Комбинированный способ гистохимического выявления дезоксирибонуклеопротеинов, полисахаридов и углеводных компонентов биополимеров в полутонких срезах тканей и органов



Комбинированный способ гистохимического выявления дезоксирибонуклеопротеинов, полисахаридов и углеводных компонентов биополимеров в полутонких срезах тканей и органов
Комбинированный способ гистохимического выявления дезоксирибонуклеопротеинов, полисахаридов и углеводных компонентов биополимеров в полутонких срезах тканей и органов
Комбинированный способ гистохимического выявления дезоксирибонуклеопротеинов, полисахаридов и углеводных компонентов биополимеров в полутонких срезах тканей и органов
Комбинированный способ гистохимического выявления дезоксирибонуклеопротеинов, полисахаридов и углеводных компонентов биополимеров в полутонких срезах тканей и органов
G01N2001/364 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2647420:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт морфологии человека" (RU)

Изобретение относится к области экспериментальной медицины и биологии, в частности к гистологическим исследованиям, и предназначено для микроскопических исследований полутонких срезов органов и тканей, залитых в смесь эпона и аралдита. Для этого изготовленные полутонкие срезы подвергают щелочному гидролизу 0,5-0,7 М раствором гидроксида калия в абсолютном метаноле в течение 10-15 мин. Образцы трижды по 3 мин отмывают абсолютным этанолом, а затем дистиллированной водой. Далее образцы подсушивают на воздухе при комнатной температуре, а затем инкубируют в течение 8 мин с 1%-ным водным раствором перийодата калия, с последующим ополаскиванием дистиллированной водой. Образцы подсушивают на воздухе и инкубируют с реактивом Шиффа в течение 30 мин в темноте, после чего промывают по 2-3 мин проточной водой, а затем сернистой и дистиллированной водой. Изобретение позволяет выявлять дезоксирибонуклеопротеины, полисахариды и углеводные компоненты в полутонких срезах различных органов без нагревания и повреждения срезов. 7 ил., 4 пр.

 

Изобретение относится к экспериментальной медицине и биологии, а именно к гистологическим исследованиям. Наиболее часто используемыми гистохимическими реакциями для световой микроскопии являются реакция Фельгена и ШИК-реакция (реактив Шиффа-йодная кислота) [3]. ШИК-реакция выявляет в срезах полисахариды и углеводные компоненты гликопротеинов и заключается в окислении перйодатом калия или натрия полисахаридов с образованием из гидроксильных групп альдегидных, дающих реакцию с фуксинсернистой кислотой (реактив Шиффа) с образованием продуктов малинового цвета [4]. Реакция Фельгена выявляет пентозы в составе дезоксирибонуклеопротеинов и также основана на применении реактива Шиффа. Ее особенностью является предварительный кислотный гидролиз нуклеопротеинов при температуре 60°С вместо использования перйодата [4]. При кислотном гидролизе в дезоксирибонуклеиновой кислоте (ДНК) разрываются гликозидные связи, соединяющие пентозу с азотистым основанием, вследствие чего в пентозах освобождаются реакционно-способные альдегидные группы у первого атома углерода, которые затем реагируют с реактивом Шиффа. Многие полимеры, содержащие углеводы, при этом гидролизуются, деполимеризуются и экстрагируются, вследствие чего реакция положительная Фельгена и ШИК-реакция одновременно не могут проявляться, и их совместное проведение нецелесообразно из-за высокой вероятности ложноотрицательных результатов.

