Способ получения гипериммунной сыворотки для лечения и профилактики некробактериоза сельскохозяйственных животных

Изобретение относится к ветеринарии и биотехнологии и может быть использовано для получения сыворотки для профилактики и лечения некробактериоза животных. Способ включает гипериммуннизацию волов-продуцентов инактивированным формалином антигеном, выделенным из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ. Антиген получают культивированием производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, далее культуральную жидкость подвергают ультрафильтрации с размером пор 13-20 кДа, к ультрафильтрату добавляют 8-10% бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ до содержания Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ 1,5-2,0 млрд клеток в 1 см3. Затем добавляют натриевую соль сукцината хитозана, взятую в конечной весовой концентрации 0,5-1,5%, проводят инактивацию формалином, взятым в конечной концентрации 0,3-0,4%, в течение 12-14 суток при 37-38°С, затем полученный антиген сорбируют на 10-15% гидроокиси алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-2,0%. Гипериммунизацию волов-продуцентов проводят вначале вакциной для профилактики некробактериоза сельскохозяйственных животных в дозе 0,4-0,6 мл/животное, затем через 4-5 недель антигеном из расчета 1,5-2,0 мл антигена на 100 кг веса тела животного вначале однократно внутрикожно в предлопаточный паховый лимфоузел совместно с масляным адъювантом, взятым в весовом соотношении к антигену как 1:0,8-1,0, затем дважды с интервалом 5-7 дней внутрикожно вводят 0,5-0,6 мл антигена на 100 кг веса тела животного вначале в правый предлопаточный и левый паховый лимфоузлы, затем в левый предлопаточный и правый паховый лимфоузлы. Использование изобретения позволяет повысить эффективность лечения некробактериоза. 4 пр.

 

Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и микробиологии, в частности к получению сыворотки для профилактики и лечения некробактериоза животных.

Некробактериоз широко распространен во всех странах мира и характеризируется гнойно-некротическим распадом кожи, слизистых оболочек, паренхиматозных органов и конечностей. В процессе переболевания некробактериозом животные теряют 30-40% живой массы тела и до одной тонны молока. Особенно большой экономический ущерб наносит некробактериоз северному оленеводству, где в год заболевает до 50-70 тыс. оленей, при этом погибает, как правило, 30-35% животных.

Известен препарат для лечения некробактериоза, содержащий сульфадиметоксин, хинозол, фурацилин, диметилсульфоксид, ацетон, глицерин, твин 40 или 80 и спирт этиловый (патент RU 1524224, опубл. 27.08.1995, А61К 31/00). Однако известный препарат не дает полного лечебного эффекта, имеет узкий спектр действия и сравнительно длительные сроки лечения.

Известен также препарат для профилактики некробактериоза сельскохозяйственных животных, содержащий антибиотик окситетрациклин, активированный иммуностимулятором (патент RU 2112546, опубл. 10.06.98). Однако этот препарат не всегда надежно защищает животных от заболевания.

Наиболее близким аналогом является Способ получения гипериммунной сыворотки для лечения и профилактики некробактериоза сельскохозяйственных животных путем гипериммуннизации волов-продуцентов инактивированным формалином антигеном, выделенным из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ (патент RU 2329828, опубл. 27.07.2008, МПК А61К 39/02).

Однако известная сыворотка недостаточна эффективна и требует двукратного введения.

Задачей изобретения является повышение эффективности целевого продукта.

