Способ получения системы доставки фрагментов нуклеиновых кислот в клетки млекопитающих

Изобретение относится к области молекулярной биологии, биоорганической химии и медицины. Предложен способ получения системы доставки фрагментов нуклеиновых кислот (ФНК) в клетки млекопитающих. Осуществляют синтез основы для доставки ФНК. В качестве основы используют аминозамещенный силанол (Si~NH2) в концентрации 1-4 мг Si/мл. Si~NH2 получают гидролизом в воде аминопропилтриэтоксисилана при рН 10-11 и температуре 20-70°С с последующей нейтрализацией силанола 0,5-1%-ным раствором уксусной кислоты до рН 8-9. К полученному раствору Si~NH2 добавляют рассчитанное количество 10-3-10-7 М раствора соответствующего ФНК в соотношении 5-100 нмоль ФНК на 1 мг Si и инкубируют в 0,1-0,2 М растворе NaCl при комнатной температуре в течение 20-30 мин. Получают систему доставки ФНК в клетки, представляющую собой композит Si~NH2⋅ФHK с емкостью по ФНК 10-100 нмоль/мг Si, обладающий высокой прочностью связывания олигонуклеотида с основой, способностью проникать через клеточную мембрану и низкой цитотоксичностью. 3 ил., 10 пр.

 

Изобретение относится к области молекулярной биологии, биоорганической химии и медицины и может быть использовано для создания систем доставки лекарственных средств (в частности, олигонуклеотидов) в клетки.

Использование фрагментов нуклеиновых кислот и их аналогов (ФНК) для селективного воздействия на внутриклеточный генетический материал является одной из важнейших задач современной биологии и фундаментальной медицины. В случае решения этой проблемы открывается возможность широкого использования этого подхода в практической медицине. Однако до конца не решенной проблемой является отсутствие эффективного способа доставки фрагментов нуклеиновых кислот и их аналогов внутрь клетки, поскольку известно, что сами по себе они проникают в клетки в очень малой степени, в первую очередь, из-за гидрофобного характера клеточной мембраны.

Известны способы доставки ФНК в клетки с помощью вирусных векторов [Bouard, D. еt al., British Journal of Pharmacology, 2009, v. 157, 153-165], путем включения в липосомы [Deshpande, D. et al., Pharm. Res., 1998, v. 15, p. 1340-1347], путем конъюгирования с катионными полимерами различной природы [Smedt, S.C. et al., Pharm. Res., 2000, v. 17, 113-126], с помощью электропорации [Baum С.et al., Biotechniques. 1994, v. 17, 1058-1062] и др. Однако проблема доставки пока не нашла окончательного решения и продолжает оставаться актуальной задачей.

Известно использование наночастиц различной природы, в частности, неорганических наночастиц в качестве агентов доставки реакционноспособных олигонуклеотидов, обеспечивая тем самым высокоэффективное взаимодействие с внутриклеточными нуклеиновыми кислотами.

Описано использование наночастиц фосфата кальция для доставки плазмидной ДНК в стволовые клетки [Cao X, et al., Int. J. Nanomedicine, 2011; 6, 3335-3349]; наночастиц фосфатов магния и марганца для доставки олигонуклеотидов в клетки HeLa [Bhakta G, et al., Biomaterials. 2005, v. 26, 2157-2163], наночастиц карбонат-апатита для доставки ДНК в клетки млекопитающих [Hossain S, et al., Anal. Biochem., 2010, v. 397, 156-161]; наночастиц благородных металлов для детекции ДНК и их доставки в клетки [Chen XJ, et al., Wiley Interdiscip.Rev. Nanomed. Nanobiotechnol., 2012, doi: 10.1002/wnan. 1159].

Известен способ получения наноразмерной системы доставки ФНК в клетки млекопитающих, включающий синтез наночастиц диоксида титана (ТiO2) размером ~5 нм и последующую иммобилизацию на них допамин-содержащего олигонуклеотида [Paunesku Т. et al., Nat. Mater. 2003, v. 2, 343-346; Thurn К.Т. et al., Small 2009, v. 5, 1318-1325; Kurepa, J. et al., Nano Lett. 2010, v. 10, 2296-2302].

