Способ прижизненной оценки действия реагентов на образование стоматоцитов



Способ прижизненной оценки действия реагентов на образование стоматоцитов
Способ прижизненной оценки действия реагентов на образование стоматоцитов
Способ прижизненной оценки действия реагентов на образование стоматоцитов
Способ прижизненной оценки действия реагентов на образование стоматоцитов

 


Владельцы патента RU 2629609:

Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия (ФГБОУ ВО НГСХА) (RU)

Изобретение относится к медицине и фармации, а именно к прижизненной оценке действия реагентов на образование стоматоцитов. Способ прижизненной оценки действия реагентов на образование стоматоцитов, включающий выделение эритроцитов из крови и изучение их формы с помощью светового микроскопа, отличается тем, что суспензию эритроцитов помещают на предметное стекло, опускают в нее объектив микроскопа (100х), после образования эхиноцитов и добавления реагентов проводят микрофотосъемку. Способ обеспечивает прижизненное изучение образования стоматоцитов под влиянием различных реагентов. 4 пр., 4 ил.

 

Изобретение относится к области медицины и фармации и может использоваться для оценки действия различных реагентов на форму эритроцитов.

При физиологических условиях нормальные эритроциты человека имеют форму двояковогнутого диска.

Известно, что многие реагенты могут обратимо модифицировать эту форму. Одна серия реагентов, действующая на внешнюю половину липидного бислоя, индуцирует серию кренированных форм, называемых эхиноцитами и характеризующихся наличием спикул. Другая серия реагентов, проникающих во внутреннюю половину липидного бислоя, индуцирует образование чашеподобных эритроцитов, называемых стоматоцитами (Sheetz М.Р., Singer S.J. Biological membranes as bilayer couples. A molecular mechanism of drug-erythrocyte interactions. Proc. Nat. Acad .Sci. U.S.A. 1974. V. 71. P. 4457-4461.

В качестве прототипа выбран способ оценки действия реагентов на эритроциты (Reinhart W.H., Lubszky S., Thony S., Schulzki T. Interaction of injectable neurotropic drugs with the red cell membrane. Toxicol in Vitro. 2014. V. 28. P. 1274-1279), включающий их выделение, отмывание от плазмы и белых клеток крови центрифугированием. После инкубации эритроцитов с реагентами их фиксируют с помощью глутарового альдегида и проводят специальную подготовку фиксированных клеток. Затем изменение формы эритроцитов изучают с помощью сканирующего электронного микроскопа.

Однако этот способ трудоемок, занимает длительное время, требует применения дорогостоящего оборудования и не позволяет получить микрофотографии прижизненного изменения формы эритроцитов.

Задачей предлагаемого изобретения является создание несложного, быстрого способа прижизненной оценки действия реагентов на образование стоматоцитов.

Известно, что нормальные эритроциты трансформируются в эхиноциты при контакте двух стеклянных поверхностей (Wong P. A basis of echinocytosis and stomatocytosis in disc-sphere transformation of the erythrocyte. J. Theor. Biol. 1999. V. 196. P. 343-361). Это называется «эффектом стекла». Эффект стекла, в частности, происходит, когда в суспензию эритроцитов, помещенных на предметное стекло, опускают объектив 100х.

Поставленная задача решается за счет того, что суспензию эритроцитов помещают на предметное стекло, опускают в нее объектив (100х) светового микроскопа, после того как образуются эхиноциты, добавляют реагент и проводят микрофотосъемку.

Способ прижизненной оценки действия реагентов на образование стоматоцитов осуществляют следующим образом. Эритроциты трижды отмывают от плазмы и белых клеток крови центрифугированием в 10-кратном объеме физиологического раствора. Отмытые эритроциты ресуспендируют в забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис-HCl, 150 мМ NaCl, pH 7.4), после чего каплю 0.5% суспензии клеток помещают на предметное стекло, опускают объектив светового микроскопа (100х), после образования эхиноцитов добавляют различные реагенты и проводят микрофотосъемку.

