Способ выявления нейронов и их аксонов в центральной нервной системе

Изобретение относится к нейробиологии и может использоваться для выявления нейронов и их аксонов на нейрохимическом уровне у животных (крыс, кроликов, кошек). Изобретение относится к способу выявления нейронов и их аксонов в центральной нервной системе, включающему промывку 5% раствором глюкозы сосудов исследуемого материала, помещение его в 10% раствор Na2S, промывку 5% раствором глюкозы и дистиллированной водой, приготовление срезов и заливку их бальзамом, отличающееся тем, что после промывки сосудов исследуемого материала 5% раствором глюкозы в них на 15-20 минут вводят 0,133 м раствор CoCl2 или CoSO4 на 5% глюкозе и после помещения в 10% раствор Na2S, который вымывают раствором глюкозы, ополаскивают 5-10 минут в 10% растворе формалина, а замороженные срезы быстро, не более 10 секунд, обрабатывают в 0,1% растворе AgNO3, тщательно промывают в дистиллированной воде, с дальнейшим обезвоживанием и бальзамированием, причем в исследуемых нейронах на микропрепаратах выявляются черные гранулы COS и тончайшие аксоны и дендриты темно-коричневого оттенка. Способ обеспечивает повышение эффективности выявления нейронов, их аксонов и дендритов.

 

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности нейробиологии, и может быть использовано для выявления нейронов и их аксонов на нейрохимическом уровне у животных (крыс, кроликов, кошек).

В расположении нейроморфологов и нейробиологов имеется широкий спектр методик для выявления нервных структур в органах, системах органов и в тканях. Классические методы выявления нейронов в центральной нервной системе и, в частности, в стволе мозга по Н.Н. Боголелепову, Нисслю, Гольджи, Марки, Ferrari, Kishida и многие другие, очень трудоемки, требуют применения весьма дорогих реактивов и оборудования. Существующие методики, хотя и окрашивают нейроны с их дендритами, не выявляют тончайших нервных волокон в структурных образованиях мозга.

Наиболее близким из способов выявления нервных элементов в тканях и, в частности, выявления нейронов в ЦНС является метод с азотнокислым кобальтом по Де Фано [Пирс Э. Гистохимия. Теоретическая и прикладная. М. 1962; Лойд 3., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. М., «Мир», 1982].

Суть метода заключается в следующем:

а) кусочки толщиной 3-4 мм фиксируют в смеси следующего состава: Co(N03)2 1 г, дистиллированной воды 100 см3, кислого формалина 15 см3. Продолжительность фиксации - 6-8 часов для молодых и 12-24 часа для взрослых тканей. Комнатная температура;

б) фиксированный материал быстро ополаскивают и помещают в 1,5% раствор азотнокислого серебра (AgN03), в темноте, при комнатной температуре на 24-48 часа, в зависимости от величины кусочков;

в) далее, после быстрого ополаскивания в дистиллированной воде, кусочки материала переносят на 8-24 часа для восстановления в смесь: гидрохинона 1-2 г, нейтрального формалина 15 см3, воды 100 см3, сульфида натрия (безводный) 0,1-0,5 г (количество сульфида натрия достаточное, чтобы в ванне сразу появилась желтоватая окраска). Раствор готовят перед самым употреблением.

г) далее исследуемый материал быстро ополаскивают водой, заливают в парафин или целлоидин.

Однако проведение метода Де Фано является малоинформативным, так как неспецифичность окраски нервных структур и окружающих их соединительно-тканных и клеточных образований приводит к наслаиванию ионов Ag+ на основные компоненты ткани.

Наиболее близким по технической сущности является способ выявления нервных структур в тканях. Патент №2595849. Суть данного способа заключалась в следующем:

а) перфузируют кусочки исследуемого материала через сосуды 5% раствором глюкозы;

б) на 10-15 минут исследуемый материал помещают в 1-2% раствор диметил-сульфоксида на дистиллированной воде с последующей промывкой сосудистого русла 5% раствором глюкозы шприцом;

в) далее шприцом вводят в сосуды 2% раствор Co(NO3)2 нa 15-20 минут;

г) промывают 5% раствором глюкозы в течение 1-2 минут;

д) помещают объект исследования в смесь следующего состава: 10%Na2S и 70% этиловый спирт - от 1 до 8 часов (время определяют эмпирическим путем в зависимости от структуры и массы органа);

е) промывают в дистиллированной воде до исчезновения запаха сероводорода;

ж) фиксируют в 10% нейтральном формалине - 3 суток;

з) приготавливают на замораживающем микротоме гистологические срезы и докрашивают их в 0,15% растворе галлоцианина. Время окрашивания варьируют от 16 до 24 часов;

и) проводят традиционную проводку через реактивы, заключение в бальзам по стандартной методике.