Наиболее близким к заявляемому способу – прототипом - является способ получения наноразмерной системы доставки олигонуклеотидов, включающий синтез наночастиц диоксида титана, синтез конъюгатов наночастиц диоксида титана с полилизином (TiO2-PL), иммобилизацию олигонуклеотидов на TiO2-PL, при этом иммобилизацию олигонуклеотида проводят в водном растворе при комнатной температуре, а не связавшийся с частицами конъюгат отмывают раствором NaCl. ФНК связываются с TiO2-PL за счет электростатического взаимодействия положительно заряженных аминогрупп полилизина (NH2) и отрицательно заряженных межнуклеотидных фосфатных групп олигонуклеотида (р). Получают наноразмерную систему доставки ФНК в клетки, представляющую собой нанокомпозит TiO2-PL⋅ФНК с емкостью по ФНК, составляющей 0.2-60 нмоль/мг. Длительность способа получения системы доставки составляет 1.5-2 часа, а с учетом времени приготовления TiO2-наночастиц -2-3 суток. Получаемая таким способом наноразмерная система доставки ФНК в клетки состоит из наночастиц диоксида титана, покрытых полилизином, на которых иммобилизованы ФНК, способные проникать в эукариотические клетки путем обычного эндоцитоза. В качестве линкера используют полиамины, содержащие от 3 до 1000 аминогрупп в молекуле, преимущественно полилизин, полиэтиленимин или спермин (патент RU 2444571 С2, опубл. 10.03.2012).

Недостатками известного способа является необходимость предварительного синтеза конъюгатов наночастиц диоксида титана с полилизином (TiO2-PL), что требует использования относительно дорогого реактива (полилизина) и дополнительного времени, а также ограниченные функциональные возможности вследствие того, что в качестве основы для системы доставки используются нестабильные золи диоксида титана, склонные к агрегации, что может быть препятствием для использования нанокомпозитов TiO2-PL⋅ФНК в медицинской практике.

Техническим результатом является упрощение и сокращение длительности способа, а также расширение его функциональных возможностей.

Технический результат достигается заявляемым способом, заключающимся в следующем.

Предварительно получают основу (носитель) для системы доставки. Для этого 3-аминопропилтриэтоксисилан (в концентрации 1-4 мг/мл в пересчете на Si) гидролизуют добавлением его по каплям к дистиллированной воде при значениях рН 10-11 и температуре от 20 до 70°С и перемешиванием в течение 8-15 ч. Полученный аминозамещенный силанол (Si~NH2) представляет собой прозрачный раствор, содержащий Si(OH)3(C3H6NH2) в виде мономера или димера или смеси мономера, димера и слабоконденсированных цепочек с соотношением Si/NH2=1:1. Высушенный на воздухе гидролизованный продукт представляет собой бесцветную стекловидную пленку. По данным рентгенофазового анализа (РФА) и просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ) сухой продукт является аморфным веществом.

Перед иммобилизацией ФНК к раствору гидролизованного продукта добавляют 0.5-1%-ную уксусную кислоту до значений рН 8-9 и получают раствор Si~NH2 с концентрацией 1-4 мг/мл в пересчете на Si и соотношением Si/NH2=1:(0.4-0.5). К полученному раствору Si~NH2 (2-25 мкл, 1-4 мг Si/мл) добавляют 10-50 мкл 10-3-10-7 М раствора соответствующего ФНК длиной 10-1500 звеньев с соотношением 5-100 нмоль ФНК на 1 мг Si и инкубируют в 0.1-0.2М растворе NaCl, при комнатной температуре в течение 20-30 минут. ФНК количественно связываются с Si~NH2 за счет сильного электростатического взаимодействия положительно заряженных аминогрупп и отрицательно заряженных межнуклеотидных фосфатных групп олигонуклеотида. Получают систему доставки ФНК в клетки, представляющую собой нанокомпозит Si~NH2⋅ФНК с размером частиц от 1 до 8 нм (по данным атомной силовой микроскопии) с концентрацией 0.25-1 мг/мл по Si и с емкостью по ФНК, составляющей 10-100 нмоль/мг. Длительность способа получения системы доставки ФНК составляет не более 0.5 часа, а с учетом приготовления основы для доставки (Si~NH2) - не более 20 часов.

Получаемая заявляемым способом система доставки ФНК в клетки представляет собой растворимый нанокомпозит, состоящий из аминосиланола, с аминогруппами которого электростатически связаны ФНК, способные проникать в эукариотические клетки предположительно путем обычного эндоцитоза, без использования дополнительных внешних методов трансфекции, и направленно воздействовать на внутриклеточный генетический материал и подавлять его дальнейшее функционирование.

