Обработка популяции рыб луфенуроном
Изобретение относится к ветеринарии и касается применения луфенурона или его соли для получения медикамента для борьбы с морскими вшами в популяции рыб. Медикамент применяется путем перорального введения суточной дозы луфенурона от 1 до 30 мг/кг рыбной биомассы в течение периода от 3 до 14 дней, при котором общее количество луфенурона, применяемого во время указанного интервала времени, составляет от 7 до 350 мг/кг рыбной биомассы. Изобретение подходит для обработки лосося и обеспечивает продолжительную эффективную защиту от морских вшей в море. 9 з.п. ф-лы, 6 табл., 2 пр.
Настоящее изобретение относится к борьбе с морскими вшами, например заражениями Lepeophtheirus salmonis, Caligus elongatus и Caligus rogercresseyi в рыбоводстве, которая включает применение известного ингибитора синтеза хитина, луфенурона, в форме специфической композиции и согласно специфическому плану обработки.
Основой борьбы с морскими вшами в коммерческом разведении лососевых рыб является в значительной степени все еще обработка химикатами, такими как органофосфаты, синтетические пиретроиды, ингибиторы синтеза хитина, пероксид водорода или макроциклические лактоны, такие как эмамектина бензоат. Развитие устойчивости у морских вшей к коммерческим продуктам, содержащим соединения из указанных классов лекарственных средств, представляет собой большую угрозу для рыбной промышленности; с одной стороны, могут быть применены более высокие дозы соединений, что усиливает проблему, ускоряя развитие устойчивости, и, кроме того, имеет потенциал создания проблемы токсичности для окружающей среды. С другой стороны, идет отчаянный поиск новых химикатов и схем их применения.
WO 99/063824 раскрывает применение луфенурона, который является членом химического класса бензоилмочевин, в борьбе с заражениями морскими вшами. Луфенурон предлагается исключительно для введения путем инъекции, и опубликованы данные о защите от заражения морскими вшами в течение 128 дней после инъекции. Несмотря на это, никакой коммерческий продукт луфенурона не был запущен по нескольким причинам. Прежде всего, инъекция огромному количеству рыбы в море расценивается как очень трудоемкое занятие для персонала рыбных хозяйств, кроме того, создает большой стресс для рыб. Кроме того, 4 месяца эффективной борьбы с морскими вшами больше не расценивается как достаточное, поскольку полный цикл развития лосося длится от 18 месяцев до приблизительно 47 месяцев, с начальной фазой, проходящей в пресной воде, и последующей фазой, например, длительностью от 6 до 23 месяцев, проходящей в морской воде с экспозицией к морским вшам.
К удивлению обнаружено, что очень продолжительный эффект и удобство в борьбе с морскими вшами, заражающими рыбу, и в частности лосось, могут быть достигнуты путем введения рыбе с кормом луфенурона перед переносом в море или во время нахождения в море.
Согласно одному аспекту настоящего изобретения предоставляется луфенурон или его ветеринарно приемлемая соль для применения при борьбе с морскими вшами в популяции рыб путем перорального введения, при которой общее количество применяемого луфенурона составляет от 7 до 350 мг/кг рыбной биомассы.
Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предоставляется луфенурон или его ветеринарно приемлемая соль для применения при борьбе с морскими вшами в популяции рыб путем перорального введения суточной дозы луфенурона от 1 до 30 мг/кг рыбной биомассы в течение периода от 3 до 14 дней, при которой общее количество луфенурона, применяемого во время указанного интервала времени, составляет от 7 до 350 мг/кг рыбной биомассы.
Настоящее изобретение согласно дополнительному аспекту обеспечивает способ борьбы с морскими вшами в популяции рыб, который включает скармливание луфенурона или его ветеринарно приемлемой соли указанной популяции рыб в суточной дозе луфенурона от 1 до 30 мг/кг рыбной биомассы в течение периода от 3 до 14 дней и в котором общее количество луфенурона, применяемого во время указанного интервала времени, составляет от 7 до 350/кг рыбной биомассы.
При применении плана обработки согласно настоящему изобретению, терапевтически эффективные концентрации луфенурона в крови, мясе и коже рыбы могут быть получены в течение по меньшей мере 5 месяцев (150 дней), таким образом, указывая на эффективную защиту рыбы против морских вшей в течение длительного периода времени.
Подробное описание
Луфенурон, N-{[2,5-дихлор-4-(1,1,2,3,3,3-гексафторпропокси)фенил]карбамоил}-2,6-дифторбензамид, имеет химическую формулу
и может быть применен в свободной форме или в форме ветеринарно приемлемой соли. Из-за асимметричного C-атома, присутствующего в молекуле, существуют два энантиомера. В пределах настоящего изобретения предпочтительно применение луфенурона в форме рацемической смеси этих двух энантиомеров. Кроме того, рацемический луфенурон может существовать в различных полиморфных формах, например, как полиморф A, B, C или D. В пределах настоящего изобретения предпочтительно применение термодинамически самого устойчивого полиморфа A.
Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения обработка луфенуроном относится к лососю и осуществляется во время начальной фазы в пресной воде перед переносом в море. Согласно дополнительному варианту осуществления настоящего изобретения обработка относится к лососю и осуществляется тогда, когда рыбы уже в море.
В целом, обработка луфенуроном согласно настоящему изобретению служит для снятия, снижения или предотвращения, в частности снижения или предотвращения заражения морскими вшами в популяции рыб. Предпочтительно, обработку проводят до заражения рыбы морскими вшами и во взрослом состоянии. Относительно обработки луфенуроном лосося указанную обработку проводят, предпочтительно, в конце пресноводной фазы или в начале фазы в морской воде.
Полный интервал времени для обработки против морских вшей составляет, например, от 3 до 14 дней, предпочтительно, от 5 до 14 дней, более предпочтительно, от 5 до 10 дней и, в частности, в течение 7 дней (1 неделя). В течение всего времени обработки скармливание луфенурона осуществляют, например, ежедневно или каждый второй день, и в частности ежедневно.
Общее количество луфенурона, применяемого во время обработки, составляет, предпочтительно, от 14 до 175 мг/кг рыбной биомассы, более предпочтительно, от 20 до 140 мг/кг рыбной биомассы, еще более предпочтительно, от 20 до 105 мг/кг рыбной биомассы, и в частности от 20 до 84 мг/кг рыбной биомассы. Согласно дополнительному предпочтительному варианту осуществления изобретения, общее количество луфенурона, применяемого во время обработки, составляет от 7 до 175 мг/кг рыбной биомассы, предпочтительно, от 7 до 140 мг/кг рыбной биомассы, более предпочтительно, от 7 до 105 мг/кг рыбной биомассы, и, в частности, от 7 до 70 мг/кг рыбной биомассы.
Согласно одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения луфенурон применяют ежедневно в течение интервала времени от 3 до 14 дней, предпочтительно, от 5 до 14 дней, более предпочтительно, от 5 до 10 дней и, в частности, 7 дней (1 неделя), в котором суточная доза составляет от 2 до 25 мг/кг рыбной биомассы, предпочтительно, от 3 до 20 мг/кг рыбной биомассы, более предпочтительно, от 3 до 15 мг/кг рыбной биомассы. Одна особенно предпочтительная обработка включает введение луфенурона в течение 7 дней подряд с суточной дозой от 3 до 6 мг, (общее количество от 21 до 42 мг/кг рыбной биомассы), в частности, от 3 до 5 мг (общее количество от 21 до 35 мг/кг рыбной биомассы) луфенурона/кг рыбной биомассы. Дополнительная особенно предпочтительная обработка включает введение луфенурона в течение 7 дней подряд с суточной дозой от 6 до 15 мг луфенурона/кг рыбной биомассы (общее количество от 42 до 105 мг/кг рыбной биомассы) и, в частности, от 6 до 12 мг луфенурона/кг рыбной биомассы (общее количество от 42 до 84 мг (кг рыбной биомассы).
Согласно другому предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения луфенурон применяют ежедневно в течение периода от 3 до 14 дней, предпочтительно, от 5 до 14 дней, более предпочтительно, от 5 до 10 дней и, в частности, 7 дней (1 неделя), в котором суточная доза составляет от 1 до 25 мг/кг рыбной биомассы, предпочтительно, от 1 до 20 мг/кг рыбной биомассы, более предпочтительно, от 1 до 15 мг/кг рыбной биомассы. Одна особенно предпочтительная обработка включает введение луфенурона в течение 7 дней подряд с суточной дозой от 1 до 10 мг, (общее количество от 7 до 70 мг/кг рыбной биомассы), в частности, от 1 до 5 мг (общее количество от 7 до 35 мг/кг рыбной биомассы) луфенурона/кг рыбной биомассы.
Согласно дополнительному варианту осуществления настоящего изобретения луфенурон применяют каждый второй день в течение периода времени, предпочтительно, от 5 до 13 дней, более предпочтительно, от 5 до 9 дней и, в частности, 7 дней. Конкретная обработка включает обработку рыб в течение периода от 7 дней, введение корма, содержащего луфенурон, в дни 1, 3, 5 и 7 и отказ от любого корма в день до обработки и в дни 2, 4 и 6 из периода обработки. Концентрацию луфенурона регулируют так, чтобы гарантировать, что та же средняя доза на кг рыбной биомассы вводится в течение всего период обработки, как и в ежедневной обработке. Относительно общего количества луфенурона, вводимого за время этих дискретных обработок, применяют вышеуказанные полученные диапазоны, включая предпочтительные.
