Способ прогнозирования степени тяжести атопического дерматита у детей

Авторы патента:

Бен Мбарек Макрем (RU)

Галимзянов Халил Мингалиевич (RU)

Башкина Ольга Александровна (RU)

Сароянц Людмила Валентиновна (RU)

Пахнова Лия Руслановна (RU)

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Владельцы патента RU 2630063:

федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Астраханский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Астраханский ГМУ Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, педиатрии и аллергологии, и может использоваться для прогнозирования степени тяжести атопического дерматита у детей. Сущность способа: в сыворотке крови у ребенка с атопическим дерматитом при поступлении в стационар определяют концентрацию неоптерина, и при концентрации неоптерина от 2,6 нг/мл до 4,0 нг/мл прогнозируют легкую степень тяжести атопического дерматита, при концентрации от 4,1 нг/мл до 5,9 нг/мл прогнозируют среднюю степень, а при концентрации 6,0 нг/мл и выше прогнозируют тяжелую степень тяжести атопического дерматита. Изобретение обеспечивает повышение точности прогноза атопического дерматита у детей. 3 пр.

Атопический дерматит - хронический нейродерматоз с выраженной генетической предрасположенностью к сенсибилизации специфическими и неспецифическими аллергенами и способностью к образованию аллергенспецифических IgE - антител. Атопический дерматит продолжает оставаться одной из актуальных проблем современной дерматологии в связи с ростом заболеваемости, довольно широким распространением в популяции и хроническим течением. Проблема обусловлена не только его высокой распространенностью, но и особенностями течения заболевания, характеризующегося хроническим течением, выраженным кожным зудом, повышением чувствительности к одному или нескольким аллергенам и, в свою очередь, приводящим к социальной дезадаптации и инвалидизации пациентов.

Известен способ прогнозирования степени тяжести атопического дерматита, основанный на комплексной оценке клинических показателей в виде расчета индекса SCORAD (Severity Scoring of Atopic Dermatitis) no формуле SCORAD=A/5+7⋅B/2+C, где A - распространенность кожных поражений (площадь поражения в %); В - интенсивность клинических проявлений (эритема /гиперемия), отек / папулообразование, мокнутие / корки, экскориация, лихенификация, сухость); С - субъективные симптомы (зуд, нарушения сна) (The SCORAD index. Consensus Report of the European Task Force on Atopic Dermatitis Dermatology. - 1993; 186(1): 23-31).

Однако данный способ имеет ряд недостатков:

- он достаточно субъективен, так как при этом способе ряд показателей (нарушения сна, интенсивность кожного зуда) оценивается либо родителями, либо самим пациентом. У детей раннего возраста данный способ не применим в связи с отсутствием возможности оценить перечисленные субъективные показатели;

- способ не достаточно точен, поскольку оценка тяжести и характера течения атопического дерматита проводится на момент обращения пациента в период обострения;

- оценка интенсивности кожных проявлений, включенная в индекс SCORAD, также обладает достаточной субъективностью, поскольку основывается на личном опыте врача или пациента;

- способ достаточно трудоемок и не может широко использоваться в практическом здравоохранении, так как предусматривает на первом этапе определение пораженных участков кожи с расчетом площади поражения кожи и интенсивности клинических проявлений с их оценкой по балльной шкале;

- способ не позволяет точно оценивать прогноз течения заболевания.

Известен способ прогнозирования течения атопического дерматита [пат.RU 2310195], заключающийся в том, что одновременно выделяют эпителиоциты в браш-биоптатах слизистой ротоглотки - материала для интегральной оценки резистентности макроорганизма пациента по показателям, характеризующим микробиоценоз и морфофункциональное состояние слизистой, определяют электрокинетическую активность ядер буккальных эпителиоцитов (ЭлА), индекс инфицирования (ИИ), индекс адгезии (ИА) и берут смывы с пораженных участков кожи площадью 2 см², в которых определяют количество колониеобразующих единиц (КОЕ) S.aureus/см². При значении индекса инфицирования >70%, индекса адгезии >100-150 микробных клеток S.aureus на эпителиоцит, КОЕ>200/см² и ЭлА<20% при первичном осмотре прогнозируют тяжелое течение атопического дерматита, при значениях индекса инфицирования <30%, индекса адгезии <50 микробных клеток S.aureus / эпителиоцит, КОЕ<50/см² и ЭлА>30% при первичном осмотре прогнозируют легкое течение.

Недостатки способа: трудоемок, расчетная часть достаточно сложна, требует сложного микробиологического и лабораторного оборудования, в связи с чем не может широко использоваться в практическом здравоохранении.

Известен также способ оценки степени тяжести атопического дерматита, основанный на качественной и количественной оценке структурных компонентов липидной пленки с пораженных участков кожи: фосфолипидов (ФЛ), холестерина (ХС), жирных кислот (ЖК), триацилглицеридов (ТАГ), эфиров холестерина (ЭХС) [Огородова Л.М., Ходкевич Л.В., Нагаева Т.А., Рыжов СВ. Способ оценки степени тяжести атопического дерматита. Регистрационный номер заявки 2002122176/15, дата подачи заявки 15.08.2002, номер патента 2239837].

