностики вируса ветряной оспы, основанный на выявлении ДНК VZV в клинических образцах методом ПЦР с использованием синтетических олигонуклеотидов-праймеров, комплементарных участкам генов, кодирующих белки VZV (Изобретение RU №2385872 Синтетические олигонуклеотиды - праймеры, используемые для выявления ДНК вируса Varicella-Zoster Herpes человека). Данное изобретение позволяет обнаружить непосредственно сам вирус в биологическом материале больного, но не дает представления об ответной иммунной реакции организма и сроках инфицирования, а также возможности прогноза тяжести патологического процесса.

Известен «Метод определения авидности иммуноглобулина G к вирусу varicella-zoster в сыворотке и цереброспинальной жидкости», Kneitz R.-H. и др., 2004. Метод направлен на сравнение авидности IgG антител к вирусу варицелла-зостер вирус (VZV) в парных сыворотках крови и образцах цереброспинальной жидкости (ЦСЖ). Данная методика позволяет параллельно сопоставлять авидность иммуноглобулина G в сыворотке крови и ЦСЖ, служит для диагностики острой инфекции или ее исключения и не зависит от концентрации специфических IgG антител. Метод предложен в качестве диагностического средства для выявления интратекального синтеза антител при вирусном энцефалите, рассеянном склерозе и используется для оценки сопутствующего заболевания ветряной оспой при прогрессировании ВИЧ-инфекции.

Однако данный метод требует обязательного параллельного исследования сыворотки крови и ликвора, что не всегда целесообразно применять в рутинной практике для диагностики заболеваний, вызванных вирусом varicella zoster. Кроме того, к недостаткам этого метода можно отнести необходимость разведения исследуемого материала (сыворотки) в пропорции 1:231, что практически невозможно сделать в рутинной лабораторной практике ввиду необходимости использования дополнительных расходных материалов и выполнения манипуляций, увеличивающих временные затраты на проведение этого исследования, приводящих к удорожанию анализа. Также требуется дополнительное разведение коньюгата, увеличивающее время постановки реакции. Отметим, что при оценке полученных результатов описанного метода используется только одно пограничное значение ИА (<37%), указывающее на острую инфекцию, однако при обследовании детского контингента необходимо учитывать особенности иммунной системы и предполагать различные варианты иммунного ответа организма в соответствии с индивидуальными и возрастными особенностями ребенка.

Наиболее близким способом для диагностики атипичных форм VZV-инфекции, возникшей вследствие реактивации вируса ветряной оспы и опоясывающего лишая является метод, основанный на анализе спонтанной продукции специфических антител мононуклеарами периферической крови (МПК), возникающей вследствие эндогенной реактивации вируса (Казанова А.С. и др. Новый метод диагностики инфекции, возникающей вследствие реактивации вируса ветряной оспы и опоясывающего лишая // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2012. - №4. - С. 57-60). Способ основан на анализе спонтанной продукции анти-VZV-IgG в культуре мононуклеаров периферической крови (МПК). Для этого первоначально мононуклеары выделяют из венозной гепаринизированой крови, затем культивировали в стерильных пробирках в питательной среде 48 часов. После определения жизнеспособности клеток проводили ингибирование синтеза белка в опытном образце МПК с помощью инкубации клеток в питательной среде с 30 минут с последующей промывкой и дополнительным тестом на жизнеспособность, а далее вновь культивировали в течение 48 часов одновременно с контрольным образцом, который продолжал изучаться без обработки циклогексимидом. Описанная методика достаточно трудоемка в связи с затратами, связанными с манипуляциями для выделения клеток крови и длительным процессом культивирования (4 суток), что не согласуется с понятием экспрессности диагностического подхода. Кроме того, учитывая постоянные проверки на жизнеспособность выделенных и культивируемых МПК возможны ошибки, связанные с точностью и информативностью получаемых результатов при конечном учете. Данную методику не возможно применять для рутинной диагностики в лабораториях, не предназначенных для ведения клеточных культур, в связи с отсутствием специальных условий и предназначенного для этого оборудования. Также отметим, что метод действительно позволяет диагностировать VZV-инфекцию, однако судить о тяжести процесса представляется затруднительным ввиду получения результатов, показывающих только интенсивность синтеза антител в ПМК, что может зависеть как от индивидуальных особенностей гуморального иммунного ответа, так и от вирусогенеза в организме обследуемого пациента. Таким образом, данный способ не обеспечивает точности и экспрессности диагностики.

