Применение препарата "экстракт мицелия вешенки "ревитацел" на основе штамма гриба pleurotus ostreatus вкпм f-819, влияющего на мужскую репродуктивную функцию

Изобретение относится к медицине, а именно к андрологии, репродуктологии. Применение «Экстракта мицелия вешенки «РЕВИТАЦЕЛ» в качестве препарата для приращения процентного соотношения уровня повышения активности сперматозоидов человека. Изобретение обеспечивает повышение мужской репродуктивной функции. 2 табл.

 

Изобретение относится к медицине (андрология, репродукция) и касается применения лекарственных препаратов и биологически активных добавок к пище на основе грибных продуцентов, влияющих на мужскую репродуктивную функцию, и предназначено для восстановления и сохранения фертильности сперматозоидов человека при их исходной сниженной подвижности - астенозооспермии.

По данным научного центра акушерства, гинекологии и перинаталогии им. В.И. Кулакова известно, что в настоящее время число бесплодных браков в России достигает 17%, в некоторых регионах - до 19%, что приближается к критическому уровню воспроизводства населения и по данным демографов эта тенденция не улучшится в ближайшие годы.

В структуре бесплодия браков в настоящее время ведущее место занимает мужской фактор. В большинстве случаев мужское бесплодие связано со снижением фертильных характеристик эякулята: подвижности, морфологии и жизнеспособности сперматозоидов. При этом значительное место в структуре мужского бесплодия занимает идиопатическая форма - до 30-50% случаев, лечение которой представляется нерешенной проблемой.

В основе патогенеза мужского бесплодия преобладают нарушения репродуктивной функции, выраженные различными видами патоспермии. Современные диагностические методы позволяют выделить ту или иную форму данной патологии.

Для стимуляции структурно-функционального состояния половых клеток у мужчин репродуктивного возраста используют ряд гормональных препаратов: ХГТ (хорионический гонадотропин), модификации тестостерона, антиэстрогены. Параллельно используют витамины, микроэлементы, антиоксиданты. [Божедомов В.А., Николаева М.А., Теодорович О.В. Применение комплекса карнитинов, фруктозы и лимонной кислоты нормализует акросомальную реакцию сперматозоидов у мужчин и бесплодных пар./ Сб. «Спермактин. Клинические исследования». М.; изд. ЗАО «Фармамед», 2005, 18 с.].

Однако число таких препаратов ограничено и часто не дает нужного эффекта особенно при идиопатической патоспермии. Получаемый ответ носит неустойчивый эффект. К тому же длительное применение некоторых препаратов требует значительных финансовых затрат.

В настоящее время из вышеперечисленного ряда препаратов в клинической практике наиболее широко используются препараты селена и карнитина: например, селен актив, селцинк и др.; спермактин [Тутельян В.А., Князев В.А. «Селен в организме человека». М.; изд. РАМН, 2002, 220 с.; Molecular identification of a novel carnitine transporter specific to human testis. - J. Biol. Chem. 2002, 277(39). - Enomoto A., Wempe M.F. et al.].

Карнитины являются сильными антиоксидантами и обеспечивают устойчивость сперматозоидов к пероксидазам и свободным радикалам.

Селен входит в состав различных ферментов простаты. Он обнаружен в селенопротеинах спермы. Основное его действие как компонента глутатионпероксидазы - нейтрализация избытка свободных радикалов в эякуляте.

Рассмотренные два препарата используют в андрологической и репродуктивной практике. Однако применение этих препаратов дает незначительный довольно неустойчивый эффект повышения концентрации и подвижности сперматозоидов.

При применении спермактина требуется длительный курс лечения (несколько месяцев) с большими дозами (до 3 г) его приема в сутки. Кроме того, длительное применение такого препарата требует больших финансовых затрат.

На практике вышеперечисленные препараты чаще всего используют при комбинированной терапии.

Индукция сперматогенеза в условиях неясности этиологических факторов, приведших к данной патологии, во многом эмпирична и интуитивна. Поэтому поиск и применение нового препарата, имеющего доказательную экспериментальную и клиническую базу в различных областях медицины и определенный механизм действия, является актуальной задачей.

