Способ прогнозирования прогресса папилломавирусной инфекции у пациенток с хроническим рецидивирующим впч - ассоциированным цервицитом

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано в гинекологических стационарах и амбулаторных условиях женских консультаций и поликлиник для прогнозирования прогресса папилломавирусной инфекции у пациенток с хроническим рецидивирующим ВПЧ-ассоциированным цервицитом. Сущность изобретения: у пациентки определяют генотипы полиморфизмов Ser249Pro в гене TLR6 и Pro72Arg в гене ТР53 и при выявлении у пациентки аллеля Ser в гене TLR6 и гомозиготного генотипа Pro/Pro или Arg/Arg в гене ТР53 прогнозируют низкий риск прогрессирования ПВИ; при выявлении у пациентки мутации Pro/Pro в гене TLR6 либо гетерозиготного генотипа Pro/Arg в гене ТР53 прогнозируют средний риск прогрессирования ПВИ; при определении у пациентки мутации Pro/Pro в гене TLR6 и гетерозиготного генотипа Pro/Arg в гене ТР53 прогнозируют высокий риск прогрессирования ПВИ. Изобретение обеспечивает возможность осуществления с высокой степенью достоверности прогнозирования прогресса ПВИ у пациенток с ВПЧ-ассоциированным цервицитом, что позволит выбрать правильную тактику ведения. 5 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано в гинекологических стационарах и амбулаторных условиях женских консультаций и поликлиник для прогнозирования прогресса папилломавирусной инфекции у пациенток с хроническим рецидивирующим ВПЧ-ассоциированным цервицитом.

Цель изобретения - повышение точности прогнозирования прогресса ПВИ у пациенток с ВПЧ-ассоциированным цервицитом, что позволит выбрать правильную тактику ведения.

Актуальность разработанного способа определяется высокой частотой заболеваний шейки матки, ассоциированных с папилломавирусной инфекцией (ПВИ), поскольку характеризуются выраженной контагиозностью и высоким онкогенным потенциалом вируса [Хронический цервицит и ВПЧ-инфекция в репродуктивном возрасте. Пути снижения диагностической и лечебной агрессии / Т.С. Качалина, Н.М. Шахова, О.В. Качалина и др. // Акушерство, гинекология и репродукция. - 2012. - №4. - С. 6-12]. В настоящее время длительная персистенция вируса папилломы человека (ВПЧ) рассматривается как этиологический фактор дисплазии шейки матки, с высоким риском последующего озлокачествления, что неоднократно подтверждено работами отечественных и зарубежных исследователей [Хронический цервицит и ВПЧ-инфекция в репродуктивном возрасте. Пути снижения диагностической и лечебной агрессии / Т.С. Качалина, Н.М. Шахова, О.В. Качалина и др. // Акушерство, гинекология и репродукция. - 2012. - №4. - С. 6-12; Nagai Y. Persistence of human papillomavirus infection after therapeutic conization for CIN 3: is it an alarm for disease recurrence? / Y. Nagai, T. Maehama, T. Asato, K. Kanazawa // Gynecol Oncol. - 2000. - Vol. 79, N 2. - P. 294-299]. По результатам отечественных исследований среднее время элиминации ВПЧ в возрасте 18-25 лет составляет от 1,5 до 2 лет у каждой второй пациентки. Актуальность проблемы объясняется существенным «омоложением»: каждый пятый рак диагностируется в возрастной группе от 15 до 39 лет, а 42,4% выявленных CIN II-CIN III - до 35 лет [Бычкова, О.С. Современные представления о папилломавирусной инфекции у детей и подростков: эпидемиология, этиология и патогенез (обзор литературы) [Текст] / О.С. Бычкова В.Ф. Коколина // Репродуктивное здоровье детей и подростков. - 2010. - №1. - С. 43-49]. Одним из ключевых звеньев патогенеза хронизации процесса является нарушение соотношения про- и противовоспалительных цитокинов. Нарушение иммунологического равновесия ведет к запуску самоподдерживающегося вялотекущего воспалительного процесса, развитию вторичного иммунодефицитного состояния. В настоящее время в клинических исследованиях изучение цитокинов используют как достоверный диагностический инструмент прогнозирования течения и исхода инфекционного процесса. В то же время активация или угнетение цитокинов зависит от функционирования врожденного иммунитета, за который отвечают TLR. Одним из современных направлений развития диагностики предраковых и онкологических заболеваний стало определение в сыворотке крови онкомаркеров при помощи иммуноферментного анализа. В настоящее время для оценки распространенности опухолевого процесса и динамики его течения активно используется уровень экспрессии онкосупрессора р53, активно участвующего в апоптозе и онкомаркера p16INK4α, выявляемого практически в 100% случаев при раке шейки матки [Кондриков Н.И. Значение иммуногистохимического определения биомаркеров плоскоклеточных интраэпителиальных поражений шейки матки // Акушерство и гинекология. - 2010. - с. 44-47].

