Прогнозирование развития распространенных форм инфильтративного эндометриоза на основании оценки экспрессии cd15 в биоптатах эндометрия

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования развития распространенных форм инфильтративного эндометриоза. Для этого оценивают результат экспрессии иммуногистохимического маркера CD15 в биоптатах эндометрия. Проводят иммуногистохимическое исследование на депарафинированных срезах толщиной 4-5 мкм. Экспрессию CD15 определяют в эпителиальных клетках эндометрия, результаты иммуногистохимической реакции оценивают полуколичественным методом в баллах. При этом отсутствие иммуноокрашенных клеток (-) - 0 баллов; менее 5% иммуноокрашенных клеток (+) - 0,5 балла, менее 20% иммуноокрашенных клеток (+) - 2 балла; от 20 до 40% окрашенных клеток (++) - 4 балла; более 40% окрашенных клеток (+++) - 6 баллов. При оценке экспрессии CD15 от 2 до 6 диагностируют распространенные формы инфильтративного эндометриоза. Изобретение позволяет прогнозировать развитие распространенных форм инфильтративного эндометриоза путем определения экспрессии маркера CD15 в образцах ткани эндометрия. 1 ил., 4 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, хирургии и патологической анатомии, предназначено для ранней диагностики и прогнозирования распространенных форм инфильтративного эндометриоза.

В настоящее время распространенность эндометриоза у женского населения составляет 10-15% (Bulun SE, 2009, Guidice LC, 2010). У женщин репродуктивного возраста он составляет 5-15%, в постменопаузе - от 3 до 5% (Modesitt SC, Tortolero-Luna G., Robinson JB, Gershenson DM, Wolf JK., 2002).

Глубокий инфильтративный эндометриоз, по данным разных авторов, встречается у 20-50% больных с генитальным эндометриозом (Cornilhe F.J., 1990; Konickx P., 1994; Martin D., 1996).

Поражение мочевыделительной системы эндометриозом встречается редко и составляет 1-2% из всех случаев эндометриоза (Donnez J, Spada F, Squifflet J, Nisolle M 2000; Vitagliano G, Villeta M, Castillo О, 2006). Чаще всего поражается мочевой пузырь (84%), поражение мочеточников составляет 10%, причем левый мочеточник поражается чаще, чем правый (Vercellini, P., Pisacreta, A., Pesole, A., Vincentini, S., Stellato, G. and Crosignani, E., 2000), почки - 4%, a уретра поражается в 2% наблюдений. По литературным данным, за последние годы увеличилась частота заболеваемости (0,3-12%).

До настоящего времени не существует теории или комплекса теорий, полностью объясняющих патогенез эндометриоза. В патогенезе эндометриоза мочевыводящих путей авторы поддерживают все гипотетические механизмы патогенеза эндометриоза, включающие ретроградную менструацию, метастатическое (лимфатическое и сосудистое) распространение, а также ятрогенную имплантацию клеток эндометрия, целомическую метаплазию/индуцированную мезенхимальную дифференцировку клеток, и развитие эндометриоидной ткани из остатков эмбриональных тканей.

В последнее время исследователи интенсивно изучают стволовые клетки эндометрия и их роль в возникновении эктопических эндометриоидных очагов. (Isaac Е. Sassona and Hugh S. Taylora, b Stem Cells and the Pathogenesis of EndometriosisAnn N Y Acad Sci. 2008 Apr; 1127: 106-115.) Многочисленные эксперименты показали, что клетки, выделенные из эндометрия, способны перерасти в эндометриоидные имплантаты (Seli Е, et al. Pathogenesis of endometriosis. Obstet Gynecol Clinics North Am. 2003; 30:61. [PubMed]; TeLinde RW, Scott RB. Experimental endometriosis. Am J Obstet Gynecol. 1950; 60:1173. [PubMed]; D’Hooghe TM, et al. Intrapelvic injection of menstrual endometrium causes endometriosis in baboons (Papio cynocephalus and Papio anubis) Am J Obstet Gynecol. 1995; 173:134. [PubMed]; Ridley JH, Edwards IK. Experimental endometriosis in the human. Am J Obstet Gynecol. 1958; 76:790. [PubMed].

