Культуральная среда для мезенхимальных стволовых клеток человека



Владельцы патента RU 2640556:

ГРИФОЛЬС, С.А. (ES)

Изобретение относится к области биохимии. Изобретение представляет собой культуральную среду для мезенхимальных клеток человека, включающую базальную среду для мезенхимальной стволовой клетки, лизат наружного слоя лейкоцитов/тромбоцитов человека (лейкоцитарную пленку) в количестве от 5 до 20% (об./об.); инсулин в количестве от 2 от 20 мг/л; селенит натрия в количестве от 0,005 до 1,730 мг/л; этаноламин в количестве от 1 до 8 мг/л и основной фактор роста фибробластов (bFGF) в количестве от 5 до 25 нг/мл, причем упомянутая среда дополнена эмбриональной бычьей сывороткой (FBS) в количестве от 10% до 20% (об./об.) или добавкой клеточной культуры, полученной из плазмы человека (CCS) в количестве от 10 до 40% (об./об.). Изобретение позволяет культивировать линии мезенхимальных клеток человека, включая те, которые не растут в культуральных средах, которые обычно используют для клеток данного типа. 6 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

 

Данное изобретение касается новой культуральной среды для мезенхимальных стволовых клеток человека (hMSC). Более конкретно данное изобретение касается культуральной среды, в которой hMSC линии могут расти, включая те, которые не растут в культуральных средах, которые обычно используют для клеток данного типа, потому что они адаптировались к специфическим культуральным средам.

hMSC представляют собой мультипотентные клетки, принципиально отличающиеся своей способностью дифференцироваться в различных мезенхимальных тканях, таких как костная, хрящевая, сухожильная, мышечная и жировая ткань, среди других. hMSC может быть выделена из различных тканей взрослых людей, включая те, которые, как найдено, находятся в костном мозге, жировой ткани и крови пуповины.

Антипролиферативное, иммуномодулирующее и противовоспалительное действие hMSC сконцентрировало внимание на данных клетках как на потенциальных терапевтических агентах при заболеваниях, вызванных иммунной системой, включая заболевание "трансплантат против хозяина", отторжение после трансплантации цельных органов и аутоиммунные заболевания.

Известно, что для культуры hMSC in vitro является обязательным сохранить их полипотенциальную способность, и для этого является необходимым добавление экзогенных факторов, таких как, например, основной фактор роста фибробластов (bFGF), эпидермальный фактор роста (EGF) и трансформирующий фактор роста (TGFβ-1), к общепринятым культуральным средам. Однако большинство hMSC зависят от конкретной культуральной среды и к тому же не могут быть культивированными на средах, которые традиционно использовали для культур мезенхимальных стволовых клеток, таких как DMEM/F12 среда, дополненная эмбриональной бычьей сывороткой, подходящей для мезенхимальных стволовых клеток (MSCQ).

Для того чтобы преодолеть эти проблемы, данное изобретение касается новой культуральной среды для hMSC, на которой hMSC, которые не растут в культуральной среде других составов, могут расти. Культуральная среда в соответствии с данным изобретением содержит:

a) базальную среду, обычно используемую для культуры мезенхимальных стволовых клеток;

b) лизат наружного слоя лейкоцитов/тромбоцитов человека (лейкоцитарная пленка; LBC);

c) инсулин;

d) селенит натрия;

e) этаноламин;

f) основной фактор роста фибробластов (bFGF).

Как используется в данном документе, термин "культуральная среда" относится к питательному раствору для культивирования, роста или пролиферации клеток. Термин "клеточная культура" относится к клеткам, которые сохраняются, культивируются или выращиваются в искусственной окружающей среде in vitro.

Термин "базальные среды" или "базальная среда", используемый в данном документе, относится к какой-либо среде, в которой мезенхимальные клетки человека способны расти, которая дополнена различными добавками, которая может или не может содержать сыворотку. Базальные среды предусматривают стандартные неорганические соли, такие как цинка, железа, магния, кальция или калия, вместе с витаминами, глюкозой, буферной системой и незаменимыми аминокислотами.