С целью устранения вышеуказанных недостатков авторы предлагают принципиально новый способ диагностики периода инфекционного заболевания, вызванного вирусом varicella zoster детей, технический результат, достигаемый в данном способе, заключается в повышении точности и экспрессности диагностики благодаря выявлению авидности IgG антител с расчетом цифровых показателей, характеризующих периоды заболеваний, вызванных вирусом varicella zoster.

Это достигается тем, что в иммуноферментном тесте исследуемую сыворотку одновременно вносят в лунки двух стрипов, иммобилизованных антигеном вируса varicella zoster, инкубируют в течение 50-55 минут, затем один стрип обрабатывают однократно водным раствором 6М мочевины в течение 15 минут, после чего оба стрипа промывают и вносят в них конъюгат специфических моноклональных антител к IgG антителам человека, инкубируют в течение 30 минут, после промывания окрашивают водным раствором хромогена 10-15 минут при комнатной температуре, реакцию останавливают раствором 0,5М серной кислоты, определяют оптическую плотность с помощью спектрофотометра и проводят расчет индекса авидности по формуле:

и при уровне ИА менее 45% и до 50% диагностируют острый период, при более 50% ИА и менее 65% - раннюю паст-инфекцию, при ИА 65% и более 70% - поздний период заболевания.

Авторами было обнаружено, что увеличение времени инкубации до 50-55 минут, в отличие от 30 минут в стандартном иммуно-ферментном тесте, на стадии образования иммунных комплексов антител со специфическими белками VZV, адсорбированными на поверхности полистероловой лунки, привело к образованию более прочной связи и позволило воздействовать на иммунный комплекс детергентом в большей концентрации. Авторы впервые использовали 6М раствор мочевины в качестве детергента, обнаружив, что именно при данной концентрации и однократной экспозиции 15 минут происходит диссоциация связи антиген-антитело в лунке. Использование менее концентрированного раствора не позволяло полностью расщеплять слабоавидные иммунные комплексы, однако увеличение концентрации детергента приводило к полному разрыву комплексов между антителами и белками, и суммарные антитела удалялись при последующих промывках. Таким образом, меньшая концентрация мочевины не приводила к полному расщеплению низкоавидных связей, использование большей концентрации оказалось неэффекивным. Авторы, впервые используя водный раствор 6 М мочевины и проведя однократную промывку, обнаружили, что значительно уменьшается вероятность отслоения адсорбированных белков с поверхности лунок, а также усиливается действие детергента на иммунные комплексы.

Авторы, существенно сократив продолжительность проведения теста, сократив необходимое время контакта сыворотки с адсорбированными на поверхности антигенами VZV, сокращая стадии обработки детергентом и время экспозиции связавшихся иммунных комплексов с раствором коньюгата в течение 30 минут, неожиданно получили оптимальный результат, повысив экспрессность и точность выполнения анализа.

Время выдержки с раствором хромогена в течение 10-15 при комнатной температуре получено экспериментальным путем и для данной модификации иммуно-ферментного метода является достаточным и наиболее оптимальным для получения конечного результата. В формуле расчета индекса авидности авторами использованы показатели оптической плотности образцов после обработки исследуемых проб сыворотки 6М раствором мочевины. Также предложена интерпретация расчетного значения индекса авидности с оценкой периода инфекционного заболевания, включающего как острый период, паст-инфекцию, так и высокий специфический протективный иммунитет, и активацию хронической персистирующей инфекции при возрастании ИА в динамике через 2 недели.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом

Для обеспечения проведения исследований по установлению авидности IgG антител к VZV может применяться стандартное оборудование для вирусологических лабораторий и лабораторий, проводящих иммуноферментный анализ (ИФА).

Авидность антител класса IgG к VZV определялась с использованием наборов реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса IgG, основанного на твердофазном непрямом иммуноферментном анализе с использованием очищенного рекомбинантного антигена varicella zoster.