Технический результат изобретения достигается в способе получения гипериммунной сыворотки для лечения и профилактики некробактериоза сельскохозяйственных животных путем гипериммуннизации волов-продуцентов инактивированным формалином антигеном, выделенным из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, тем, что антиген получают культивированием производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, далее культуральную жидкость подвергают ультрафильтрации с размером пор 13-20 кДа, к ультрафильтрату добавляют 8-10% бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ до содержания Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ 1,5-2,0 млрд клеток в 1 см, добавляют натриевую соль сукцината хитозана, взятую в конечной весовой концентрации 0,5-1,5%, проводят инактивацию формалином, взятым в конечной концентрации 0,3-0,4%, в течение 12-14 суток при 37-38°С, затем полученный антиген сорбируют на 10-15% гидроокиси алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-2,0%, а гипериммунизацию волов-продуцентов проводят вначале вакциной для профилактики некробактериоза сельскохозяйственных животных в дозе 0,4-0,6 мл/животное, затем через 4-5 недель антигеном из расчета 1,5-2,0 мл антигена на 100 кг веса тела животного вначале однократно внутрикожно в предлопаточный паховый лимфоузел совместно с масляным адъювантом совместно с масляным адъювантом, взятым в весовом соотношении к антигену как 1:0,8-1,0, затем дважды с интервалом 5-7 дней внутрикожно вводят 0,5-0,6 мл антигена на 100 кг веса тела животного вначале в правый предлопаточный и левый паховый лимфоузлы, затем в левый предлопаточный и правый паховый лимфоузлы.

Известна вакцина против некробактериоза животных (патент RU 2329828, опубл. 27.07.2008, Бюл. №21, МПК А61К 39/02, А61Р 31/04).

Известен способ получения натриевой соли сукцината хитозана (Патент RU 2144040, МПК С08В 37/08, А61К 31/722, опубл. 10.01.2000), который может быть использован в ветеринарии, медицине и косметике в качестве пленкообразователя, гидранта или эмульгатора.

В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие режимы способа получения гипериммунной сыворотки для лечения и профилактики некробактериоза сельскохозяйственных животных аналогичные заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию «новизны».

Все режимы способа осуществимы в промышленных условиях, направлены на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».

Впервые предложен способ получения гипериммунной сыворотки для лечения и профилактики некробактериоза сельскохозяйственных животных, где некробактериозный антиген получают культивированием производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, далее культуральную жидкость подвергают ультрафильтрации, к ультрафильтрату добавляют бактериальную массу штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ и натриевую соль сукцината хитозана, проводят инактивацию формалином, затем полученный антиген сорбируют на гидроокиси алюминия при определенных условиях, т.е. предложение соответствует критериям «новизна» и «изобретательский уровень».

Изобретение иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1. Сыворотку получают путем гипериммунизации животных антигеном возбудителя некробактериоза

Для получения некробактериозного антигена берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-20 кДа, к ультрафильтрату добавляют 10% бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ до содержания Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ 2,0 млрд клеток в 1 см3, добавляют натриевую соль сукцината хитозана, взятую в конечной весовой концентрации 1,5%, проводят инактивацию формалином, взятым в конечной концентрации 0,4%, в течение 14 суток при 38°С, затем полученный антиген сорбируют на 15% гидроокиси алюминия в гликолевом буфере с рН 8,6, взятой в конечной концентрации 2,0%, а гипериммунизацию волов-продуцентов проводят вначале вакциной для профилактики некробактериоза сельскохозяйственных животных в дозе 0,6 мл/животное, затем через 5 недель антигеном из расчета 2,0 мл антигена на 100 кг веса тела животного вначале однократно внутрикожно в предлопаточный паховый лимфоузел совместно с масляным адъювантом совместно с масляным адъювантом, взятым в весовом соотношении к антигену как 1:0,8, затем дважды с интервалом 7 дней внутрикожно вводят 0,6 мл антигена на 100 кг веса тела животного вначале в правый предлопаточный и левый паховый лимфоузлы, затем в левый предлопаточный и правый паховый лимфоузлы

После этого проводят контроль бактериологический, физико-химический и активности сыворотки. Сыворотка содержит антитела к F.necrophorum в титре не ниже 1:128 (в РА). За период наблюдения в течение 10 дней все животные оставались здоровыми. На месте введения изменений нет.

