Фиксатор проб для цитологических исследований



Фиксатор проб для цитологических исследований
Фиксатор проб для цитологических исследований
Фиксатор проб для цитологических исследований

 

G01N1/30 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2630983:

Занин Сергей Александрович (RU)
Цуров Алаудин Бесланович (RU)
Туровая Алла Юрьевна (RU)
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России) (RU)
Каде Азамат Халидович (RU)
Трофименко Артем Иванович (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к цитологии, и может быть использовано при гистологических, онкологических, гематологических, патологоанатомических исследованиях. Фиксатор проб для цитологических исследований состоит из смеси, об.%: ХЧ изопропиловый спирт - 88, ЧДА диметилсульфоксид - 2, ЧДА глицерин - 10. Изобретение позволяет уменьшить время фиксации, расширить спектр исследований на фиксированных материалах, повысить безопасность при работе с реагентами и доступность компонентов входящих в состав фиксирующей жидкости, а также обеспечит высокую сохранность клеток. 2 ил., 1 табл.

 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к цитологии, и может быть использовано при гистологических, онкологических, гематологических, патологоанатомических исследованиях.

В исследовательских и клинических медицинских лабораториях большинство цитологических и иммуноцитохимических исследований требует проведения фиксации биоматериала, для чего применяют фиксаторы, благодаря их использованию становится возможным изучение тонкого строения клеток и длительное хранение изучаемого материала.

Морфология любой клетки крови или костного мозга для цитологических и иммуноцитохимических исследований микропрепаратов зависит, прежде всего, от качества фиксации препарата. Для фиксации мазков крови, костного мозга, цитологических препаратов используют метанол, абсолютный этанол, жидкость Никифорова (смесь равных частей спирта и эфира), метаноловый раствор эозина-метиленового синего по Май-Грюнвальду, метаноловый раствор эозина-метиленового синего типа Лейшмана, фиксатор-краситель Райта (Справочник по клиническим лабораторным методам исследования / Под ред. Е.А. Кост, - 2-е изд. - М.: Медицина, 1975. - 393 с.; Тодоров Й. Клинические лабораторные исследования в педиатрии. Изд. Медицина, София, 1963. - 874 с., Bancroft's Theory and Practice of Histological Techniques: Expert Consult: Online and Print, 2002. - 768 с.). Каждый из перечисленных фиксаторов имеет определенные недостатки: высокую специфичность фиксации, значительную токсичность, пожароопасность, высокую стоимость и низкую доступность. Ближайшим аналогом предлагаемого фиксатора является метанол.

Основными недостатками метанола являются: высокая токсичность, пожароопасность, оборот метанола строго контролируется государством, для его приобретения требуется лицензия, значительные расходы на его хранение, что повышает затраты и снижает потребительскую привлекательность метанола (Типовая отраслевая инструкция о порядке получения, перевозки, хранения, отпуска и применения метанола ИБТВ 2-001-82. Стр. 2-5).

Задачи: создание фиксирующей жидкости (фиксатора), не имеющей в своем составе метанола, этанола и других веществ, оборот которых контролируется государством, не являющейся высокотоксичной, недорогой, не требующей больших затрат на хранение и использование, при этом не уступающей в фиксирующих способностях метанолу.

Фиксатор проб для цитологических исследований, состоящий из смеси, об. %:

ХЧ изопропиловый спирт - 88

ЧДА диметилсульфоксид - 2

ЧДА глицерин – 10.

Техническим результатом изобретения является уменьшение времени фиксации, за счет того, что в состав фиксатора включен диметилсульфоксид - он облегчает поступление изопропанола в клетку и увеличивает скорость фиксации; расширение спектра исследований на фиксированных материалах, уменьшение затрат на покупку реагентов, повышение безопасности при работе с реагентами, повышение доступности компонентов входящих в состав фиксирующей жидкости, высокая сохранность клеток, т.к. у изопропанола имеется большое преимущество - он в сравнении с метанолом и этанолом, в меньшей степени повреждает антигены клетки. Данный эффект потенцируется глицерином, что позволяет расширить спектр проводимых иммуноцитохимических реакций при использовании предлагаемого фиксатора.

Основными компонентами фиксатора являются: изопропиловый спирт, диметилсульфоксид, глицерин.

