Способ профилактики африканской чумы свиней



Способ профилактики африканской чумы свиней
Способ профилактики африканской чумы свиней
G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2629399:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" (RU)

Изобретение относится к области ветеринарии. Предложен способ профилактики африканской чумы свиней, включающий выявление животных с инфекционным заболеванием на начальной стадии развития, убой больных и дальнейшее обследование остальных животных. Остальных животных в очаге инфекционного заболевания африканской чумой свиней обследуют в течение суток методом полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. Животных-носителей вируса и здоровых животных переводят в отдельные помещения и в их присутствии осуществляют санацию помещений озоно-воздушной смесью: в помещении с животными-носителями вируса - в течение месяца не менее 3-4 раз в неделю с концентрацией озона 4-6 г/м3 в течение 20-30 минут, в помещении со здоровыми животными - в течение не более двух недель 2-3 раза в неделю с концентрацией озона 3-4 г/м3 в течение 15-20 минут. Изобретение обеспечивает расширение функциональных возможностей способа профилактики африканской чумы свиней. 2 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к способу профилактики африканской чумы свиней.

Известен способ санации животноводческих помещений в присутствии животных, в котором осуществляют обработку животноводческих помещений озоно-воздушной смесью, отличающийся тем, что обработку осуществляют озоно-воздушной смесью с концентрацией озона 1-3 мг/м3 с периодичностью 24 часа в течение 1,5-2 часа, которую готовят с помощью озонатора, установленного непосредственно в животноводческом помещении (RU №2542504).

Недостатком данного способа является невозможность его использования для проведения дезинфекции помещений в присутствии животных в случае их заражения вирусом африканской чумы свиней, т.к. для уничтожения данной инфекции необходима обработка озоно-воздушной смесью с более высокой концентрацией озона.

Известен способ оздоровления хозяйств от лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС), включающий оздоровительные мероприятия, которые проводят по вариантам в зависимости от первоначальной инфицированности стада, определенной по результатам серологического исследования, изоляцию инфицированных ВЛКРС животных и немедленную сдачу на убой больных животных, отличающийся тем, что при первоначальной инфицированности стада до 2,5% инфицированных животных немедленно сдают на убой, а остальных животных исследуют каждые 3 месяца с обязательным удалением инфицированных животных; в хозяйствах, где выявлено 2,6-10,0% животных, инфицированных ВЛКРС, инфицированных животных собирают на отдельной ферме, откуда молодняк после откорма коров после отела и по мере прекращения лактации сдают на убой, оставшихся животных исследуют серологическим методом на ВЛКРС и вновь выявленных инфицированных животных немедленно переводят на указанную ферму; при первоначальной инфицированности стада 10,1-40,0% всех животных в хозяйстве делят на две группы: серопозитивные и серонегативные и содержат их изолированно друг от друга, инфицированных животных каждые 6 месяцев исследуют гематологическим методом и признанных больными сдают на убой, а коров и нетелей, не инфицированных ВЛКРС, исследуют серологическим методом с интервалом три месяца, при этом вновь выявленных серопозитивных животных переводят в группу инфицированных коров; при первоначальной инфицированности стада более 40,0% всех взрослых животных исследуют только гематологическим методом через каждые 6 месяцев и выявленных больных сдают на убой (RU №2268589).

Недостатком данного способа является продолжительность диагностирования лейкоза крупного рогатого скота серологическим методом, что в свою очередь способствует прогрессивному развитию заболевания, ведущему к массовой гибели животных.

Техническим результатом является расширение функциональных возможностей способа профилактики африканской чумы свиней.

