Способ диагностики репродуктивного респираторного синдрома свиней непрямым иммуногистохимическим анализом на основании моноклональных антител

Изобретение относится к медицине, а именно к ветеринарии, и может быть использовано для диагностики репродуктивного респираторного синдрома свиней. Для этого диагностику репродуктивного респираторного синдрома свиней проводят непрямым иммуногистохимическим анализом на основании моноклональных антител. В качестве патологического материала используют органы свиней, далее выявляют вирус, в качестве моноклональных антител берут моноклон 4h7h9 для идентификации антигена rN вируса репродуктивного респираторного синдрома свиней и антитела с меткой пероксидазы хрена. Выявляют специфическую окраску с учетом результатов по выявлению конгломератов красно-кирпичного цвета. Использование данного способа позволяет диагностировать репродуктивный респираторный синдром в органах свиней на основании моноклональных антител для идентификации антигена rN вируса. 3 ил.

 

Предлагаемое изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к способу диагностики репродуктивного респираторного синдрома свиней (РРСС) путем выявления специфического антигена вышеуказанного возбудителя в цитоплазме инфицированных альвеолярных макрофагов и свободных макрофагов лимфоузлов при иммуногистохимическом анализе (ИГХА) парафиновых срезов легких и лимфоузлов, на основе моноклональных антител, и может быть использован в научно-исследовательских институтах и ветеринарных лабораториях.

Для диагностики РРСС применяют методы молекулярной биологии, направленные на выделение вируса; выявление его антигенов, а также антител к вирусу. Для данных целей используют полимеразную цепную реакцию в режиме реального времени (РТ ПЦР), стандартную полимеразную цепную реакцию (ПЦР) [4]; in-situ гибридизацию [5]; иммуноферментный анализ (ИФА) сывороток крови на наличие специфических антител против вируса репродуктивного респираторного синдрома свиней (ВРРСС) с применением стандартных диагностических наборов [2; 3]; авидин-биотиновый комплекс при иммуногистохимическом исследовании (ИГХИ) и иммунофлюоресцентную метку [6; 7]. Также, для выполнения ИГХИ, используют автоматические иммуностейнеры [8].

При ИГХИ органов свиней зарубежные авторы опираются на разработанный в 1994 году способ, который описал Patrick G. Halbur с соавторами [9]. Суть их способа заключается в следующем. При вскрытии трупов поросят отбирают образцы легких и помещают их в 10% забуференный нейтральный формалин, жидкость Буэна или раствор, содержащий 4% формальдегида и 1% глутарового альдегида. Затем ткань фиксируют в течение 24 часов. После фиксации ткани в жидкости Буэна, ее выдерживали в 5 сменах 70%-ного этилового спирта. После этого формировали парафиновые блоки и нарезали на микротоме толщиной 3 микрона. Полученные срезы приклеивали на предметные стекла с поли-L-лизиновым покрытием, депарафинировали в 2 порциях ксилола и далее проводили по спиртам в возрастающей концентрации. Для удаления эндогенной пероксидазы срезы выдерживали в 3% растворе перекиси водорода 3 раза по 10 минут. Далее срезы промывали в 0,05М TRIS буфере (рН 6,7) - 5 минут. В качестве блокирующего раствора использовали 5% нормальную сыворотку крови козы. В качестве первичных антител использовали моноклональные антитела SDOW-17, разведенные в смеси 1 часть TRIS буфера и 9 частей фосфатного буфера (PBS рН 7,2) в соотношении 1:000. Далее срезы с антителами инкубировали при 4°С 16 часов во влажной камере. После инкубации срезы споласкивали TRIS буфером 5 минут, и еще 5 минут выдерживали в 1% растворе сыворотки козы на TRIS буфере. Затем срезы помещали в биотинилированую козью антимышиную антисыворотку на 30 минут. Затем отмывали в 3 порциях TRIS буфера. После этого срезы выдерживали в пероксидазном конъюгате в разведении 1:200 (в TRIS/PBS буфере), 40 минут. Отмывали в течение 5 минут в TRIS буфере. Далее срезы инкубировали в свежеприготовленном растворе 3,3'-диаминобензидин тетрахлориде от 8 до 10 минут при комнатной температуре. Реакцию останавливали промыванием в дистиллированной воде 5 минут. Окрашивали гематоксилином, промывали в растворе (10 г MgS4 и 2 г NaHCO3 в 1 литре ультрачистой воды). Полоскали в дистиллированной воде, дегидрировали, покрывали покровным стеклом при помощи монтирующей среды.

