Способ определения топирамата в плазме крови



Способ определения топирамата в плазме крови
Способ определения топирамата в плазме крови
Способ определения топирамата в плазме крови
Способ определения топирамата в плазме крови

Владельцы патента RU 2631613:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научный центр неврологии" (ФГБНУ НЦН) (RU)

Изобретение относится к фармакологии и может быть использовано для проведения терапевтического лекарственного мониторинга топирамата у пациентов в условиях стационара. Для этого проводят количественное определение топирамата в плазме крови человека с использованием высокоселективного метода хроматомасс-спектрометрии. Анализ проводят с использованием матрицы раствора внутреннего стандарта - 2,3-4,5-бис-О-изопропилиден-бета-D-фруктопиранозы-N-(4-хлорбензоил)сульфамата и топирамата, полученного экстракцией из плазмы крови. Разделение продуктов экстракции проводят на колонке ХTerra MS C18. Элюирование со скоростью 0,8 мл/мин при температуре колонки 35°C проводят раствором А (10 мМ ацетат аммония) и раствором Б (смесь ацетонитрила и 10 мМ ацетата аммония в отношении 90:10) в соотношении раствор А : раствор Б = 40:60 (%). Топирамат детектируют по четырем дочерним ионам с m/z 95.9, 122.0, 161.9, 280.0, образующимся в результате фрагментации родительского молекулярного иона топирамата с m/z 338.2, а его концентрацию рассчитывают по формуле: С=15,06732079×AR, где С - концентрация топирамата (мкг/мл), AR - отношение площади хроматографического пика топирамата к площади пика внутреннего стандарта. Изобретение позволяет количественно и с высокой достоверностью определять топирамат в плазме крови пациентов. 1 табл., 4 ил.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к фармакологии, и может быть использовано для количественного определения топирамата в плазме крови человека с целью проведения терапевтического лекарственного мониторинга данного препарата у пациентов в условиях стационара.

Топирамат - противоэпилептическое средство относится к классу сульфат-замещенных моносахаридов. Химическое название 2,3:4,5-Ди-O-изопропилиден-бета-D-фруктопиранозы сульфамат; брутто-формула C12H21NO8S.

В связи с появлением новых технологий в фармакокинетике, фармакогенетике и аналитической химии современная медицина выходит на качественно новый этап развития. Базисом рациональной терапии в современной медицине становится терапевтический лекарственный мониторинг - способ управления и контроля эффективности фармакотерапии в реальном времени. Как известно, главная цель рациональной терапии - максимальный лечебный эффект при минимальном побочном действии. Для достижения этой цели в клинике осуществляется разнонаправленный мониторинг больных, с целью получения исчерпывающей информации об их состоянии. Такого рода информацию можно получить различными способами, в том числе и терапевтический лекарственный мониторинг. Топирамат уменьшает частоту возникновения потенциалов действия, характерных для нейрона в состоянии стойкой деполяризации, что свидетельствует о зависимости блокирующего действия препарата на натриевые каналы от состояния нейрона. Топирамат потенцирует активность GABA в отношении некоторых подтипов GABA-рецепторов (в т.ч. GABAA-рецепторов), а также модулирует активность самих GABAA-рецепторов, препятствует активации каинатом чувствительности каинат/АМПК-рецепторов к глутамату, не влияет на активность N-метил-D-аспартата в отношении NMDA-рецепторов. Эти эффекты топирамата являются дозозависимыми при концентрации топирамата в плазме от 1 мкМ до 200 мкМ, с минимальной активностью в пределах от 1 мкМ до 10 мкМ. Кроме того, топирамат угнетает активность некоторых изоферментов карбоангидразы, однако этот эффект у топирамата более слабый, чем у ацетазоламида и, по-видимому, не является главным в противоэпилептической активности топирамата.

На сегодняшний день известен способ оптимизации режима дозирования противоэпилептических препаратов, в том числе и топирамата, путем забора биологического материала и проведения полимеразной цепной реакции по генам-кандидатам с последующим анализом их аллельных вариантов. Далее, путем сопоставления выявленного аллельного полиморфизма с данными о его влиянии на эффективную терапевтическую дозу и возникновении побочных эффектов, производится расчет эффективной терапевтической дозы противоэпилептического препарата и определение риска развития побочных эффектов. Предложенное изобретение позволяет с высокой точностью определять эффективную терапевтическую дозу и наличие риска развития побочных эффектов (RU 2574204, 10.02.2016). Это эффективный метод молекулярной биологии, но в то же время он довольно трудоемок и требует наличия опытных специалистов по проведению данной реакции. Необходимо отметить, что наличие фармакогенетической информации о пациенте действительно обладает определенной прогностической ценностью, однако фармакогенетический скриннинг сам по себе не отменяет необходимости измерения реальной концентрации антиконвульсантов в крови конкретного пациента в процессе индивидуализации лекарственной терапии.

