Применение клеточной линии меланомы кожи человека 369 admel

Изобретение относится к области медицинской биотехнологии, а именно к применению клеточной линии меланомы кожи человека 369 ADmel, хранящейся в Специализированной коллекции культур клеток позвоночных Российской коллекции клеточных культур под регистрационным номером РККК (П) 727Д. Клеточная линия обладает стабильными культуральными и морфологическими характеристиками, характеризуется экспрессией дифференцировочных опухолеассоциированных антигенов - MelanA, MITF, gp100, S100, тирозиназа, TRP-1; раково-тестикулярных антигенов - NY-ESO-1 и семейств MAGE, BAGE, GAGE, LAGE. Изобретение позволяет тестировать активность различных фармацевтических препаратов, создавать диагностические наборы и тест-системы для разработки новых лекарственных средств и новых терапевтических подходов, в частности, позволяет создать модельную систему, позволяющую определить оптимальные дозы фотосенсибилизатора для фотодинамической терапии, а также приготавливать противоопухолевые вакцины на основе активированных дендритных клеток. 2 пр.

 

Изобретение относится к области медицинской биотехнологии, в частности, к получению клеточных линий, используемых для клеточных технологий в медицине, среди которых создание биомедицинских клеточных продуктов - противоопухолевых вакцин, тестирование активности различных фармацевтических препаратов, создание диагностических наборов, а также тест-систем для разработки новых лекарственных средств и новых терапевтических подходов.

Культивирование клеток и тканей животных к настоящему времени получило широкое распространение в различных областях исследований, от клеточной и молекулярной биологии до быстро прогрессирующих прикладных областей биотехнологии. Особенный интерес в последние десятилетия возник по отношению к проблеме культивирования опухолевых клеток, так как исследования опухолей животных и человека, адаптированных к росту in vitro, обладают рядом преимуществ: это возможность получать неограниченное количество клеток для любых исследований, в том числе неосуществимых in vivo; изучать специализированные свойства клеток в строго контролируемых условиях окружающей среды вне коррелятивных влияний целостного организма. Существование банков постоянных линий опухолевых клеток дает возможность проводить исследования на идентичном материале, что важно для выработки стандартных подходов к решению ряда проблем в биологии и медицине. В настоящее время работы по приготовлению клеточных линий приобрели систематический характер, однако каждая полученная клеточная линия имеет индивидуальные неповторяющиеся свойства и характеристики, так как является продуктом, полученным из биологического материала конкретного индивидуума.

Несмотря на колоссальные успехи, достигнутые в последние десятилетия в области хирургического лечения и лекарственной терапии злокачественных новообразований, по-прежнему остается проблема высокой смертности среди больных метастатическими формами paкa [Monjazeb A.M., Hsiao H.H., Sckisel G.D., Murphy W.J. Theroleofantigen-specificandnon-specificimmunotherapyinthetreatmentofcancer // JImmunotoxicol. - 2012. - Jul-Sep; 9(3). - P. 248-58. - doi: 10.3109/1547691Х.2012.685527].

Применение принципиально новых методов лечения, основанных на клеточных технологиях, расширяет арсенал приемов воздействия на опухолевый процесс. Показатель распространенности меланомы кожи в общей структуре заболеваемости злокачественными новообразованиями в 2015 году в Российской Федерации составил 57,0 на 100000 населения по сравнению с 38,0 для 2005 года [Под ред. А.Д. Каприна, В.В. Старинского, Г.В. Петровой Состояние онкологической помощи населению России в 2015 году // М: МНИОИ им. П.А. Герцена - филиал ФГБУ «НМИРЦ» Минздрава России, 2016. - Ил. - 236 с. ISBN 978-5-85502-226-1].

Меланома кожи - это злокачественное новообразование, характеризующееся агрессивным течением и высоким метастатическим потенциалом, резистентное к стандартным методам химио- и радиотерапии. Однако в настоящее время уже известно, что иммунная система играет важную роль на некоторых этапах патогенеза этой опухоли. Это положение является отправной точкой для различных новейших молекулярно-биологических приемов воздействия на клеточный и гуморальный иммунитет этой категории больных, поэтому особенно активно разрабатываются методы биотерапии, направленные на активацию естественного противоопухолевого иммунитета, то есть методы активной специфической иммунотерапии.

