Способ определения чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам

Изобретение относится к микробиологии и дезинфектологии и может быть использовано для оценки чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам. Способ предусматривает нанесение дозатором взвеси тестируемых микроорганизмов на поверхность чашки Петри и досушивание взвеси микроорганизмов. После подсушивания проводят обработку зараженной поверхности чашки дезинфицирующим средством путем орошения, протирания или погружения и временную выдержку. Затем в чашку Петри вносят раствор нейтрализатора, соответствующего химическому составу используемого дезинфицирующего средства, и спустя время выдержки добавляют растопленный и остуженный до 45°С агар. Чашку помещают в термостат при оптимальной температуре и после выдержки осуществляют учет количества выросших колоний. По результатам сравнения с данными, полученными с аналогично контамированной чашкой, обработанной так же, как опытная, но стерильной водопроводной водой, выносят суждение о чувствительности тестируемых микроорганизмов к дезинфицирующему средству. Снижение количества микроорганизмов от воздействия раствора дезинфицирующего средства на 99,00%-100% говорит об их чувствительности, а снижение менее 99,99% - о резистенции. Изобретение позволяет повысить точность способа определения. 1 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к области эпидемиологии, микробиологии и дезинфектологии и может быть использовано для оценки чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам при проведении в медицинских организациях соответствующего мониторинга.

Известен ускоренный способ оценки чувствительности микроорганизмов к дезинфектантам («Методические рекомендации по ускоренному определению устойчивости бактерий к дезинфекционным средствам» Утверждены руководителем департамента Госсанэпиднадзора Минздрава РФ 2000 г.). Способ основан на применении цветной питательной среды, изменяющей цвет под влиянием жизнедеятельности размножающихся бактерий. Эффективные концентрации дезинфектанта предотвращают накопление бактерий и сохраняют цвет среды. Известный способ характеризуется относительно низкой степенью достоверности результатов исследований, связанной с наличием бактериостатического эффекта, т.к. в нем не предусмотрено применение нейтрализатора, что не исключает бактериостатический эффект. Кроме того, не учитывается рекомендованное время воздействия дезинфицирующего средства для достижения гибели микроорганизма, что приводит к получению неправильных результатов.

Наиболее близким к изобретению является способ оценки чувствительности микроорганизмов к дезинфектантам (RU 2378363 С1 С 12N1/00, 2008 г.). Способ заключается в том, что тестируемую взвесь микроорганизмов наносят на поверхность, которую после подсушивания обрабатывают дезинфицирующим раствором. После этого через временную выдержку, необходимую для проявления дезинфицирующего эффекта, на поверхность наносят нейтрализатор дезинфицирующего средства (ДС) и через определенное время берут смыв с поверхности сухим стерильным тампоном, с помощью которого делают посев на питательную среду. Оценку чувствительности микроорганизмов к ДС судят по росту их колоний на питательной среде. Недостатком известного способа является относительно низкая степень достоверности результатов исследований, которая объясняется тем, что с помощью тампона невозможно обеспечить достаточную точность количественного посева смеси на твердую питательную среду, т.к. часть микроорганизмов остается на тестируемой поверхности, а часть - на тампоне. Кроме того, в известном способе необходимо использовать несколько открытых тест-объектов, контаминированных возбудителями инфекций, что приводит к риску биологического загрязнения окружающей среды и заражения медицинского персонала. Известная методика трудоемка, т.к. требует наличия и специальной подготовки тест-объектов к проведению исследований (мытье, упаковка, стерилизация).

Техническим результатом, которого можно достичь при осуществлении данного изобретения, является упрощение хода исследований, повышение уровня их безопасности и точности результатов исследований.

Технический результат достигается тем, что согласно способу определения чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам, заключающемуся в том, что на внутреннюю поверхность чашки Петри дозатором наносят взвесь тестируемых микроорганизмов, после подсушивания взвеси проводят обработку зараженной поверхности чашки соответствующим дезинфицирующим средством путем ее орошения, протирания или погружения, после окончания дезинфекционной выдержки в чашку Петри вносят раствор нейтрализатора, соответствующего химическому составу используемого дезинфицирующего средства, и через определенную временную выдержку добавляют растопленный и остуженный до 45°С агар, затем чашку помещают в термостат при оптимальных для роста тестируемого микроорганизма температуре и времени, после чего осуществляют учет количества выросших на чашке Петри колоний и сравнивают результаты с данными, полученными с аналогично контамированной чашкой, обработанной так же, как опытная, но не раствором дезинфицирующего средства, а стерильной водопроводной водой, по результатам сравнения выносят суждение о чувствительности тестируемых микроорганизмов к дезинфицирующему средству при снижении количества микроорганизмов от воздействия раствора дезинфицирующего средства на 99,00-100%, а при менее 99,99% - об их резистенции.