Определяющими отличительными признаками предлагаемого способа от прототипа являются:

1) В качестве основы для доставки ФНК в клетки используют аминозамещенный силанол (Si~NH2) в концентрации 1-4 мг Si/мл, который получают гидролизом в воде аминопропилтриэтоксисилана при рН 10-11 и температуре 20-70°С с последующей нейтрализацией до рН 8-9, что позволяет упростить способ и сократить его длительность за счет сокращения стадий, удешевить за счет исключения дорогого препарата полилизина и обеспечить получение растворимого препарата, что является преимуществом для использования в медицинской практике.

2) Последующую иммобилизацию ФНК на Si~NH2 осуществляют путем добавления рассчитанного количества 10-3-10-7М раствора соответствующего ФНК к прозрачному раствору Si~NH2 с концентрацией 1-4 мг/мл в пересчете на Si в 0.1-0.2 М NaCl при рН 8-9 и перемешивания при комнатной температуре в течение 20-30 минут, что обеспечивает прочное связывание ФНК с Si~NH2 за счет электростатического взаимодействия отрицательно заряженных фосфатных групп ФНК с положительно заряженными аминогруппами.

Заявляемый способ обеспечивает получение нанокомпозита с практически такой же емкостью по ФНК, как и известный способ (прототип), и высокой прочностью связывания ФНК с Si~NH2, основанной на сильном электростатическом взаимодействии фосфатных групп с аминогруппами. Предлагаемый способ, как и известный способ (прототип), обеспечивает возможность присоединять к Si~NH2 любые ФНК и их аналоги, содержащие отрицательные заряды на межнуклеотидных фосфатных группах. Предлагаемый способ, как и известный способ (прототип), обеспечивает высокую противовирусную активность получаемых препаратов в отношении вируса гриппа А. Кроме этого, предлагаемый способ обеспечивает возможность получения прозрачных растворов нанокомпозитов, не содержащих агрегированных наночастиц, склонных к осаждению.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.

Пример 1. Получение Si~NH2.

К 120 мл нагретой на водяной бане до 70°С дистиллированной воде по каплям добавляют 4 г 3-аминопропилтриэтоксисилана (508 мг по Si) до рН 10 и перемешивают при этой температуре 8 ч. Концентрация продукта составляет 4.2 мг Si/мл. По данным титрования продукта мольное соотношение NH2/Si в образце составляет 1:1. После охлаждения до комнатной температуры к раствору добавляют 0.5% раствор уксусную кислоту до рН 8. Концентрация наночастиц Si~NH2 после нейтрализации составляет 4 мг Si/мл. По данным титрования продукта мольное соотношение NH2/Si после нейтрализации составляет 0.5. Размер наночастиц - 1-8 нм по данным атомной силовой микроскопии.

Пример 2. Получение Si~NH2.

Способ осуществляют аналогично примеру 1, за исключением того, что гидролиз 3-аминопропилтриэтоксисилана проводят при 20°С и рН 11 и перемешивают при этой температуре 15 ч. После гидролиза раствор нейтрализуют 1%-ный раствор уксусной кислотой до значений рН 9.

Пример 3. Получение Si~NH2.

Способ осуществляют аналогично примеру 1, за исключением того, что в реакции гидролиза используют 127 мг 3-аминопропилтриэтоксисилана (в пересчете на Si). Концентрация продукта после нейтрализации составляет 1 мг Si/мл.

Пример 4. Получение композита Si~NH2⋅oligo1

К 25 мкл Si~NH2, полученному по примеру 1, добавляют 65 мкл 0.16 М NaCl и 10 мкл 10-3 М (10 нмоль) раствора 10-звенного олигонуклеотида d(5'CATCCAGGATp)* (oligo1). Реакционную смесь инкубируют при комнатной температуре в течение 30 минут. Получают продукт Si~NH2⋅oligo1 с концентрацией 1 мг/мл (по Si) и емкостью по олигонуклеотиду 100 нмоль/мг Si.

Пример 5. Получение композитов Si~NH2⋅oligo2 и Si~NH2⋅oligo3.