Однако данный способ имеет следующие недостатки:

- не обеспечивает точности прогноза основного заболевания;

- трудоемок, так как при его осуществлении производится большое количество технологических операций (экстрагирование, центрифугирование, выпаривание, хроматография);

- требует высоких материальных затрат в связи с необходимостью использования дорогостоящего оборудования и реактивов для выполнения множества лабораторных исследований.

Наиболее близким аналогом - прототипом - является способ прогнозирования тяжелого течения атопического дерматита по уровню специфических IGG-аутоантител у детей старше 3-х лет [заявка RU 2009130183, 06.08.2009], согласно которому при исходном уровне аутоантител к кератину более 333,68 МЕ/мл прогнозируют тяжелое персистирующее течение атопического дерматита через 6 мес.

Недостатками прототипа являются следующие:

- способ основан на учете показателя, отражающего наличие аутоиммунных механизмов в патогенезе атопического дерматита, тогда как преобладающим патогенетическим механизмом являются атопические (аллергические) механизмы;

- данный способ не используется у детей до трех лет, в то время как именно у детей этой группы ограничено использование шкалы SCORAD, и отсутствует объективная оценка степени тяжести атопического дерматита;

- требует специфического диагностического оборудования и дорогостоящих тест-систем, что ограничивает использование в реальной клинической практике.

Главной задачей, решаемой изобретением, является улучшение прогнозирования степени тяжести атопического дерматита у детей.

Изобретение направлено на повышение точности прогноза атопического дерматита у детей.

Указанный технический результат достигается тем, что в сыворотке крови у ребенка с атопическим дерматитом при поступлении в стационар определяют концентрацию неоптерина в сыворотке крови и при концентрации неоптерина от 2,6 нг/мл до 4,0 нг/мл прогнозируют легкую степень тяжести атопического дерматита, при концентрации от 4,1 нг/мл до 5,9 нг/мл прогнозируют среднюю степень, а при концентрации 6,0 нг/мл и выше прогнозируют тяжелую степень тяжести атопического дерматита.

В предлагаемым способе используется определение концентрации неоптерина [2-амино-4-гидрокси-6-(D-эритро-1',2',3'-тригидроксипропил)-птеридин], являющегося низкомолекулярным соединением, производным гуанозинтрифосфата (ГТФ).

Определение оптической плотности и концентрации неоптерина осуществляли с использованием набора Neopterin ELISA фирмы IBL International (Германия). Тест разработан на основании следующих работ: 1. Westermann J., Thiemann F., Gerstner L. et al. Evalution of a New Simple and Rapid Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Kit for Neopterin Determination/ Clin Chem Lab Med 38(4):345-353 (2000), 2. Bayer M., Schmitz S., Westermann J et al/ Evalution of a New-Linked Immunosorbent Assay for the Determination of Neopterin/ Clin Lab/ 51 (2005).

По современным представлениям неоптерин (НП) является неспецифическим высокочувствительным маркером активации моноцитарного звена клеточного иммунитета и биохимических изменений, индуцируемых цитокинами, которые определяют активность воспаления различной этиологии [Шевченко О.П., Олефиренко Г.А., Орлова О.В. Использование неоптерина для оценки активации клеточного иммунитета.// Лаборатория. - 2004. - №48. – С.6]. Высокий уровень неоптерина является индикатором активности иммунопатологического процесса и, по данным некоторых исследователей, предшествует клиническим проявлениям заболевания [Oldhafer K.J., Schafer О., Wonigeit К. et al. Monitoring of serum neopterin levels after liver transplantation.// Transplantation Proc. - 1988. - Vol. 20.1. - P.671-673, Werner-Fermayer G., Werner E.R., Fuchs D. et al. Tumor necrosis factor-alpha and lipopolysaccaride enhance interferon-induced tryptophan degradation and pteridine synthesis in human cells.// Biol. Chem. Hoppe-Seyler. - 1989. - Vol. 370. - P. 1 063-1069], что определяет высокую прогностическую значимость выявленных изменений.

Определение НП в биологических жидкостях ранее применялось для диагностики, прогнозирования, а также оценки эффективности лечения целого ряда заболеваний у взрослых [Фукс Д., Самсонов М.Ю., Вейс Г. И др. Клиническое значение неоптерина при заболеваниях человека, Fuchs D., Weiss G., Reibnegger G. et al. The role of neopterin as a monitor of cellular immune activation in transplantation, inflammatory, infection and malignant disease.//Crit.Rev.Clin.Lab.Sci. - 1992. - Vol. 29. - P. 307-341, Murr C., Bergant A., Widschwendter M. Neopterin is an independent prognostic variable in females with breast cancer.// Clin. Chem. - 2002. - Vol. 75. - P. 1999-2001].