Для детекции стволовых клеток эндометрия и эндометриоидных очагов авторы использовали разные маркеры. Oct-4 является фактором транскрипции, играет большую роль в поддержке клеточной плюрипотентности в эмбриональных и взрослых стволовых клетках, зародышевых клетках и целых эмбрионах на разных стадиях развития. Авторы также сообщили, что данный маркер был выявлен в половине исследуемых образцов эндометрия. (Matthai, Хорват и др., 2006). Экспрессия мРНК Oct4 была обнаружена во всех экспериментальных образцах эндометрия у женщин в фолликулярной или лютеиновой фазе менструального цикла (Bentz, Kenning et al., 2010). Экспрессия других маркеров стволовых клеток, таких как Вс1-2, С-комплект (CD117) и CD34, также были обнаружены в стволовых клетках эндометрия (Cho, Park et al., 2004). Экспрессия Musashi-1 (РНК-связывающего белка) была выявлена в образцах эндометрия, эндометриоидных очагах и эндометриоидной карциномы (Gotte, Wolf et al., 2008). Экспрессия Musashi-1 была обнаружена в эпителиальных и стромальных клетках пролиферативного эндометрия. В клетках эндометрия количество Musashi-1 положительных клеток базального слоя в стромальном компоненте в 1,5 раза и в эпителиальном компоненте в 3 раза выше, чем в функциональном слое. В эндометриоидных и раковых клетках эндометрия также выявлены высокие уровни Musashi-1 (Gotte, Wolf et al., 2008) Като и соавторы использовали два маркера для дифференцировки эпителиальных (CD13) и стромальных (CD9) стволовых клеток эндометрия (Kato, Yoshimoto et al., 2007).

Song и соавторы изучили транскрипцию факторов плюрипотентности (SOX2, NANOG (Nanog homeobox) и ОСТ4 у жешцин репродуктивного возраста, страдающих эндометриозом яичников, и у женщин без данной патологии. Результаты исследования показали, что в эндометрии у женщин с эндометриозом яичников указанные маркеры были значительно выше, чем в эндометрии у женщин без эндометриоза. Кроме того, было выявлено, что в очагах эндометриоза экспрессия данных маркеров значительно превышала показатели эутопического эндометрия (Song Y, Xiao L, Fu J, Huang W, Wang Q, ZhangX, Yang S. Increased expression of the pluripotency markers sex-determining region Y-box 2 and Nanog homeobox in ovarian endometriosis. Reprod Biol Endocrinol, 2014; 12: 42). Также установлено, что стволовые клетки/клетки-предшественники костного мозга при внедрении в эндометрий способствуют ремоделированию сосудов (Pittatore G, Moggio A, Benedetto С, Bussolati В, Revelli A. Endometrial adult/progenitor stem cells: pathogenetic theory and new antiangiogenic approach for endometriosis therapy. Reprod Sci (2014) 21(3):296-304. doi:10. 1177/1933719113503405) или могут трансдифференцироваться в клетки эндометрия (Du Н, Taylor HS. Stem cells and reproduction. Curr Opin Obstet Gynecol (2010) 22(3):235-41. doi:10.1097/GCO.0b013e328338c152; 8 Zhang WB, Cheng MJ, Huang YT, Jiang W, Cong Q, Zheng YF, et al. A study in vitro on differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into endometrial epithelial cells in mice. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol (2012) 160(2): 185-90. doi:10.1016/j.ejogrb.2011.10.012). Выявлено также, что регенеративные клетки эндометрия, выделенные из менструальной крови, могут дифференцироваться в различные клеточные линии, такие как клетки, синтезирующие инсулин (Li, Chen et al., 2010), остеобласты (Ai, Mehrabani, 2010), одонтобласты (Ai, Tabatabaei et al. 2009), и нейроны (Wolff, Gao et al., 2011 and Ai, Esfandiari et al., 2009a). Эндометриальные стволовые клетки (ЭнСК) были недавно использованы для замены дофаминергических нейронов в мышиной модели болезни Паркинсона (Wolff, Gao et al. 2011). Hida и соавторы изучали кардиогенный потенциал ЭнСК (Hida, Nishiyama et al. 2008). Также известен ангиогенный потенциал ЭнСК, чем обусловлена высокая регенеративность эндометрия (Esfandiari, Ai et al. 2007; Esfandiari, Khazaei et al. 2007; Esfandiari, Ai et al. 2008 and Ai, Esfandiari et al 2009a and 2009b). Антиогенез может играть не только ключевую роль в процессе регенерации эндометрия, но и может участвовать в формировании и развитии очагов эндометриоза (Donnez, Smoes et al., 1998; Fujishita, Hasuo et al., 2000).

Теория ретроградной менструации и стволовых клеток указывают на связь между эндометрием и эндометриоидными очагами.

В нашей работе мы провели морфологическое исследование, анализ экспрессии иммуногистохимических маркеров стволовости клеток в эндометрии у женщин с эндометриозом мочевыводящих путей и в эндометрии здоровых женщин. Эти исследования были проведены в рамках научно исследовательских работ, проводимых в НЦАГиП им. Кулакова

Реализацией изобретения является прогнозирование развития распространенных форм инфильтративного эндометриоза по интенсивности экспрессии иммуногистохимического маркера CD15 в биоптате эндометрия.