Предпочтительно базальная среда, обычно используемая для культуры мезенхимальных клеток, в культуральной среде в соответствии с данным изобретением представляет собой DMEM/F12 + пируват, DMEM/F12 среда, будучи смесью из равных частей модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM), которая является модификацией минимальной эссенциальной среды, разработанной Гарри Иглом (Налу Eagle), и среды F12 Хэма, разработанной Хэмом (Ham) для роста СНО (яичник китайского хомячка) клеток, F10 Хэма, F12 Хэма, MCDB 131, среда, разработанная Кнедлером (Knedler) и Хэмом (Ham), как среда с пониженным добавлением сыворотки для роста клеток человека, или RPMI 1640, название которой происходит от заглавных букв Roswell Park Memorial Institute, где среда была разработана Муром (Moore) и сотрудниками для культуры нормальных и неопластических лимфоцитом, хотя, когда добавлена в достаточной мере, в ней могут выращивать другие различные типы клеток. Состав и композиция данных сред широко известны и могут быть получены от какого-либо производителя или поставщика, такого как, например, Gibco (Life Technologies). Более предпочтительно средой является DMEM/F12 + пируват.

Одним из компонентов культуральной среды для мезенхимальных клеток человека в соответствии с данным изобретением является лизат наружного слоя лейкоцитов/тромбоцитов. Наружный слой лейкоцитов/тромбоцитов, также известный как "лейкоцитарная пленка", является оболочкой, которая наблюдается между плазмой и красными клетками после центрифугирования или седиментации цельной крови. Он в своей основе содержит лейкоциты и тромбоциты. Лизат наружного слоя лейкоцитов/тромбоцитов (лейкоцитарная пленка) присутствует в культуральной среде в соответствии с данным изобретением в количестве от 5 до 20% (об./об.), более предпочтительно от 7 до 15% (об./об.) и наиболее предпочтительно 10% (об./об.).

Другим из компонентов культуральной среды в соответствии с данным изобретением является инсулин. Благотворный эффект инсулина на рост клеток известен (Cartwright, Т. y Shah, G.P Culture media. Basic cell culture, 2nd edition, Davis, J.M. ed. 2002. Oxford University Press, New York, USA). В культуральной среде в соответствии с данным изобретением инсулин предпочтительно присутствует в количестве от 2 до 20 мг/л, более предпочтительно от 5 до 15 мг/л и наиболее предпочтительно 10 мг/л.

Кроме того, другим компонентом культуральной среды в соответствии с данным изобретением является селен в форме селенита натрия. Селен является следовым элементом, которым обычно обеспечивается культуральная среда посредством сыворотки и который может быть для нее незаменимым. Селенит натрия присутствует в культуральной среде в количестве от 0,005 до 1,730 мг/л.

Более того, культуральная среда для мезенхимальных клеток в соответствии с данным изобретением содержит этаноламин. Известно, что этаноламин стимулирует строительство клеточных мембран. Этаноламин в культуральной среде в соответствии с данным изобретением присутствует в количестве от 1 до 8 мг/л, предпочтительно от 2 до 5 мг/л.

В заключение культуральная среда для мезенхимальных клеток в соответствии с данным изобретением, кроме того, содержит bFGF. Известно, что bFGF рекомендуется для культивирования мезенхимальных клеток (Sato, J. et al. Specific cell types and their requirements. Basic cell culture, 2nd edition, Davis, J.M. ed. 2002. Oxford University Press, New York, USA). bFGF присутствует в культуральной среде в соответствии с данным изобретением в количестве от 5 до 25 нг/мл.

Неожиданно, путем комбинации компонентов в культуральной среде в соответствии с данным изобретением является возможным культивировать линии мезенхимальных клеток человека, включая те, которые адаптированы к другим культуральным средам, которые, как правило, являются коммерчески доступными, которые не растут в культуральных средах, обычно используемых для данного типа клеток, таких как, например, мезенхимальные клетки человека, предлагаемые Lonza или PromoCell.