Для увеличения количества и подвижности сперматозоидов в 2014 году в Российской Федерации зарегистрирована к применению новая форма БАД к пище «СПЕРОТОН» (СГР № RU.77.99.11.003.E.006698.07.14 от 16.07.2014 г.), представляющая собой сбалансированный набор витаминов: L-карнитина, витамина Е, фолиевой кислоты и микроэлементов (цинка, селена). Применение БАД к пище «СПЕРОТОН»: стимулирует сперматогенез; повышает концентрацию сперматозоидов в семенной жидкости, увеличивает подвижность сперматозоидов [Режим доступа: http://www.medcentre.com.ua/speroton-html].

Анализ проведенных в последние годы медико-биологических исследований и клинических испытаний новых форм препаратов показал, что одной из перспективных групп препаратов в этой области являются препараты на основе растительного сырья, чьи свойства в настоящее время изучаются достаточно полно для их широкого применения в области профилактики и лечения мужского бесплодия.

Особое место в этом ряду занимают создаваемые новые формы препаратов на основе экстрактов высших базидиальных грибов, так называемых «медицинских грибов».

Исследованием лечебных свойств высших базидиальных грибов и практическим их применением в области медицины занимаются ученые ряда стран на протяжении последних 60 лет.

Среди метаболитов высших грибов выделены и идентифицированы вещества из шляпочных грибов, которые являются иммуномодуляторами и проявляют существенные противоопухолевые, кардиоваскулярные, противовирусные, антибактериальные, противопаразитарные, гепатозащитные и противодиабетические свойства [Герасименя В.П. Экстракты базидиальных грибов и их полифункциональная медико-биологическая активность / В.П. Герасименя, К.З. Гумаргалиева, С.В. Захаров, Т.И. Милевич, А.В. Трезвова, под ред. В.П. Герасимени, В.Ю. Полякова. - М.: Институт химической физики имени Н.Н. Семенова РАН, ООО «Инбиофарм», 2014, - 128 с.; Экстракты мицелия вешенки (Pleurotus ostreatus): медико-биологические эффекты и возможные механизмы действия: сборник статей / Под ред. В.П. Герасимени, В.Ю. Полякова. - М.: Институт химической физики имени Н.Н. Семенова РАН, ООО «Инбиофарм», 2013, - 224 с.].

К числу таких препаратов, прежде всего, относятся препараты на основе экстрактов, полученных из мицелия гриба Pleurotus ostreatus, в состав которых входят углеводы, аминокислоты, высшие жирные кислоты, органические кислоты, витамины группы В, Р, Е. D, С, каратиноиды, минеральные вещества и др., как одного из перспективных базидиомицетов, нашедших широкое применение в медицинской практике [Герасименя В.П. Химический состав экстракта мицелия Pleurotus ostreatus 1137 (фармакологической субстанции) / В.П. Герасименя, С.В. Захаров, Л.П. Семашева, Г.И. Кирьянов // Экстракты мицелия вешенки (Pleurotus ostreatus): медико-биологические эффекты и возможные механизмы действия: сборник статей - М.: Институт химической физики РАН, ООО «Инбиофарм». - 2013. - С. 16-19].

Известны «Препарат, влияющий на тканевой обмен, и применение штамма гриба Pleurotus 1137 для его получения» (патент РФ 2192873, кл. А61K 35/70, 2001 г.) и «Препарат с полифункциональной медико-биологической активностью, влияющий на тканевой обмен, на основе штамма гриба Pleurotus ostreatus ВКПМ F-819» (патент РФ 2487930, кл. А61K 36/06, C12N 1/14, 2012 г.), используемые в биотехнологии и медицине при производстве и применении медицинских препаратов и биологически активных добавок на основе грибных продуцентов.