Однако и этот способ не дает полной информации о структуре нейронов и их дендритов и, особенно, нейронов ганглиев парасимпатического отдела вегетативной нервной системы, их связей и требует проведения дополнительной окраски стромы, что приводит к искажению структуры аксональных волокон.

Задачей изобретения является повышение эффективности выявления нейронов, их аксонов и дендритов, информативности биохимических процессов и экономичности.

Поставленная задача достигается первоначальной перфузией исследуемого материала в 5% растворе глюкозы с последующим введением в сосуды 0,133 м раствора или CoSO4 на 5% растворе глюкозы и дальнейшим помещением исследуемых кусочков мозга в 10% раствор Na2S с 70° этиловым спиртом с кратковременным ополаскиванием (10-15 минут) в 10% растворе формалина с докрашиванием срезов в 0,1% растворе AgNO3.

Способ осуществляют следующим образом:

1. Сразу после забоя животного, промывают сосуды мозга теплым 5% раствором глюкозы при t=37-40°С.

2. Вводят в сосуды 0,133 м раствор на 5% глюкозе на 15-20 минут. При отсутствии можно использовать CoSO4.

3. Вымывают раствор кобальта теплым 5% раствором глюкозы.

4. Кусочки мозга помещают в 10% раствор Na2S на 5-10 часов. Последняя готовится следующим образом - 31 г. Na2S-9Н2O+69 мл дистиллированной воды. Эту смесь фильтруют перед использованием и к 2 мл 10% раствора Na2S добавляют 100 мл 70° спирта.

5. Вымывают Na2S раствором глюкозы, кусочки мозга ополаскивают в течение 5-10 минут в 10% растворе формалина, промывают в дистиллированной воде, режут на замораживающем микротоме.

6. Срезы быстро обрабатывают, не более 10 секунд, в 0,1% растворе AgNO3, тщательно промывают в дистиллированной воде с последующим обезвоживанием и заливают в бальзам.

Результат: В нейронах выявляются черные гранулы сульфида кобальта (CoS), которые их маркируют (CO2+Na2S→CoS→черный осадок). Кроме того, выявляются тончайшие нервные волокна аксонов и дендритов (CoS+2Ag→Ag2S) темно-коричневого цвета.

Применение методики позволяет сделать заключение о достаточно высокой чувствительности и селективности разработанного гистохимического метода на основе реакции сульфида кобальта в сочетании с солями серебра.

Способ выявления нейронов и их аксонов в центральной нервной системе, включающий промывку 5% раствором глюкозы сосудов исследуемого материала, помещение его в 10% раствор Na2S, промывку 5% раствором глюкозы и дистиллированной водой, приготовление срезов и заливку их бальзамом, отличающееся тем, что после промывки сосудов исследуемого материала 5% раствором глюкозы в них на 15-20 минут вводят 0,133 м раствор CoCl2 или CoSO4 на 5% глюкозе и после помещения в 10% раствор Na2S, который вымывают раствором глюкозы, ополаскивают 5-10 минут в 10% растворе формалина, а замороженные срезы быстро, не более 10 секунд, обрабатывают в 0,1% растворе AgNO3, тщательно промывают в дистиллированной воде, с дальнейшим обезвоживанием и бальзамированием, причем в исследуемых нейронах на микропрепаратах выявляются черные гранулы COS и тончайшие аксоны и дендриты темно-коричневого оттенка.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине и ветеринарии может быть использовано для определения влияния физических факторов на биологические объекты. Для этого осуществляют проведение физического воздействия (рентгеновское, акустическое, термическое или сочетанное воздействие) на клетки тканей животного.

Группа изобретений относится к области измерения значений гликемии у больных диабетом. Раскрыт осуществляемый с помощью компьютера способ обеспечения оценки в режиме реального времени уровня гликозилированного гемоглобина (HbA1c) у пациента, исходя из результата измерения уровня глюкозы в крови при самостоятельном контроле (SMBG).

Способ относится к медицине и предназначен для определения возможности еюнального питания у больных с синдромом кишечной недостаточности. С помощью фиброгастродуоденоскопа устанавливают назоеюнальный зонд с глубиной введения 10-15 см за двенадцатиперстно-тощекишечный изгиб, затем в назоеюнальный зонд вводят маркер, в качестве которого используют ацетаминофен в количестве 0,5 г, через 5-15 мин после его поступления в кишечник определяют концентрацию ацетаминофена в плазме крови.

