Способ получения противоклещевого иммуноглобулина из донорской иммунной плазмы

Авторы патента:

Волкова Лариса Владимировна (RU)

Шульц Елена Владимировна (RU)

A61K39/395 - антитела (агглютинины A61K 38/36); иммуноглобулины; иммунные сыворотки, например антилимфоцитные сыворотки

Владельцы патента RU 2639261:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Пермский национальный исследовательский политехнический университет" (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения противоклещевого иммуноглобулина. Для этого предварительно по экспериментальным данным анализов плазмы многочисленной группы доноров осуществляют прогностический расчет среднего титра антител к вирусу клещевого энцефалита (ВКЭ) прогнозируемой котловой загрузки (Т_{ср.прог}) по следующей формуле:

где T₁ - титр плазмы 1:10 ME или менее; V₁ - объем плазмы с титром 1:10 ME или менее; Т₂ - титр плазмы 1:20 ME; V₂ - объем плазмы с титром 1:20 МЕ; Т₃ - титр плазмы 1:40 ME; V₃ - объем плазмы с титром 1:40 МЕ; Т₄ - титр плазмы 1:80 МЕ; V₄ - объем плазмы с титром 1:80 МЕ; Т₅ - титр плазмы 1:160 МЕ; V₅ - объем плазмы с титром 1:160 МЕ; Т₆ - титр плазмы 1:320 ME; V₆ - объем плазмы с титром 1:320 МЕ. Использование данного способа получения противоклещевого иммуноглобулина заключается в повышении эффективности использования иммунной плазмы доноров с получением противоклещевого иммуноглобулина с титром антител к ВКЭ, равным 1:160 ME. 2 пр.

Изобретение относится к иммунобиологической промышленности и может быть использовано для получения противоклещевого иммуноглобулина из донорской иммунной плазмы.

Получение сырья для производства специфических иммуноглобулинов - процесс не только длительный, но и весьма сложный. Он включает в себя отбор доноров по вирусной безопасности и возможности использования их плазмы в производстве направленных иммуноглобулинов. Данными критериями являются наличие у доноров иммунной плазмы для фракционирования необходимого уровня общего белка не менее 50 г/л и специфического титра антител к вирусу клещевого энцефалита (ВКЭ) не менее 1:20 ME.

Известен способ получения иммуноглобулина для внутривенного введения с использованием метода Кона (RU 2122864, опубл. 10.12.1998 г.), обладающий антикомплементарной активностью не менее 10 мг белка. Однако такой способ не предназначен для получения противоклещевого иммуноглобулина из донорской иммунной плазмы с заданным титром специфической активности в готовом препарате.

Наиболее близким к заявляемому является способ получения иммуноглобулинов, в том числе противоклещевого, включающий обработку фракций крови раствором неионного детергента и последующим извлечением иммуноглобулинов общепринятыми приемами, а именно по методу Кона (RU 2128508, опубл. 10.04.1999 г.).

Известный способ не позволяет получить иммуноглобулин с требуемым титром специфической активности. Применение этого способа позволяет получать препарат из иммунного сырья донорской плазмы с более высоким уровнем специфических антител к ВКЭ, чем необходимо, а значит, эффективность использования иммунной плазмы будет низкой, поэтому затраты на получение противоклещевого иммуноглобулина будут неоправданно высокими.

Технический результат заключается в повышении эффективности использования иммунной плазмы доноров и снижении затрат на получение противоклещевого иммуноглобулина с титром антител к ВКЭ, равным 1:160 ME за счет уменьшения объема использования дорогостоящей иммунной плазмы доноров с высоким титром, т.е. 1:40 ME и выше.

Технический результат достигается при использовании способа получения противоклещевого иммуноглобулина из донорской иммунной плазмы, включающего фракционирование белков и выделение готового препарата по методу Кона.

