Способ получения бруцеллёзной моноспецифической сыворотки anti-abortus

Авторы патента:

Аракелян Петрос Карапетович (RU)

Димов Сергей Константинович (RU)

Янченко Татьяна Александровна (RU)

Разницына Галина Васильевна (RU)

Димова Алеся Сергеевна (RU)

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

Владельцы патента RU 2639127:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных" (ФГБНУ ВНИИБТЖ) (RU)

Изобретение относится к ветеринарии и касается способа получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, включающего иммунизацию кроликов разовой дозой штамма В. abortus 19, обескровливание животных, перекрестную абсорбцию сыворотки бактериальной массой гетерологического вида бруцелл с последующей ее инкубацией при 37°C в течение 2 ч, концентрирование сыворотки путем центрифугирования, консервирование и фасовку, где иммунизацию кроликов проводят подкожно в область подгрудка суспензией, представляющей собой смесь культуры штамма В. abortus 19, обеззараженной кипячением, с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG, проводят пробное крововзятие, осуществляют трехкратное взятие крови и обескровливают, в качестве гетерологического вида бруцелл для адсорбции используют штамм В. melitensis 565. Изобретение обеспечивает снижение трудоемкости, повышение противоэпидемической безопасности процесса получения сыворотки, увеличение в два раза выхода конечного продукта. 2 пр., 8 табл.

Изобретение относится к ветеринарии, к диагностике инфекционных болезней, а именно к дифференциации возбудителей бруцеллеза.

Бруцеллез - инфекционная болезнь животных, представляющая большую опасность как для животных, так и для людей.

Существуют различные виды возбудители бруцеллеза. Среди сельскохозяйственных животных наиболее распространены бруцеллы видов abortus и melitensis, опасные как для животных, так и людей.

Принципиально важно, в случае возникновения вспышки бруцеллеза, объективно установить вид возбудителя, так как от этого существенно зависит выбор оптимальной схемы противобруцеллезных мероприятий.

Известно, что для дифференциации возбудителей бруцеллеза в бактериологической диагностике в качестве одного из основных методов используют антивидовые моноспецифические бруцеллезные сыворотки. От уровня их чувствительности зависит надежность видовой дифференциации бруцелл. Кроме того, практически важны простота и безопасность их получения.

Известен принцип получения бруцеллезных моноспецифических (монорецепторных) антивидовых диагностических сывороток по определенной схеме, целью которого является достижение высокого уровня антител за счет многократной гипериммунизации животных-продуцентов (кроликов) культурами вирулентных штаммов бруцелл, с последующей адсорбцией полученных сывороток взвесью бруцелл гетерологичного вида для удаления общих для них антител (Вершилова П.А. Биохимическая и серологическая дифференциация группы Brucella и ее значение в эпидемиологии // Архив биологических наук, 35, сер. Б, 2. М., 1934; Кириллов Л.В. Получение монорецепторных сывороток // Биологические и химиотерапевтические ветеринарные препараты. М., 1963. С. 366-371; Иванов Н.П. Бруцеллез животных и меры борьбы с ним. / Под ред. Т.С. Сайдулдина. - Алматы, 2007. - 433 с.).

Недостатками этого принципа получения бруцеллезных моноспецифических как М-, так и А-сывороток являются высокая себестоимость конечного продукта за счет получения сыворотки только при однократном взятии крови, а также эпидемическая опасность, связанная с использованием в процессе производства живых штаммов бруцелл.

Наиболее близким техническим результатом является способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus (Патент RU №2375074 (13) С1 от 30.06.2008, А61К 39/00). Способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus включает внутривенную иммунизацию кроликов разовой дозой в объеме 1 мл смесью (1:1) из взвеси вакцинного штамма В. abortus 19 ВА концентрацией 3,0-5,0×10⁹м.к. (микробных клеток)/мл, обеззараженной кипячением в течение 60 мин, и взвеси живой культуры того же штамма В. abortus 19ВА концентрацией 3,0-5,0×10⁹ м.к./мл, обескровливание животных, инактивацию сыворотки при 60-65°С в течение 1-1,5 ч, для перекрестной абсорбции используют бакмассу штамма В. melitensis 548, с последующей инкубацией сыворотки при 37°С в течение 2 ч, ее концентрированием путем центрифугирования и добавлением фенола в качестве консерванта.

Недостатками этого способа являются трудоемкость процесса, эпидемическая опасность, связанная с использованием живой культуры бруцелл вида abortus, небольшой объем выхода конечного продукта за счет получения сыворотки от животного-продуцента только при обескровливании.

