Лекарственная композиция цитопротекторного действия и способ ее получения



Лекарственная композиция цитопротекторного действия и способ ее получения
Лекарственная композиция цитопротекторного действия и способ ее получения
Лекарственная композиция цитопротекторного действия и способ ее получения
Лекарственная композиция цитопротекторного действия и способ ее получения
Лекарственная композиция цитопротекторного действия и способ ее получения
Лекарственная композиция цитопротекторного действия и способ ее получения
Лекарственная композиция цитопротекторного действия и способ ее получения
Лекарственная композиция цитопротекторного действия и способ ее получения
Лекарственная композиция цитопротекторного действия и способ ее получения
Лекарственная композиция цитопротекторного действия и способ ее получения

Владельцы патента RU 2651047:

Общество с ограниченной ответственностью "Научно-технологическая фармацевтическая фирма "ПОЛИСАН" (RU)

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине и представляет собой лекарственную композицию цитопротекторного действия в виде водного раствора, содержащую инозин, никотинамид, рибофлавина мононуклеотид натрия, янтарную кислоту и биологически активное соединение. Согласно изобретению в качестве биологически активного соединения она содержит димеглюмина сукцинат формулы [HOCH2(CHOH)4CH2NH2CH3]+2[OOC(CH2)2COO]2-, причем компоненты в композиции находятся в определенном соотношении, в мас. %. Изобретение обеспечивает получение композиции, обладающей высокой биологической активностью, безопасностью и стабильностью. 2 н.п. ф-лы, 7 табл., 27 пр.

 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине, в частности, к лекарственной композиции в виде водного раствора, обладающей цитопротекторным действием и содержащей в качестве активных компонентов: димеглюмина сукцинат, никотинамид, инозин и рибофлавина мононуклеотид, а также к способу ее получения. Композиция обладает безопасностью и стабильностью и может быть использована для лечения широкого спектра заболеваний, связанных с нарушениями энергетического обмена.

Известно большое количество комбинированных лекарственных средств для парентерального введения, содержащих янтарную кислоту и/или ее соли - сукцинаты и обладающих широким спектром цитопротекторного действия.

Так, известны инъекционные лекарственные препараты нейротропного и антигипоксического действия, содержащие янтарную кислоту в комбинации с витаминами и витаминоподобными компонентами (ЕА 00879, KP 20130035514, RU 2380089, RU 2331414, RU 2497522, RU 2108095, RU 2383331, RU 2205640, RU 2440115), а также комбинированные ноотропные (RU 2372913, RU 2359669), иммунотропные (RU 2526184, RU 2395278, RU 2527329, RU 2411944) и гепатопротекторные препараты (JP 09/188.664, ЕА 007865).

Известен также препарат на основе янтарной кислоты для лечения нарушений минерального (RU 2481831) и метаболического обмена (JP 2013189437, RU 2404761, RU 2351323), а также коррекции микроциркуляции (RU 2549448).

Кроме того, сукцинаты применяются в качестве вспомогательных компонентов для стабилизации офтальмологических капель (RU 25113997), растворов солей кальция для внутривенного введения (RU 2481831), антибиотиков и антисептиков (CN 105287371, CN 104414965, RU 2339730, RU 2526184, RU 2327453, RU 2114617, RU 2333003, RU 2361579), противораковых (RU 2478370), противотуберкулезных препаратов (WO 2014014434), а также широко используются в качестве компонентов инфузионных растворов для диализа (JP 2010-042124, RU 2536994, RU 2549448, RU 2311202, RU 2521361).

Наиболее близким по составу к заявляемой композиции, является комплексный лекарственный препарат цитопротекторного действия, взятый в качестве прототипа, содержащий смесь метаболитов в виде соли янтарной кислоты, инозина и комплекса витаминов (ЕА 001099 «Инъекционное лекарственное средство «Цитофлавин», обладающий цитопротекторным действием») следующего состава, масс. %:

Янтарная кислота 9,5-10,5
Инозин 1,9-2,1
Никотинамид 0,95-1,05
Рибофлавина мононуклеотид натрия 0,19-0,21
Натрия гидроокись 3,3-3,7
N-метилглюкамин 15,7-17,3
Вода для инъекций до 100,0

Необходимо отметить, что указанная композиция имеет ряд существенных недостатков. Так, она содержит 8,5 ммоль ионов натрия в одной ампуле и при введении рекомендованных разовых дозировок прототипа до 40 мл в виде инфузий, приготовленных в 500 мл 0,9% физиологического раствора, может привести к увеличению содержания ионов натрия до 220 ммоль/л в приготовленном растворе (при физиологической норме 135-150 ммоль/л) и формированию нарушений ионного баланса организма - гипернатриемии с развитием возможной гипергидратации органов и тканей и формированию побочных эффектов -нарушения сознания, очаговой неврологической симптоматики, отеков.