Способ осуществляют аналогично примеру 4, кроме того, что в качестве олигонуклеотидов используют 10-4 М растворы 21-звенных олигодезоксирибонуклеотидов d(5'GCAAAAGCAGGGTAGATAATCp) (oligo2) или d(5'GATCAACTCCATATGCCATGTp) (oligo3) (по 25 мкл, 2.5 нмоль), и реакцию проводят в 0.2 М NaCl, для чего в реакционную смесь добавляют 50 мкл 0.4 М NaCl. Получают композиты Si~NH2⋅oligo2 и Si~NH2⋅oligo3 с концентрацией 1 мг/мл (по Si) и с емкостью по олигонуклеотиду 25 нмоль/мг Si.

Пример 6. Получение композита Si~NH2⋅oligo4 и Si~NH2⋅oligo5.

Способ аналогичен примеру 5, отличается тем, что в качестве олигонуклеотида используют 50 мкл 10-4 М (5 нмоль) раствора 30-звенного олигорибонуклеотида 5'CUGCUGUACAUGGCACAUGGAAUUGAUUA (oligo4) или 50 мкл 10-4 М раствора 16-звенного аналога олигодезоксирибонуклеотида dps(5'CCGTCGGTACCGGCCG) (oligo5), содержащего межнуклеотидные тиофосфатные группы (ps), и реакцию проводят в 0.1 М NaCl, для чего в реакционную смесь добавляют 25 мкл 0.4 М NaCl. Получают нанокомпозиты Si~NH2⋅oligo4 и Si~NH2⋅oligo5 с концентрацией 1 мг/мл (по Si) и с емкостью по олигонуклеотидам 50 нмоль/мг Si.

Пример 7. Получение композита Si~NH2⋅oligo5.

Способ аналогичен примеру 4, отличается тем, что в качестве олигонуклеотида используют 50 мкл 1500-звенного фрагмента ДНК (oligo5) с концентрацией 2⋅10-7 М (1⋅10-2 нмоль), 2 мкл Si~NH2, полученного по примеру 3 и 48 мкл 0.4 М NaCl. Получают нанокомпозит Si~NH2⋅oligo5 с концентрацией 0.02 мг/мл (по Si) и с емкостью по олигонуклеотиду 5 нмоль/мг Si.

Пример 8. Оценка способности нанокомпозита Si~NH2⋅ФНК проникать в клетки.

В эксперименте используют клетки линий HeLa и MDCK (полученные из коллекции культур клеток ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор», п. Кольцово, Новосибирская обл.), красители для окрашивания клеточных ядер и мембран (DAPI и Cell Mask Plasma Membrane Stain) и питательную среду для клеток DMEM, эмбриональную телячью сыворотку (ЭТС), антибиотики, буфер PBS (Invitrogen, США). Для приготовления образцов для конфокальной микроскопии клетки культивируют в полной среде DMEM в 8-луночных камерах до достижения 70% монослоя, после этого полную среду заменяют на среду без сыворотки, стрептомицина и пенициллина (160 мкл). Затем добавляют исследуемый нанокомпозит SiO2 Si~NH2⋅oligo2(Flu), полученный, как описано в примере 5 с использованием олигонуклеотида, меченного флуоресцеином (40 мкл в лунку) до конечной концентрации 0.01 мг/мл по Si и 0.25 нмоль/мл по олигонуклеотиду. После 24-ч инкубации клетки отмывают буфером PBS, фиксируют и окрашивают красителями (DAPI для ядер, и Cell Mask Plasma Membrane Stain для клеточных мембран) в течение 10 мин. Препараты анализируют с помощью конфокального лазерного сканирующего микроскопа LSM 510 UV MetaMicroscope (Carl Zeiss, Inc.). На фиг. 1 представлены изображения клеток HeLa (А) и MDCK (Б) (а - ядра, б - границы клеток и внутриклеточные актиновые филаменты, в - флуоресцеин-меченные нанокомпозиты). Видно, что в случае обоих типов клеток (HeLa и MDCK) нанокомпозит Sid Si~NH2⋅oligo2(Flu) обнаруживается внутри клеток.

Пример 9. Оценка цитотоксичности нанокомпозитов.