Принцип определения авидности антител заключался в обнаружении антител, способных разрушать связь с антигеном VZV при обработке образовавшегося комплекса детергентом - 6М раствором мочевины. При сравнении показателя оптической плотности раствора, подвергшегося воздействию детергента, и с таковым без воздействия детергента рассчитывалось значение снижения экстинции как показателя степени зрелости (авидности) антител.

ИФА проводился по следующей схеме:

1. Связывание антител. Первые лунки двух стрипов оставлялись незаполненными и рассматривались как контроль субстрата, во все остальные вносилось по 90 мкл раствора для разведения сыворотки (РРС) и по 10 мкл исследуемой сыворотки, предварительно разведенной раствором для предварительного разведения (РПРС) с целью получения конечного разведения 1:100. Одни и те же исследуемые сыворотки вносились одновременно в следующие за контрольными лунки параллельно в два ряда. Планшет инкубировался при температуре 37°С в течение 50-55 мин во влажной камере. После инкубации раствор удалялся и один стрип промывался однократно 6 М раствором мочевины с экспозицией 15 минут, затем 3 раза раствором фосфатно-солевого буфера с твином (ФСБ-Т), а второй стрип обрабатывался ФСБ-Т, затем также промывался 3 раза, как и опытный стрип.

2. Внесение конъюгата. Во все лунки, кроме лунки для контроля субстрата, добавлялось по 100 мкл рабочего раствора конъюгата - специфических моноклональных антител к IgG человека с пероксидазой хрена. Планшет инкубировался при температуре 37°С в течение 30 минут. После инкубации раствор из лунок удалялся и промывался 5-кратно раствором ФСБ-Т.

3. Проведение реакции взаимодействия с субстратом. Во все лунки вносилось по 100 мкл 0,05% водного раствора ТМБ. Планшет выдерживался в темноте при комнатной температуре в течение 15 минут. Спустя указанное время реакция останавливалась внесением 100 мкл 0,5М раствора серной кислоты.

4. Учет результатов ИФА и расчет индекса авидности (ИА) антител. Измерение оптической плотности (ОП) проводился с помощью спектрофотометра в режиме: основной фильтр - 450 нм, референс-фильтр - 620 нм, не позднее, чем через 10 минут после остановки реакции.

Расчет ИА антител проводился по формуле:

и при уровне ИА менее 45% и до 50% диагностируют острый период, при более 50% ИА и менее 65% - раннюю паст-инфекцию, при ИА 65% и более 70% - поздний период заболевания, характеризующийся как высоким специфическим протективным иммунитетом, так и возможной активацией хронической персистирующей инфекции при возрастании ИА в динамике через 2 недели.

Способ диагностики периода инфекционного заболевания, вызванного вирусом varicella zoster у детей может быть подтвержден следующими примерами:

Пример 1

Для выявления периода инфицирования определялся индекс авидности антител класса IgG к вирусу VZV у 15 детей в возрасте от 1 года до 14 лет, в момент от 1 до 5 дней после инфицирования вирусом ветряной оспы и проходящих лечение в клинике ФГБУ НИИДИ ФМБА России. В сыворотках крови детей выявлялись антитела IgG к VZV стандартным методом иммуно-ферментного анализа (ИФА) с использованием коммерческих тест-систем. В Таблице 1 представлено определение периода инфекционного процесса, вызванного VZV у детей.

* Цифровой уровень антител указан в единицах оптической плотности

У 14 детей (86,7%) в сыворотке были обнаружены специфические IgG антитела с низкой авидностью (показатели авидности не превышали показателей 50, которые констатировали раннюю фазу заболевания ветряной оспой. У одного больного (№3 - пятый день заболевания) определялся поздний период инфекции, и пациент (№8 - четвертый день заболевания) была обнаружена ранняя паст-инфекция.

Пример 2

В клинике НИИДИ на отделение нейроинфекций и органической патологии нервной системы был госпитализирован больной Ш.С., 12 лет, с диагнозом ветряночный энцефалит на 10 сутки после высыпаний. Диагноз был подтвержден клинико-ликворологическими данными. При обследовании биологического материала (кровь, ликвор, мазок из ротоглотки) получены следующие результаты, представленные в Таблице 2.

ГЩР ликвора на ДНК VZV - положительно; ПЦР крови на ДНК ЦМВ - отрицательно; ПЦР крови на ДНК ВГЧ 6 - отрицательно; ПЦР мочи на ДНК ЦМВ - отрицательно; ИЦХ исследования мазка ротоглотки на ЦМВ - отрицательно.