Из патентно-технической литературы и практики обследования и лечения детей с атопическим дерматитом неизвестно о способе прогнозирования степени тяжести атопического дерматита у детей с использованием определения уровня НП.

Отсюда правомерен вывод о соответствии заявляемого решения критерию «новизна».

Указанная выше совокупность существенных признаков необходима и достаточна для получения технического результата - прогноза степени тяжести атопического дерматита у детей.

Между существенными признаками и решаемой задачей существует причинно-следственная связь, где каждый признак необходим и влияет на получение технического результата, а вместе взятые признаки достаточны для его получения. Правомерен вывод о соответствии заявляемого технического решения критерию «изобретательский уровень».

Предлагаемый способ может быть реализован многократно с использованием присущих ему существенных признаков, а, значит, заявляемое техническое решение соответствует критерию «промышленная применимость».

Предлагаемый способ повышает объективность и точность прогнозирования течения атопического дерматита, прост, не требует затрат на приобретение дорогостоящего оборудования, является высокоинформативным.

Изобретение апробировано на 20-ти детях в аллергологическом отделении ГБУЗ АО «Областная детская клиническая больница им. Н.Н. Силищевой» г. Астрахани.

Ниже приводятся результаты апробации.

Клинический пример 1. Ребенок Д., 5 лет.

Анамнез заболевания: поступил в стационар с жалобами на кожные высыпания, зуд кожных покровов, заложенность носа, скудное слизистое отделяемое, сухой кашель, рецидивирующие отеки глаз, частые вирусные инфекции (ежемесячно). Первые высыпания в виде яркой гиперемии щек на фоне приема сиропа парацетамола в 10-месячном возрасте, затем мокнутия в шейных складках и подмышечной области на употребление клубники, персиков, рыбы. В течение 3-х месяцев беспокоит заложенность носа, покраснение глаз после прогулки и контакта с травой.

Ребенок от II беременности на фоне гестоза, отеков, II срочных родов. Наследственность отягощена: у отца акродерматит, у матери медикаментозная аллергия (цефтриаксон), у бабушки поллиноз (лебеда).

При поступлении: Состояние средней тяжести. Кожные покровы бледные, пятнисто-папулезная сыпь в локтевой области, на ушах, расчесы. В зеве нерезкая гиперемия дужек. Периферические лимфоузлы эластичной консистенции, не спаяны друг с другом и окружающими тканями, безболезненные. Носовое дыхание слегка затруднено слизистым отделяемым. Коньюнктивы глаз гиперемированы. В легких дыхание жесткое, хрипов нет. ЧДД 20 в 1 минуту. Границы относительной сердечной тупости по возрасту. Тоны сердца ясные, ритмичные, систолический шум в 5 точке. ЧСС 95 ударов в минуту. Живот мягкий, безболезненный. Печень +0,5 см из-под ребра, край эластичный, безболезненный. Селезенка не пальпируется. Стул, диурез не нарушены.

Проведено комплексное лабораторное обследование. Анализ крови на общий IgE - 523 МЕ/мл.

Концентрация неоптерина в сыворотке крови 3,83 нг/мл. Прогнозировано легкое течение атопического дерматита, хотя по шкале SCORAD показатели между легкой и средней степенью тяжести. Установлен диагноз: Атопический дерматит, детская форма, ограниченный, легкой степени, период обострения, смешанной сенсибилизации. Аллергический риноконъюнктивит, персистирующий, средней тяжести.

Назначено лечение без использования топических ГКС, в т.ч. эмоленты, антигистаминные препараты внутрь. Через 3 мес динамика положительная, стойкая. Обострения основного заболевания не отмечено. В динамике концентрация неоптерина в сыворотке крови 0,96 нг/мл, что в пределах нормальных значений.

Клинический пример 2. Ребенок Е., 7 лет.

Анамнез заболевания: Девочка от I беременности, I срочных родов. Мать ребенка во время беременности диету не соблюдала, употребляла много коровьего молока, творога. Наследственность отягощена: у матери в детстве аллергический диатез, у отца крапивница на укусы насекомых и антибиотики пенициллинового ряда.

Девочка больна с 6-месячного возраста, когда на фоне перевода на молочные смеси (НАН, Нутрилон) и введения прикорма гречневой молочной кашей появилась гиперемия щек, голеней, затем мокнутие в шейных и паховых складках. Установлен диагноз: Атопический дерматит, младенческая форма, средне-тяжелое течение, с пищевой сенсибилизацией к БКМ. Переведена на высокогидролизованные смеси, гипоаллергенные монокомпонентные прикормы. Периодически отмечалось ухудшение состояния в связи с нарушением диеты, в связи с чем девочка получала антигистаминные препараты I и II поколения, элидел, топические ГКС (адвантан, элоком) с положительным эффектом.