Кроме того, известный лекарственный препарат производят с использованием технологии асептического розлива. При этом существует достаточно высокая вероятность контаминации микроорганизмами в процессе приготовлении препарата, так как стерилизующая фильтрация с использованием стандартного фильтра с размером пор 0,22 мкм хотя и создает надежный барьер для бактерий, но часто не удерживает споры, вирусы и микоплазмы.

Более того, содержащиеся в составе прототипа янтарная кислота, инозин, никотинамид и рибофлавина мононуклеотид являются субстратами и факторами роста микроорганизмов, что дополнительно повышает возможность микробной контаминации. Несмотря на высокий риск микробной контаминации, очевидно, что отказ в процессе производства такого препарата от термической стерилизации, обусловлен наличием в композиции термолабильного рибофлавина мононуклеотида и неустойчивых к гидролизу инозина и никотинамида (Справочник биохимика. Доссон Р., Эллиот Д. и др. М.: Мир, 1991).

Ввиду того, что предлагаемая лекарственная композиция может быть использована в терапии критических состояний и в педиатрической практике, требуется минимизация микробной контаминации и рисков возникновения побочных эффектов в результате образования продуктов разложения ее компонентов.

На практике часто используют способы получения лекарственных препаратов, которые содержат термолабильные лекарственные вещества, включающие этап растворения активных компонентов без нагревания, с последующей стерилизующей фильтрацией и асептическим розливом, не позволяющие применить стандартные режимы термической стерилизации.

В настоящее время для таких препаратов используются технологии стерилизации с применением комбинированных способов воздействия на микроорганизмы: температурные, химические, гамма-излучение, ультразвук и другие методы, позволяющие сохранить фармакологическую активность и качество препарата.

Так, в заявке RU 2001117337 предлагается вариант радиационной стерилизации растворов, в патенте RU 2519841 - стерилизация СВЧ - сверхвысокочастотным излучением. В заявке RU 2006142783 стерилизация осуществляется за счет обработки импульсными высоковольтными разрядами, генерирующими стерилизующее УФ излучение, а в заявке RU 2000130091 предлагается способ электрохимической стерилизации жидкостей.

В настоящее время для стерилизации нестабильных водных растворов используются также комбинации режимов термической и физической стерилизации, так в патенте RU 2238108 нагрев осуществляют воздействием электромагнитного поля СВЧ, а стерилизацию осуществляют электромагнитным полем КВЧ. В заявке RU 2003115619 предложен оригинальный комбинированный способ стерилизации, путем воздействия электрического поля и акустической вибрации.

Однако, поскольку многие комбинированные нестандартные методы стерилизации не дают высокой гарантии отсутствия микробной контаминации лекарственного препарата, дополнительно в раствор часто добавляют разрешенные международными фармакопеями антимикробные консерванты: бензиловый спирт (RU 2209070, RU 210550, RU 2326669, RU 2192855, US 20150126466, UA 26343), бензалкония хлорид (RU 2419417, UA 26343), хлор-бутанол (UA 26343), метакрезол (RU 2093144), крезол (RU 2020954), фенол (RU 2111012). Такой способ позволяет стерилизовать термолабильные лекарственные препараты при нестандартных температурных режимах, но имеет весьма существенный недостаток - ограничение к медицинскому применению, особенно в педиатрической практике (ГФ XIII, ОФС.1.1.0016.15 Стерилизация) ввиду добавления в состав препарата консерванта.

В настоящее время наиболее широко используемым методом финишной стерилизации в промышленном производстве инъекционных и инфузионных лекарственных препаратов является термическая стерилизация насыщенным водяным паром под давлением (автоклавирование). Параметры этого процесса регламентированы в международных фармакопеях (ГФ XIII, ЕР 9.0, USP 39). Стандартную стерилизацию насыщенным паром водных растворов лекарственных препаратов осуществляют при температуре 120-122°С под давлением в течение 8-15 минут в зависимости от физико-химических свойств и других параметров объекта термической стерилизации, позволяющий получить стабильный и качественный продукт.

