Способ исследования повышения антибиотикочувствительности условно-патогенной микрофлоры in vitro молочнокислой кормовой добавкой, содержащей культуру микроорганизмов lactobacillus acidophilus la-5

Изобретение относится к биотехнологии. Способ исследования повышения антибиотикочувствительности условно-патогенной микрофлоры пробиотиком Lactobacillus acidophilus LA-5 in vitro предусматривает использование супернатанта молочнокислой кормовой добавки, содержащей культуру микроорганизмов Lactobacillus acidophilus LA-5, полученного в разные сроки роста культуры в 1, 10, 20 и 30 день. К 0,5 мл среды МПБ добавляют 0,5 мл супернатанта молочно-кислой кормовой добавки, после чего вносят 0,5 мл МПБ суточной культуры одного из штаммов условно-патогенной микрофлоры. Полученный раствор инкубируют 18-24 ч при Т=37,0±0,5°С. Затем проводят определение антибиотикочувствительности микроорганизмов на МПА с 24 видами антибактериальных препаратов дискодиффузионным методом. Изобретение позволяет расширить арсенал способов исследования повышения антибиотикочувствительности условно-патогенной микрофлоры in vitro. 2 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано в лабораторной работе при изучении антибиотикочувствительности микроорганизмов.

Повышение антибиотикочувствительности in vitro необходимо для научно-исследовательских задач в целях изучения возможных изменений генетических структур и обменных процессов в культуре микроорганизмов обеспечивающих антибиотикорезистентность. ВОЗ ООН (World Health Organization. WHO Global Strategy for Containment of Antimicrobial Resistance. Geneva, 2001. WHO/CDS/CSR/DRS/2001.2.) считает проблему антибиотикорезистентности микроорганизмов наиболее важной в современной микробиологии.

Известен способ повышения антибиотикочувствительности условно-патогенной микрофлоры молочно-кислой кормовой добавки, содержащей культуру микроорганизмов Bifidobacter longum Б-41 in vitro (RU 2562590 C1, 10.09.2015), избранный нами в качестве аналога. Предлагаемый нами способ отличается от предложенного аналога различным влиянием супернатанта Lactobacillus acidophilus LA-5 на показатели антибиотикочувствительности отдельных изучаемых видов микроорганизмов. Так, у S. enteritidis 182 при воздействии Lactobacillus acidophilus LA-5 к 1 дню культивирования увеличился диаметр задержки роста на 40,9%, а при воздействии Bifidobacter longum Б-41 на 31,8%.

Оценку антибиотикочувствительности микроорганизмов проводили в соответствии с методическими указаниями «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» (МУК №4.2.1890-04, 2004 г.). Способ включает выращивание культуры тест-штамма микроорганизма на мясопептонном бульоне (МПБ) в течение 18-20 ч при Т=37,0±0,5°C, с последующим инкубированием на мясопептонном агаре (МПА) с дисками пропитанными различными видами антибактериальных препаратов в течение 18-20 ч при Т=37,0±0,5°C.

Состав молочно-кислой кормовой добавки описан в диссертации кандидата с/х наук Матасова А.А. «Использование молочно-кислой кормовой добавки при выращивании крупного рогатого скота» www.dissercat.com/content/ispolzovanie-molochnokisloi-kormovoi-dobavki-pri-vyrashchivanii-molodnyaka-krupnoqo-rogatogo.

В состав молочно-кислой кормовой добавки включен штамм Lactobacilus acidophilis №LA-5 содержащий 23*108 КОЕ / на 1 мл при рН=3,46, изготовленный по ТУ 9224-001-014185347608.

Задача изобретения - способ исследования повышения антибиотикочувствительности условно-патогенной микрофлоры.

Указанная задача решается тем, что в способе повышения антибиотикочувствительности условно-патогенной микрофлоры in vitro молочно-кислой кормовой добавки, содержащей культуру микроорганизмов Lactobacillus acidophilus LA-5, используется супернатант молочно-кислой кормовой добавки, содержащей культуру микроорганизмов Lactobacillus acidophilus LA-5, включающий использование супернатанта, полученного в разные сроки роста в 1, 10, 20 и 30 день. В состав супернатанта входят: молочная кислота, перекись водорода, лизоцим и вещества с антибиотической активностью: реутерин, плантарицин, лактоцидин, лактолин. Супернатант (надосадочная жидкость) получают после центрифугирования культивируемых микроорганизмов при 3000 об/мин.