Для тестирования цитотоксичности препаратов используют перевиваемую культуру клеток MDCK, полученную из коллекции культур клеток ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор». По 100 мкл суспензии клеток MDCK с концентрацией 100 000 кл./мл в среде RPMI-1640, содержащей 5% сыворотки крови плодов коровы, вносят в 96-луночные планшеты 12-канальной автоматической пипеткой. Планшеты с клетками помещают в термостат при температуре 37°С, 5% СО2 и 100% влажности на 2 сут до образования клеточного монослоя.

Для определения токсических концентраций образец разбавляют в несколько раз (в 2, 4, 8, 16, 20 раз, 32, 64 раза) средой RPMI-1640, содержащей 5% сыворотки крови плодов коровы. Образец после каждого разведения вносят на монослой клеток MDCK в 4-х лунках по 100 мкл/лунку планшета и оставляют в термостате при температуре 37°С, 5% СО2 и 100% влажности. Токсическое действие образца на монослой клеток MDCK оценивают через 2 суток по соотношению живых и мертвых клеток с помощью инвертированного микроскопа.

Эксперименты повторены 2-3 раза. Результаты представлены на фиг. 2, где квадраты - Si~NH2, треугольники - Si~NH2⋅oligo2. Из фиг. 2 видно, что выживаемость клеток примерно одинакова для исследуемых образцов, и величина ТС50 (концентрация препарата, при которой гибнет 50% клеток) составляет ~0.65 мг/мл в пересчете на Si.

Пример 10. Исследование противовирусной активности нанокомпозитов.

В экспериментах используют вирус гриппа A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) с исходным титром 106,5 ТЦД50/мл. Исследуют противовирусные свойства композитов Si~NH2⋅oligo2 и Si~NH2⋅oligo3, полученных как описано в примере 5, контрольного образца Si~NH2, полученного как в примере 1, а также образца TiO2-PL⋅oligo2, полученного известным способом (прототип). В качестве олигонуклеотидной части нанокомпозитов используют олигонуклеотиды: oligo2, комплементарный 3'-концу вирусной (-)РНК и имеющий выраженные противовирусные свойства по отношению к вирусу гриппа A H5N1, и oligo3, имеющий случайную последовательность той же длины.

Противовирусные свойства нанокомпозитов исследованы на культуре клеток MDCK. Используют среду DMEM с добавлением 2% FBS, глютамина и антибиотиков. Клетки культивируют, как описано в примере 13. Препараты разводят средой RPMI-1640, содержащей 2 мкг/мл трипсина, и вносят на монослой отмытых от сыворотки клеток MDCK в объеме 50 мкл на лунку 96-луночного планшета из расчета 0.1 мкМ по олигонуклеотиду (4 мкг/мл по Si) в конечной реакционной смеси. Концентрация препарата примерно в 150 раз меньше значения ТС50 (фиг. 2), т.е. используется нетоксическая концентрация. Реакционные смеси инкубируют при 37°С и 100% влажности в СО2-инкубаторе в течение 1 ч. Затем вносят вирус A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) в разведениях на среде RPMI-1640, содержащей 2 мкг/мл трипсина, от -1 до -8 с десятикратным шагом в объеме 50 мкл/лунку. В качестве контроля используют вирус A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) без добавления исследуемых препаратов. Инкубируют в течение 2 суток в CO2-термостате при 37°С и 100% влажности; определяют наличие вируса визуально под микроскопом по ЦПД и в РГА с 1% эритроцитами петуха. Все препараты были проверены на противовирусную активность при n=6.

На фиг. 3 приведены значения титра вируса (в единицах log ТЦД50/мл) в клетках МДСК, зараженных вирусом и обработанных исследуемыми препаратами. Из фиг. 3 следует, что контрольные образцы Si~NН2 (исходный силанол) и Si~NH2⋅oligo3 (содержащий случайную нуклеотидную последовательность, не комплементарную вирусной РНК) не проявляют заметной противовирусной активности, т.е. не происходит достоверно значимого снижения титра вируса в клетках. Образец Si~NH2⋅oligo2 обладает высокой противовируной активностью, которая даже несколько превосходит таковую для образца TiO2-PL⋅oligo2, полученного известным способом (прототип): разница между значениями титра вируса в контроле и опытах с соответствующими образцами составляет 3.2 log и 2.6 log, что соответствует подавлению репродукции вируса в 1000 и 400 раз соответственно.