Известны следующие способы прогнозирования прогрессирования ПВИ:

1. Способ прогнозирования рака шейки матки при доброкачественных и предраковых процессах шейки матки у женщин репродуктивного возраста. Данный способ включает в себя определение клинических факторов риска развития рака шейки матки, метилирования генов MLH1, HIC1, RASSF1A, MGMT, N33, CDH1 в биоптате шейки матки и расчет коэффициента вероятности развития рака шейки матки p, где:

p - коэффициент вероятности риска развития рака шейки матки;

e - основание натурального логарифма, равное 2,71828182845904;

z=2,4274+2,2163*X1+0,3791*X1+0,528*X3+1,1373*X4+1,2187*X5+2,1587*X6+26,5802*X7+1,3323*Х8+1,9323*Х9+1,8596*Х10+1,6689*Х11+1,2123*Х12+1,0690*Х13;

X1 - морфотип (доброкачественные процессы - 1, CIN I - 2, CIN II - 3, CIN III - 4),

Х2 - метилирование MLH1 (значения: есть - 1, нет - 0),

Х3 - метилирование MGMT (значения: есть - 1, нет - 0),

Х4 - метилирование N33 (значения: есть - 1, нет - 0),

Х5 - метилирование RASSF1 (значения: есть - 1, нет - 0),

Х6 - метилирование HIC1 (значения: есть - 1, нет - 0),

Х7 - метилирование CDH1 (значения: есть - 1, нет - 0),

Х8 - ВПЧ высокого риска (значения: есть - 1, нет - 0),

Х9 - дисплазия шейки матки в анамнезе (значения: есть - 1, нет - 0),

X10 - эрозия шейки матки в анамнезе (значения: есть - 1, нет - 0),

X11 - травмы шейки матки после родов/абортов (значения: есть - 1, нет - 0),

X12 - ИППП (значения, есть - 1, нет - 0);

Х13 - отягощенная онкологическая наследственность (значения: есть - 1, нет - 0) и при величине р больше 0,6 прогнозируют высокую вероятность риска развития рака шейки матки, при р, равном 0,3-0,59, - умеренную вероятность, при р меньше 0,29 - низкую вероятность. На основании полученных данных можно определить 3 группы пациенток:

- с низкой вероятностью развития рака - р=0,0-0,29;

- с умеренной вероятностью развития рака - р=0,3-0,59;

- с высокой вероятностью развития рака - р=0,6-1,0.

В предлагаемой формуле должен указываться морфотип (доброкачественные процессы - 1, CIN I - 2, CIN II - 3, CIN III - 4), однако не всегда папилломавирусная инфекция на начальных этапах либо в случае рецидивирования после хирургического лечения имеет клинические проявления на шейке матки до CIN 1-3). Кроме того, данная формула достаточно загромождена переменными и трудна для восприятия практикующему врачу-гинекологу. Это является недостатками данного способа.

2. Способ прогнозирования варианта течения заболевания у больных с плоскоклеточными эпителиальными поражениями низкой степени на фоне папилломавирусной инфекции.

В заявленном способе используют последовательный анализ Вальда. Рассчитывают диагностический коэффициент ДК для каждого из признаков по формуле ДК=101g*(P1/P2), где Р1 - относительная частота признака при первом верифицируемом состоянии, выраженная в долях единицы; Р2 - относительная частота признака при втором верифицируемом состоянии. Учитывают такие признаки, как: вирусная нагрузка вируса папилломы человека (ВПЧ) 16, 18 типов; клинико-кольпоскопический индекс; иммуногистохимический индекс p16ink4α; возраст; начало половой жизни; интервал от менархе до сексуального дебюта. При сумме ДК менее минус 13 битов вероятность благоприятного исхода LSIL составляет 95%, при ДК от плюс 13 до плюс 19 битов вероятность перехода LSIL в плоскоклеточное интраэпителиальное поражение высокой степени (HSIL) составляет 95%, при ДК более плюс 20 битов - вероятность 99%. Способ позволяет прогнозировать вариант течения плоскоклеточного интраэпителиального поражения низкой степени на фоне папилломавирусной инфекции. Недостатком известного способа является ограниченность применения данного способа только для пациенток с диагностированной ЦИН низкой степени.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

На первом этапе в одноразовую пластиковую пробирку с 200 мкл раствора антикоагулянта (0,05М раствор ЭДТА) собиралось 2000 мкл венозной крови пациенток с ВПЧ-ассоциированным цервицитом. Затем в пробирку типа «Эппендорф» с замком вносилась цельная кровь в количестве 1000 мкл и центрифугировалась со скоростью 3000 об/мин на высокоскоростной центрифуге «MiniSpin» («Eppendorf», Германия) при комнатной температуре в течение 5 мин, плазма удалялась пипеткой и пробирка выдерживалась при -20°C в течение 1 часа. Содержимое полностью размораживалось при комнатной температуре, и в пробирку вносился реактив «ДНК-экспресс-кровь» в соотношении 500 мкл цельной крови к 500 мкл реактива. Полученная смесь тщательно перемешивалась на микроцетрифуге-вортексе «MicroSpin FV-2400» (Biosan, Латвия). Затем пробирка со смесью прогревалась при 99°C в течение 15 минут в твердотельном термостате «Гном» (НПФ «ДНК-технология», Россия). Полученный супернатант использовался в качестве исследуемого образца ДНК.

На втором этапе готовились рабочие смеси реагентов для амплификации с реакционной смесью НОРМА и ПАТОЛОГИЯ из расчета на 1 пробу: 17,5 мкл разбавителя, 2,5 мкл реакционной смеси, 0,2 мкл Taq-полимеразы. Пробирки центрифугировались в течение 3-5 секунд при 1500-3000 об/мин на микроцентрифуге-вортексе, затем переносились в прогретый до температуры +94°C программируемый термостат (амплификатор) «Терцик» (НПФ «ДНК-технология», Россия) с точным типом регулирования, и проводилась амплификация.