Технический результат достигается тем, что в способе профилактики африканской чумы свиней, включающем выявление 2,5-3% от общего количества животных с инфекционным заболеванием на начальной стадии развития в очаге и 1-й угрожаемой зоне, убой больных и дальнейшее обследование остальных животных, согласно изобретению остальных животных в очаге инфекционного заболевания африканской чумы свиней обследуют в течение суток методом экспресс-диагностики, включающим отбор проб крови животных, выделение из нее ДНК генома вирусного заболевания, проведение полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени, по результатам которой выявляют животных-носителей вируса и здоровых животных, которых переводят в отдельные помещения и в их присутствии осуществляют санацию помещений озоно-воздушной смесью: в помещении с животными-носителями вируса - в течение месяца не менее 3-4 раз в неделю с концентрацией озона 4-6 г/м3 в течение 20-30 минут, в помещении со здоровыми животными - в течение не более двух недель 2-3 раза в неделю с концентрацией озона 3-4 г/м3 в течение 15-20 минут.

Новизна заявляемого способа профилактики африканской чумы свиней состоит в идентификации вируса в пробах патологического материала с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени в течение суток, что в свою очередь позволяет выявить животных-носителей вируса африканской чумы свиней на начальной стадии их инфицирования, а также осуществление санации помещений, в которых отдельно друг от друга присутствуют животные-носители вируса и здоровые животные.

Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, направлены на достижение технического результата и не выявлены при изучении данной и смежной областей науки и техники и, следовательно, соответствуют критерию «изобретательский уровень».

Эти отличия позволяют сделать вывод о соответствии заявляемых технических решений критерию «новизна».

Заявляемый способ профилактики африканской чумы свиней рекомендовано использовать в специализированных ветеринарных, животноводческих, сельскохозяйственных предприятиях.

Способ профилактики африканской чумы свиней осуществляют следующим образом.

В стаде свиней ведут забор проб крови от каждого животного. Для получения сыворотки пробирки с кровью отстаивают при комнатной температуре до полного образования сгустка, затем центрифугируют. После сыворотку в количестве не менее 1 мл переносят одноразовыми наконечниками с фильтром в одноразовые пробирки объемом 1,5 мл. Для подготовки пробы к проведению полимеразной цепной реакции используют различные методики, с помощью которых осуществляют экстракцию ДНК из полученных образцов сыворотки крови животных и удаление или нейтрализацию посторонних примесей для получения препарата ДНК с чистотой, пригодной для проведения полимеразной цепной реакции.

Для подготовки образцов и проведения полимеразной цепной реакции используют специальный набор реагентов для выявления возбудителя африканской чумы свиней (инструкция по применению «ПЦР-АЧС-ФАКТОР», набора реагентов для выявления возбудителя африканской чумы свиней в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции с флуоресцентным детектором в режиме реального времени компании «Фактор-мед», ссылка - http://faktor.ru/catalog/veterinarya/produkrsiya/ptsr_asf_faktor/).

Согласно данной инструкции в отдельной пробирке смешивают компоненты набора из расчета на каждую реакцию: 5 мкл ПНР СМЕСЬ, 10 мкл смеси ПНР БУФЕР, 0,5 мкл TAQ POLYMERASE, данную смесь перемешивают и сбрасывают капли кратковременным центрифугированием. Затем отбирают необходимое количество пробирок для амплификации ДНК исследуемых и контрольных проб, вносят по 15 мкл приготовленной реакционной смеси. Используя наконечники с фильтром, в подготовленные пробирки добавляют:

1) отрицательный контроль ПЦР (К-) - вносят в пробирку по 10 мкл ДНК буфера;

2) по 10 мкл ДНК из исследуемых образцов в соответствующие пробирки;

3) положительный контроль ПЦР (К+) - вносят в пробирку 10 мкл положительного контрольного образца.

Далее осуществляют полимеразную цепную реакцию с флуоресцентным детектором в режиме реального времени на амплификаторе Rotor-Gene 3000/6000. Прибор программируют, устанавливают параметры температурно-временного режима амплификации, детекцию флуоресцентного сигнала назначают после стации отжига праймеров, после чего начинают процесс амплификации с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. В его основе лежит принцип флуоресцентной детекции продуктов полимеразной цепной реакции непосредственно в ходе амплификации. Детекция продуктов амплификации проводится прямо в реакционной среде через стенки или крышку закрытой пробирки.

