Способ дифференциальной диагностики заболеваний щитовидной железы

Изобретение используется в патологической анатомии, эндокринологии, хирургии. Способ дифференциальной диагностики заболеваний щитовидной железы заключается в том, что проводят гистоэнзиматическое исследование фермента тиреопероксидазы (ТПО) в щитовидной железе и по активности ТПО диагностируют диффузный токсический зоб, многоузелковый токсический зоб, фолликулярную аденому в состоянии эутиреоза, аденокарциному. Целью изобретения является обеспечение достоверности полученных результатов при проведении дифференциальной диагностики заболеваний щитовидной железы. 4 пр., 2 ил.

 

Область применения: патологическая анатомия, эндокринология, хирургия, изобретение может использоваться для дифференциальная диагностика заболеваний щитовидной железы (ЩЖ).

Пероксидаза ЩЖ-тиреопероксидаза (ТПО) является ключевым ферментом в синтезе тиреоидных гормонов. Она синтезируется в гранулярной эндоплазматической сети и затем упакованном в экзоцитозные пузырьки виде накапливается в апикальной части тироцитов.

Считают, что ТПО встроена в апикальную мембрану фолликулярных тироцитов ЩЖ и катализирует перекисное окисление йода с последующим йодированием тирозина в составе тиреоглобулина. Таким образом, ТПО катализирует как минимум две реакции в процессе синтеза гормонов ШЖ: йодирование тирозиновых остатков тиреоглобулина и слияние йодотирозинов в процессе синтеза тироксина (Т4) и трийодтиронина (Т3). Надо считать уникальным то, что готовые гормоны в составе тиреоглобулина накапливаются во внеклеточной среде, а далее, по мере необходимости, поступают в циркуляцию путем эндоцитоза.

Из приведенных данных следует, что интенсивность синтеза тиреоидных гормонов в фолликулярных тироцитах находится в прямой зависимости от активности ТПО. Из этого положения напрашивается вывод, что по уровню активности ТПО можно судить о функциональном состоянии ЩЖ.

Он важен, прежде всего, по той причине, что патоморфологическое заключение при исследовании послеоперационного материала не предполагает установление функционального состояния органа.

В настоящее время для определения функционального состояния ЩЖ используются следующие методы, которые описаны в Инструкциях по применению набора реагентов для количественного иммуноферментного определения. «Утверждена» Приказом Росздравнадзора от «18» ноября 2011 г. №7492 - Пр/11.

- Инструкция по применению набора реагентов для количественного иммуноферментного определения свободного тироксина в сыворотке крови человека. («ТироидИФА-свободный Т4»).

- Инструкция по применению набора реагентов для количественного иммуноферментного определения свободного трийодтиронина в сыворотке крови человека («ТироидИФА-свободный Т3»).

- Инструкция по применению набора реагентов для количественного иммуноферментного определения тиреотропного гормона в сыворотке крови человека («ТироидИФА-ТТГ»).

- Инструкция по применению набора реагентов для количественного иммуноферментного определения аутоантител к тиреоидной пероксидазе в сыворотке крови человека («ТироидИФА-атТПО»).

Используемые на практике методы определения содержания тиреоидных гормонов и аутоантител к аутоантигенам в крови имеют следующие недостатки.

1. Необходимость использования дорогостоящих реактивов.

2. Длительность времени при получении ответа. Оно связано с тем, что гормоны определяют не у каждого пациента в отдельности, а группу больных, накапливая их до определенного количества, понятно с потерей времени.

3. Только при первичном обращении больных результаты могут быть достоверными. В преобладающем большинстве случаев обращаются больные, находящиеся на учете и нуждающиеся в повторном обследовании. При исследовании гормонов у этой группы больных, которые чаще всего принимают соответствующие препараты, достоверность результатов анализа сомнительна в том плане, что способность тиреоцитов к повышенной продукции гормонов сохраняется. В частности, больные с диффузным токсическим зобом (ДТЗ), принимающие тиреостатические препараты, в большинстве своем находятся в состоянии медикаментозного эутиреоза и соответственно содержание гормонов в пределах нормы, а клинические признаки в какой-то мере сохраняются.