Активная иммунотерапия включает в себя неспецифическую иммунотерапию (индуцирование активного воспалительного процесса, неспецифическая вакцинация, местное и системное использование БЦЖ, применение, интерферонов-α и -γ, фактора некроза опухолей, интерлейкинов, колониестимулирующих факторов, высоких доз антиэстрогенов и др.); специфическую иммунотерапию с иммунизацией опухолевыми антигенами (вакцинотерапию); генную терапию [Galluzzi L., Vacchelli Е., Bravo-San Pedro J.M. et al. Classification of current anticancer immunotherapies // Oncotarget. - 2014. - Dec 30; 5(24). - P. 12472-508.-DOI: 10.18632/oncotarget. 2998].

Эффективность противоопухолевой вакцины зависит от точности определения возможных мишеней для иммунного ответа на молекулярном уровне. Опухолеассоциированные антигены (ОАА), выявляемые на клетках злокачественных опухолей человека и определяемые только у небольшого числа нормальных клеток, потенциально могут быть использованы в качестве материала для приготовления вакцин [Papaioannou N.E., Beniata O.V., Vitsos P. et al. Harnessing the immune system to improve cancer therapy // Ann Transl Med. - 2016. - Jul; 4 (14). - P. 261. - doi: 10.21037/atm. 2016.04.01].

В качестве носителей ОАА используют аутологичные и аллогенные цельные или лизированные опухолевые клетки, причем каждая опухолевая клеточная линия обладает специфическим уникальным набором ОАА, и расширение спектра клеточных линий позволяет создать более широкий пул данных антигенов, которые могут стать доступны для антигенпрезентирующих клеток (АПК), таких как дендритные клетки (ДК) в процессе манипуляций in vitro при создании противоопухолевых вакцин, что позволяет с наибольшей эффективностью индуцировать противоопухолевый иммунитет [Franks H.A., Wang Q., Patel P.M. Newanticancerimmunotherapies // AnticancerRes. - 2012. - Jul; 32 (7). - Р. 2439-53].

В настоящее время уже созданы поливалентные вакцины на основе нескольких клеточных линий меланомы кожи для лечения диссеминированных форм этого вида злокачественного новообразования, однако в результате проведения рандомизированных клинических испытаний их эффективность не признана достаточной [Srivatsan S., Patel J.M, Bozeman E.N. et al. Allogeneic tumor cell vaccines: the promise and limitations in clinical trials // Hum Vaccin Immunother. - 2014. - 10(1). - P. 52-63. doi: 10.4161/hv. 26568].

Проблема заключается в несостоятельности иммунологических синапсов, связанных с анергией АПК, которую можно преодолеть с помощью создания противоопухолевых вакцин на основе ДК, активированных опухолевыми клеточными лизатами, богатыми ОАА. Для этого необходимо иметь разнообразный спектр характеризованных линий малигнизированных клеток опухолей разных локализаций.

Кроме того, исследования последних лет убедительно показали, что такие ОАА как раково-тестикулярные антигены (РТА) присутствуют в клетках многих опухолей и потенцируют противоопухолевый иммунный ответ, что дает основание к разработке универсальных подходов в клеточной иммунотерапии злокачественных новообразований [Bodey B. Cancer-testisantigens: promisingtargetsforantigendirectedantineoplasticimmunotherapy // ExpertOpinBiolTher. - 2002. - Aug; 2 (6). - P. 577-84].

Техническим результатом изобретения является расширение арсенала клеточных линий, используемых для создания цельноклеточных и генноинженерных противоопухолевых вакцин, что дает возможность повысить эффективность лечения и увеличить продолжительность жизни при лечении злокачественных новообразований. Кроме того, полученная новая клеточная линия может использоваться для тестирования активности различных фармацевтических препаратов, создания диагностических наборов и тест-систем для разработки новых лекарственных средств и новых терапевтических подходов.

Указанный технический результат достигается применением клеточной линии меланомы кожи человека 369 ADmel, экспрессирующей раково-тестикулярные антигены, хранящейся в специализированной коллекции культур клеток позвоночных Российской коллекции клеточных культур под регистрационным номером РККК (П) 727Д, для приготовления биомедицинских клеточных продуктов и тестирования противоопухолевых препаратов.

Полученная клеточная линия 369 ADmel обладает стабильными культуральными и морфологическими характеристиками. Родословная клеточной линии 369 ADmel представлена следующим образом.