Сущность изобретения заключается в том, что предварительно по экспериментальным данным анализов плазмы многочисленной группы доноров осуществляют прогностический расчет среднего титра антител к ВКЭ в прогнозируемой котловой загрузке (Т_{ср.прог}) по следующей формуле:

где

T₁ - титр плазмы 1:10 ME или менее;

V₁ - объем плазмы с титром 1:10 ME или менее;

Т₂ - титр плазмы 1:20 ME;

V₂ - объем плазмы с титром 1:20 ME;

Т₃ - титр плазмы 1:40 ME;

V₃ - объем плазмы с титром 1:40 ME;

Т₄ - титр плазмы 1:80 ME;

V₄ - объем плазмы с титром 1:80 ME;

Т₅ - титр плазмы 1:160 ME;

V₅ - объем плазмы с титром 1:160 ME;

Т₆ - титр плазмы 1:320 ME;

V₆ - объем плазмы с титром 1:320 ME;

V_1+2+3+4+5+6 - общий объем плазмы в экспериментальной загрузке,

затем Т_{ср.прог}сравнивают с титром 1:20 ME и осуществляют разбавление экспериментальной загрузки нормальной плазмой с титром 1:10 ME или менее до получения Т_{ср.прог}=1:20 ME, далее осуществляют котловую загрузку, из которой готовят препарат с титром антител к ВКЭ, равным 1:160 ME.

Специфическая активность готового препарата противоклещевого иммуноглобулина должна быть не менее 1:160 ME. Донорская плазма против ВКЭ имеет уровень специфических антител - не менее 1:20 ME.

Как правило, при производстве специфического иммуноглобулина по методу Кона происходит концентрирование антител примерно в 8-10 раз, поэтому осуществление прогностического расчета среднего титра антител к ВКЭ в прогнозируемой котловой загрузке позволит получать готовый продукт с заданным титром 1:160 ME с максимально возможным выходом, тем самым существенно повысить эффективность использования иммунной плазмы в результате существенного уменьшения объема использования дорогостоящей иммунной плазмы доноров с высоким титром, т.е. 1:40 МЕ и выше.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Исходным сырьем служит карантинизированная плазма крови от группы доноров с заранее известным титром антител к ВКЭ. При формировании котловой загрузки вычисляют объем плазмы с одной и той же величиной титра (от 1:20 до 1:320 ME), т.е. определяют Т₁…Т₆ и соответствующие им V₁…V₆.

Далее по этим данным осуществляют прогностический расчет среднего титра антител к ВКЭ в прогнозируемой котловой загрузке (Т_{ср.прог}) по следующей формуле:

где

T₁ - титр плазмы 1:10 МБ или менее;

V₁ - объем плазмы с титром 1:10 ME или менее;

Т₂ - титр плазмы 1:20 ME;

V₂ - объем плазмы с титром 1:20 МЕ;

Т₃ - титр плазмы 1:40 МЕ;

V₃ - объем плазмы с титром 1:40 ME;

Т₄ - титр плазмы 1:80 МЕ;

V₄ - объем плазмы с титром 1:80 ME;

Т₅ - титр плазмы 1:160 ME;

V₅ - объем плазмы с титром 1:160 ME;

Т₆ - титр плазмы 1:320 ME;

V₆ - объем плазмы с титром 1:320 ME;

V _1+2+3+4+5+6 - общий объем плазмы в экспериментальной загрузке.

Затем Т_{ср.прог} сравнивают с титром 1:20 ME, и если Т_{ср.прог} выше 1:20 ME осуществляют разбавление экспериментальной загрузки нормальной плазмой с титром 1:10 ME или менее до получения Т_{ср.прог}=1:20 МЕ.

Далее проводят фракционирование плазмы котловой загрузки по методу Кона (Cohn Е., Strong L. Huges W. Preparations and properties of serum and plasma proteins // J. Amer. Chem. Soc. -1946, - Vol .68, - P. 459), последовательно изменяя концентрацию этанола с 8 до 25 об. %.