В качестве прототипа нами взят способ, описанный в Инструкция по применению набора реагентов для количественного иммуноферментного определения свободного тироксина в сыворотке крови человека («ТироидИФА-свободный Т4»).

К недостаткам прототипа можно отнести следующее:

- необходимость использования дорогостоящих реактивов;

- длительность времени выполнения анализа.

Целью изобретения является обеспечение достоверности полученных результатов при проведении дифференциальной диагностики заболеваний ЩЖ путем гистохимического исследования активности ключевого фермента при синтезе тиреоидных гормонов - ТПО.

Сущность предлагаемого изобретения заключается в следующем.

1. Сущность проведения дифференциальной диагностики диффузного токсического зоба заключается в следующем.

При постановке реакции на ТПО реакция проводится следующим образом: из взятого свежего (послеоперационный) материал готовят срезы, полученные срезы толщиной 15-20 мк переносятся на предметные стекла и хранятся 2 часа с целью высушивания. Предметные стекла со срезами покрывают 0.3% раствором молибдата аммония на 5 минут. После слива предыдущего раствора на стекла покрывают инкубационной средой на 15 минут. Инкубационная среда готовится следующим образом: в бюксик наносится 1 мл насыщенного раствора бензидина и добавляют 1 каплю 0.3% раствора перекиси водорода (раствор рассчитан на 3-4 стекла). По истечении времени инкубации стекла с инкубационной средой переносят на столик микроскопа с фотоприставкой и сразу же делают съемки. Оптимальное увеличение, при котором удается четко видеть окрашенные структуры - 400. При использовании предлагаемого способа в местах локализации фермента на голубоватом фоне цитоплазмы фолликулярных тироцитов образуются темно-синие гранулы. В обзорных микропрепаратах (фиг. 1, а) имеются признаки макро- и микрофолликулярного зоба, который сочетается с наличием аденоматозных зон (фиг. 1, а). Это позволяет ставить диагноз - диффузный токсический зоб.

2. Сущность проведения дифференциальной диагностики многоузлового токсического зоба заключается в следующем.

Характерно обилие аденоматозных очагов, т.е. формирующихся новых фолликулов, большинство которых без видимого просвета. Активность фермента в тиреоцитах умеренная и высокая. Просматриваются лишь единичные, полностью сформированные фолликулы; содержание окрашенных продуктов реакции в стенке также высокое (фиг. 1, б). Можно ставить диагноз многоузлового токсического зоба.

3. При фолликулярной аденоме, состояние эутиреоза характерно наличие многочисленных аденоматозных очагов. Однако, в отличии от предыдущего случая, количество сформированных фолликулов больше. В стенке фолликулов активность фермента умеренная или высокая. Четко очерчены межфолликулярные соединительнотканные прослойки; в их структурах отсутствуют окрашенные продукты гистохимической реакции (фиг. 2, а).

4. Аденокарцинома.

В гистохимических препаратах сплошь аденоматозные и паренхиматозные очаги, в основном без просвета. Активность фермента в них очень высокая. Лишь единичные фолликулы имеют просвет. Эпителий в их стенке неравномерно многослойный с умеренной и высокой активностью ТПО. Нередко аденоматозные и паренхиматозные очаги сливаются, образуя сплошные окрашенные участки.

В межфолликулярных соединительнотканных прослойках продукты гистохимической реакции отсутствуют (фиг. 2, б).

Примеры конкретного выполнения способа.

1. Больной Р. Поступил в отделение эндокринной хирургии РКБ 25.10.15 г. с диагнозом «Диффузный токсический зоб IV ст.» Жалобы на опухолевидное образование на передней поверхности шеи, затрудненное дыхание при физической нагрузке, тахикардию, раздражительность, плаксивость, головную боль, слабость, потливость.

Содержание тиреоидных гормонов в крови: Т4 св. - <5,15 пмоль/л,

ТТГ - 0,039 мЕД/л.

Клинический диагноз: Диффузный токсический зоб IV ст. Проведена операция – субфасциальная тиреоидэктомия.