Группа изобретений относится к области анализа биологических материалов, в частности медицинских тестов. В заявке описаны устройство, система, способ и машиночитаемый носитель для универсального анализа результатов иммунологических диагностических экспресс-тестов.
Изобретение относится к медицине, в частности к инфектологии, и касается оценки степени тяжести инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна - Барр у взрослых.

Изобретение относится к области биотехнологии и, в частности, к способу диагностики кальциноза сосудов сердечно-сосудистой системы. Способ диагностики кальциноза сосудов сердечно-сосудистой системы у пациентов с ишемической болезнью сердца состоит из следующих стадий: получение образца крови пациента с ишемической болезнью сердца (ИБС); измерение уровня продуктов генов mir-199a-5p и mir-382 в образцах крови пациента с ИБС с помощью методов оценки количества РНК; сравнение уровня продукции генов mir-199a-5p и mir-382 в тестируемых образцах с контрольными; предсказание наличия кальциноза у пациентов с ИБС, в случае если уровень продукции генов mir-199a-5p и mir-382 повышен в тестируемых образцах по сравнению с контрольными образцами.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу комплексной диагностики состояния зубов при воздействии компьютерного излучения. Способ комплексной диагностики состояния зубов при воздействии компьютерного излучения, заключающийся в том, что проводят диагностику слюны по форме микрокристаллов и при наличии деформации формы кристаллов ротовой жидкости у обследуемого пациента проводят дополнительные исследования состояния эмали зубов, при котором на эмаль зуба наносят электролит в виде 10% раствора хлорида кальция в контролируемые точки, проводят измерение силы тока с помощью двух электродов, первый пассивный из которых располагают в полость рта и обеспечивают контакт с мягкими тканями, второй активный электрод погружают в электролит, снимают показания и при значении тока 0-0,2 мкА диагностируют интактную минерализованную эмаль, при значении тока 0,3-3,8 мкА диагностируют предкариозное состояние эмали, при значении тока 3,9-7,9 мкА диагностируют начальный кариес, при значении тока 8,0-27,7 мкА диагностируют поверхностный кариес, при значении тока 27,8-50,0 мкА диагностируют средний кариес, при значении тока более 50,0 мкА диагностируют глубокий кариес.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу комплексной диагностики состояния зубов при воздействии компьютерного излучения. Способ комплексной диагностики состояния зубов при воздействии компьютерного излучения, заключающийся в том, что проводят диагностику слюны по форме микрокристаллов и при наличии деформации формы кристаллов ротовой жидкости у обследуемого пациента проводят дополнительные исследования состояния эмали зубов, при котором на эмаль зуба наносят электролит в виде 10% раствора хлорида кальция в контролируемые точки, проводят измерение силы тока с помощью двух электродов, первый пассивный из которых располагают в полость рта и обеспечивают контакт с мягкими тканями, второй активный электрод погружают в электролит, снимают показания и при значении тока 0-0,2 мкА диагностируют интактную минерализованную эмаль, при значении тока 0,3-3,8 мкА диагностируют предкариозное состояние эмали, при значении тока 3,9-7,9 мкА диагностируют начальный кариес, при значении тока 8,0-27,7 мкА диагностируют поверхностный кариес, при значении тока 27,8-50,0 мкА диагностируют средний кариес, при значении тока более 50,0 мкА диагностируют глубокий кариес.

Изобретение относится к области медицины, в частности к стоматологии, медицинской микробиологии. Способ прогнозирования негативных последствий в полости рта при ортодонтическом лечении зубочелюстных аномалий несъемной техникой, включающий инструментальное и микробиологическое обследование, отличающийся тем, что у пациентов перед установкой несъемной техники после оценки индексных показателей стоматологического статуса проводят забор биоматериала зубной бляшки и устанавливают количественное содержание оральных стрептококков S.

Изобретение относится к области медицины, в частности к стоматологии, медицинской микробиологии. Способ прогнозирования негативных последствий в полости рта при ортодонтическом лечении зубочелюстных аномалий несъемной техникой, включающий инструментальное и микробиологическое обследование, отличающийся тем, что у пациентов перед установкой несъемной техники после оценки индексных показателей стоматологического статуса проводят забор биоматериала зубной бляшки и устанавливают количественное содержание оральных стрептококков S.