Техническим результатом предлагаемого способа изготовления бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus является снижение трудоемкости процесса ее изготовления, эпидемической опасности и увеличения выхода конечного продукта.

Техническое решение достигается тем, что способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus включает иммунизацию кроликов разовой дозой штамма В. abortus 19, получение сыворотки, перекрестную абсорбцию сыворотки бактериальной массой гетерологического вида melitensis с последующей ее инкубацией при 37°С в течение 2 часов, концентрирование сыворотки путем центрифугирования, консервирование и фасовку, иммунизацию кроликов проводят подкожно в область подгрудка суспензией в объеме 1 мл, представляющей собой смесь 200 млн м.к. культуры штамма В. abortus 19, обеззараженной кипячением в течение 60 минут, с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG, на 14-16 день проводят пробное крововзятие, а на 21-45 дни осуществляют трехкратное взятие крови и на 60 день обескровливают, для перекрестной адсорбции используют штамм В. melitensis 565, обеззараженный кипячением в течение 60 минут.

Предлагаемый способ изготовления бруцеллезной моноспецифической бруцеллезной диагностической сыворотки anti-abortus позволяет снизить трудоемкость за счет подкожного введения, максимально повысить противоэпидемическую безопасность этого процесса за счет использования обеззараженных культур бруцелл, а минимум четырехкратное взятие крови от каждого кролика позволит в два раза увеличить количество получаемой сыворотки.

В качестве антигенов использовали обеззараженные (инактивированные) кипячением 30 минут культуры бруцелл:

- для гипериммунизации кроликов - взвесь обеззараженной культуры штамма B. abortus 19-200 млн м.к. с добавлением адъюванта MONTANIDE™ ISA 61 VG;

- для адсорбции полученной сыворотки - обеззараженный штамм B. melitensis 565.

Используемые штаммы должны отвечать паспортным данным. Культуру В. abortus 19 высевают на одну из питательных сред: эритрит агар, МППГГА. После 2-3-суточного роста при температуре 37°С бактериальную массу смывают с поверхности питательной среды физиологическим раствором с добавлением 0,5% фенола. Полученную взвесь бруцелл доводят до необходимой концентрации по оптическому стандарту мутности, сливают через двойной марлевый фильтр в колбы и обезвреживают кипячением в течение 60 минут, периодически помешивая. Проверяют на чистоту и стерильность путем засева на питательные среды.

Взвеси культур, используемые в качестве антигенов как при гипериммунизации кроликов, так и для адсорбции полученных сывороток, должны быть стерильными.

В качестве адъюванта применяли французский препарат MONTANIDE™ ISA 61 VG, производитель - фирма «SEPPIC». Готовый к использованию масляный адъювант для ветеринарных вакцин для производства эмульсий «вода в масле» содержит особое обогащенное светлое минеральное масло и высокоочищенное ПАВ, полученное из маннитола и очищенной олеиновой кислоты растительного происхождения. Препарат MONTANID™ISA 61 VG не содержит компонентов животного происхождения. Рецептуры вакцин с MONTANIDE™ ISA 61 VG вызывают сильный и продолжительный иммунный ответ. По сравнению с традиционными масляными эмульсиями суспензия с MONTANIDE™ ISA 61 VG является устойчивой, стабильной и легко вводимой. Для приготовления 100 г вакцины обычно необходимо: MONTANIDE™ ISA 61 VG - 60 г и водной антигенной среды - 40 г. Стабильные эмульсии получаются путем смешивания водной среды в MONTANIDE™ ISA 61 VG, при комнатной температуре или ниже, при интенсивном перемешивании.

При комнатной температуре интенсивно перемешивают на магнитной мешалке взвесь культуры штамма В. abortus 19, обеззараженной (кипячением в течение 60 минут), с добавлением адъюванта MONTANIDE™ ISA 61 VG, в соотношении 40 и 60% соответственно, т.е. для приготовления 10 мл суспензии необходимо 4 мл взвеси - 500 млн м.к./мл и 6 мл адъюванта.

В качестве животных-продуцентов использовали кроликов.

Заявленный результат достигается следующим образом.