Необязательно культуральная среда в соответствии с данным изобретением содержит антибиотик. Применять могут какой-либо антибиотик, который, как правило, используют при культивировании данного типа клеток. Предпочтительно данный антибиотик представляет собой смесь гентамицина - амфотерицина. Количество антибиотика, которое должно быть использовано в культуральной среде, может быть легко определено квалифицированным специалистом в данной области.

Для роста мезенхимальных стволовых клеток является важным, чтобы культуральная среда в соответствии с данным изобретением была дополнена, например, эмбриональной бычьей сывороткой (FBS) или добавкой клеточной культуры, извлеченной из плазмы человека (CCS), полученной, например, как описано в патенте США 8252590 В2. Если используют FBS, считается, что количество от 10 до 20% (об./об.) является достаточным. С другой стороны, если CCS используют для того, чтобы добавить к культуральной среде в соответствии с данным изобретением, считается, что может быть достаточным количество от 10 до 40% (об./об.).

Культуральная среда для мезенхимальных стволовых клеток в соответствии с данным изобретением может быть в сухой форме или в жидкой форме. Для использования в сухой форме ее компоненты могут быть растворены в подходящей жидкости для культуры мезенхимальных клеток. Тип жидкости, в которой компоненты культуральной среды в соответствии с данным изобретением могут быть растворены, является известным квалифицированному специалисту в данной области уровня техники, такой как, например, стерильная дистиллированная вода.

Данное изобретение более детально описывается ниже с ссылкой на количество вариантов осуществления. Данные примеры, однако, не предназначены для ограничения пределов данного изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1.

Готовят культуральную среду в соответствии с данным изобретением, содержащую DMEM/F12 + пируват как базальную среду 10% (об./об.) лизат наружного слоя лейкоцитов/тромбоцитов (лейкоцитарную пленку), 10 мг/л инсулина, 0.0067 мг/л селенита натрия, 2 мг/л этаноламина и 20 нг/мл bFGF. Данная среда называется LV2. Среда LV2 была использована сама или была дополнена 10% (об./об.) эмбриональной бычьей сывороткой (FBS), подходящей для мезенхимальных стволовых клеток (MSCQ) или 15% (об./об.) добавкой клеточной культуры, полученной из плазмы человека (CCS). hMSC, коммерчески доступные от Lonza (Basel, Switzerland) или PromoCell (Heidelberg, Germany), были культивированы. Культуральные среды, рекомендуемые производителем, использовали как положительный контроль. Только одну коммерчески доступную базальную среду использовали как отрицательный контроль. Результаты показаны в таблице 1.

Таблица 1.
Экспериментальные результаты культивирования Lonza и PromoCell hMSC.
Культуральная среда Рост клеток
Lonza hMSC PromoCell hMSC
Рекомендуемая производителем (+) (+)
DMEM/F12 (-) (-)
DMEM/F12+FBS (MSCQ) (-) (-)
DMEM/F12+CCS (-) (-)
LV2 (-) (-)
LV2+FBS (MSCQ) (+) (+)
LV2+CCS (+) (+)

Как можно видеть из таблицы 1, Lonza hMSC не способна расти более длительное время, когда используют только DMEM/12 базальную среду как культуральную среду, в том числе когда данная базальная среда дополнена FBS или CCS. Они, кроме того, не растут, когда LV2 среда в соответствии с данным изобретением используется самостоятельно. Однако они способны к росту в культуральной среде в соответствии с данным изобретением, когда она дополнена FBS или CCS, и в культуральной среде, рекомендуемой производителем.

Пример 2.

Для того чтобы определить эффект комбинирования всех компонентов культуральной среды в соответствии с данным изобретением LV2 культуральную среду готовили, как описано в примере 1 и в дополнение, кроме того, готовили данные различные среды, в которых отсутствовал, по меньшей мере, один компонент культуральной среды в соответствии с данным изобретением. Приготовленные среды и полученные результаты показаны в таблице 2.