Пример 2. Сыворотку получают путем гипериммунизации животных антигеном возбудителя некробактериоза

Для получения некробактериозного антигена берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-20 кДа, к ультрафильтрату добавляют 8% бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ до содержания Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ 1,5 млрд клеток в 1 см3, добавляют натриевую соль сукцината хитозана, взятую в конечной весовой концентрации 0,5%, проводят инактивацию формалином, взятым в конечной концентрации 0,3% в течение 12 суток при 37°С, затем полученный антиген сорбируют на 10% гидроокиси алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4, взятой в конечной концентрации 1,8%, а гипериммунизацию волов-продуцентов проводят вначале вакциной для профилактики некробактериоза сельскохозяйственных животных в дозе 0,4 мл/животное, затем через 4 недель антигеном из расчета 1,5 мл антигена на 100 кг веса тела животного вначале однократно внутрикожно в предлопаточный паховый лимфоузел совместно с масляным адъювантом совместно с масляным адъювантом, взятым в весовом соотношении к антигену как 1:1, затем дважды с интервалом 5 дней внутрикожно вводят 0,5 мл антигена на 100 кг веса тела животного вначале в правый предлопаточный и левый паховый лимфоузлы, затем в левый предлопаточный и правый паховый лимфоузлы.

После этого проводят контроль бактериологический, физико-химический и активности сыворотки. Сыворотка содержит антитела к F.necrophorum в титре не ниже 1:128 (в РА). За период наблюдения в течение 10 дней все животные оставались здоровыми. На месте введения изменений нет.

Пример 3. Полученную по примерам 1-2 сыворотку применяют для клинического испытания в хозяйстве.

В опыт берут 150 оленей с первой стадией заболевания, которая характеризовалась покраснением и отеком области межкопытной щели, венчика и сгибательной поверхности пута, серозным выделением у отдельных животных, которое высыхало, образуя на коже корку. Температура тела повышалась до 40° и выше. Животные были угнетены, у них прекращалась жвачка, резко снижались удои. Эта группа была поделена на три группы по 50 животных. 1-я группа (опытная) подвергалась лечению гипериммунной сывороткой, полученной по примеру 1, 2-я группа (опытная) подвергалась лечению гипериммунной сывороткой, полученной по примеру 2, 3-я группа получала лечение гипериммунной сывороткой, полученной по известному техническому решению (прототипу).

Перед применением гипериммунных сывороток производят расчистку и обрезку копыт, туалет раневой поверхности, удаляют омертвевшие ткани. Всем животным, получающим лечение, на раневую поверхность накладывают ватно-марлевый тампон, пропитанный гипериммунной сывороткой, и фиксируют его поддерживающей повязкой. Одновременно с наложением повязки каждому животному в круп вводят по 150 мл гипериммунной сыворотки.

За подопытными животными установлено клиническое наблюдение с двукратным измерением температуры. Через 4-6 суток повязки с конечностей снимают и проводят осмотр раневой поверхности.

У животных первой и второй группы раны очистились от клеточного дейтрита, на отдельных участках появились очаги грануляционной ткани. У животных третьей группы была обнаружена грануляционная ткань, заполняющая всю раневую поверхность. В результате лечебных мероприятий в первой и второй группах были излечены 49 и 47 животных соответственно. Эффективность лечения составляет 98 и 94%. В третьей группе были излечены только 32 животных. Эффективность лечения составляет 64%. У животных 3-й группы болезнь прогрессировала.

Пример 4. Полученную по примерам 1-2 сыворотку применяют для клинического испытания в хозяйстве

В опыт берут 150 оленей со второй стадией заболевания, при которой патологический процесс увеличен, очаг с мягких тканей переходил на надкостницу, иногда возникал оссифицирующий периостит и остеоартрит копытного сустава. У животных установлена выраженная хромота, пораженная конечность горяча на ощупь и резко болезненна, в местах поражения возникала характерная язва с изрытыми краями. Эта группа была поделена на три группы по 50 животных. 1-я группа (опытная) подвергалась лечению гипериммунной сывороткой, полученной по примеру 1, 2-я группа (опытная) подвергалась лечению гипериммунной сывороткой, полученной по примеру 2, 3-я группа получала лечение гипериммунной сывороткой, полученной по известному техническому решению (прототипу).