На конечном этапе проводилось разделение продуктов амплификации методом горизонтального электрофореза по следующей схеме:

1. В аппарат для электрофореза заливался ТАЕ буфер, приготовленный на дистиллированной воде разбавлением 50×ТАЕ в 50 раз (pH=8,3).

2. Готовилась 3% агароза из расчета на 1 гель: к 1,5 г агарозы добавить 1 мл 50×ТАЕ буфера и 55 мл дистиллированной воды (включен запас на испарение).

3. Приготовленная смесь расплавлялась на электрической плите на небольшой мощности. К 50 мл расплавленной агарозы добавлялось 5 мкл 1% раствора бромистого этидия.

4. Расплавленная агароза сразу же заливалась в планшет для заливки геля. Для получения в агарозном геле карманов для нанесения образцов устанавливалась на планшет гребенка, используя зажим типа «бульдог», после застывания геля зажим убирался.

5. В карманы геля наносилось по 10 мкл амплификата в последовательности, соответствующей нумерации проб.

6. Подключалась электрофоретическая камера к источнику питания и задавалось напряжение, соответствующее напряженности электрического поля 10-15 В/См геля. Проводилось электрофоретическое разделение продуктов амплификации в направлении от катода (-) к аноду (+) в течение 15 мин. Контроль за электрофоретическим разделением осуществлялся визуально по движению полосы красителя.

7. Гель из формы переносился на стекло УФ-трансиллюминатора и результаты анализировались визуально с защитным экраном и при помощи программы. Фрагменты анализируемой ДНК проявлялись в виде светящихся оранжево-красных полос под УФ-излучением с длиной волны 310 нм. Результаты интерпретировались в следующих вариантах: нормальная гомозигота, гетерозигота, мутантная гомозигота.

При выявлении у пациентки аллеля Ser в гене TLR6 и гомозиготного генотипа Pro/Pro или Arg/Arg в гене ТР53 прогнозируют низкий риск прогрессирования ПВИ; при выявлении у пациентки мутации Pro/Pro в гене TLR6 либо гетерозиготного генотипа Pro/Arg в гене ТР53 прогнозируют средний риск прогрессирования ПВИ; при определении у пациентки мутации Pro/Pro в гене TLR6 и гетерозиготного генотипа Pro/Arg в гене ТР53 прогнозируют высокий риск прогрессирования ПВИ.

Предлагаемый способ основан на следующем исследовании.

На первом этапе были обследованы 48 пациенток с ВПЧ-ассоциированным хроническим цервицитом и 24 женщины без патологии шейки матки. Пациентки с ВПЧ-ассоциированным цервицитом вошли в основную группу. Контрольную группу составили женщины без патологии шейки матки. Группы были идентичны по возрастному, соматическому и психологическому исходному состоянию.

Критерии включения: пациентки с ВПЧ-ассоциированным хроническим рецидивирующим цервицитом.

Критерии исключения: отсутствие ПВИ у пациентки, экстрагенитальная патология инфекционного генеза, РШМ, нежелание самой женщины.

В ходе исследования были изучены взаимосвязи точечных нуклеотидных мутаций промоторных участков генов большинства цитокинов и TLR. Определялись генетические полиморфизмы TLR: Мутация 1 толл-подобного рецептора 9, полиморфизма A2848G в гене TLR9, Мутация толл-подобного рецептора 2, полиморфизма Arg753Gln в гене TLR2, Мутация толл-подобного рецептора 3, полиморфизма Phe412Leu в гене TLR3, Мутация толл-подобного рецептора 4, полиморфизма Asp299Gly в гене TLR4, Мутация 2 толл-подобного рецептора 4 TLR4 Thr399lle (rs4986791), Мутация толл-подобного рецептора 6, полиморфизма Ser249Pro в гене TLR6, Мутация толл-подобного рецептора 9, полиморфизма Т-1237С в гене TLR9.

Определялась мутация белка р53 ТР53 (Pro47Ser) и мутация 2 белка р53 ТР53 (Pro72Arg).

Также изучались генетические полиморфизмы интерлейкинов: Мутация интерлейкина 2, полиморфизма T-330G в гене IL2, Мутация интерлейкина 6, полиморфизма C-174G в гене IL6, Мутация - 3 интерлейкина 10, полиморфизма С-819Т в гене IL10, Мутация интерлейкина 12В, полиморфизма А1188С в гене IL12B, Мутация интерлейкина 1b полиморфизма Т-31С в гене IL1b, Мутация 2 интерлейкина 1b IL1b Т-511С, Мутация интерлейкина 4 IL4 С-589Т, Мутация - 1 интерлейкина 10 IL10 G-1082А, Мутация интерлейкина 17А IL17A G-197A.

В ходе молекулярно-генетического исследования при сравнении частот встречаемости аллелей и генотипов полиморфных маркеров генов цитокинов у обследованных женщин групп не было выявлено статистически значимых отличий.

При сравнении частот встречаемости аллелей и генотипов полиморфных маркеров в гене ТР53 выявлена значительная вариабельность в генотипах гена Pro72Arg, при анализе полиморфизма Arg72Pro в гене ТР53 значимых различий не выявлено.

Частоты встречаемости аллелей и генотипов полиморфного маркера гена Pro72Arg в гене ТР53 выявило вариабельность в генотипах в группах сравнения, за счет гетерозиготного генотипа Pro/Arg, который встречался у пациенток с ВПЧ-ассоциированным цервицитом чаще в 2 раза (58,3% против 29,2% соответственно в контрольной группе) (p<0,01) (табл. 1).