Клеточная линия получена из метастаза эпителиоидно-клеточной меланобластомы с небольшим количеством пигмента в лимфатический узел больной Н., 36 л., проходившей лечение в специализированном онкологическом медицинском учреждении. Материал получен при хирургическом удалении метастатического образования.

Получение клеточной линии 369 ADmel осуществлено следующим образом.

Опухолевая ткань получена хирургическим путем. Измельченные стерильным скальпелем образцы опухоли (1-3 мм2) подвергали механической дезагрегации в автоматическом режиме, помещая их на стерильные ножи, в течение 30-60 сек. Полученную суспензию клеток пропускали последовательно через стерильные нейлоновые фильтры 100 мкм, 70 мкм, 50 мкм, суспендировали в полной питательной среде и переносили в культуральную посуду, в которой осуществляли культивирование в течение длительного времени. Стабильно растущая клеточная линия была получена на 25 пассаже.

Морфологические признаки клеточной линии 369 ADmel характеризуются следующим образом.

Культура представлена фибробластоподобными веретеновидными и полигональными клетками с крупными ядрами и одним-двумя ядрышками.

Цитоплазма клеток содержит значительное количество гранул меланина. Ядра 53% клеток окрашиваются антителами против Ki-67.

Маркерные признаки клеточной линии 369 ADmel следующие.

Методом проточной цитометрии определена поверхностная экспрессия антигенов HLAA/B/C - 94,4%. Произведено типирование антигенов HLAIкласса - А*02,24, В*55, С*17,07.

На основании иммуноцитохимического исследования определена экспрессия дифференцировочных опухолеассоциированных антигенов-MelanA, MITF, gp100, S100, тирозиназа, TRP-1.

Методом проточной цитометрии определена экспрессия раково-тестикулярных антигенов: NY-ESO-1 и семейств MAGE,BAGE,GAGE. Методом ПЦР выявлена экспрессия MAGEA4, А12; GAGE 1, 3; LAGE 1a, 1b

Культуральные свойства клеточной линии 369 ADmel представлены следующим образом.

Клеточная линия культивируется в питательной среде DMEM/F12 с добавлением 20% эмбриональной телячьей сыворотки, глутамина (365 мг/л), инсулина (5 мкг/мл), трансферрина (5 мкг/мл), селена (5 нг/мл), антибиотиков (пенициллин со стрептомицином в концентрации: 100 ед/мл и 100 мкг/мл соответственно).Культивирование осуществляется при 37°С, 5% СО2, 100% влажности. Культура имеет адгезионный монослойный тип роста. Во флаконы объемом 25 см2 в 5 мл среды засевают 1×106 клеток. При субкультивировании клетки снимаются 2 раза в неделю в соотношении 1:1 с использованием стандартных растворов 0,25% трипсина и 0,02% раствора версена (1:1).

Условия криоконсервации следующие.

Для длительного хранения клетки консервируют путем замораживания в жидком азоте. Криосреда: DMEM/F12 50%, эмбриональная телячья сыворотка 40%, DMSO 10%; 3×106 клеток/мл на ампулу. Клетки клеточной линии ресуспендируют в среде для замораживания. Режим замораживания: жидкий азот, снижение температуры на 1°С в минуту до -25°С, затем быстрое замораживание до минус 70°С. Хранение в жидком азоте при температуре -196°С. Размораживание быстрое, при 37°С. Клетки разводят в 10 мл бессывороточной среды и осаждают центрифугированием, ресуспендируют в 5 мл той же среды, содержащей 20% эмбриональной телячьей сыворотки, и переносят в культуральный флакон объемом 25 см2. Жизнеспособность клеток оценивают по включению трепанового синего. Жизнеспособность клеток после криоконсервации составляет 87%. Контаминация исследована следующим образом.

При длительном наблюдении бактерии и грибы в культуре не обнаружены. Методом ПЦР были проведены исследования на наличие Mycoplasmapneumonia, genitalium, hominis-тест на микоплазму отрицателен.

Кариологическая характеристика клеточной линии 369 ADmel следующая:

44, XX, t(1;9), -4, +6q, -10, t(11;14), +13q, t(20;15).

Использование клеточной линии 369 ADmel представлено следующими примерами.

Пример 1. Использование клеточной линии 369 ADmel для приготовления противоопухолевых вакцин на основе активированных дендритных клеток.