Исследование проводилось на клинической базе 1 патологоанатомического отделения ФГБУ «НЦ АГиП им. В.И. Кулакова» Минздрава России и кафедры акушерства, гинекологии, репродуктологии и перинатологии ГБОУ ВПО Первого МГМУ им. И.М. Сеченова,

В исследование были включены пациентки, проходившие обследование и лечение в НЦАГиП имени В.И. Кулакова по поводу инфильтративнного эндометриоза с поражением мочевыводящих путей. Возраст пациенток в обеих группах находился в пределах от 23 до 42 лет, средний возраст составил 34±1 года. Пациентки были разделены на две группы. I группу составили пациентки с инфильтративным эндометриозом мочевыводящих путей. II контрольную группу составили здоровые женщины (суррогатные матери). Критерием включения в I группу являлось наличие инфильтративного эндометриоза с вовлечением мочевыводящих путей. Критериями исключения являлись отсутствие инфильтративного эндометриоза с поражением мочевыводящих путей и злокачественные образования. Критерием включения во II группу являлось отсутствие эндометриоза и каких-либо гинекологических и соматических заболеваний. Критериями исключения являлись наличие гинекологических и соматических заболеваний.

Пациентки I и II группы проходили физикальное обследование, были проведены все необходимые клинико-лабораторные и инструментальные исследования для уточнения наличия эндометриоза и подготовки к оперативному лечению у пациенток из I группы и для исключения каких либо заболеваний у пациенток из II группы.

Для данного исследования использовали соскобы эндометрия, взятые у пациенток с эндометриозом мочевыводящих путей, и эндометрий, взятый у суррогатных матерей.

Материал для гистологического исследования фиксировали в забуферном (фосфатном) 10%-ном нейтральном формалине, затем образцы были обработаны по общепринятой стандартной методике и заключены в парафин. Для морфологических исследований с каждого блока делали не менее 10 ступенчатых срезов толщиной 4 мкм, после чего проводили окрашивание гемотоксилином и эозином по общепринятой методике, далее ставили иммуногистохимические реакции.

Иммуногистохимическое исследование проведено у 20 пациенток - у 10 в каждой группе.

Иммуногистохимическое исследование проводили на депарафинированных срезах толщиной 4-5 мкм по общепринятым протоколам (DAKO protocols).

Иммуногистохимическим методом выявляли маркеры стволовости CD15-monoclonal mouse antibody(clone ММА), 1:50, Cell Marque, Aldh1-rabbit monoclonal antibody (clone EP1933Y), 1:400, GeneTex, SOX2 - rabbit monoclonal antibody (clone SP76), 1:100, Cell Marque с помощью моноклональных антител. В качестве вторичных антител и агентов для детекции ставили положительные и отрицательные контрольные реакции.

Результаты ИГХ реакции оценивали полуколичественным методом в баллах по общепринятой методике: отсутствие иммуноокрашенных клеток (-) - 0 баллов; менее 5% иммуноокрашенных клеток (+) - 0,5 балла, менее 20% иммуноокрашенных клеток (+) - 2 балла; от 20 до 40% окрашенных клеток (++) - 4 балла; более 40% окрашенных клеток (+++) - 6 баллов.

Полученные данные были статистически обработаны.

Все полученные данные были обработаны на персональном компьютере с использованием программы Statistica for Windows v.8.0, StatSoft Inc. (США). Для каждого количественного параметра были определены: среднее значение (М), среднеквадратическое отклонение (δ), ошибка среднего (m), 95% доверительный интервал, медиана (Me), интерквартильный размах (Q1-Q3), для качественных данных - частота (%).

Перед проведением сравнительного анализа количественных данных в исследуемых группах определяли вид распределения данных (тест Колмогорова-Смирнова). При нормальном виде распределения данных для оценки различий в группах использованы методы параметрической статистики (критерий Стьюдента). При отсутствии нормального распределения данных применялись методы непараметрической статистики - тест Манна-Уитни для сравнения данных в группах.

Для сравнения числовых данных (после проверки количественных данных на нормальное распределение) использовали t-критерий Стьюдента для 2 независимых выборок: ,

где M1, М2 - средние арифметические; σ1 и σ2 - стандартные отклонения; N1, N2 - размеры выборок.

В случае несоответствия закону нормального распределения или при сравнения в малых выборках сравнение числовых показателей между двумя группами осуществляли с помощью критерия Манна-Уитни для несвязанных совокупностей:

где n1 - количество единиц в первой выборке; n2 - количество единиц во второй выборке; Tx - большая из двух ранговых сумм, соответствующая выборке с nx - единиц.

Статистически значимыми считались отличия при р<0,05 (95% уровень значимости) и при р<0,01 (99% уровень значимости).