Предлагаемый способ позволяет существенно упростить и сократить длительность, а также расширить функциональные возможности известного способа (прототипа) и обеспечить получение нанокомпозитов, представляющих собой систему доставки фрагментов нуклеиновых кислот и их аналогов в клетки млекопитающих. При этом получаемые заявляемым способом нанокомпозиты обладают свойствами, подобными нанокомпозитам, получаемым известным способом, а именно: такой же емкостью по ФНК, в частности олигодезоксирибонуклеотиду, высокой прочностью связывания олигонуклеотида с основой, способностью проникать через клеточную мембрану, низкой цитотоксичностью и специфической противовирусной активностью по отношению к вирусу гриппа А.

Способ получения системы доставки фрагментов нуклеиновых кислот (ФНК) в клетки млекопитающих, включающий синтез основы для доставки ФНК в клетки и иммобилизацию ФНК на основу, отличающийся тем, что в качестве основы используют аминозамещенный силанол (Si~NH2) в концентрации 1-4 мг Si/мл, который получают гидролизом в воде аминопропилтриэтоксисилана при рН 10-11 и температуре 20-70°С с последующей нейтрализацией силанола 0,5-1%-ным раствором уксусной кислоты до рН 8-9, далее к полученному раствору Si~NH2 добавляют рассчитанное количество 10-3-10-7 М раствора соответствующего ФНК в соотношении 5-100 нмоль ФНК на 1 мг Si и инкубируют в 0,1-0,2 М растворе NaCl при комнатной температуре в течение 20-30 мин.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой гепатопротекторную инъекционную фармацевтическую композицию на основе силимарина и наночастиц селена, включающую силимарин, дистиллированную воду, отличающуюся тем, что дополнительно содержит наночастицы селена, восстановленные из селенистой кислоты с образованием коллоидного селена, при этом в качестве восстановителя для коллоидного селена используют цистеин, или аскорбиновую кислоту, или тиосульфат натрия, или меркаптоэтанол, кроме того, содержит в качестве стабилизатора pH гидроксид натрия, или гидроксид калия, или аргинин, кроме того, содержит стабилизатор для силимарина, в качестве которого используют янтарную, или фумаровую, или яблочную, или лимонную, или щавелевую кислоту.

Группа изобретений относится к области фармакологии и медицины и касается жидкой композиции, содержащей комбинацию длительно действующего инсулина в форме, в которой инсулин связан с Fc-областью иммуноглобулина и инсулинотропного пептида, который находится в форме, в которой пептид связан с Fc-областью иммуноглобулина.

Группа изобретений относится к вдыхаемым сухим порошкам, которые используются для лечения или профилактики респираторных заболеваний. Раскрыты сухие порошки для лечения респираторных заболеваний, состоящие из вдыхаемых сухих частиц, включающих соли одновалентных металлов в количестве по меньшей мере 3 % от веса сухой частицы и фармацевтически активное вещество, представляющее собой антибиотик, LABA, LAMA, кортикостероид или их комбинацию.

Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к мгновенно флотирующей гастроретентивной готовой форме, представленной в виде таблетки, мини-таблетки, гранулы, капсулы или пеллеты и содержащей фармацевтически активный ингредиент, рецептурную добавку и функционализированный натуральный и/или синтетический карбонат кальция, который имеет БЭТ специфическую площадь поверхности 5-200 м2/г и является продуктом реакции натурального или синтетического карбоната кальция с фармацевтически приемлемой кислотой и диоксидом углерода, образующимся посредством кислотной обработки и/или подающимся из внешнего источника, где источник натурального карбоната кальция выбирается из мрамора, кальцита, мела, известняка, доломита и/или их смесей, а синтетическим карбонатом кальция является осажденный карбонат кальция, содержащий арагонитовую, ватеритовую или кальцитовую минералогические кристаллические формы; а также к способу ее изготовления и к применению функционализированного натурального и/или синтетического карбоната кальция для ее получения.

Изобретение относится к области дерматологии и представляет собой дерматологическое репаративное средство, содержащее зостерин, редкосшитые акриловые полимеры, представляющие собой эфир гомополимеров акриловой кислоты, поперечно-сшитых аллилсахарозой, аллилпентаэритритом или дивинилгликолем, консерванты, едкий натр и воду дистиллированную, причем компоненты в средстве находятся в определенном соотношении в мас.%.