Известно, что такие реагенты, как хлористый лантан (Шереметьев Ю.А., Суслов Ф.Ю. Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов Пат. 2082968, 1997), акридиновый оранжевый (Шереметьев Ю.А., Шереметьева А.В. Способ оценки агрегационной способности эритроцитов. Пат. 2390778, 2008) и хлористый цинк (Шереметьев Ю.А., Левин Г.Я., Поповичева А.Н. Способ оценки агрегационной способности эритроцитов. Пат. 2452958, 20 (2) индуцируют агрегацию эритроцитов человека. В то же время мало известно о влиянии их на форму эритроцитов человека.

Пример 1. Каплю 0.5% суспензии отмытых эритроцитов помещают на предметное стекло, в нее опускают объектив светового микроскопа (100х) и после образования эхиноцитов (рис. 1) добавляют хлористый лантан (320 мкМ). На рисунке 2 видно, что эхиноциты переходят в стоматоциты.

Пример 2. Каплю 0.5% суспензии отмытых эритроцитов помещают на предметное стекло, опускают объектив светового микроскопа (100х) и после образования эхиноцитов (рис. 1) добавляют акридиновый оранжевый (3 мМ). На рисунке 3 видно, что эхиноциты переходят в стоматоциты.

Пример 3. Каплю 0.5% суспензии отмытых эритроцитов помещают на предметное стекло, опускают объектив светового микроскопа (100х) и после образования эхиноцитов (рис. 1) добавляют хлористый цинк (4 мМ). На рисунке 4 видно, что эхиноциты переходят в стоматоциты.

Преимуществами предлагаемого способа является простота, доступность и быстрота, отсутствие необходимости в дорогостоящем и сложном оборудовании. Способ позволяет определить прижизненное изменение формы эритроцитов при большом увеличении светового микроскопа (1000х). Важным преимуществом способа является то, что он позволяет изучать переход эхиноцитов в стоматоциты. Отсутствие необходимости фиксации эритроцитов глутаровым альдегидом позволяет избежать искажения истинной картины процесса изменения формы эритроцитов, которая может возникать при использовании фиксаторов клеток крови.

Способ прижизненной оценки действия реагентов на образование стоматоцитов, включающий выделение эритроцитов из крови и изучение их формы с помощью световой микроскопии, отличающийся тем, что суспензию эритроцитов помещают на предметное стекло, опускают в нее объектив микроскопа (100х), после образования эхиноцитов и добавления реагентов проводят микрофотосъемку.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к областям экологии, ветеринарии, животноводства и предлагается для использования в качестве теста прижизненной оценки уровня аккумуляции свинца в мышечной ткани крупного рогатого скота герефордской породы.

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования, позволяющим осуществлять эффективный скрининг антиоксидантов. Способ экспресс-скрининга потенциальных антиоксидантов заключается в том, что выделяют липопротеиды низкой плотности (ЛНП) из плазмы венозной крови здоровых доноров, осуществляют окисление липопротеидов низкой плотности при температуре 37°С внесением 30 мМ сульфата меди (CuSO4), после чего через фиксированные интервалы времени измеряют накопление липогидропероксидов (конъюгированных диенов) при 233 нм (ΔD233) и по результатам исследования строят кинетическую кривую окисления ЛНП, из которой определяют продолжительность периода индукции (τ), затем в опытные пробы вносят исследуемые антиоксиданты (конечная концентрация 1 мкМ), растворенные либо в 96% этаноле - для жирорастворимых веществ или в среде инкубации - для водорастворимых веществ, и если продолжительность периода индукции исследуемого вещества выше 0,4 - вещество может рассматриваться в качестве эффективного антиоксиданта; если ниже 0,1 - исследованное вещество эффективным антиоксидантом не является.

Изобретение относится к медицине, и предназначено для ранней диагностики дисфункции сфинктера Одди III типа у пациентов, оперированных по поводу желчнокаменной болезни.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для сбора зрелых яиц in vitro от самок возбудителя гельминтозооноза Trichostrongylus colubriformis. Способ заключается в том, что матриксы из тонких кишок спонтанно зараженных трихостронгилюсами при исследовании гельминтологическими методами на вскрытии мелких жвачных предварительно обрабатывают в изотоническом растворе (0,9%) хлорида натрия при t = 37°C.
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии и сердечно-сосудистой хирургии, и может быть использовано для диагностики реактивности и дефицита кровотока в позвоночных артериях у пациентов с клиникой вертебрально-базилярной недостаточности.