Гистозаключение: Базедофицированный микро-макрофолликулярный диффузный токсический зоб.

Реакция на ТПО. В цитоплазме фолликулярных тироцитов активность фермента высокая. В полость фолликулов вдаются эпителиальные выпячивания в виде сосочков с просветленной средней частью. В межфолликулярных пространствах аденоматозные очаги с высокой активностью фермента.

Гистохимическое заключение: Диффузный токсический зоб тяжелой степени. Состояние тиреотоксикоза.

2. Больной С. поступил в отделение эндокринной хирургии РКБ 16.11.15 г. с диагнозом «Многоузловой токсический зоб III ст. Медикаментозный эутиреоз.» Жалобы на опухолевидное образование на передней поверхности шеи, затрудненное дыхание при физической нагрузке, быстрой ходьбе, тахикардию, раздражительность, плаксивость, головную боль, слабость.

Содержание тиреоидных гормонов в крови: Т3 св. - 3,7 пмоль/л, Т4 св. - 10,0 пмоль/л, ТТГ - 11,3 мМЕ/л, AT к ТПО - 625 МЕ/мл.

Клинический диагноз: Многоузловой токсический зоб III ст. тяжести. Медикаментозный эутиреоз. Проведена операция – субфасциальная тиреоидэктомия.

Гистозаключение: На фоне коллоидного зоба узлы фолликулярной аденомы с очаговой лимфоцитарной инфильтрацией.

Реакция на ТПО: В поле зрения многочисленные аденоматозные очаги (пролиферирующиеся тироциты) с высокой активностью фермента; просматриваются лишь единичные сформированные фолликулы с просветом.

Гистохимическое заключение: Узловой токсический зоб тяжелой степени. Состояние тиреотоксикоза.

3. Больная Ш. поступила в отделение эндокринной хирургии РКБ 10.9.15 г. с диагнозом «Диффузно-узловой эутиреоидный зоб III ст.» Жалобы на опухолевидное образование на передней поверхности шеи, головные боли, дискомфорт в шее.

Содержание тиреоидных гормонов в крови: Т4 об. - 21,8 нмоль/л, Т3 об. - 13,7 нг/мл, ТТГ - 0,1 мкМЕ/мл.

Клинический диагноз: Многоузловой эутиреоидный зоб III ст.

Гистозаключение: Макро-микрофолликулярный коллоидный зоб с полями фибротизации и формированием узловатых комплексов.

Реакция на ТПО: Многочисленные аденоматозные очаги с умеренной и высокой активность фермента. Часть очагов содержат сформированные мелкие фолликулы. В их стенке активность ТПО также умеренная или высокая. Четко очерчены межфолликулярные соединительнотканные прослойки без окрашенных продуктов реакции.

Гистохимическое заключение: Фолликулярная аденома. Состояние эутиреоза.

4. Больной И. поступил в лабораторно-диагностический центр «Астрамед» 22.12.15 г. с диагнозом «Многоузловой токсический зоб II ст. Медикаментозный эутиреоз.» Жалобы на опухолевидное образование на передней поверхности шеи, головные боли, тахикардию, слабость, потливость.

Содержание тиреоидных гормонов в крови: Т4 св. - 42,3 пмоль/л, ТТГ - <0,004 нМЕ/л.

Клинический диагноз: Многоузловой токсический зоб II ст.

Гистозаключение: Полиморфная аденома щитовидной железы с участками папиллярного и фолликулярного строения и признаками малигнизации и гиперфункции эпителия.

Реакция на ТПО: Аденоматозные и паренхиматозные очаги с очень высокой активностью. В стенке сформированных аденоматозных фолликулов неравномерный многослойный эпителий умеренной, местами высокой активностью фермента. Многие аденоматозные и паренхиматозные очаги слиты между собой.

Гистохимическое заключение: Аденокарцинома. Состояние тиреотоксикоза.

Признаки изобретения, отличительные от прототипа.

По предлагаемому способу проводят гистохимическое исследование послеоперационного материала ЩЖ путем определения активности ТПО, что позволяет дополнить гистологическое заключение патоморфологов функциональным.