В патентных источниках информации не обнаружено сведений о данном способе определения чувствительности, что позволяет сделать вывод о соответствии данного способа критериям охраноспособности.

В качестве тест-объекта используют чашку Петри, а в качестве тест-организма - культуры микроорганизмов, выделенные из клинического материала и объектов внешней среды - грамотрицательные и грамоположительные бактерии, включая микробактерии туберкулеза, грибы рода Кандида.

Для нейтрализации антимикробного действия ДС для различных химических групп применяют следующие:

- для средства из группы окислителей - 0,5-1% растворы тиосульфата натрия;

- для альдегид- и фенолсодержащих средств - воду, универсальный нейтрализатор, содержащий твин - 80-3%, сапонин - 3%, гистидин - 0,1% и цистеин - 0,1%;

- для катионных поверхностно-активных веществ - 0,1-1,0% растворы сульфонола или 0,5-1,0% растворы сольфонола с 10% обезжиренного молока.

Способ осуществляют следующим образом.

Оценку чувствительности выделенных (с объектов внутрибольничной среды или от больного) и идентифицированных микроорганизмов проводят к дезинфицирующему средству, применяемому в медицинской организации или предлагаемому на его замену.

Если средство предназначено для дезинфекции поверхностей или посуды на внутреннюю поверхность чашки Петри площадью, например, 80 см2 дозатором (пипеткой) наносят 0,4 мл 2 млрд суспензии микроорганизмов и равномерно распределяют ее по поверхности стерильным стеклянным шпателем. Если ДС предназначено для дезинфекции медицинских изделий, на поверхность чашки наносят 0,1 мл суспензии микроорганизмов с добавлением 40% инактивированной лошадиной сыворотки.

После подсушивания обработку зараженной поверхности чашки проводят по режиму и способу, рекомендованному в Инструкции по применению средства (орошение, протирание или погружение), соблюдая режим и рекомендованные нормы расхода соответственно выбранному способу.

После окончания дезинфекционной выдержки чашку заливают 8 мл раствора нейтрализатора, соответствующего данному ДС, и делают несколько круговых движений чашкой для лучшего смачивания ее поверхности. Через определенную временную выдержку, необходимую для действия нейтрализатора, например 10 мин, жидкость заливают растопленным и остуженным до 45°С агаром. Посевы выдерживают в термостате при температуре и времени, оптимальных для роста тестируемого микроорганизма, после чего проводят учет результатов, вынося суждение о его чувствительности либо резистенции.

При анализе результатов подсчитывают количество выросших на чашке Петри колоний и сравнивают полученные данные с аналогично контаминированной чашкой, обработанной так же, как опытная, но не раствором ДС, а стерильной водопроводной водой. Если гибель микроорганизма составляет 99,99% для средств, предназначенных для дезинфекции поверхностей, и 100% для средств, предназначенных для дезинфекции медицинских изделий (отсутствие роста во всех пробах), выделенный штамм микроорганизма считают чувствительным к действию ДС, если менее 99,99 и 100% (наличие роста в одной или более проб) - устойчивым.

В клинике выделен и идентифицирован микроорганизм A.baumanii. Для дезинфекции в этой организации применяли средство, содержащее в своем составе 18% алкилдиметилбензиламмоний хлорида - четвертичного аммониевого соединения (ЧАС). В Инструкции по применению этого средства рекомендован режим для обеззараживания поверхностей: концентрация - 0,2%, время действия - 60 мин, способ обработки - протирание, норма расхода - 150-200 мл/м2. Оценка чувствительности выделенного микроорганизма A.baumanii произведена по способу согласно изобретению. Одновременно оценена чувствительность микроорганизма P.aeruginosa - штамм из коллекции микроорганизмов ФБУН НИИ Дезинфектологии Роспотребнадзора к тому же дезинфицирующему средству и в том же режиме применения. Результат представлен в таблице.