* Антитела определялись методом ИФА. Цифровой уровень антител указан в единицах оптической плотности

Лабораторный диагноз: ветряночный энцефалит, ранняя паст-инфекция.

Пример 3

В клинике НИИДИ на отделении нейроинфекций находилась больная, Ф.Ю., 5 лет, с диагнозом вирусная инфекция неясной этиологии, подозрение на герпесвирусную инфекцию. При вирусологическом обследовании сыворотки крови больного на группу герпесвирусов методом ИФА были получены следующие результаты, представленные в таблице 3.

* Цифровой уровень антител указан в единицах оптической плотности

Лабораторный диагноз: Герпетическая инфекция, этиологически связанная с ВПГ1, отсутствие заболевания, вызванного вирусом VZV

Таким образом, авторами предложен эффективный и информативный способ диагностики периода инфекционного заболевания, вызванного вирусом varicella zoster у детей, с помощью которого возможно устанавливать острую инфекцию, активацию хронической персистирующей инфекции, а также высокий протективный иммунитет, что оказывается решающим фактором при установлении этиологии заболевания и выборе адекватной терапевтической тактики.

Способ диагностики периода инфекционного заболевания, вызванного вирусом varicella zoster у детей, путем определения антител в иммуноферментном тесте, отличающийся тем, что исследуемую сыворотку одновременно вносят в лунки двух стрипов, иммобилизованных антигеном вируса varicella zoster, инкубируют в течение 50-55 минут, затем один стрип обрабатывают однократно водным раствором 6 М мочевины в течение 15 минут, после чего оба стрипа промывают и вносят в них конъюгат специфических моноклональных антител к IgG антителам человека, инкубируют в течение 30 минут, после промывания окрашивают водным раствором хромогена 10-15 минут при комнатной температуре, реакцию останавливают раствором 0,5 М серной кислоты, определяют оптическую плотность с помощью спектрофотометра, проводят расчет индекса авидности по формуле:

и при уровне ИА менее 45% и до 50% диагностируют острый период, при более 50% ИА и менее 65% - раннюю паст-инфекцию, при ИА 65% и более 70% - поздний период заболевания.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к способу калибровки составного анализа, включающему: добавление калибровочного реагента, включающего по меньшей мере две различные связывающие молекулы, где каждая молекула обладает способностью специфичного связывания с агентом захвата и способностью связываться с детектирующей молекулой и где по меньшей мере две из связывающих молекул имеют различные специфичности и присутствуют в различных концентрациях, добавление детектирующей молекулы, детектирование связанной детектирующей молекулы, создание калибровочной кривой, включающей ряд калибровочных точек/интервалов.

Настоящая группа объектов изобретения относится к области биотехнологии. Предложен рекомбинантный мультимерный скаффолд на основе 3 домена FnIII тенасцина (Tn3), который специфически связывается с рецептором 2 TRAIL (TRAIL R2).

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Представлен рекомбинантный ген, кодирующий белок L1 вируса папилломы человека 16 типа, с кодонами, оптимизированными для гетерологичной экспрессии в штаммах Е.

Изобретение относится к области биохимии. Предложено антитело к рецептору эпидермального фактора роста 2 (HER2) человека, а также включающие указанное антитело фармацевтические композиции, предназначенные для профилактики и лечения злокачественной опухоли и для индуцирования апоптоза.

Изобретение относится к медицине и касается способа получения селективного иммуносорбента для удаления антител к десмоглеину 3 типа (Dsg3) из крови больных пузырчаткой, при котором приготавливают раствор Dsg3 в фосфатном буфере.