При сравнении частот встречаемости аллелей и генотипов полиморфных маркеров TLR выявлена значительная вариабельность в генотипах гена TLR6. При сравнении частот встречаемости аллелей и генотипов полиморфных маркеров TLR выявлена значительная вариабельность в генотипах гена TLR6.

Частоты встречаемости аллелей и генотипов полиморфного маркера гена TLR6 распределились следующим образом: аллель Pro встречалась чаще у пациенток основной группы, чем в контрольной - 58,4% против 30,2%, а аллель Ser встречалась реже - в 41,6% и 69,8% случаях соответственно. Также отмечено значимое увеличение частоты мутантных гомозигот Pro/Pro у больных основной группы, что в 12,5 раза чаще, чем в контрольной - 50% против 4,1% (p<0,01). У каждой второй обследованной пациентки была определена гомозигота Pro/Pro. Количество гетерозигот Ser/Pro значимо различалось, за счет повышения генотипа Pro/Pro у пациенток основной группы. Частота встречаемости нормальной гомозиготы Ser/Ser не отличались - 33,3% против 50,0%. (табл. 2).

При дальнейшем анализе выявлена зависимость между наличием мутантной гомозиготы Pro/Pro TLR6 у больных основной группы и длительностью заболевания. Так, средняя продолжительность заболевания на момент обследования у женщин без мутации в гене TLR6 в основной группе составила - 2,5±1,2 года, а у пациенток, носительниц мутантной гомозиготы Pro/Pro гена TLR 6, - 3,9±1,01 год (p<0,01) (табл. 3).

После выявления значимых различий на основе молекулярно-генетического анализа группа с ВПЧ-ассоциированным хроническим рецидивирующим цервицитом была разделена на две клинические подгруппы: 1 и 2, в которых были проанализированы иммуногенетические особенности обследуемых. В подгруппу №1 вошло 30 пациенток с ВПЧ-ассоциированным хроническим рецидивирующим цервицитом с нарастанием количественной вирусной нагрузки ПВИ в динамике, в подгруппу №2 - 18 пациенток с ВПЧ-ассоциированным хроническим цервицитом с уменьшением вирусной количественной нагрузки в динамике. Для определения значимости различий исходов в зависимости от воздействия фактора риска и оценки силы связи между фактором риска и исходом использовались таблицы сопряженности (табл. 4, 5)

Таким образом, сила связи между наличием у пациенток с ВПЧ-ассоциированным хроническим рецидивирующим цервицитом гетерозиготного генотипа Pro/Arg в гене ТР53, мутантной гомозиготы Pro/Pro TLR6 и прогрессированием ПВИ определена как сильная (p<0,01).

Предлагаемый способ реализован в следующих клинических наблюдениях.

ПРИМЕР №1

Больная М.А., 29 лет, обратилась с жалобами на скудные выделения бело-желтого цвета из влагалища в течение 16 месяцев. Не замужем, незащищенные половые контакты в течение года отрицает. До обращения дважды с периодичностью 6 месяцев обнаружен ВПЧ 33 тип в количестве 3,8*106 и 2,4*106 копий/100 тыс. клеток. Прошла 2 курса противовирусной терапии по поводу вагинита и цервицита бактериально-вирусной этиологии. При осмотре шейки матки в зеркалах обнаружена гиперемия вокруг цервикального канала, выделения - бели умеренные. При бимануальном осмотре патологических изменений не выявлено. Кольпоскопически диагностирован хронический цервицит с признаками вирусного поражения (при проведении пробы Шиллера обнаружена йоднегативная зона с четкими контурами по передней губе). Бактериоскопически-промежуточный тип мазка на флору. В соскобе из цервикального канала методом ПЦР ДНК обнаружен ВПЧ 33 тип в количестве 2,5*103 копий/100 тыс. клеток. Пациентке выставлен диагноз. Хронический рецидивирующий ВПЧ-ассоциированный цервицит.

Проведено генотипирование полиморфизмов Ser249Pro в гене TLR6 и Pro72Arg в гене ТР53. Обнаружено, что пациентка имеет гомозиготный генотип Ser/Ser в гене TLR6 и гомозиготу Pro/Arg в гене ТР53.

Таким образом, прогнозируется низкий риск прогрессирования ПВИ, что подтверждается динамикой снижения количественной нагрузки ВПЧ 33 типа.

ПРИМЕР №2

Больная П.Ю., 37 лет, обратилась с жалобами на незначительные выделения молочного цвета из влагалища в течение 18 месяцев. Замужем, незащищенные половые контакты в течение года отрицает. До обращения 8 месяцев назад обнаружен ВПЧ 16 тип в количестве 2,9*103 копий/100 тыс. клеток. Прошла курс противовирусной терапии по поводу хронического цервицита бактериально-вирусной этиологии. При осмотре шейки матки в зеркалах выявлены гиперемия вокруг цервикального канала, выделения - бели умеренные. При бимануальном осмотре патологических изменений не выявлено. Кольпоскопически диагностирована эктопия шейки матки, осложненная хроническим цервицитом вирусной этиологии (при проведении пробы Шиллера обнаружена йоднегативная зона с четкими контурами в зоне трансформации). Бактериоскопически-промежуточный тип мазка на флору. В соскобе из цервикального канала методом ПЦР ДНК обнаружен ВПЧ 16 типа в количестве 4,3*103 копий/100 тыс. клеток. Пациентке выставлен диагноз: Хронический рецидивирующий ВПЧ-ассоциированный цервицит.