Известен также способ определения топирамата в плазме крови путем жидкостной хроматографии - масс-спектрометрии, в котором в качестве внутреннего стандарта для определения топирамата используется дейтерированный топирамат (топирамат-d12), при этом детектирование проводится с использованием интерфейса мультимодального - электрораспыления по молекулярному иону топирамата с m/z 338.1. В качестве аналитического оборудования использовалось устройство LC (модель 1200, компания Agilent Technologies, Inc.) с бинарным насосом и автосемплером в сочетании с масс-селективным детектором (LOMSD SL, Agilent Technologies, Inc.). Точность варьировала в диапазоне от 0,075 до 7,5 мкг/мл. Определение известного значения в соответствии с предписанной концентрацией составляла от 96.93% и 97,68%.

Наиболее близким техническим решением является способ определения топирама в плазме крови с помощью хроматомасс-спектрометрии причем в качестве внутреннего стандарта для определения топирамата используется дейтерированный топирамат (топирамат-d12) (Kamal М. Matar Therapeutic drug monitoring of topiramate by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Clinica Chimica Acta, 2010, pp. 1-6, в статье Matar K., 2010). Применение в обоих этих способах в качестве внутреннего стандарта молекулы топирамата, в котором атомы водорода замещены дейтерием в целом оправдано и имеет ряд серьезных преимуществ: одинаковый с аналитом коэффициент экстракции, схожее хроматографическое поведение, одинаковый характер масс-фрагментации с анализируемым соединением. Однако дейтерированные аналоги имеют ряд серьезных недостатков, лимитирующих их широкое применение. Прежде всего это высокая цена и труднодоступность в сравнении с недейтерированными веществами. Вторая особенность связана с содержанием незамещенных дейтерием атомов водорода в молекуле. При их наличии приходится лимитировать верхнюю концентрацию внутреннего стандарта, дабы он не давал вклада в сигнал измеряемого вещества. Кроме того, при длительном нахождении в водных растворах в молекулах дейтерированных соединений может происходить самопроизвольный процесс замены дейтерия на наиболее распространенный изотоп водорода (протий), что может влиять на параметры количественного анализа, внося дополнительную погрешность в измерения. Это обуславливает их ограниченный срок годности в сравнении с недейтерированными соединениями. Также с этим связана необходимость создания особых условий хранения для этих соединений (-20°С).

Технический результат заявленного изобретения заключается в создании способа определения топирамата в плазме крови с высокой воспроизводимостью и точностью, наиболее адаптированного для решения задач экспериментальной и клинической фармакокинетики.

Технический результат достигается тем, что проводят количественное определение топирамата в плазме крови путем ее анализа на наличие топирамата высокоселективным методом хроматомасс-спектрометрии, при этом хроматомасс-спектрометрию осуществляют с использованием матрицы в виде плазмы крови с топираматом и внутреннего стандарта, вещества, близкого по строению молекулы к анализируемому веществу - 2,3-4,5-бис-О-изопропилиден-бета-D-фруктопиранозы-N-(4-хлорбензоил)сульфамата, разделение продуктов экстракции проводят на обращенно-фазной хроматографической колонке 4,6×150 мм, при этом в качестве элюента применяют 10 мМ ацетат аммония - раствор А и смесь ацетонетрила и 10 мМ ацетата аммония в отношении 90:10 - раствор Б, взятых в процентном соотношении раствора А к раствору Б 40:60 соответственно, с температурой разделения 35°С, и скоростью подачи элюента 0,8 мл/мин, детектирование топирамата проводят по четырем дочерним ионам с m/z 95.9, 122.0, 161.9, 280.0, образующихся в результате фрагментации родительского молекулярного иона топирамата с m/z 338.2, а его концентрацию рассчитывают по формуле: С=15,06732079×AR, где С - концентрация топирамата (мкг/мл), AR - отношение площади хроматографического пика топирамата к площади пика внутреннего стандарта.

Способ осуществляется следующим образом.

Все растворители имели квалификацию «Для хроматографии», реактивы - не ниже «ч.д.а.». Для приготовления растворов стандартных образцов использовали субстанции стандартов топирамата (производства Sigma-Aldrich, США) и 2,3-4,5-бис-O-изопропилиден-бета-D-фруктопиранозы (4-хлорбензоил)сульфамата (см. фиг. 1). На фигуре 1 показан стандарт топирамата - C19H24ClNO9S Exact Mass: 477,09. В качестве биологической матрицы использовали плазму крови.