Кроликам однократно подкожно в область подгрудка вводят 1 мл суспензии, представляющей собой смесь антигена (200 млн м.к. обеззараженной культуры штамма В. abortus 19) с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG. На 14 день проводят пробное крововзятие, а далее, при условии положительной РА с полученной сывороткой и испытуемой живой культурой В. melitensis в разведении не ниже 1:160, осуществляют четырехкратное взятие крови (из ушной вены) в сроки с 21 по 45 день после гипериммунизации, из расчета 16-20 мл крови на 1 кг живой массы. Через 60 дней тотальное взятие крови (производственное кровопускание). Кровь от каждого кролика берут с соблюдением правил асептики и антисептики в отдельную стерильную емкость. После крововзятия емкость с кровью ставят в термостат при 37°С на 3-4 часа для отделения сыворотки, затем помещают в холодильник при 2-8°С на 2-е суток. Сыворотку от каждого кролика сливают отдельно в стерильные сосуды, после чего прогревают в водяной бане при температуре 60-65°С в течение 1-1,5 часов при постоянном перемешивании и добавлением мертиолата натрия до конечной концентрации 1:10000.

Процесс адсорбции полученной штамма anti-abortus сыворотки проводят, используя бактериальную массу обеззараженного кипячением в течение 30 минут штамма В. melitensis 565, полученную путем выращивания на матрицах в течение 72 часов. Бакмассу смывают 0,9% раствором натрия хлорида, центрифугируют в течение 30 минут при частоте вращения 5000 об/мин, осадок собирают и добавляют 0,9% раствор натрия хлорида. Полученную бакмассу, из расчета 3,5-3,7×10⁹ КОЕ на 10 мл сыворотки, добавляют к сыворотке, с последующей инкубацией смеси при 37°С в течение 2 часов, концентрируют сыворотку путем центрифугирования 30 мин при 5000 об/мин и консервируют, например, добавлением мертиолата натрия в конечной концентрации 1:10000, фасуют.

Контроль активности полученной сыворотки осуществляют в РА до адсорбции и после нее, используя в качестве антигенов живые культуры бруцелл видов abortus и melitensis. Сыворотка считается качественной, если РА с ней и антигенами живых культур бруцелл видов melitensis будет положительной в разведениях не ниже 1:160 и отрицательном результате агглютинации живых культур бруцелл видов melitensis в разведениях 1/10 соответственно.

Пробу сыворотки крови из каждой емкости подвергают проверке на стерильность путем высевов на МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом и среду Сабуро и на активность в РА, РСК, РБП.

При условии стерильности и получении положительных результатов серологических реакций сыворотку смешивают в одну емкость для составления серии, консервируют, например, мертиолатом натрия качестве консерванта в конечной концентрации 1:10000 и расфасовывают.

Пример 1. Определение оптимальной схемы гипериммунизации кроликов для получения сыворотки бруцеллезной моноспецифической anti-abortus.

В опыте изучена сравнительная эффективность четырех схем получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, для чего из здоровых кроликов, предварительно проверенных на бруцеллез серологическими методами, сформировали 4 группы (по 3 кролика в каждой):

1-я группа - животным вводят однократно внутривенно в объеме 1 мл смесь (1:1) из взвеси вакцинного штамма В. abortus 19 концентрацией 3,0-5,0×10⁹м.к. (микробных клеток)/мл, обеззараженного кипячением в течение 60 мин, и взвеси живой культуры того же штамма В. abortus 19 концентрацией 3,0-5,0×10⁹ м.к./мл.

2-я группа - животным вводят однократно подкожно в область подгрудка обеззараженную кипячением в течение 60 минут культуру В. abortus 19 в дозе 200 млн м.к. в смеси с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG в общем объеме 1 мл.

3-я группа - животным вводят однократно подкожно в область подгрудка обеззараженную кипячением в течение 60 минут культуру В. abortus 19 в дозе 100 млн м.к. в смеси с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG в общем объеме 1 мл.

4-я группа - животным вводят однократно подкожно в область подгрудка обеззараженную кипячением в течение 60 минут культуру В. abortus 19 в дозе 300 млн м.к. в смеси с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG в общем объеме 1 мл.

Кровь от животных в целях получения сывороток брали на 7, 14, 21, 28, 45, 60 и 90 дни после введения антигенов.

Исследование полученных сывороток проводили в РА с антигенами, приготовленными из В. abortus 544 и B. melitensis 565, согласно общепринятой методике до и после адсорбции.

Перед адсорбцией сыворотки инактивировали при 60-65°С в течение 1-1,5 ч и обезвреживали мертиолатом натрия до конечной концентрации 1:10000.

В дальнейшем проводили адсорбцию полученных сывороток anti-abortus бактериологической массой штамма B. melitensis 565, обеззараженной кипячением в течение 60 минут и добавленной к сыворотке из расчета 3,5-3,7×10⁹ м.к. на 10 мл сыворотки, с последующей инкубацией смеси при 37°С в течение 2 часов, концентрирование путем центрифугирования 30 минут при 5000 об/мин, добавление в качестве консерванта мертиолата натрия до конечной концентрации 1:10000 и фасовку.