Дальнейшее спиртовое фракционирование загрузки приводит к получению готового препарата с титром антител к ВКЭ, равным 1:160.

Пример 1

Была сформирована 1-я экспериментальная загрузка донорской иммунной плазмы в количестве 174,91 л

T₁=1:10 ME; V₁=35,01 л;

Т₂=1:20 МЕ; V₂=130,64 л;

Т₃=1:40 ME; V₃=8,1 л;

Т₄=1:80 МЕ; V₄=0,29 л;

Т₅=1:160 МЕ; V₅=0,87 л;

Т₆=1:320; V₆=0 л.

Расчет прогнозируемой котловой загрузки по формуле показал, что

Округлив эту величину до целого значения, получаем титр антител к ВКЭ, равный 1:20 ME. Расчет показал, что объема нормальной плазмы с титром 1:10 ME и менее в количестве 35,01 л в качестве добавки будет достаточно для получения титра 1:20 МЕ. Поэтому для получения котловой загрузки с нужным титром было добавлено 35,01 л нормальной плазмы с титром 1:10 ME и менее.

После формирования котловой загрузки производили отбор проб для определения титра антител к ВКЭ в реакции торможения гемагглютинации, который составил 1:20 ME.

Фракционирование осуществляли путем медленного добавления к раствору котловой загрузки плазмы с pH 7,2 охлажденного 50 об. % раствора спирта до концентрации 8 об. % при непрерывном перемешивании и постоянном снижении температуры до минус 3°C. Затем смесь центрифугировали на установках типа СГО-100 при 15000 об/мин и температуре минус 3°C. Осадок стадии А8 являлся балластным, центрифугат передавали на стадию А. К центрифугату А8 (pH 6,8-7,2) добавляли 50 об. % раствор этилового спирта до концентрации 25 об. %.

При непрерывном перемешивании и снижении температуры от минус 3°C до минус 10°C осадок А, полученный при центрифугировании смеси, в количестве 8,5-9,5 кг разводили в солевом растворе в 20 раз и осаждали в тех же условиях. Центрифугировали и получали осадок А'. Этот осадок растворяли в солевом растворе в 25 раз и осаждали охлажденным этиловым спиртом до концентрации 17 об. % (стадия Б).

Центрифугат Б (pH 5,55) выдерживали при температуре минус 4°C в течение 12-14 часов, затем центрифугировали со скоростью 15000 об/мин и температуре минус 4°C (стадия Б1).

Центрифугат Б1 подвергали осветляющей фильтрации. Из осветленного раствора выделяли иммуноглобулин G путем осаждения. Иммуноглобулин из раствора переводили в нерастворенную фазу при добавлении охлажденного 50 об. % этанола при pH 6,8-7,2 и температуре минус 10°C с последующим отделением осадка путем центрифугирования со скоростью 15000 об/мин при температуре минус 10°C.

Полученный осадок в количестве 3,0 кг растворяли в 0,4-0,5% растворе хлорида натрия и подвергали ультрафильтрации на установке типа Sartaflow Beta с использованием кассетных мембранных модулей с размером пор 100 кД. К ультрафильтрату в качестве стабилизатора добавляли глицин из расчета 2,25 г глицина на 100 мл раствора. С полученным ультрафильтратом проводили осветляющую и стерилизующую фильтрацию.

После стерилизующей фильтрации осуществляли отбор проб раствора иммуноглобулина для контроля. Продукт выдерживали при температуре 20-27°C в течение 3-4 недель. По истечении этого срока корректировали физико-химические показатели (9,5-10,5% белка, pH 6,6-7,4).

Затем снова проводили стерилизующую фильтрацию и отбор проб для определения титра специфической активности препарата.

Величина титра антител к ВКЭ готового препарата составила 1:160 ME.

Выход готового препарата с 1 л донорской плазмы составил 3,9 упаковок или 39 ампул.