Последнее ухудшение после перенесенного ОРЗ и использования антибиотиков.

При поступлении в стационар девочка предъявляет жалобы на кожный зуд, высыпания на верхних и нижних конечностях, кистях рук. Состояние средней тяжести. Кожа сухая, с участками эритемы, лихенификации, экскориации, корочки. Подкожно-жировая клетчатка развита умеренно. Видимые слизистые чистые. Зев не гиперемирован. Лимфатические узлы не увеличены. ЧДД 20 в 1 мин. Носовое дыхание свободно. В легких дыхание везикулярное, хрипов нет. Артериальное давление 100/60 мм рт.ст. ЧСС 88 уд./мин. Пульс удовлетворительного наполнения, ритм правильный, тоны - звучные, ритмичные. Язык чистый. Живот мягкий, безболезненный. Печень не выступает из-под реберной дуги, безболезненная. Желчный пузырь не пальпируется. Селезенка не пальпируется. Мочеполовая система развита по женскому типу. Стул, диурез не нарушены.

При дополнительном обследовании в сыворотке крови определена умеренно высокая концентрация неоптерина 4,27 нг/мл. Прогнозировано средне-тяжелое течение заболевания, период обострения. Установлен диагноз: Атопический дерматит, детская форма, средне-тяжелый, период обострения, с пищевой сенсибилизацией. Проведено лечение с учетом международных рекомендаций курс топических ГКС не более 2-х недель, с дальнейшим переходом на пимекролимул (элидел), эмоленты (эмолиум, липикар), антигистаминные препараты (ксизал). Через 3 месяца в динамике при обследовании в сыворотке крови определено незначительное повышение концентрации неоптерина 2,86 нг/мл. Прогнозировано легкое течение заболевания. Рекомендовано в дальнейшем ограничить объем терапии, без использования топических ГКС.

Клинический пример 3. Серафим К., 1 год 10 месяцев.

Анамнез заболевания: Ребенок болен с 3-недельного возраста с появления папулезных высыпаний на коже туловища, конечностей, затем эритематозных очагов, мокнутия, экскориаций, корочек, выраженного зуда, беспокойства.

Анамнез жизни: Мальчик от 5 беременности (1 - самопроизвольный аборт, 2, 3 - срочные роды, 4 - внематочная), физиологически протекавшей, 3 срочных родов в срок, с массой при рождении 4100, ростом 50 см. Период ранней адаптации протекал гладко. Нарастание веса и психомоторное развитие на 1 году жизни по возрасту. Ребенок с рождения на грудном вскармливании. Первые проявления аллергии - с 3 недель в виде папулезных высыпаний. Гипоаллергенная диета кормящей матери - без эффекта. С 8 месяцев ребенок переведен на вскармливание Нутрилоном Пепти Аллергия. Получал длительную терапию антигистаминными препаратами и топическими ГКС с положительным, но кратковременным эффектом. Отмечалось дальнейшее распространение высыпаний, появление очагов покраснения и мокнутия. В 1 год установлен диагноз атопический дерматит, младенческая форма, распространенный, средней степени тяжести, с пищевой сенсибилизацией. По результатам аллергического обследования выявлен повышенный уровень IgE (выше 1080 МЕ/мл), высокий уровень специфических IgE к белкам коровьего молока, глютену, гречке, рису, пшенице. Неоднократно ребенок получал лечение стационарно, где на фоне парентерального и местного использования гормональных препаратов отмечалось некоторое улучшение состояния кожи. Однако через несколько дней после выписки из стационара - вновь появлялись распространенные высыпания, усиление кожного зуда.

В рационе ребенка: кукурузная, гречневая каша, картофель, говядина, кролик, индейка. Гипоаллергенный быт соблюдают.

При поступлении: состояние средне-тяжелое по заболеванию. Кожные покровы бледно-розовые, распространенные эритематозно-сквамозные высыпания, сухость, расчесы. В области голеностопных суставов - очаги лихенификации, эрозии под геморрагическими корочками. На лице - очаги мокнутия под серозно-геморрагическими корками. Видимые слизистые чистые. Зев разрыхлен, подкожно-жировая клетчатка развита умеренно. Лимфатические узлы не увеличены. ЧДД 25 в 1 мин. Носовое дыхание свободно. В легких дыхание пуэрильное, хрипов нет. Артериальное давление 90/60 мм рт.ст. ЧСС=115 уд./мин. Пульс удовлетворительного наполнения, ритм правильный, тоны - звучные, на верхушке выслушивается мягкий систолический шум. Язык чистый. Живот умеренно вздут, мягкий. Печень выступает из-под реберной дуги на 1,5 см, край ровный. Желчный пузырь не пальпируется. Селезенка не пальпируется. Мочеполовая система развита по мужскому типу. Стул, диурез не нарушены.