Для выделения топирамата из плазмы крови и очистки экстракта используют метод жидкостной экстракции. К образцу плазмы крови объемом 500 мкл добавляют 50 мкл внутреннего стандарта (2,3-4,5-бис-О-изопропилиден-бета-D-фруктопиранозы-N-(4-хлорбензоил)сульфамата, 100 мкг/мл) и 500 мкл пересыщенного раствора бикарбоната натрия (NaHCO3, 1,14 моль/л) с целью повышения коэффициента извлечения топирамата. Затем приливают 5 мл органического экстрагента - этилацетата. Образовавшуюся смесь встряхивают в течение 5 минут на вортекс-миксере Heidolph Ultra, а затем центрифугируют на скорости 3500 об/мин для разделения органического и гидрофильного слоя. Надосадочную жидкость осторожно декантируют и упаривают в центрифужном вакуумном концентраторе Eppendorf Concentrator 5301 при температуре 60°С. Полученный сухой остаток перерастворяют в 500 мкл метанола. Образец переносят в хроматографическую виалу, которую помещают в автосамплер хроматографа для дальнейшего хромато-масс-спектрометрического анализа. Раствор инжектируют в петлю хроматографа в объеме 10 мкл.

В данных условиях коэффициент экстракции для топирамата составляет 88,97±1,25%, для внутреннего стандарта - 90,96±0,93%.

Для высокоэффективной жидкостной хромато-масс-спектрометрии используют хроматограф - «Finnigan Surveyor LC Pump Plus», детектор - масс-спектрометрический детектор «LCQ Fleet MS» (квадрупольная ионная ловушка) и аналитическую колонку - обращенно-фазную колонку XTerra MS С18 фирмы Waters, США (4,6×150 мм; 5 мкм).

Масс-спектрометрическое детектирование топирамата проводят, по четырем дочерним ионам с m/z 95.9, 122.0, 161.9, 280.0, образующимся в результате фрагментации родительского молекулярного иона топирамата с m/z 338.2 при нормализованной энергии соударений 23 eV. Масс-спектр второго порядка для топирамата представлен на фиг. 2А и для 2,3-4,5-бис-О-изопропилиден-бета-D-фруктопиранозы-N-(4-хлорбензоил)сульфамата на фиг. 2Б1 (по вертикали интенсивность (Intensity) по горизонтали масса заряда (m/z).

Внутренний стандарт детектируют по дочерним ионам с m/z 154.90, 234.00, 250.00, 262.00, 418.20, образующимся в результате распада молекулярного иона внутреннего стандарта с m/z 476.4. Масс-спектрометр работал в режиме регистрации ионов, отрицательно заряженных электроспреем (ESI), создаваемым напряжением в 5 кВ. Скорость потока газа-небулайзера (азота): 5 л/мин, давление на распылителе - 100 psi. Температура интерфейса капилляра составляла 350°С, температура нагревателя - 300°С. Амплитуда возбуждения на концевых электродах ловушки 0,1 В. В качестве демпфирующего газа в ионной ловушке использовался гелий. Данные обрабатывались с помощью Xcalibur 2.1 w/Foundation 1.0.1.

Разделение осуществляют на обращенно-фазной хроматографической колонке XTerra MS С18 фирмы Waters, США, 5 мкм, 4,6×150 мм. Подвижная фаза состоит из двух растворов: 10 мМ ацетата аммония, (раствор А) и смеси ацетонитрила и 10 мМ ацетата аммония в соотношении 90:10 соответственно (раствор Б). Растворы А и Б взяты в процентном соотношении 40А:60Б. Работа проводилась в изократическом режиме элюирования. Скорость потока подвижной фазы составляла 0,8 мл/мин. Объем пробы - 10 мкл. Температура разделения 35°С. Продолжительность хроматографирования - 10 минут. Время удерживания аналита - 3,22±0,05 минут. Время удерживания внутреннего стандарта (2,3-4,5-бис-O-изопропилиден-бета-D-фруктопиранозы-N-(4-хлорбензоил)сульфамата) - 2,75±0,05 минут.

Демонстрационная хроматограмма образца плазмы крови с концентрацией топирамата 10 мкг/мл представлена на фигуре 3, на которой видна хроматограмма экстрагированного образца плазмы крови с концентрацией топирамата 10 мкг/мл, верхний пик - пик аналита, нижний пик - пик внутреннего стандарта (по вертикали относительное содержание (Relative abundance), по горизонтали время (Time) в минутах).