Изобретение относится к области медицины, а именно к микробиологии, клинической лабораторной диагностике, молекулярной биологии, акушерству, гинекологии и неонатологии.
Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для экспресс-диагностики скрытых воспалительных процессов молочной железы и репродуктивных органов коров.

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки функционального состояния печени при патологии. Производят оценку лабораторных данных, характеризующих состояние органа: интенсивность процессов липопероксидации (ДК, МДА), функциональная активность (БИЛ, АлАТ, Рж, ЦП) и состояние гистоструктур органа (МИТ, ГЕП, СТ); определяют фазу патологического процесса.

Изобретение относится к диагностике, в частности к гистохимии, и может быть использовано для оценки типа мышечных волокон. Для этого гистологические срезы для определения окислительного, окислительно-гликолитического и гликолитического типов мышечных волокон последовательно помещают вначале в 1% раствор CaCI2, затем в 2% раствор CoCI2 и далее в 1% раствор сульфида аммония, в последующем их помещают в кислую среду, в которой инактивируется «быстрый» миозин гликолитических волокон, и в щелочную среду для определения окислительно-гликолитического и гликолитического типов, в которой инактивируется «медленный» миозин окислительных волокон, при этом окислительные волокна на срезе окрашиваются черным цветом, окислительно-гликолитические волокна - серым цветом, а гликолитические волокна - белым цветом, тип же мышечных волокон определяют по площади их поперечного сечения, а в качестве маркеров используют ферменты: сукцинатдегидрогеназу - для оценки активности окислительных процессов в митохондриях и лактатдегидрогеназу - для определения интенсивности гликолиза в цитоплазме клетки.
Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и ортопедии, и может быть использовано для хирургического лечения гетеротопической оссификации с выполнением локального нейромоделирования спастического синдрома пациента.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования степени риска формирования синдрома поликистозных яичников (СПКЯ) у девочек-подростков. В качестве анамнестических данных оценивают наличие: наследственной отягощенности по СПКЯ со стороны как матери, так и отца, отягощенного семейного анамнеза по сахарному диабету 2 типа, отягощенной наследственности по ожирению. При наличии каждому признаку присваивают по 2 балла. Также определяют наличие низкой ≤2800 г или высокой ≥ 4000 г массы тела ребенка при рождении при доношенном гестационном сроке, гестационного сахарного диабета у матери во время беременности, избытка массы тела у матери во время беременности, хронических тонзилогенных инфекций и частых ангин у девочки, черепно-мозговой травмы, нейроинфекции в анамнезе, малоподвижного образа жизни, перенесенный сильный психоэмоциональный стресс. При наличии их присваивают по 1 баллу. Среди клинических данных оценивают наличие: нарушения менструального цикла по типу олиго-/аменореи в течение более чем 1,5-2 лет после менархе, ановуляторного цикла, ожирения - индекс массы тела (ИМТ) более 30 кг/м2, гирсутизма. При наличии каждому признаку присваивают 3 балла. При наличии избытка массы тела при ИМТ 26-30 кг/м2, абдоминального перераспределения жироотложений, пограничного оволосения - 8-14 баллов по шкале Ферримана-Голлвея, повышенной сальности волос и кожи, угревой сыпи и акне, себореи, негроидного акантоза, фиброзно-кистозной мастопатии, каждому признаку присваивают 2 балла. Оценивают в 1 балл наличие нормальной массы тела, дисфункционального маточного кровотечения пубертатного периода. Определяют лабораторные показатели: при наличии увеличения отношения лютеинизирующего гормона к фолликулостимулирующему гормону (ЛГ/ФСГ) более 2,5 присваивают 3 балла. Также определяют наличие повышенного уровня лютеинизирующего гормона, повышенного уровня общего тестостерона, повышенного уровня андростендиона, повышения инсулина натощак, увеличения уровня гликозилированного гемоглобина. Оценивают при их наличии в 2 балла каждый показатель. При наличии повышения уровня антимюллерового гормона выше возрастной нормы присваивают 1 балл. Определяют эхографические признаки: объем яичников более 10 см3, не менее 12 кистозно-атрезирующихся фолликулов диаметром 2-9 мм, при наличии которых присваивают 3 балла. При наличии мультифолликулярных яичников присваивают 1 балл. Полученные баллы суммируют. При сумме баллов 1-15 определяют низкую степень риска формирования синдрома поликистозных яичников. При сумме баллов 16-31 - среднюю степень риска. При сумме баллов 32-62 - высокую степень риска формирования синдрома поликистозных яичников. Способ позволяет объективно, эффективно, просто и на ранних сроках прогнозировать формирование синдрома поликистозных яичников у девочек-подростков за счет оценки комплекса наиболее значимых показателей. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии при диагностике врожденных заболеваний, и может быть использовано для ранней диагностики синдрома Алажилля у детей. Способ обследования детей с подозрением на синдром Алажилля заключается в том, что детям первых 3-5 месяцев жизни, при наличии симптомокомплекса, проявляющегося низкой массой тела при рождении, длительным, более 2-х недель, желтушным периодом, а детям старше 5-ти месяцев наличием кожного зуда, гепато/гепатоспленомегалии, ахолии/гипохолии стула, проводят биохимический анализ крови для подтверждения признаков холестаза, таких как прямая гипербилирубинемия, умеренная цитолитическая активность, повышение уровня холестерина, после чего, при выявлении признаков холестаза, проводят ультразвуковое исследование органов брюшной полости и, при выявлении неоднородности печеночной паренхимы и утолщения стенок внутрипеченочных желчных протоков, проводят ультразвуковое исследование сердца и рентгенографию грудопоясничного отдела позвоночника, а при выявлении изменений со стороны сердечно-сосудистой системы, скелета и почек дополнительно проводят молекулярно-генетическое исследование для верификации синдрома Алажилля. 