Способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии

Авторы патента:

Шитлина Алена Игоревна (RU)

Темерова Елена Валентиновна (RU)

Бойко Татьяна Владимировна (RU)

Герунова Людмила Карповна (RU)

Герунов Тарас Владимирович (RU)

G01N30/90 - плоскостная хроматография, например хроматография в тонком слое или бумажная хроматография

G01N21/35 - с использованием инфракрасного излучения (G01N 21/39 имеет преимущество)

Владельцы патента RU 2633013:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина" (RU)

Изобретение относится к ветеринарной токсикологии и может быть использовано при определении содержания левомицетина в кормах животного происхождения. Заявленный способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии включает отбор пробы корма массой от 200 до 500 мг, гомогенизацию, экстракцию 95% этанолом, фильтрацию экстракта, обезвоживание сернокислым натрием, упаривание, растворение сухого остатка в этилацетате, введение растворенного сухого остатка в жидкостный хроматограф с детектором спектрофотометрическим UVV 104М и колонкой Диасфер-110С-16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм, с использованием элюента: смеси ацетонитрил-вода-диэтиламин в соотношении 30:70:0,1, обработку результатов анализа. Технический результат – повышение чувствительности и избирательности способа, а также сокращение длительности проведения анализа. 1 табл.

Изобретение относится к ветеринарной токсикологии и может быть использовано при определении содержания левомицетина в кормах животного происхождения.

Известен способ количественного определения левомицетина в пищевых продуктах и фармпрепаратах, заключающийся в том, что левомицетин переводят из пробы в раствор, проводят кислотный гидролиз и осаждают белок из гидролизата с последующим вольтамперометрическим определением, вольтамперометрическое определение левомицетина осуществляют путем регистрации катодных пиков антибиотика на индикаторном ртутно-пленочном или стеклоуглеродном электроде в дифференциальном режиме съемки вольтамперограмм при соответствующих потенциалах -(0,67±0,05) В и -(0,60±0,03) В относительно насыщенного хлорид-серебряного электрода на фонах 0,1 моль/дм³ аммония лимоннокислого двузамещенного (рН 4,7-5,1) или 0,1 моль/дм³ (NH₄)₂SO₄ с добавлением НСl до рН 5,1 при скорости развертки потенциала 10-25 мВ/с и концентрацию левомицетина определяют по высоте пика методом добавок аттестованных смесей [Патент RU №2180748, МПК G01N 27/48, 20.03.2002].

Недостатками известного способа являются низкая чувствительность и длительность проведения анализа.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому способу является определение остаточных количеств левомицетина (Хлорамфеникола, Хлормицетина) в продуктах животного происхождения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, который заключается в отборе проб - 10 г мяса, гомогенизации с 15 см³ фосфатного буфера (рН=6,88), последующей экстракции 3 раза по 30 см³ этилацетата. Полученную взвесь центрифугируют 15 мин при 4000 об/мин и декантируют. Этилацетатный слой промывают последовательно 5 см³насыщенного раствора NaCl с добавлением 0,2 мл 10% NaOH; 5 см³насыщенного раствора NaCl с добавлением 0,2 см³ 10%-ного СН₃СООН; 5 см³ насыщенного раствора NaCl. Органический слой отбирают и упаривают на ротационном испарителе (при 50°С) до возможно минимального объема, отдувают азотом до исчезновения запаха органических растворителей, добавляют 3 см³ смеси ацетонитрил-вода (1:4) и экстрагируют 3 раза по 5 см³петролейным эфиром. Петролейный эфир отбрасывают и извлекают левомицетин экстракцией этилацетатом (3 раза по 5 см³). Этилацетатный слой упаривают досуха, растворяют в 0,1 см³ метанола. В жидкостной хроматограф с колонкой (Ультрасфер ODS, C₁₈) 5 мкм (250×4,6 мм), УФ-детектором при λ=278 нм, используя элюент ацетонитрил-вода-дециламин (40:60:0,1), вводят 5 мкл стандартного раствора (10 нг/мкл) левомицетина. В тех же условиях вводят метанольный экстракт образца мяса. Проводят обработку результатов. За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. [Определение остаточных количеств левомицетина (Хлорамфеникола, Хлормицетина) в продуктах животного происхождения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и иммуноферментного анализа. Методические указания. МУК 4.1.1912 - 04 // Сборник методических документов, необходимых для обеспечения применения Федерального закона от 12 июня 2008 г. - №88 ФЗ «Технический регламент на молоко и молочную продукцию». - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009. - С. 41-47