Группа изобретений относится к позиционирующему устройству для подачи птицы и способам подачи птицы с использованием данного устройства. Позиционирующее устройство для подачи птицы содержит раму; кронштейн опоры для груди, выступающий из рамы; опору для груди в форме седла, функционально соединенную с кронштейном опоры для груди и сконфигурированную для предоставления опоры для груди птицы, при этом опора для груди ориентирована таким образом, что голова птицы опущена вниз и вытянута вперед; держатель крыльев, функционально соединенный с рамой над опорой для груди и сконфигурированный для приема и удержания крыльев птицы в по сути прямом, вертикальном положении; пару элементов опоры для ног, функционально соединенных с рамой и сконфигурированных для предоставления опоры и раздвигания ног птицы; и пару держателей ног, функционально соединенных с рамой и расположенных напротив опоры для груди относительно держателя крыльев, и сконфигурированных для приема и удержания ног птицы.
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к средству для профилактики послеродового эндометрита у коров. Средство содержит глюкозо-солевой раствор, аминокислоты лизин и метионин, каждая взята из расчета 19,0-21,0 г на 1 литр, а также новокаин из расчета 4,5-5,5 г на 1 литр.

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способу снижение риска развития послеродовых воспалительных заболеваний матки у коров. Способ включает введение коровам биологически активных веществ антиоксидантного действия.
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способу профилактики и коррекции транспортного стресса у сельскохозяйственных животных. Способ включает применение пробиотического препарата «Интестевит» с кормом для животных за 10 дней перед транспортировкой по 5 доз на голову 1 раз в день и 7 дней после транспортировки по 10 доз на голову 1 раз в день.
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к средству для обработки сосков вымени. Средство содержит поливиниловый спирт марки ПВС18/11, хвойно-глицериновую биологически активную добавку, хлоргексидин 0,05% и дистиллированную воду, при этом компоненты взяты в определенном соотношении.

Изобретение относится к медицине. Способ терапевтической обработки ран на теле человека или животных включает первую стадию лечения, на которой проводят лечение ран пониженным давлением с помощью приспособления для лечения пониженным давлением, и вторую стадию лечения, которую проводят с применением раневой повязки без создания пониженного давления во влажной среде.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу интубации трахеи кролика. Способ включает проведение направляющего устройства в трахею на 4-5 см ниже гортани и последующее проведение в трахею по направляющему устройству интубационной трубки.
Изобретение относится к ветеринарии и может быть применимо для хирургического лечения разрыва передней крестовой связки коленного сустава у собак. Удаляют остатки разорванной передней крестовой связки.

Изобретение относится к техническим средствам оценки качества воздушной среды обитания человека при воздействии на нее аэрозолей различных загрязнителей, в частности к устройству для подсадки лабораторного животного и фиксации положения его тела.

Изобретение относится к животноводству, а именно к способу оценки состояния здоровья молодняка крупного рогатого скота. Способ предусматривает использование в качестве диагностической биосреды шерсти животного, исследование образцов шерсти по 25 химическим элементам и оценку результатов исследования элементного статуса шерсти по центильной шкале.

Изобретение относится к ветеринарии, диагностике патологий коленного сустава у собак. Прогнозирование вывиха коленной чашки у собак проводят путем анализа компьютерных томограмм коленного сустава. Вычисляют парапателлярно-чашечный коэффициент – отношение площади парапателлярного хряща к площади коленной чашки. При величине этого коэффициента менее 0,1 возможен вывих коленной чашечки. Способ обеспечивает высокую точность измерения при минимальном времени обследования, технологичность и простоту прогнозирования. 2 табл.

Изобретение относится к нейробиологии и может использоваться для выявления нейронов и их аксонов на нейрохимическом уровне у животных. Изобретение относится к способу выявления нейронов и их аксонов в центральной нервной системе, включающему промывку 5 раствором глюкозы сосудов исследуемого материала, помещение его в 10 раствор Na2S, промывку 5 раствором глюкозы и дистиллированной водой, приготовление срезов и заливку их бальзамом, отличающееся тем, что после промывки сосудов исследуемого материала 5 раствором глюкозы в них на 15-20 минут вводят 0,133 м раствор CoCl2 или CoSO4 на 5 глюкозе и после помещения в 10 раствор Na2S, который вымывают раствором глюкозы, ополаскивают 5-10 минут в 10 растворе формалина, а замороженные срезы быстро, не более 10 секунд, обрабатывают в 0,1 растворе AgNO3, тщательно промывают в дистиллированной воде, с дальнейшим обезвоживанием и бальзамированием, причем в исследуемых нейронах на микропрепаратах выявляются черные гранулы COS и тончайшие аксоны и дендриты темно-коричневого оттенка. Способ обеспечивает повышение эффективности выявления нейронов, их аксонов и дендритов.

Наверх