Пример 2

Была сформирована 2-я экспериментальная загрузка из иммунной плазмы:

T₁=1:10; V₁=0 л;

Т₂=1:20; V₂=83,32 л;

Т₃=1:40; V₃=26,3 л;

Т₄=1:80; V₄=8,9 л;

Т₅=1:160; V₅=1,3 л;

Т₆=1:320; V₆=0 л.

Расчет прогнозируемой котловой загрузки по формуле показал, что

Средний титр прогнозируемой загрузки больше, чем 1:20 ME. Для снижения титра брали нормальную плазму с титром к ВКЭ, равным 1:10 ME и менее в количестве 47,85 л и добавляли в экспериментальную, затем вновь рассчитывали Т_{ср.прог} по указанной формуле. В результате получили:

Средний прогнозируемый титр был равен 1:24,6 ME, что при формировании котловой загрузки показало титр, равный 1:20 МЕ.

Затем осуществляли стадии технологического процесса, описанные в примере 1.

Величина титра антител к ВКЭ готового препарата составила 1:160 ME.

Выход готового препарата с 1 л донорской плазмы составил 4,0 упаковки или 40 ампул.

Способ получения противоклещевого иммуноглобулина из донорской иммунной плазмы, включающий фракционирование белков и выделение готового препарата по методу Кона,

отличающийся тем, что

предварительно по экспериментальным данным анализов плазмы многочисленной группы доноров осуществляют прогностический расчет среднего титра антител к вирусу клещевого энцефалита (ВКЭ) прогнозируемой котловой загрузки (Т_{ср.прог}) по следующей формуле:

где

T₁ - титр плазмы 1:10 ME или менее;

V₁ - объем плазмы с титром 1:10 ME или менее;

Т₂ - титр плазмы 1:20 ME;

V₂ - объем плазмы с титром 1:20 ME;

Т₃ - титр плазмы 1:40 ME;

V₃ - объем плазмы с титром 1:40 ME;

Т₄ - титр плазмы 1:80 ME;

V₄ - объем плазмы с титром 1:80 ME;

Т₅ - титр плазмы 1:160 ME;

V₅ - объем плазмы с титром 1:160 ME;

Т₆ - титр плазмы 1:320 ME;

V₆ - объем плазмы с титром 1:320 ME;

V_1+2+3+4+5+6 - общий объем плазмы в экспериментальной загрузке,

затем Т_ср.._прог сравнивают с титром 1:20 ME и осуществляют разбавление экспериментальной загрузки нормальной плазмой с титром 1:10 ME или менее до получения Т_{ср.прог}=1:20 ME, далее осуществляют котловую загрузку, из которой готовят препарат с титром антител к ВКЭ, равным 1:160 ME.

Группа изобретений относится к области биотехнологии, а именно биохимии и медицине, и касается антител для лечения онкологических заболеваний. Антитела по изобретению специфически связывают и блокируют рецептор 1 типа фактора роста фибробластов (FGFR1) и характеризуются аминокислотными последовательностями H-CDR1, H-CDR2, H-CDR3, L-CDR1, L-CDR2 и L-CDR3.

Способ направленного разрушения раковых клеток // 2638446

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для направленного разрушения раковых клеток. Для этого осуществляют их предварительную визуализацию путём введения в исследуемый объект комплекса, состоящего из объединенных молекул фотосенсибилизатора, флуоресцентных наночастиц, флуоресцирующих в инфракрасной области спектра, и биологических распознающих молекул.

Лечение инфаркта миокарда с использованием антагонистов tgf-бета // 2637088

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается лечения инфаркта миокарда. Для этого вводят антагонист TGF-β, представляющий собой антитело, которое содержит VH-домен PET1073G12 (SEQ ID NO:2) и VL-домен PET1073G12 (SEQ ID NO:7).