Недостатками данного метода определения левомицетина является его низкая чувствительность и избирательность, длительность проведения анализа.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является повышение чувствительности и избирательности способа, сокращение длительности проведения анализа.

Технический результат достигается тем, что в способе определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающем отбор пробы, гомогенизацию, экстракцию, упаривание, растворение сухого остатка, введение растворенного сухого остатка в хроматограф с использованием элюента, обработку результатов анализа, в качестве пробы берут навеску кормов животного происхождения массой от 200 до 500 мг, экстракцию проводят 95% этанолом, перед упариванием экстракт фильтруют, обезвоживают сернокислым натрием, растворение сухого остатка проводят в этилацетате, в качестве хроматографа используют жидкостной хроматограф с детектором спектрофотометрическим UVV 104М и колонкой Диасфер-110С-16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм, в качестве элюента используют смесь ацетонитрил-вода-диэтиламин в соотношении 30:70:0,1.

Уменьшение массы пробы корма животного происхождения позволяет уменьшить объем экстрагента и количество извлекаемых при экстракции коэкстрактивных веществ, исключить этап очистки экстракта, что сокращает потери искомого вещества, ускоряет выпаривание экстрагента, повышает чувствительность и избирательность метода, сокращает продолжительность проведения анализа.

Использование 95% этанола для экстракции повышает чувствительность и избирательность способа. Экстракция 95% этанолом позволяет извлечь максимальное количество левомицетина, так как его растворимость в 95% этаноле выше, чем в этилацетате.

Фильтрация, обезвоживание экстракта сернокислым натрием сокращает продолжительность проведения анализа.

Использование для растворения сухого остатка этилацетата повышает избирательность метода. Кроме того, использование для растворения сухого остатка этилацетата менее опасно, чем использование метанола.

Использование жидкостного хроматографа с детектором спектрофотометрическим UVV 104М и колонкой Диасфер-110С-16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм, а также элюента, состоящего из смеси ацетонитрил-вода-диэтиламин в соотношении 30:70:0,1 позволяет получить острый, симметричный пик левомицетина, коэффициент асимметрии которого близок к 1, а также сократить время удерживания в колонке, что повышает чувствительность, избирательность метода и сокращает время проведения анализа.

Способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии осуществляют следующим образом. Берут, например, 250 мг мясокостной муки, гомогенизируют. Далее экстрагируют 95% этанолом по 5 мл трижды по 20 минут. Отдельные экстракты объединяют, фильтруют через воронку с бумажным фильтром, заполненным безводным сернокислым натрием, в грушевидную колбу для выпаривания, затем упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40°С досуха. Полученный сухой остаток растворяют в 1 мл этилацетата и аликвоту вводят в жидкостный хроматограф «Хромос-ЖХ 301» с детектором спектрофотометрическим UVV 104М и колонкой Диасфер-110С-16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм. Рабочая длина волны 278 нм. В качестве элюента используют подвижную фазу ацетонитрил-вода-диэтиламин в соотношении 30:70:01. Скорость потока 500 мкл/мин. Время удерживания левомицетина 5,305 мин. Нижний предел обнаружения 0,005 мг/кг. Проводят обработку результатов анализа. Количество левомицетина в пробе корма животного происхождения (X, мг/кг) рассчитывают по формуле

Х=А×S₂×V₂ / S₁×V₁×P,

где X - содержание левомицетина в пробе, мг/кг;

А - количество левомицетина в стандартном растворе, введенном в хроматограф, нг;

S₁ - площадь пика стандартного раствора левомицетина, введенного в хроматограф, мм²;

S₂ - площадь пика левомицетина в пробе, мм²;

V₁ - объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;

V₂ - объем экстракта после растворения сухого оcтатка, мл;

Р - навеска анализируемого образца, г.