Например, относительно 7-дневной обработки луфенуроном в дни 1, 3, 5 и 7, доза луфенурона в каждый из указанных дней составляет, например, от 2 до 44 мг/кг рыбной биомассы (общее количество от 8 до 176 мг/кг рыбной биомассы), преимущественно от 3 до 44 мг/кг рыбной биомассы (общее количество от 12 до 176 мг/кг рыбной биомассы), предпочтительно, от 5 до 35 мг/кг рыбной биомассы (общее количество от 20 до 140 мг/кг рыбной биомассы), еще более предпочтительно, от 5 до 26 мг/кг рыбной биомассы (общее количество от 20 до 104 мг/кг рыбной биомассы).
Луфенурон соответственно применяют в форме лекарственного корма для рыб. Корм для рыб, как правило, присутствует в форме гранул или таблеток; общепринятые ингредиенты указанных таблеток или гранул являются, например, рыбной мукой, рыбьим жиром, овощными белками, сахаридами, такими как типичные моно- или дисахариды, полисахариды, такие как маннаны, глюканы или альгинаты и/или другие типичные инертные наполнители, такие как пигменты, витамины, минералы, связующие компоненты и т.п. Лекарственный корм для рыб, содержащий луфенурон, может быть получен путем включения подходящего количества луфенурона или его соли в кормовой продукт для рыбы. Луфенурон может быть включен в кормовую смесь до таблетирования. Однако предпочтительно наносить покрытия с луфенуроном на таблетки или гранулы. Например, коммерчески доступные таблетки или гранулы для рыб покрывают луфенуроном или, предпочтительно, готовой смесью, содержащей луфенурон и одно или более ветеринарно приемлемых инертных наполнителей, таких как крахмал, коллоидальный диоксид кремния (Aerosil®), микрокристаллическая целлюлоза, лактоза и т.п. Кроме того, может присутствовать типичный консервант. Концентрация луфенурона в готовой смеси может быть выбрана в пределах широкого диапазона; например, ценными зарекомендовали себя концентрации луфенурона от 0,001 до 90% мас./мас., предпочтительно, от 1 до 50% мас./мас. и, более предпочтительно, от 5 до 15% мас./мас., согласно дополнительному варианту осуществления от 0,001 до 10% мас./мас., предпочтительно, от 0,05 до 5% мас./мас. и, в частности, от 0,15 до 2,5% мас./мас. в каждом случае на основе всей массы готовой смеси. Кормовые таблетки могут быть покрыты готовой смесью путем способа сухого нанесения покрытия. С этой целью готовую смесь добавляют к таблеткам, и полученную смесь встряхивают/смешивают для получения однородного распределения луфенурона на таблетках. Согласно альтернативному способу нанесения внешнего покрытия с дополнительной обработкой маслом, к продукту из вышеописанного способа сухого нанесения внешнего покрытия добавляют рыбий жир или растительное масло при непрерывном перемешивании до тех пор, пока таблетки не станут полностью покрыты. Согласно еще другому варианту осуществления, называемому вакуумным способом нанесения покрытия, заранее полученную смесь сначала растворяют/суспендируют в рыбьем жире или растительном масле перед разбрызгиванием на таблетки под вакуумом.
После добавления активного ингредиента к рыбному корму таблетки или гранулы содержат, например, от 0,0005 до 5% (мас./мас.), предпочтительно, от 0,001 до 2,5% (мас./мас.) и, в частности, от 0,0025 до 1,25% (мас./мас.) луфенурона на основе всей массы рыбного корма.
В соответствии с этим изобретением луфенурон превосходно подходит для применения в борьбе с паразитными ракообразными у рыб. Они включают семейство Caligidae с представительными родами Dissonus, Caligus (т.е. C. curtus, C. elongatus, C. clemensi, C. rogercresseyii) и Lepeophtheirus (т.е. L. salmonis); семейства Cecropidae, Dichelesthiidae, Lernaeopodidae с представительным родом Salmincola; семейства Pandaridae, Pennellidae с представительными родами Lernaeocera и Pennella; и семейство Sphyriidae; семейство Lernaeidae с представительным родом Lernaea; семейства Bomolochidae, Chondracanthidae, Ergasilidae и Philichthyidae; семейство Argulidae с представительным родом Argulus (т.е. A. foliaceus).
Рыбы включают пищевую рыбу, рыбу для разведения, аквариумную, водоемную, речную, водохранилищную рыбу всех возрастов, встречающихся в пресной воде, морской воде и солоноватой воде. Например, бас, лещ, карп, зубатка, голец, голавль, цихлида, треска, угорь, камбала, гурами, хариус, морской окунь, палтус, кефаль, камбала, трахинотус, плотва, красноперка, лосось, морской язык, осетр, тилапия, форель, тунец, сиг, желтохвост.