Проведено генотипирование полиморфизмов Ser249Pro в гене TLR6 и Pro72Arg в гене ТР53. У пациентки обнаружена мутантная гомозигота Pro/Pro в гене TLR6 и гомозигота Arg/Arg в гене ТР53. Следовательно, прогнозируется средний риск прогрессирования ПВИ, что доказывается отсутствием как регресса, так и прогресса после комплексной противовирусной терапии.

ПРИМЕР №3

Больная Е.В., 23 года, обратилась с целью профилактического осмотра. Периодически имеет жалобами на выделения желтого цвета из влагалища в течение длительного времени, усиливающиеся после менструации. Замужем, беременность - 1, роды - 1. В течение 30 месяцев трижды лечилась по поводу ПВИ. Обнаружен ВПЧ 39 и 51 типов в количестве 2,1*103 и 4,7*106 копий/100 тыс. клеток. Наблюдается с диагнозом: эктропион, осложненный ВПЧ-ассоциированным цервицитом. После отсутствия положительной динамики в консервативной терапии после родов была произведена химическая деструкция шейки матки на фоне противовирусной терапии. При объективном исследовании в зеркалах, на шейке матки деформирована, слегка гипертрофирована, выделения бели. При бимануальном осмотре патологических изменений не выявлено. При кольпоскопии выявлена рубцовая деформация шейки матки после химической деструкции. Хронический цервицит. LSIL (нежный ацетобелый эпителий, йоднегативная зона, уходящая в цервикальный канал). Бактериоскопически констатирован вагинит неспецифической этиологии. В соскобе из цервикального канала методом ПЦР ДНК 51 типа ВПЧ в количестве 5,9*108 копий/100 тыс. клеток. У пациентки при иммуногенетическом обследовании обнаружена мутация Pro/Pro в гене TLR6 и гетерозиготный генотип Pro/Arg в гене ТР53. Таким образом, прогнозируется высокий риск прогрессирования ПВИ, что подтверждается клиническими данными и нарастанием количества ВПЧ, несмотря на проведенные три курса противовирусной терапии и деструкцию шейки матки.

Таким образом, заявленный способ позволяет с высокой степенью достоверности прогнозировать прогресс ПВИ у пациенток хроническим, рецидивирующим, ВПЧ-ассоциированным цервицитом, что в дальнейшем поможет выбрать правильную тактику ведения таких пациенток.

Преимуществами заявляемого способа является:

1. Способ позволяет достоверно спрогнозировать прогресс ПВИ у пациенток хроническим, рецидивирующим, ВПЧ-ассоциированным цервицитом.

2. Способ является простым и доступным для практических врачей и может использоваться в амбулаторных условиях.

3. Способ не требует применения многочисленных дорогостоящих реактивов, оборудования и позволяет снизить материальные затраты при диагностике данной патологии, в связи с чем является более рациональным и экономически оправданным.

Способ прогнозирования прогресса папилломавирусной инфекции у пациенток с хроническим рецидивирующим ВПЧ-ассоциированным цервицитом, заключающийся в том, что у пациентки определяют генотипы полиморфизмов Ser249Pro в гене TLR6 и Pro72Arg в гене ТР53 и при выявлении у пациентки аллеля Ser в гене TLR6 и гомозиготного генотипа Pro/Pro или Arg/Arg в гене ТР53 прогнозируют низкий риск прогрессирования ПВИ; при выявлении у пациентки мутации Pro/Pro в гене TLR6 либо гетерозиготного генотипа Pro/Arg в гене ТР53 прогнозируют средний риск прогрессирования ПВИ; при определении у пациентки мутации Pro/Pro в гене TLR6 и гетерозиготного генотипа Pro/Arg в гене ТР53 прогнозируют высокий риск прогрессирования ПВИ.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для оценки состояния здоровья человека. В периферической крови обследуемого с помощью метода проточной цитофлюорометрии определяют процентное содержание Th17-лимфоцитов, а именно процент лимфоцитов с фенотипом CD3+CD4+CD161+CD45R0+ от гейта CD3+CD4+лимфоцитов.

Изобретение относится к области медицины, а именно к наркологическим и инфекционным болезням, и может быть использовано для диагностики абстинентного синдрома при опийной наркомании, сочетанной с ВИЧ-инфекцией.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования эндометриопатии, отличающийся тем, что в образце менструальной крови определяют концентрации интерлейкина-6 (ИЛ-6), глутатионпероксидазы-1 (ГТП 1) и растворимой формы Е-селектина и определяют коэффициент вероятности эндометриопатии (Р) по формуле: гдеа=0,0002782; b=0,0381529; с=-0,1205126; d=-1,1189533; e - экспонента (константа) = 2,7; X3 - значение концентрации ИЛ-6, пг/мл; Х2 - значение концентрации растворимой формулы Е селектина, нг/мл; X1 - значение концентрации ГТП 1, нг/мл; и при значении Рэ > 0,29 прогнозируют наличие эндометриопатии.
Изобретение относится к области медицины, педиатрии, инфекционным болезням и касается способа оценки эффективности терапии инфекции, вызванной вирусом герпеса человека 6 типа (ВГЧ-6), у детей.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для оценки нейропротекторных свойств веществ in vitro. Для этого используют дифференцированные в нейрональном направлении индуцированные плюрипотентные стволовые клетки человека путем репрограммирования фибробластов кожи человека в индуцированные плюрипотентные стволовые клетки.