Для приготовления калибровки готовили маточные растворы стандартов топирамата и внутреннего стандарта в метаноле с концентрациями 1 мг/мл. Раствор топирамата применяли для приготовления растворов рабочих стандартных образцов на плазме крови с концентрациями 0,156 мкг/мл; 0,313 мкг/мл; 0,625 мкг/мл; 1,25 мкг/мл; 2,5 мкг/мл; 5 мкг/мл; 10 мкг/мл; 20 мкг/мл. Раствор внутреннего стандарта с концентрацией 1 мг/мл разбавляли в 10 раз для получения рабочего раствора внутреннего стандарта с концентрацией 100 мкг/мл. Калибровочная кривая топирамата в плазме крови показана на фиг. 4.

Количественное определение осуществляли по градуировочной зависимости для топирамата в плазме крови и рассчитывали по формуле С=15,06732079×AR, где С - концентрация топирамата (мкг/мл), AR (Area Ratio) - отношение площадей пиков аналита и внутреннего стандарта. Коэффициент корреляции составил R2=0.9973, что соответствует надлежащей аналитической аппроксимации. Предел количественного определения - 0,625 мкг/мл.

Точность и воспроизводимость

Точность выражалась в виде коэффициента вариации (% C.V.) для каждой серии образцов согласно уравнению:

, где

SD - стандартное отклонение серии определений;

- среднее арифметическое значение полученных концентраций.

Воспроизводимость измерялась, как процент отклонения (% dev.) от теоретического значения по формуле , где

- среднее арифметическое значение полученных концентраций;

Для метрологической валидации полученной методики определяли точность в течение рабочего дня. Каждый из образцов, предназначенных для контроля качества, анализировали в течение 1 рабочего дня (6 определений). Результаты представлены в таблице 1.

Относительная ошибка определения топирамата не превышала 10%.

Таким образом, заявленный способ обладает высокой эффективностью в проведении анализа, не требует использования большого количества химических реактивов. Высокая точность и чувствительность данного метода количественного определения топирамата в плазме крови обеспечивает идентификацию вещества с установленными характеристиками погрешности, что позволяет ее использовать как в экспериментальной, так и клинической фармакокинетики препарата.

Способ количественного определения топирамата в плазме крови, включающий анализ крови на наличие топирамата высокоселективным методом хроматомасс-спектрометрии, отличающийся тем, что проводят хроматомасс-спектрометрию с использованием матрицы в виде плазмы крови с топираматом и внутреннего стандарта, вещества, близкого по строению молекулы к анализируемому веществу - 2,3-4,5-бис-О-изопропилиден-бета-D-фруктопиранозы-N-(4-хлорбензоил)сульфамата, разделение продуктов экстракции проводят на обращенно-фазной хроматографической колонке 4,6×150 мм, при этом в качестве элюента применяют 10 мМ ацетат аммония - раствор А и смесь ацетонитрила и 10 мМ ацетата аммония в отношении 90:10 - раствор Б, взятых в процентном соотношении раствора А к раствору Б 40:60 соответственно, с температурой разделения 35°C, и скоростью подачи элюента 0,8 мл/мин, детектирование топирамата проводят по четырем дочерним ионам с m/z 95.9, 122.0, 161.9, 280.0, образующимся в результате фрагментации родительского молекулярного иона топирамата с m/z 338.2, а его концентрацию рассчитывают по формуле С=15,06732079×AR, где С - концентрация топирамата (мкг/мл), AR - отношение площади хроматографического пика топирамата к площади пика внутреннего стандарта.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования развития печеночной недостаточности при механической желтухе. Дополнительно проводят приготовление мазков крови с последующим сканированием эритроцитов методом полуконтактной атомно-силовой микроскопии и измерения их параметров, затем определяют индекс печеночной недостаточности, учитывая показатель значения билирубина, гаммаглютамилтрасферазы, аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрасферазы, относительный объем эритроцита, который определяют как ΔV=V/V0, где V - объем эритроцита в эксперименте, a V0 - объем эритроцита в норме, оба объема вычисляют по данным атомно-силовой микроскопии.

Группа изобретений относится к медицине и предназначена для улучшения структуры кишечной микробиоты. Описано применение берберина, позволяющее избирательно увеличивать первую популяцию кишечной микробиоты при одновременном уменьшении второй популяции кишечной микробиоты у субъекта.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования осложнений у пациента в острый период политравмы путем исследования показателей крови и мочи, отличающийся тем, что при поступлении у пациента определяют показатели концентрации глюкозы, общего белка и натрия в сыворотке крови, фибриногена в плазме, белка в моче, в цельной крови количество лейкоцитов и тромбоцитов, определяют активированное частичное тромбопластиновое время, тромбиновое время и протромбиновый индекс, сравнивают полученные результаты с показателями нормы, используемыми в лаборатории, и оценивают вероятность развития летального исхода и осложнений в виде пневмонии, жировой эмболии и нагноения.