Особую сложность представляет гистохимическое выявление дезоксирибонуклеопротеинов и углеводных структур в полутонких срезах тканей и органов, залитых в смолы для электронно-микроскопического исследования. Изготовление полутонких срезов толщиной 1-2 мкм предшествует электронно-микроскопическому исследованию биологических препаратов и необходимо для выявления клеток и неклеточных структур, интересующих исследователя, для последующего изготовления ультратонких срезов. Гистохимические методики, широко применяемые при исследовании гистологических препаратов, изготовленных из обезвоженных в спиртах и залитых в парафин кусочков ткани, не всегда воспроизводятся на полутонких срезах, так как при подготовке ткани для электронно-микроскопического исследования образцы контрастируются оксидом осмия, уранилацетатом, что существенно влияет на течение гистохимических реакций, а затем заливаются в эпоксидные смолы, которые, полимеризуясь, изменяют свойства биополимеров [1]. Проведение гистохимических реакций, направленных на выявление основных биополимеров в клетках, таких как нуклеиновые кислоты, полисахариды и гликопротеины позволило бы существенно повысить точность выявления органелл и включений, а также дифференцировки сходных по строению структур, таких как фрагментированные ядра, секреторные гранулы, лизосомы, что значительно повысило бы точность отбора участков тканей и органов для электронной микроскопии, избавило от необходимости заливки и исследования большего количества объектов, а соответственно, снизило стоимость исследования. Помимо этого данные методики позволили бы существенно расширить использование полутонких срезов в гистологических и цитологических исследованиях с использованием световой микроскопии, так как полутонкие срезы позволяют визуализировать структуры, недоступные для исследования классических гистологических препаратов. Использование гистохимических реакций, выявление и дифференцировка внутриклеточных образований могли бы в ряде случаев проводиться и без использования электронной микроскопии, что также существенно позволяет снизить стоимость исследования.

Реакция Фельгена на полутонких срезах затруднена, так как смолы и контрастирующие вещества ингибируют проявление окраски [2]. Наиболее близким аналогом реакции Фельгена в полутонких срезах является методика, разработанная для неконтрастированных препаратов [9]. Образцы для исследований фиксируют в глутаровом альдегиде без постфиксации оксидом осмия и заливают в Эпон. Изготавливают полутонкие срезы толщиной 1-2 мкм. Кислотный гидролиз проводят в течение 1 ч при комнатной температуре в 5 н. растворе соляной кислоты. Затем на срезы наносят реактив Шиффа и инкубируют в темноте в течение 1-2 ч. Ядра окрашиваются в ярко-розовый цвет.

Недостатком метода является получение аналогичного окрашивания и без кислотного гидролиза, который является определяющим фактором в развитии реакции Фельгена, только за счет реакции реактива Шиффа с глутаровым альдегидом, присутствующим в образце, то есть окрашивание является неспецифической реакцией, что было установлено самим разработчиком метода [9]. Помимо этого подготовка образцов не позволяет использовать их в дальнейшем для электронно-микроскопических исследований.

Известно несколько способов проведения ШИК-реакции на полутонких срезах [5, 6]. Их общими недостатками являются сильное повреждающее воздействие на ткань дополнительных окислителей, например перекиси водорода, а также способность давать специфическое окрашивание препаратов только при использовании определенного типа заливочной смолы (метакрилат, Эпон, Аралдит). В настоящее время, как правило, для изготовления препаратов применяется комбинированная смесь смол Эпон и Аралдит, а метакрилат практически не применяется в электронной микроскопии.

Наиболее близким аналогом к заявляемому способу является способ, предложенный R. DiBella и K. Hashimoto [7], по проведению ШИК-реакции на полутонких срезах. На препараты биологических образцов, залитых в Аралдит, наносят несколько капель 0,5%-ного перйодата калия на 10 мин и нагревают стекла на нагревательном столике до 65°C. Чтобы избежать испарения по мере надобности перйодат добавляют на срезы. Затем погружают стекла в дистиллированную воду, а затем снова прогревают до испарения воды. На прогретый до 65°C препарат наносят капельно реактив Шиффа на 5 мин, периодически добавляя для предупреждения испарения. Реактив изменяет цвет на пурпурный, после чего срезы отмываются в дистиллированной воде.

Недостатком данного метода является необходимость неоднократного инкубирования срезов при повышенной температуре, которая вызывает пересушивание препарата, а в дальнейшем при отмывании в дистиллированной воде отклеивание и потерю срезов. Метод не окрашивает биологические образцы, залитые в другие заливочные смолы. Не комбинируется с другими гистохимическими методиками.