Способы и применения ингибиторов пропротеиновой конвертазы субтилизин кексин типа 9(pcsk9) // 2636820

Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для лечения сепсиса или септического шока. Для этого проводят введение ингибитора пропротеиновой конвертазы субтилизин кексин 9 (PCSK9) нуждающемуся в этом субъекту, где ингибитором PCSK9 является антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.

Композиции и способы лечения и предупреждения инфекций, вызванных staphylococcus aureus // 2636780

Изобретение относится к медицине и касается фармацевтической композиции для лечения и предупреждения инфекций, вызванных Staphylococcus aureus, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и очищенное моноклональное антитело, содержащее вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий CDR1, CDR2 и CDR3, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий CDR1, CDR2 и CDR3, где моноклональное антитело специфично связывается с белком A (SpA) Staphylococcus aureus с KD менее чем 1×10-10 М посредством паратопа его Fab-участка.

Композиции и способы для диагностики и лечения опухоли // 2636461

Изобретение относится к области иммунологии. Предложены варианты антител, связывающих опухолеассоциированный антигенный полипептид ТАТ425.

Композиции модифицированных антител, способы их получения и применения // 2636046

Данная группа объектов изобретения относится к области биотехнологии. Предложено активируемое антитело, содержащее а) антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (AB), связывающееся с рецептором эпидермального фактора роста (EGFR); б) маскирующую часть (MM), которая ингибирует специфичное связывание AB в нерасщепленном состоянии с EGFR, но не препятствует его связыванию и не конкурирует с ним за связывание с EGFR в расщепленном состоянии; в) расщепляемую часть (CM), которая действует в качестве субстрата для протеазы; и г) линкеры (L1 и L2).

Анти-vegf/dll4-иммуноглобулины с двойными вариабельными доменами и их применения // 2636043

Изобретение относится к области биохимии и биотехнологии, в частности, к белку, связывающему DLL4 и VEGF. Указанный белок содержит первую и вторую полипептидные цепи, каждая из которых имеет два вариабельных домена, связанных линкером.

Композиции для ингибирования masp-2-зависимой активации комплемента // 2636038

Настоящее изобретение относится к иммунологии. Предложено выделенное человеческое моноклональное антитело и его антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с MASP-2 человека.

Антитела к pd-l1 и их применение для усиления функции т-клеток // 2636023

Настоящее изобретение относится к иммунологии. Предложено выделенное антитело к PD-L1 и его антигенсвязывающий фрагмент, охарактеризованные аминокислотными последовательностями гипервариабельных участков (HVR) в составе вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи.

Улучшенные высококонцетрированные жидкие препараты антител против tnf-альфа // 2639386

Группа изобретений относится к области фармацевтики и медицины и касается жидкого водного фармацевтического препарата, содержащего человеческое антитело против TNFα, а именно: адалимумаба в концентрации 100 мг/мл, 1 мг/мл полисорбата-80, 42 мг/мл маннита и воду. Заявлены также способы лечения болезней, ассоциированных с вредной активностью TNFα, путем введения пациенту указанного препарата. Группа изобретений обеспечивает повышенную биодоступность при подкожном введении субъекту, при этом уменьшается боль, ассоциированная с инъекцией препарата у субъекта.10 н. и 11 з.п. ф-лы, 26 табл., 9 пр.

Улучшенные высококонцетрированные жидкие препараты антител против tnf-альфа // 2639386

Антитела против фактора роста эндотелия сосудов (vegf) // 2639506

Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ блокирования или уменьшения рецидивирующего роста опухоли или рецидивирующего роста раковых клеток, включающий введение эффективного количества антитела против VEGF субъекту, нуждающемуся в таком лечении, где антитело против VEGF содержит: HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 или 5; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, или где антитело против VEGF содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44 или 45. Также описан способ лечения не-неопластического состояния, включающий введение эффективного количества антитела против VEGF субъекту, нуждающемуся в таком лечении, где антитело против VEGF представляет собой антитело по указанному выше способу. 6 н и 13 з.п. ф-лы, 16 ил., 5 пр.