Таблица 2.
Эффект удаления компонентов из культуральной среды на рост Lonza и PromoCell hMSC.
Культуральная среда Рост клеток
Lonza hMSC PromoCell hMSC
Рекомендуемая производителем (+) (+)
DMEM/F12 (-) (-)
LV2+CCS (+) (+)
LV2+CCS без инсулина, селенита натрия и этаноламина (-) (-)
LV2+CCS без лизата лейкоцитов/тромбоцитов (лейкоцитарной пленки) (-) (-)
LV2+CCS без bFGF (-) (-)
LV2+CCS без LBC/bFGF (-) (-)

Как можно видеть из таблицы 2, Lonza и PromoCell hMSC росли только в культуральной среде, рекомендуемой производителем, и в культуральной среде в соответствии с данным изобретением, дополненной CCS. Когда, по меньшей мере, один из компонентов культуральной среды в соответствии с данным изобретением удаляли, hMSC не были способными расти в ней более длительное время.

Хотя изобретение описано в соответствии с примерами предпочтительных вариантов осуществления изобретения, они не должны приниматься во внимание как ограничивающие изобретение, которое определяются наиболее широкой интерпретацией последующей формулы изобретения.

1. Культуральная среда для мезенхимальных клеток человека, включающая базальную среду для мезенхимальной стволовой клетки, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит

a) лизат наружного слоя лейкоцитов/тромбоцитов человека (лейкоцитарную пленку) в количестве от 5 до 20% (об./об.);

b) инсулин в количестве от 2 от 20 мг/л;

c) селенит натрия в количестве от 0,005 до 1,730 мг/л;

d) этаноламин в количестве от 1 до 8 мг/л и

e) основной фактор роста фибробластов (bFGF) в количестве от 5 до 25 нг/мл, причем упомянутая среда дополнена эмбриональной бычьей сывороткой (FBS) в количестве от 10 до 20% (об./об.) или добавкой клеточной культуры, полученной из плазмы человека (CCS), в количестве от 10 до 40% (об./об.).

2. Культуральная среда для мезенхимальных клеток человека по п. 1, в которой базальная среда для мезенхимальной стволовой клетки представляет собой DMEM/F12 + пируват, F10 Хэма, F12 Хэма, MCDB 131 или RPMI 1640.

3. Культуральная среда для мезенхимальных клеток человека по п. 1, в которой лизат наружного слоя лейкоцитов/тромбоцитов человека (лейкоцитарная пленка) присутствует в культуральной среде в количестве от 7 до 15% (об./об.).

4. Культуральная среда для мезенхимальных клеток человека по п. 1, в которой инсулин присутствует в количестве от 5 до 15 мг/л.

5. Культуральная среда для мезенхимальных клеток человека по п. 1, в которой этаноламин присутствует в количестве от 2 до 5 мг/л.

6. Культуральная среда для мезенхимальных клеток человека по п. 5, которая дополнительно содержит антибиотик.

7. Культуральная среда для мезенхимальных клеток человека по п. 6, в которой антибиотик является смесью из гентамицина/амфотерицина.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложены способы промотирования регенерации ткани или органа у пациента путем уничтожения частично функционирующих или не функционирующих клеток или стареющих клеток, содержащих конечный продукт гликирования, а также способ преодоления эффектов старения и способ селективного уничтожения стареющих клеток у пациента.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к индуцирующему иммунитет агенту, содержащему эффективное количество по меньшей мере одного полипептида, обладающего индуцирующей иммунитет активностью, который индуцирует цитотоксические Т-клетки, способные уничтожать опухолевые клетки, экспрессирующие полипептид CAPRIN-1.