Луфенурон особенно подходит для обработки лосося. Термин «лосось» в рамках этого изобретения понимается как включающий всех представителей семейства Salmonidae, особенно подсемейства salmoninae, и, предпочтительно, атлантический лосось (Salmo salar), радужная форель (Oncorhynchus mykiss), кумжа или атлантическая сельдь (S. trutta), тихоокеанский лосось, вишневый лосось или сима (O. masou), тайваньский лосось (O. masou formosanum), чавыча или королевский лосось (O. tshawytscha), кета или лосось Калико (O. keta), кижуч или серебряный лосось (O. kisutch), розовый лосось (O. gorbuscha), лосось Sockeye или Нерка (O. nerka), искусственно распространенные виды, такие как виды Salmo clarkii и Salvelinus, такие как голец (S. fontinalis).
Предпочтительными объектами настоящего изобретения являются Атлантический и Тихоокеанский лосось и пеструха, включая виды форелей, которые разводят в море, но традиционно не называют «пеструхой».
При применении луфенурона согласно плану по настоящему изобретению, рыба поглощает луфенурон таким образом, что терапевтически эффективная концентрация активного вещества поддерживается в течение длительного времени, например, в течение по меньшей мере 5 месяцев, предпочтительно, в течение по меньшей мере 6 месяцев и, более предпочтительно, в течение по меньшей мере 9 месяцев. Испытания показали, что период защиты рыбы против морских вшей очень хорошо коррелирует с наблюдаемыми уровням луфенурона в филе или крови рыбы.
В то время как обработка луфенуроном в отдельности согласно плану обработки по настоящему изобретению обеспечивает, в целом, полную защиту от морских вшей в течение длительных периодов времени, указанная обработка при определенных обстоятельствах может быть дополнительно улучшена при помощи луфенурона в комбинации с любым другим агентом для борьбы с морскими вшами; или компонентом вакцины, включающим агенты, усиливающие иммунитет; или ингредиентом корма, содержащим иммунные модификаторы. Такая комбинированная обработка может быть необходима там, где рыбы уже заражены паразитами, которые повзрослели до обработки луфенуроном, или в случае, если желательно быстрое очищение от паразитов.
Дополнительным подходящим агентом для борьбы с морскими вшами является, например, перекись водорода; формальдегид; органофосфат, такой как трихлорфон, малатион, дихлофос или азаметифос; макроциклический лактон, такой как ивермектин, бензоат эмамектина или моксидектин; пиретроид, такой как циперметрин, в частности, циперметрин цис-40:транс-60 или высокого порядка цис циперметрин цис-80:транс20, или дельтаметрин; неоникотиноид, такой как имидаклоприд, нитенпирам, тиаметоксам или тиаклоприд; спинозин, такой как спиносад; ювенильный гормон насекомого, аналогичный такому как эпофенонан, трипрен, метопрен, гидропрен или кинопрен; или карбамат, такой как феноксикарб.
Если луфенурон применяют в комбинации с другим соединением, являющимся активным при борьбе с морскими вшами, указанный партнер по комбинации является, предпочтительно, органофосфатом, пиретроидом, таким как циперметрин или дельтаметрин, макроциклический лактон, такой как эмамектина бензоат; перекись водорода; или неоникотиноид, такой как тиаклоприд.
Кроме того, предпочтительно применение луфенурона согласно плану по настоящему изобретению в отсутствие дополнительного агента борьбы против морских вшей, выбранного из группы, состоящей из соединений формулы
включая все геометрические и стереоизомеры, N-оксиды, S-оксиды и их соли согласно WO 2011/157733, где каждый из A1, A2, A3, R', R'', R''' и X имеет значение, такое как приведено на страницах 1 и 2 указанного WO 2011/157733; и, в частности, где
R', R'' и R''' каждый независимо представляет собой водород, галоген, цианогруппу, C1-C2-алкил, гало-C1-C2-алкил, C1-C2-алкокси или C1-C2-галоалкоксигруппу, при условии что по меньшей мере один из R', R'' и R''' не является водородом;
A1 представляет собой C, A2 представляет собой N, A3 представляет собой O, CH2 или NR1' и связь между A1, и A2 является двойной связью; или A1 представляет собой N, каждый из A2 и A3 представляет собой CH2, и связь между A1 и A2 является одинарной связью;
R1' независимо является таким, как определен R1 ниже; и X представляет собой
(a) радикал формулы
в котором R5 представляет собой H, C1-C2-алкил, C1-C2-галоалкил, галоген, нитро или цианогруппу, и Q представляет собой
(i) 5- или 6-членное гетероароматическое кольцо, включающее 1-3 одинаковых или различных гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из O, С и N; или