Перед применением гипериммунных сывороток производят расчистку и обрезку копыт, туалет раневой поверхности, удаляют омертвевшие ткани. Всем животным, получающих лечение, на раневую поверхность накладывают ватно-марлевый тампон, пропитанный гипериммунной сывороткой, и фиксируют его поддерживающей повязкой. Одновременно с наложением повязки каждому животному в круп вводят по 150 мл гипериммунной сыворотки.

За подопытными животными установлено клиническое наблюдение с двукратным измерением температуры. Через 14-16 суток повязки с конечностей снимают и проводят осмотр раневой поверхности.

У животных первой и второй группы раны очистились от клеточного дейтрита, на отдельных участках появились очаги грануляционной ткани. У животных третьей группы была обнаружена грануляционная ткань, заполняющая всю раневую поверхность. В результате лечебных мероприятий в первой и второй группах были излечены 48 и 46 животных. Эффективность лечения составляет 96 и 92% соответственно. В третьей группе были излечены только 20 животных. Эффективность лечения составляет 40%. У животных 3-й группы болезнь прогрессировала.

Таким образом, гипериммунная сыворотка против некробактериоза позволяет на 28-58% повысить эффективность лечения некробактериоза и может быть использована как специфическое лечебное средство с терапевтической и профилактической целью в неблагополучных по некробактериозу животноводческих и оленеводческих хозяйствах. Сыворотка может применяться сочетанно с вакцинацией животных, особенно в начальной стадии болезни.

Способ получения гипериммунной сыворотки для лечения и профилактики некробактериоза сельскохозяйственных животных путем гипериммуннизации волов-продуцентов инактивированным формалином антигеном, выделенным из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, отличающийся тем, что антиген получают культивированием производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, далее культуральную жидкость подвергают ультрафильтрации с размером пор 13-20 кДа, к ультрафильтрату добавляют 8-10% бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ до содержания Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ 1,5-2,0 млрд клеток в 1 см3, добавляют натриевую соль сукцината хитозана, взятую в конечной весовой концентрации 0,5-1,5%, проводят инактивацию формалином, взятым в конечной концентрации 0,3-0,4%, в течение 12-14 суток при 37-38°С, затем полученный антиген сорбируют на 10-15% гидроокиси алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-2,0%, а гипериммунизацию волов-продуцентов проводят вначале вакциной для профилактики некробактериоза сельскохозяйственных животных в дозе 0,4-0,6 мл/животное, затем через 4-5 недель антигеном из расчета 1,5-2,0 мл антигена на 100 кг веса тела животного вначале однократно внутрикожно в предлопаточный паховый лимфоузел совместно с масляным адъювантом, взятым в весовом соотношении к антигену как 1:0,8-1,0, затем дважды с интервалом 5-7 дней внутрикожно вводят 0,5-0,6 мл антигена на 100 кг веса тела животного вначале в правый предлопаточный и левый паховый лимфоузлы, затем в левый предлопаточный и правый паховый лимфоузлы.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биохимии. Описаны полностью человеческие антитела, которые связываются либо с токсином А, либо с токсином В Clostridium difficile, или как с токсином А, так и с токсином В.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения пневмококковых гипериммунных сывороток. Для этого проводят гипериммунизацию кроликов антигеном, представляющим собой инактивированный формалином антиген плазмидосодержащего штамма пневмококка.

Изобретение относится к биохимии. Описано выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к получению энтеросорбента для направленной сорбции холерного экзотоксина. Энтеросорбент для направленной сорбции холерного экзотоксина, полученный путем иммобилизации методом адсорбции антитоксического противохолерного иммуноглобулина G, выделенного из сыворотки крови животных, иммунизированных холерным токсином, на микрочастицах размером 200-300 нм предварительно подготовленного кислоторастворимого хитозана в соотношении 0,08-0,1:1.

