Штамм клубеньковых бактерий sinorhizobium fredii для изготовления бактериального удобрения под сою

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм клубеньковых бактерий Sinorhizobium fredii АмБ-17 депонирован в ВКМ под регистрационным номером ВКМ B-3152D. Штамм может быть использован при изготовлении бактериального удобрения под сою. Изобретение позволяет повысить урожайность сои. 1 табл.

 

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано для производства бактериального удобрения для сои.

Наиболее близким к изобретению является штамм Sinorhizobium fredii ВКМ B-2458D, используемый для приготовления соевого нитрагина (патент РФ на изобретение №2415924 от 10.04.11. Прототип).

Недостатком прототипа является малый диапазон температур для оптимального роста.

Техническая проблема, решаемая данным изобретением, состоит в получении более технологичного штамма, обладающего высокими адаптационными возможностями, стимулирующего быстрое наращивание биомассы и увеличивающего урожайность бобовых культур.

Данная проблема решается новым штаммом клубеньковых бактерий Sinorhizobium fredii ВКМ B-3152D АмБ-17, который выделен в 2014 году из клубеньков дикорастущей сои, произрастающей на лесных почвах Благовещенского района Амурской области.

Полученный штамм депонирован и хранится во Всероссийской коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов (ИБФМ) им. Г.К. Скрябина Российской академии наук под регистрационным номером ВКМ В-3152D.

Штамм Sinorhizobium fredii ВКМ B-3152D характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками.

Культурально-морфологические признаки

Подвижные удлиненные палочки размером (2,3÷2,5)×0,4 мк. Грамотрицательный. Быстрорастущая хемогетеротрофная культура, питается и размножается в органических субстратах при отсутствии света, в аэробных условиях. В чашках Петри на глюкозно-пептонной агаризованной среде указанные бактерии вырастают на 2-4 сутки после посева, образуя выпуклые прозрачные слизистые колонии диаметром 1,0…7,0 мм. Бактерии Sinorhizobium fredii ВКМ B-2458D хорошо растут и на других питательных средах.

Питательные среды для штамма АмБ-17, г/л, рН 6-8, содержащие различные углеводы:

1. Соевая мука - 10; дрожжевой экстракт - 5 г; К2НРО4 - 2; КН2РО4 - 1; MgSO4 - 0,2; MnSO4 - 0,2; (NH4)2SO4 - 0,2; CaCl2 - 0,2; NaCl - 0,5; глюкоза - 20.

2. Пептон - 10; дрожжевой экстракт - 5 г; К2НРО4 - 2; КН2РО4 - 1; MgSO4 - 0,2; MnSO4 - 0,2; (NH4)2SO4 - 0,2; CaCl2 - 0,2; NaCl - 0,5; глюкоза - 20.

3. Пептон - 10; дрожжевой экстракт - 5 г; К2НРО4 - 2; КН2РО4 - 1; MgSO4 - 0,2; MnSO4 - 0,2; (NH4)2SO4 - 0,2; CaCl2 - 0,2; NaCl - 0,5; маннит - 20.

4. Соевая мука - 10; дрожжевой экстракт - 5 г; К2НРО4 - 2; КН2РО4 - 1; MgSO4 - 0,2; MnSO4 - 0,2; (NH4)2SO4 - 0,2; CaCl2 - 0,2; NaCl - 0,5; маннит - 20.

5. Пептон - 10; дрожжевой экстракт - 5 г; К2НРО4 - 2; КН2РО4 - 1; MgSO4 - 0,2; MnSO4 - 0,2; (NH4)2SO4 - 0,2; CaCl2 - 0,2; NaCl - 0,5; сахароза - 20.

6. Соевая мука - 10; дрожжевой экстракт - 5 г; K2HPO4 - 2; KH2PO4 - 1; MgSO4 - 0,2; MnSO4 - 0,2; (NH4)2SO4 - 0,2; CaCl2 - 0,2; NaCl - 0,5; сахароза - 20.

Стерилизация среды при 111°C в течение 30 мин.

Навеску соевой муки, полученную путем размола пророщенных соевых семян, заливают 1 литром воды и кипятят в течение 30 минут. В фильтрат, доведенный до 1 литра, вносят соли.

При выращивании штамма ВКМ B-3152D в пробирках на всех вышеперечисленных средах (при температуре 28°C в течение 72 часов) отмечен обильный рост штриха гелеобразной мутноватой консистенции. При длительном хранении чистой культуры в холодильнике при температуре 4°C консистенция штриха штамма ВКМ B-3152D не изменяется.