Задача изобретения - разработать методику, позволяющую одновременно проводить гистохимическое выявление ДНК, полисахаридов и углеводных компонентов различных классов биополимеров (гликопротеинов) в полутонких срезах образцов, залитых в комбинированные смолы, дающую специфическое окрашивание различных тканей и органов, с минимальным повреждающим воздействием на срезы.

Заявленный способ одновременного гистохимического выявления ДНК, полисахаридов и углеводных компонентов биополимеров в полутонких срезах биологических образцов, залитых в смесь смол эпона и аралдита, заключается в погружение срезов в 0,5 М раствор гидроксида калия в абсолютном метаноле на 10 мин при комнатной температуре, переносе срезов в первый абсолютный этиловый спирт на 3 мин, затем - во второй и третий абсолютный этанол также с инкубацией 3 мин. Затем срезы промываются в трех сменах дистиллированной воды по 3 мин. После третьей промывки избыток воды осторожно удаляется со стекол вокруг срезов фильтровальной бумагой, и предметные стекла со срезами оставляют для подсушивания при комнатной температуре на 3-4 мин. Затем на срезы капельно наносят 1%-ный водный раствор перйодата калия и инкубируют при комнатной температуре 8 мин. Погружают стекла в дистиллированную воду на несколько секунд для удаления перийодата. Затем избыток воды удаляют со стекол вокруг срезов фильтровальной бумагой. Срезы подсушивают при комнатной температуре в течение 3-4 мин. На срезы капельно наносят реактив Шиффа и помещают срезы в темноту на 30 мин. После окончания инкубации срезы погружают на 2-3 мин в проточную холодную воду. В это время приготовляют сернистую воду добавлением к 100 мл дистиллированной воды 0,5 г метабисульфита натрия и 5-6 капель 1 н. соляной кислоты. Затем переносят на 1 мин в сернистую воду, после чего промывают в дистиллированной воде в течение 1 мин. Удаляют избыток воды со стекол фильтровальной бумагой, оставляют срезы при комнатной температуре на 5 мин для высыхания, затем наносят среду для заключения препаратов и покрывают покровным стеклом.

Технический результат заключается в появлении стабильного специфического окрашивания структур, содержащих ДНК и углеводы, в оттенки от розово-сиреневого до малиново-фиолетового в различных органах и тканях, залитых в смесь Эпона и Аралдита, без потери и термического повреждения полутонких срезов.

Указанный технический результат достигается тем, что в предлагаемом способе кислотный гидролиз ДНК при повышенной температуре заменен на обработку спиртовым раствором щелочи. Для выявления ДНК в полутонких срезах образцов необходимо было сделать пентозы ДНК доступными для проведения ШИК-реакции, как с другими полисахаридами и гликопротеинами, то есть освободить их гидроксильные группы для реакции с перйодатом, что позволит избежать разрыва гликозидных связей и окисления пентоз кислотой. Для образования в пентозах реакционно-способных альдегидных групп провели щелочной гидролиз в 0,5 М растворе гидроокиси калия в метаноле. Воздействие щелочи вызывает отщепление от нуклеотидов остатков фосфорной кислоты с образованием нуклеозидов. Разрыва гликозидных связей при этом не происходит, но освобождается гидроксильная группа у третьего атома углерода пентозы. Это дает возможность окислить ее перйодатом, а затем провести реакцию с реактивом Шиффа. Выбор в качестве растворителя абсолютного метанола обусловлен следующим: спирты облегчают проникновение реактива в срезы, но при приготовлении водно-спиртового раствора может произойти реакция Каниццаро с образованием из углеводов спиртов и кислот [4], что может помешать выявлению ДНК. Поэтому был выбран абсолютный спирт. Выбор метанола обусловлен тем, что он не способен вступать в реакцию с щелочами, но понижает рН раствора, что важно для сохранности биополимеров. Одновременно это позволяет также увеличить реакционную способность углеводов в ДНК и в других сложных соединениях за счет растворения смол, а также облегчить взаимодействие перйодата калия с гидроксилами углеводов. Известно, что некоторые полисахариды, например гликозаминогликаны, плохо реагируют с перийодатом, так как их карбоксильные и сульфатные группировки вызывают отталкивание перйодат-иона, вследствие чего ШИК-реакция может их не выявлять [8]. Обработка срезов щелочью должна была минимизировать эти явления. Для повышения специфичности после щелочного гидролиза использовали многократную отмывку препарата сначала в полярных (абсолютном этаноле), затем в неполярных растворителях (дистиллированной воде) для удаления органических и неорганических гидрофобных и гидрофильных соединений, в том числе фиксатора, так как ШИК-реакция может давать ложноположительные результаты на биологических образцах, фиксированных глутаровым альдегидом (наиболее распространенным фиксатором для электронно-микроскопических исследований), поскольку считается, что свободные альдегидные группы могут вступать в реакцию с реактивом Шиффа. Концентрацию перийодата калия повысили с 0,5 до 1% для повышения эффективности окисления при комнатной температуре. Усиление реакции с реактивом Шиффа за счет повышения температуры реакционной среды заменили увеличением длительности инкубации с реактивом Шиффа при комнатной температуре.