Известно, что для композиций, содержащих термолабильные компоненты при производстве стерильных растворов лекарственных препаратов одним из наиболее критических процессов, приводящих к образованию неприемлемого уровня нежелательных примесей (продуктов разложения), снижающих безопасность применения препарата, является процесс финишной термической стерилизации, задачей которого является полное уничтожение всех видов микроорганизмов и их спор.

Разработка эффективных многокомпонентных препаратов в виде раствора для внутривенного введения является важной задачей современной медицины. Создание лекарственных композиций существенно затрудняется тем, что часто используются достаточно нестабильные в водных растворах и чувствительные к стрессовым факторам (температура, рН, окислители, свет) компоненты, что обычно приводит к разложению и химическому взаимодействию их между собой, автокатализу химических превращений, с образованием нежелательных продуктов разложения на всех стадиях производства лекарственного препарата.

Задачей изобретения является создание лекарственной композиции цитопротекторного действия в виде водного раствора, обладающего высокой биологической активностью, безопасностью и стабильностью, а также разработка способа получения композиции.

Поставленная задача решается тем, что лекарственная композиция цитопротекторного действия в виде водного раствора, содержащая инозин, никотинамид, рибофлавина мононуклеотид натрия, согласно изобретению, дополнительно содержит в качестве активного компонента соединение димеглюмина сукцинат формулы:

[НОСН2(СНОН)4CH2NH2CH3]+2[ООС(СН2)2СОО]2- при следующем соотношении компонентов, масс. %:

Димеглюмина сукцинат 38,76-47,37
Инозин 1,80-2,20
Никотинамид 0,90-1,10
Рибофлавина мононуклеотид натрия 0,18-0,22
Вода для инъекций до 100,0

Также поставленная задача решается тем, что в способе получения лекарственной композиции цитопротекторного действия путем растворения активных компонентов воде для инъекций с последующей стерилизующей фильтрацией, согласно изобретению, в композицию дополнительно вводят янтарную кислоту до получения стабильного раствора со значением рН в диапазоне от 6,0 до 7,0 и проводят термическую стерилизацию при температуре от 100 до 116°С.

Заявленная лекарственная композиция содержит новое биологически активное соединение на основе янтарной кислоты - димеглюмина сукцинат (ди-N-(1-дезокси-D-глюцитол-1-ил)-N-метиламмония сукцинат) формулы:

[НОСН2(СНОН)4CH2NH2CH3]+2[ООС(СН2)2СОО]2-.

Синтез соединения осуществляют согласно схеме химической реакции, представленной на рисунке 1:

Пример 1. Для получения димеглюмина сукцината в реактор емкостью 1000 л загружают 150 кг (0,7684 кг/моль) меглюмина (Р N002809/01-241212) и 500 л спирта метилового (ГОСТ 2222-95, марка А). Массу нагревают при перемешивании до полного растворения меглюмина. К полученному раствору при дальнейшем перемешивании в течение 30 минут добавляют 45,4 кг (0,3842 кг/моль) янтарной кислоты (Р N002810/01-130612). Перемешивание продолжают в течение одного часа, при этом происходит образование белых кристаллов целевого продукта. После выдержки в течение одного часа кристаллы отфильтровывают на центрифуге и сушат под вакуумом 0,085-0,09 МПА, при температуре 50-55°С. Всего получают 190,5 кг димеглюмина сукцината (выход - 97,5%).

Физико-химические свойства димеглюмина сукцината приведены в таблице 1, структурная формула представлена на рисунке 2.

Хорошая растворимость димеглюмина сукцината в воде и физиологически приемлемое значение рН водных растворов (7,1-7,2), делает его пригодным для лекарственных препаратов для внутривенного введения.

В настоящем изобретении впервые показано, что новое химическое соединение формулы: [НОСН2(СНОН)4CH2NH2CH3]+2[ООС(СН2)2СОО]2- может быть использовано в качестве биологически активного компонента лекарственной композиции цитопротекторного действия.