(ii) группа -C(O)N(R1)-T, в которой R1 представляет собой H, C1-C4-алкил, C2-C4-алкилкарбонил или C2-C4-алкоксикарбонил, и T представляет собой C1-C6-алкил, который является незамещенным или замещенным C3-C6-циклоалкилом, галогеном, цианогруппой, нитрогруппой, аминогруппой, гидроксигруппой, C1-C6-алкоксигруппой, C1-C6-галоалкоксигруппой, C1-C6-алкилтиогруппой, C1-C6-галоалкилтиогруппой, C1-C6-алкилсульфинилом, C1-C6-галоалкилсульфинилом, C1-C6-алкилсульфонилом, C1-C6-галоалкилсульфонилом, карбоксигруппой, карбамоилом, C1-C6-алкилкарбониламиногруппой, C1-C6-галоалкилкарбониламиногруппой, C1-C6-алкоксикарбонилом, сульфонамидoгруппой, N-моно- или N,N, ди-C1-C4-алкилсульфонамидoгруппой, C2-C6-алканоилом, незамещенным или галогеном, цианогруппой, этенилом или этинилом, замещенным в алкильной части N-C1-C6-алкиламинокарбонилом, или незамещенным или галогеном, -C1-C2-алкилом-, C1-C2-галоалкилом или циано-замещенным 4-6-членным гетероциклилом; или T представляет собой C3-C6-циклоалкил или 4-6-членный гетероциклил, каждый из которых является незамещенным или замещенным галогеном, C1-C2-алкилом, C1-C2-галоалкилом или циано-; или
(iii) радикал -C(O)NH-C=N-O-C1-C2-алкил, радикал -C(O)N=C-N-ди-C1-C2-алкил или радикал -C(O)N=C(NH2)-O-C1-C2-алкил; или
(iv) группу -CH(R3)-N(R4)-C(O)-T1, в которой R3 представляет собой H, C1-C6-алкил, C1-C6-галоалкил, галоген или цианогруппу, R4 представляет собой H; C1-C4-алкил, C2-C4-алкилкарбонил или C2-C4-алкоксикарбонил и T1 независимо определен так, как T выше;
(b) радикал формулы
в котором R5' представляет собой H, C1-C2-алкил, C1-C2-галоалкил, галоген, нитро или цианогруппу, и Q является таким, как определено выше;
(c) радикал формулы
в которой Q' представляет собой радикал, такой как определено в вариантах осуществления (ii), (iii) и (iv) для Q выше; или
(d) радикал формулы
в которой n равняется 1 или 2, и Q'' является группой -N(R4)-C(O)-T2, где T2 независимо имеет значение как T выше, и R4 такое, как определено выше.
Подходящая комбинированная обработка с луфенуроном и другим агентом для борьбы против морских вшей может быть осуществлена, например, путем обработки рыбы, в частности лосося, сначала луфенуроном согласно кормовому способу и режиму, как указано выше, и затем, например, через 3 месяца, предпочтительно, 5 месяцев, более предпочтительно, 6 месяцев и, в частности, 9 месяцев после окончания кормовой обработки луфенуроном, проведения обработки с дополнительным агентом для борьбы против морских вшей; указанная вторая обработка может быть обработкой в ванне, обработкой с кормом или, предпочтительно, обработкой путем инъекции рыбе дополнительного агента для борьбы с морскими вшами. Согласно предпочтительному варианту осуществления этой комбинированной обработки, кормовая обработка луфенуроном имеет место в конце фазы пресноводного развития лосося или в начале его фазы в морской воде.
Дополнительная комбинированная обработка включает, прежде всего, обработку рыбы, в частности лосося, дополнительным агентом борьбы с морскими вшами и затем, например, через 1 час - 2 месяца после этого, предпочтительно, 1 час - 1 месяц после этого или через, в частности, 1 неделю - 1 месяц после этого, проведение обработки луфенуроном с кормом согласно настоящему изобретению, как описано выше. Согласно предпочтительному варианту осуществления этой комбинированной обработки, обработка дополнительным агентом борьбы с морскими вшами представляет собой обработку в ванне, обработку с кормом или обработку посредством инъекции, которую осуществляют в начале фазы в морской воде, например, через 1 час - 3 месяца, предпочтительно, 6 часов - 2 месяца и, в частности, через 12 часов - 1 месяц после выпуска рыбы в морскую воду.
Согласно дополнительному варианту осуществления настоящего изобретения, кормовую обработку луфенуроном объединяют с вакцинацией рыбы против типичных бактериальных или вирусных инфекций. Типичными бактериальными заболеваниями, с которыми борются путем вакцинации, являются, например, вибриоз, фурункулез, болезнь ран, нетипичный aeromonas salmonicida, рыбный риккетсиоз или ERM/иерсиниоз. Примерами вирусных заболеваний, с которыми борются, являются заболевания поджелудочной железы/PDV, инфекционный панкреатический некроз/IPNV или инфекционная анемия у лосося/ISAV. Вакцину, в целом, применяют путем обработки в ванне или обработки с кормом или, предпочтительно, путем инъекции. Вакцинация может иметь место или незадолго до, во время или после кормовой обработки рыбы луфенуроном.