1. Клеточную линию 369 ADmel культивировали в пластиковых флаконах в полной питательной среде DMEM/F12 с добавлением 20% эмбриональной телячьей сыворотки, глутамина (365 мг/л), инсулина (5 мкг/мл), трансферрина (5 мкг/мл), селена (5 нг/мл), пенициллина (100 ед/мл), стрептомицина (100 мкг/мл). Культивирование осуществляли при 37°С, 5% СO2, 100% влажности в СO2-инкубаторе «Heracel» (TermoElectronLTDGmbH, Германия).

2. При достижении конфлюэнтного монослоя производили пересев клеток и дальнейшее пассирование культуры с рассевом 1:1.

3. Из флакона удаляли культуральную среду, омывали поверхность флакона небольшим количеством ферментативного раствора (0,25% трипсина и 0,02% раствора версена в равных пропорциях) и затем к клеткам добавляли 1-3 мл этого раствора. Помещали флаконы в СО2-инкубатор и проводили визуальный контроль состояния клеток.

4. Клетки собирали серологической пипеткой, отмывали двукратным центрифугированием в 10 мл 0,9% физиологического раствора при 1000 об/мин в течение 10 мин.

5. Производили подсчет клеток и оценку их жизнеспособности.

6. Для приготовления опухолевого лизата клетки линии 369 ADmel смешивали в равных пропорциях с клетками других опухолевых клеточных линий и проводили 6 последовательных циклов моментального замораживания до -196°С и оттаивания до комнатной температуры в фосфатно-солевом буфере без криопротектора, качество лизиса контролировали с помощью 0,1% трипанового синего и светового микроскопа.

7. Осуществляли осаждение клеточного детрита центрифугированием (10 мин, 3000 об/мин), фильтрацию надосадочной фракции через фильтр 0,2 мкм и расфасовку опухолевого лизата в криопробирки для хранения при -20°С до использования.

8. Вносили лизат с клеточной линией 369 ADmel в культуры незрелых дендритных клеток пациентов на 5-й день культивирования в соотношении 3 лизированные опухолевые клетки: 1 ДК, добавляли ростовые факторы: гранулоцитарно-макрофагальный фактор роста (72 нг/мл), интерлейкин 4 (20 нг/мл) и фактор некроза опухолей альфа (20 нг/мл). Инкубировали в условиях 37°С, 5% СО2, 100% влажности в СO2-инкубаторе «Heracel» (TermoElectronLTDGmbH, Германия) в течение 48 часов.

9. В результате получали активированные ДК с иммунофенотипом CD14-/CD1a-/CD83+/CD80+/CD86+/HLADR+.

Пример 2. Использование клеточной линии 369 ADmel для создания модельной системы, позволяющей определить оптимальные дозы фотосенсибилизатора для фотодинамической терапии.

1. Клеточную линию 369 ADmel культивировали, как описывается выше. После пересева клетки собирали, осуществляли подсчет их количества и оценку жизнеспособности и высевали в чашки Петри 35 мм (BDFalcon, США) в количестве 500 тыс. клеток.

2. После адаптации клеток к субстрату добавляли фотосенсибилизатор фотодитазин в концентрациях 0, 0,5 мкг/мл, 1 мкг/мл, 2,5 мкг/мл, 3 мкг/мл. Облучали клетки линии 369 ADmel светом лазера с длиной волны 662 нм через 30 мин инкубации (время облучения 6 мин и 10 мин). Суммарная доза облучения составила от 40 до 60 Дж/см2.

3. Клетки снимали с субстрата, отмывали от диссоциирующего ферментативного раствора, подсчитывали и проводили анализ эффекта через 1 час и через 4 часа после фотодинамического воздействия.

4. К полученной суспензии клеток (1×106/мл) добавляли моноклональные антитела против аннексина V, меченные FITC (Annexin V-FITC), пропидиум йодид (BD, США), затем инкубировали 15 мин в темноте при комнатной температуре. Подсчет клеток проводили с использованием флуоресцентного микроскопа Carl Zeiss, Германия. Уровень апоптоза оценивали по апоптотическому индексу.

5. Обнаружили, что все изученные концентрации фотосенсибилизатора обладают сопоставимой способностью индуцировать ранний апоптоз. При увеличении времени лазерного облучения происходит более быстрый переход фотосенсибилизированных опухолевых клеток линии ADmel в позднюю фазу апоптоза.