При изучении результатов иммуногистохимических исследований обнаружены особенности экспрессии всех 3 маркеров CD15, Aldh А1 и SOX2 в аутологичном эндометрии у больных с эндометриозом.

Aldh А1 определяли в цитоплазме и в ядрах клеток эпителиальных и стромальных компонентов эндометриоидной ткани и аутологичного эндометрия (I группы). В контрольной II группе экспрессия данного маркера не выявлена. Несмотря на отсутствие экспрессии в контрольной группе, статистически достоверных различий между группами не обнаружено.

Экспрессия SOX2 обнаружена в ядрах клеток очагов эндометриоза и в незначительном количестве аутологичного эндометрия (I группа). В контрольной II группе экспрессии SOX2 не выявлено. Экспрессия в основном выявлена в эпителиальных компонентах. В стромальном компоненте данный маркер в незначительных количествах определяли только в очагах эндометриоза. В аутологичном эндометрии экспрессия была оценена на 1-2 балла. Между группами статистически значимого различия не обнаружено

Экспрессия CD15 выявлена только в эпителиальных клетках очагов эндометриоза, аутологичном эндометрии (I группа) и не выявлена в контрольном эндометрии (II группа). Экспрессия в аутологичном эндометрии была оценена от 2 до 6 баллов. При сравнении между группами выявлено статистический значимое различие (р=0,0174) (фигура 1)

Таким образом, статистически значимая разница экспрессии CD15 между группами позволила разработать способ прогнозирования развития распространенных форм инфильтративного эндометриоза с помощью определения экспрессии маркера CD15 в образцах ткани эндометрия, полученных при пайпель биопсии или при диагностических выскабливаниях.

Клинический пример 1

Больная С., 40 лет, обратилась с жалобами на, боли внизу живота и поясничной области слева, обильные болезненные менструации.

Из анамнеза: 2011 г. По месту жительства проведена диагностическая лапаротомия биопсия образования ретроцервикальной области (гистологическое заключение - эндометриоз РЦ области). Была назначена гормональная терапия - диферилин 3,75 мг №6, затем терапия была продолжена жанином по контрацептивной схеме. В 2013 г была выявлена стриктура левого мочеточника и гидронефротические изменения левой почки, в связи с чем проведено стентирование левого мочеточника. При обращении 2014 г. в НЦАГиП был диагностирован инфильтративный эндометриоз клетчатки боковой стенки таза с вовлечением левого мочеточника. Гидронефроз левой почки I ст. Аденомиоз II ст. Проведена лапароскопия - иссечение эндометриоидного инфильтрата, уретеролиз слева, гистеректомия без придатков.

При гистологическом исследовании эндометрий соответствовал пролиферативной фазе.

Иммуногистохимическое исследование: Aldh А1 определяли в цитоплазме и в ядрах клеток эпителиальных и стромальных компонентов. Экспрессия Aldh А1 в эпителиальных и стромальных компонентах эндометрия оценена в 6 баллов. Экспрессия SOX2 обнаружена в ядрах клеток. В эпителиальном компоненте эндометрия интенсивность экспрессии оценена в 4 балла, а в стромальном компоненте экспрессии данного маркера не обнаружено. Экспрессия CD15 выявлена только в эпителиальных компонентах эндометрия и оценена в 6 баллов.

Клинический пример 2

Больная И., 32 года, обратилась по поводу общей слабости, болей внизу живота во время менструации, отсутствие беременности, затрудненное мочеиспускание в период менструации.

Из анамнеза: впервые эндометриоидная киста правого яичника диагностирована в 2010 г. В 2012 г. при подготовке к ЭКО проведена ЛС, сальпингоовариолизис, удаление эндометриоидных кист обоих яичников. После операции появились указанные жалобы. В 2014 г. был диагностирован РЦ эндометриоз, в связи с чем была направлена в НЦАГиП.

После проведения полного клинико-лабораторного и инструментального обследования был поставлен диагноз: распространенная форма НГЭ:РЦ эндометриоз с прорастанием и стенозом прямой кишки, ректо-сигмоидного отдела толстой кишки. Эндометриоз KMC, клечатки малого таза. Эндометриоз мочевого пузыря. Эндометриоидная киста правого яичника. Спаечный процесс брюшной полости.

Была выполнена гистероскопия, диагностическое выскабливание эндометрия. Цистоскопия. Лапароскопия, резекция правого яичника, иссечение инфильтративного эндометриоза малого таза, «шейвинг» прямой кишки, дисковидная резекция ректо-сигмоидного отдела толстой кишки, иссечение эндометриоза пузырноматочной складки, резекция мочевого пузыря, сальпингоовариолизис.

При гистологическом исследовании эндометрий соответствовал пролиферативной фазе.