Согласно все еще дополнительному варианту осуществления настоящего изобретения, кормовую обработку луфенуроном объединяют с ингредиентом корма, который обладает модулирующим эффектом на биологию, физиологию, биохимию и, особенно, иммунитет рыбы. Типичными функциями могут быть повышенная секреция слизистой или изменения в характеристиках слизистой, такие, что экспонирование паразитов к луфенурону увеличивается, или вши, подвергнутые воздействию луфенурона, в меньшей степени способны адгезироваться на обработанной рыбе. Применение модулирующего ингредиента в корме может иметь место в течение длительных периодов в цикле получения рыбы или может иметь место до, во время или после обработки луфенуроном. Примерами таких модулирующих ингредиентов являются глюканы, маннаны или альгинаты, применяемые как в отдельности, так и в комбинации с витаминами и/или минералами.
Следующие примеры дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение.
Пример 1:
Три группы по 150 лососей (Атлантический Лосось, S. salar) со средней массой 238 г обрабатывали содержащими лекарственное вещество таблетками, содержащими луфенурон в дозе, соответственно, 3, 5 и 10 мг/кг/день в течение 7 дней подряд. Содержащие лекарственное вещество таблетки получали путем сухого нанесения покрытия коммерчески доступных таблеток рыбного корма содержащей луфенурон готовой смесью для получения содержания луфенурона 0,03, 0,05 и 0,1% (мас./мас.) в рыбном корме и применяли с нормой внесения 1%. Обработку проводили в морской воде.
Каждую группу содержали в отдельной клетке. Четвертую клетку, содержащую 150 лососей со средней массой 238 г, добавляли в исследование в качестве необработанной контрольной группы.
После обработки рыбы подвергали естественному заражению морскими вшами в течение периода в 9 месяцев. Во время исследования температура воды изменялась между 4 и 12°C. Массы рыб и количества морских вшей оценивали после обработки через 1 день, после обработки через 1 неделю и затем ежемесячно до 9 месяца. Подсчеты проводили на 10 рыбах в каждом отобранном образце. Количество халимуса, невзрослых и взрослых особей, мобильных и зрелых особей женского пола L. salmonis регистрировали для каждой рыбы. Не делали различий между халимусом I-IV стадий или между мужскими особями незрелой и зрелой стадий.
Эффективность вычисляли с применением формулы:
% эффективности=100-(100×среднее для группы обработки/среднее для контроля).
Как показано в таблице 1, обработка 3 мг/кг защищала рыбу от заражения морскими вшами в течение 5 месяцев после обработки. Осуществлялась борьба с халимусом на незрелых стадиях, и это в свою очередь предотвращало накопление особей зрелых стадий. На 6 месяц действие против незрелых вшей падало ниже такового для дозы 10 мг/кг/день и на 5 мг/кг/день.
| Таблица 1 Средний подсчет в группах L. salmonis для группы 3 мг/кг |
||||||
| группа 3 мг/кг | L. salmonis: все стадии | L. salmonis: незрелые и зрелые особи | ||||
| Время | Вес [г] | Обработанные | Контроль | Обработанные | Контроль | Эффективность, % |
| 1 день | 263 | 0,10 | 0,10 | 0,10 | 0,00 | н/о |
| 1 неделя | 283 | 0,10 | 0,40 | 0,10 | 0,00 | н/о |
| 1 месяц | 409 | 0,00 | 1,00 | 0,00 | 1,00 | 100 |
| 2 месяца | 600 | 0,30 | 2,90 | 0,10 | 1,90 | 95 |
| 3 месяца | 915 | 0,20 | 3,10 | 0,10 | 2,20 | 95 |
| 4 месяца | н/о | 0,00 | 2,50 | 0,00 | 2,40 | 100 |
| 5 месяцев | 1410 | 0,10 | 3,60 | 0,10 | 3,60 | 97 |
| 6 месяцев | 1797 | 1,30 | 2,60 | 1,30 | 2,60 | 50 |
Как показано в таблице 2, обработка 5 мг/кг защищала рыбу от морского заражения вшами в течение 9 месяцев после обработки. Борьба осуществлялась с особями халимуса на незрелой и зрелой стадиях.