Для оценки эффективности заявленного способа провели следующие исследования.

Пример 1. Определение специфичности развивающейся окраски

Для установления специфичности одновременного определения углеводных компонентов и ДНК провели гистохимические реакции заявленным способом в образцах органов, имеющих биологические структуры, которые должны давать положительную реакцию на углеводные компоненты и ДНК, а также отрицательную реакцию на ДНК и углеводы. Объектом исследования были полутонкие срезы щитовидной железы и сосудов. Препараты щитовидной железы являются положительной пробой на ШИК-реакцию из-за содержания в полостях фолликулах большого количества коллоида - высокогликозилированного белка тироглобулина. Также положительную ШИК-реакцию дают базальные мембраны фолликулярных тироцитов и капилляров. Одновременно ядра клеток щитовидной железы дают положительную реакцию Фельгена. Плазма крови в просветах сосудов содержит большое количество гликопротеинов, дающих ШИК-положительную реакцию. Эритроциты не имеют ядер и не содержат большого количества углеводов в цитоплазме, вследствие чего не дают ни ШИК-реакции, ни реакции Фельгена, то есть являются отрицательным контролем.

Материал фиксировали 1%-ным глутаровым альдегидом с постфиксацией 1%-ным раствором тетраокиси осмия в какодилатном буфере и 5%-ным водным раствором уранилацетата и заливали в смесь Эпона и Аралдита с добавлением дибутилфталата в качестве пластификатора и додецил-янтарнокислого ангидрида в качестве уплотнителя и DMP30 в качестве катализатора. Провели окрашивание изготовленных полутонких срезов по заявленной методике. На фиг. 1 представлены результаты гистохимических реакций в щитовидной железе. Коллоид в просвете фолликулов окрашен в малиново-фиолетовый цвет, ядра тироцитов - в сиренево-розовый цвет с более интенсивной окраской ядрышек, цитоплазма клеток не окрашена, в цитоплазме видны ШИК-положительные включения тироглобулина (указаны стрелками), в просветах сосудов неокрашенные эритроциты. На фиг. 2 представлены результаты окрашивания срезов сосуда, в виде окрашенной в розово-малиновый цвет плазмы в просвете сосуда и неокрашенных эритроцитов (указаны стрелками). Сохранность срезов была стопроцентной.

Таким образом, заявленный способ характеризуется эффективностью при постановке реакции на образцах, залитых в комбинированные эпоксидные смолы, не дает ложноположительных и ложноотрицательных реакций и, следовательно, является специфичным методом выявления углеводных компонентов и ДНК.