Положительный эффект от использования изобретения.

1. Используются недорогие отечественные реактивы.

2. С момента получения послеоперационного материала до постановки гистохимической реакции и получения ответа проходит 2-3 часа (в прототипе от нескольких дней до нескольких недель).

3. Гистохимическая картина ЩЖ, выявляемая путем определения активности основного фермента синтеза тиреоидных гормонов - ТПО, не подвержена влиянию лечебных тиреостатических препаратов и отражает истинное состояние функциональной активности фолликулярных тиреоцитов и их потенциальные возможности (в прототипе, в случаях повышенной функциональной активности ЩЖ, тиреостатические препараты тормозят выход гормонов в циркуляцию и создают картину искусственного медикаментозного эутиреоза.

4. Способ позволит врачам проводить дифференциальную диагностику заболеваний щитовидной железы, позволит поставить окончательный клинический диагноз и проводить дальнейшие послеоперационные лечебные мероприятия.

Технический результат.

Предлагаемый способ гистоэнзиматической дифференциальной диагностики заболеваний ЩЖ путем определения активности ТПО позволит патологоанатомам дополнить морфологическое заключение функциональным. Это поможет хирургам и терапевтам при постановке окончательного клинического диагноза и проведении адекватного послеоперационного лечения.

Информация, принятая во внимание

- Инструкция по применению набора реагентов для количественного иммуноферментного определения свободного тироксина в сыворотке крови человека («ТироидИФА-свободный Т4»).

«Утверждена» Приказом Росздравнадзора от «18» ноября 2011 г. №7492 - Пр/11 – прототип.

- Инструкция по применению набора реагентов для количественного иммуноферментного определения свободного трийодтиронина в сыворотке крови человека («ТироидИФА-свободный Т3»).

- Инструкция по применению набора реагентов для количественного иммуноферментного определения тиреотропного гормона в сыворотке крови человека («ТироидИФА-ТТГ»).

- Инструкция по применению набора реагентов для количественного иммуноферментного определения аутоантител к тиреоиднойпероксидазе в сыворотке крови человека («ТироидИФА-атТПО»).

Способ дифференциальной диагностики заболеваний щитовидной железы, заключающийся в количественном иммуноферментном определении гормонов щитовидной железы, отличающийся тем, что проводят гистоэнзиматическое исследование фермента тиреопероксидазы (ТПО) в щитовидной железе, при выявлении окрашенных продуктов реакции, локализованных лишь в цитоплазме тиреоцитов как в стенке фолликул, так и в межфолликулярных аденоматозных зонах, выявлении признаков макро- и микрофолликулярного зоба, который сочетается с наличием аденоматозных зон, диагностируют диффузный токсический зоб; если активность фермента в тиреоцитах умеренная или высокая, видны лишь единичные полностью сформированные фолликулы, содержание окрашенных продуктов реакции в стенке фолликулы высокое, диагностируют многоузелковый токсический зоб; если выявлены аденоматозные очаги, в стенке фолликулов активность фермента умеренная или высокая, четко очерчены межфолликулярные соединительнотканные прослойки и в их структурах отсутствуют окрашенные продукты гистохимической реакции, диагностируют фолликулярную аденому в состоянии эутиреоза; при выявлении в гистохимических препаратах сплошь аденоматозных и паренхиматозных очагов без просвета с очень высокой активностью фермента, сливающихся между собой в сплошные окрашенные участки, эпителий в стенке фолликул неравномерно многослойный с умеренной и высокой активностью ТПО, в межфолликулярных соединительнотканных прослойках продукты гистохимической реакции отсутствуют, диагностируют аденокарциному.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначено для прогнозирования необходимости проведения лазерной коагуляции при ретинопатии недоношенных.

Изобретение относится к области популяционной генетики и предназначено для поддержания жизнеспособности популяций животных или растений на урбанизированных территориях.