Сущность изобретения состоит в том, что в способе исследования повышения антибиотикочувствительности условно-патогенной микрофлоры in vitro молочно-кислой кормовой добавки, содержащей культуру микроорганизмов Lactobacillus acidophilus LA-5, используют супернатант молочно-кислой кормовой добавки, содержащей культуру микроорганизмов, где к 0,5 мл среды МПБ добавляют 0,5 мл супернатанта молочно-кислой кормовой добавки, затем вносят 0,5 мл МПБ суточной культуры условно-патогенной микрофлоры, после чего, полученный раствор инкубируют 18-24 ч при Т=37,0±0,5°C, затем проводят определение антибиотикочувствительности микроорганизмов на МПА с 24 видами антибактериальных препаратов дискодиффузионным методом (тетрациклин, стрептомицин, тилан, апромицин, амоксиклав, офлоксацин, окситетрациклин, оксициллин, левомицетин, гентомицин, неомицин, ампициллин, линкомицин, пенициллин, сульфетрин, энрофлоксацин, канамицин, корбенециллин, амикацин, цефазолин, цефатоксим, ципрофлоксацин, цефуроксим, рифампицин).

Пример 1. Анализ изменения зоны задержки роста микроорганизмов при определении антибиотикочувствительности после контакта с молочно-кислой кормовой добавкой, содержащей культуру микроорганизмов Lactobacillus acidophilus LA-5 разных сроков культивирования, показал разную чувствительность у исследуемых представителей условно-патогенной микрофлоры. Так, наибольший рост антибиотикочувствительности микроорганизмов отмечается после культивирования с десяти и тридцати дневными культурами (табл. 1).

Р<0,05

Рост антибиотикочувствительности Е. cloaceae 200, St. albus АТСС 25923, S. enteritidisl82, E. coli АТСС 25222, Pr. vulgaris 192, Kl. pneumonia 71 после контакта с супернатантом молочно-кислой кормовой добавки Lactobacillus acidophilus LA-5 первого дня культивирования составил от 9,1 до 40,9%, десятого дня - от 19,1 до 75%, двадцатого дня от 19,6 до 32,3% и тридцатого дня от 49,3 до 73,8% соответственно.

Наибольшее увеличение антибиотикочувствительности (на 75,0%) отмечено у E. cloaceae 200 после контакта с десятидневной культурой молочно-кислой кормовой добавки Lactobacillus acidophilus LA-5.

Наименьшее изменение диаметра задержки роста антибиотика после контакта с молочно-кислой кормовой добавкой Lactobacillus acidophilus LA-5 после 30-ти дней культивирования отмечено у Pr. vulgaris 192 (49,3%) и Kl. pneumonia 71 (53,1%).

Пример 2. Установлено, что супернатант молочно-кислой кормовой добавки Lactobacillus acidophilus LA-5 разного срока культивирования вызывает устойчивый рост количества антибактериальных препаратов, к которым чувствительны изучаемые штаммы условно-патогенной микрофлоры. Кроме того, увеличение срока инкубирования пробиотика совпадает со снижением количества малочувствительных препаратов у штаммов условно-патогенной микрофлоры (табл.2).

Примечание: количество препаратов, к которым микрофлора устойчива - У (зона задержки роста менее 10 мм), малочувствительна - М (зона задержки роста менее 15 мм), чувствительна - Ч (зона задержки роста более 15 мм).

Способ исследования повышения антибиотикочувствительности условно-патогенной микрофлоры in vitro молочно-кислой кормовой добавкой, содержащей культуру микроорганизмов Lactobacillus acidophilus LA-5, предусматривающий использование супернатанта молочно-кислой кормовой добавки, содержащей культуру микроорганизмов Lactobacillus acidophilus LA-5, полученного в разные сроки роста в 1, 10, 20 и 30 день, при этом к 0,5 мл МПБ добавляют 0,5 мл супернатанта молочно- кислой кормовой добавки, после чего вносят 0,5 мл суточной культуры условно-патогенной микрофлоры на МПБ, далее полученный раствор инкубируют 18-24 ч при Т=37,0±0,5°C, затем проводят определение антибиотикочувствительности микроорганизмов на МПА с 24 видами антибактериальных препаратов дискодиффузионным методом.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения биологических препаратов с фунгицидной активностью предусматривает культивирование штамма бактерий Bacillus amyloliquefaciens (ВКПМ: B-12464) на питательной среде, содержащей в качестве питательной основы отходы или побочные продукты спиртовой или пивоваренной промышленности, такие как послеспиртовая барда нативная или фильтрованная, или продукты переработки послеспиртовой барды по технологиям Dried Distillers Grains и Dried Distillers Grains with Solubles, или сухая, в том числе гранулированная, пивная дробина с добавлением патоки, или гидрола, или мелассы, или солодового экстракта при необходимости, в условиях постоянного перемешивания и аэрации.

Изобретение относится к микробиологии. Предложен штамм бактерий Pseudomonas fluorescens BS1506 для защиты растений от фитопатогенных грибов и бактерий и стимуляции роста растений.

Изобретение относится к биохимии. Предложен способ получения мультиспецифической связывающей молекулы, содержащей по меньшей мере две связывающих группировки, такой как антитело, где способ включает культивирование клетки, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую растворимую сортазу А из S.

Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству. Предложен способ обработки семени растения.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен рекомбинантный штамм гриба Penicillium verruculosum PVERINU13 BКПMF-1292 и штамм гриба Penicillium verruculosum PVERINU18 BКПMF-1291.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Eremothecium ashbyi Guill.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен рекомбинантный штамм мицелиального гриба Penicillium canescens СL14 ВКМ F-4706D, продуцирующий бактериальную термофильную целлюлазу Cel5L из Clostridium thermocellum с молекулярной массой 48 кДа.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и пищевой промышленности. Предложен способ производства консерванта продуктов питания.
Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения органического пигмента для окраски полимерных материалов предусматривает выращивание штамма пигментсодержащего гриба Hypomyces odoratus ВКПМ F-242 на питательной среде, содержащей разваренное зерно пшеницы или овса, отруби пшеничные или ржаные, березовые опилки, измельченные кукурузные кочерыжки, макро– и микроэлементы и водопроводную воду при заданном соотношении компонентов, в условиях твердофазного культивирования при температуре 22-24°C в течение 7-10 дней и рН среды 6,0-6,2.

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Проводится идентификациия цитрат-ассимилирующих энтеробактерий, изолированных при микробиологической диагностике дисбиотических состояний кишечника (дисбактериозов) у детей и взрослых.

Изобретение относится к области микробиологии. Предложен способ получения трехмерных структур, используемых для детекции, выделения или подсчета микроорганизмов.

Изобретение относится к биотехнологии. Универсальная питательная среда для культивирования коринебакетрий, нокардий и родококков содержит панкреатический гидролизат кильки, Д- глюкозу, KH2PO4, MgSO4, водный голубой, натрий углекислый, агар микробиологический, геотермальная вода, стерильная деффибринированная кровь животных и парафин в заданном соотношении компонентов.
Изобретение относится к медицинской микробиологии и представляет собой набор, содержащий авирулентные штаммы Yersinia pestis подвида pestis биовара orientalis КМ 2011, подвида pestis биовара antiqua КМ 2008, КМ 2012, КМ 260 (12), КМ 130(3), подвида pestis биовара medievalis КМ 2010, КМ 2014, КМ 2024, подвида caucasica КМ 2013, штаммы Yersinia pseudotuberculosis КМ 2004, КМ 2005, КМ 2006, Yersinia enterocolitica КМ 2007 и штамм Pasteurella multocida КМ 2003, депонированные в Государственной коллекции патогенных бактерий «Микроб».

Изобретение относится к области биохимии. Описан способ дифференциации штаммов Yersinia pestis на основной и неосновные подвиды методом ПЦР в режиме реального времени.

Изобретение относится к области биохимии и молекулярной биологии, в частности к набору олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченого зонда. Указанный набор предназначен для идентификации ДНК возбудителя бластомикоза Blastomyces dermatitidis методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов.
Изобретение относится к области биохимии. Предложено биосенсорное устройство для обнаружения биологических микро- и нанообъектов, таких как бактерии и вирусы.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложено устройство и способ для обнаружения целевых биомолекул с использованием вышеуказанного устройства.

Группа изобретений относится к области медицины. Предложены заготовка для изготовления тест-системы для проведения экспресс-диагностики инфекции Helicobacter pylori по уреазной активности биоптата и способ изготовления вышеуказанной тест-системы.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ оценки пригодности водорослей и цианобактерий для формирования активного ила очистных сооружений.

Изобретение относится к медицине и касается биомедицинского клеточного препарата (БМПК), содержащего криоконсервированный антиген CD34+ после размораживания. БМПК содержит линии аллогенных гемопоэтических стволовых клеток CD133+, ко-экспрессирующих поверхностные маркеры стволовых клеток: CD34+, CD38+, и CD34+, ко-экспрессирующих CD38+, CD117+, которые составляют 2% клеточной массы БМКП, и дополнительно содержит лейкоконцентрат аутологичных мобилизованных мононуклеарных клеток человека, причем названные компоненты смешаны с биологически стабильной стерильной средой, при конечной концентрации клеток линии CD34+ и CD133+ (40÷100)⋅106 клеток/мл раствора.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ исследования повышения антибиотикочувствительности условно-патогенной микрофлоры пробиотиком Lactobacillus acidophilus LA-5 in vitro предусматривает использование супернатанта молочнокислой кормовой добавки, содержащей культуру микроорганизмов Lactobacillus acidophilus LA-5, полученного в разные сроки роста культуры в 1, 10, 20 и 30 день. К 0,5 мл среды МПБ добавляют 0,5 мл супернатанта молочно-кислой кормовой добавки, после чего вносят 0,5 мл МПБ суточной культуры одного из штаммов условно-патогенной микрофлоры. Полученный раствор инкубируют 18-24 ч при Т37,0±0,5°С. Затем проводят определение антибиотикочувствительности микроорганизмов на МПА с 24 видами антибактериальных препаратов дискодиффузионным методом. Изобретение позволяет расширить арсенал способов исследования повышения антибиотикочувствительности условно-патогенной микрофлоры in vitro. 2 табл., 2 пр.

Наверх