Настоящее изобретение относится к акушерству и касается прогнозирования угрозы невынашивания инфекционного генеза на ранних сроках гестации. Сущность способа: в сыворотке крови беременных со сроком 6-11 недель гестации с помощью иммуноферментного анализа определяют уровень интерфероноподобного цитокина IL-28B.
Изобретение относится к медицине, а именно к ветеринарии, и может быть использовано для получения антигена для дифференциальной диагностики вакцинированных и больных бруцеллезом животных.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для иммуногистохимического выявления антигенов в препаратах органов продуктивных и непродуктивных животных длительного хранения в фиксаторах.
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и найдет широкое применение в лечении пациенток с аменореей, обусловленной нервной анорексией. Сущность способа: пациенток на этапе редукции нервной анорексии с продолжающейся аменореей в сыворотке крови методом ИФА определяют уровень дофамина и ЛГ, и если уровень дофамина составляет 67,25 пг/мл и более, но менее 280 пг/мл, а показатели ЛГ 0,95 мМЕ/л и более, прогнозируют нормализацию менструальной функции.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлено антитело, специфически связывающееся с PTK7 (протеинтирозинкиназа 7) человека, а также конъюгат указанного антитела с цитотоксическим агентом.

Изобретение относится к области биомедицины и касается способа диагностирования острого повреждения почек и применения in vitro набора, содержащего праймеры, необходимые для выполнения способа. Способ включает анализ образца, взятого у пациента, и определение уровня экспрессии по меньшей мере одной микроРНК, выбранной из miR-127, miR-126, miR-210 и miR-101, и сравнение упомянутого уровня экспрессии со значением контроля, где: (а) снижение уровня экспрессии сывороточной miR-127 в отношении значения контроля свидетельствует об остром повреждении почек; (б) повышение уровня экспрессии miR-127 в моче в отношении значения контроля свидетельствует об остром повреждении почек; (в) снижение уровня экспрессии сывороточной miR-126 в отношении значения контроля свидетельствует об остром повреждении почек; (г) повышение уровня экспрессии сывороточной miR-210 в отношении значения контроля свидетельствует об остром повреждении почек; (д) снижение уровня экспрессии miR-210 в моче в отношении значения контроля свидетельствует об остром повреждении почек; или (е) повышение уровня экспрессии сывороточной miR-101 в отношении значения контроля свидетельствует об остром повреждении почек. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 20 ил., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для оценки влияния алюминия на иммунный статус. Для этого в пробе крови пациента определяют содержание алюминия, и в тех пробах крови пациентов, где содержание алюминия выше референтного значения, извлекают иммунокомпетентные клетки. Определяют мембранный маркер лимфоцитов CD11a/CD18 и количество внутриклеточного маркера апоптоза - белка bcl2. Затем рассчитывают интегральный коэффициент Ккр., равный отношению содержания CD11a/CD18 к содержанию белка bcl2: Ккр=(CD11a/CD18)/bcl2. При значении указанного интегрального коэффициента более 70 при одновременном содержании алюминия в крови пациента выше его референтного значения оценивают состояние иммунного статуса пациента от воздействия алюминия как соответствующее патологическому повышению иммунологической реактивности. Использование данного способа позволяет достоверно установить влияние алюминия на возникновение иммунодефицита за счет использования в качестве информативного критерия совокупности уровня контаминации алюминием и соотношения клеточного рецептора и белка, характеризующих инициируемый алюминием процесс клеточной гибели как маркер эффекта иммунотоксического действия. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ диагностики параимплантарного воспаления после эндопротезирования крупных суставов, характеризующийся тем, что производят забор крови, готовят образцы сыворотки крови, осуществляют исследование сыворотки крови с помощью иммуноферментного анализа, определяя количественные значения показателей: фактора, ингибирующего миграцию макрофагов (MIF), и белка, стимулирующего макрофаги (MSP), а также интерлейкинов 1, 4, 8, 10 (IL1, IL4, IL8, IL10), рассчитывают коэффициент выраженности макрофагальной реакции и коэффициент выраженности гуморального ответа , определяют показатель развития параимплантарного воспаления К, равный (К1+К2)-2.7, и при его отрицательных значениях констатируют регресс патологического процесса, при положительных значениях - прогресс патологического процесса. Изобретение позволяет повысить чувствительность и специфичность диагностики направленности развития параимплантарного воспаления. 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии и клинической иммунологии. У больных определяют клинико-анамнестические и лабораторно-инструментальные критерии диагностики псориатического артрита и присваивают им баллы. При возрасте старше 40 лет присваивают 1 балл, кожном зуде - 1 балл, псориазе ногтей - 1 балл, индексе массы тела (ИМТ) больше или равном 25 кг/м2 - 1 балл, скорости оседания эритроцитов (СОЭ) больше или равной 7 мм/ч - 1 балл, уровне общего холестерина более 4,2 ммоль/л - 1 балл, уровне цитокина TNFα выше 8,1 пг/мл - 1 балл, выявлении генотипа С-597 IL10 - 1 балл, гепатомегалии по результатам УЗИ - 1 балл. Суммируют полученные баллы, и при сумме баллов равной 5 или более диагностируют псориатический артрит. Способ позволяет достоверно диагностировать псориатический артрит у больных псориазом за счет определения клинико-анамнестических и лабораторно-инструментальных критериев диагностики. 1 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, педиатрии и аллергологии, и может использоваться для прогнозирования степени тяжести атопического дерматита у детей. Сущность способа: в сыворотке крови у ребенка с атопическим дерматитом при поступлении в стационар определяют концентрацию неоптерина, и при концентрации неоптерина от 2,6 нг/мл до 4,0 нг/мл прогнозируют легкую степень тяжести атопического дерматита, при концентрации от 4,1 нг/мл до 5,9 нг/мл прогнозируют среднюю степень, а при концентрации 6,0 нг/мл и выше прогнозируют тяжелую степень тяжести атопического дерматита. Изобретение обеспечивает повышение точности прогноза атопического дерматита у детей. 3 пр.