При дополнительном обследовании в сыворотке крови определена высокая концентрация неоптерина 7,6 нг/мл. Сделано заключение о необходимости пересмотра диагноза атопический дерматит в сторону повышения степени тяжести заболевания (на тяжелую степень), несмотря на то, что по шкале SCORAD по совокупности симптомов имелось основание для определения средней степени тяжести.

Ребенок был направлен для оказания высокотехнологичной медицинской помощи в НЦЗД (г. Москва), где был подтвержден диагноз: Атопический дерматит, распространенная форма, тяжелое непрерывно-рецидивирующее течение. Пищевая аллергия.

За время госпитализации ребенку было выполнено комплексное обследование по протоколу оказания высокотехнологичной медицинской помощи, включающего клинические, лабораторные и инструментальные методы исследования, проведена поликомпонентная терапия с применением иммуносупрессивных и иммунобиологических препаратов.

Учитывая тяжелое непрерывно-рецидивирующиее течение атопического дерматита, отсутствие устойчивого эффекта от стандартных методов терапии (топические ГКС, антигистаминные препараты), к лечению был подключен иммуносупрессивный препарат Сандиммун Неорал из расчета 3,5 мг/кг/сут - по 0,2 мл ×2 раза. Однако в связи с отсутствием значимого клинического эффекта данный препарат был отменен с 23.12.2015 г., по решению врачебного консилиума к лечению был подключен иммубиологический препарат Ксолар в дозе 75 мг (0,6 мл) - однократно. На фоне проведенного лечения состояние кожи со значительной положительной динамикой, зуд купирован. Сохраняются остаточные проявления атопического дерматита, сухость кожных покровов. Выписан домой в удовлетворительном состоянии под наблюдение специалистов по месту жительства.

В динамике концентрация неоптерина в сыворотке крови снизилась до 5,6 нг/мл, что соответствует средней степени тяжести заболевания. Ребенок находится на «Д» наблюдении и лечении с использованием топических ГКС сильного действия.

Преимущества предлагаемого способа прогнозирования степени тяжести атопического дерматита:

- способ позволяет точно оценивать прогноз течения заболевания, так как является достоверным лабораторным критерием, отражающим наличие и выраженность воспалительного процесса;

- способ основан на учете показателя, отражающего преобладающие механизмы воспалительного процесса в патогенезе хронического атопического воспалительного заболевания (атопического дерматита);

- способ достаточно объективен, так как при его использовании отсутствует необходимость учета ряда субъективных показателей, которые не могут быть оценены ни родителями, ни пациентами, в т.ч. раннего возраста, ни практикующими врачами;

- может использоваться у пациентов разного возраста, в т.ч. раннего;

- возможно прогнозирование дальнейшей тяжести течения в разных периодах заболевания атопическим дерматитом (обострения, ремиссии и др.);

- способ не трудоемок и может широко использоваться в практическом здравоохранении, так как предусматривает проведение лабораторных исследований методом иммуноферментного анализа, являющегося доступным даже для амбулаторного звена здравоохранения.

Способ прогнозирования степени тяжести атопического дерматита у детей на основании иммунохимического исследования крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови у ребенка при поступлении в стационар иммуноферментным методом определяют концентрацию неоптерина и при концентрации неоптерина от 2,6 нг/мл до 4,0 нг/мл прогнозируют легкую степень тяжести атопического дерматита, при от 4,1 нг/мл до 5,9 нг/мл прогнозируют среднюю степень, а при 6,0 нг/мл и выше прогнозируют тяжелую степень тяжести атопического дерматита у детей.

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии и клинической иммунологии. У больных определяют клинико-анамнестические и лабораторно-инструментальные критерии диагностики псориатического артрита и присваивают им баллы.

Способ диагностики параимплантарного воспаления после эндопротезирования крупных суставов // 2629598

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ диагностики параимплантарного воспаления после эндопротезирования крупных суставов, характеризующийся тем, что производят забор крови, готовят образцы сыворотки крови, осуществляют исследование сыворотки крови с помощью иммуноферментного анализа, определяя количественные значения показателей: фактора, ингибирующего миграцию макрофагов (MIF), и белка, стимулирующего макрофаги (MSP), а также интерлейкинов 1, 4, 8, 10 (IL1, IL4, IL8, IL10), рассчитывают коэффициент выраженности макрофагальной реакции и коэффициент выраженности гуморального ответа , определяют показатель развития параимплантарного воспаления К, равный (К1+К2)-2.7, и при его отрицательных значениях констатируют регресс патологического процесса, при положительных значениях - прогресс патологического процесса.

Способ оценки влияния алюминия на иммунный статус // 2629597

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для оценки влияния алюминия на иммунный статус. Для этого в пробе крови пациента определяют содержание алюминия, и в тех пробах крови пациентов, где содержание алюминия выше референтного значения, извлекают иммунокомпетентные клетки.

Способ диагностики и/или прогнозирования острого повреждения почек // 2629591

Изобретение относится к области биомедицины и касается способа диагностирования острого повреждения почек и применения in vitro набора, содержащего праймеры, необходимые для выполнения способа.