Полученные данные свидетельствуют, что к воздействию алкилдиметилбензиламмоний хлорида тест-микроорганизм P.aeruginosa чувствительный (после воздействия ДС жизнеспособные микроорганизмы не выявлены), a A.baumanii - резистентный, т.к. после воздействия ДС микроорганизм выживает).

Пример 1.

В медицинской организации (ФГАУ «Лечебно-реабилитационный центр» МЗ РФ) выделили циркулирующий во внутрибольничной среде и вызывающий заболевания штамм Klebsiella pneumoniae. Чтобы оценить эффективность проводимых дезинфекционных мероприятий, необходимо оценить чувствительность этого микроорганизма к применяемому дезинфицирующему средству.

Применяемое в медицинской организации средство («ЭКОН-ДЕЗ») содержит в своем составе: четвертичные аммониевые соединения - 14,7%, N,N-бис-(3-аминопропил)додециламин - 6%, полигексаметиленгидрохлорид - 4% и применяется для дезинфекции поверхностей в помещении способом протирания в концентрации 0,5% при дезинфекционной выдержке 10 мин.

Постановка эксперимента.

Две стерильные чашки Петри (одна - опытная, вторая - контрольная) на поддоне располагают на лабораторном столе. На дно обеих чашек Петри (площадь 80 см2) дозатором наносят по 0,4 мл 2-млрд. суспензии суточной культуры микроорганизма и подсушивают в течение 60 мин. Затем дно опытной чашки протирают салфеткой, смоченной 0,5% раствором средства, а дно контрольной чашки - салфеткой, смоченной стерильной водопроводной водой. Через 10 мин в чашки вносят по 5 мл раствора нейтрализатора, содержащего 0,5% сульфонола, выдерживают 10 мин, затем заливают растопленным и остуженным до 45°С агаром. После застывания агара чашки помещают в термостат и культивируют в течение 48 часов.

В опытной чашке Петри выросло 39 КОЕ, в контрольной чашке - 2×105 КОЕ.

Заключение. Выделенная в медицинской организации культура Klebsiella pneumoniae резистентна к воздействию применяемого средства, так как снижение количества микроорганизмов составило 99,96%, что менее существующего критерия эффективности для дезинфицирующих средств - 99,99%.

Таким образом, проведение всех этапов исследований в одной чашке Петри, моделирующей любой тест-объект (посуду, поверхности, медицинские изделия), который можно обработать любым способом (орошением, протиранием, погружением), и возможность введения нейтрализатора с последующим контролем обеззараживания (заливанием питательной среды в ту же чашку Петри, в которой не теряется ни одного микроорганизма, в отличие от контроля обеззараживания методом смыва салфеткой либо тампоном), позволяет получить более точный результат эксперимента, улучшить экологию окружающей среды (контаминированная чашка все время накрыта крышкой) и снизить трудоемкость проведения исследований.

Применение данной методики позволит более эффективно вести мониторинг устойчивости к дезинфицирующим средствам микроорганизмов, циркулирующих в медицинских организациях.

Способ определения чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам, заключающийся в том, что на внутреннюю поверхность чашки Петри дозатором наносят взвесь тестируемых микроорганизмов, после подсушивания взвеси проводят обработку зараженной поверхности чашки соответствующим дезинфицирующим средством путем ее орошения, протирания или погружения, после окончания дезинфекционной выдержки в чашку Петри вносят раствор нейтрализатора, соответствующего химическому составу используемого дезинфицирующего средства, и через определенную временную выдержку добавляют растопленный и остуженный до 45°C агар, затем чашку помещают в термостат при оптимальных для роста тестируемого микроорганизма температуре и времени, после чего осуществляют учет количества выросших на чашке Петри колоний и сравнивают результаты с данными, полученными с аналогично контамированной чашкой, обработанной так же, как опытная, но не раствором дезинфицирующего средства, а стерильной водопроводной водой, по результатам сравнения выносят суждение о чувствительности тестируемых микроорганизмов к дезинфицирующему средству при снижении количества микроорганизмов от воздействия раствора дезинфицирующего средства на 99,00%-100%, а при менее 99,99% - об их резистенции.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии. Питательная среда для выделения бактерий Yersinia enterocolitica содержит пептон, дрожжевой экстракт, маннит, натрия пируват, натрия хлорид, магния сульфат, натрия дезоксихолат, нейтральный красный, кристаллический фиолетовый, агар-агар, иргасан, дополнительно содержит гидролизат панкреатический мяса с содержанием аминного азота 0,15%, «Монаспор», новобиоцина натриевую соль, аспарагин, глицерин и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов.