Согласно описанию и формулам этих изобретений известные препараты обладают противоопухолевой активностью и способностью модулировать проявление гематологической токсичности цитостатиков. Кроме того, препараты проявляют антимикробную активность в отношении как к грамположительным, так и к грамотрицательным бактериям. Препараты производят путем глубинного культивирования гриба Pleurotus ostreatus 1137 (ВКПМ, F-819) с последующим разделением мицелия и культуральной жидкости и выделением из мицелия экстракцией этанолом при кислом или нейтральном значениях рН среды биологически активных веществ с антимикробной активностью, содержащих аминокислоты (глицин, аланин, треонин, серии, лейцин) и углеводы (глюкозу, глюкозамин, арабинозу, ксилозу). Препараты выполнены в виде обезвоженных гранул или таблеток или в виде гелеобразного сиропа. Штамм гриба Pleurotus ostreatus 1137 (ВКПМ, F-819) применяется в качестве продуцента физиологически активных веществ с противоопухолевой активностью. На основе гриба Pleurotus ostreatus 1137 (ВКПМ, F-819), получены препараты, обладающие широким спектром лечебно-профилактического действия, в т.ч. и антиоксидантной активностью.

Однако как препараты, влияющие на мужскую репродуктивную функцию согласно изобретению, известные препараты не применяются.

Таким образом, несмотря на большое число установленных лечебных эффектов базидиомицетов, сведения в литературе о применении существующих медицинских препаратов на основе высших базидиальных грибов в практике медицины для профилактики и лечения патогенеза мужского бесплодия при нарушении репродуктивной функции, выражаемой различными видами патоспермии, в частности идиопатической патоспермии, практически отсутствуют, за исключением «Препарата на основе гриба Pleurotus ostreatus 1137, влияющего на мужскую репродуктивную функцию» [Патент РФ на изобретение №2422151 от 17.03.2010 г. Препарат на основе гриба Pleurotus 1137, влияющий на мужскую репродуктивную функцию. Герасименя В.П., Аполихин О.И., Захаров С.В., Сивков А.В., Евдокимов В.В., Рабинович Э.З., Трезвова А.В. Опубликован 27.06.2011 г. - Бюл. №18].

По результатам медико-биологических исследований, клинических испытаний и практического применения препарата согласно описанию изобретения применение биологически активных веществ, выделенных из мицелия гриба Pleurotus ostreatus 1137 (ВКПМ, F-819), в качестве препарата, эффективно повышает мужскую репродуктивную функцию [Евдокимов В.В. Антиоксидантная терапия при сниженной фертильности у мужчин / В.В. Евдокимов, М.Н. Коршунов, Е.С. Коршунова, Д.Т. Айбятов, Э.З. Рабинович, В.П. Герасименя, С.В. Захаров // Экспериментальная и клиническая урология. - 2010. - №4.- С. 38-42; Евдокимов В.В. Коррекция патоспермии антиоксидантами in vitro и in vivo: тезисы докладов / В.В. Евдокимов, А.В. Сивков, Е.С. Корптунова, М.Н. Коршунов, В.П. Герасименя, С.В. Захаров, Э.З. Рабинович // Материалы XX ежегодной международной конференции Российской Ассоциации Репродукции Человека «Репродуктивные технологии сегодня и завтра», Нижний Новгород, 6-8 сентября. - 2010. - С. 65-66].

Результат в известном изобретении, выбранном в качестве прототипа, достигается применением биологически активных веществ, выделенных из мицелия гриба Pleurotus ostreatus 1137 (ВКПМ, F-819) в качестве препарата, повышающего мужскую репродуктивную функцию.

До 2016 года готовый продукт выпускался в виде 2-х форм:

а. Биологически активная добавка к пище «Экстракт мицелия вешенки «ЭМВ» по ТУ 9317-01-87552538-08 (свидетельство о государственной регистрации №77.99.23.3.У.11397.12.09 от 14.12.2009 г.).

Экстракт мицелия вешенки «ЭМВ» производится в виде сгущенного экстракта (геля) и представляет собой вязкий однородный концентрат, полученный из мицелия вешенки (штамм 1137, ВКПМ, F-819), выращенного в регулируемых асептических условиях методом глубинного культивирования на жидкой питательной среде, содержащей растительное сырье.

б. Биологически активная добавка к пище «Экстракт мицелия вешенки «ЭМВ» (сироп) по ТУ 9317-02-87552538-08 (свидетельство о государственной регистрации №77.99.23.3.У.11398.12.09 от 14.12.2009 г.).

«Экстракт мицелия вешенки «ЭМВ» (сироп) производится в виде смеси сгущенного экстракта (геля) мицелия вешенки (штамм 1137, ВКПМ, F-819) и сиропа фруктозы, лимонной кислоты, бензоата натрия, дигидроквертецина и воды.