Изобретение относится к молекулярной биологии. Способ включает: экстракцию препаратов суммарной РНК, получение комплементарной ДНК с помощью реакции обратной транскрипции на РНК-матрице и последующую амплификацию в режиме реального времени с использованием высокоспецифичных праймеров для генов PTEN, CYP1B1 и АСТВ (референтный локус), а также расчет коэффициента относительной экспрессии генов PTEN и CYP1B1 (КPTEN и КCYP1B1) методом RT-PCR.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может применяться для проведения дифференциальной диагностики лимфомы Ходжкина и лимфаденита у подростков.

Группа изобретений раскрывает способы детектирования и/или ингибирования активности TOR-киназы у пациентов, включающие измерение с помощью проточной цитометрии количества фосфорилированного 4ЕВР1 в биологическом образце пациента перед и после введения ингибитора TOR-киназы, где ингибитор TOR-киназы представляет собой 7-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-3-ил)-1-(транс-4-метоксициклогексил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1Н)-он, или 1-этил-7-(2-метил-6-(4Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1Н)-он, или его фармацевтически приемлемую соль, стереоизомер или таутомер, а также набор для использования при проточной цитометрии для детектирования или измерения ингибирования активности TOR-киназы у пациента.

Группа изобретений относится к области иммунологии и медицины и касается способа выявления аутоиммунного ответа против белка 3-гидрокси-3-метилглутарил-коэнзим А-редуктазы, способа диагностики миопатии, а также способа определения целесообразности продолжения терапии статинами у субъекта, включающих выявление аутоантитела, распознающего указанный белок.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложен способ для иммуноферментного определения функциональной активности компонента С3 комплемента человека.
Изобретение относится к медицине и описывает способ прогноза прогрессирования желудочковой экстрасистолии у больных постинфарктным кардиосклерозом (ПИКС) путем обследования пациентов, при этом у пациентов в период до года после перенесенного ОИМ, с умеренной частотой желудочковой экстрасистолии, на фоне стандартной терапии, включающей β-адреноблокатор, в лимфоцитах периферической крови определяют активности ферментов: НАДФ-зависимой декарбоксилирующей малатдегидрогеназы (НАДФМДГ), НАДФ-зависимой глутаматдегидрогеназы (НАДФГДГ), глутатионредуктазы (ГР) и НАДФН-зависимой глутаматдегидрогеназы (НАДФН-ГДГ), после чего рассчитывают коэффициент внутриклеточного НАДФН-обмена (КВНО), представляющий собой отношение суммы активности НАДФМДГ и НАДФГДГ к сумме активности ГР и НАДФН-ГДГ, т.е.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и описывает способ прогнозирования антиаритмической эффективности высококонцентрированного препарата омега-3 полиненасыщенных жирных кислот при лечении больных с желудочковыми нарушениями ритма сердца и постинфарктным кардиосклерозом путем исследования ферментов лимфоцитов периферической крови пациента до начала терапии, при этом до начала терапии определяют активности ферментов: НАДФ-зависимой декарбоксилирующей малатдегидрогеназы (НАДФМДГ) и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ), после чего рассчитывают коэффициент липидно-углеводного обмена (КЛУО), представляющий собой отношение активности НАДФМДГ к активности Г6ФДГ, то есть КЛУО=НАДФМДГ/Г6ФДГ, и при значении КЛУО, равном или больше 5,56, прогнозируют антиаритмическую эффективность препарата, а при значении КЛУО меньше 5,56 - отсутствие антиаритмической эффективности препарата омега-3 полиненасыщенных жирных кислот.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к выделенному моноклональному анти-LOXL2 антителу или его антиген-связывающему фрагменту, а также к конъюгатам, их содержащим.

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано для количественного определения серебряной соли сульфадимидина для стандартизации и контроля качества лекарственных средств.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано в гинекологических стационарах и амбулаторных условиях женских консультаций и поликлиник для прогнозирования прогресса папилломавирусной инфекции у пациенток с хроническим рецидивирующим ВПЧ-ассоциированным цервицитом.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для оценки состояния здоровья человека. В периферической крови обследуемого с помощью метода проточной цитофлюорометрии определяют процентное содержание Th17-лимфоцитов, а именно процент лимфоцитов с фенотипом CD3+CD4+CD161+CD45R0+ от гейта CD3+CD4+лимфоцитов.