Включение в состав лекарственной композиции нового активного компонента - димеглюмина сукцината, не содержащего ионы натрия, позволяет снизить токсичность композиции и, следовательно, минимизировать риск развития побочных явлений, связанных гипернатриемией, и тем самым расширить область ее использования в медицинской практике.

Оптимальное количественное содержание димеглюмина сукцината и других компонентов в заявленной композиции определено опытным путем и описано в примерах 2-4.

Биологическая активность и безопасность заявленной композиции исследована в опытах 1 и 2.

В способе получения заявленной композиции, авторами предложено использовать в качестве стабилизатора янтарную кислоту, которая позволяет наряду с получением стабильного раствора с физиологически приемлемым диапазоном показателя рН, применить термическую стерилизацию раствора в широком диапазоне температур, что минимизирует микробную контаминацию и риски возникновения побочных эффектов в результате образования продуктов разложения ее компонентов. В результате повышена безопасность готового раствора и, следовательно, лекарственная композиция может быть использована в терапии критических состояний и в педиатрической практике.

Оптимальное количественное содержание стабилизатора при получении заявленной композиции определено опытным путем и описано в примерах: 6-21 и 22-27.

Изобретение осуществляют следующим образом.

Для получения лекарственных композиций, включающих димеглюмина сукцинат, приготавливают водные растворы согласно примерам 2-4.

Пример 2. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 38,76 кг димеглюмина сукцината, 1,8 кг инозина, 0,9 кг никотинамида, 0,18 кг рибофлавина мононуклеотида, доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, в асептических условиях композицию разливают в стерильные ампулы по 10 мл, запаивают. Каждая ампула содержит - 3876 мг димеглюмина сукцината (38,76 масс. %), инозина 180 мг (1,8 масс. %), никотинамида 90 мг (0,9 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 18 мг (0,18 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 3. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 43,0 кг димеглюмина сукцината, 2,0 кг инозина, 1,0 кг никотинамида, 0,2 кг рибофлавина мононуклеотида, доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, в асептических условиях композицию разливают в стерильные ампулы по 10 мл, запаивают. Каждая ампула содержит - 4300 мг димеглюмина сукцината (43,0 масс. %), инозина 200 мг (2,0 масс. %), никотинамида 100 мг (1,0 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 20 мг (0,2 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 4. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 47,37 кг димеглюмина сукцината, 2,2 кг инозина, 1,1 кг никотинамида, 0,22 кг рибофлавина мононуклеотида, доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, в асептических условиях композицию разливают в стерильные ампулы по 10 мл, запаивают. Каждая ампула содержит -4737 мг димеглюмина сукцината (47,37 масс. %), инозина 220 мг (2,2 масс. %), никотинамида 110 мг (1,1 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 22 мг (0,22 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Полученный раствор (примеры 2-4), содержащий в качестве активного компонента соединение димеглюмина сукцинат, содержит существенно меньшее количество ионов натрия по сравнению с составом по прототипу (около 0,04 ммоль на ампулу 10 мл против 8,5 в прототипе в пересчете на ампулу 10 мл), что снижает токсичность лекарственной композиции.

Для изучения стабильности заявляемой композиции, состав, полученный по примеру 3, закладывали в климатическое оборудование Binder KBF 720 при различных условиях хранения (40±2)°С и (25±2)°С. Результаты представлены в таблице 2.

Количественное содержание димеглюмина сукцината, никотинамида, инозина, неидентифицированных примесей и гипоксантина определяли методом ВЭЖХ при следующих условиях: спектрофотометрический детектор, длина волны 254 нм, рефрактометрический детектор, хроматографическая колонка Phenomenex Luna Phenyl-Hexyl длиной 250 мм с внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная сорбентом зернением 5 мкм, или аналогичная; скорость потока элюента 0,7 мл/мин, температура колонки 25°С; время хроматографирования 30 мин. Количественное содержание рибофлавина мононуклеотида определяли спектрофотометрическим методом в кювете с толщиной слоя 1 см в максимуме поглощения при длине волны 445±2 нм.

Композиция считалась безопасной для внутривенного введения, если по истечении срока наблюдения в различных условиях хранения концентрации активных компонентов составляли не менее 95,0% от исходного значения, а содержание неидентифицированных примесей не превышало 2,0%.