Изобретение относится к области иммунологии и биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения антиген-специфических цитотоксических клеток, обладающих противоопухолевой цитотоксической активностью против клеток немелкоклеточного рака легкого, включающий получение дендритных клеток из моноцитов периферической крови больного немелкоклеточным раком легкого, культивирование дендритных клеток в присутствии рекомбинантного человеческого гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (рчГМ-КСФ) и интерлейкина-4 (рчИЛ-4), с последующей нагрузкой антигенами опухоли и созреванием с помощью фактора некроза опухоли (ФНО-α) и интерлейкина-1β (ИЛ-1β) в течение 24 часов, после чего зрелые дендритные клетки культивируют совместно с неприлипающей фракцией аутологичных мононуклеарных клеток, где совместное культивирование зрелых дендритных клеток и неприлипающей фракции аутологичных мононуклеарных клеток проводят в присутствии ингибитора ИДО 1-метил-L-триптофана (1 МТ).

Настоящее изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к клеточным культуральным средам без глутамина, дополненным аспарагином, и может быть использовано для получения полипептида, выбранного из антител, фрагментов антител и иммуноадгезинов, в клетке-хозяине млекопитающего.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к белку «цинковые пальцы» неприродного происхождения, который связывается с геном Htt, что может быть использовано в медицине.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к способу получения двухкомпонентного препарата для лечения повреждения суставов. Способ получения двухкомпонентного препарата для лечения повреждения суставов, осуществляемого путем малоинвазивного введения в суставную сумку, упомянутого препарата в виде двух компонентов - основного и инициирующего, заключающийся в том, что для получения основного компонента препарата плазму крови переносят с помощью шприца и переходного фильтра с размером пор, достаточным для обеспечения стерильности, в одно из отделений криопакета и выдерживают до полного замораживания, затем замороженную плазму крови частично размораживают, перемещают первую оттаявшую фракцию плазмы крови в пустое отделение криопакета и удаляют её из криопакета шприцом, подсоединенным к порту пакета, а оставшийся в криопакете криопреципитат плазмы крови размораживают, затем в упомянутом криопреципитате плазмы крови ресуспендируют клетки, предшественники хондроцитов, в количестве, достаточном для обеспечения терапевтического эффекта, а для изготовления инициирующего компонента препарата смешивают раствором хлорида кальция и тромбина в сбалансированном солевом растворе с добавлением аминокапроновой кислоты в количестве не более максимальной рекомендованной дозы для однократного введения в суставную сумку, при определенных условиях.

Изобретение относится к нейрофизиологии, конкретно к направленному обучению биологической нейронной сети. Способ включает использование микроэлектродной матрицы для выращивания культуры диссоциированных нейрональных клеток, стимуляцию высокочастотными электрическими импульсами двух участков нейрональных клеток на основе правила зависящей от времени импульса синаптической пластичности и оценку эффективности обучения биологической нейронной сети.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к носителю для лекарственного средства для лечения фиброза кишечника посредством доставки лекарственного средства для ингибирования активности или роста клеток, продуцирующих внеклеточный матрикс в кишечнике, что может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению популяции стромальных стволовых клеток из человеческого костного мозга. Способ включает выделение популяции стромальных стволовых клеток на основании экспрессии синдекана-2 из смешанной популяции стромальных клеток взрослых млекопитающих.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммунологии, и может быть использовано в медицине для индуцирования противоопухолевого иммунитета против экспрессирующего Lck, WHSC2, SART2, SART3, UBE2V, EGFR, PTHrP или MRP3 рака.
Изобретение относится к области медицинской биотехнологии, а именно к применению клеточной линии меланомы кожи человека 369 ADmel, хранящейся в Специализированной коллекции культур клеток позвоночных Российской коллекции клеточных культур под регистрационным номером РККК (П) 727Д. Клеточная линия обладает стабильными культуральными и морфологическими характеристиками, характеризуется экспрессией дифференцировочных опухолеассоциированных антигенов - MelanA, MITF, gp100, S100, тирозиназа, TRP-1; раково-тестикулярных антигенов - NY-ESO-1 и семейств MAGE, BAGE, GAGE, LAGE. Изобретение позволяет тестировать активность различных фармацевтических препаратов, создавать диагностические наборы и тест-системы для разработки новых лекарственных средств и новых терапевтических подходов, в частности, позволяет создать модельную систему, позволяющую определить оптимальные дозы фотосенсибилизатора для фотодинамической терапии, а также приготавливать противоопухолевые вакцины на основе активированных дендритных клеток. 2 пр.