Заявляемый способ расширяет арсенал клеточных линий, используемых для создания цельноклеточных и генноинженерных противоопухолевых вакцин, способствует повышению эффективности лечения и увеличению продолжительность жизни пациентов при лечении злокачественных новообразований. Полученная новая клеточная линия 369 Admel может использоваться для тестирования активности различных фармацевтических препаратов, создания диагностических наборов и тест-систем для разработки новых лекарственных средств и новых терапевтических подходов.

Применение клеточной линии меланомы кожи человека 369 ADmel, экспрессирующей раково-тестикулярные антигены, хранящейся в специализированной коллекции культур клеток позвоночных Российской коллекции клеточных культур под регистрационным номером РККК (П) 727Д, для приготовления биомедицинских клеточных продуктов и тестирования противоопухолевых препаратов.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области биохимии. Изобретение представляет собой культуральную среду для мезенхимальных клеток человека, включающую базальную среду для мезенхимальной стволовой клетки, лизат наружного слоя лейкоцитов/тромбоцитов человека (лейкоцитарную пленку) в количестве от 5 до 20% (об./об.); инсулин в количестве от 2 от 20 мг/л; селенит натрия в количестве от 0,005 до 1,730 мг/л; этаноламин в количестве от 1 до 8 мг/л и основной фактор роста фибробластов (bFGF) в количестве от 5 до 25 нг/мл, причем упомянутая среда дополнена эмбриональной бычьей сывороткой (FBS) в количестве от 10% до 20% (об./об.) или добавкой клеточной культуры, полученной из плазмы человека (CCS) в количестве от 10 до 40% (об./об.).

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложены способы промотирования регенерации ткани или органа у пациента путем уничтожения частично функционирующих или не функционирующих клеток или стареющих клеток, содержащих конечный продукт гликирования, а также способ преодоления эффектов старения и способ селективного уничтожения стареющих клеток у пациента.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к индуцирующему иммунитет агенту, содержащему эффективное количество по меньшей мере одного полипептида, обладающего индуцирующей иммунитет активностью, который индуцирует цитотоксические Т-клетки, способные уничтожать опухолевые клетки, экспрессирующие полипептид CAPRIN-1.

Изобретение относится к области иммунологии и биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения антиген-специфических цитотоксических клеток, обладающих противоопухолевой цитотоксической активностью против клеток немелкоклеточного рака легкого, включающий получение дендритных клеток из моноцитов периферической крови больного немелкоклеточным раком легкого, культивирование дендритных клеток в присутствии рекомбинантного человеческого гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (рчГМ-КСФ) и интерлейкина-4 (рчИЛ-4), с последующей нагрузкой антигенами опухоли и созреванием с помощью фактора некроза опухоли (ФНО-α) и интерлейкина-1β (ИЛ-1β) в течение 24 часов, после чего зрелые дендритные клетки культивируют совместно с неприлипающей фракцией аутологичных мононуклеарных клеток, где совместное культивирование зрелых дендритных клеток и неприлипающей фракции аутологичных мононуклеарных клеток проводят в присутствии ингибитора ИДО 1-метил-L-триптофана (1 МТ).

Настоящее изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к клеточным культуральным средам без глутамина, дополненным аспарагином, и может быть использовано для получения полипептида, выбранного из антител, фрагментов антител и иммуноадгезинов, в клетке-хозяине млекопитающего.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к белку «цинковые пальцы» неприродного происхождения, который связывается с геном Htt, что может быть использовано в медицине.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к способу получения двухкомпонентного препарата для лечения повреждения суставов. Способ получения двухкомпонентного препарата для лечения повреждения суставов, осуществляемого путем малоинвазивного введения в суставную сумку, упомянутого препарата в виде двух компонентов - основного и инициирующего, заключающийся в том, что для получения основного компонента препарата плазму крови переносят с помощью шприца и переходного фильтра с размером пор, достаточным для обеспечения стерильности, в одно из отделений криопакета и выдерживают до полного замораживания, затем замороженную плазму крови частично размораживают, перемещают первую оттаявшую фракцию плазмы крови в пустое отделение криопакета и удаляют её из криопакета шприцом, подсоединенным к порту пакета, а оставшийся в криопакете криопреципитат плазмы крови размораживают, затем в упомянутом криопреципитате плазмы крови ресуспендируют клетки, предшественники хондроцитов, в количестве, достаточном для обеспечения терапевтического эффекта, а для изготовления инициирующего компонента препарата смешивают раствором хлорида кальция и тромбина в сбалансированном солевом растворе с добавлением аминокапроновой кислоты в количестве не более максимальной рекомендованной дозы для однократного введения в суставную сумку, при определенных условиях.

