Штамм "калмыкия-16" вируса оспы овец для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов



Штамм калмыкия-16 вируса оспы овец для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов
Штамм калмыкия-16 вируса оспы овец для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов
Штамм калмыкия-16 вируса оспы овец для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов
Штамм калмыкия-16 вируса оспы овец для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов

Владельцы патента RU 2647768:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр вирусологии и микробиологии" (ФГБНУ ФИЦВиМ) (RU)

Настоящее изобретение относится к вирусологии и ветеринарии. Предложен штамм “Калмыкия-16” вируса оспы овец семейства Poxviridae рода Capripoxvirus, выделенный от больной овцы во время эпизоотии болезни в Республике Калмыкия и депонированный в Государственной коллекции микроорганизмов Государственного научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под номером 3160. Предложенный штамм может быть применен в качестве референс-штамма при проведении вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовлении вакцин и диагностических препаратов. 1 ил., 2 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и касается штамма вируса оспы овец (BOO), и может быть использовано в научно-исследовательских институтах и диагностических центрах в качестве референс-штамма при проведении вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов.

Оспа овец (ОО) - острые контагиозное вирусное заболевание, характеризующиеся лихорадкой папулезно-пустулезными поражениями эпителиальных клеток кожи и слизистых оболочек. Согласно принятой классификации вирус оспы овец относится к семейству Poxviridae род Capripoxvirus.

Вирус является этиологическим агентом высококонтагиозного заболевания, характеризующегося лихорадкой и пузырьково-пустулезной сыпью. Оспа овец регистрируется на всех континентах, за исключением Австралии и Океании (2). В Российской Федерации оспу овец регистрируют эпизодически, в частности 2015 году нотифицировано 9 вспышек (Республике Дагестан, Приморский край, Республика Калмыкия) (8).

Основными путями заражения животных является контактный и воздушно-капельный путь (1). Источник и резервуар инфекции - больные овцы. Передача вируса осуществляется в основном алиментарным путем и через механических переносчиков.

Оспа овец регистрируется во все сезоны года и имеет выраженную тенденцию к увеличению территориального охвата. Заболеваемость при оспе овец колеблется от 20 до 90%, а летальность в зависимости от породы, возраста животных и формы течения болезни может достигать 5-100%. Возбудитель оспы овец состоит в близком генетическом, антигенном и серологическом родстве с возбудителями оспы коз и нодулярного дерматита крупного рогатого скота, но по патогенности они обладают видовой специфичностью (3-7).

Целью данного изобретения является получение нового штамма вируса оспы овец, обладающего стабильными антигенными свойствами для использования в качестве референтного штамма при проведении вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований и изготовления диагностических и вакцинных препаратов.

Поставленная цель достигнута путем выделения вируса оспы овец от больной овцы, принадлежащей КФК «Эрдня» Лаганского района Республики Калмыкия во время эпизоотии болезни. Выделенный вирус является новым штаммом возбудителя, выделенным на территории РФ. Полученный вирулентный штамм обозначен как штамм «Калмыкия 16» и депонирован в Государственной Коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии РАСХН под №3160.

Новый штамм «Калмыкия-16» характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические свойства. При электронно-микроскопических исследованиях в вируссодержащем материале обнаружены вирусные частицы, размером 300×250×200 нм, морфологически тождественные представителям рода Capripoxvirus семейства Poxviridae.

Культуральные свойства. Штамм «Калмыкия -16» размножается в первичных культурах почки и тестикул ягнят, а также в перевиваемой культуре клеток ПО. Репродукция вируса сопровождается цитопатическим действием, приводящим к образованию характерных «оспенных» поражений на 3-4 сутки культивирования. В культурах гетерологичного происхождения (ПС, МДВК, VERO) без предварительной адаптации вирус не размножается.

Инфекционная активность. Обладает высокой инфекционной активностью, при внутрикожном титровании на овцах титр вируса составляет 105,1ИД/см3, в культуре клеток ПО после адаптации накапливается 104,5-5,0 ТЦД50/см3.

Антигенные свойства. Вызывает образование вируснейтрализующих антител.

Гемаглютинирующие и гемадсорбирующие свойства. Не обладает.

Патогенность для человека. Не патогенен.

Патогенные свойства. Штамм патогенен для овец всех пород и возрастных групп.

Контагиозность. Штамм контагиозен для овец. Интактные овцы заболевают оспой овец при совместном содержании с инфицированными животными.

Контаминация бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами. Штамм не контаминирован бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами.

Способ и срок хранения, периодичность пассажей. Штамм хранят при минус 40°C и «освежают» на овцах. Периодичность освежения штамма один раз в 10 лет.