Изобретение относится к диагностике, а именно к способу прогнозирования развития бронхиальной астмы у больных полипозным риносинуситом. Способ прогнозирования развития бронхиальной астмы у больных полипозным риносинуситом, заключающийся в том, что в крови пациентов определяют молекулы средней массы (МСМ), ед.оп.пл., измеряют температуру выдыхаемого и вдыхаемого воздуха (Т выд), °С, и (Т вдых), °С, и определяют разность температур (ΔT), °С, между температурой вдыхаемого и выдыхаемого воздуха, прогноз осуществляют с помощью дискриминантного уравнения: D=+5,028×Т выд-0,405×ΔТ-8,910×МСМ, где граничное значение дискриминантной функции 152,16; при D больше или равно граничному значению дискриминантной функции прогнозируют отсутствие развития бронхиальной астмы у больных с полипозным риносинуситом; при D меньше граничного значения дискриминантной функции прогнозируют развитие бронхиальной астмы у больных с полипозным риносинуситом.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогноза развития постперикардиотомного синдрома (ПКТС) у больных ишемической болезнью сердца (ИБС), перенесших аортокоронарное шунтирование, характеризующийся тем, что у пациентов через сутки после операции определяют активность аргиназы в эритроцитах и арилэстеразную активность параоксоназы (PON) в плазме крови, затем рассчитывают коэффициент К по формуле: К = аргиназа/PON, где «аргиназа» - это активность аргиназы, МЕ/(г Hb); «PON» - арилэстеразная активность параоксоназы, МЕ/(мг белка); и при значении коэффициента К, равном 0,39 и более, у пациента прогнозируют развитие ПКТС с вероятностью 67%.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для лечения эндометриоза при нежелательности беременности. Для этого определяют коэффициент активности эндометриоза (КАЭ) как отношение значений уровня клеток целомического эпителия СА-125 на 2-3 и 7-9 дни менструального цикла (МЦ), при значении КАЭ до 1,4 пациентке назначают постоянное использование комбинированных гормональных контрацептивов (КГК); при КАЭ от 1,5 до 2,9 назначают или КГК в непрерывном режиме, или гестагены также в непрерывном режиме.
Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки риска развития простудных заболеваний у лиц пожилого возраста, заключающийся в исследовании ротовой жидкости пациента пожилого возраста с определением концентрации иммуноглобулина А и концентрации иммуноглобулина G, отличающийся тем, что исследование проводят через час после еды, двукратно с разницей в 30 дней и полость рта за 15 минут до забора ротовой жидкости промывают раствором натрия хлорида 0,9%, далее рассчитывают отношение концентрации иммуноглобулина А к концентрации иммуноглобулина G и в случае снижения отношения концентрации иммуноглобулина А к концентрации иммуноглобулина G при втором исследовании в 2 раза и более пациента относят в группу высокого риска развития простудных заболеваний у лиц пожилого возраста.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования исхода беременности при угрожающих преждевременных родах. Способ прогнозирования исхода беременности при угрожающих преждевременных родах путем исследования периферической венозной крови до начала сохраняющей терапии у беременных женщин с клиническими признаками угрожающих преждевременных родов в сроках гестации 24-34 недели, заключающийся в том, что в плазме крови определяют показатель резистентности активного V фактора свертывания крови к активированному протеину С и при его значении, равном 0,94 или менее, прогнозируют преждевременные роды.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики угрожающих преждевременных родов. Способ диагностики угрожающих преждевременных родов, включающий биохимическое исследование периферической венозной крови у беременных женщин, заключающийся в том, что в сроки гестации 24-34 недели в плазме крови определяют концентрацию норадреналина и при ее значении, равном 167,6 пг/мл или менее, диагностируют угрожающие преждевременные роды.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к микробиологии. Способ определения адгезии микроорганизмов на эпителиальных клетках слизистой оболочки полости рта и клеточной линии НЕр 2 заключается в том, что осуществляют забор материала, получают из указанного материала суспензию клеток с концентрацией 2×106 кл/мл, определенной на денситометре, смешивают 0,1 мл полученной суспензии клеток с 0,1 мл суспензии бактерий с концентрацией 2×109 кл/мл, инкубируют 30 мин при 37°С, после инкубирования смесь трехкратно отмывают забуференным физраствором при 600 об/мин по 10 мин, далее удаляют супернатант из осадка и делают мазки на стекле, фиксируют в пламени спиртовки 2-3 с и окрашивают по Граму, под микроскопом подсчитывают в 10 полях зрения среднее количество адсорбированных микроорганизмов - средний показатель адгезии, проведя не менее трех опытов, и считают степень адгезии от 0 до 1,9 - низкоадгезивной, от 2 до 4,9 - среднеадгезивной, свыше 5 - высокоадгезивной, при условии, что в случае забора эпителиальных клеток слизистой оболочки полости рта его осуществляют медицинским ершиком после предварительного полоскания раствором антисептика хитозана на Абисибе.