Экспрессия иммуногистохимических маркеров в эндометрии: экспрессия Aldh A1 обнаружено только в эпителиальном компоненте эндометрия и оценена на 2 балла. SOX2 также обнаружен только в эпителиальном компоненте и оценен в 2 балла. Экспрессия CD15 в эпителиальном компоненте оценена в 4 балла.

Клинический пример 3

Больная Е., 42 года, обратилась по поводу альгоменореи, болей в правой подвздошной области, выделения крови из прямой кишки в первые 2 дня менструации, и выделение слизи до 10 дня менструации, диспареунии. Указанные жалобы беспокоили в течение 3 лет. После проведения клинико-лабораторных и инструментальных методов исследования был поставлен диагноз: распространенная форма наружного генитального эндометриоза: ретроцервикальный эндометриоз с прорастанием в задний свод влагалища, прямую кишку, эндометриоз крестцово-маточных связок и тазовой брюшины, эндометриоидные кисты яичников, инфильтративный эндометриоз правого параметрия, стенки малого таза с признаками вовлечения в процесс правого запирательного нерва, дистального отдела правого мочеточника, гидронефротическая трансформация правой почки III стадии с правосторонним гидроуретерем. Выраженный спаечный процесс в полости малого таза. Миома матки небольших размеров. При нефросцинтиграфии было диагностировано отсутствие накопительной и выделительной функции правой почки.

Была проведена средненижнесрединная лапаротомия. Правосторонняя нефрэктомия. Аппендэктомия. Гистерэктомия с правыми придатками, резекция заднего свода влагалища, резекция левого яичника. Низкая передняя резекция прямой кишки. Иссечение эндометириоидного инфильтрата правой боковой стенки таза. Невролиз правого запирательного нерва. Налажение трансверзостомы.

При гистологическом исследовании эндометрий был в стадии пролиферации.

Экспрессия имуногистохимических маркеров в эндометрии обнаружена только в эпителиальном компоненте. Экспрессия Aldh А1 оценена в 1 балл, SOX2 в 1 балл и CD15 на 2 балла.

Клинический пример 4

Больная А., 32 лет, проходила обследование для вступления в программу суррогатного материнства. При обследовании соматической и гинекологической патологий не выявлено.

В биоптате эндометрия экспрессии имуногистохимических маркеров CD15, Aldh A1, SOX2 в эпителиальном и стромальном компонентах не обнаружено.

Способ прогнозирования развития распространенных форм инфильтративного эндометриоза на основании оценки результата экспрессии иммуногистохимического маркера CD15 в биоптатах эндометрия, отличающийся тем, что проводится иммуногистохимическое исследование на депарафинированных срезах толщиной 4-5 мкм, экспрессию CD15 определяют в эпителиальных клетках эндометрия, результаты иммуногистохимической реакции оценивают полуколичественным методом в баллах: отсутствие иммуноокрашенных клеток (-) - 0 баллов; менее 5% иммуноокрашенных клеток (+) - 0,5 балла, менее 20% иммуноокрашенных клеток (+) - 2 балла; от 20 до 40% окрашенных клеток (++) - 4 балла; более 40% окрашенных клеток (+++) - 6 баллов, и при оценке экспрессии CD15 от 2 до 6 диагностируют распространенные формы инфильтративного эндометриоза.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно, к способу определения угрозы прерывания беременности на 7-9 неделях гестации вследствие подавления активности мембранных рецепторов к прогестерону при обострении цитомегаловирусной инфекции.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, может быть использовано для прогнозирования развития жизнеопасных предсердных аритмий у больных с гипертонической болезнью.

Изобретение относится к области медицины, лабораторной диагностики и представляет собой способ диагностики бруксизма путем проведения клинического обследования и исследования крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови больного определяют содержание серотонина и при его концентрации ниже 180 нг/мл диагностируют бруксизм.

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии и иммунологии, и может быть использовано для диагностики аллергии. Для этого осуществляют подготовку пробы биологического материала (копрофильтрат) с последующей спектрофотометрией при 405 нм.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается рекомбинантного штамма E. coli, являющегося продуцентом антигена возбудителя сибирской язвы Bacillus anthracis.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается рекомбинантного штамма E. coli, являющегося продуцентом антигена возбудителя сибирской язвы Bacillus anthracis.
Группа изобретений относится к медицине и касается диагностических реагентов для клинической лабораторной диагностики сифилитической инфекции. Заявлены стабилизированный кардиолипиновый антиген и способ его получения.