Изопропиловый спирт обладает свойствами вторичных спиртов жирного ряда. Химическая формула (рациональная) изопропилового спирта: CH3СН(ОН)СН3. Это бесцветная жидкость с характерным спиртовым запахом, более резким по сравнению с этанолом (по этому признаку их можно отличить), t - плавления - 89,5°C, t - кипения +82,4°C, плотность 0,7851 г/см3 (при 20°C), t - вспышки 11,7°C.

Диметилсульфоксид (ДМСО) - вязкая бесцветная жидкость с характерным запахом. Химическая формула (рациональная) диметилсульфоксида: (CH3)2SО. ДМСО является важным биполярным апротонным растворителем. Благодаря своей сильной растворяющей и проникающей способности ДМСО часто используют как растворитель в химических и медико-биологических исследованиях.

Глицерин - бесцветная, вязкая, очень гигроскопичная жидкость. Химическая формула (рациональная) глицерина: CH3CH5(OH)3. Химические свойства глицерина типичны для многоатомных спиртов. Для приготовления фиксирующей жидкости необходимо развести реагенты: изопропанол, диметилсульфоксид и глицерин. Так как основным фиксирующим свойством обладает изопропанол, то его концентрация в растворе преобладает над другими реагентами и равна 88%. Концентрация диметилсульфоксида равна 2%, а глицерина составляет 10%. В необходимом количестве вначале смешивают изопропанол и диметилсульфоксид, последним добавляют глицерин. Жидкость хранят при комнатной температуре продолжительное время без существенной потери ее свойств.

Для фиксации клеток крови в качестве доказательства использовали кровь белых лабораторных крыс. Взятие крови проводили из кончика хвоста животного. После нанесения крови на предметные стекла создавали мазок крови. Проводили фиксацию подсушенных на воздухе мазков клеток в охлажденном до +4°C растворе фиксатора в течение 30 секунд, проводили отмывку от фиксатора в охлажденном до +4°C 0,9% растворе натрия хлорида в течение 1 минуты, далее 5 секунд в 0,9% растворе натрия хлорида при комнатной температуре и окунали в дистиллированную воду. Готовые мазки могут храниться довольно продолжительное время, от 1 до 3 лет, в зависимости от условий хранения.

После фиксации клеток, для подтверждения качества фиксации проводили окраску мазков крови методом Романовского-Гимзе. Полученные микропрепараты фотографировали с помощью окулярной камеры «Levenhuk 230» (США) на микроскопе Микромед-6 (Россия). Фотографии представлены ниже (см. Приложение).

Способ исследования мазков апробирован на 100 крысах в течение 3 лет. При этом задачи, поставленные в данном изобретении, решены с достоверностью p<0.05. На зафиксированных мазках предлагаемым фиксатором после окраски показано нормальное строение клеток крови крыс. Обнаруживались эритроциты и различные лейкоциты.

Апробация фиксатора проведена на мазках крови, полученных от 10 здоровых добровольцев в течение 1 года. При этом задачи, поставленные в данном изобретении, решены с достоверностью p<0.05.

Для приготовления 100 мл фиксатора взяли 88 мл ХЧ изопропилового спирта, 2 мл ЧДА диметилсульфоксида, 10 мл ЧДА глицерина. Разместили в емкость с притертой пробкой и путем взбалтывания получили готовую смесь - фиксатор для цитологических исследований.

У крысы, белой самки, массой 205 грамм, из кончика хвоста была взята капля крови. Далее шлифованным стеклом наносили небольшое количество крови на предметное стекло и получали, размазывая кровь по стеклу, мазок крови. Подсушивали мазок. Потом окунали в раствор фиксатора, охлажденного до +4°C на 30 секунд, затем проводили отмывку от фиксатора в охлажденном до +4°C 0,9% растворе натрия хлорида в течение 1 минуты, погружали на 5 секунд в 0,9% раствор натрия хлорида при комнатной температуре и споласкивали в дистиллированной воде.

Готовые мазки после подсыхания окрашивали методом Романовского-Гимзе и перед отправкой в архив заключали готовые препараты в полистирол.

Результат приведен на фиг. 1 и фиг. 2 (приложение) - мазки крови при увеличении в 100 раз. При микроскопическом исследовании мазка крови наблюдали эритроциты (1) и различные лейкоциты (2).

Фиксатор проб для цитологических исследований, состоящий из смеси, об. %:

ХЧ изопропиловый спирт - 88

ЧДА диметилсульфоксид - 2

ЧДА глицерин - 10.