Изобретения касаются безбелковой среды и способа ее использования. Охарактеризована безбелковая среда для культивирования клеток СНО. Среда не содержит олигопептиды, содержит аминокислоты, витамины, органические и неорганические соли и источники углеводов и дополнена по меньшей мере 2 мг/л путресцина ⋅ 2HCl. Изобретения способствуют росту клеток, их удельной продуктивности и плотности. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 7 ил., 11 пр.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способу улучшения сократительной способности сердца, повышения капиллярной плотности или снижения миокардиальной гипертрофии у пациента с поврежденным миокардом, что может быть использовано в медицине. Указанный способ включает введение очищенной популяции клеток, производных от кардиальной ткани человека, где указанные клетки не экспрессируют теломеразу, тяжелую цепь миозина, CD31, CD45 и CD16, и экспрессируют GATA4, Nkx2.5, CD105, CD90, CD59 и CD54. Изобретение позволяет эффективно улучшать сократительную способность сердца, повышать капиллярную плотность или снижать миокардиальную гипертрофию у пациентов, перенесших острый инфаркт миокарда. 15 з.п. ф-лы, 39 ил., 30 табл., 20 пр.

Настоящая группа изобретений относится к биотехнологии и иммунологии. Предложены способы получения целевого антитела с модулированным галактозилированием (варианты), способы модулирования галактозилирования целевого антитела (варианты) путем оптимизации культуральной среды. Способы предусматривают повышение осмоляльности раствора для культивирования клеток животных и/или добавление аспарагина в раствор в определенный момент времени процесса культивирования клеток. Изобретения обеспечивают получение желаемой популяции антител. 5н. и 14 з.п. ф-лы, 3 ил., 8 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к модифицированным in vitro дендритным клеткам, и может быть использовано в медицине. Полученные определенным способом дендритные клетки используют в составе фармацевтической композиции или набора для регулируемой экспрессии полипептида, обладающего функцией интерлейкина-12 (IL-12) в присуствии активирующего лиганда. Изобретение позволяет эффективно ингибировать рост опухоли у млекопитающих. 6 н. и 30 з.п. ф-лы, 18 ил., 5 пр.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложены автомат и автоматизированный способ культивирования клеток, стерильный одноразовый комплект для культивирования клеток в автомате, опорное средство для взбалтывания для автомата и применение вышеуказанных автомата, комплекта и средства для культивирования стволовых клеток типа CD34+ или мононуклеарных клеток крови, таких как лимфоциты. Автомат содержит резервуары с культуральной средой, факторами роста и культивируемыми клетками, инкубатор с термостатической камерой и мешочком для культивирования или выращивания клеток, компьютерную систему управления, опорное средство для взбалтывания емкости для культивирования или выращивания. Комплект содержит один мешочек для выращивания клеток и гибкие трубки для соединения мешочка с другими мешочками или резервуарами, причем мешочек имеет входное и выходное отверстия, а также отверстие для забора проб. Средство для взбалтывания имеет поддерживающую мешочек подставку, три клапана на подставке, причём средство выполнено с возможностью наклона подставки из горизонтального положения в вертикальное положение и вибрирования. Способ включает загрузку в мешочек культуральной среды, факторов роста и культивируемых клеток, взбалтывание мешочка, выдерживание мешочка для выращивания клеток в инкубационных условиях и сбор содержимого мешочка. Изобретения обеспечивают культивирование, размножение или выращивание клеток в улучшенных условиях стандартизации, мониторинга и контроля операций. 7 н. и 20 з.п. ф-лы, 24 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к химерному антигенному рецептору (CAR), обладающему специфичностью к CD22, что может быть использовано в медицине. Рекомбинантным путем получают рецептор CAR, содержащий антигенсвязывающий домен HA22, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен T-клетки, а также нуклеиновую кислоту, кодирующую заявленный рецептор, рекомбинантный экспрессирующий вектор, содержащий указанную нуклеиновую кислоту, популяцию выделенных клеток-хозяев для экспрессии полученного рецептора, фармацевтическую композицию, содержащую полученный рецептор, предложены способы лечения и обнаружения CD22-экспрессирующего рака и применение полученного рецептора для получения лекарственного средства для лечения CD22-экспрессирующего рака. Изобретение позволяет эффективно бороться с CD22-экспрессирующим раком за счет активизации лизиса указанных клеток полученным химерным рецептором. 8 н. и 7 з.п. ф-лы, 9 ил., 2 табл., 8 пр.