Изобретение относится к нейрофизиологии, конкретно к направленному обучению биологической нейронной сети. Способ включает использование микроэлектродной матрицы для выращивания культуры диссоциированных нейрональных клеток, стимуляцию высокочастотными электрическими импульсами двух участков нейрональных клеток на основе правила зависящей от времени импульса синаптической пластичности и оценку эффективности обучения биологической нейронной сети.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к носителю для лекарственного средства для лечения фиброза кишечника посредством доставки лекарственного средства для ингибирования активности или роста клеток, продуцирующих внеклеточный матрикс в кишечнике, что может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению популяции стромальных стволовых клеток из человеческого костного мозга. Способ включает выделение популяции стромальных стволовых клеток на основании экспрессии синдекана-2 из смешанной популяции стромальных клеток взрослых млекопитающих.

Изобретение относится к области нанотехнологии, медицины и фармакологии. Описан способ получения нанокапсул антисептика-стимулятора Дорогова (АСД) 2 фракция в оболочке из геллановой камеди.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к тканевой инженерии. Предложена лишенная клеток путем перфузии сосудистая ткань свиньи, коровы, овцы, собаки или человека, содержащая лишенный клеток внеклеточный матрикс указанной ткани.

Группа изобретений относится к области фармакологии, а именно к применению паралитического яда моллюсков для местного лечения зуда. Применение паралитического яда моллюсков (PSP, Paralytic Shellfish Poison) для местного лечения зуда у человека или другого млекопитающего, где PSP представляет собой сакситоксин или трициклический 3,4-пропинпергидропурин, представленный следующей формулой (I), где R1 и R5 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н и -ОН; R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н, -OSO3- и -SO3; и R4 выбран из группы, состоящей из -Н, -ОН, -OC(=O)NH2, -OC(=O)NHSO3- и -ОС(=O)СН3, или где PSP представляет собой соль сакситоксина или трициклического 3,4-пропинпергидропурина.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу выделения моносиалотетрагексозилганглиозида натрия (GM1). Способ выделения GM1 заключается в том, что готовят экстракт свиного мозга с использованием смеси трихлорметана, метилового спирта, проводят абсорбцию на макроретикулярной ионообменной смоле и десорбцию жидкого экстракта, разделение ганглиозидной смеси, отделение моносиалотетрагексозиловых ганглиозидов сырьевого продукта с его последующей очисткой, сушкой и упаковкой при определенных условиях.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен способ, устройство и набор для отбора клеток, а также способ улучшения клинического исхода трансплантации гемопоэтических стволовых клеток и клеток-предшественников, способ удаления злокачественной клетки в композиции, содержащей трансплантат из клеток-предшественников, и способ предотвращения болезни «трансплантат против хозяина» с сохранением эффекта «трансплантат против опухоли», причем все предложенные способы осуществляют с использованием вышеуказанного устройства для отбора клеток.

Изобретение относится к способу получения нанокапсул антисептика-стимулятора Дорогова (АСД) 2 фракция в каррагинане. Указанный способ характеризуется тем, что АСД 2 фракция диспергируют в раствор каррагинана в бензоле в присутствии препарата Е472с в качестве поверхностно-активного вещества при перемешивании 1300 об/мин, далее приливают 10 мл серного эфира, полученную суспензию отфильтровывают и сушат при комнатной температуре, при этом используется массовое соотношение ядро:оболочка 1:1, 1:3 или 3:1.

Изобретение относится к ветеринарной медицине и касается способа выращивания телят в хозяйствах, неблагополучных по ОРВИ. Представленный способ включает введение биостимулятора перед вакцинацией, в качестве которого используют комплексный препарат на основе АСД-2 фракции, причем лечебный раствор препарата готовят на 0,9% изотоническом растворе натрия хлорида, а в качестве добавок в препарат вводят жидкую форму препарата "Виватон", выдержанную под вытяжкой в открытой посуде в течение 36-48 ч до полного исчезновения запаха аммиака, и Алоэ инъекционный.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения биологически активного продукта из кожи марала. Способ получения биологически активного концентрата из кожи маралов, заключающийся в том, что кожу измельчают до состояния фарша и подвергают ферментативному гидролизу с последующей экстракцией под действием ультразвуковых колебаний, при этом ферментативный гидролиз проводят в присутствии ферментов пепсина и папаина, причем фермент пепсин вводится в процесс в начале экстрагирования смеси, а папаин - в середине временного периода процесса экстракции, после фильтрации осуществляют сушку экстракта при определенных условиях.