Гриб Pleurotus ostreatus 1137 (ВКПМ, F-819) применяют для получения препарата, влияющего на мужскую репродуктивную функцию.

В результате проведенных углубленных медико-биологических исследований по определению действующих веществ в составе экстракта, мишеней и механизма их действия, а также опыта практического применения обеих форм препаратов, несмотря на их высокую эффективность, были выявлены присущие этим препаратам основные недостатки.

Эти недостатки были связаны, прежде всего, с недостаточно высокой растворимостью в дистиллированной воде в установленном соотношении масс. (%) полученного из мицелия Pleurotus ostreatus химического состава жирорастворимых биологически активных веществ, например витаминов D и его активных форм, витамина Е, флавоноидов, высших жирных кислот и др, что, в свою очередь, не позволяло равномерно их распределять по объему готовых форм производимых препаратов, а соответственно в последующем получать валидируемые значимые результаты по их эффективному лечебному действию на организм при их применении в практической медицине, в том числе и в качестве препарата, повышающего мужскую репродуктивную функцию.

Кроме того, начиная с 2016 года, оба препарата промышленно не выпускаются и указанные в описании Свидетельства о государственной регистрации утратили свою силу.

Снятие с производства указанных препаратов, несмотря на их эффективное применение в практической медицине, прежде всего, вызвано заменой этих препаратов на более эффективные формы такого рода препаратов, зарегистрированных в 2015-2016 г.г. в виде 2-х новых форм:

а. Биологически активная добавка к пище «Экстракт мицелия вешенки «РЕВИТАЦЕЛ» (ТУ 9317-033-87552538-15), которая представляет собой раствор ЭМВ в пропиленгликоле и является дополнительным источником витамина D. «Экстракт мицелия вешенки «РЕВИТАЦЕЛ» также используют в качестве сырья в пищевой и парфюмерной промышленности (свидетельство о государственной регистрации RU.77.99.11.003.Е.001355.03.16 от 25.03.2016 г.);

б. Биологически активная добавка к пище «Экстракт мицелия вешенки «ОВОДОРИН - D» (сироп) (ТУ 9317-034-87552538-15), в состав которой входит экстракт мицелия вешенки «РЕВИТАЦЕЛ», дигидрокверцетин (150,0-300,0 мг /100 г сиропа) и сироп, включающий глицерин, пропиленгиколь, лимонную кислоту, консервант натрия бензоат, воду (свидетельство о государственной регистрации RU.77.99.11.003.E. 001780.014.16 от 22.04.2016 г.).

В зарегистрированных новых формах обоих препаратов указанные выше недостатки были устранены за счет разработки новой технологии растворимости в установленном соотношении масс. (%) полученного из мицелия Pleurotus ostreatus химического состава жирорастворимых биологически активных веществ, например витаминов D и его активных форм, витамина Е, флавоноидов, высших жирных кислот и др, что, в свою очередь, позволило повысить гомогенизацию этих веществ и их длительную равновесную устойчивость в применяемых органических растворах и равномерно их распределять по объему готовых форм производимых препаратов, а соответственно, в последующем получить валидируемые значимые результаты по их эффективному лечебному действию на организм при их применении в практической медицине.

Проведенные цитологические и медико-биологические исследования по лечебным свойствам разработнных новых форм препаратов подтвердили их медико-биологическую полифункциональность и более высокую эффективность по сравнению с ранее изученными в этой области препаратами на основе «Экстракта мицелия вешенки «ЭМВ» по ТУ 9317-01-87552538-08 (свидетельство о государственной регистрации №77.99.23.3.У.11397.12.09 от 14.12.2009 г.) и «Экстракта мицелия вешенки «ЭМВ» (сироп) по ТУ 9317-02-87552538-08 (свидетельство о государственной регистрации №77.99.23.3.У.11398.12.09 от 14.12.2009 г.).