Изобретение относится медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для определения субпопуляционного состава клеток кожи. Способ определения субпопуляционного состава клеток кожи и получения цитоиммунограммы кожи включает забор биоптата кожи на глубину 2 мм, гомогенизацию ткани в 0,9%-ном водном растворе хлорида натрия при температуре +23…+25°С, извлечение гомогената, фильтрование гомогената через инертную фильтровальную перегородку с диаметром пор 20 мкм, центрифугирование гомогената при 400 g в течение 5 минут при температуре +23…+25°С. После центрифугирования определяют жизнеспособность клеток кожи, инкубируют в течение 20 минут клетки кожи с моноклональными антителами для проточной цитометрии меченые флюорохромами, проводят фенотипирование клеток кожи, определяют количество клеток кожи определенного фенотипа - цитоиммунограмму кожи: кератиноциты CD49f+, из них активированные CD49f+HLA-DR+; фибробласты (фиброциты) CD45-CD14-CD44+, из них активированные CD45-CD14-CD44+CD80+; тучные клетки CD249+, из них активированные CD249+CD63+; моноциты (макрофаги) CD45+CD14+, из них активированные CD45+CD14+HLA-DR+; внутриэпидермальные макрофаги CD207+, их них активированные CD207+CD80+, CD207+HLA-DR+, CD207+CD80+HLA-DR+; эндотелиальные клетки CD146+, их них активированные CD146+CD34+, CD146+HLA-DR+, CD146+CD54+, CD146+CD54+HLA-DR+; лимфоцитарные популяции: Т-лимфоциты CD45+CD3+, Т-хелперы CD45+CD3+CD4+CD8-, Т-супрессоры CD45+CD3+CD4-CD8+, В-лимфоциты CD45+CD3-CD19+, NK-лимфоциты CD45+CD3-CD16+CD56+. Использование данного способа позволяет составить количественную и функциональную характеристику всех составляющих элементов кожи для использования в диагностике. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкоурологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития стеноза везикоуретрального анастомоза после радикальной простатэктомии. Для этого проводят гистологическое исследование парапростатических тканей области шейки мочевого пузыря, включающее подсчет клеток воспалительного инфильтрата: лимфоциты, моноциты, плазмоциты в парапростатических тканях области шейки мочевого пузыря. А также определяют площадь распространения фиброза в препаратах, окрашенных азокармином по Гейденгайну. При количестве лимфоидных клеток свыше 30 в поле зрения при объективе 40 и окулярах 10 (×400) и при замещении соединительнотканными волокнами более 2/3 площади препарата в поле зрения прогнозируют высокий риск развития стеноза. Использование данного способа позволяет снизить послеоперационные осложнения путем прогнозирование риска развития стеноза везикоуретрального анастомоза после радикальной простатэктомии и выбора тактики лечения пациента. 2 пр.