Группа изобретений относится к области фармацевтики, а именно к фармацевтической композиции для предупреждения и лечения полинейропатии в виде твердой лекарственной формы пролонгированного высвобождения, включающей в качестве активного агента Биотин – 40-60 мас.%, а в качестве вспомогательных веществ: Метоцел К100 LV – 14-21 мас.%, Метоцел К4М – 5-10 мас.%, микрокристаллическую целлюлозу (МКЦ) – 7-18 мас.%, коповидон – 1,5-3 мас.%, коллоидный диоксид кремния – 0,4-1 мас.% и фармацевтически приемлемую соль стеариновой кислоты – 0,6-1 мас.%, а также к способу ее получения, согласно которому Биотин, Метоцел К4М, Метоцел К100 LV, МКЦ и коповидон просеивают и перемешивают до однородности, добавляют соль стеариновой кислоты, коллоидный диоксид кремния, перемешивают, смесь уплотняют вальцеванием, добавляют коллоидный диоксид кремния и перемешивают вместе с предварительно уплотненными гранулами с последующим добавлением соли стеариновой кислоты, перемешиванием и формованием твердой лекарственной формы.

Изобретение относится к области дерматологии и представляет собой способ лечения воспалительных повреждений при розацеа у нуждающегося в этом индивидуума, включающий местное введение один раз в сутки на область кожи, затронутую воспалительными повреждениями при розацеа, фармацевтической композиции, содержащей от 0,5% до 1,5% по массе ивермектина и фармацевтически приемлемый носитель, где уже через 2 недели после исходного введения фармацевтической композиции наблюдают значительное снижение количества воспалительных повреждений.

Изобретение относится к твердой дисперсии, пригодной для индукции апоптоза. Дисперсия включает соединение Формулы I где значение групп R0, R1, R2, R3, R4, A, В, R5, X, Y и R6 определено в формуле изобретения, или его фармацевтически приемлемую соль.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой способ лечения папулопустулезной розацеа у нуждающегося в этом индивидуума, включающий местное нанесение один раз в сутки на область кожи, пораженную папулопустулезной розацеа, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей ивермектин и фармацевтически приемлемый носитель, где лечение приводит к значительному снижению числа воспалительных очагов у индивидуума уже через 2 недели после первичного нанесения фармацевтической композиции.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается технологии изготовления лекарственного средства для регуляции метаболических процессов, связанных с дефицитом калия и магния в организме.

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для консервативного лечения адаптированных проникающих ранений роговицы.

Изобретение относится к соединению формулы (I) и его вариантам, которые могут использоваться в качестве фармацевтических агентов, а также к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, которые могут быть использованы для лечения или предотвращении мукозита или инфекции.

Изобретение относится к области медицины, в частности к фармакологии, и может быть использовано при разработке ранозаживляющих средств для лечения ран и ожогов. Предложено ранозаживляющее средство, включающее в качестве активного компонента окисленный декстран, в качестве вспомогательных компонентов для симптоматической терапии оно содержит лидокаина гидрохлорид и хлоргексидина биглюконат, а также фармацевтически приемлемый наполнитель.

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой готовую к использованию антимикробную композицию, включающую пенетамат (PNT) или его фармацевтический эквивалент и по меньшей мере один масляный носитель, незагущающее, препятствующее слеживанию средство, где композиция составлена таким образом, что вязкость композиции составляет ниже 3000 мПа·с при температуре 20°С, и способ ее изготовления.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой фармацевтическую композицию, обладающую противовоспалительной и антибактериальной активностью, заживлением ран, активностью восстановления суставов и усилением активности противоопухолевых лекарственных средств, содержащую эффективное количество несульфатированного хондроитина в качестве активного ингредиента.

Группа изобретений относится к фармацевтике, в частности, к средствам для лечения местных радиационных поражений кожи липосомами, содержащими альфа-фетопротеин человека.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к терапевтической фосфолипидной композиции для лечения или профилактики кардиометабилических расстройств, метаболического синдрома, нейродегенеративных расстройств, содержащей концентрированный терапевтический фосфолипидный экстракт, включающий соединения Формулы I, где общее количество фосфолипидных соединений Формулы I из экстракта находится в концентрации от 60 масс.% до 90 масс.% от общей массы композиции и экстракт включает астаксантин; к капсуле, содержащей концентрированный терапевтический экстракт масла криля, который содержит фосфолипидные соединения Формулы I, и экстракт включает астаксантин; к использованию композиции, которая включает концентрированный терапевтический фосфолипидный экстракт, содержащий соединения Формулы I, для получения терапевтических композиций для снижения уровня триглицеридов в сыворотке крови; к использованию концентрированного терапевтического фосфолипидного экстракта, который содержит соединения Формулы I, для получения фармацевтических композиций для лечения сердечнососудистых заболеваний.