Изобретение относится к медицине и предназначено для выделения и исследования иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины низкой плотности (ИК-ммЛНП), из сыворотки крови человека.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для определения цитотоксической активности NK-клеток в отношении клеток трофобласта.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике гастроэнтерологии, может быть использовано для диагностики степени тяжести цирроза печени смешанной этиологии.Способ диагностики степени тяжести цирроза печени смешанной этиологии с помощью анализа крови заключается в том, что у пациентов в сыворотке крови определяют уровень интерлейкина-6, и при значении интерлейкина-6 менее или равном 12,7 пг/мл диагностируют легкую (компенсированную) степень цирроза печени, при концентрации интерлейкина-6 более 12,7 пг/мл и менее или равной 26,2 пг/мл диагностируют умеренную (субкомпенсированную) степень, при уровне интерлейкина-6 более 26,2 пг/мл - тяжелую (декомпенсированную) степень цирроза печени.Технический результат: повышение доступности и простоты выполнения при высокой чувствительности, специфичности и объективности способа.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа идентификации В-клеточного клона, который специфически связывается с мишеневым антигеном, предусматривающего наличие множества В-клеток; взаимодействие В-клеток с мишеневым антигеном, где мишеневый антиген содержит первую сортируемую метку, и окрашивание множества В-клеток анти-IgG антителами, содержащими вторую сортируемую метку, и анти-IgM антителами, содержащими третью сортируемую метку; отделение от множества В-клеток одной или нескольких В-клеток, которые могут специфически связываться с мишеневым антигеном, используя клеточный сортер. Группа изобретений также касается способа идентификации В-клеточного клона, который специфически связывается с мишеневым антигеном, предусматривающего дополнительно иммунизирование животного мишеневым антигеном и выделение множества В-клеток из иммунизированного животного. Группа изобретений обеспечивает идентификацию В-клеточного клона, который специфически связывается с мишеневым антигеном. 2 н. и 16 з.п. ф-лы, 14 ил., 13 табл., 5 пр.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа измерения активности натуральных клеток-киллеров (NK-клеток), включающего стимулирование NK-клеток в образце цельной крови посредством инкубирования образца цельной крови со средством, включающим по меньшей мере один стимулирующий цитокин, выбранный из группы, состоящей из интерлейкина 2, интерлейкина 15 и интерлейкина 18, и измерение количества секретируемых NK-клетками цитокинов, секретированных в образце цельной крови. Группа изобретений также касается набора для измерения активности натуральных клеток-киллеров. Группа изобретений обеспечивает большую точность измерения активности натуральных клеток-киллеров по сравнению с измерением активности натуральных клеток-киллеров с использованием PBMC. 3 н. и 21 з.п. ф-лы, 9 пр., 12 ил., 2 табл.