| Таблица 2 Средний подсчет в группах L. salmonis для группы 5 мг/кг |
||||||
| группа 5 мг/кг | L. salmonis: все стадии | L. salmonis: незрелые и зрелые особи | ||||
| Время | Вес [г] | Обработанные | Контроль | Обработанные | Контроль | Эффективность, % |
| 1 день | 253 | 0,00 | 0,10 | 0,00 | 0,00 | н/о |
| 1 неделя | 294 | 0,00 | 0,40 | 0,00 | 0,00 | н/о |
| 1 месяц | 407 | 1,90 | 1,00 | 0,10 | 1,00 | 90 |
| 2 месяца | 701 | 0,00 | 2,90 | 0,00 | 1,90 | 100 |
| 3 месяца | 1000 | 0,20 | 3,10 | 0,20 | 2,20 | 91 |
| 4 месяца | 1241 | 0,10 | 2,50 | 0,10 | 2,40 | 96 |
| 5 месяцев | 1593 | 0,10 | 3,60 | 0,10 | 3,60 | 97 |
| 6 месяцев | 1655 | 0,60 | 2,60 | 0,60 | 2,60 | 77 |
| 7 месяцев | 1995 | 1,80 | 5,30 | 0,60 | 5,10 | 88 |
| 8 месяцев | 1980 | 0,50 | 5,40 | 0,50 | 5,10 | 90 |
| 9 месяцев | 2290 | 0,40 | 6,80 | 0,40 | 6,80 | 94 |
Как показано в таблице 3, обработка 10 мг/кг защищала рыбу от заражения морскими вшами до окончания исследования, которое длилось 9 месяцев после обработки. Борьба осуществлялась с особями халимуса незрелой и зрелой стадий. Эффективность в группе с 10 мг/кг превосходила таковую в группе с 5 мг/кг, поскольку во все моменты времени эффективность против морских вшей составляла более 95%.
| Таблица 3 Средние подсчеты для группы L. salmonis для группы 10 мг/кг |
||||||
| группа 10 мг/кг | L. salmonis: все стадии | L. salmonis: незрелые и зрелые особи | ||||
| Время | Вес [г] | Обработанные | Контроль | Обработанные | Контроль | Эффективность, % |
| 1 день | 256 | 0,00 | 0,10 | 0,00 | 0,00 | н/о |
| 1 неделя | 296 | 0,20 | 0,40 | 0,00 | 0,00 | н/о |
| 1 месяц | 423 | 3,10 | 1,00 | 0,00 | 1,00 | 100 |
| 2 месяца | 644 | 0,00 | 2,90 | 0,00 | 1,90 | 100 |
| 3 месяца | 974 | 0,10 | 3,10 | 0,10 | 2,20 | 95 |
| 4 месяца | 1161 | 0,00 | 2,50 | 0,00 | 2,40 | 100 |
| 5 месяцев | 1440 | 0,00 | 3,60 | 0,00 | 3,60 | 100 |
| 6 месяцев | 1628 | 0,30 | 2,60 | 0,10 | 2,60 | 96 |
| 7 месяцев | 1905 | 0,80 | 5,30 | 0,10 | 5,10 | 98 |
| 8 месяцев | 2091 | 0,10 | 5,40 | 0,10 | 5,10 | 98 |
| 9 месяцев | 2065 | 0,00 | 6,80 | 0,00 | 6,80 | 100 |
Пример 2:
Три группы по 400 атлантических лососей (Salmo salar) со средней массой 80 г обрабатывали содержащими лекарственное вещество таблетками, содержащими луфенурон, чтобы доставить дозы, эквивалентные 1, 5 и 10 мг/кг/день в течение более чем 7 дней подряд. Четвертую группу, содержащую 400 лососей со средней массой 80 г добавляли в исследование в качестве необработанной контрольной группы. Содержащие лекарственное вещество таблетки получали путем нанесения покрытия коммерчески доступных таблеток рыбного корма содержащей луфенурон готовой смесью для получения содержания 0,005, 0,025 и 0,05% (мас./мас.) луфенурона в рыбном корме. Группы рандомизировали, и работники на месте работали «вслепую» в отношении групп корма. Обработку проводили в инкубатории с пресной водой и рыбу переводили в морскую воду в течение 7 дней после завершения обработки.
После перевода в море каждую группу разделяли на две клетки, и все клеточные группы содержали в отдельных рандомизированных клетках.
После обработки рыбы подвергали естественному заражению морскими вшами. Во время исследования температура изменялась между 1,9 и 8,1°C. Массы рыб оценивали при размещении в клетки, снова спустя приблизительно 2 недели после перевода в морскую воду и затем с 4-недельным интервалом. Количество морских вшей оценивали приблизительно через 2 недели после перевода в морскую воду и затем с 4-недельным интервалом. Количество халимуса, незрелых и зрелых особей мужского пола, мобильных и зрелых особей L. salmonis женского пола регистрировали для каждой рыбы. Никакого различия не делали между халимусом I-IV стадий или между незрелыми и зрелыми особями мужского пола. Общие количества Caligus elongates также регистрировали, но никакого значимого заражения не было установлено, чтобы провести оценку эффективности.