5 ил., 1 пр.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к микробиологии. Способ определения адгезии микроорганизмов на эпителиальных клетках слизистой оболочки полости рта и клеточной линии НЕр 2 заключается в том, что осуществляют забор материала, получают из указанного материала суспензию клеток с концентрацией 2×106 кл/мл, определенной на денситометре, смешивают 0,1 мл полученной суспензии клеток с 0,1 мл суспензии бактерий с концентрацией 2×109 кл/мл, инкубируют 30 мин при 37°С, после инкубирования смесь трехкратно отмывают забуференным физраствором при 600 об/мин по 10 мин, далее удаляют супернатант из осадка и делают мазки на стекле, фиксируют в пламени спиртовки 2-3 с и окрашивают по Граму, под микроскопом подсчитывают в 10 полях зрения среднее количество адсорбированных микроорганизмов - средний показатель адгезии, проведя не менее трех опытов, и считают степень адгезии от 0 до 1,9 - низкоадгезивной, от 2 до 4,9 - среднеадгезивной, свыше 5 - высокоадгезивной, при условии, что в случае забора эпителиальных клеток слизистой оболочки полости рта его осуществляют медицинским ершиком после предварительного полоскания раствором антисептика хитозана на Абисибе. 2 пр., 2 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики угрожающих преждевременных родов. Способ диагностики угрожающих преждевременных родов, включающий биохимическое исследование периферической венозной крови у беременных женщин, заключающийся в том, что в сроки гестации 24-34 недели в плазме крови определяют концентрацию норадреналина и при ее значении, равном 167,6 пг/мл или менее, диагностируют угрожающие преждевременные роды. Вышеописанный способ позволяет с высокой степенью точности определять угрожающие преждевременные роды в сроки 24-34 недели беременности. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования исхода беременности при угрожающих преждевременных родах. Способ прогнозирования исхода беременности при угрожающих преждевременных родах путем исследования периферической венозной крови до начала сохраняющей терапии у беременных женщин с клиническими признаками угрожающих преждевременных родов в сроках гестации 24-34 недели, заключающийся в том, что в плазме крови определяют показатель резистентности активного V фактора свертывания крови к активированному протеину С и при его значении, равном 0,94 или менее, прогнозируют преждевременные роды. Вышеописанный способ позволяет с высокой точностью прогнозировать исход беременности при угрожающих преждевременных родах, выбрать правильную тактику ведения беременности, индивидуальный подход к лечению, минимизировать осложнения преждевременных родов для матери и плода. 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки риска развития простудных заболеваний у лиц пожилого возраста, заключающийся в исследовании ротовой жидкости пациента пожилого возраста с определением концентрации иммуноглобулина А и концентрации иммуноглобулина G, отличающийся тем, что исследование проводят через час после еды, двукратно с разницей в 30 дней и полость рта за 15 минут до забора ротовой жидкости промывают раствором натрия хлорида 0,9%, далее рассчитывают отношение концентрации иммуноглобулина А к концентрации иммуноглобулина G и в случае снижения отношения концентрации иммуноглобулина А к концентрации иммуноглобулина G при втором исследовании в 2 раза и более пациента относят в группу высокого риска развития простудных заболеваний у лиц пожилого возраста. Осуществление изобретения обеспечивает повышение информативности клинического и лабораторного обследования людей пожилого возраста. 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для лечения эндометриоза при нежелательности беременности. Для этого определяют коэффициент активности эндометриоза (КАЭ) как отношение значений уровня клеток целомического эпителия СА-125 на 2-3 и 7-9 дни менструального цикла (МЦ), при значении КАЭ до 1,4 пациентке назначают постоянное использование комбинированных гормональных контрацептивов (КГК); при КАЭ от 1,5 до 2,9 назначают или КГК в непрерывном режиме, или гестагены также в непрерывном режиме. Способ позволяет упростить и индивидуализировать выбор тактики лечения эндометриоза при нежелательности беременности при его доступности и низкой себестоимости. 2 табл., 4 пр.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогноза развития постперикардиотомного синдрома (ПКТС) у больных ишемической болезнью сердца (ИБС), перенесших аортокоронарное шунтирование, характеризующийся тем, что у пациентов через сутки после операции определяют активность аргиназы в эритроцитах и арилэстеразную активность параоксоназы (PON) в плазме крови, затем рассчитывают коэффициент К по формуле: К = аргиназа/PON, где «аргиназа» - это активность аргиназы, МЕ/(г Hb); «PON» - арилэстеразная активность параоксоназы, МЕ/(мг белка); и при значении коэффициента К, равном 0,39 и более, у пациента прогнозируют развитие ПКТС с вероятностью 67%. Технический результат заявляемого изобретения заключается в повышении точности, специфичности и чувствительности прогностического метода, позволяющего выделить группу риска на раннем этапе и выбрать адекватную терапию для пациентов. 1 табл., 2 пр., 1 ил.