Способ диагностики периода инфекционного заболевания, вызванного вирусом varicella zoster у детей // 2629335

Изобретение относится к медицине, а именно к вирусологии, и может быть использовано для диагностики периода инфекционного процесса, вызванного вирусом ветряной оспы.

Калибровочный реагент и способ // 2629310

Группа изобретений относится к способу калибровки составного анализа, включающему: добавление калибровочного реагента, включающего по меньшей мере две различные связывающие молекулы, где каждая молекула обладает способностью специфичного связывания с агентом захвата и способностью связываться с детектирующей молекулой и где по меньшей мере две из связывающих молекул имеют различные специфичности и присутствуют в различных концентрациях, добавление детектирующей молекулы, детектирование связанной детектирующей молекулы, создание калибровочной кривой, включающей ряд калибровочных точек/интервалов.

Trail r2-специфические мультимерные скаффолды // 2628699

Настоящая группа объектов изобретения относится к области биотехнологии. Предложен рекомбинантный мультимерный скаффолд на основе 3 домена FnIII тенасцина (Tn3), который специфически связывается с рецептором 2 TRAIL (TRAIL R2).

Рекомбинантный ген l1hpv16, рекомбинантная плазмида pqe-l1/16, белок l1hpv16 и их применение // 2628693

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Представлен рекомбинантный ген, кодирующий белок L1 вируса папилломы человека 16 типа, с кодонами, оптимизированными для гетерологичной экспрессии в штаммах Е.

Антитела, способные специфически связываться с her2 // 2628094

Изобретение относится к области биохимии. Предложено антитело к рецептору эпидермального фактора роста 2 (HER2) человека, а также включающие указанное антитело фармацевтические композиции, предназначенные для профилактики и лечения злокачественной опухоли и для индуцирования апоптоза.

Применение селективного иммуносорбента для удаления антител к десмоглеину 3 типа из сыворотки крови у больных пузырчаткой // 2627652

Изобретение относится к медицине и касается способа получения селективного иммуносорбента для удаления антител к десмоглеину 3 типа (Dsg3) из крови больных пузырчаткой, при котором приготавливают раствор Dsg3 в фосфатном буфере.

Способ определения субпопуляционного состава клеток кожи и получения цитоиммунограммы кожи // 2630607

Изобретение относится медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для определения субпопуляционного состава клеток кожи. Способ определения субпопуляционного состава клеток кожи и получения цитоиммунограммы кожи включает забор биоптата кожи на глубину 2 мм, гомогенизацию ткани в 0,9%-ном водном растворе хлорида натрия при температуре +23…+25°С, извлечение гомогената, фильтрование гомогената через инертную фильтровальную перегородку с диаметром пор 20 мкм, центрифугирование гомогената при 400 g в течение 5 минут при температуре +23…+25°С. После центрифугирования определяют жизнеспособность клеток кожи, инкубируют в течение 20 минут клетки кожи с моноклональными антителами для проточной цитометрии меченые флюорохромами, проводят фенотипирование клеток кожи, определяют количество клеток кожи определенного фенотипа - цитоиммунограмму кожи: кератиноциты CD49f+, из них активированные CD49f+HLA-DR+; фибробласты (фиброциты) CD45-CD14-CD44+, из них активированные CD45-CD14-CD44+CD80+; тучные клетки CD249+, из них активированные CD249+CD63+; моноциты (макрофаги) CD45+CD14+, из них активированные CD45+CD14+HLA-DR+; внутриэпидермальные макрофаги CD207+, их них активированные CD207+CD80+, CD207+HLA-DR+, CD207+CD80+HLA-DR+; эндотелиальные клетки CD146+, их них активированные CD146+CD34+, CD146+HLA-DR+, CD146+CD54+, CD146+CD54+HLA-DR+; лимфоцитарные популяции: Т-лимфоциты CD45+CD3+, Т-хелперы CD45+CD3+CD4+CD8-, Т-супрессоры CD45+CD3+CD4-CD8+, В-лимфоциты CD45+CD3-CD19+, NK-лимфоциты CD45+CD3-CD16+CD56+. Использование данного способа позволяет составить количественную и функциональную характеристику всех составляющих элементов кожи для использования в диагностике. 1 табл.

Способ прогнозирования риска развития стеноза везикоуретрального анастомоза после радикальной простатэктомии // 2631606

Изобретение относится к медицине, а именно к онкоурологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития стеноза везикоуретрального анастомоза после радикальной простатэктомии. Для этого проводят гистологическое исследование парапростатических тканей области шейки мочевого пузыря, включающее подсчет клеток воспалительного инфильтрата: лимфоциты, моноциты, плазмоциты в парапростатических тканях области шейки мочевого пузыря. А также определяют площадь распространения фиброза в препаратах, окрашенных азокармином по Гейденгайну. При количестве лимфоидных клеток свыше 30 в поле зрения при объективе 40 и окулярах 10 (×400) и при замещении соединительнотканными волокнами более 2/3 площади препарата в поле зрения прогнозируют высокий риск развития стеноза. Использование данного способа позволяет снизить послеоперационные осложнения путем прогнозирование риска развития стеноза везикоуретрального анастомоза после радикальной простатэктомии и выбора тактики лечения пациента. 2 пр.