Группа изобретений относится к среде для культивирования клеток млекопитающих, способу ее получения и способу продуцирования рекомбинантного полипептида с использованием указанной среды. Предложенная среда не содержит сыворотку и белки и характеризуется молярным отношением ионов натрия к ионам калия, составляющим от приблизительно 10 к 1 до приблизительно 1 к 1, в которой концентрация ионов натрия находится между приблизительно 50 и приблизительно 90 мМ и в которой молярное отношение общей концентрации ионов к общей концентрации аминокислот составляет от приблизительно 1,9 до приблизительно 4. Способ продуцирования рекомбинантного полипептида включает культивирование клеток млекопитающих в указанной среде и экспрессию рекомбинантного полипептида. Предложен также способ получения указанной среды, предусматривающий смешивание различных компонентов друг с другом. Группа изобретений обеспечивает высокую продуктивность полипептидов при использовании указанной среды в системах культивирования клеток млекопитающих. 3 н. и 10 з.п. ф-лы, 6 ил., 5 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммуноцитокинам, и может быть использовано в медицине для лечения рака. Получают иммуноцитокин, содержащий: конъюгат интерлейкина 15 и домена sushi IL-15Rα, ковалентно связанный с антителом или его фрагмент, направленным против антигена, имеющего отношение к неоваскуляризации опухоли или к внеклеточному матриксу опухоли, или опухолевого антигена. При этом аминокислотная последовательность конъюгата находится в С-концевом положении относительно аминокислотной последовательности антитела или его фрагмента. Изобретение обеспечивает получение суперагонистов IL-15, демонстрирующих повышенную активность (т.е. в 10-100 раз) по сравнению с RLI в отдельности, с высоким выходом в клетках СНО. 8 н. и 10 з.п. ф-лы, 12 ил.

Изобретение относится к области клеточной биологии, конкретно к получению биобезопасной культуры мезенхимальных стволовых клеток из ворсин хориона человека. Способ включает выделение из плаценты человека после операции «кесарево сечение» культуры мезенхимальных стволовых клеток из ворсин хориона, дезагрегацию ткани раствором, содержащим 0,2% коллагеназы 2 типа и 0,18% коллагеназы 4 типа, приготовленным на среде DMEM\F12 в соотношении 1:1 и инкубирование при 37°С в течение 30 мин. Далее собирают отделившиеся клетки, центрифугируют при 800 об/мин в течение 15 мин, получая осадок клеток, который ресуспендируют в ростовой среде DMEM\F12, содержащей 5% фетальной сыворотки теленка, 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, ресуспендируют осадок клеток в ростовой среде DMEM\F12 (в соотношении 1:1), переносят в культуральные флаконы и культивируют в атмосфере, содержащей 5% СО2 до формирования 3\4 монослоя, меняя ростовую среду 3 раза в неделю, и при достижении 3\4 монослоя клетки пересевают в соотношении 1:2, причем после 1 пассажа часть клеток используют для выявления наличия в культуре вирусов СПИД, гепатита В и С и микоплазмы методом ПЦР и в случае позитивного анализа на эти инфекции культура бракуется. Изобретение позволяет получать биобезопасную культуру, не зараженную вирусами СПИДа, гепатита В и С и микоплазмы. 1 табл.
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 2012-11-13 2018-01-27T13:37:47
Наверх