 

Похожие патенты:

Устройство для измерения размеров капель воды водовоздушных потоков содержит корпус, державку с кассетой со стеклами, блок управления, подвижной цилиндрический кожух, закрывающий кассету и приводимый в движение микроэлектродвигателем, установленным в корпусе.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к микробиологии. Способ определения адгезии микроорганизмов на эпителиальных клетках слизистой оболочки полости рта и клеточной линии НЕр 2 заключается в том, что осуществляют забор материала, получают из указанного материала суспензию клеток с концентрацией 2×106 кл/мл, определенной на денситометре, смешивают 0,1 мл полученной суспензии клеток с 0,1 мл суспензии бактерий с концентрацией 2×109 кл/мл, инкубируют 30 мин при 37°С, после инкубирования смесь трехкратно отмывают забуференным физраствором при 600 об/мин по 10 мин, далее удаляют супернатант из осадка и делают мазки на стекле, фиксируют в пламени спиртовки 2-3 с и окрашивают по Граму, под микроскопом подсчитывают в 10 полях зрения среднее количество адсорбированных микроорганизмов - средний показатель адгезии, проведя не менее трех опытов, и считают степень адгезии от 0 до 1,9 - низкоадгезивной, от 2 до 4,9 - среднеадгезивной, свыше 5 - высокоадгезивной, при условии, что в случае забора эпителиальных клеток слизистой оболочки полости рта его осуществляют медицинским ершиком после предварительного полоскания раствором антисептика хитозана на Абисибе.

Изобретение относится к области медицины, а именно - к неонатологии, к способам мониторинга состава конденсата выдыхаемого воздуха новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции, с целью мониторинга состояния пациента.

Группа изобретений относится к технической физике применительно к изучению образцов двухкомпонентных металлических сплавов, а именно исследованиям термозависимостей физических свойств расплавов образцов химически активных сплавов.

Изобретение относится к области обработки металлов давлением и может быть использовано для определения сопротивления деформации металлических материалов путем испытания образцов на сжатие, для построения кривой упрочения, для определения математической зависимости между сопротивлением деформации и степенью деформации при различных температурах.

Изобретение относится к области аналитической химии и может найти применение в области экологии и охраны окружающей среды при контроле загрязнения атмосферы. Производят отбор пробы при протягивании через фильтр атмосферного воздуха.

Группа изобретений относится к контролю загрязняющих атмосферу аэрозолей и газов, а именно к методам и устройствам отбора проб из атмосферного воздуха, обеспечивающих изокинетические условия отбора проб воздуха с борта самолета для определения аэрозольных примесей и/или газообразных примесей.

Изобретение относится к оперативному контролю скрытой и явной зараженности насекомыми зерновой насыпи и может быть использовано при исследовании качества партий продовольственного зерна, предназначенных для хранения в зерноперерабатывающей промышленности и семеноводстве.

Изобретение относится к технике океанографических и гидролого-геологических исследований прибрежных районов шельфа, предназначено для отбора проб минеральной взвеси с различных горизонтов придонного слоя моря в зоне больших скоростей турбулентного потока для получения репрезентативных данных о составе и концентрации взвеси и ее распределении по вертикали.

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к области получения и подготовки образцов проб с водных поверхностей водоемов для проведения бактериологических исследований.

Изобретение относится к петрофизике и может быть использовано при подготовке образцов керна слабоконсолидорованных осадочных горных пород к лабораторным исследованиям. Предлагаемый способ изготовления образца из слабоконсолидированного керна включает заморозку слабоконсолидированного и рыхлого керна в жидком азоте, выбуривание стандартных цилиндрических образцов, помещение полученных цилиндрических образцов в оболочку. В качестве оболочки используют термоусаживаемую трубку, с торцов устанавливают фильтрующие сетки и перфорированные планшайбы из немагнитного и не вступающего в реакцию с жидкостями материала. Обеспечивается сохранение правильной геометрической формы образца, его свойств и возможности проведения различных видов исследований. 1 ил.