Изобретение относится к медицине, лечению заболеваний и повреждений головного мозга (ГМ) человека. Способ дистанционной мультиволновой электромагнитной радионейроинженерии головного мозга включает следующие стадии: а) проектирования и разметки путем проведения комплексной диагностики методами МРТ-исследования ГМ, МРТ-трактографии проводящих путей зон повреждений (ЗП) ГМ, МРТ-ангиографии сосудов ГМ, позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ) ГМ или ПЭТ всего тела пациента, компьютерной томографии (КТ) ГМ, церебрального электроэнцефалографического картирования (ЭЭГ) и/или магнитоэнцефалографии (МЭГ) ГМ с созданием индивидуальной 3D-карты моделирования повреждений нервной ткани (НТ) путем программного мультиуровневого слияния данных диагностики для последующего определения ЗП НТ путем их разметки на коже головы пациента с использованием аппарата стереотаксической радиотерапии и радиохирургии для определения углов наклона и радиусов воздействия последующего неионизирующего стереотаксического воздействия фокусированного ультразвука (ФУЗ) на НТ; b) ремоделирования сосудистого русла ЗП НТ с использованием ФУЗ под контролем МРТ ионизирующего излучения (ИИ) или структурно-резонансной терапии (СРТ); с) клеточной реставрации ЗП НТ путем направленной клеточной интервенции в ЗП НТ мобилизованных в периферический кровоток аутологичных мезенхимальных стромальных стволовых клеток (МССК), гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) и прогенеторных клеток (ПК); d) коррекции вегетативного обеспечения ЗП НТ путем сочетания воздействия на ЗП НТ электромагнитного неионизирующего излучения в виде СРТ с одновременным или последовательным воздействием ФУЗ; е) динамической интеграции соматических и вегетативных компонентов путем сочетания воздействия ФУЗ с одновременным или последующим воздействием СРТ; f) реабилитации функционального состояния поврежденной НТ ГМ путем использования сочетания СРТ и ФУЗ.

Изобретение относится к медицине, а именно к пластической хирургии. Выполняют липофилинг в заранее размеченную область реконструируемой молочной железы, расширив границы книзу и латерально.

Изобретение относится к клеточным технологиям. Описана линия мезенхимальных стволовых клеток (hb-MSC) для терапевтического применения, задепонированная во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под регистрационным номером Н-154. При этом линия обладает по меньшей мере одной из следующих характеристик: при посеве 0,7×106 клеток во флакон площадью 75 см2 и культивировании в течение по меньшей мере 96 часов: (а) клетки продуцируют по меньшей мере 4,5 мМ лактата в течение 24 часов после замены среды; (b) клетки продуцируют по меньшей мере 150 пг/мл GRO/KC в течение 24 часов после замены среды; (с) клетки продуцируют менее чем 250 пг/мл OPG через 24 часа после замены среды; или (d) клетки продуцируют менее чем 80 пг/мл TGF-β3 через 24 часа после замены среды. Также описаны кондиционированные среды для терапевтического применения, полученные путём культивирования указанной выше линией, и применение данных сред. Изобретение расширяет арсенал терапевтических средств. 9 н. и 53 з.п. ф-лы, 7 ил., 3 табл., 8 пр.

Изобретение относится к области медицинской биотехнологии, а именно к применению клеточной линии меланомы кожи человека 369 ADmel, хранящейся в Специализированной коллекции культур клеток позвоночных Российской коллекции клеточных культур под регистрационным номером РККК 727Д. Клеточная линия обладает стабильными культуральными и морфологическими характеристиками, характеризуется экспрессией дифференцировочных опухолеассоциированных антигенов - MelanA, MITF, gp100, S100, тирозиназа, TRP-1; раково-тестикулярных антигенов - NY-ESO-1 и семейств MAGE, BAGE, GAGE, LAGE. Изобретение позволяет тестировать активность различных фармацевтических препаратов, создавать диагностические наборы и тест-системы для разработки новых лекарственных средств и новых терапевтических подходов, в частности, позволяет создать модельную систему, позволяющую определить оптимальные дозы фотосенсибилизатора для фотодинамической терапии, а также приготавливать противоопухолевые вакцины на основе активированных дендритных клеток. 2 пр.

Наверх