Молекулярно-генетическая характеристика.

Нуклеотидная последовательность гена GPCR (ген белка, относящегося к суперсемейству семиспиральных хемокиновых рецепторов) на 100% идентична последовательностям штаммов «Srinagar/2000 Р-5», «NISKHI», «Odisha/16», «Srinagar/2000 Р-40» вируса оспы овец.

Сущность изобретения поясняется следующими примерами.

Пример 1. Изучение биологических свойств штамма BOO «Калмыкия -16» (проверка патогенности для овец).

При внутрикожном заражении в дозе 500 ИД50/0,5 см3 инкубационный период составлял 3-5 дней. У 100% зараженных овец наблюдали угнетение, отсутствие аппетита, потерю веса и характерные оспенные поражения. У 30% зараженных животных наблюдали генерализованную форму течения болезни. Летальность составила 14%. При доброкачественном течении болезни и отсутствии осложнений наблюдали выздоровление, которое наступало на 21-28 сутки.

Пример 2. Штамм «Калмыкия - 2016» используют для получения гипериммунной сыворотки крови для диагностических исследований.

Гипериммунную сыворотку используют в качестве реагента для вирусологических реакций при обнаружении как вирусного антигена в пробах патологического материала от больных оспой овец и павших животных, а также в качестве положительного контроля в серологических реакциях.

Иммунизировали две группы овец: овцам первой группы подкожно вводили вирусвакцину против оспы овец сухую культуральную (штамм НИСХИ, клон Б-5/96) в прививной дозе. Через 14 суток овцам внутрикожно (в несколько точек) вводили по 500 ИД50/0,5 см3 эпизоотический штамм BOO штамма «Калмыкия -16».

Во 2 группу вошли овцы реконвалесценты. На 40 сутки с момента клинических проявлений болезни овцам вводили внутрикожно BOO штамма «Калмыкия -16» в дозе 500 ИД50/0,5 см3.

Динамику накопления антител в крови иммунизированных животных определяли РДП и РН (таблица №1).

Данные таблицы 1 свидетельствуют о том, что на 14 сутки после вакцинации у животных 1 группы титр ВНА составил 1:2. После внутрикожного введения эпизоотического вируса штамм Калмыкия-16 у вакцинированных овец, через 14 суток, активность сывороток в РДП была в разведении 1:2, а титр ВНА увеличился до 1:8.

При иммунизации животных группы №2 (реконвалесценитов) также отмечено значительное увеличение специфической активности сыворотки крови. Титр антител в РДП у переболевших животных достигал значений 1:2, в РН 1:8. После дополнительного внутрикожного введения эпизоотического вируса титры антител в РДП у этих животных оставались примерно на том же уровне, а в РН они возросли и составляли 1:32.

Результаты проведенных исследований показали, что сыворотку крови с высокой активностью можно получать при иммунизации эпизоотическим штаммом ОО «Калмыкия 16» вакцинированных и переболевших овец.

Пример 3. Секвенирование и филогенетический анализ гена GPCR вируса штамма «Калмыкия-16» вируса оспы овец.

Методом нуклеосорбции провели выделение ДНК из культурального материала, содержащего вирус оспы овец, штамм «Калмыкия-16». С использованием 2 пар праймеров GPCR1-GPCR2 и GPCR3-GPCR4 амплифицировали 2 фрагмента гена GPCR (ген белка, относящегося к суперсемейству семиспиральных хемокиновых рецепторов) вируса штамма «Калмыкия-16». Данные фрагменты секвенировали методом Сэнгера с использованием генетического анализатора «АВВ1 PRISM 3130» (Applied Biosystems, США) (Таблица 2). В результате получена нуклеотидная последовательность фрагмента гена GPCR размером 1000 п.о.: 5' -

С помощью программ «Bio Edit 6.0» и «Mega 5.0» провели выравнивание и филогенетический анализ полученной нуклеотидной последовательности с последовательностями гена GPCR штаммов вируса оспы овец, представленных в базе данных GenBank (www.ncbi.nlm.nih.gov).

Филогенетическое дерево строили по методу Максимальной экономии, достоверность распределения последовательностей по группам оценивали бутстрэп-анализом со 100-кратной повторностью (Рисунок 1).

На дереве видно, что изолят из Калмыкии находится в кластере штаммов вируса оспы овец, выделенных в Индии и Казахстане. Наибольшая степень нуклеотидной идентичности (100%) наблюдается со штаммами «Srinagar/2000 Р-5», «NISKHI», «Odisha/16», «Srinagar/2000 Р-40».