Результаты опыта приведены в таблицах 1-7.

РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 7 день после их сенсибилизации (таблица 1), в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:80 - 1:160 и 1:80, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно; во второй группе - до адсорбции 1:40 - 1:80 и 0-1:80, а после адсорбции - 1:20 - 1:40 и 0-1:10 соответственно; в третьей группе - до адсорбции 1:40 - 1:80 и 0-1:80 соответственно, а после адсорбции 1:20 - 1:40 и 0-1:10 соответственно; в четвертой группе - до адсорбции 1:40 - 1:80 и 0-1:80 соответственно, а после адсорбции 1:20 - 1:40 и 0-1:10 соответственно.

РА сыворотками крови, полученными от кроликов на 14 день после их сенсибилизации (таблица 2), в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:640 - 1:2560 и 1:1280 - 1:2560, а после адсорбции - 1:160 и 1:10-20 соответственно; во второй группе - до адсорбции 1:320 - 1:1280 и 1:80 - 1:1280, а после адсорбции - 1:160 - 1:320 и 0-1:10 соответственно; в третьей группе - до адсорбции 1:80 - 1:320 и 1:80 - 1:320 соответственно, а после адсорбции - 1:20 - 1:160 и 0-1:10 соответственно; в четвертой группе - до адсорбции 1:320 - 1:1280 и 1:160 - 1:1280 соответственно, а после адсорбции 1:160 - 1:320 и 0-1:10 соответственно.

РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 21 день после их сенсибилизации (таблица 3), в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:160 - 1:320 и 1:640 - 1:1280, а после адсорбции - 1:160 - 1:1280 и 1:20 соответственно; во второй группе - до адсорбции 1:160 - 1:1280 и 1:80 - 1:1280, а после адсорбции - 1:160 и 0-1:20 соответственно; в третьей группе до адсорбции - 1:80 - 1:160 и 0-1:80 соответственно, а после адсорбции - 1:80 и 0-1:10 соответственно; в четвертой группе - до адсорбции 1:320 - 1:1280 и 1:160 - 1:1280 соответственно, а после адсорбции 1:160 - 1:320 и 0-1:20 соответственно.

РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 28 день после их сенсибилизации (таблица 4), в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:160 и 1:640 - 1:1280, а после адсорбции - 1:160 - 1:320 и 1:20 - 1:40 соответственно; во второй группе - до адсорбции 1:320 - 1:640 и 1:640 - 1:1280, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно; в третьей группе - до адсорбции 1:80 - 1:320 и 0-1:80 соответственно, а после адсорбции - 1:20 - 1:160 и 0-1:10 соответственно; в четвертой группе - до адсорбции 1:640 и 1:640 - 1:1280 соответственно, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно.

РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 35 день после их сенсибилизации (таблица 5), в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:160 и 1:640 - 1:1280, а после адсорбции - 1:80 - 1:160 и 1:10 соответственно; во второй группе - до адсорбции 1:320 - 1:640 и 1:320 - 1:1280, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно; в третьей группе - до адсорбции 1:160 и 1:80 - 1:320 соответственно, а после адсорбции - 1:80 и 0-1:10 соответственно; в четвертой группе - до адсорбции 1:640 и 1:320 - 1:1280 соответственно, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно.

РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 60 день после их сенсибилизации (таблица 6), в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:160 и 1:640 - 1:1280, а после адсорбции - 1:80 - 1:160 и 1:10 соответственно; во второй группе до адсорбции - 1:320 - 1:640 и 1:320 - 1:1280, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно; в третьей группе до адсорбции - 1:80 - 1:160 и 0-1:160 соответственно, а после адсорбции 1:80 и 0-1:10 соответственно; в четвертой группе до адсорбции - 1:640 и 1:160-1:1280 соответственно, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно.

РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 90 день после их сенсибилизации (таблица 7), в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:160 - 1:320 и 1:80, а после адсорбции - 1:80 и 1:40 соответственно; во второй группе до адсорбции - 1:160 и 1:320, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно, в третьей группе до адсорбции -1:80 и 0-1:80 соответственно, а после адсорбции - 1:-20-40 и 0-1:10 соответственно; в четвертой группе до адсорбции - 1:160 1:320 и 1:320 - 1:640 соответственно, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно.

Таким образом, из приведенных данных очевидно, что оптимальной является схема получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, испытанная на животных второй группы, в которой использовалась однократная подкожная гипериммунизация в область подгрудка суспензия инактивированной культуры бруцелл вида anti-abortus в смеси с масляным адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG. Кроме эпидемической безопасности, ее преимущества заключаются в более высоких ее титрах при получении в отдаленные сроки после гипериммунизации, а значит, в возможности получения значительного объема сыворотки с более высокой активностью за счет многократного (не менее 4-х раз) взятия крови.