Установлено, что такая полифункциональность производимого по усовершенствованной технологии Экстракта мицелия вешенки и разработанных на его основе различных форм препаратов, в том числе и БАД к пище «РЕВИТАЦЕЛ», прежде всего, связана с установленными нами его отдельными активными веществами, механизмом и мишенями их внегеномного действия на измененные свойства мембран клеток и/или мембранных рецепторов, реагирующих на внешние сигналы, поступающие от внесенных в организм активных веществ, содержащихся в составе принимаемого экстракта низкомолекулярных биологически активных веществ или его отдельных компонентов в реальном масштабе времени, в т.ч. впервые открытого нами в грибе Pleurotus ostreatus 1137 активной формы витамина D дезметилинцистерол [Патент РФ на изобретение №2435599 от 21.07.2010 г. Препарат 4-hydroxy-17R-methylincisterol, влияющий на тканевой обмен, и применение штамма гриба Pleurotus 1137 для его получения. Герасименя В.П., Захаров С.В., Кирьянов Г.И., Поляков В.Ю., Ташлицкий В.Н. Опубликован 10.12.2011 г. - Бюл. №34].

Полученные результаты подтверждены многократно повторенными экспериментами, испытаниями как на уровне in vivo, так и in vitro и обработаны с использованием современных методов статистического анализа [Экстракты мицелия вешенки (Pleurotus ostreatus): медико-биологические эффекты и возможные механизмы действия: сборник статей / Под ред. В.П. Герасимени, В.Ю. Полякова - М.: Институт химической физики РАН, ООО «Инбиофарм». - 2013. - 224 с.].

Однако как препарат, влияющий на мужскую репродуктивную функцию согласно изобретению, ни один из известных новых препаратов в настоящее время не применяется.

Задачей настоящего изобретения является обоснование применения препарата «Экстракт мицелия вешенки «РЕВИТАЦЕЛ», полученного в виде однородной прозрачной водной суспензии сгущенного «Экстракта мицелия вешенки «ОВОДОРИН®» на основе штамма гриба Pleurotus ostreatus ВКПМ F-819 в пропиленгликоле, содержащей витамин D и консервант натрия бензоат по новому назначению, подтверждающему возможность реализации известным препаратом лечения мужского бесплодия, связанного со снижением фертильных характеристик спермы.

Технический результат состоит в повышении эффекта стимуляции функционального состояния половых клеток, который приводит к снижению андрогенодефицита у мужчин репродуктивного возраста при нарушении фертильных характеристик эякулята, в частности при идиопатической патоспермии за счет применения известного препарата по новому назначению.

Результат достигается применением «Экстракта мицелия вешенки «РЕВИТАЦЕЛ» для приращения процентного соотношения уровня повышения активности сперматозоидов человека.

Готовый продукт выпускается в виде:

- Биологически активной добавки к пище «Экстракт мицелия вешенки «РЕВИТАЦЕЛ» по ТУ 9317-033-87552538-15 (свидетельство о государственной регистрации № RU.77.99.11.003.Е.001355.03.16 от 25.03.2016 г.), которая представляет собой раствор ЭМВ в пропиленгликоле и является дополнительным источником витамина D.

Входящий в состав биологически активной добавки к пище «Экстракт мицелия вешенки «РЕВИТАЦЕЛ» «Экстракт мицелия вешенки «ОВОДОРИН®» производится в виде сгущенного экстракта (геля) (ТУ 9317-032-87552538-15) и представляет собой вязкий однородный концентрат, полученный из мицелия вешенки (штамм 1137, ВКПМ, F-819), выращенного в регулируемых асептических условиях методом глубинного культивирования на жидкой питательной среде, содержащей растительное сырье [Герасименя В.П. Инновационные биотехнологии промышленного культивирования грибов Pleurotus ostreatus (Fr.) Kumm, используемых в фармакологической практике для создания медицинских препаратов/ В.П. Герасименя, С.В. Захаров, В.М. Брусникин, М.А. Клыков, Л.П. Семашева; под ред. В.П. Герасимени, В.Ю. Полякова. - М.: Институт химической физики имени Н.Н. Семенова РАН, ООО «Инбиофарм», 2013, - 212 с.].

Производимый «Экстракт мицелия вешенки «РЕВИТАЦЕЛ», в виде однородной прозрачной водной суспензии сгущенного «Экстракта мицелия вешенки «ОВОДОРИН®» на основе штамма гриба Pleurotus ostreatus ВКПМ F-819 в пропиленгликоле, содержащей витамин D и консервант натрия бензоат, применяют для приращения процентного соотношения уровня повышения активности сперматозоидов человека.