Изобретение относится к диагностике, а именно к способу прогнозирования развития бронхиальной астмы у больных полипозным риносинуситом. Способ прогнозирования развития бронхиальной астмы у больных полипозным риносинуситом, заключающийся в том, что в крови пациентов определяют молекулы средней массы (МСМ), ед.оп.пл., измеряют температуру выдыхаемого и вдыхаемого воздуха (Т выд), °С, и (Т вдых), °С, и определяют разность температур (ΔT), °С, между температурой вдыхаемого и выдыхаемого воздуха, прогноз осуществляют с помощью дискриминантного уравнения: D=+5,028×Т выд-0,405×ΔТ-8,910×МСМ, где граничное значение дискриминантной функции 152,16; при D больше или равно граничному значению дискриминантной функции прогнозируют отсутствие развития бронхиальной астмы у больных с полипозным риносинуситом; при D меньше граничного значения дискриминантной функции прогнозируют развитие бронхиальной астмы у больных с полипозным риносинуситом. Вышеописанный способ позволяет эффективно прогнозировать развитие бронхиальной астмы у больных полипозным риносинуситом. 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования осложнений у пациента в острый период политравмы путем исследования показателей крови и мочи, отличающийся тем, что при поступлении у пациента определяют показатели концентрации глюкозы, общего белка и натрия в сыворотке крови, фибриногена в плазме, белка в моче, в цельной крови количество лейкоцитов и тромбоцитов, определяют активированное частичное тромбопластиновое время, тромбиновое время и протромбиновый индекс, сравнивают полученные результаты с показателями нормы, используемыми в лаборатории, и оценивают вероятность развития летального исхода и осложнений в виде пневмонии, жировой эмболии и нагноения. Способ позволяет на раннем этапе оценивать состояние пациента и прогнозировать развитие осложнений острого периода политравмы, вовремя принять необходимые профилактические и лечебные действия. 4 пр.
Наверх