В России, для диагностики вышеуказанного заболевания, применяют полимеразную цепную реакцию, РТ ПЦР, иммуноферментный анализ и иммуноцитохимическая диагностика на культуре клеток МАРК-145 непрямым гистохимическим вариантом ИФА с применением моноклональных антител [1].

В задачу наших исследований входило: разработать эффективный способ диагностики репродуктивного респираторного синдрома свиней, обеспечивающий специфическое выявление вируса в органах свиней, поскольку не требует дорогостоящего, специфического оборудования, прост в исполнении и выполним в любой гистологической лаборатории.

Предложенный способ заключается в следующем.

Получение моноклональных антител (МКА), к белку rN вируса РРСС

Для иммунизации использовали самок мышей линии BALB/c. Мышей иммунизировали 3-4-кратно с интервалом 2 недели. В качестве антигенов использовали рекомбинантный белок rN РРСС, полученный в прокариотической системе экспрессии в E.coli. Для слияния была выбрана перевиваемая клеточная линия мышиной миеломы Sp2/0, дефектная по гену HGPT, не продуцирующая собственные иммуноглобулины. В качестве ростовой среды для культивирования миеломных и гибридомных клеток использовали среду RPMI-1640 (Sigma), содержащую 20% эмбриональной телячьей сыворотки, 4,5 г/л глюкозы, 3 мМ глутамина, 0,2 ед/мл инсулина, 60 мкг/мл гентамицина.

После введения бустерной дозы антигена получали суспензию клеток селезенки мыши стандартным методом в охлажденной ростовой среде без сыворотки.

Для слияния использовали PEG/DMSO Solution (Sigma, США). Гибридизацию проводили по методу Kohler G., Milstain С. Суспензию клеток селезенки и миеломные клетки смешивали в соотношении 3:1 (5:1 - 2-е слияние rN), соответственно. После слияния клетки ресуспендировали в селективной среде HAT, вносили в 96-луночные панели в концентрации 1,5×105 клеток в лунку в объеме 0,1 мл. Панели с клетками инкубировали при 37°С в атмосфере 5% СО2. Первичный просмотр панелей проводили через 5 дней после слияния.

"Подкармливание" гибридомных клонов проводили каждые 2-3 дня, используя в течение 9-10 дней после слияния среду с HAT. Культуральные жидкости тестировали на наличие противовирусной активности в реакции ИФА, когда клоны гибридных клеток занимали не менее 50% площади лунки. Клоны, обнаружившие специфическую активность, реклонировали путем лимитирующих разведений в 96-луночных панелях с фидерным слоем из перитонеальных макрофагов мышей. Супернатанты из лунок, содержащих реклонированные гибридомы, снова тестировали на наличие антител и их специфичность. Позитивные реклонированные гибридомы наращивали в культуральных флаконах увеличивающихся размеров.