Изобретение относится к биотехнологии. Конкретно, изобретение относится к предупреждению феномена усиления токсичности глазных инстилляций при совместном применении комбинации лекарственных препаратов.

Изобретение относится к медицине, а именно к ветеринарии, и может быть использовано для диагностики репродуктивного респираторного синдрома свиней. Для этого диагностику репродуктивного респираторного синдрома свиней проводят непрямым иммуногистохимическим анализом на основании моноклональных антител.
Изобретение относится к медицине, в частности, к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования возможной вакцинации против туберкулеза у новорожденных из групп высокого перинатального риска в роддоме.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и отоларингологии. Определяют антитела IgM и IgG к ВПГ- 1 типа, антитела IgM и IgG к ВПГ- 2 типа и антитела IgG к ЦМВ при индексе авидности антител IgG к ВПГ- 1 типа более 65% в сыворотке крови в баллах(А).

Данное изобретение относится к области иммунологии. Предложено изолированное антитело, которое обладает способностью специфично связываться с амилоидом бета (Аβ), а также антигенные циклические пептиды, способные вызывать специфический иммунный ответ против олигомерного Аβ.

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано для количественного определения серебряной соли сульфадимидина для стандартизации и контроля качества лекарственных средств. Для этого готовят контрольный водный раствор сульфадимидина. Оптическую плотность рабочего и контрольного образцов регистрируют спектрофотометрически при длине волны 242 нм. Расчет результатов проводят по удельному показателю поглощения с учетом молекулярных масс сульфадимидина и его серебряной соли. Изобретение обеспечивает унифицирование методики анализа в контрольно-аналитических лабораториях, результатов определения и уменьшение погрешности анализа. 2 табл., 1 ил., 1 пр.

Изобретение используется в патологической анатомии, эндокринологии, хирургии. Способ дифференциальной диагностики заболеваний щитовидной железы заключается в том, что проводят гистоэнзиматическое исследование фермента тиреопероксидазы (ТПО) в щитовидной железе и по активности ТПО диагностируют диффузный токсический зоб, многоузелковый токсический зоб, фолликулярную аденому в состоянии эутиреоза, аденокарциному. Целью изобретения является обеспечение достоверности полученных результатов при проведении дифференциальной диагностики заболеваний щитовидной железы. 4 пр., 2 ил.