Метрологическая характеристика способа определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии представлена в таблице 1.

Анализ метрологических характеристик свидетельствует о высокой чувствительности и избирательности предлагаемого способа.

Предлагаемый способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии обеспечивает повышение чувствительности и избирательности за счет уменьшения навески пробы; использования в качестве экстрагента 95% этанола; использования жидкостного хроматографа с детектором спектрофотометрическим UVV 104М и колонкой Диасфер-110С-16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм, а также элюента, состоящего из смеси ацетонитрил-вода-диэтиламин в соотношении 30:70:01. Чувствительность предлагаемого способа определения левомицетина повышается в 2 раза.

Предлагаемый способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии обеспечивает сокращение длительности проведения анализа за счет уменьшения массы пробы корма, проведения фильтрации, обезвоживания экстракта сернокислым натрием, использования жидкостного хроматографа с детектором спектрофотометрическим UVV 104М и колонкой Диасфер-110С-16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм, а также элюента, состоящего из смеси ацетонитрил-вода-диэтиламин в соотношении 30:70:01. Длительность проведения анализа предлагаемым способом сокращается в 1,8 раза.

Заявляемый способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии может быть использован в лабораториях для контроля качества кормов, а также для оценки качества сырья животного происхождения, предназначенного для производства кормов, и определения содержания левомицетина в корме при добавлении в него антибиотика с целью групповой фармакотерапии.

Заявляемый способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии апробирован в химико-токсикологическом отделе БУ ОО «Омская областная ветеринарная лаборатория».

Источники информации

1. Патент RU №2180748, МПК G01N 27/48, 20.03.2002.

2. Определение остаточных количеств левомицетина (Хлорамфеникола, Хлормицетина) в продуктах животного происхождения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и иммуноферментного анализа. Методические указания. МУК 4.1.1912 - 04 // Сборник методических документов, необходимых для обеспечения применения Федерального закона от 12 июня 2008 г. - №88 ФЗ «Технический регламент на молоко и молочную продукцию». - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009. - С. 41-47 (прототип).

Способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающий отбор пробы, гомогенизацию, экстракцию, упаривание, растворение сухого остатка, введение растворенного сухого остатка в хроматограф с использованием элюента, обработку результатов анализа, отличающийся тем, что в качестве пробы берут навеску кормов животного происхождения массой от 200 до 500 мг, экстракцию проводят 95% этанолом, перед упариванием экстракт фильтруют, обезвоживают сернокислым натрием, растворение сухого остатка проводят в этилацетате, в качестве хроматографа используют жидкостной хроматограф с детектором спектрофотометрическим UVV 104М и колонкой Диасфер–110C-16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм, в качестве элюента используют смесь ацетонитрил-вода-диэтиламин в соотношении 30:70:0,1.

Изобретение относится к способу определения подлинности сиропа пижмы обыкновенной. Указанный способ предполагает определение в сиропе методом тонкослойной хроматографии доминирующего компонента цветков пижмы обыкновенной - флавоноида тилианина, который предварительно извлекают путем обработки сиропа равным количеством ацетона.

Способ определения жирорастворимых витаминов а, d2, е и в-каротина при совместном присутствии методом тонкослойной хроматографии // 2530620

Изобретение относится к способам стандартизации лекарственных препаратов, биологически активных добавок, премиксов, лекарственного растительного сырья, растительных масел, масляных экстрактов, изделий пищевой, химической и косметологической отраслей промышленности по содержанию основных жирорастворимых витаминов и может быть использовано в фармацевтической, химической, косметологической и пищевой отраслях промышленности для определения подлинности и степени чистоты жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии в одно- и многокомпонентных препаратах.

Способ определения кодеина // 2523408

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для обнаружения и количественного определения кодеина в различных объектах, в частности в лекарственных препаратах.