Выполнение ИГХИ с полученными МКА к белку rN вируса РРСС

Для выявления вируса репродуктивного респираторного синдрома брали лимфоузлы, легкое. Для определения тропности вируса дополнительно брали миндалины, селезенка, почка, печень, миокард. Объекты помещали в 10% раствор забуференного нейтрального формалина. Размеры исследуемой ткани 1,0×1,0×0,5 см. Далее выдерживаются при комнатной температуре 48-72 часа, затем проходят гистологическую проводку через изопропиловый спирт и ксилол в смеси с парафином. После обработки ткани выполняется пропитывание ее парафином, для формирования парафиновых блоков. После этого блоки нарезаются толщиной 3-5 микрон, срезы наклеиваются на предметные стекла, покрытые глицериновым альбумином по Малори и высушиваются. После просушки стекол срезы депарафинируются в течение 20 мин, дегидрируются - 10 мин. Далее срезы отмывали в 2 порциях дистиллированной воды по 5 минут в каждой. Для удаления эндогенной пероксидазы, срезы помещали в 3% раствор перекиси водорода в термостат при 37°С на 40 минут. Далее отмывка в PBS буфере рН 7,7 трижды с экспозицией 10 минут, при комнатной температуре. После отмывки срезов готовили блокирующий 5% раствор сухого молока на PBS буфере рН 7,7 и инкубировали в термостате при 37°С, 40 минут. Затем промывали трижды PBS буфером рН 7,7 с экспозицией 10 минут при комнатной температуре. Далее на срезы органов наносили моноклональные антитела 4h7 в разведении 1:1500 на PBS буфере и инкубировали во влажной камере в термостате при 37°С - 80 минут, отмывали в PBS буфере дважды по 5 минут при комнатной температуре. Затем наносили антимышиные антитела конъюгированные с пероксидазой хрена в разведении 1:200 в 5% растворе сухого молока на PBS буфере рН 7,7, инкубировали во влажной камере в термостате при 37°С - 40 минут. Отмывали в PBS с твином дважды, по 5 минут при комнатной температуре. Непосредственно перед использованием, готовили субстрат пероксидазы: 3-амино-9-этилкарбазол на диметилформамиде в 0,02 М Na-фосфатном буфере рН 5,0 с добавлением перекиси водорода. Затем споласкивали в трех порциях дистиллированной воды и окрашивали Гематоксилином Майера. После окраски срезы споласкивали в дистиллированной воде и покрывали монтирующей средой под покровное стекло.

Предложенный способ предусматривает проведение иммуногистохимического анализа парафиновых срезов легких и лимфоузлов с использованием пероксидазного конъюгата на основе моноклональных антител клона а_мышь* и моноклональных антител к капсидному белку вируса репродуктивного респираторного синдрома свиней клона 4h7h9. При этом обнаружение антигена вируса репродуктивного респираторного синдрома свиней осуществляется на цитоплазме инфицированных альвеолярных макрофагов и свободных макрофагов лимфоузлов с окрашенной пероксидазной меткой в виде конгломератов коричневого цвета хорошо заметных на препаратах без докраски ядер клеток гематоксилином Майера (фиг. 1, 3). Для дифференциации клеток при проведении ИГХИ возможно дополнительное окрашивание срезов гематоксилином Майера, что улучшает визуализацию ядер клеток альвеолярных макрофагов легкого и свободных макрофагов лимфоузлов. В данном случае при положительной реакции на РРСС хорошо просматриваются ядра клеток синего цвета и конгломераты антиген - антитело (пероксидазная метка антител) коричневого цвета (фиг. 2, 4).

Предложенный способ чувствителен, специфичен, позволяет достоверно обнаружить антигены вируса репродуктивного респираторного синдрома свиней и дифференцировать их от возбудителей болезней, протекающих с клинически схожей картиной.

Предложенный способ апробирован нами в 2015-2016 гг, в секторе патоморфологии ФГБНУ ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко и на опытной базе о. Лисий, Выпшеволотского филиала ФГБНУ ВИЭВ при проведении острых опытов по заражению поросят ВРРСС.

Предлагаемый способ найдет применение в научно-исследовательских институтах и ветеринарных лабораториях.

Список литературы:

1. Вишняков И.Ф., Куриннов В.В., Балашов Е.А., Лыска В.М., Суханова О.В., Зуев В.В. Патент RU 2115929 С1, патентообладатель - Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии. (Прототип).