Изобретение относится к ветеринарии, эпизоотологии, а именно к способам дифференциальной экспресс-диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота. Способ дифференциальной экспресс-диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота, включающий исследование сывороток животных в иммуноферментном анализе с использованием специфического антигена из типичных бруцелл вида abortus, ОПС-антигена и конъюгата на основе рекомбинантного белка G, отличается тем, что исследование сывороток проводят параллельно непрямым и конкурентным методами иммуноферментного анализа с использованием ОПС-антигена в качестве конкурирующего агента, а интерпретацию результатов проводят по формуле Кэо=D1/D2*100, где D1 - оптическая плотность, измеряемая в лунке, содержащей ОП-С антиген; D2 - оптическая плотность, измеряемая в лунке, не содержащей ОП-С антиген; Кэо - коэффициент, определяющий степень эпизоотической опасности по бруцеллезу животного, от которого получен исследованный образец сыворотки крови, и при 0≤К≤60 - отсутствие у животного эпизоотической опасности по бруцеллезу; 61≤К≤100 и выше - наличие у животного высокой эпизоотической опасности по бруцеллезу. 3 пр., 3 табл.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использована для диагностики ассоциированного с кишечником заболевания и/или ассоциированной с кишечником патологии у животного. Способ включает получение образца от указанного животного. Проводят измерение первого сигнала, полученного за счет связывания первой части образца с антигеном цельной пшеницы, содержащим растворимые в спирте и растворимые в воде антигены пшеницы. Измеряют второй сигнал, полученный за счет связывания второй части образца с антигеном глиадина, включающим дезамидированный α-глиадин. Также проводят измерение третьего сигнала, полученного за счет связывания третьей части образца с антигеном, выбранным из группы, состоящей из: (1) агглютинина зародыша пшеницы; (2) глютеоморфина; (3) глютенина; (4) дезамидированного глютенина; и (5) продинорфина, и анализ результатов указанного теста. При этом полученные результаты свидетельствуют о наличии целиакии в случае, если указанный первый сигнал свидетельствует о присутствии IgA или IgG против указанных антигенов пшеницы, указанный второй сигнал свидетельствует о присутствии IgA или IgG против антигена глиадина, и указанный третий сигнал свидетельствует о присутствии IgA или IgG против по меньшей мере одного антигена, выбранного из группы, состоящей из глютеоморфина, глютенина, дезамидированного глютенина и продинорфина. Полученные результаты свидетельствуют о наличии глютеновой иммунореактивности и чувствительности в случае, если указанный первый сигнал свидетельствует о присутствии IgA или IgG против указанных антигенов пшеницы, указанный второй сигнал свидетельствует о присутствии IgA или IgG против антигена глиадина, за исключением дезамидированного α-глиадина, и указанный третий сигнал свидетельствует о присутствии IgA или IgG против по меньшей мере одного антигена, выбранного из группы, состоящей из глютеоморфина, глютенина, или свидетельствует об отсутствии IgA или IgG против дезамидированного глютенина. Группа изобретений относится также к варианту способа диагностики, к планшету для осуществления теста для применения в способе дианостики. Использование данной группы изобретений позволяет дифференцировать глютеновую иммунореактивность и чувствительность, латентную целиакию, болезнь Крона и другие кишечные патологии от классической целиакии. 4 н. и 20 з.п. ф-лы, 7 ил., 8 табл., 4 пр.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для ранней диагностики и мониторинга заболевания у субъекта с использованием циркулирующих тканевых макрофагов. Способ включает этапы: a) обеспечения биологического образца для тестирования от указанного субъекта, причем указанный образец содержит циркулирующие тканевые макрофаги (СТМ); b) окрашивания указанных СТМ с использованием панели дифференциально меченых различных антител против опорных маркеров CD14, CD16, CD300e, CD36 и HLADR с целью идентификации и подсчета различных субпопуляций СТМ; c) фиксации, пермеабилизации и окрашивания СТМ с использованием одного или нескольких антител для обнаружения против одного или более эпитопов по меньшей мере одного протеазо-индуцированного фрагмента белка, полученного в результате внутриклеточной деградации не принадлежащего СТМ белка, отдельными СТМ в тканях, из которых они происходят, тем самым идентифицируя по меньшей мере одну субпопуляцию циркулирующих тканеспецифических макрофагов (CTSM). Далее проводят анализ с применением многопараметрической проточной цитометрии указанных окрашенных СТМ и CTSM путем селективного пропускания по опорным маркерам CD14, CD16, CD300e, CD36 и HLADR с целью определения количества сигналов каждого определенного меченого антитела, связанного с отдельными клетками. Определяют относительное и абсолютное количество отдельных клеток в каждой субпопуляции СТМ и каждой специфической субпопуляции CTSM, экспрессирующих каждый из измеренных внутриклеточных эпитопов. Расчет относительного и абсолютного количества клеток проводят в каждой субпопуляции СТМ и каждой специфической субпопуляции CTSM, каждое из которых происходит из различных нормальных и измененных тканей, что определяют с помощью оцениваемого набора отдельных протеазо-индуцированных фрагментов белка. Проводят определение количества связанного с антителами сигнала, ассоциированного с каждым отдельным оцениваемым внутриклеточным пептидом, с целью получения профиля окрашивания CTSM. А также сравнивают тестируемый профиль окрашивания CTSM с нормальным профилем окрашивания CTSM для каждой оцениваемой ткани, причем повышенное количество CTSM свидетельствует о наличии заболевания. Группа изобретений относится также к набору для ранней диагностики и мониторинга заболевания у субъекта с использованием циркулирующих тканевых макрофагов. Использование данной группы изобретений позволяет проводить раннюю диагностику и мониторинг заболевания у субъекта с использованием циркулирующих тканевых макрофагов по опорным маркерам CD14, CD16, CD300e, CD36 и HLADR. 