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития аномальных маточных кровотечений пубертатного периода у девочек-подростков, рожденных с задержкой внутриутробного роста плода. Способ прогнозирования включает определение показателей полового развития девочки, в частности индекса массы тела и возраст менархе, определение гомозиготы ТТ в гене NOS3 (-786) T>C, определение гомозиготы СС в гене ESR1 (-397) T>C и вычисление прогностического индекса. При значении прогностического индекса больше 0 делают заключение о низком риске аномальных маточных кровотечений пубертантного периода; при значении прогностического индекса меньше или равно 0 прогнозируют высокий риск формирования аномальных маточных кровотечений пубертантного периода. Изобретение обеспечивает своевременную диагностику, позволяет повысить результативность лечения и избежать серьезных осложнений и рецидивов аномальных маточных кровотечений пубертантного периода. 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования степени вероятности полной регрессии при проведении неоадъювантной химиотерапии у пациенток с люминальным В молекулярно-генетическим субтипом рака молочной железы. Для этого проводят гистологическое исследование препаратов ткани первичного новообразования до проведения неоадъювантной химиотерапии. При этом в препаратах оценивают инфильтративный компонент, в котором определяют наличие трабекулярных, тубулярных, альвеолярных, солидных структур и дискретных групп опухолевых клеток. Затем оценивают стромальный компонент. В инфильтративном компоненте опухоли определяют наличие или отсутствие дискретных групп опухолевых клеток. В строме опухоли оценивают выраженность воспалительной инфильтрации, степень злокачественности. Проводят иммуногистохимическое исследование для оценки экспрессии bcl-2, Р-гликопротеина в клетках воспалительного инфильтрата, мембранной экспрессии MRP2 в опухолевых клетках. Степень злокачественности X1 при первой степени оценивают в 1 балл, при второй в 2 балла, третьей в 3 балла. Присутствие в инфильтративном компоненте дискретных групп клеток Х2 оценивают отсутствие в 1 балл, присутствие в 2 балла. Присутствие в воспалительном инфильтрате bcl-2-позитивных клеток Х3 оценивают в 2 балла, отсутствие в 1 балл. Позитивную экспрессию Р-гликопротеина в клетках воспалительного инфильтрата Х4 оценивают в 2 балла, отсутствие в 1 балл. Наличие мембранной экспрессии MRP2 в опухолевых клетках Х5 оценивают в 2 балла, отсутствие в 1 балл. Далее рассчитывают значение уравнения регрессии Y по формуле: Y=5-3,0X1-18,5Х2-25,5Х3+75,6X4-19,8X5, далее, значение вероятности достижения полной регрессии опухоли Р определяют по формуле: Р=eY/(1+eY), и при Р≥0,5 прогнозируют высокую, а при Р<0,5 - низкую вероятности полной регрессии при проведении неоадъювантной химиотерапии. 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, акушерству и гинекологии, и может использоваться для ведения беременных с инфекционной патологией урогенитального тракта на ранних сроках гестации. Для этого у беременных исследуют состояние мукозального иммунитета, течение инфекционного и гестационного процессов. При выявлении клинической картины невынашивания беременности, дисбиоза микробиоценоза биотопа слизистых открытых полостей или воспалительного процесса биотопа слизистых открытых полостей, наличии клинических проявлений инфекционного процесса и/или верификации возбудителя проводят профилактику прерывания беременности, витаминотерапию, антибиотикотерапию, назначают иммуноглобулин и иммуномодулятор с антимикробной активностью. При выявлении клинической картины невынашивания беременности, нормоценоза или промежуточного типа микробиоценоза биотопа слизистых открытых полостей, клинических проявлений инфекционного процесса и/или верификации возбудителя проводят профилактику прерывания беременности, витаминотерапию, антибиотикотерапию, назначают иммуномодулятор с антимикробной активностью. При физиологическом течении беременности, выявлении дисбиоза микробиоценоза биотопа слизистых открытых полостей или воспалительного процесса биотопа слизистых открытых полостей, клинических проявлений инфекционного процесса и/или верификации возбудителя назначают витаминотерапию и иммуномодулятор с антимикробной активностью. При физиологическом течении беременности, выявлении нормоценоза или промежуточного типа микробиоценоза биотопа слизистых открытых полостей, клинических проявлений инфекционного процесса и/или верификации возбудителя проводят витаминотерапию. Способ позволяет достичь адекватного медикаментозного и иммунологического лечения за счет проведения персонализированного подхода к выбору тактики лечения при профилактике осложнений антибактериальной терапии путем уточнения показаний к ее проведению. 5 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и касается способа раннего прогнозирования развития инфекционно-воспалительных осложнений (ИВО). У женщин после сверхранних преждевременных родов перед родами устанавливают: имели ли место роды ранее, страдает ли женщина эндокринной патологией и никотинозависимостью, была ли угроза прерывания беременности в первом триместре данной беременности, имеет ли место истмико-цервикальная недостаточность при данной беременности. Берут бактериологический посев содержимого цервикального канала и определяют наличие грамотрицательной микрофлоры. Производят забор венозной крови натощак из правой локтевой вены в вакуумные пробирки в количестве 5 мл и определяют наличие анемии и количество лейкоцитов в плазме венозной крови на биохимическом автоматическом анализаторе «Sapphire 400». С учетом полученных данных вычисляют прогностический индекс по математической формуле. В зависимости от полученного значения индекса прогнозируют высокий риск развития ИОВ у женщин после сверхранних преждевременных родов либо делают заключение об отсутствии данного риска у родильницы. Способ позволяет до родов выявить группу высокого риска развития инфекционно-воспалительных осложнений после сверхранних преждевременных родов за счет определения информативных данных анамнеза и лабораторных данных. 2 пр.