2. Орлянкин Б.Г., Гребенникова Т.В., Алипер Т.И., Мишин А.М. Специфическая профилактика репродуктивного респираторного синдрома свиней // Свиноводство. 2010. №3. С. 67-69.

3. Сидорчук А.А., Зеленуха Е.А. // Причины респираторной патологии свиней в ряде промышленных комплексов России. Ветеринария, 2014, №1, стр. 17-24.

4. Livak KJ, Schmittgen TD // Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta DeltaC(T)). Methods 25, 2001, p. 402-408.

5. Trang NT, Hirai T, Ngan PH, Lan NT, Fuke N, Toyama K, Yamamoto T, Yamaguchi R Enhanced detection of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus in fixed tissues by in situ hybridization following tyramide signal amplification. //J Vet Diagn Invest. 2015 May; 27(3): 326-31. Epub 2015 Apr 8.

6. Obdulio , S Rosales, Francisco J , David Risco, Juan J Quereda, Simon P Graham, Jean-Pierre Frossard, Sophie В Morgan, Falko Steinbach, Trevor W Drew, Tony S Strickland and Francisco J Salguero//Comparative analysis of cytokine transcript profiles within mediastinal lymph node compartments of pigs after infection with porcine reproductive and respiratory syndrome genotype 1 strains differing in pathogenicity Veterinary Research 2015 46: 34.

7. Barranco I, J, IM, Quereda JJ, Salguero FJ, Pallares FJ, Carrasco L // Immunohistochemical expression of IL-12, IL-10, IFN-α and IFN-γ in lymphoid organs of porcine reproductive and respiratory syndrome virus-infected pigs. Vet Immunol Immunopathol 149, 2012, p. 262-271.

8. James E. Benson, Michael J. Yaeger, Jane Christopher-Hennings, Kelly Lager, Kyoung-Jin Yoon//A comparison of virus isolation, immunohistochemistry, fetal serology, and reverse-transcription polymerase chain reaction assay for the identification of porcine reproductive and respiratory syndrome virus transplacental infection in the fetus. J Vet Diagn Invest 14: 8-14 (2002), p. 8-14.

9. Patrick G. Halbur Development of a streptavidin-biotin immunoperoxidase procedure for the detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus antigen in porcine lung//Patrick G. Halbur, John J. Andrews, Elise L. Huffman, Prem S. Paul, Xiang-Jin Meng, Yosiya Niyo. J Vet Diagn Invest 6: 254-257 (1994) p. 254-257.

Учет результатов прилагается.

Способ диагностики репродуктивного респираторного синдрома свиней непрямым иммуногистохимическим анализом на основании моноклональных антител, отличающийся тем, что в качестве патологического материала используют органы свиней, далее выявляют вирус непрямым иммуногистохимическим способом, в качестве моноклональных антител берут моноклон 4h7h9 для идентификации антигена rN вируса репродуктивного респираторного синдрома свиней и антитела с меткой пероксидазы хрена с последующей специфической окраской, и учетом результатов по выявлению конгломератов красно-кирпичного цвета.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, в частности, к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования возможной вакцинации против туберкулеза у новорожденных из групп высокого перинатального риска в роддоме.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и отоларингологии. Определяют антитела IgM и IgG к ВПГ- 1 типа, антитела IgM и IgG к ВПГ- 2 типа и антитела IgG к ЦМВ при индексе авидности антител IgG к ВПГ- 1 типа более 65% в сыворотке крови в баллах(А).

Данное изобретение относится к области иммунологии. Предложено изолированное антитело, которое обладает способностью специфично связываться с амилоидом бета (Аβ), а также антигенные циклические пептиды, способные вызывать специфический иммунный ответ против олигомерного Аβ.

Изобретение относится к медицине, а именно к психиатрии, и может быть использовано для прогноза риска формирования панических расстройств. Определяют общеклинические показатели, в качестве которых используют иммунобиологические.