Изобретение относится к медицине и касается способа выделения подклассов иммуноглобулина G (IgG) аутоантител к иммунорегуляторному цитокину фактору некроза опухоли (TNF), заключающегося в получении общей фракции IgG аффинной хроматографией с использованием сорбента Protein G Sepharose с последующей нейтрализацией, объединением и диализом IgG, очистке полученной фракции IgG от примеси TNF. При этом выделение подклассов IgG производят из фармацевтического препарата иммуноглобулина для внутривенного введения, после получения фракции IgG осуществляют ее очистку от примеси TNF ультрафильтрацией с использованием центрифужных фильтров, затем проводят этап выделения антител IgG3 и получения смеси IgG1, IgG2, IgG4 аффинной хроматографией; затем выделяют антитела IgG1 многократной негативной аффинной хроматографией с последующим объединением и диализом, затем выделяют антитела IgG2 многократной негативной аффинной хроматографией с последующим объединением и диализом, затем проводят очистку антител IgG1 и IgG2 от примеси IgG4 негативной аффинной хроматографией, после чего проводят выделение специфических аутоантител к TNF подклассов IgG1, IgG2, IgG3 аффинной хроматографией с последующей нейтрализацией, объединением и диализом. Изобретение обеспечивает получение чистых фракций аутоантител к TNF подклассов IgG1, IgG2 и IgG3. 1 пр., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано в клинической практике для оценки вероятности развития у пациента вариантов клещевых инфекций: безэритемной формы иксодового клещевого боррелиоза или сочетанного течения боррелиозно-энцефалитной инфекции Для этого определяют значения лабораторных показателей пациента в остром периоде заболевания (в сроки 10-14 дней от начала заболевания): доли CD4+, CD8+ лимфоцитов, абсолютное количество CD4+ лимфоцитов, уровни IgM, ИЛ-8, гамма-глобулинов, фагоцитарный индекс (ФИ), количество фагоцитирующих нейтрофилов (ФН), индекс Кердо; определяют значения лабораторных показателей пациента в периоде реконвалесценции (в сроки 21-25 дней от начала заболевания): долю CD3+ лимфоцитов, абсолютное количество CD8+ лимфоцитов, уровень IgM, индекс Кердо. В остром периоде заболевания оценивают значения лабораторных показателей пациента в баллах: долю CD4+ лимфоцитов при значениях ≤34,1% - 4 балла, долю CD8+ лимфоцитов при значениях ≤24,01% - 1 балл, абсолютное количество CD4+ лимфоцитов при значениях ≤678,07 мкл-1 - 3 балла, уровни IgM при значениях >7,66 г/л - 6 баллов, ИЛ-8 при значениях >97,4 пг/мл - 6 баллов, гамма-глобулинов при значениях ≤16,88% - 4 балла, показатели ФИ при значениях >35,6% - 1 балл, ФН при значениях >1892,68 мкл-1 - 1 балл, индекс Кердо при значениях ≤-7,14 - 4 балла; иные значения показателей оценивают как 0 баллов; подсчитывают сумму баллов; при сумме >11 баллов оценивают вероятность развития сочетанного течения боррелиозно-энцефалитной инфекции равной 82,25±0,06%; при сумме ≤11 баллов оценивают вероятность развития безэритемной формы иксодового клещевого боррелиоза равной 84,81±0,05%. В периоде реконвалесценции оценивают значения лабораторных показателей пациента острого периода заболевания в баллах: долю CD4+ лимфоцитов при значениях ≤34,1% - 4 балла, долю CD8+ лимфоцитов при значениях ≤24,01% - 1 балл, абсолютное количество CD4+ лимфоцитов при значениях ≤678,07 мкл-1 - 3 балла, уровни IgM при значениях >7,66 г/л - 6 баллов, ИЛ-8 при значениях >97,4 пг/мл - 6 баллов, гамма-глобулинов при значениях ≤16,88% - 4 балла; ФИ при значениях >35,6% - 1 балл, ФН при значениях >1892,68 мкл-1 - 1 балл, индекс Кердо при значениях ≤-7,14 - 4 балла; оценивают значения лабораторных показателей пациента периода реконвалесценции в баллах: долю CD3+ лимфоцитов при значениях ≤74,11% - 2 балла, абсолютное количество CD8+ лимфоцитов при значениях ≤480,45 мкл-1 - -1 балл, уровень IgM при значениях >1,59 г/л - 3 балла, индекс Кердо при значениях ≤-11,15 - 2 балла; иные значения показателей оценивают как 0 баллов. Подсчитывают сумму баллов; при сумме >14 баллов оценивают вероятность развития сочетанного течения боррелиозно-энцефалитной инфекции равной 88,53±0,05%; при сумме ≤14 баллов оценивают вероятность развития безэритемной формы иксодового клещевого боррелиоза равной 86,80±0,05%. Использование данного способа позволяет проводить дифференцированную диагностику безэритемной формы иксодового клещевого боррелиоза или сочетанного течения боррелиозно-энцефалитной инфекции. 6 табл., 2 ил.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для измерения активности клеточно-опосредованного иммунного ответа у субъекта. При этом проводят совместную инкубацию образца, включающего лимфоциты от субъекта, по меньшей мере, с двумя наборами пептидов, полученных из белкового антигена. Первый набор, распознающийся CD8+ лимфоцитами, содержит один пептид длиной от 7 до 14 аминокислотных остатков. Второй набор, распознающийся CD4+ лимфоцитами, содержит один пептид длиной от 16 аминокислотных остатков или больше. При этом пептиды охватывают весь указанный белковый антиген или его часть. Измеряют присутствие или повышение уровня иммунной эффекторной молекулы из эффекторных Т-клеток. Присутствие или уровень иммунной эффекторной молекулы для Т-клеток является показателем уровня клеточно-опосредованной отвечаемости субъекта. Также предложены применение и способ определения статуса активности клеточно-опосредованного иммунного ответа у субъекта. Группа изобретений позволяет измерить общий клеточно-опосредованный иммунный ответ от CD4+ и от CD8+ лимфоцитов, за счет повышения чувствительности и специфичности способа измерения. 3 н. и 21 з.п. ф-лы, 9 табл., 2 ил.,5 пр.

Изобретение относится к новым соединениям N,N'-диэтил-N,N'-ди(2-бром-4-R-фенил)амидам 2,2'-бипиридил-6,6'-дикарбоновой кислоты и 6,6'-диэтил-9,9'-диR-3,3'-дибензо[ƒ]-1,7-нафтиридин-5,5'(6H,6'H)-дионам формулы (1) и (2) соответственно: .Изобретение также относится к способу их получения. Технический результат – получены новые соединения, которые могут найти применение в качестве органических лигандов для комплексообразования с ионами f-элементов, что может быть использовано во времяразрешенном иммунофлуоресцентном и других видах флуоресцентного анализа. 4 н. и 1 з.п. ф-лы, 10 ил., 1 табл., 25 пр.

Группа изобретений относится к способу определения результата реакции агглютинации, а также к микропланшету и устройству, используемым при осуществлении указанного способа. Способ определения реакции агглютинации включает этап реакции пробы с реагентом в лунке микропланшета, этап центрифугирования микропланшета, причем на этапе центрифугирования агглютинированный материал пробы отделяют от неагглютинированного материала пробы посредством сепарирующего материала, этап получения по меньшей мере одного изображения верхней стороны микропланшета и по меньшей мере одного изображения нижней стороны микропланшета и этап определения, на котором определяют положительный или отрицательный статус пробы в отношении реакции агглютинации путем сравнения интенсивности цвета и/или уровня серого на изображениях верхней стороны и нижней стороны микропланшета. Также раскрыты микропланшет для определения продуктов реакций агглютинаций и тестирующая установка для определения реакции агглютинации. Группа изобретений обеспечивает высокую надежность и высокую производительность определения результатов реакции агглютинации. 3 н. и 18 з.п. ф-лы, 9 ил.