Изобретение относится к фармакологии, а именно к препарату для стимуляции противоопухолевого иммунитета или терапии онкологических заболеваний. Препарат для стимуляции противоопухолевого иммунитета или терапии онкологических заболеваний, характеризующийся тем, что в качестве основного компонента содержит смесь нативных или инактивированных корпускулярных антигенов, полученных, по меньшей мере, из трех культуральных штаммов бледной трепонемы, относящихся к разным антигенным группам возбудителя.
Представленная группа изобретений касается способа получения концентрата культуры клеток бруцелл из штамма Brucella abortus 19 для приготовления бруцеллезных антигенов, способа получения концентрата клеток бруцелл из штамма Brucella abortus 19 для получения сыворотки бруцеллезной диагностической, способа получения единого бруцеллезного антигена РА, РСК и РДСК, способа получения бруцеллезного антигена для роз-бенгал пробы (РБП), способа получения бруцеллезного антигена для кольцевой реакции (КР) с молоком, способа получения сыворотки бруцеллезной диагностической, тест-системы для диагностики бруцеллеза животных в РА, РСК и РДСК, тест-системы для диагностики бруцеллеза животных в РБП и тест-системы для диагностики бруцеллеза животных в КР с молоком.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к противоопухолевому средству. Противоопухолевое средство, представляющее собой рекомбинантный циклофилин А человека в виде раствора в фосфатном буфере, является продуцентом штамма Escherichia coli (BL21(DE3)Gold/pETCYPopti, депонированного во Всероссийской Коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИ Генетика, регистрационный номер В-11983 от 18 июля 2014 г.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложено выделенное моноклональное антитело, которое связывается с белком РВР2а или РВР5.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для защиты птиц от болезни Ньюкастла. Способ включает введение in ovo во время последней четверти периода инкубации эффективной иммунизирующей дозы иммуногенной композиции непосредственно в эмбрион.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к антителу или его функциональному фрагменту, направленным против эпитопа стафилококка золотистого, а также к их применению для обнаружения стафилококка золотистого.

Изобретение относится к ветеринарии и биотехнологии и может быть использовано для получения сыворотки для профилактики и лечения некробактериоза животных. Способ включает гипериммуннизацию волов-продуцентов инактивированным формалином антигеном, выделенным из производственного штамма Fusobacterium necrophorum 0-1 ВИЭВ. Антиген получают культивированием производственного штамма Fusobacterium necrophorum 0-1 ВИЭВ, далее культуральную жидкость подвергают ультрафильтрации с размером пор 13-20 кДа, к ультрафильтрату добавляют 8-10 бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum 0-1 ВИЭВ до содержания Fusobacterium necrophorum 0-1 ВИЭВ 1,5-2,0 млрд клеток в 1 см3. Затем добавляют натриевую соль сукцината хитозана, взятую в конечной весовой концентрации 0,5-1,5, проводят инактивацию формалином, взятым в конечной концентрации 0,3-0,4, в течение 12-14 суток при 37-38°С, затем полученный антиген сорбируют на 10-15 гидроокиси алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-2,0. Гипериммунизацию волов-продуцентов проводят вначале вакциной для профилактики некробактериоза сельскохозяйственных животных в дозе 0,4-0,6 млживотное, затем через 4-5 недель антигеном из расчета 1,5-2,0 мл антигена на 100 кг веса тела животного вначале однократно внутрикожно в предлопаточный паховый лимфоузел совместно с масляным адъювантом, взятым в весовом соотношении к антигену как 1:0,8-1,0, затем дважды с интервалом 5-7 дней внутрикожно вводят 0,5-0,6 мл антигена на 100 кг веса тела животного вначале в правый предлопаточный и левый паховый лимфоузлы, затем в левый предлопаточный и правый паховый лимфоузлы. Использование изобретения позволяет повысить эффективность лечения некробактериоза. 4 пр.

Наверх