Пример 2. Изучение диагностической активности бруцеллезных моноспецифических сывороток anti-abortus, полученных от кроликов, гипериммунизированных по разным схемам, через 6 месяцев их хранения (таблица 8).

Установлено, что сыворотка, полученная от кроликов по схеме, предусматривающей однократную подкожную, в область подгрудка, гипериммунизацию обеззараженной культурой бруцелл вида anti-abortus в смеси с масляным адъювантом MONTANIDE^ТМ ISA 61 VG, сохранила свою активность (РА в разведении не ниже 1:160) в течение не менее 6 месяцев после ее получения. Из крови, взятой через 21, 28, 35 и 60 дней после гипериммунизации, в отличие от сыворотки, полученной при однократной внутривенной гипериммунизации смеси 1:1 обеззараженной и живой культурой бруцелл вида abortus без адъюванта, потерявшей активность в более ранние сроки - 28-35 дней.

Предлагаемый способ получения бруцеллезной моноспецифической бруцеллезной диагностической сыворотки anti-abortus позволяет снизить трудоемкость за счет подкожного иммунизации, максимально повысить противоэпидемическую безопасность этого процесса за счет использования обеззараженных культур бруцелл, а также брать кровь от каждого животного минимум четырехкратно, а значит, в два раза повысить количество получаемой сыворотки.

Литература

1. Вершилова П.А. Биохимическая и серологическая дифференциация группы Brucella и ее значение в эпидемиологии // Архив биологических наук, 35, сер. Б, 2. М., 1934.

2. Иванов Н.П. Бруцеллез животных и меры борьбы с ним. / Под ред. Т.С. Сайдулдина. - Алматы, 2007. - 433 с.

3. Кириллов Л.В. Получение монорецепторных сывороток // Биологические и химиотерапевтические ветеринарные препараты. М., 1963. С. 366-371.

4. Патент RU №2375074 (13) от 30.06.2008, А61K 39/00. «Способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus».

5. Технический бюллетень MONTANIDE™ ISA 61 VG.

Способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, включающий иммунизацию кроликов разовой дозой штамма В. abortus 19, обескровливание животных, перекрестную абсорбцию сыворотки бактериальной массой гетерологического вида бруцелл с последующей ее инкубацией при 37°C в течение 2 ч, концентрирование сыворотки путем центрифугирования, консервирование и фасовку, отличающийся тем, что иммунизацию кроликов проводят подкожно в область подгрудка суспензией в объеме 1 мл, представляющей собой смесь 200 млн м.к. культуры штамма В. abortus 19, обеззараженной кипячением в течение 60 мин, с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG, на 14-16 день проводят пробное крововзятие, а на 21-45 дни осуществляют трехкратное взятие крови и на 60 день обескровливают, в качестве гетерологического вида бруцелл для адсорбции используют штамм В. melitensis 565, обеззараженный кипячением в течение 60 мин.

Изобретение относится к медицине, а именно кардиохирургии и кардиореаниматологии, и может быть использовано для оценки прогноза течения послеоперационного периода у взрослых пациентов с острой сердечной недостаточностью после операций на открытом сердце, получающих лечение методом экстракорпоральной мембранной оксигенации.

Способ диагностики степени тяжести гиперандрогении // 2638813

Изобретение относится к медицине, в частности к гинекологии и эндокринологии, и представляет собой способ диагностики степени тяжести гиперандрогении, включающий определение индекса свободного тестостерона (ИСТ) на основе глобулина, связывающего половые стероиды, и тестостерона крови, отличающийся тем, что ИСТ рассчитывают по формуле где Тобщий – уровень общего тестостерона, нмоль/л, ГСПС – уровень глобулина, связывающего половые стероиды, нмоль/л, и при величине ИСТ от 31 до 36 и наличии клинических проблем, выбранных из гирсутизма, дермопатии и нарушений менструального цикла, диагностируют легкую степень тяжести заболевания, при величине ИСТ от 36 до 100 диагностируют среднюю степень тяжести заболевания, а при величине ИСТ более 100 диагностируют тяжелую степень тяжести заболевания.