Штамм вируса эбола заир h.sapiens-wt/gin/2015/kalidie-kindia-1022 для получения антигена, используемого в качестве компонента иммуноферментной тест-системы для выявления антител классов g и м к вирусу эбола // 2631937

Изобретение относится к области медицинской вирусологии и микробиологии и касается штамма вируса Эбола Заир. Представленный штамм вируса Эбола Заир H.sapiens-wt/GIN/2015/Kalidie-Kindia-1022 выделен из крови больного лихорадкой Эбола во время эпидемии в Гвинее 2014-2015 гг. путем 3 последовательных пассажей на мышах-сосунках линии BALB/c и 6 последовательных пассажей на культуре клеток Vero и депонирован в государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» под номером V-695. Изобретение позволяет получить антиген - компонент иммуноферментной тест-системы для выявления антител классов G и М к вирусу Эбола с титром не менее 2⋅106 ТЦПД50/мл. 6 табл., 6 пр.

Способ диагностики степени тяжести цирроза печени смешанной этиологии // 2632101

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике гастроэнтерологии, может быть использовано для диагностики степени тяжести цирроза печени смешанной этиологии.Способ диагностики степени тяжести цирроза печени смешанной этиологии с помощью анализа крови заключается в том, что у пациентов в сыворотке крови определяют уровень интерлейкина-6, и при значении интерлейкина-6 менее или равном 12,7 пг/мл диагностируют легкую (компенсированную) степень цирроза печени, при концентрации интерлейкина-6 более 12,7 пг/мл и менее или равной 26,2 пг/мл диагностируют умеренную (субкомпенсированную) степень, при уровне интерлейкина-6 более 26,2 пг/мл - тяжелую (декомпенсированную) степень цирроза печени.Технический результат: повышение доступности и простоты выполнения при высокой чувствительности, специфичности и объективности способа. 3 пр., 1 табл.

Способ определения цитотоксической активности nk-клеток // 2632109

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для определения цитотоксической активности NK-клеток в отношении клеток трофобласта. Способ включает выделение фракции мононуклеарных клеток, содержащих NK-клетки, из периферической крови. Проводят инкубацию в культуральной среде мононуклеаров в присутствии клеток-мишеней с последующей оценкой количества погибших клеток путем проточной цитофлуометрии. При этом мононуклеары периферической крови, содержащие NK-клетки, инкубируют в культуральной среде DMEM в течение 4 часов в присутствии клеток трофобласта линии Jeg-3. Часть клеток трофобласта инкубируют в культуральной среде DMEM без мононуклеаров в течение 4 часов. Затем определяют количество нежизнеспособных и жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных с мононуклеарами периферической крови, и базовое количество нежизнеспособных и жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных в культуральной среде без мононуклеаров периферической крови. Определяют цитотоксический эффект NK-клеток в отношении клеток трофобласта по формуле: ЦЭ=(X1/Х2)×100-(Х1баз/Х2баз)×100, где ЦЭ - цитотоксическая активность NK-клеток, X1 - количество нежизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных с мононуклеарами периферической крови, Х2 - количество жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных с мононуклеарами периферической крови, Х1баз. - базовое количество нежизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных в культуральной среде без добавления мононуклеаров; Х2баз. - базовое количество жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных в культуральной среде без добавления мононуклеаров. Использование данного способа позволяет получить количественную оценку цитотоксической активности NK-клеток, что дает возможность проводить мониторинг течения беременности. 6 ил., 1 табл., 1 пр.

Способ выделения и исследования атерогенности иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины // 2632118

Изобретение относится к медицине и предназначено для выделения и исследования иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины низкой плотности (ИК-ммЛНП), из сыворотки крови человека. Агрегируют из сыворотки крови человека множественно модифицированные ЛНП в условиях 9,1% ПВП-35000 при комнатной температуре, осаждают центрифугированием, тщательно декантируют. Полученный супернатант инкубируют при 4°С в течение 30 мин. Образовавшиеся агрегаты ИК-ммЛНП осаждают повторным центрифугированием, декантируют, растворяют преципитат в буфере без ПВП и определяют содержание холестерина, триацилглицеринов. Определяют содержание IgG в составе преципитата. Исследуют комплемент-связывающую способность иммунных комплексов, содержащих ммЛНП. Способ может применяться для ранней диагностики субклинического атеросклероза. 1 ил., 5 табл., 3 пр.