ПЦР с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени имеет ряд значительных преимуществ:

- объединение этапов амплификации и детекции результатов. Появляется возможность оценить кинетику процесса, которая зависит от начального количества исследуемого материала;

- существенное снижение риска контаминации и ошибок при анализе результатов;

- высокая специфичность реакции за счет использования высокоспецифичных флуоресцентных зондов;

- высокая производительность;

- упрощение требований к организации ПЦР-лаборатории;

- возможность количественной оценки исходной ДНК матрицы;

- регистрация и учет данных в электронном формате.

ПНР в реальном времени характеризуется возможностью проведения качественного и количественного анализа. Регистрируемое в процессе амплификации нарастание сигнала от отделенного флуорофора прямо пропорционально увеличению концентрации синтезированных специфических продуктов и отражает концентрацию ДНК в исходной матрице.

Учет результатов полимеразной цепной реакции согласно указанной выше инструкции проводят по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией. Образец считают положительным (вирус АЧС присутствует), если наблюдают рост специфического сигнала, при этом значения контрольных образцов находятся в пределах нормы. Образец считают отрицательным (вирус АЧС отсутствует), если не наблюдают рост специфического сигнала, при этом значения контрольных образцов находятся в пределах нормы.

В результате проведения полимеразной цепной реакции с флуоресцентным детектором в режиме реального времени при выявлении первоначального инфицирования вирусом африканской чумы свиней 2,5-3% голов животных от общего количества в стаде инфицированных особей сдают на убой, после чего животных-носителей инфекции и здоровых особей переводят в отдельные помещения. Затем осуществляют санацию помещений в присутствии животных с помощью озоно-воздушной смеси, при этом в помещении с животными-носителями вируса ее проводят в течение месяца 3 раза в неделю с концентрацией озона 5 мг/м3 в течение 25 минут. В помещении со здоровыми животными санацию проводят в течение двух недель 2 раза в неделю с концентрацией озона 4 мг/м3 в течение 18 минут.

Результаты проведения опытов по санации помещений показывают, что санация помещения озоно-воздушной смесью с концентрацией озона 1-3 мг/м3 является малоэффективной при содержании общего микробного числа по результатам анализа санитарно-микробиологического контроля воздуха в животноводческом помещении более 400 тыс./м3, уровнем аммиака более 30 мг/м3 и сероводорода более 15 мг/м3, т.к. незначительно повлияла на снижение указанных показателей.

После санации помещений озоно-воздушной смесью с концентрацией озона 7-10 мг/м3 наблюдалось значительное снижение параметров ОМЧ, аммиака и сероводорода в воздухе, однако последствием такой дезинфекции являлось ухудшение общего самочувствия животных, снижение их активности и аппетита. Поэтому по итогам проведенных испытаний наиболее оптимальной признана санация с концентрациями озона 4 и 5 мг/м3, т.к. санация озоно-воздушной смесью с данными концентрациями озона не оказывала токсикологического побочного эффекта, а также снижала уровень содержания вредных веществ в животноводческих помещениях до регламентированных норм. Данные по содержанию вредных соединений в воздухе животноводческих помещений до и после санации в зависимости от концентрации озона в озоно-воздушной смеси представлены в таблицах 1 и 2.

По итогам санации видно, что обработка помещений озоно-воздушной смесью с концентрацией озона 4-5 мг/м3 в течение 15-25 минут снижает уровень загрязнения воздуха вредными соединениями до предельно допустимых значений, при этом не оказывая вредного токсикологического воздействия на состояние здоровья животных.

Результаты проведенных мероприятий в животноводческих помещениях в присутствии животных позволяют сделать вывод о том, что данный способ профилактики африканской чумы свиней эффективен в качестве улучшения и сохранения санитарного состояния на животноводческих предприятиях.