Изобретение относится к медицине, онкологии, радиологии, лучевой терапии. Способ лучевой терапии (ЛТ) орофарингеального рака (ОФР) на фоне соответствующей химиотерапии включает предварительное определение у больного массы тела и диаметра шеи и предлучевую подготовку с использованием КТ-топометрии и расчета дозиметрического плана. При этом перед началом лечения у больного дополнительно определяют содержание альбумина плазмы крови. В качестве ЛТ используют 3D конформную ЛТ, причем при достижении суммарной очаговой дозы облучения больного (СОД) 20 Гр повторно определяют массу тела, содержание альбумина плазмы крови и диаметр шеи. При снижении хотя бы одного из этих показателей более чем на 5% повторно выполняют КТ-топометрию и расчет дозиметрического плана облучения, в соответствии с чем продолжают ЛТ до СОД 40 Гр. Затем снова определяют показатели массы тела, альбумина плазмы крови и диаметра шеи больного и при повторном снижении хотя бы одного показателя более чем на 5% вновь корректируют дозиметрический план, в соответствии с которым продолжают ЛТ до достижения СОД 70 Гр. Способ обеспечивает оптимальную тактику адаптивного химиолучевого лечения благодаря своевременной коррекции дозиметрического плана, исключая превышение пороговых значений предельно допустимых доз для органов риска, попадающих в зону облучения, а также исключая некорректность охвата 95%-ной изодозой первичной опухоли и зон регионарного лимфооттока. 1 пр., 1 табл.