Изобретение относится к области медицины, а именно к наркологическим и инфекционным болезням, и может быть использовано для диагностики абстинентного синдрома при опийной наркомании, сочетанной с ВИЧ-инфекцией.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования эндометриопатии, отличающийся тем, что в образце менструальной крови определяют концентрации интерлейкина-6 (ИЛ-6), глутатионпероксидазы-1 (ГТП 1) и растворимой формы Е-селектина и определяют коэффициент вероятности эндометриопатии (Р) по формуле: гдеа=0,0002782; b=0,0381529; с=-0,1205126; d=-1,1189533; e - экспонента (константа) = 2,7; X3 - значение концентрации ИЛ-6, пг/мл; Х2 - значение концентрации растворимой формулы Е селектина, нг/мл; X1 - значение концентрации ГТП 1, нг/мл; и при значении Рэ > 0,29 прогнозируют наличие эндометриопатии.
Изобретение относится к области медицины, педиатрии, инфекционным болезням и касается способа оценки эффективности терапии инфекции, вызванной вирусом герпеса человека 6 типа (ВГЧ-6), у детей.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для оценки нейропротекторных свойств веществ in vitro. Для этого используют дифференцированные в нейрональном направлении индуцированные плюрипотентные стволовые клетки человека путем репрограммирования фибробластов кожи человека в индуцированные плюрипотентные стволовые клетки.

Изобретение относится к биотехнологии. Конкретно, изобретение относится к предупреждению феномена усиления токсичности глазных инстилляций при совместном применении комбинации лекарственных препаратов.

Изобретение относится к медицине, а именно к ветеринарии, и может быть использовано для диагностики репродуктивного респираторного синдрома свиней. Для этого диагностику репродуктивного респираторного синдрома свиней проводят непрямым иммуногистохимическим анализом на основании моноклональных антител.
Изобретение относится к медицине, в частности, к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования возможной вакцинации против туберкулеза у новорожденных из групп высокого перинатального риска в роддоме.

Изобретение относится к медицине и касается способа выделения подклассов иммуноглобулина G (IgG) аутоантител к иммунорегуляторному цитокину фактору некроза опухоли (TNF), заключающегося в получении общей фракции IgG аффинной хроматографией с использованием сорбента Protein G Sepharose с последующей нейтрализацией, объединением и диализом IgG, очистке полученной фракции IgG от примеси TNF. При этом выделение подклассов IgG производят из фармацевтического препарата иммуноглобулина для внутривенного введения, после получения фракции IgG осуществляют ее очистку от примеси TNF ультрафильтрацией с использованием центрифужных фильтров, затем проводят этап выделения антител IgG3 и получения смеси IgG1, IgG2, IgG4 аффинной хроматографией; затем выделяют антитела IgG1 многократной негативной аффинной хроматографией с последующим объединением и диализом, затем выделяют антитела IgG2 многократной негативной аффинной хроматографией с последующим объединением и диализом, затем проводят очистку антител IgG1 и IgG2 от примеси IgG4 негативной аффинной хроматографией, после чего проводят выделение специфических аутоантител к TNF подклассов IgG1, IgG2, IgG3 аффинной хроматографией с последующей нейтрализацией, объединением и диализом. Изобретение обеспечивает получение чистых фракций аутоантител к TNF подклассов IgG1, IgG2 и IgG3. 1 пр., 1 табл.

Изобретение используется в патологической анатомии, эндокринологии, хирургии. Способ дифференциальной диагностики заболеваний щитовидной железы заключается в том, что проводят гистоэнзиматическое исследование фермента тиреопероксидазы в щитовидной железе и по активности ТПО диагностируют диффузный токсический зоб, многоузелковый токсический зоб, фолликулярную аденому в состоянии эутиреоза, аденокарциному. Целью изобретения является обеспечение достоверности полученных результатов при проведении дифференциальной диагностики заболеваний щитовидной железы. 4 пр., 2 ил.

Наверх