Пример 2. Определение чувствительности выявления ДНК и углеводного компонента

Яркость развивающейся окраски ядер зависит от количества гетерохроматина, имеющего высокую компактизацию нуклеопротеинов, и более рыхлого эухроматина, соответственно, дающего более слабую окраску дезоксирибонуклеопротеинов. Аналогично насыщенность окраски углеводных компонентов зависит от их количества в исследуемом объекте, что дает возможность при необходимости для спектрофотометрического определения количества данных соединений. Для определения чувствительности заявленного способа провели гистохимическое выявление гликопротеинов и ДНК в щитовидной железе в фолликулах с различным функциональным состоянием клеток. Фиксация и заливка материала проводилась аналогичным способом, как и в примере 1.

На фиг. 3 представлены результаты выявления тироглобулина в группе фолликулов щитовидной железы с различным содержанием этого гликопротеина с соответствующей окраской содержимого полостей фолликулов от светлого розово-сиренево до насыщенного малинового цвета. Эухроматин ядер дает слабую положительную реакцию, гетерохроматин вдоль ядерной оболочки и ядрышки окрашиваются более интенсивно. Цитоплазма клеток не окрашивается. Положительная ШИК-реакция наблюдается в базальных мембранах фолликулярных тироцитов.

На фиг. 4 представлены результаты гистохимической реакции в клетках щитовидной железы с различным состоянием ядер. Пикнотизированные ядра погибающих, десквамированных в полость фолликулов, клеток (указаны стрелками) дают более интенсивную окраску за счет более высокой концентрации нуклеопротеинов.

Таким образом, заявленный способ гистохимического выявления обладает чувствительностью.

Пример 3. Выявление полисахаридов, затрудняющих протекание ШИК-реакции

К углеводам, в структуре которых имеются группировки, препятствующие образованию альдегидных групп в углеводах, относятся гликозаминогликаны. Для определения эффективности заявленного метода провели гистохимическое выявление гепарина тучных клеток - протеогликана, состоящего из белка и гликозаминогликанов. Для избежания неправильной трактовки отрицательных результатов провели реакцию вышеописанным способом на полутонких срезах дающей положительную ШИК-реакцию щитовидной железы, в соединительнотканных перегородках которой часто встречаются тучные клетки.

На фиг. 5 показаны результаты в виде резко положительной реакции с развитием насыщенной малиново-фиолетовой окраски гранул в цитоплазме тучных клеток, ярким розово-сиреневым окрашиванием коллоида в фолликулах и малиново-фиолетовым окрашиванием гетерохроматина и ядрышек ядер фолликулярных тироцитов.

Таким образом, заявленный способ позволяет выявлять гликозаминогликаны, что повышает применимость ШИК-реакции.

Пример 4. Отсутствие органоспецифичности заявленного способа

Для установления эффективности заявленного метода провели выявление ДНК и углеводов в различных органах. Препараты коркового вещества надпочечников и семенников крыс были изготовлены вышеописанным в примере 1 способом. Корковое вещество надпочечников представлено клетками, в цитоплазме которых содержится большое количество крупных митохондрий овальной формы и единичные липидные капли, не дающие положительной реакции с реактивом Шиффа. Клетки окружены капиллярами, чья базальная мембрана ШИК-положительна. В семенниках сперматогенный эпителий содержит крупные ядра с деконденсированным хроматином низкой плотности, дающим слабую реакцию Фельгена. Сперматозоиды содержат в головке сильно конденсированный хроматин, а в хвостике - большое количество гликопротеинов на плазмолемме, вследствие чего дают резко положительную ШИК-реакцию и реакцию Фельгена.

На фиг. 6 показаны результаты реакции на корковом веществе надпочечников. Ядра клеток имеют сиренево-розовую окраску, в цитоплазме видны крупные неокрашенные капли липидов (указаны стрелками) и более мелкие неокрашенные митохондрии. Яркую окраску дают базальные мембраны капилляров.

На фиг. 7 представлены результаты гистохимических реакций заявленным способом в препаратах семенников. В сперматогенном эпителии розово-сиреневую окраску дают хромосомы, яркую малиново-фиолетовую окраску - головки, и малиново-сиреневую - хвостики сперматозоидов (указаны стрелками).