Изобретение относится к области медицинской вирусологии и микробиологии и касается штамма вируса Эбола Заир. Представленный штамм вируса Эбола Заир H.sapiens-wt/GIN/2015/Kalidie-Kindia-1022 выделен из крови больного лихорадкой Эбола во время эпидемии в Гвинее 2014-2015 гг. путем 3 последовательных пассажей на мышах-сосунках линии BALB/c и 6 последовательных пассажей на культуре клеток Vero и депонирован в государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» под номером V-695. Изобретение позволяет получить антиген - компонент иммуноферментной тест-системы для выявления антител классов G и М к вирусу Эбола с титром не менее 2⋅106 ТЦПД50/мл. 6 табл., 6 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике гастроэнтерологии, может быть использовано для диагностики степени тяжести цирроза печени смешанной этиологии.Способ диагностики степени тяжести цирроза печени смешанной этиологии с помощью анализа крови заключается в том, что у пациентов в сыворотке крови определяют уровень интерлейкина-6, и при значении интерлейкина-6 менее или равном 12,7 пг/мл диагностируют легкую (компенсированную) степень цирроза печени, при концентрации интерлейкина-6 более 12,7 пг/мл и менее или равной 26,2 пг/мл диагностируют умеренную (субкомпенсированную) степень, при уровне интерлейкина-6 более 26,2 пг/мл - тяжелую (декомпенсированную) степень цирроза печени.Технический результат: повышение доступности и простоты выполнения при высокой чувствительности, специфичности и объективности способа. 3 пр., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для определения цитотоксической активности NK-клеток в отношении клеток трофобласта. Способ включает выделение фракции мононуклеарных клеток, содержащих NK-клетки, из периферической крови. Проводят инкубацию в культуральной среде мононуклеаров в присутствии клеток-мишеней с последующей оценкой количества погибших клеток путем проточной цитофлуометрии. При этом мононуклеары периферической крови, содержащие NK-клетки, инкубируют в культуральной среде DMEM в течение 4 часов в присутствии клеток трофобласта линии Jeg-3. Часть клеток трофобласта инкубируют в культуральной среде DMEM без мононуклеаров в течение 4 часов. Затем определяют количество нежизнеспособных и жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных с мононуклеарами периферической крови, и базовое количество нежизнеспособных и жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных в культуральной среде без мононуклеаров периферической крови. Определяют цитотоксический эффект NK-клеток в отношении клеток трофобласта по формуле: ЦЭ=(X1/Х2)×100-(Х1баз/Х2баз)×100, где ЦЭ - цитотоксическая активность NK-клеток, X1 - количество нежизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных с мононуклеарами периферической крови, Х2 - количество жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных с мононуклеарами периферической крови, Х1баз. - базовое количество нежизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных в культуральной среде без добавления мононуклеаров; Х2баз. - базовое количество жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных в культуральной среде без добавления мононуклеаров. Использование данного способа позволяет получить количественную оценку цитотоксической активности NK-клеток, что дает возможность проводить мониторинг течения беременности. 6 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к вирусологии, и может быть использовано для диагностики периода инфекционного процесса, вызванного вирусом ветряной оспы. Сущность способа: исследуемую сыворотку одновременно вносят в лунки двух стрипов, иммобилизованных антигеном вируса varicella zoster, инкубируют в течение 50-55 минут, затем один стрип обрабатывают однократно водным раствором 6 М мочевины в течение 15 минут, после чего оба стрипа промывают и вносят в них конъюгат специфических моноклональньгх антител к IgG антителам человека, инкубируют в течение 30 минут, после промывания окрашивают водным раствором хромогена 10-15 минут при комнатной температуре, реакцию останавливают раствором 0,5 М серной кислоты, определяют оптическую плотность с помощью спектрофотометра, проводят расчет индекса авидности по формуле: и при уровне ИА менее 45 и до 50 диагностируют острый период, при более 50 ИА и менее 65 - раннюю паст-инфекцию, при ИА 65 и более 70 - поздний период заболевания. Способ является эффективным и информативным для диагностики периода инфекционного заболевания, вызванного вирусом varicella zoster у детей, с помощью которого возможно устанавливать острую инфекцию, активацию хронической персистирующей инфекции, а также высокий протективный иммунитет, что оказывается решающим фактором при установлении этиологии заболевания и выборе адекватной терапевтической тактики. 3 табл., 3 пр.

Наверх