Источники информации

1. Hailat N., An outbreak of sheep pox associated with unusual winter conditions in Jordan./ N.Hailat, O.Al-Rawashdeh, S.Lafi and Z.Al-Rawashdeh // Trop.Anim.Health Prod. 1994. V. 26. P. - 79-80.

2. Garner M.G., The extent and impact of sheep pox and goat pox in the state of Maharashtra, India./ M.G. Garner, S.D. Sawarkar, E.K. Brett, J.R. Edwards, V.B. Kulkarni, V.B. Boyle and S.N.Singh // Trop.Anim.Health Prod.2000. V. 32. P. 205-223.

3. Cam V.M. Control of capripoxvirus infections / V.M. Carn, // Vaccine. - 1993. - V. - 11. - P. 1275-1279.

4. Subba Rao M.V., Antigenic relationships among sheep pox, goat pox and contagious pustular dermatitis viruses.. / M.V. Subba Rao and B.S. Malik, // Acta virol. 1984., 28. P. - 380-387.

5. Kitching R.P., Clinical and antigenic relationship between isolates of sheep and goat pox viruses / R.P. Kitching and W.P.Taylor. // Trop.Anim.Health Prod. 1985. 17. - P. - 64-74.

6. Gershon P.D., Physical characterization of genome of cattle of capripoxvirus / P.D. Gershon and D.N. Black, // Virology. - 1987. - V. - 160. - P. - 473-476.

7. Gershon P.D., A comparison of the genomes of capripoxvirus isolates of sheep, goats, and cattle/ P.D. Gershon and D.N. Black, // Virology. - 1988. - V. - 164. - P. - 341-349.

8. http://www.oie.int/wahis_2/public/wahid.php/Diseaseinformation/WI

Штамм «Калмыкия-16» вируса оспы овец семейства Poxviridae род Capripoxvirus, депонированный в Государственной Коллекции микроорганизмов Государственного научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под №3160, для проведения вирусологических, молекулярно-генетических и мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к вирусологии и ветеринарии. Предложен штамм вируса нодулярного дерматита крупного рогатого скота «Волгоградский» семейства Poxviridae, род Capripoxvirus, выделенный из патологического материала от больных коров из Волгоградской области и депонированный в Государственной коллекции микроорганизмов Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под №3161.

Настоящее изобретение относится к вирусологии и медицине. Предложен штамм вируса гриппа A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8, типа А, подтипа Н5, семейства Orthomyxoviridae, рода Influenzavirus, полученный в течение последовательного пассирования в 10-суточных эмбрионах СПФ-кур и депонированный в коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» под регистрационным номером штамм ВГП A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 (диагностический).

Настоящее изобретение относится к вирусологии и ветеринарии. Предложен штамм вируса инфекционной анемии цыплят «МЕ-77», выделенный из печени клинически больных цыплят-бройлеров из промышленного птицеводческого хозяйства ООО «Торгово-птицеводческая компания «Балтптицепром» (г.

Изобретение относится к областям медицинской вирусологии, биотехнологии и микробиологии и касается онколитического штамма вируса болезни Ньюкасла, способного селективно лизировать новообразования млекопитающих.

Настоящее изобретение относится к вирусологии и медицине. Предложен штамм А/Япония/ГК/6:2/2014 RA-36 (H2N2), Influenzavirus А, подтип H2N2, полученный методом классической генетической реассортации штамма-донора A/HongKong/1/68/162/35(H3N2) и эпидемического вируса A/Japan/305/1957 (H2N2) и депонированный в Государственную коллекцию вирусов ФГБУ «ФНИЦЭМ им.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложена композиция антибактериальная для продления срока годности охлажденной рыбы и снижения риска возникновения инфекций, передаваемых пищевым путем.

Настоящее изобретение относится к агробиотехнологии. Предложен набор синтетических олигонуклеотидов для выявления вируса крапчатости винограда (Grapevine fleck virus) с использованием метода полимеразной цепной реакции.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к аттенуированному штамму вируса зеленой крапчатой мозаики огурца. Изобретение позволяет эффективно защищать растения огурца от патогенных штаммов вируса зеленой крапчатой мозаики огурца.

Группа изобретений относится к биотехнологии и медицине. Предложены химерная вирусоподобная частица (VLP) папилломавируса человека (HPV), способ ее получения и извлечения, способы профилактики или лечения инфекции HPV или рака шейки матк, и индукции иммунного ответа у пациента, включающие введение предложенной HPV VLP, а также применение предложенной HPV VLP в указанных способах и в получении лекарственных средств для осуществления указанных способов.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается нового штамма вируса ящура Aphtae epizooticae типа А сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus.