Следовательно, заявленный способ характеризуется отсутствием органоспецифичности положительных реакций, то есть является универсальным для выявления ДНК и углеводных компонентов в органах и тканях.

Таким образом, заявленный способ является эффективным методом выявления ДНК, полисахаридов и углеводных компонентов биополимеров в полутонких срезах образцов разнообразных тканей и органов, залитых в смесь различных эпоксидных смол. Данный метод отличается также высокой сохранностью материала и простотой исполнения, так как не требует использования термостатов и нагревательных столиков.

Литература

1. Гайер Г. Электронная гистохимия. - М.: Мир, 1974. - 488 с.

2. Конарев В.Г., Тютерев С.Л. Методы биохимии и цитохимии нуклеиновых кислот растений. - Л.: Колос, 1970. - 204 с.

3. Петрова А.С., Полонская Н.Ю. Глава 17. Основные методы окрашивания цитологических препаратов // Микроскопическая техника: руководство / Под ред. Д.С. Саркисова, Л.Ю. Перова. - М.: Медицина, 1996. - 544 с.

4. Пирс Э. Гистохимия. Пер. с англ. - М.: Издательство иностранной литературы, 1962. - 962 с.

5. Carson F., Hladik С. Histotechnology: A Self-Instructional Text (3 ed.). - Hong Kong: American Society for Clinical Pathology Press, 2009. - P. 137-139.

6. Cerri PS, Sasso-Cerri E. Staining methods applied to glycol methacrylate embedded tissue sections // Micron - 2003. - Vol. 34. - No 8. - P. 365-372.

7. DiBella R., Hashimoto K. A new method for PAS stain of osmium-fixed Araldite-embedded thick tissue section // J. Invest. Dermatol. - 1966. - Vol. 47. - P. 503-505.

8. Scott J., Harbinson R. Periodate oxidation of acid polysaccharides. II. Rates of oxidation of uronic acids in hyalyuronides and acid mucopolysaccharides // Histochemie. - 1969. - Vol. 19. - P. 155-161.

9. Stockert J. Feulgen positive nucleoli in Epon semithin sections: Fact or artifact? // Experientia. 1978. - Vol. 33. - No 12. - P. 1669-1670.

Способ одновременного гистохимического выявления дезоксирибонуклеопротеинов, полисахаридов и углеводных компонентов биополимеров в полутонких срезах тканей и органов, заключающийся в окислении срезов 1%-ным водным раствором перйодата калия в течение 7-10 мин с последующей отмывкой срезов в дистиллированной воде и подсушиванием срезов; инкубации в темноте с реактивом Шиффа в течение 25-40 мин с последующей отмывкой в течение 2-3 мин в проточной, по 1 мин в сернистой и дистиллированной воде и получением розово-фиолетового окрашивания в образцах, отличающийся тем, что образцы, предварительно залитые в смесь эпона и аралдита, гидролизуют 0,5-0,7 М раствором гидроксида калия в абсолютном метаноле при комнатной температуре с последующим удалением продуктов гидролиза при отмывании абсолютным этанолом и дистиллированной водой.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области очистки отработанных газов двигателя внутреннего сгорания. Предложены способ и устройство для калибровки датчика отработавших газов.

Изобретение относится к способам анализа пищевых продуктов, а именно к способам оценки качества пчелиного меда. Изобретение может быть использовано в пищевой промышленности для распознавания подлинного и фальсифицированного продукта.

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, гинекологии, репродуктологии и иммунологии, и предназначено для прогнозирования результативности программы экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).

Изобретение относится к области медико-биологических исследований, а именно к способам заполнения ингаляционной камеры аэрозолем при исследовании ингаляционной токсичности веществ.

Изобретение относится к области медицины, в частности к судебной медицине, и может быть использовано для установления наличия мекония и/или кала в следах на вещественных доказательствах при проведении судебно-медицинских экспертиз.