Эффективность вычисляли с применением формулы:
% эффективности=100-(100×средние значение для группы обработки/среднее значение для контроля).
| Таблица 4 Подсчет для группы L. salmonis с 1 мг/кг |
||||||
| Группа 1 мг/кг | L. salmonis: все стадии | L. salmonis: незрелые и зрелые особи | ||||
| Дни после перевода в море | Масса [г] | Обработанные | Контроль | Обработанные | Контроль | Эффективность, % |
| 5 | 109 | |||||
| 15 | 98 | 0 | 0,4 | 0 | 0,25 | 100 |
| 42 | 135 | 0 | 1,25 | 0 | 0,9 | 100 |
| 76 | 196 | 0,1 | 2,7 | 0,1 | 2,65 | 96,2 |
| 98 | 258 | 0,8 | 4,15 | 0,45 | 2,8 | 83,9 |
| 125 | 303 | 0,4 | 4,9 | 0,3 | 4,25 | 92,9 |
| 154 | 358 | 0,3 | 4,2 | 0,3 | 4,15 | 92,8 |
Как показано в таблице 4, можно заключить, что обработка 1 мг/кг защищала рыбу от заражения морскими вшами по меньшей мере пять месяцев после обработки с эффективностью приблизительно в 90%. Борьба осуществлялась с особями халимуса на незрелой и зрелой стадиях.
| Таблица 5 Подсчет в группе L. salmonis с 5 мг/кг |
||||||
| Группа 5 мг/кг | L. salmonis: все стадии | L. salmonis: незрелые и зрелые особи | ||||
| Дни после перевода в море | Масса [г] | Обработанные | Контроль | Обработанные | Контроль | Эффективность, % |
| 5 | 106 | |||||
| 15 | 107 | 0,1 | 0,4 | 0 | 0,25 | 100 |
| 76 | 201 | 0 | 2,7 | 0 | 2,65 | 100 |
| 98 | 277 | 0,1 | 4,15 | 0,1 | 2,8 | 96,4 |
| 125 | 318 | 0 | 4,9 | 0 | 4,25 | 100 |
| 154 | 371 | 0 | 4,2 | 0 | 4,15 | 100 |
Как показано в таблице 5, можно заключить, что обработка 5 мг/кг защищала рыбу от заражения морскими вшами в течение до 5 месяцев после обработки. Исследование продолжается. Возможно, что защита будет более длительной. Борьба осуществлялась с особями халимуса на незрелой и зрелой стадиях.
| Таблица 6 Подсчет в группе L. salmonis с 10 мг/кг |
||||||
| Группа 10 мг/кг | L. salmonis: все стадии | L. salmonis: незрелые & зрелые особи | ||||
| Дни после перевода в море | Масса [г] | Обработанные | Контроль | Обработанные | Контроль | Эффективность, % |
| 5 | 110 | |||||
| 15 | 115 | 0,5 | 0,4 | 0 | 0,25 | 100 |
| 76 | 208 | 0 | 2,7 | 0 | 2,65 | 100 |
| 98 | 291 | 0 | 4,15 | 0 | 2,8 | 100 |
| 125 | 316 | 0 | 4,9 | 0 | 4,25 | 100 |
| 154 | 384 | 0 | 4,2 | 0 | 4,15 | 100 |
Как показано в таблице 6, можно заключить, что обработка 10 мг/кг защищала рыбу от заражения морскими вшами в течение до 5 месяцев после обработки. Исследование продолжается. Возможно, что защита будет более длительной. Борьба осуществлялась с особями халимуса на незрелой и зрелой стадиях.
1. Применение луфенурона или его соли для получения медикамента для борьбы с морскими вшами в популяции рыб путем перорального введения суточной дозы луфенурона от 1 до 30 мг/кг рыбной биомассы в течение периода от 3 до 14 дней, при котором общее количество луфенурона, применяемого во время указанного интервала времени, составляет от 7 до 350 мг/кг рыбной биомассы.
2. Применение по п. 1, в котором пероральное введение включает введение лечимой рыбе корма, включающего луфенурон, в популяции рыб.
3. Применение согласно п. 1 или 2, где пероральное введение включает введение луфенурона популяции рыб ежедневно в течение 5-10 дней.
4. Применение по п. 3, где пероральное введение включает введение луфенурона популяции рыб ежедневно в течение 7 дней.
5. Применение согласно п. 1 или 2, где пероральное введение включает введение луфенурона популяции рыб в суточной дозе от 1 до 20 мг/кг рыбной биомассы.
6. Применение согласно п. 5, где пероральное введение включает введение луфенурона популяции рыб в суточной дозе от 1 до 15 мг/кг рыбной биомассы.
7. Применение по п. 1 или 2, в котором пероральное введение включает введение популяции рыб ежедневно в течение 7 дней дозы луфенурона от 1 до 15 мг/кг рыбной биомассы.
8. Применение согласно п. 7, где пероральное введение включает введение луфенурона ежедневно популяции рыб в течение 7 дней в дозе от 1 до 10 мг/кг рыбной биомассы.
9. Применение по п. 2, где корм для лечимой рыбы получают путем нанесения луфенурона в виде покрытия на гранулы или таблетки рыбного корма.
10. Применение согласно п. 1, где популяция рыб включает лососевых.