При хранении в условиях ускоренного старения при (40±2)°С происходит незначительное снижение количества активных компонентов, но наблюдается образование неидентифицированных примесей в количестве более 2,0% (табл. 2), что свидетельствует о потенциальном риске возникновения побочных эффектов.

В условиях естественного хранения заявленная композиция стабильна в течение 2 лет, однако, как и препарат по прототипу, она получена в условиях асептического розлива без финишной стерилизации, т.е. с потенциальной высокой вероятностью контаминации микроорганизмами.

Попытка уменьшить риск контаминации микроорганизмами в условиях асептического розлива лекарственной композиции и путем введения в состав вспомогательных компонентов, являющихся химическими консервантами, таких как бензиловый спирт, бензалкония хлорид, крезол, пропиленгликоль в концентрации 0,5-5,0 масс. % оказалась неудачной, так как при их добавлении происходило изменение цвета раствора и выпадение осадка, что свидетельствовало о химическом взаимодействии активных компонентов со вспомогательными.

Попытка стерилизации предлагаемой композиции альтернативными методами стерилизации (радиационная, СВЧ) также оказалась неудачной вследствие быстрой деградации активных компонентов и в первую очередь рибофлавина мононуклеотида натрия с изменением окраски раствора от желтого до темно-коричневого, критическим увеличением неидентифицированных примесей (продуктов разложения) и осадка.

На следующем этапе проводились исследования влияния различных режимов термической стерилизации препарата на его стабильность. Для этого готовили композицию в ампулах по примеру 5.

Пример 5. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 43,0 кг димеглюмина сукцината, 2,0 кг инозина, 1,0 кг никотинамида, 0,2 кг рибофлавина мононуклеотида, доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы по 10 мл. Каждая ампула содержит - 4300 мг димеглюмина сукцината (43,0 масс. %), инозина 200 мг (2,0 масс. %), никотинамида 100 мг (1,0 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 20 мг (0,2 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %. Далее ампулы с композицией, были разделены на 3 части и подвергнуты термической стерилизации водяным паром под давлением в следующих режимах: 121±1°С, 8 минут; 110±1°С, 8 минут и 100±1°С, 8 минут.

Количественное содержание димеглюмина сукцината, никотинамида, инозина и примесей до и после стерилизации определяли методом ВЭЖХ при следующих условиях: спектрофотометрический детектор, длина волны 254 нм, рефрактометрический детектор, хроматографическая колонка Phenomenex Luna Phenyl-Hexyl длиной 250 мм с внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная сорбентом зернением 5 мкм, или аналогичная; скорость потока элюента 0,7 мл/мин, температура колонки 25°С; время хроматографирования 30 мин. Количественное содержание рибофлавина мононуклеотида определяли спектрофотометрическим методом в кювете с толщиной слоя 1 см в максимуме поглощения при длине волны 445±2 нм.

Условия проведения термической стерилизации образцов композиции считались приемлемыми для безопасного лекарственного препарата для внутривенного введения, если после процесса термической стерилизации концентрации активных компонентов составляли не менее 95,0% от исходного значения, а содержание неидентифицированных примесей не превышало 2,0%.

Результаты анализа композиции, полученной по примеру 5 и подвергнутой термической стерилизации в различных режимах, представлены в таблице 3, где показано, что она не выдерживает стандартный режим термической стерилизации (121±1°С, 8 мин) - происходит снижение концентраций активных компонентов инозина, никотинамида с образованием продуктов деградации никотиновой кислоты и гипоксантина соответственно, кроме того происходит существенное снижение концентрации рибофлавина мононуклеотида натрия (на 7,9%) по отношению к его исходному содержанию и образование неидентифицированных примесей более 2,0%. Режимы 110±1°С и 100±1°С также не обеспечивают приемлемый уровень неидентифицированных примесей в растворе, 3,5 и 2,2 соответственно.

Таким образом, композиция, полученная по примеру 5, представляет собой водный раствор химически активных, термолабильных и подверженных гидролизу компонентов.

Для получения стабильных растворов необходимо устранить факторы, способствующие деструкции лекарственных веществ, что достигается путем применения вспомогательных веществ - стабилизаторов, а также использования комплекса технологических приемов в процессе приготовления лекарственных форм.

Стабилизаторы должны быть безопасными как в чистом виде, так и в сочетании с компонентами лекарственного препарата (фармакологическая индифферентность), разрешены к применению в медицинской практике, эффективными в применяемых концентрациях (выполнять свое функциональное назначение), химически чистыми, коммерчески доступными.