Изобретение относится к медицине, а именно к психиатрии, и может быть использовано для прогноза риска формирования панических расстройств. Определяют общеклинические показатели, в качестве которых используют иммунобиологические.
Изобретение относится к медицине и предназначено для лечения больных раком толстой кишки. С использованием метода полимеразной цепной реакции в реальном времени проводят количественную оценку экспрессии генов ZEB1, ZEB2, VIM, SFRP2, PLS3 в образцах опухоли и нормальной слизистой оболочки кишки.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способам определения комбинации антигенсвязывающих сайтов и получения биспецифического антитела, что может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается прогнозирования течения послеоперационного периода у пациентов с ишемической болезнью сердца после чрескожного коронарного вмешательства.

Настоящее изобретение относится к иммунологии. Предложено антитело, которое связывается с фактором роста сосудистого эндотелия А (VEGF-А) человека и мыши, а также антигенсвязывающий фрагмент такого антитела.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогноза раннего прогрессирования меланомы кожи. Способ по изобретению включает определение в гомогенатах образцов ткани опухоли и прилежащей к ней визуально неизмененной ткани (перитуморальной зоне), взятых при хирургическом лечении по поводу меланомы кожи, методом иммуноферментного анализа уровней цитокинов ИЛ-6 в ткани опухоли, ИЛ-2 и ИЛ-1β в ткани перитуморальной зоны.