Способ профилактики африканской чумы свиней, включающий выявление 2,5-3% от общего количества животных с инфекционным заболеванием на начальной стадии развития в очаге и 1-й угрожаемой зоне, убой больных и дальнейшее обследование остальных животных, отличающийся тем, что остальных животных в очаге инфекционного заболевания африканской чумой свиней обследуют в течение суток методом экспресс-диагностики, включающим отбор проб крови животных, выделение из нее ДНК генома вирусного заболевания, проведение полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени, по результатам которой выявляют животных-носителей вируса и здоровых животных, которых переводят в отдельные помещения и в их присутствии осуществляют санацию помещений озоно-воздушной смесью: в помещении с животными-носителями вируса - в течение месяца не менее 3-4 раз в неделю с концентрацией озона 4-6 г/м3 в течение 20-30 минут, в помещении со здоровыми животными - в течение не более двух недель 2-3 раза в неделю с концентрацией озона 3-4 г/м3 в течение 15-20 минут.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и перинатологии, и может быть использовано для прогнозирования неврологических нарушений у новорожденных с задержкой внутриутробного развития плода (ЗВРП).

Изобретение относится к гигиене труда и медицине и может быть использовано для обоснования биомаркеров производственно обусловленных негативных эффектов (НЭ) работников промышленных производств при воздействии вредных производственных факторов (ВПФ).

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложен способ неинвазивной пренатальной диагностики анеуплоидий плода, включающий выделение внеклеточной ДНК (вкДНК) из образца крови, полученной у беременной женщины, выбор регионов генома для проведения амплификации, приготовление геномных библиотек, картирование полученных последовательностей на референсный геном или части генома человека с определением их координат, определение значения покрытия для каждого региона генома, характеризующегося открытостью хроматина между плацентой и клетками крови матери, отличающейся не менее чем на 20%, и получение регионов генома с указанной открытостью хроматина, после чего делается вывод о наличии анеуплоидий плода.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и касается способа ранней диагностики наследственной тирозинемии 1 типа (HT1). Сущность способа заключается в том, что детям первых 3-х месяцев жизни, у которых имеет место сочетание симптомокомплекса, состоящего из лихорадки неясного генеза, отеков, желтухи и диспепсического синдрома, а у детей в возрасте 4 месяцев и старше - гепато- или гепатоспленомегалии и клинических проявлений острого рахита, проводят исследование крови с оценкой уровня гемоглобина и количества эритроцитов, количества тромбоцитов, уровня АЛТ, ACT, билирубина и его фракций, уровня щелочной фосфатазы, кальция, фосфора, АФП, коагулограммы.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и медицины и предназначено для диагностики наличия мутации L576P гена c-KIT в тканях меланомы. Оценку наличия мутации проводят по соотношениям значений пороговых циклов Ct в трех реакциях ПЦР в реальном времени с аллель-специфичными праймерами.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в перинатологии и неонатологии при оценке готовности новорожденного ребенка к естественному молочному вскармливанию по сроку гестации.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложен способ одновременной диагностики наследственных заболеваний на основе использования биочипа с иммобилизованными на его поверхности олигонуклеотидными мишенями, включающий детекцию точковых мутаций в генах CUL7, NBAS, DIA1, FAH и GJB2, вызывающих 3М синдром, SOPH синдром, наследственную энзимопеническую метгемоглобинемию 1 типа, тирозинемию 1 типа и наследственную несиндромальную глухоту 1А типа, соответственно.

Изобретение относится к области медицины, в частности к эндокринологии, и предназначено для прогнозирования эффективности терапии сахарного диабета 2 типа. Осуществляют забор периферической венозной крови и выделение ДНК.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, нео- и перинатологии, и может быть использовано для прогнозирования сердечно-сосудистой патологии у новорожденного.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для определения наличия в организме беременных женщин хронического процесса, который сопровождается увеличенной гибелью клеток.