Физиолого-биохимические признаки

Прототрофный микроорганизм, аэробный фиксатор, температурный диапазон роста 23-32°C. Оптимальная температура роста 24-26°C. При 0°C и 37°C рост приостанавливается. Микроаэрофилы, развивающиеся при незначительных количествах кислорода в среде, хорошо растут при глубинном посеве. Оптимум рН 7,0; диапазон рН 6,0-8,0.

Отношение к источникам углерода: хемогетеротрофная бактерия, хорошо усваивает и растет на органических субстратах: сахарозе, глюкозе, мальтозе, манните, с образованием продуктов щелочного характера. В качестве источника азота бактерии используют разнообразные минеральные и органические азотсодержащие соединения.

Штамм не патогенен. Пересевается один раз в 6 месяцев. Хранится в пробирках на маннитно-соевом или глюкозно-пептонном агаре при температуре 4-5°C.

Штамм ВКМ B-3152D идентифицирован по «Определителю» Берги (1980) как штамм вида Sinorhizobium fredii.

Штамм Sinorhizobium fredii ВКМ B-3152D отличается от ранее известных штаммов клубеньковых бактерий сои способностью использовать различные источники углеродного питания, хорошо расти в широком температурном и рН диапазоне. Кроме того, в отличие от прототипа, имеющего оптимальную температуру роста 27-28°C, заявляемый штамм имеет оптимальную температуру роста 24-26°C, что больше соответствует основной летней температуре Амурского региона.

Изобретение поясняется следующим конкретным примером использования штамма Sinorhizobium fredii ВКМ В-3152D.

Пример

Посевной материал получают выращиванием штамма в пробирках с агаризованной питательной соевой средой с глюкозой, г/л: К2НРО4 - 0,5; KH2PO4 - 0,5; NaCl - 0,2; MgSO4 - 0,1; CaSO4 - 0,1; соль молибдена - следы; глюкоза - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 20,0.

После посева пробирки с бактериальной культурой выставляют в термостаты с температурой 27-28°C на 7 суток. За это время в пробирках на косяке плотной питательной среды отмечается обильное нарастание бактериальной массы испытываемого штамма.

Для инокуляции семян в день посева сои готовят бактериальную смесь. Для этого в пробирки со штрихом испытываемого штамма клубеньковых бактерий сои вносят по 3 мл деионизированный (очищенной) воды. Путем встряхивания пробирки получают однородную бактериальную смесь, которой сразу же обрабатывают семена сои. Полученный объем суспензии (3 мл) используют для предпосевной обработки 300 г семян сои. После нанесения суспензии семена сои тщательно перемешивают, подсушивают в тени и высевают в подготовленную почву.

В таблице приводятся данные об эффективности штамма ВКМ B-3152D в зависимости от условий года, полученные в результате проведения полевых экспериментов.

Опыты проводили на лугово-черноземовидных почвах с сортом сои МК-100. Бактеризованные семена высевают в день обработки. Штамм Sinorhizobium fredii ВКМ B-3152D по сравнению с контролем (фон - естественная инокуляция) стабильно повышал урожайность семян сои в течение 3-х лет испытаний в среднем на 2,5 ц/га.

Штамм клубеньковых бактерий сои вида Sinorhizobium fredii, депонированный в коллекции ФГБУН ИБФМ им. Г.К. Скрябина РАН под регистрационным номером ВКМ B-3152D, для изготовления бактериального удобрения под сою.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ оценки эффективности работы сильвинитовых сооружений.

Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности штамму Е. coli RosettaTM (pRARE2, pR752), ВКПМ B-11308.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4299 – продуцент секретируемой ксилоглюканазы, кодируемой геном AsCeGH12b (SEQ ID NO: 1), клонированным из Aspergillus cervinus ВКПМ F-612.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и микробиологии и представляет собой L-лизин-продуцирующую бактерию, принадлежащую к роду Corynebacterium или роду Brevibacterium и модифицированную таким образом, что ген ltbR, кодирующий транскрипционный регулятор, инактивирован.

Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к рекомбинантной плазмидной ДНК pClcRFP. Указанная плазмида pClcRFP кодирует продукцию гибридного флуоресцентного белка RFP для определения биодоступных хлорированных катехолов, их аналогов и тяжелых металлов.

Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к модифицированному микроорганизму Saccharomyces cerevisiae, имеющему повышенную продуктивность в отношении молочной кислоты.

Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к способу получения рекомбинантного белка. Данный способ включает культивирование прокариотической клетки-хозяина, продуцирующей рекомбинантный белок, выделение указанного рекомбинантного белка и его очистку до отфильтрованного препарата для хранения (FBS).