Группа изобретений относится к способу определения результата реакции агглютинации, а также к микропланшету и устройству, используемым при осуществлении указанного способа. Способ определения реакции агглютинации включает этап реакции пробы с реагентом в лунке микропланшета, этап центрифугирования микропланшета, причем на этапе центрифугирования агглютинированный материал пробы отделяют от неагглютинированного материала пробы посредством сепарирующего материала, этап получения по меньшей мере одного изображения верхней стороны микропланшета и по меньшей мере одного изображения нижней стороны микропланшета и этап определения, на котором определяют положительный или отрицательный статус пробы в отношении реакции агглютинации путем сравнения интенсивности цвета и/или уровня серого на изображениях верхней стороны и нижней стороны микропланшета. Также раскрыты микропланшет для определения продуктов реакций агглютинаций и тестирующая установка для определения реакции агглютинации. Группа изобретений обеспечивает высокую надежность и высокую производительность определения результатов реакции агглютинации. 3 н. и 18 з.п. ф-лы, 9 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и касается прогнозирования неблагоприятных перинатальных исходов при синдроме задержки внутриутробного роста плода у женщин с реактивацией хронической цитомегаловирусной инфекции во втором триместре беременности, осложненной ретроплацентарной гематомой. Предлагаемый способ отличается тем, что у беременных определяют титр антител IgM к ЦМВ и рост титров антител IgG к ЦМВ при авидности IgG к ЦМВ более 65% в баллах (1 балл - титры антител IgG к ЦМВ 1:200-1:200; 2 балла - титры антител IgG к ЦМВ 1:400-1:400; 3 балла - титры антител IgG к ЦМВ 1:200-1:800; 4 балла - титры антител IgG к ЦМВ 1:400-1:1600) (А), концентрацию суммарных антифосфолипидных антител (Ед/мл) (В), количество ретроплацентарных гематом в плаценте в баллах: (1 балл - 1 гематома; 2 балла - 2 гематомы; 3 балла - 3 и более гематомы) (С). Затем с помощью дискриминантного уравнения рассчитывают величину дискриминантной функции D: D=-2,454×А-1,217×В-3,404×С, где D - дискриминантная функция с граничным значением равным -21,55. При D, равной или больше граничного значения дискриминантной функции, прогнозируют отсутствие неблагоприятных перинатальных исходов, а при D, меньшей граничного значения дискриминантной функции, прогнозируют развитие неблагоприятных перинатальных исходов при синдроме задержки внутриутробного роста плода у женщин с реактивацией хронической цитомегаловирусной инфекции во втором триместре беременности, осложненной ретроплацентарной гематомой. Изобретение обеспечивает возможность обоснованного и своевременного проведения лечебных мероприятий, направленных на профилактику неблагоприятных перинатальных исходов при синдроме задержки внутриутробного роста плода у женщин с реактивацией хронической цитомегаловирусной инфекции во втором триместре беременности, осложненной ретроплацентарной гематомой. Вероятность правильного прогноза составляет 88,5%. 2 пр.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа прогнозирования выхода из бессознательного состояния травматического или метаболического генеза у субъекта, включающего получение биологического образца от указанного субъекта; по меньшей мере однократный анализ указанного биологического образца для определения уровня антител к одному или нескольким фрагментам каинатных рецепторов GluR6 и/или GluR7; сравнение этого уровня с уровнем соответствующих антител в образцах, взятых у здоровых субъектов; при низком уровне антител в образце субъекта, находящегося в бессознательном состоянии, не превышающем контрольный уровень, зафиксированный в образцах здоровых субъектов, прогнозирование благоприятного выхода из бессознательного состояния; при повышенном уровне антител в образце субъекта, находящегося в бессознательном состоянии, превышающем контрольный уровень, зафиксированный в образцах здоровых субъектов, прогнозирование неблагоприятного исхода развития болезни. Группа изобретений также касается способа прогнозирования выхода из бессознательного состояния травматического или метаболического генеза у субъекта, включающего получение по крайней мере двух биологических образцов от указанного субъекта в интервале от 1 часа до 90 дней; анализ указанных биологических образов для определения уровня антител к одному или нескольким фрагментам каинатных рецепторов GluR6 и/или GluR7; сравнение уровней соответствующих антител, определенных в разных образцах одного субъекта, друг с другом и с уровнем соответствующих антител в образцах, взятых у здоровых субъектов. Группа изобретений обеспечивает прогнозирование как восстановления сознания субъекта при благоприятном исходе, так и вероятности перехода в хроническое вегетативное состояние или летального исхода. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано в гинекологических стационарах и амбулаторных условиях женских консультаций и поликлиник для прогнозирования прогресса папилломавирусной инфекции у пациенток с хроническим рецидивирующим ВПЧ-ассоциированным цервицитом. Сущность изобретения: у пациентки определяют генотипы полиморфизмов Ser249Pro в гене TLR6 и Pro72Arg в гене ТР53 и при выявлении у пациентки аллеля Ser в гене TLR6 и гомозиготного генотипа ProPro или ArgArg в гене ТР53 прогнозируют низкий риск прогрессирования ПВИ; при выявлении у пациентки мутации ProPro в гене TLR6 либо гетерозиготного генотипа ProArg в гене ТР53 прогнозируют средний риск прогрессирования ПВИ; при определении у пациентки мутации ProPro в гене TLR6 и гетерозиготного генотипа ProArg в гене ТР53 прогнозируют высокий риск прогрессирования ПВИ. Изобретение обеспечивает возможность осуществления с высокой степенью достоверности прогнозирования прогресса ПВИ у пациенток с ВПЧ-ассоциированным цервицитом, что позволит выбрать правильную тактику ведения. 5 табл., 3 пр.

Наверх