Стабилизированный кардиолипиновый антиген для реакции микропреципитации при диагностике сифилиса и способ его получения // 2633087

Группа изобретений относится к медицине и касается диагностических реагентов для клинической лабораторной диагностики сифилитической инфекции. Заявлены стабилизированный кардиолипиновый антиген и способ его получения. Кардиолипиновый антиген получен способом, включающим приготовление буферного раствора с последовательным добавлением друг к другу ЭДТА динатриевой соли, натрия фосфорнокислого 2-замещенного, калия фосфорнокислого 1-замещенного, холин-хлорида, тимеросала (мертиолята), воды очищенной, далее получившийся раствор перемешивают и фильтруют, после чего приготавливают спиртовой раствор липидов, для этого смешивают кардиолипин, лецитин, холестерин и спирт этиловый абсолютированный, затем осуществляют смешение буферного раствора и спиртового раствора. Техническими результатами группы изобретений является:- законченный цикл получения готовой к применению суспензии кардиолипинового антигена на производственном предприятии,- контроль качества и обеспечение длительной специфической активности приготовленного реагента в реакции микропреципитации при диагностике сифилиса с исключением этапа лабораторного приготовления рабочей эмульсии Аг Кл. 2 н.п. ф-лы, 2 пр.

Штамм e.coli - продуцент полноразмерного протективного антигена bacillus anthracis в форме вирусоподобных частиц // 2633504

Изобретение относится к области биотехнологии и касается рекомбинантного штамма E. coli, являющегося продуцентом антигена возбудителя сибирской язвы Bacillus anthracis. Представленный штамм получен на основе протективного антигена Bacillus anthracis путем введения в штамм E. coli BL21 (DE3) плазмиды pGEM-TTPPAG. Плазмида pGEM-TTPPAG содержит в своем составе промотор фага Т7, который контролирует экспрессию слитого гена, представляющего собой полноразмерный ген ТТP бактериофага DT57C (кодирует белок трубки хвоста pb6), слитый через 3’-конец с геном протективного антигена B. anthracis, и экспрессирующегося в форме вирусоподобных частиц. Изобретение обеспечивает выход целевого продукта в оптимальных условиях культивирования не ниже 1 г/л культуры, а также позволяет получить основной защитный антиген возбудителя сибирской язвы B. anthracis в форме вирусоподобных частиц (ВПЧ), имеющих размер 225,4 нм, что облегчает его очистку и потенциально повышает иммуногенность. Полученные ВПЧ, свободные от растворимого клеточного белка, могут использоваться в качестве антигена для иммунизации. 5 ил., 3 табл.

Штамм e. coli - продуцент изолированного домена 1 протективного антигена bacillus anthracis в форме вирусоподобных частиц // 2633508

Изобретение относится к области биотехнологии и касается рекомбинантного штамма E. coli, являющегося продуцентом антигена возбудителя сибирской язвы Bacillus anthracis. Представленный штамм получен на основе протективного антигена Bacillus anthracis путем введения в штамм E. coli BL21 (DE3) плазмиды pTrPPA. Плазмида pTrPPA содержит в своем составе промотор фага Т7, который контролирует экспрессию слитого гена, представляющего собой продукт гена 142 Т5-подобного фага DT57C, известного как белок, терминирующий хвост (TrP), слитый через 3’-конец с доменом 1 протективного антигена B. anthracis, что позволяет при протеолитическом отщеплении в процессе транспорта токсина в цитоплазму клетки-мишени сохранять структурную стабильность антигена, и экспрессирующегося в форме вирусоподобных частиц. Изобретение обеспечивает выход целевого продукта не ниже 1 г/л культуры в оптимальных условиях культивирования, а также позволяет получать изолированный домен 1 основного защитного антигена возбудителя сибирской язвы B. anthracis в форме вирусоподобных частиц, что облегчает его очистку и потенциально повышает иммуногенность. 6 ил.

Способ диагностики пищевой аллергии // 2633749

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии и иммунологии, и может быть использовано для диагностики аллергии. Для этого осуществляют подготовку пробы биологического материала (копрофильтрат) с последующей спектрофотометрией при 405 нм. При этом берут утреннюю пробу фекалий в количестве 1 г, растворяют ее в 9 мл фосфатно-солевого буфера с 0,05% Твином 20 (ФСБТ) рН=7,2. Затем перемешивают до однородной консистенции. После чего центрифугируют в течение 10-20 мин при 3500 об/мин. Отбирают надосадочную жидкость и проводят иммуноферментный анализ на наличие аллергенспецифических IgE-антител к пищевым аллергенам с последующей спектрофотометрией. При определении оптической плотности 0,15 ед. оптической плотности и более диагностируют аллергию к конкретному аллергену. А при определении оптической плотности менее 0,15 ед. диагностируют отсутствие аллергии к конкретному аллергену. Изобретение позволяет повысить точность диагностики пищевой аллергии на 10-12%. 3 пр.