Способ определения цист лямблий и ооцист криптоспоридий в клиническом материале, смывах с объектов окружающей среды, в почве // 2638810

Изобретение относится к медицине и ветеринарии и представляет собой способ определения в одной постановке цист лямблий и ооцист криптоспоридий в биологическом материале - кале, в смывах объектов окружающей среды и в почве, заключающийся в подготовке пробы, внесении в пробу иммуномагнитных частиц, иммунохимическом связывании, в результате чего образуются агрегаты цист и ооцист с магнитными частицами, улавливании агрегатов цист и ооцист в магнитном поле, отмывке зафиксированных агрегатов цист и ооцист буферным раствором, диссоциации меркаптоэтанолом или соляной кислотой, разделении цист, ооцист и магнитных частиц в магнитном поле, переносе выделенных цист и ооцист на предметное стекло для последующего иммунофлуоресцентного мечения и последующей оценки микроскопированием с применением насадки «Опти-Люм» на микроскоп, где результат учитывают исходя из того, что цисты лямблий представляют собой сверкающие и флюоресцирующие яблочно-зеленым светом объекты, от округлых до овальных от 8 до 14 мкм в длину на 7-10 мкм в ширину, с ярко подсвеченными краями, ооцисты же криптоспоридий представляют собой сверкающие и флюоресцирующие яблочно-зеленым светом объекты, от овальных до сферических от 3 до 5 мкм в диаметре, с ярко подсвеченными краями.

Способ лабораторной оценки эффективности экстракорпоральной мембранной оксигенации у взрослых пациентов с острой сердечной недостаточностью после операций на открытом сердце // 2638808

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиохирургии и кардиореаниматологии, и может быть использовано для лабораторной оценки эффективности экстракорпоральной мембранной оксигенации у взрослых пациентов с острой сердечной недостаточностью после операций на открытом сердце.

Устройство для взятия биоматериала при перипротезной инфекции коленного сустава // 2638786

Изобретение относится к медицинской технике, используемой в общей хирургии, травматологии, ортопедии и гнойной хирургии, и может быть использовано для взятия проб биоматериала для исследований.

Устройство и установка для разделения компонентов биологических жидкостей и способы их работы // 2638656

Группа изобретений относится к устройствам и способу разделения компонентов биологических жидкостей и может быть использовано в биотехнологии, для препаративных целей в промышленности, в лабораторной или исследовательской практике, в частности для отделения осадка при центрифугировании с непрерывной подачей биологической жидкости для разделения.

Способ прогнозирования риска формирования суб- и декомпенсированной плацентарной недостаточности в семьях с тромбофилией обоих родителей // 2637873

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, предназначено для врачей гемостазиологов, акушеров-гинекологов и перинатологов акушерских стационаров, перинатальных центров.

Способ определения митогениндуцированной адгезивности лейкоцитов // 2637652

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения митогениндуцированной адгезивности лейкоцитов. Для этого проводят отбор проб крови, выделение лейкоцитов, инкубирование, фиксацию и окраску клеток.

Способ и реагент-индикатор для рн-метрии вагинальной жидкости // 2637649

Группа изобретений относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использована для для рН-метрии вагинальной жидкости. Для этого проводят забор биоматериала вагинальной жидкости с формированием контактного слоя с реагентом, при этом контактный слой получают смешиванием образца биоматериала с предварительно размещенной каплей реагента-индикатора на предметном стекле.

Способ микроскопического исследования биологических образцов, маркированных фосфоресцентными зондами in vitro // 2637630

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для микроскопического исследования биологических образцов, маркированных фосфоресцентными зондами in vitro.

Способ прогнозирования осложненного течения вакцинального периода детей с неблагоприятным преморбидным фоном // 2639128

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования течения вакцинального процесса при вакцинации живыми вакцинами детей с неблагоприятным преморбидным фоном. Для этого проводят иммунологическое обследование. Детям с неблагоприятным преморбидным фоном до вакцинации определяют субпопуляции лимфоцитов CD16+, CD25+. При относительных значениях субпопуляции лимфоцитов с фенотипом CD16+ ниже 20% и CD25+ ниже 24% прогноз – благоприятный. При относительных значениях субпопуляции лимфоцитов с фенотипом CD16+, CD25+ выше 20% и 24% прогноз – неблагоприятный. Изобретение позволяет прогнозировать осложненное течение поствакцинального периода при вакцинации против кори, паротита, краснухи, у детей с неблагоприятным преморбидным фоном (часто болеющих, с аллергическими заболеваниями, патологией нервной системы, вторичными иммунодефицитными состояниями, сочетанной патологией). 6 пр.