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано для количественного определения серебряной соли сульфадимидина для стандартизации и контроля качества лекарственных средств.

Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано в агроэкологии при определении нитрификационной способности почв. Для этого проводят компостирование почвы в термостате и определяют количество нитратов, накопившихся в почве в результате нитрификационных процессов.

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству и гинекологии. Предложен способ выявления наследственной предрасположенности к развитию задержки роста плода у курящих женщин.

Группа изобретений относится к области аналитических методов изотопной геохронологии и геохимии. Способ включает измерение количества каждого из изотопов в анализируемом веществе, выделенном из навески образца на каждом из этапов выделения анализируемого вещества из навески образца; введение в экспериментальные данные стандартных поправок; вычисление отношений ΔF/Δt, где F и t - количество первого и второго изотопа в анализируемом веществе, выделенном из навески образца, или иной непрерывный параметр, указывающий стадию выделения анализируемого вещества из навески образца, ΔF и Δt - приращения F и t, отвечающие этапу выделения анализируемого вещества из навески образца; и вычисление по полученным данным характеристики изотопной системы образца при этом осуществляют поэтапное выделение анализируемого вещества из навески образца для двух и более навесок одного и того же образца, устанавливая для разных навесок образца разные границы этапов выделения анализируемого вещества из навески образца по Т, за исключением нескольких границ этапов выделения анализируемого вещества из навески образца по Т, где Т - непрерывный параметр, указывающий стадию выделения анализируемого вещества из навески образца и изменяющийся для каждой из навесок образца в одинаковых пределах; формируют для каждой навески образца массивы данных Мm, представляющие зависимости F(t)m, где индекс m указывает номера массивов данных Мm и зависимостей F(t)m; множества точек, представляющие зависимости F(t)m и заданные массивами данных Мm, разбивают на совокупности точек, представляющие участки зависимостей F(t)m, и перемещают резко отклоняющиеся совокупности точек, представляющие участки зависимостей F(t)m, вдоль координат F и t, сохраняя постоянными расстояния вдоль координат F и t между точками, принадлежащими одной и той же совокупности точек, представляющей участок зависимости F(t)m, обеспечивая согласованность соответствующих друг другу зависимостей F(t)m, полученных при выделении анализируемого вещества из различных навесок образца; растягивают (сжимают) зависимости F(t)m вдоль координат F и t, обеспечивая совпадение точек соответствующих друг другу зависимостей F(t)m, полученных при выделении анализируемого вещества из различных навесок образца, отвечающих одинаковым значениям Т; объединяют массивы данных Мm, представляющие соответствующие друг другу зависимости F(t)m, полученные при выделении анализируемого вещества из различных навесок образца, в массивы данных D*n, представляющие соответствующие этим массивам данных зависимости F(t)*n, где индекс n указывает номера массивов данных D*n и зависимостей F(t)*n; аппроксимируют зависимости F(t)*n функциями F(t)апрn; вычисляют отношения ΔF/Δt как производные от соответствующих функций F(t)апрn.

Изобретение относится к медицине. Предложен способ моделирования алкогольной кардиомиопатии, заключающийся в принудительной алкоголизации животных 10%-ным водным раствором этанола в течение 13 недель, последующем отборе животных с высоким предпочтением к алкоголю и продолжении алкоголизации до конца 24 недели от начала алкоголизации.

Изобретение относится к области промысловой геологии и может быть использовано в процессе добычи углеводородов из подземных геологических формаций. В данном документе описан способ измерения вязкости неньютоновской жидкости для поточного измерения и управления процессом.

Изобретение относится к пробоотборным системам и предназначено для отбора проб с поверхности почвы и различных поверхностей производственных помещений. Устройство содержит корпус с тангенциальным заборным патрубком и эжекторной трубкой, циклон, выходной патрубок и отверстие для слива в корпусе.

Изобретение относится к технике измерения обводненности скважинной нефти, то есть оценки доли нефти и воды в добываемой пластовой жидкости. Техническим результатом является отсечение пробы в трубке.