Способ количественного определения классов липидов и подклассов фосфолипидов в биологических материалах // 2517086

Настоящее изобретение относится к области биохимии и описывает способ количественного определения классов липидов и подклассов фосфолипидов в биологических материалах, заключающийся в том, что методом тонкослойной хроматографии разделяют общие липиды на классы и фосфолипиды на подклассы, проявляют их на хроматограмме и количество определяют с использованием денситометрии, причем липиды, остающиеся на старте после разделения общих липидов на классы, сдвигают на 0,5 см выше, проявляют классы липидов и подклассы фосфолипидов на хроматограмме парами йода и рассчитывают площади пиков, соответствующие интенсивности окраски треков на хроматограмме с помощью денситометра, а количество общих фосфолипидов, других классов липидов и подклассов фосфолипидов определяют расчетным методом, выделяя линиями каждый трек отдельно и производят суммарный расчет площадей треков, берут эту цифру за 100% и определяют процент каждого класса липидов от общих липидов или каждого подкласса фосфолипидов от общих фосфолипидов, составляя пропорцию.

Способ выделения монослоя вещества // 2512630

Изобретение относится к области аналитической химии и предназначено для выделения монослоя вещества для целей последующего анализа свойств вещества. Способ выделения монослоя вещества включает нанесение жидкой пробы с растворенным в ней веществом на линию старта на хроматографическую пластину, содержащую слой сорбента.

Способ хроматографического анализа органических веществ // 2512252

Изобретение относится к области хроматографического анализа веществ и позволяет осуществить анализ органических веществ. Способ хроматографического анализа органических веществ включает растворение исследуемого органического вещества в летучем растворителе с получением раствора пробы, последующее нанесение капли раствора пробы на хроматографическую пластину со слоем сорбента, при этом в качестве растворителя выбирают вещество, не вступающее в химическое взаимодействие с пробой и сорбентом, последующий качественный и количественный анализ проявившихся колец.

Сэндвич-камера с контрпластинкой для тонкослойной хроматографии // 2494393

Изобретение относится к тонкослойной хроматографии (TCX) и может быть использовано в аналитической химии и в физической химии. Сэндвич-камера с контрпластинкой для TCX содержит разделяющую хроматографическую пластинку с адсорбционным слоем на подложке и контрпластинку - хроматографическую пластинку с адсорбционным слоем на подложке.

Способ разделения методом тонкослойной хроматографии // 2494392

Изобретение относится к тонкослойной хроматографии (ТСХ) и может быть использовано в аналитической химии. Способ разделения исследуемой смеси методом тонкослойной хроматографии включает нанесение исследуемой смеси на разделяющую хроматографическую пластинку и последующее разделение компонентов исследуемой смеси подвижной фазой в сэндвич-камере, включающей разделяющую хроматографическую пластинку и сухую контрпластинку, которая не касается подвижной фазы.

Способ хроматографического анализа в закрытом тонком слое сорбента и устройство для его осуществления // 2494391

Способ и устройство могут использоваться в различных научных и практических областях медицины, биологии, химии, пищевой промышленности, охране окружающей среды и других отраслей народного хозяйства для анализа смесей органических и неорганических веществ методом тонкослойной хроматографии.

Способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии // 2484458

Изобретение относится к ветеринарной токсикологии и санитарии, а именно к определению остаточных количеств инсектицида в органах и тканях животных при подозрении на отравление имидаклопридом, а также в продуктах животного происхождения.

Способ определения влагосодержания слоя смолы на несущей плите // 2632255

Настоящее изобретение относится к способу определения влагосодержания на древесной плите. Способ определения влагосодержания по меньшей мере одного слоя смолы, обеспеченного по меньшей мере на одной древесной плите в качестве несущей плиты, где по меньшей мере между одним слоем смолы и несущей плитой предусматривают NIR-отражающий слой.

Способ оптического определения компонента, преимущественно сероводорода, и его концентрации в потоке газа // 2626389

Изобретение относится к области физики, в частности к аналитическому приборостроению и может быть использовано в газоанализаторах, применяемых на установках извлечения серы.

Газовые датчики // 2626040

Изобретение относится к средствам измерения концентрации газа. Газовый датчик для измерения концентрации определенного газа содержит источник света, измерительный объем, детектор, предназначенный для приема света, прошедшего через измерительный объем, и адаптируемый фильтр, расположенный между источником света и детектором.