Штамм культуры Pleurotus ostreatus 1137 (ВКПМ, F-819) хранится во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов, ГосНИИгенетика под регистрационным номером ВКПМ, F-819.

Задача медико-биологических исследований препарата состояла в получении данных, подтверждающих влияние препарата «Экстракт мицелия вешенки «РЕВИТАЦЕЛ» в виде однородной прозрачной водной суспензии сгущенного «Экстракта мицелия вешенки «ОВОДОРИН®» на основе штамма гриба Pleurotus ostreatus ВКПМ F-819 в пропиленгликоле, содержащей витамин D и консервант натрия бензоат, на приращения процентного соотношения уровня повышения активности сперматозоидов человека.

Для решения вышеуказанной задачи проведены две серии экспериментов in vitro по влиянию на подвижность сперматозоидов существующей формы препарата, выбранного в качестве аналога, и новых форм препарата на основе «Экстракта мицелия вешенки «ОВОДОРИН®», включающих в том числе и заявляемую форму препарата.

Проведение экспериментальных медико-биологических исследований применения заявляемого и известных форм препаратов осуществлялось на базе НИИ урологии и интервенционной радиологии им. Н.А. Лопаткина - филиала ФГБУ « НМИРЦ» Минздрава (г. Москва).

Во всех сериях экспериментов исследовали два основных параметра, характеризующих повышение мужской репродуктивной функции - «Активная подвижность» сперматозоидов человека и «Общая подвижность» сперматозоидов человека, выраженные в приращении процентного соотношения уровня повышения активности сперматозоидов человека от влияния исследуемых форм препаратов в изучаемых дозовых концентрациях при их добавлении в эякулят в мг/мл эякулята в течение заданного интервала времени (через 0,5 час, 1,0 час, 3,0 час после начала эксперимента) в принятом в эксперименте соотношении масс.

Подсчет подвижности сперматозоидов проводили на оптическом микроскопе Karl Zeiss Jena (Германия) при увеличении x400.

Первая серия экспериментов включала исследования in vitro проявления дозовой зависимости влияния на подвижность сперматозоидов двух новых форм препарата на основе «Экстракта мицелия вешенки «ОВОДОРИН^®», включающих в том числе и заявляемую форму препарата по выбранному основному параметру, влияющему на мужскую репродуктивную функцию: «Активная подвижность» сперматозоидов:

- эксперименты по воздействию in vitro препарата «Экстракт мицелия вешенки «РЕВИТАЦЕЛ» (ТУ 9317-033-87552538-15) на сперматозоиды человека в 3-х дозовых концентрациях: 0,5 мг/мл; 2,5 мг/мл; 5,0 мг/мл с установленным временем контроля активной подвижности сперматозоидов человека через 0,5 час, 1,0 час, 3,0 час;

- эксперименты по воздействию in vitro препарата «Экстракт мицелия вешенки «ОВОДОРИН - D» (сироп) (ТУ 9317-034-87552538-15) на сперматозоиды человека в 3-х дозовых концентрациях: 0,5 мг/мл; 2,5 мг/мл; 5,0 мг/мл с установленным временем контроля активной подвижности сперматозоидов человека через 0,5 час, 1,0 час, 3,0 час.

Исследованию подвергнуты 18 образцов эякулята с разной степенью подвижности.

Вторая серия экспериментов включала исследования in vitro проявления влияния на подвижность сперматозоидов существующей формы препарата, выбранного в качестве аналога, и новой заявляемой формы применения препарата по выбранным основным параметрам, влияющих на мужскую репродуктивную функцию: «Активная подвижность» сперматозоидов и «Общая подвижность» сперматозоидов для выбранного максимального значения дозовой концентрации (мг/мл эякулята) влияния применяемого препарата на активную подвижность сперматозоидов, полученного по результатам проведения первой серии экспериментов:

- эксперименты по воздействию in vitro БАД к пище «СПЕРОТОН» (СГР № RU.77.99.11.003.E.006698.07.14 от 16.07.2014 г.) на сперматозоиды человека в дозовой концентрации 2,5 мг/мл с установленным временем контроля активной подвижности сперматозоидов человека через 30 мин, 1,0 час, 3,0 час;

- эксперименты по воздействию in vitro препарата «Экстракт мицелия вешенки «РЕВИТАЦЕЛ» (ТУ 9317-033-87552538-15) на сперматозоиды человека в дозовой концентрации 2,5 мг/мл с установленным временем контроля активной подвижности сперматозоидов человека через 30 мин, 1,0 час, 3,0 час.