Изобретение относится к биотехнологии. Конкретно, изобретение относится к предупреждению феномена усиления токсичности глазных инстилляций при совместном применении комбинации лекарственных препаратов. Используют культуры клеток конъюнктивы, при этом осуществляют подбор оптимальных концентраций глазных препаратов путем оценки метаболитической активности культуры клеток конъюнктивы качественно через морфологическую оценку с помощью визуального контроля и количествено с помощью МТТ-теста. Оценка осуществляется при воздействии указанных глазных препаратов или их комбинаций в различных концентрациях. Оценивают продукцию цитокинов в сравнении с контролем по уровню транскрипции после 48 ч инкубирования с указанными глазными препаратами или их комбинацией в подобранной концентрации. В качестве контроля используют не обработанную культуру клеток конъюнктивы. Усиление продукции цитокинов указывает на отсутствие усиления токсичности глазных инстилляций при совместном применении лекарственных препаратов, что позволяет применять проверенную комбинацию лекарственных препаратов для лечения воспалительных заболеваний конъюнктивы и роговицы. Изобретение может быть использовано для предупреждения феномена усиления токсичности глазных инстилляций при совместном применении комбинации лекарственных препаратов. 4 з.п. ф-лы, 3 ил., 3 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для оценки нейропротекторных свойств веществ in vitro. Для этого используют дифференцированные в нейрональном направлении индуцированные плюрипотентные стволовые клетки человека путем репрограммирования фибробластов кожи человека в индуцированные плюрипотентные стволовые клетки. После чего индуцированные плюрипотентные стволовые клетки неоднократно помещают в культуральную среду, обеспечивающую их дифференцировку в нейрональном направлении и формирование дофаминергических нейронов. Полученные дифференцированные клетки подвергают повреждающему воздействию в присутствии исследуемых веществ и по результатам выживаемости клеток оценивают протекторное действие исследуемых веществ. Использование данного способа позволяет проводить тестирование соединений на наличие нейропротекторной активности. 16 з.п. ф-лы, 10 ил., 4 пр.
Изобретение относится к области медицины, педиатрии, инфекционным болезням и касается способа оценки эффективности терапии инфекции, вызванной вирусом герпеса человека 6 типа (ВГЧ-6), у детей. Сущность способа: у ребенка до начала терапии, затем через один и три месяца от начала лечения определяют вирусную нагрузку (ВН) ДНК ВГЧ-6 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в соскобе из эпителия ротоглотки и при снижении ВН через указанные промежутки времени на 2 log10 и более делают вывод о высокой эффективности терапии; при снижении ВН на 1 log10 - об умеренной эффективности лечения. Технический результат: объективность, повышение чувствительности способа, неинвазивность. 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования эндометриопатии, отличающийся тем, что в образце менструальной крови определяют концентрации интерлейкина-6 (ИЛ-6), глутатионпероксидазы-1 (ГТП 1) и растворимой формы Е-селектина и определяют коэффициент вероятности эндометриопатии (Р) по формуле: гдеа=0,0002782; b=0,0381529; с=-0,1205126; d=-1,1189533; e - экспонента (константа) = 2,7; X3 - значение концентрации ИЛ-6, пг/мл; Х2 - значение концентрации растворимой формулы Е селектина, нг/мл; X1 - значение концентрации ГТП 1, нг/мл; и при значении Рэ > 0,29 прогнозируют наличие эндометриопатии. Изобретение обеспечивает повышение точности и объективности оценки состояния эндометрия у женщин с репродуктивными нарушениями. 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к наркологическим и инфекционным болезням, и может быть использовано для диагностики абстинентного синдрома при опийной наркомании, сочетанной с ВИЧ-инфекцией. Для этого методом иммуноферментного анализа в крови, взятой из локтевой вены, выявляют наличие комплекса сывороточных цитокинов - IL-1β, IL-2, IL-6, IL-18, IFNα, IFNγ с последующим определением их уровней. При значениях IFNα - от 2,9 до 10,3 пг/мл, IFNγ - от 7,5 до 10,9 пг/мл, IL-1β - от 2,2 до 12,6 пг/мл, IL-2 - от 1,7 до 7,5 пг/мл, IL-6 - от 1,4 до 9,4 пг/мл, IL-18 - от 847 до 1353 пг/мл диагностируют абстинентный синдром при опийной наркомании, сочетанный с ВИЧ-инфекцией. Использование данного изобретения позволяет провести дифференциальную диагностику абстинентного синдрома при опийной наркомании, сочетанного с ВИЧ-инфекцией, что определяет уже в ранние сроки заболевания назначить необходимую этиотропную и патогенетическую терапию. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для оценки состояния здоровья человека. В периферической крови обследуемого с помощью метода проточной цитофлюорометрии определяют процентное содержание Th17-лимфоцитов, а именно процент лимфоцитов с фенотипом CD3+CD4+CD161+CD45R0+ от гейта CD3+CD4+лимфоцитов. Вычисляют расчетный показатель процентного содержания Th17-лимфоцитов в периферической крови по следующей формуле: у = -0,0059х2 + 0,6819х + 1,1671,где х - возраст обследуемого лица в годах, у - расчетный процент Th17 для данного возраста; сравнивают расчетный и реальный показатели процентного содержания Th17-лимфоцитов в периферической крови. При их совпадении или наличии между ними разницы, не превышающей 2σ, обследуемого считают здоровым. В случае превышения реального показателя Th17-лимфоцитов над расчетным более чем на 2σ обследуемого считают больным, где σ - стандартное отклонение. Использование данного способа позволяет на основании критерия соответствия возрастной норме индивидуального уровня Th17-лимфоцитов в периферической крови выявить среди лиц с неизвестным анамнезом и неясными клиническими проявлениями группу здоровых лиц и группу больных лиц. 1 пр., 1 табл., 1 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано в гинекологических стационарах и амбулаторных условиях женских консультаций и поликлиник для прогнозирования прогресса папилломавирусной инфекции у пациенток с хроническим рецидивирующим ВПЧ-ассоциированным цервицитом. Сущность изобретения: у пациентки определяют генотипы полиморфизмов Ser249Pro в гене TLR6 и Pro72Arg в гене ТР53 и при выявлении у пациентки аллеля Ser в гене TLR6 и гомозиготного генотипа Pro/Pro или Arg/Arg в гене ТР53 прогнозируют низкий риск прогрессирования ПВИ; при выявлении у пациентки мутации Pro/Pro в гене TLR6 либо гетерозиготного генотипа Pro/Arg в гене ТР53 прогнозируют средний риск прогрессирования ПВИ; при определении у пациентки мутации Pro/Pro в гене TLR6 и гетерозиготного генотипа Pro/Arg в гене ТР53 прогнозируют высокий риск прогрессирования ПВИ. Изобретение обеспечивает возможность осуществления с высокой степенью достоверности прогнозирования прогресса ПВИ у пациенток с ВПЧ-ассоциированным цервицитом, что позволит выбрать правильную тактику ведения. 5 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано для количественного определения серебряной соли сульфадимидина для стандартизации и контроля качества лекарственных средств. Для этого готовят контрольный водный раствор сульфадимидина. Оптическую плотность рабочего и контрольного образцов регистрируют спектрофотометрически при длине волны 242 нм. Расчет результатов проводят по удельному показателю поглощения с учетом молекулярных масс сульфадимидина и его серебряной соли. Изобретение обеспечивает унифицирование методики анализа в контрольно-аналитических лабораториях, результатов определения и уменьшение погрешности анализа. 2 табл., 1 ил., 1 пр.