Группа изобретений может быть использована в химической, нефтехимической, пищевой и других отраслях промышленности, в которых процесс протекает при высоком давлении и высокой температуре. Способ определения газонасыщения жидкости может быть использован для контроля гетерогенно-каталитических реакций, протекающих при высоком давлении и температуре, таких, например, - реакции гидрирования, окисления. Способ определения газонасыщения реализуется с помощью устройства, состоящего из пробоотборника и измерительного прибора. Пробоотборник включает в себя входной вентиль 1 точной регулировки, капилляр 2, калибровочную микроемкость 3 и выходной вентиль 4 точной регулировки. Измерительный прибор включает в себя мерную бюретку 5, внутреннюю трубку 6, измерительную трубку 7, вспомогательную емкость 8. Входной вентиль 1 точной регулировки плавно открывают, при этом жидкость, насыщенная газом, через капилляр 2 заполняет калибровочную микроемкость 3. Входной вентиль закрывают и плавно открывают выходной вентиль точной регулировки, жидкость под собственным давлением вытекает и попадает в мерную бюретку 5 измерительного прибора. При дросселировании жидкости происходит разделение пробы на газовую и жидкую составляющие и снижение температуры пробы до комнатной. Выделившийся из жидкости газ поступает через внутреннюю трубку 6 в верхнюю часть измерительной трубки 7 и выдавливает запорную жидкость из кольцевого пространства во вспомогательную емкость 8. По разности исходного и конечного уровней запорной жидкости определяют объем газовой составляющей, а объем жидкости измеряют в мерной бюретке. Обеспечивается упрощение конструкции устройства и способа отбора проб, повышение точности определения количества растворенного газового компонента в жидком реагенте, находящемся под высоким давлением, точности определения жидкой компоненты пробы, возможность контроля скорости протекания реакции. 2 н.п. ф-лы, 1 ил.

Изобретение относится к области радиоэкологического мониторинга районов мирных подземных ядерных взрывов в пределах нефтегазоносных бассейнов, в частности к малогабаритным устройствам пробоподготовки горючих природных газовых проб в полевых условиях и перевода опасных для транспортировки горючих природных газовых проб в безопасные водные образцы для дальнейшего определения в них содержания трития в лабораторных условиях методом жидкостно-сцинтилляционной спектрометрии. Устройство включает последовательно установленные в едином корпусе и взаимосвязанные компрессор подачи горючего природного газа или попутного нефтяного газа в инжекционную горелку, водоохлаждаемый конденсатор и контейнер для сбора конденсата водяного пара - конденсированных продуктов горения, при этом инжекционная горелка установлена таким образом, что сопло ее направлено вертикально вниз для подачи продуктов горения во входное отверстие установленного ниже по ее оси водоохлаждаемого конденсатора, а держатель горелки прикреплен к конденсатору с возможностью изменения расстояния между выходом горелки и входом продуктов горения в конденсатор от 4,7 до 5,0 см в зависимости от состава горючего газа. Водоохлаждаемый конденсатор выполнен в виде дугообразно изогнутой под прямым углом трубки с внутренним диаметром не более 15 мм, переходящей в вертикальную трубку, высотой не более 20 см и внутренним диаметром не более 40 мм, закрытую воронкообразным днищем с отверстиями для слива конденсированных продуктов горения в нижеустановленный контейнер. Внутри вертикальной трубки конденсатора соосно установлена охлаждаемая трубка, на которой также соосно установлены по крайней мере три конуса с коаксиальным зазором не менее 2 мм между внутренней поверхностью конденсатора и внешними краями конусов. Техническим результатом является получение конденсата водяного пара в полевых условиях, безопасного для перевозки любым видом транспорта, в стационарную лабораторию, исключая необходимость транспортировки газовой пробы в стальных баллонах. 3 ил.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и касается способа раннего прогнозирования развития инфекционно-воспалительных осложнений (ИВО). У женщин после сверхранних преждевременных родов перед родами устанавливают: имели ли место роды ранее, страдает ли женщина эндокринной патологией и никотинозависимостью, была ли угроза прерывания беременности в первом триместре данной беременности, имеет ли место истмико-цервикальная недостаточность при данной беременности. Берут бактериологический посев содержимого цервикального канала и определяют наличие грамотрицательной микрофлоры. Производят забор венозной крови натощак из правой локтевой вены в вакуумные пробирки в количестве 5 мл и определяют наличие анемии и количество лейкоцитов в плазме венозной крови на биохимическом автоматическом анализаторе «Sapphire 400». С учетом полученных данных вычисляют прогностический индекс по математической формуле. В зависимости от полученного значения индекса прогнозируют высокий риск развития ИОВ у женщин после сверхранних преждевременных родов либо делают заключение об отсутствии данного риска у родильницы. Способ позволяет до родов выявить группу высокого риска развития инфекционно-воспалительных осложнений после сверхранних преждевременных родов за счет определения информативных данных анамнеза и лабораторных данных. 2 пр.
Наверх