Изобретение относится к применению пробиотического бактериального штамма Lactobacillus reuteri DSM 17938 и/или Bifidobacterium longum АТСС BAA-999 в производстве питательной композиции для субъекта.

Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для лечения бактериальной инфекции у животного. Для этого вводят инъецируемую ветеринарную композицию, содержащую хинолон и цефалоспорин или их фармацевтически приемлемые соли с пропиленгликоля дикаприлокапратом и/или глицерилкаприлокапратом в масляной суспензии.

Группа изобретений относится к области фармацевтики, а именно к пероральной пленкообразующей основе, включающей пищевой полимер, растворимый и в воде, и в органическом растворителе, имеющем параметр растворимости, равный от 9,7 до 20 (кал/см3)1/2, пенообразующее средство, выбранное из гидрокарбонатов натрия, или аммония, или карбонатов натрия, магния, аммония, калия или кальция, и вспомогательное пенообразующее средство, вспенивающееся в присутствии воды и выбранное из L-аскорбиновой кислоты, L-битартрата калия, дигидропирофосфата кальция, дигидропирофосфата динатрия, галактуроновой кислоты, глюкуроновой кислоты, фумарата мононатрия, сульфата алюминия-калия, DL-малата натрия, дигидрофосфата натрия, гидрофосфата дикалия, дигидрофосфата натрия и гидрофосфата динатрия, причем и пенообразующее средство, и вспомогательное пенообразующее средство нерастворимо в указанном органическом растворителе и включено в виде частиц со средним размером от 0,1 до 60 мкм, а также к препарату, включающему лекарственное средство в указанной основе, и к способам их получения.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для лечения предраковых и ранних стадий раковых заболеваний желудка. Сущность предлагаемого способа лечения заключается в поэтапном комбинированном лечении: первый этап лечения включает принятие Кларитромицина 500 мг, Метронидазола 250 мг с добавлением Де-Нол 120 мг, в случае без эффекта эрадикации хеликобактер назначают иной антибактериальный препарат из пенициллинового ряда, одновременно при дуоденогастральном рефлюксе назначают антирефлюксные препараты: Церукал 0,5% 2,0 мл или Домперидон 0,01 г. При диагностике предраковых заболеваний, в том случае если выявляется дрожжеподобный мицелий, назначаются противогрибковые препараты, также обязательно вместе с антибактериальными препаратами назначают настой из травы «Чистотел большой»; второй этап лечения включает применение настойки из травы «Каллизия фрагранс»; третий этап включает применение настоя из травы «Чистотел большой»; четвертый этап лечения включает применение настойки из травы «Каллизия фрагранс». Способ лечения обеспечивает уменьшение в количественном отношении полипов желудка, уменьшение размеров или полную регрессию полиповидных образований. 5 пр.

Изобретение относится к области молекулярной биологии, биоорганической химии и медицины. Предложен способ получения системы доставки фрагментов нуклеиновых кислот в клетки млекопитающих. Осуществляют синтез основы для доставки ФНК. В качестве основы используют аминозамещенный силанол в концентрации 1-4 мг Siмл. Si~NH2 получают гидролизом в воде аминопропилтриэтоксисилана при рН 10-11 и температуре 20-70°С с последующей нейтрализацией силанола 0,5-1-ным раствором уксусной кислоты до рН 8-9. К полученному раствору Si~NH2 добавляют рассчитанное количество 10-3-10-7 М раствора соответствующего ФНК в соотношении 5-100 нмоль ФНК на 1 мг Si и инкубируют в 0,1-0,2 М растворе NaCl при комнатной температуре в течение 20-30 мин. Получают систему доставки ФНК в клетки, представляющую собой композит Si~NH2⋅ФHK с емкостью по ФНК 10-100 нмольмг Si, обладающий высокой прочностью связывания олигонуклеотида с основой, способностью проникать через клеточную мембрану и низкой цитотоксичностью. 3 ил., 10 пр.

Наверх