Фармацевтическая композиция для лечения и/или профилактики рака // 2639522

Изобретение относится к области биохимии, в частности к антителу, которое специфически связывается с белком CAPRIN-1, а также к конъюгату для лечения или профилактики CAPRIN-1 экспрессирующего рака, его содержащему. Также раскрыты фармацевтическая композиция для лечения или профилактики CAPRIN-1, а также фармацевтическая комбинация для лечения или профилактики CAPRIN-1, содержащие вышеуказанное антитело или конъюгат. Изобретение также относится к способу лечения или профилактики CAPRIN-1 экспрессирующего рака, включающему применение вышеуказанного антитела, конъюгата, композиции или комбинации. Изобретение позволяет эффективно осуществлять лечение или профилактику CAPRIN-1 экспрессирующего рака. 8 н. и 4 з.п. ф-лы, 8 пр.

Фармацевтическая композиция для лечения и/или профилактики рака // 2639522

Слитые полипептиды, содержащие домен wap, и способы их применения // 2639526

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к слитым белкам для ингибирования нейтрофильных серин-протеаз, и может быть использовано в медицине. Получают слитые белки имеющие по меньшей мере один полипептид человеческого секреторного ингибитора лейкоцитарных протеаз (SLPI), функционально связанный с полипептидом Fc-фрагмента иммуноглобулина, имеющего аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 98% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Изобретение позволяет получить слитый полипептид, способный эффективно ингибировать активность нейтрофильных серин-протеаз и облегчать, таким образом, симптомы заболеваний или расстройств, связанных с избыточной экспрессией или активностью серин-протеаз у нуждающегося в этом субъекта. 5 н. и 10 з.п. ф-лы, 4 ил., 4 пр.

Фосфоспецифичные антитела, распознающие тау // 2639537

Настоящее изобретение относится к иммунологии. Предложены антитело и его фрагмент, которые связываются с фосфо-эпитопом на белке Тау, а также кодирующие их полинуклеотиды; линии клеток, продуцирующие антитела; вектор, содержащая его клетка-хозяин и способ получения антитела и его функционального фрагмента. Кроме того, предложены фармацевтический состав, способ лечения, облегчения или защиты от таупатии; способ индукции пассивной иммунной реакции у животного; способ диагностики связанного с белком тау заболевания, расстройства или состояния или предрасположенности к связанному с белком тау заболеванию; способ мониторинга минимального остаточного заболевания у пациента после лечения антителом против тау; способ прогнозирования ответа больного на лечение антителом против тау; способы обнаружения мультимеров фосфо-Тау (pTau) в образце мозга, в том числе посмертного обнаружения; диагностический набор. Данное изобретение может найти дальнейшее применение в диагностике и терапии заболеваний, связанных с Тау-белком. 19 н. и 23 з.п. ф-лы, 10 ил., 15 табл., 11 пр.

Фосфоспецифичные антитела, распознающие тау // 2639537

Способы и композиции для лечения аутоиммунных и воспалительных заболеваний // 2639540

Изобретение относится к области биохимии, в частности к выделенному антителу против RhoB, его фрагменту, композиции, его содержащей, а также к способу подавления воспалительного и/или аутоиммунного заболевания, опосредованного В-клетками и к способу лечения состояния или расстройства, связанного с повышенными уровнями иммуноглобулина в сыворотке крови у нуждающегося в этом субъекта с его использованием. Также раскрыты выделенный пептид для получения вышеуказанного антитела, а также конъюгат и композиция, его содержащие. Изобретение позволяет эффективно осуществлять подавление воспалительного и/или аутоиммунного заболевания, опосредованного B-клетками. 7 н. и 12 з.п. ф-лы, 10 ил., 2 пр.

Способы и композиции для лечения аутоиммунных и воспалительных заболеваний // 2639540