Изобретение относится к микробиологии. Питательная среда для культивирования чумного микроба содержит кислотный гидролизат водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, натрий сернистокислый, агар микробиологический и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ исследования повышения антибиотикочувствительности условно-патогенной микрофлоры пробиотиком Lactobacillus acidophilus LA-5 in vitro предусматривает использование супернатанта молочнокислой кормовой добавки, содержащей культуру микроорганизмов Lactobacillus acidophilus LA-5, полученного в разные сроки роста культуры в 1, 10, 20 и 30 день.

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Проводится идентификациия цитрат-ассимилирующих энтеробактерий, изолированных при микробиологической диагностике дисбиотических состояний кишечника (дисбактериозов) у детей и взрослых.

Изобретение относится к области микробиологии. Предложен способ получения трехмерных структур, используемых для детекции, выделения или подсчета микроорганизмов.

Изобретение относится к биотехнологии. Универсальная питательная среда для культивирования коринебакетрий, нокардий и родококков содержит панкреатический гидролизат кильки, Д- глюкозу, KH2PO4, MgSO4, водный голубой, натрий углекислый, агар микробиологический, геотермальная вода, стерильная деффибринированная кровь животных и парафин в заданном соотношении компонентов.
Изобретение относится к медицинской микробиологии и представляет собой набор, содержащий авирулентные штаммы Yersinia pestis подвида pestis биовара orientalis КМ 2011, подвида pestis биовара antiqua КМ 2008, КМ 2012, КМ 260 (12), КМ 130(3), подвида pestis биовара medievalis КМ 2010, КМ 2014, КМ 2024, подвида caucasica КМ 2013, штаммы Yersinia pseudotuberculosis КМ 2004, КМ 2005, КМ 2006, Yersinia enterocolitica КМ 2007 и штамм Pasteurella multocida КМ 2003, депонированные в Государственной коллекции патогенных бактерий «Микроб».

Изобретение относится к области биохимии. Описан способ дифференциации штаммов Yersinia pestis на основной и неосновные подвиды методом ПЦР в режиме реального времени.

Изобретение относится к области биохимии и молекулярной биологии, в частности к набору олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченого зонда. Указанный набор предназначен для идентификации ДНК возбудителя бластомикоза Blastomyces dermatitidis методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов.
Изобретение относится к области биохимии. Предложено биосенсорное устройство для обнаружения биологических микро- и нанообъектов, таких как бактерии и вирусы.

Изобретение относится к области медицины, а именно санитарии и дезинфектологии, и предназначено для обеззараживания воздушной среды и поверхностей в помещениях аэрозолированием.
Изобретение относится к области синтеза сшитых полимеров полигуанидинового ряда и может быть использовано в качестве основы для создания новых лекарственных форм.

Группа изобретений относится к биотехнологии, а именно к многокомпонентным системам для образования перкислот, содержащим ацетилксиланэстеразы и их варианты, обладающие пергидролитической активностью, и способу получения пероксикарбоновых кислот.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно санитарии и дезинфекции, и предназначено для дезинфекции объектов ветеринарного надзора. Способ дезинфекции объектов ветеринарного надзора включает их обработку дезинфицирующим средством при расходе дезинфицирующего средства 0,03-0,05 л/м2.

Изобретение относится к области медицины, а именно к ветеринарии и санитарии, и предназначено для дезинфекции объектов ветеринарного надзора. Способ дезинфекции объектов ветеринарного надзора включает их обработку дезинфицирующим средством при расходе дезинфицирующего средства 0,03-0,05 л/м2, содержащим раствор оксидантов, синтезированный из 5,0-10,0%-ного раствора натрия хлорида, подвергнутого воздействию постоянного электрического тока с интенсивностью, обеспечивающей достижение величин окислительно-восстановительного потенциала +1000±50 мВ, и соли металлов, с последующей 55-65 мин экспозицией.