Изобретение используется в патологической анатомии, эндокринологии, хирургии. Способ дифференциальной диагностики заболеваний щитовидной железы заключается в том, что проводят гистоэнзиматическое исследование фермента тиреопероксидазы (ТПО) в щитовидной железе и по активности ТПО диагностируют диффузный токсический зоб, многоузелковый токсический зоб, фолликулярную аденому в состоянии эутиреоза, аденокарциному. Целью изобретения является обеспечение достоверности полученных результатов при проведении дифференциальной диагностики заболеваний щитовидной железы. 4 пр., 2 ил.

Изобретение относится к медицине и касается способа выделения подклассов иммуноглобулина G (IgG) аутоантител к иммунорегуляторному цитокину фактору некроза опухоли (TNF), заключающегося в получении общей фракции IgG аффинной хроматографией с использованием сорбента Protein G Sepharose с последующей нейтрализацией, объединением и диализом IgG, очистке полученной фракции IgG от примеси TNF. При этом выделение подклассов IgG производят из фармацевтического препарата иммуноглобулина для внутривенного введения, после получения фракции IgG осуществляют ее очистку от примеси TNF ультрафильтрацией с использованием центрифужных фильтров, затем проводят этап выделения антител IgG3 и получения смеси IgG1, IgG2, IgG4 аффинной хроматографией; затем выделяют антитела IgG1 многократной негативной аффинной хроматографией с последующим объединением и диализом, затем выделяют антитела IgG2 многократной негативной аффинной хроматографией с последующим объединением и диализом, затем проводят очистку антител IgG1 и IgG2 от примеси IgG4 негативной аффинной хроматографией, после чего проводят выделение специфических аутоантител к TNF подклассов IgG1, IgG2, IgG3 аффинной хроматографией с последующей нейтрализацией, объединением и диализом. Изобретение обеспечивает получение чистых фракций аутоантител к TNF подклассов IgG1, IgG2 и IgG3. 1 пр., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к ветеринарии, и может быть использовано для диагностики репродуктивного респираторного синдрома свиней. Для этого диагностику репродуктивного респираторного синдрома свиней проводят непрямым иммуногистохимическим анализом на основании моноклональных антител. В качестве патологического материала используют органы свиней, далее выявляют вирус, в качестве моноклональных антител берут моноклон 4h7h9 для идентификации антигена rN вируса репродуктивного респираторного синдрома свиней и антитела с меткой пероксидазы хрена. Выявляют специфическую окраску с учетом результатов по выявлению конгломератов красно-кирпичного цвета. Использование данного способа позволяет диагностировать репродуктивный респираторный синдром в органах свиней на основании моноклональных антител для идентификации антигена rN вируса. 3 ил.

Наверх