Изобретение относится к области биохимии. Описана группа изобретений, включающая способ выявления РНК и ДНК из сухих биологических образцов и набор для выделения РНК и ДНК из сухих биологических образцов.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложен способ неинвазивной пренатальной диагностики анеуплоидий плода, включающий выделение внеклеточной ДНК (вкДНК) из образца крови, полученной у беременной женщины, выбор регионов генома для проведения амплификации, приготовление геномных библиотек, картирование полученных последовательностей на референсный геном или части генома человека с определением их координат, определение значения покрытия для каждого региона генома, характеризующегося открытостью хроматина между плацентой и клетками крови матери, отличающейся не менее чем на 20%, и получение регионов генома с указанной открытостью хроматина, после чего делается вывод о наличии анеуплоидий плода.

Изобретение относится к области медицины и касается способа прогнозирования повышенного риска субарахноидального кровоизлияния вследствие разрыва аневризмы сосудов головного мозга у лиц азиатской расы.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и медицины и предназначено для диагностики наличия мутации L576P гена c-KIT в тканях меланомы. Оценку наличия мутации проводят по соотношениям значений пороговых циклов Ct в трех реакциях ПЦР в реальном времени с аллель-специфичными праймерами.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложена тест-система для мультиплексного количественного анализа экспрессии генов интерферона лямбда, противовирусного белка МхА и интерлейкина 23 на основе обратной транскрипции в сочетании с полимеразной цепной реакцией в реальном времени, включающая специфические праймеры и соответствующие им флуоресцентные гидролизуемые зонды, а также отрицательный и положительные контрольные образцы.

Настоящее изобретение относится к области молекулярной биологии и биотехнологии. Изобретение обеспечивает способ генетической паспортизации штаммов Bacillus thuringiensis с помощью проведения мультиплексного экспресс-анализа референтных последовательностей ДНК.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу определения биологической активности дефибротида. Приводят в контакт дефибротид, эуглобулин млекопитающего и субстрат, специфичный для плазмина, который в результате реакции с плазмином дает измеряемый продукт.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложен способ одновременной диагностики наследственных заболеваний на основе использования биочипа с иммобилизованными на его поверхности олигонуклеотидными мишенями, включающий детекцию точковых мутаций в генах CUL7, NBAS, DIA1, FAH и GJB2, вызывающих 3М синдром, SOPH синдром, наследственную энзимопеническую метгемоглобинемию 1 типа, тирозинемию 1 типа и наследственную несиндромальную глухоту 1А типа, соответственно.

Изобретение относится к области медицины, в частности к эндокринологии, и предназначено для прогнозирования эффективности терапии сахарного диабета 2 типа. Осуществляют забор периферической венозной крови и выделение ДНК.

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии и молекулярной биологии, и предназначено для определения риска возникновения рецидива онкологических заболеваний молочной железы.

Изобретение относится к области ветеринарии. Предложен способ профилактики нодулярного дерматита крупного рогатого скота (КРС), включающий выявление животных с инфекционным заболеванием на начальной стадии развития, убой больных и дальнейшее обследование остальных животных.

Изобретение относится к области ветеринарии. Предложен способ профилактики африканской чумы свиней, включающий выявление животных с инфекционным заболеванием на начальной стадии развития, убой больных и дальнейшее обследование остальных животных. Остальных животных в очаге инфекционного заболевания африканской чумой свиней обследуют в течение суток методом полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. Животных-носителей вируса и здоровых животных переводят в отдельные помещения и в их присутствии осуществляют санацию помещений озоно-воздушной смесью: в помещении с животными-носителями вируса - в течение месяца не менее 3-4 раз в неделю с концентрацией озона 4-6 гм3 в течение 20-30 минут, в помещении со здоровыми животными - в течение не более двух недель 2-3 раза в неделю с концентрацией озона 3-4 гм3 в течение 15-20 минут. Изобретение обеспечивает расширение функциональных возможностей способа профилактики африканской чумы свиней. 2 табл., 1 пр.

Наверх