Изобретение относится к области медицины, а именно к ветеринарии и санитарии, и предназначено для дезинфекции объектов ветеринарного надзора. Способ дезинфекции объектов ветеринарного надзора включает их обработку дезинфицирующим средством при расходе дезинфицирующего средства 0,03-0,05 л/м2, содержащим раствор оксидантов, синтезированный из 5,0-10,0%-ного раствора натрия хлорида, подвергнутого воздействию постоянного электрического тока с интенсивностью, обеспечивающей достижение величин окислительно-восстановительного потенциала +1000±50 мВ, и соли металлов с последующей 55-65 мин экспозицией.

Группа изобретений относится к биотехнологии, а именно к многокомпонентным системам для образования перкислот, содержащим ферментативный катализатор, обладающий пергидролитической активностью, и способу получения пероксикарбоновых кислот.

Группа изобретений относится к биотехнологии, а именно к многокомпонентным системам для образования перкислот, содержащим ферментативный катализатор, обладающий пергидролитической активностью, и способу получения пероксикарбоновых кислот.

Группа изобретений относится к биотехнологии, а именно к многокомпонентным системам для образования перкислот, содержащим ферментативный катализатор, обладающий пергидролитической активностью, и способу получения пероксикарбоновых кислот.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к санитарии и дезинфекции, и предназначено для дезинфекции объектов ветеринарного надзора. Способ дезинфекции объектов ветеринарного надзора включает их обработку дезинфицирующим средством при расходе дезинфицирующего средства 0,03-0,05 л/м2.

Изобретение относится к области дезинфектологии и может быть использовано в медицинских и санитарно-профилактических учреждениях, на предприятиях пищевой и перерабатывающей промышленности в качестве устройства для обеззараживания рук. Устройство для обеззараживания рук содержит корпус, в верхней части которого имеется щель, предназначенная для опускания рук в камеру. На стенках внутренней поверхности камеры закреплены фиксаторы 2, предназначенные для установки трубок 3 с распылительными форсунками. Одни из концов трубок 3 закрыты, а открытые концы трубок соединены посредством гибкого шланга 4 с электромагнитным клапаном 5, регулирующим подачу в камеру антисептика. При опускании рук в щель корпуса срабатывает индикатор присутствия рук 6, по сигналу с которого зажигается первый световой индикатор 8 и открывается электромагнитный клапан 5, обеспечивающий подачу аэрозоля из баллона в камеру. По окончании процесса распыления электромагнитный клапан 5 выключается и гасится световой индикатор 8, а через определенную временную выдержку включается подача воздуха с узла 9 и зажигается световой индикатор 10. По окончании режима нагнетания воздуха в камеру гасится световой индикатор 10 и включается индикатор 11, свидетельствуя об окончании процесса обработки рук. Изобретение обеспечивает сокращение расхода используемого кожного антисептика для качественного обеззараживания рук при одновременном снижении времени их обработки. 1 з.п. ф-лы, 2 ил.

Изобретение относится к микробиологии и дезинфектологии и может быть использовано для оценки чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам. Способ предусматривает нанесение дозатором взвеси тестируемых микроорганизмов на поверхность чашки Петри и досушивание взвеси микроорганизмов. После подсушивания проводят обработку зараженной поверхности чашки дезинфицирующим средством путем орошения, протирания или погружения и временную выдержку. Затем в чашку Петри вносят раствор нейтрализатора, соответствующего химическому составу используемого дезинфицирующего средства, и спустя время выдержки добавляют растопленный и остуженный до 45°С агар. Чашку помещают в термостат при оптимальной температуре и после выдержки осуществляют учет количества выросших колоний. По результатам сравнения с данными, полученными с аналогично контамированной чашкой, обработанной так же, как опытная, но стерильной водопроводной водой, выносят суждение о чувствительности тестируемых микроорганизмов к дезинфицирующему средству. Снижение количества микроорганизмов от воздействия раствора дезинфицирующего средства на 99,00-100 говорит об их чувствительности, а снижение менее 99,99 - о резистенции. Изобретение позволяет повысить точность способа определения. 1 табл., 1 пр.

Наверх