Изобретение относится к области медицинской и ветеринарной иммунологии, а именно к устройствам для определения функциональной активности комплемента в крови человека при диагностике ряда заболеваний. Устройство включает корпус, внутри которого расположен измерительный блок, содержащий модуль для размещения тестируемых образцов, источники света для подсветки образцов и видеокамеры с микрообъективами для фиксации состояния образцов, блок питания и микроконтроллер, подсоединенный к персональному компьютеру. Модуль для размещения тестируемых образцов выполнен в виде стрипа с ячейками и снабжен узлом встряхивания. Видеокамеры с микрообъективами объединены в блок таким образом, что каждая ячейка стрипа имеет размещенную над ней видеокамеру с микрообъективом. Измерительный блок снабжен узлом термостатирования, выполненным в виде теплового насоса на основе элемента Пелтье и термодатчика. При этом источники света для подсветки образцов размещены под каждой ячейкой стрипа и образуют осветительный узел темнопольной микроскопии. Обеспечивается повышение воспроизводимости анализов, снижения трудоемкости их проведения, сокращение времени на подготовку образцов, повышение надежности устройства и уменьшение его габаритов. 1 з.п. ф-лы, 4 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и ортопедии, и может быть использовано для определения оптимального интервала между операциями эндопротезирования при лечении двусторонних заболеваний тазобедренных или коленных суставов. Способ включает индивидуальное обследование больного, через 3 месяца после первой операции исследуют дополнительно Т-критерий шейки бедренной кости на стороне планируемой операции, уровень остеокальцина, уровень β-Cross laps, уровень витамина Д в сыворотке крови. Если 10-летний риск основных остеопоротических переломов менее 10%, Т-критерий шейки бедренной кости на стороне планируемой операции больше -1 SD, уровень остеокальцина, уровень β-Cross laps, уровень витамина Д в сыворотке крови в норме, то операцию второго эндопротезирования сустава можно выполнять через 3 месяца после первой. Если 10-летний риск основных остеопоротических переломов более 10% и менее 20%; Т-критерий шейки бедренной кости на стороне планируемой операции меньше -1 SD и больше -2,5 SD; уровень остеокальцина ниже нормы, уровень β-Cross laps выше нормы, уровень витамина Д в сыворотке крови ниже нормы, то операцию второго эндопротезирования сустава можно выполнять не ранее чем через 6 месяцев после первого эндопротезирования. Если 10-летний риск основных остеопоротических переломов более 20%; Т-критерий шейки бедренной кости на стороне планируемой операции меньше -2,5 SD, уровень остеокальцина ниже нормы, уровень β-Cross laps выше нормы, уровень витамина Д в сыворотке крови ниже нормы, то операцию второго эндопротезирования можно выполнять не ранее чем через 12 месяцев после первого. Использование изобретения позволяет оценить риски ранней асептической нестабильности эндопротеза, определить оптимальный срок выполнения второй операции, снизить количество осложнений, снизить затраты на лечение и улучшить качество жизни пациентов. 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области экологии, фармакологии, токсикологии, медицины и касается автоматизации определения подвижности биологических тест-объектов на 96-луночном планшете. Прибор для измерения подвижности тест-объектов в исследованиях для определения активности комплемента сыворотки крови содержит корпус, установочный узел для размещения планшета с пробами в лунках, шаговый привод, блок управления, подключенный к персональному компьютеру, и фотометрический модуль, представляющий собой модуль динамического светорассеяния, выполненный в виде источника излучения, размещенного над лунками планшета, и фотоприемника излучения, расположенного под лунками планшета и под углом к осевой линии источника излучения. Достигается ускорение анализа, повышение надежности механической части прибора, уменьшение габаритов устройства, а также - удобство пользования. 1 пр., 3 ил.

Изобретение относится к области химии, а именно к аналитической химии, электрохимии и биохимии, и предназначено для идентификации пептидов и выявления аминокислотных замен в их структурах. Для осуществления способа на печатный графитовый электрод наносят аликвоту 60-100 мкл 50 мкМ раствора пептида в буферном растворе. Регистрируют квадратно-волновую вольтамперограмму окисления в области от 0 до 1,5 В (отн. Ag/AgCl). Измеряют потенциалы максимумов и высоты полученных сигналов окисления аминокислотных остатков - пиков или волн и фиксируют результаты. По различию в положении потенциалов максимумов сигналов окисления и их интенсивности, зная аминокислотные последовательности для группы исследуемых пептидов или имея базу данных, полученную ранее, проводят идентификацию пептидов. При сравнении результатов относительно контроля - «нормального» пептида, констатируют аминокислотную замену. Использование изобретения обеспечивает электрохимическую идентификацию пептидов и выявление в их структуре аминокислотных замен. 1 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, и может быть использовано для индивидуальной количественной оценки ранних проявлений неблагоприятного побочного действия кортикостероидных препаратов на иммунологические процессы в организме ребенка при терапии нефротического синдрома. Для этого используют показатели уровня лейкоцитов периферической крови (Алейк), процентного содержания в крови всех форм нейтрофилов (Анейт) и моноцитов (Амон), на основании которых проводят расчет коэффициента модификации Млейк – лейкоцитов, Мнейт – нейтрофилов, Ммон – моноцитов по формулам: Млейк = (Алейк – 3,5) х 1,1; Мнейт = (Анейт – 19) х 0,5; Ммон = (Амон – 2) х 2. С учетом коэффициента модификации каждого показателя рассчитывают индекс иммунологических реакций (ИИР) по формуле: при значениях ИИР > 13,5 ед. определяют неблагоприятные побочные реакции кортикостероидных препаратов на иммунологические процессы в организме ребенка. Способ позволяет своевременно провести мероприятия по фармакологической коррекции возникающих неблагоприятных побочных реакций процессы в организме ребенка. 9 табл., 3 пр.
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 2016-06-03 2017-09-28T10:02:22
Наверх