Способ прогнозирования хронической гипоксии плода у женщин, забеременевших с помощью экстракорпорального оплодотворения // 2639137

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии, акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования хронической гипоксии плода (ХГП) у женщин, забеременевших с помощью ЭКО. Для этого у женщин перед процедурой ЭКО в венозной крови определяют содержание тиреотропного гормона и при его значении более 1,92 мМЕ/л прогнозируют развитие ХГП. Способ позволяет повысить точность и специфичность прогнозирования ХГП у женщин, забеременевших с помощью метода ЭКО, при простоте его выполнения с выделением группы риска формирования ХГП для своевременного проведения профилактических мероприятий. 1 табл., 4 пр.

Способ прогнозирования эффективности пролонгированной лучевой терапии при раке прямой кишки // 2639253

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано в прогнозировании эффективности пролонгированной лучевой терапии при раке прямой кишки для индивидуализации и выбора оптимальной тактики лечения. Сущность изобретения заключаются в том, что в биопсийном материале опухоли прямой кишки до начала курса пролонгированной лучевой терапии и после 10 сеанса лучевой терапии проводят ДНК-цитометрический анализ и определяют индекс пролиферации опухоли. При снижении индекса пролиферации в 1,5 раза и более прогнозируют эффективность проводимой лучевой терапии, сеансы ее продолжают в полном объеме, при снижении индекса пролиферации опухоли менее чем в 1,5 раза прогнозируют недостаточную эффективность лучевой терапии, сеансы которой прекращают. Использование способа позволяет прогнозировать эффективность лучевой терапии, индивидуализировать тактику лечения, улучшить результаты лечения больных, способ прост в исполнении. Способ позволит снизить затраты на неэффективное лечение рака прямой кишки. 2 пр.

Способ определения оптимального срока выполнения оперативного вмешательства после пролонгированной лучевой терапии при раке прямой кишки // 2639392

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и предназначено для определения оптимального срока выполнения оперативного вмешательства после пролонгированной лучевой терапии при раке прямой кишки. В биопсийном материале опухоли прямой кишки до начала курса лучевой терапии и через 4 недели после ее окончания проводят ДНК-цитометрический анализ и определяют индекс пролиферации опухоли. Отличие индексов пролиферации в 1,3 раза и менее является показателем для окончания перерыва в лечении и выполнения операции. Отличие индексов пролиферации более чем в 1,3 раза является показателем для продления перерыва в лечении и выполнения операции через 6-8 недель после окончания курса лучевой терапии. Изобретение обеспечивает определение оптимального срока выполнения операции после окончания курса лучевой терапии и снижение затрат на лечение рака прямой кишки. 2 пр.

Способ неинвазивного определения стадии фиброза печени у пациентов с хроническим вирусным гепатитом // 2639432

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для неинвазивного определения стадии фиброза печени у пациентов с хроническим вирусным гепатитом. Пациенту проводят общее и биохимическое исследование крови и УЗИ органов брюшной полости. Определяют возраст, абсолютное содержание тромбоцитов, тимоловую пробу, относительное содержание альбумина крови, толщину правой доли печени, длину селезенки, ширину селезенки, площадь сечения селезенки, отношение суммы площадей сечений правой и левой долей печени к площади сечения селезенки, диаметр селезеночной вены. Вычисляют значения функций классификации стадий фиброза KF1-KF4 по заявленным формулам. Определяют стадию фиброза печени, за которую принимают индекс функции классификации с наибольшим значением. Способ позволяет точно и неинвазивно определить стадии фиброза печени за счет оценки комплекса наиболее значимых показателей. 4 пр.

Способ определения непосредственных причин терминального исхода при отравлениях этанолом на фоне алкогольной болезни печени // 2639435

Изобретение относится к области медицины, а именно к судебной медицине. Для установления непосредственных причин смерти. Для определения непосредственных причин терминального исхода при отравлениях этанолом на фоне алкогольной болезни печени (АБП) оценивают комплекс патоморфологических, судебно-химических и гистохимических эквивалентов и их компонентов в баллах. Полученные баллы суммируют, и при сумме баллов, равной 4-6, определяют мозговой тип умирания с развитием паралича сердечно-сосудистого и дыхательного центров; при сумме баллов, равной 7-9, - печеночный тип, обуславливающий острую печеночную недостаточность, отек головного мозга; при сумме баллов, равной 10-12, - сердечный, при котором причиной смерти является прогрессирование цирротической кардиомиопатии (ЦКМП) с нарастанием сердечной недостаточности по левожелудочковому типу; при сумме баллов, равной не менее 13, - сердечный, в основе которого лежит алкогольная кардиомиопатия (АКМП), влекущая за собой внезапную сердечную смерть или острую недостаточность кровообращения. Способ повышает точность определения истинной причины смерти и достоверность информации, отражаемой в статистических документах. 3 пр.