Способ обнаружения разливов нефти или нефтепродуктов на поверхности водоема // 2622721

Изобретение относится к области экологического мониторинга и может быть использовано для обнаружения нефтяных разливов. Способ обнаружения разливов нефти или нефтепродуктов на поверхности водоема заключается в установке тепловизора на беспилотный летательный аппарат, располагаемый в зависшем состоянии над зоной разлива, тепловизор осуществляет съемку в виде ряда цифровых изображений, которые через приемно-передающее устройство беспилотного летательного аппарата передаются в режиме реального времени на пункт круглосуточного дистанционного наблюдения, где оцениваются параметры разлива нефти или нефтепродуктов.

Система и способ исследований с помощью совместного использования лиэс и ик-спектроскопии поглощения // 2616777

Изобретение относится к лазерно-искровой эмиссионной спектрометрии. Система (102) для определения свойств образца (114) содержит ЛИЭС-детектор (104, 106) и детектор инфракрасного поглощения (108, 110) для исследования образца (114) с целью создания спектральных данных ЛИЭС и спектральных данных инфракрасного поглощения, соответственно; и процессор данных (112), предусмотренный для применения по меньшей мере одной хемометрической модели прогнозирования, каждая из которых построена для установления связи, предпочтительно количественной связи, между признаками объединенных спектральных данных ЛИЭС и поглощения с отдельным специфическим свойством образца, с комбинированным набором данных, выведенным из по меньшей мере частей данных ЛИЭС и данных поглощения, для создания из него определения, предпочтительно количественного определения, специфического свойства, связанного с указанной моделью.

Способ обнаружения газа-пропеллента // 2614657

Изобретение относится к способу и системе для обнаружения присутствия газа-пропеллента в газообразном образце с использованием лазерного излучения, в частности, в диапазоне от 3,30 до 3,5 мкм и может быть использовано для проверки герметичности содержащих пропеллент контейнеров.

Способ определения степени замещения метилцеллюлозы ик-спектроскопией // 2611381

Разработан способ определения степени замещения метилцеллюлозы, основанный на применении приставки НПВО к ИК-спектрометру, не требующий операций пробоподготовки и позволяющий работать непосредственно с веществами в твердом агрегатном состоянии.

Применение цис-1,4-полиизопрена в качестве имитатора оптических свойств пинаколилметилфторфосфоната // 2608629

Изобретение относится к применению цис-1,4-полиизопрена в качестве имитатора оптических свойств пинаколилметилфторфосфоната для проверки работоспособности инфракрасных дистанционных газосигнализаторов и при обучении специалистов работе на них.

Способ разведки и система для обнаружения углеводородов с использованием подводного аппарата // 2608344

Изобретение относится к области геологии и может быть использовано при поиске скоплений углеводородов. Предложен способ обнаружения углеводородов с использованием подводного аппарата, снабженного одним или несколькими измерительными компонентами.

Инфракрасный оптический газоанализатор // 2596035

Изобретение относится к измерительной технике, а именно к приборам для измерения концентрации газа, присутствующего в окружающей среде. Газоанализатор содержит два источника инфракрасного излучения, основной и дополнительный, измерительную кювету, интерференционный светофильтр, основной и дополнительный приемники инфракрасного излучения, два усилителя.

Устройство для регистрации эмиссии образца в среднем диапазоне инфракрасного спектра // 2640751

Изобретение относится к спектральной измерительной технике. Устройство для регистрации эмиссии образца в среднем диапазоне инфракрасного спектра содержит внешний источник излучения, конденсорную систему, первое плоское зеркало, сферическое зеркало. В качестве регистрирующей системы использована ИК-матрица с возможностью продольного и поперечного перемещения относительно лучей, исходящих от второго плоского зеркала. Матрица размещена за фокальной плоскостью этих лучей, причем расстояние от фокальной плоскости до воспринимающей системы таково, что диаметр пучка ИК-эмиссии совпадает или близок к размеру входного окна регистрирующей матрицы. 5 ил.