Изобретение относится к вирусологии и ветеринарии. Предложен штамм вируса нодулярного дерматита крупного рогатого скота «Волгоградский» семейства Poxviridae, род Capripoxvirus, выделенный из патологического материала от больных коров из Волгоградской области и депонированный в Государственной коллекции микроорганизмов Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под №3161.

Настоящее изобретение относится к способу получения и очистки ортопоксвируса. Предложенный способ включает следующие этапы: приготовление культуры пакующих клеток; инфицирование культуры пакующих клеток ортопоксвирусом; культивирование инфицированных пакующих клеток до получения потомства ортопоксвируса; инкубация в присутствии одной или более нуклеаз до разрушения нуклеиновых кислот; выделение ортопоксвирусов из супернатанта культуры и/или пакующих клеток; добавление моновалентных солей в концентрации от 200 до 300 мМ в условиях, подходящих для ингибирования активности нуклеазы и для предотвращения адсорбции указанных ортопоксвирусов к анионообменному адсорбенту; осуществление контакта полученной смеси с анионообменным адсорбентом в условиях, подходящих для захвата нуклеиновых кислот.

Группа изобретений относится к фармацевтическим композициям, содержащим иммунизирующее количество инактивированного вируса ньюкаслской болезни и адъювант. Способ вакцинации кур или индеек против ньюкаслской болезни характеризуется тем, что он включает стадию проведения первичной вакцинации указанных кур или индеек вакциной, содержащей иммуногенное количество инактивированного вируса ньюкаслской болезни и адъювант типа «вода в масле», и стадию проведения бустерной вакцинации спустя 2-12 недель после указанной первичной вакцинации указанных кур или индеек вакциной, содержащей иммуногенное количество инактивированного вируса ньюкаслской болезни и адъювант типа «вода в масле».
Изобретение относится к медицинской вирусологии и микробиологии. Способ оценки противооспенной активности лечебно-профилактических препаратов включает введение в организм модельных животных контрольной и испытуемой групп по заданной схеме суспензии исследуемого противовирусного препарата.

Группа изобретений относится к области ветеринарии и предназначена для вакцинации птиц путем глазного введения. Заявленная композиция содержит один или более живых ослабленных вирусов и хитозан.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Новый штамм «КЭМ-7» вируса оспы кур получен путем многократных пассажей материнского вируса на развивающихся эмбрионах кур.

Изобретение относится к области биотехнологии, вирусологии и медицины. .

Изобретение относится к таким иммуногенным и вакцинным композициям, которые пригодны для использования у различных животных (мишеневых или хозяев) видов, восприимчивых к заболеванию, вызванному BTV, включая, но не ограничиваясь, млекопитающих, рептилий, птиц, в особенности людей, парных млекопитающих или животных, таких как, но не ограничиваясь, собак, кошек, лошадей, млекопитающих из зоопарков или животных, таких как морские млекопитающие, напр., тюлени, кошки, лошади, зоопарковые рептилии, такие как змеи, крокодилы, аллигаторы, и птичьи виды.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. .

Изобретения относятся к выделению экспрессированных бакуловирусами вирусоподобных частиц (VLP)безоболочечных вирусов из клеток насекомых и касаются способа выделения экспрессированных бакуловирусом VLP цирковируса свиней 2-го типа (PCV2) в клетках насекомых и способа получения экспрессированных бакуловирусами VLP PCV2. Представленный способ выделения экспрессированных бакуловирусом VLP PCV2 включает стадию смешивания клеток насекомых, выбранных из SF9 и SF21, с солью, где раствор соли в воде, полученный в результате смешивания, содержит от 300 мОсмоль/л до 600 мОсмоль/л соли, выбранной из группы, состоящей из NaCl, KCl, CaCl2 и MgCl2, и не включает стадий лизиса или разрушения клеток. Изобретения позволяют получать несекретируемые VLP в культуральную жидкость без необходимости выделения всей клеточной нуклеиновой кислоты и белкового содержимого. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 8 ил., 1 табл., 8 пр.

Настоящее изобретение относится к вирусологии и ветеринарии. Предложен штамм “Калмыкия-16” вируса оспы овец семейства Poxviridae рода Capripoxvirus, выделенный от больной овцы во время эпизоотии болезни в Республике Калмыкия и депонированный в Государственной коллекции микроорганизмов Государственного научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под номером 3160. Предложенный штамм может быть применен в качестве референс-штамма при проведении вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовлении вакцин и диагностических препаратов. 1 ил., 2 табл., 3 пр.

Наверх