Во второй серии экспериментов исследованию подвергнуты 6 образцов эякулята с разной степенью подвижности.

Полученные результаты двух серий экспериментальных исследований представлены в таблицах 1, 2.

Проведена сравнительная оценка полученных результатов экспериментальных исследований in vitro по влиянию на подвижность сперматозоидов человека применения заявляемого препарата «Экстракт мицелия вешенки «РЕВИТАЦЕЛ» (ТУ 9317-033-87552538-15) с применением существующих форм препаратов «Экстракт мицелия вешенки «ЭМВ» в виде геля по ТУ 9317-01-87552538-08 и «Экстракт мицелия вешенки «ЭМВ» (сироп) по ТУ 9317-02-87552538-08, выбранных в качестве прототипов, применяемых в качестве препаратов, повышающих мужскую репродуктивную функцию [Патент РФ на изобретение №2422151 от 17.03.2010 г. Препарат на основе гриба Pleurotus 1137, влияющий на мужскую репродуктивную функцию. Герасименя В.П., Аполихин О.И., Захаров С.В., Сивков А.В., Евдокимов В.В., Рабинович Э.З., Трезвова А.В. Опубликован 27.06.2011 г. - Бюл. №18], и известного препарата «СПЕРОТОН» (аналог) (СГР № RU.77.99.11.003.E.006698.07.14 от 16.07.2014 г.).

Проведенный анализ применения известных форм препарата на основе биологически активных веществ, выделенных из мицелия гриба Pleurotus ostreatus 1137 (ВКПМ, F-819), выбранного в качестве прототипа препарата, повышающего мужскую репродуктивную функцию [Патент РФ на изобретение №2422151 от 17.03.2010 г. Препарат на основе гриба Pleurotus 1137, влияющий на мужскую репродуктивную функцию. Герасименя В.П., Аполихин О.И., Захаров С.В., Сивков А.В., Евдокимов В.В., Рабинович Э.З., Трезвова А.В. Опубликован 27.06.2011 г. - Бюл. №18], показал следующую эффективность его применения.

В серии опытов с препаратом «Экстракт мицелия вешенки «ЭМВ» в виде геля (выбранного в качестве прототипа) по ТУ 9317-01-87552538-08 (свидетельство о государственной регистрации №77.99.23.3.У.11397.12.09 от 14.12.2009 г.), приготовленном в концентрации 50 мкг/мл, получены следующие результаты. Через 3 часа в образцах эякулята с гелем общая подвижность сперматозоидов составила 107% по отношению к исходному уровню 100%, в контрольных образцах общая подвижность существенно не изменялась.

В серии опытов с препаратом «Экстракт мицелия вешенки «ЭМВ» (сироп) по ТУ 9317-02-87552538-08 (свидетельство о государственной регистрации №77.99.23.3.У.11398.12.09 от 14.12.2009 г.) через 1 час не происходило изменений выделенных параметров. Но к 3-му часу обнаружено незначительное снижение общей подвижности сперматозоидов в контрольных образцах до 86% по отношению к 100% исходного уровня. В образцах эякулята, содержащих 30 мкг/мл сиропа «ЭМВ», подвижность снизилась до 92%, а в эякуляте с концентрацией сиропа ЭМВ 60 мкг/мл подвижность повысилась до 104%, при этом активная подвижность сперматозоидов повысилась до 145% по отношению к исходным 100%.