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложено применение пробиотического штамма Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434 и применение штамма Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434 в комбинации, по меньшей мере, с одним из штаммов Lactobacillus plantarum для лечения или профилактики остеопороза, лечения или профилактики костной ткани или для повышения абсорбции ионов Са2+ у млекопитающего.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены штаммы Gardnerella vaginalis ВКМ B-3001D (I генотипа) и Gardnerella vaginalis ВКМ B-3003D (III генотипа), обладающие выраженным патогенным потенциалом, способностью колонизовать слизистую влагалища женщин репродуктивного возраста и вызывать выраженные клинические симптомы бактериального вагиноза, и штамм Gardnerella vaginalis ВКМ B-3002D (II генотипа), обладающий меньшим патогенным потенциалом и колонизирующей способностью, что ассоциируется с бессимптомным течением бактериального вагиноза, а также коллекция, содержащая эти штаммы.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен микробный препарат для утилизации углеводородных загрязнений акваторий водоемов, береговой линии при температуре от +4 до +20°С и солености до 30 г/л.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен способ ферментации CO-содержащего газообразного субстрата (варианты).

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен штамм микроорганизма Streptomyces virginiae - продуцент антибиотика вирджиниамицина, депонированный в ВКМ под регистрационным номером ВКМ Ac-2738D и способ получения антибиотика вирджиниамицина.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ предусматривает помещение сульфатредуцирующих бактерий в синтетическую среду, содержащую металлы, с добавлением питательных веществ, включающих в себя растворы витаминов, солей, кофакторов, лактата, сульфида натрия, с дальнейшим культивированием в течение 10 суток при температуре 28ºС, собранный со дна емкости осадок, содержащий кристаллы сульфидов кобальта, и высушивают.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к разработке химерных молекул внешнего поверхностного белка А (OspA), и может быть использовано в медицине. Разработанный химерный полипептид с SEQ ID NO: 173, а также композиции и комбинированные вакцины, которые его содержат, способны вызывать специфический иммунный ответ против бактерий рода Borrelia.

Изобретение относится к биотехнологии и экологии. Предложен способ получения биопрепарата для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложено применение пробиотического штамма Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434 и применение штамма Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434 в комбинации, по меньшей мере, с одним из штаммов Lactobacillus plantarum для лечения или профилактики остеопороза, лечения или профилактики костной ткани или для повышения абсорбции ионов Са2+ у млекопитающего.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены штаммы Gardnerella vaginalis ВКМ B-3001D (I генотипа) и Gardnerella vaginalis ВКМ B-3003D (III генотипа), обладающие выраженным патогенным потенциалом, способностью колонизовать слизистую влагалища женщин репродуктивного возраста и вызывать выраженные клинические симптомы бактериального вагиноза, и штамм Gardnerella vaginalis ВКМ B-3002D (II генотипа), обладающий меньшим патогенным потенциалом и колонизирующей способностью, что ассоциируется с бессимптомным течением бактериального вагиноза, а также коллекция, содержащая эти штаммы.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен микробный препарат для утилизации углеводородных загрязнений акваторий водоемов, береговой линии при температуре от +4 до +20°С и солености до 30 г/л.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен микробный препарат для утилизации углеводородных загрязнений акваторий водоемов, береговой линии, при температуре от +4 до +20°С и солености до 30 г/л.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен микробный препарат для утилизации углеводородных загрязнений акваторий водоемов, береговой линии при температуре от +4 до +20°С и солености до 30 г/л.

Изобретения относятся к сельскому хозяйству. Способ получения экочернозема состоит в том, что собирают и смешивают отходы животноводства и растениеводства, измельчают их, добавляют к ним измельченные сорбирующие добавки до устранения избыточной влажности смеси, вносят культуру перерабатывающих микроорганизмов, перемешивают и выдерживают при стабильной температуре до окончания переработки, причем в качестве отходов животноводства используют навоз, удаленный гидросмывом, измельчение отходов и сорбирующих добавок производят до размера частиц не более 5 мм, из смеси отходов отбирают 1…3% объема, помещают в дренируемую терморегулируемую емкость слоем 3…6 см поверх слоя экочернозема, содержащего черноземообразующие организмы, выдерживают при температуре 20…30°C до окончания переработки слоя смеси в экочернозем, затем укладывают новый слой смеси, выдерживают до окончания переработки и повторяют эти операции, пока длительность переработки очередного слоя не станет менее одних суток, после чего проливают ее водой в количестве не более 50% массы экочернозема в терморегулируемой емкости и собирают дренаж.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм клубеньковых бактерий Sinorhizobium fredii АмБ-17 депонирован в ВКМ под регистрационным номером ВКМ B-3152D. Штамм может быть использован при изготовлении бактериального удобрения под сою. Изобретение позволяет повысить урожайность сои. 1 табл.

Наверх