2 н. и 21 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр., 7 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к применению выделенного антитела к CXCR4 в диагностике рака, что может быть использовано в медицине. В частности, раскрыты способы диагностики и/или прогнозирования онкогенного расстройства, связанного с экспрессией CXCR4, определения, является ли указанное расстройство или пациент, страдающий им восприимчивым к лечению анти-CXCR4 антителом, способы определения эффективной схемы лечения и наборы для лечения указанных заболеваний. Изобретение позволяет проводить эффективную диагностику и терапию онкогенных расстройств, характеризующихся экспрессией CXCR4. 5 н. и 13 з.п. ф-лы, 7 ил., 3 табл., 7 пр.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к трасплантологии, и может быть использована для обнаружения циркулирующих в крови клеток, полученных из ткани пуповины человека, после их введения. Способ включает анализ клеток, полученных из ткани пуповины человека, и мононуклеарных клеток периферической крови пациента для определения одного или более маркеров, характерных для циркулирующих клеток, полученных из ткани пуповины человека, в крови пациента, которому были введены клетки; сравнение одного или более маркеров, характерных для циркулирующих клеток, полученных из ткани пуповины человека (hUTC), в крови пациента, которому были введены клетки, и одного или более маркеров, характерных для мононуклеарных клеток периферической крови человека; анализ образца проводят при помощи аналитической методики обнаружения одного или более уникальных маркеров, характерных для циркулирующих клеток hUTC, в крови пациента, которому были введены клетки; разделение мононуклеарных клеток периферической крови пациента и циркулирующих клеток hUTC, в крови пациента, которому были введены клетки, полученные из ткани пуповины человека, на основании обнаружения одного или более уникальных маркеров. Маркеры, характерные для hUTC, содержат CD10 и/или CD13. Группа изобретений относится также к вариантам способа определения hUTC и набору для применения в способе обнаружения в крови hUTC. Использование данной группы изобретений однозначно позволяет обнаружить клетки человека, полученные из ткани пуповины, в образце пациента, даже при небольшом их количестве. В частности, изобретение обеспечивает обнаружение подобных клеток для терапевтических целей без ограничения по кариотипу клеток для терапевтических целей (XY против XX) и полу реципиента (пациента). 4 н. и 22 з.п. ф-лы, 11 пр., 5 ил., 11 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии и неврологии, и предназначено для прогнозирования развития рассеянного склероза (PC) у больных с оптическим невритом (ОН) подострого течения. В сыворотке крови определяют уровень оптической плотности для антител класса IgM к S-антигену сетчатки. Регистрируют величины пиковой латентности и амплитуды Р100 зрительных вызванных потенциалов (ЗВП), амплитуду N95 паттерн-электроретинограммы (ПЭРГ), фотопический негативный ответ в колбочковой ЭРГ (ФНО). При уровне оптической плотности для антител класса IgM к S-антигену сетчатки равном и более 0.15, удлинении пиковой латентности Р100 ЗВП на 20% и более, снижении амплитуды N95 ПЭРГ и/или амплитуды ФНО на 20% и более прогнозируют развитие рассеянного склероза. Использование изобретения обеспечивает возможность своевременного оказания специализированной помощи для предотвращения усугубления течения рассеянного склероза. 3 пр.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для обнаружения антитела в тестируемом образце, содержащем жидкость организма субъекта-млекопитающего. При этом указанное антитело направлено на чужеродный антиген, введенный в указанного субъекта-млекопитающего. Способ включает стадии: (а)приведение тестируемого образца в контакт со множеством различных количеств антигена, специфичного в отношении антитела, (b) выявление величины специфического связывания указанного антитела и указанного антигена стадии (а), и (c) построение графика или вычисление кривой зависимости величины указанного специфического связывания от количества антигена для каждого количества антигена, используемого на стадии (а). На присутствие в тестируемом образце антитела указывает в основном S-образная или сигмовидная кривая. Изобретение обеспечивает выявление антител, в качестве биологических маркеров болезненного состояния или предрасположенности к заболеванию. 9 з.п. ф-лы, 15 ил., 6 табл., 7 пр.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования степени вероятности выполнения циторедуктивной операции в оптимальном объеме у больных диссеминированным раком яичников. Для этого определяют клинические параметры: стадию заболевания, объем асцитической жидкости, уровень сывороточных маркеров СА 125 и НЕ4, уровень инсулиноподобного фактора II типа (IGF-II) и металлопротеиназы РАРР-А в асцитической жидкости до лечения. Рассчитывают дискриминантные функции Y1, Y2. При значениях Y1>Y2 прогнозируют высокую, а при Y1<Y2 - низкую степень вероятности выполнения циторедуктивной операции в оптимальном объеме. Изобретение позволяет определить этапность хирургического и химиотерапевтического лечения у больных с диссеминированным раком яичников. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования развития распространенных форм инфильтративного эндометриоза. Для этого оценивают результат экспрессии иммуногистохимического маркера CD15 в биоптатах эндометрия. Проводят иммуногистохимическое исследование на депарафинированных срезах толщиной 4-5 мкм. Экспрессию CD15 определяют в эпителиальных клетках эндометрия, результаты иммуногистохимической реакции оценивают полуколичественным методом в баллах. При этом отсутствие иммуноокрашенных клеток - 0 баллов; менее 5 иммуноокрашенных клеток - 0,5 балла, менее 20 иммуноокрашенных клеток - 2 балла; от 20 до 40 окрашенных клеток - 4 балла; более 40 окрашенных клеток - 6 баллов. При оценке экспрессии CD15 от 2 до 6 диагностируют распространенные формы инфильтративного эндометриоза. Изобретение позволяет прогнозировать развитие распространенных форм инфильтративного эндометриоза путем определения экспрессии маркера CD15 в образцах ткани эндометрия. 1 ил., 4 пр.

Наверх