Способ диагностики урогенитального трихомониаза // 2639452

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, паразитологии, венерологии, медицинской микробиологии, гематологии, и может быть использовано для диагностики урогенитального трихомониаза. Способ диагностики урогенитального трихомониаза включает забор периферической крови, ее пробоподготовку и ферментативное разрушение форменных элементов периферической крови путем добавления к пробе крови ферментативного препарата протеолитического действия Вобэнзим однократно в виде 0,1-0,5%-ного водного раствора в соотношении 1:1. Далее через 6-12 часов с момента применения ферментативного препарата проводят изготовление мазков и их микроскопическое исследование на выявление трихомонад. Изобретение обеспечивает существенное сокращение длительности проведения лабораторной диагностики трихомониаза из крови, повышение точности диагностики трихомониаза за счет более полного лизиса форменных элементов периферической крови и уменьшение расхода ферментативного препарата. 3 пр.

Стабилизация и анализ жирных кислот в биологическом образце при хранении на твердом носителе // 2639455

Настоящее изобретение относится к способу стабилизации жирных кислот, присутствующих в образце, таком как биологические жидкости (например, кровь, слюна, грудное молоко, моча, сперма, плазма и сыворотка крови), причем способ предусматривает нанесение жирных кислот или образца, содержащего жирные кислоты, на твердый носитель, который содержит твердую подложку, по меньшей мере одно хелатообразующее средство и по меньшей мере один антиоксидант, где твердая подложка содержит менее 2 мкг/см2 примесей, где примеси представляют собой одно или более соединений, выбранных из группы, состоящей из насыщенных жирных кислот, сложных эфиров насыщенных жирных кислот, смоляных кислот и сложных эфиров смоляных кислот. Настоящее изобретение дополнительно относится к способу определения состава жирных кислот в образце при хранении на таком носителе. причем способ предусматривает: (a) нанесение образца на твердый носитель, содержащий твердую подложку, по меньшей мере одно хелатообразующее средство и по меньшей мере один антиоксидант, где твердая подложка содержит менее 2 мкг/см2 примесей, в результате чего образец становится сорбированным на твердой подложке; (b) определение состава жирных кислот в образце, сорбированном на твердой подложке, где примеси представляют собой одно или более соединений, выбранных из группы, состоящей из насыщенных жирных кислот, сложных эфиров насыщенных жирных кислот, смоляных кислот и сложных эфиров смоляных кислот. Также изобретение относится к твердому носителю и способу его получения. 5 н. и 69 з.п. ф-лы, 8 ил., 13 табл.

Способ прогнозирования острого повреждения почек у больных острым коронарным синдромом // 2639465

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования острого повреждения почек (ОПП) у больных острым коронарным синдромом (ОКС), заключающийся в определении содержания эндогенного эритропоэтина в сыворотке крови, отличающийся тем, что уровень эритропоэтина корригируют на содержание гемоглобина в крови по формуле ,где ЕРО - уровень эритропоэтина сыворотки крови, МЕ/мл; Hb - уровень гемоглобина в капиллярной крови, г/л; ЕРОкор - уровень эритропоэтина, корригированный на концентрацию гемоглобина, МЕ/г; и при уровне корригированного эритропоэтина более 75,3 МЕ/г прогнозируют высокий риск развития острого повреждения почек. Осуществление изобретения позволяет повысить точность прогнозирования развития ОПП у больных ОКС, что открывает возможности для своевременной профилактики и лечения большего числа пациентов. 2 пр.

Способ прогнозирования негативных последствий в полости рта при ортодонтическом лечении зубочелюстных аномалий несъемной техникой // 2639476

Изобретение относится к области медицины, в частности к стоматологии, медицинской микробиологии. Способ прогнозирования негативных последствий в полости рта при ортодонтическом лечении зубочелюстных аномалий несъемной техникой, включающий инструментальное и микробиологическое обследование, отличающийся тем, что у пациентов перед установкой несъемной техники после оценки индексных показателей стоматологического статуса проводят забор биоматериала зубной бляшки и устанавливают количественное содержание оральных стрептококков S. mutans и S. Sanguis в КОЕ/г, при выявлении в биотопе обоих видов стрептококков или отдельно каждого в содержании 104 и более КОЕ/г в зубной бляшке, определении индекса КПУ более 1,9 и индекса Green-Wermillion более 1,4 прогнозируют негативные последствия в полости рта, выраженные в кариозной активности в процессе лечения. Использование способа обеспечивает возможность прогнозирования и, соответственно, предупреждения негативных последствий при ортодонтическом лечении зубочелюстных аномалий несъемной техникой в виде кариеса зубов. 2 ил., 3 табл., 3 пр.