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, гинекологии, репродуктологии и иммунологии, и предназначено для прогнозирования результативности программы экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).

Изобретение относится к области медико-биологических исследований, а именно к способам заполнения ингаляционной камеры аэрозолем при исследовании ингаляционной токсичности веществ.

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству и гинекологии. Предложен способ выявления наследственной предрасположенности к развитию задержки роста плода у курящих женщин.

Изобретение относится к области спортивной медицины и предназначено для определения наследственной предрасположенности человека к спортивной деятельности. Осуществляют забор биологического материала, выделение ДНК, генотипирование по локусам ACE, PPPARGC1A, PPARGC1B, PPARG2, PPARA, PPARD, VDR, CALCR, VEGFA, GNB3, NOS3, AGT 704, AGT 521, IL6.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования эндометриопатии, отличающийся тем, что в образце менструальной крови определяют концентрации интерлейкина-6 (ИЛ-6), глутатионпероксидазы-1 (ГТП 1) и растворимой формы Е-селектина и определяют коэффициент вероятности эндометриопатии (Р) по формуле: гдеа=0,0002782; b=0,0381529; с=-0,1205126; d=-1,1189533; e - экспонента (константа) = 2,7; X3 - значение концентрации ИЛ-6, пг/мл; Х2 - значение концентрации растворимой формулы Е селектина, нг/мл; X1 - значение концентрации ГТП 1, нг/мл; и при значении Рэ > 0,29 прогнозируют наличие эндометриопатии.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для анализа структур межклеточного вещества соединительной ткани в гистологических срезах шейки матки у животных.

Изобретение относится к области медицины, в частности к травматологии, ортопедии и ревматологии, и предназначено для прогнозирования развития идиопатического коксартроза.

Изобретение относится к способам количественного определения биологически активных веществ в растительном сырье и получаемых на его основе продуктах питания, а именно к способу определения содержания витамина К1 в продуктах растительного происхождения, и может быть использовано в химической, фармацевтической и пищевой отраслях, медицине, в том числе гигиене питания. Способ определения содержания витамина К1 в продуктах растительного происхождения включает количественное извлечение из продуктов растительного происхождения витамина К1 (филлохинона) смесью пропанола-2 и гексана, отделение полученного экстракта, устранение влияния компонентов матрицы путем фильтрации экстракта через гидрофобную мембрану, упаривание экстракта в токе азота, перерастворение пробы в элюенте и анализ методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с математической обработкой хроматографических данных, что позволяет устанавливать абсолютную величину концентрации филлохинона в 100 г продукта растительного происхождения. Способ позволяет определять концентрацию витамина К1 как без концентрирования, так и с 60-кратным концентрированием при использовании минимального количества реактивов и минимальной комплектации аналитической системы, а также в любом продукте растительного происхождения. 2 ил., 8 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области экспериментальной медицины и биологии, в частности к гистологическим исследованиям, и предназначено для микроскопических исследований полутонких срезов органов и тканей, залитых в смесь эпона и аралдита. Для этого изготовленные полутонкие срезы подвергают щелочному гидролизу 0,5-0,7 М раствором гидроксида калия в абсолютном метаноле в течение 10-15 мин. Образцы трижды по 3 мин отмывают абсолютным этанолом, а затем дистиллированной водой. Далее образцы подсушивают на воздухе при комнатной температуре, а затем инкубируют в течение 8 мин с 1-ным водным раствором перийодата калия, с последующим ополаскиванием дистиллированной водой. Образцы подсушивают на воздухе и инкубируют с реактивом Шиффа в течение 30 мин в темноте, после чего промывают по 2-3 мин проточной водой, а затем сернистой и дистиллированной водой. Изобретение позволяет выявлять дезоксирибонуклеопротеины, полисахариды и углеводные компоненты в полутонких срезах различных органов без нагревания и повреждения срезов. 7 ил., 4 пр.

Наверх