Анализ результатов первой серии экспериментов (см. таблицу 1) показал, что наиболее эффективной формой препарата в отношении проявления его дозовой зависимости влияния на подвижность сперматозоидов человека из числа исследуемых препаратов является применение заявляемого препарата «Экстракт мицелия вешенки «РЕВИТАЦЕЛ» (ТУ 9317-033-87552538-15). При этом наиболее эффективной дозовой концентрацией препарата из числа исследуемых концентраций является концентрация препарата 2,5 мг/мл эякулята, при которой значения приращения (в %) параметра уровня активной подвижности сперматозоидов после применения препарата во времени в течение 3-х час после его применения достигают 142%-150%. Максимальное значение 150% приращения параметра уровня активной подвижности сперматозоидов после применения препарата при этой концентрации достигается через 1, 0 час.

Полученные значения приращения (в %) параметра уровня активной подвижности сперматозоидов после применения заявляемой формы препарата значительно превосходят значения аналогичных показателей, проявляющихся при применении известной формы препарата, выбранной в качестве прототипа [см. Патент РФ на изобретение №2422151 от 17.03.2010 г.].

На основании полученных результатов второй серии экспериментов in vitro выявления влияния на подвижность сперматозоидов существующей формы препарата, выбранного в качестве аналога, и новой заявляемой формы применения препарата по выбранным основным параметрам, влияющих на мужскую репродуктивную функцию (см. таблицу 2) установлено преимущество применения заявляемой формы препарата «Экстракт мицелия вешенки «РЕВИТАЦЕЛ» (ТУ 9317-033-87552538-15) по сравнению с применением известного препарата «СПЕРОТОН» (аналог) (СГР № RU.77.99.11.003.E.006698.07.14 от 16.07.2014 г.) по основным параметрам «Активная подвижность» сперматозоидов и (%) и «Общая подвижность» сперматозоидов (%) для заданных значений времени контроля исследуемых параметров (час).

Анализ полученных результатов показывает, что в установленных условиях проведения эксперимента по результатам полученных значений из числа исследуемых препаратов (в том числе выбранных в качестве аналога и прототипа) наибольшую эффективность влияния на подвижность сперматозоидов человека по значениям исследуемых показателей проявляет применение заявляемой формы препарата «Экстракт мицелия вешенки «РЕВИТАЦЕЛ» (ТУ 9317-033-87552538-15). Так, например, значения приращения (в %) по отношению к исходному уровню «Активной подвижности» сперматозоидов при применении заявляемой формы препарата при его концентрации 2,5 мг/мл достигают 158% через 1,0 час после обработки эякулята препаратом, а через 3,0 час - 153% и превосходят такого рода значения, полученные с применением известного препарата «СПЕРОТОН» (аналог) после его обработки эякулята через 1,0 час на 29%, а через 3,0 час - на 48%.

Аналогичная картина наблюдается и при сравнительной оценке параметра «Общая подвижность» сперматозоидов (%). Так, например, значения приращения (в %) по отношению к исходному уровню «Общая подвижность» сперматозоидов при применении заявляемой формы препарата при его концентрации 2,5 мг/мл достигают 126% через 1,0 час после обработки эякулята препаратом, а через 3,0 час - 143% и превосходят такого рода значения, полученные с применением известного препарата «СПЕРОТОН» (аналог) после его обработки эякулята через 1,0 час на 12%, а через 3,0 час - на 39%.

Полученные значения приращения (в %) параметра уровня активной подвижности и общей подвижности сперматозоидов после применения заявляемой формы препарата значительно превосходят значения аналогичных показателей, проявляющихся при применении известной формы препарата, выбранной в качестве прототипа [см. Патент РФ на изобретение №2422151 от 17.03.2010 г.].

Таким образом, судя по полученным результатам, применение заявляемого препарата по сравнению с известными препаратами повышает эффект стимуляции структурно-функционального состояния половых клеток, заключающийся в снижении андрогенодефицита у мужчин репродуктивного возраста при нарушении функциональных характеристик эякулята, в частности при идиопатической патоспермии.

Применение заявляемого препарата с таким физиологическим проявлением свойств позволит при нарушении репродуктивной функции, выражаемой различными видами патоспермии, улучшить фертильность эякулята (фертильные характеристики сперматозоидов), что в свою очередь позволит уменьшить уровень идиопатической формы мужского бесплодия, в том числе и за счет приращения процентного соотношения уровня повышения активности сперматозоидов человека.

Применение «Экстракта мицелия вешенки «РЕВИТАЦЕЛ» для приращения процентного соотношения уровня повышения активности сперматозоидов человека.