Для стабилизации композиции авторы предлагают использовать янтарную кислоту, которая соответствует требованиям, предъявляемым к стабилизаторам для лекарственных препаратов для парентерального введения.

Результаты изучения влияния количества янтарной кислоты на значение рН раствора и стабильность композиций, полученных по примерам 6-21, представлены в таблице 4.

Пример 6. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 38,76 кг димеглюмина сукцината, 1,8 кг инозина, 0,9 кг никотинамида, 0,18 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,010 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=7,0 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, затем фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 3876 мг димеглюмина сукцината (38,76 масс. %), инозина 180 мг (1,8 масс. %), никотинамида 90 мг (0,9 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 18 мг (0,18 масс. %), 1,0 мг янтарной кислоты (0,01 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 7. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 47,37 кг димеглюмина сукцината, 2,2 кг инозина, 1,1 кг никотинамида, 0,22 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,016 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=7,0 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 4737 мг меглюмина (47,37 масс. %), инозина 220 мг (2,2 масс. %), никотинамида 110 мг (1,1 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 22 мг (0,22 масс. %), 1,6 мг янтарной кислоты (0,016 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 8. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 38,76 кг димеглюмина сукцината, 1,8 кг инозина, 0,9 кг никотинамида, 0,18 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,031 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=6,8 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 3876 мг димеглюмина сукцината (38,76 масс. %), инозина 180 мг (1,8 масс. %), никотинамида 90 мг (0,9 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 18 мг (0,18 масс. %), 3,1 мг янтарной кислоты (0,031 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 9. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 47,37 кг димеглюмина сукцината, 2,2 кг инозина, 1,1 кг никотинамида, 0,22 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,042 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=6,8 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 4737 мг димеглюмина сукцината (47,37 масс. %), инозина 220 мг (2,2 масс. %), никотинамида 110 мг (1,1 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 22 мг (0,22 масс. %), 4,2 мг янтарной кислоты (0,042 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 10. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 38,76 кг димеглюмина сукцината, 1,8 кг инозина, 0,9 кг никотинамида, 0,18 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,095 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=6,6 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 38,76 мг димеглюмина сукцината (38,76 масс. %), инозина 180 мг (1,8 масс. %), никотинамида 90 мг (0,9 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 18 мг (0,18 масс. %), 9,5 мг янтарной кислоты (0,095 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 11. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 47,37 кг димеглюмина сукцината, 2,2 кг инозина, 1,1 кг никотинамида, 0,22 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,120 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=6,6 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 4737 мг димеглюмина сукцината (47,37 масс. %), инозина 220 мг (2,2 масс. %), никотинамида 110 мг (1,1 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 22 мг (0,22 масс. %), 12,0 мг янтарной кислоты (0,12 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 12. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 38,76 кг димеглюмина сукцината, 1,8 кг инозина, 0,9 кг никотинамида, 0,18 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,184 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=6,4 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 3876 мг димеглюмина сукцината (38,76 масс. %), инозина 180 мг (1,8 масс. %), никотинамида 90 мг (0,9 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 18 мг (0,18 масс. %), 18,4 мг янтарной кислоты (0,184 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 13. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 47,37 кг димеглюмина сукцината, 2,2 кг инозина, 1,1 кг никотинамида, 0,22 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,226 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=6,4 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 4737 мг димеглюмина сукцината (47,37 масс. %),инозина 220 мг (2,2 масс. %), никотинамида 110 мг (1,1 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 22 мг (0,22 масс. %), 22,6 мг янтарной кислоты (0,226 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 14. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 38,76 кг димеглюмина сукцината, 1,8 кг инозина, 0,9 кг никотинамида, 0,18 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,311 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=6,2 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 3876 мг димеглюмина сукцината (38,76 масс. %), инозина 180 мг (1,8 масс. %), никотинамида 90 мг (0,9 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 18 мг (0,18 масс. %), 31,1 мг янтарной кислоты (0,311 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 15. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 47,37 кг димеглюмина сукцината, 2,2 кг инозина, 1,1 кг никотинамида, 0,22 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,383 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=6,2 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 4737 мг димеглюмина сукцината (47,37 масс. %), инозина 220 мг (2,2 масс. %), никотинамида 110 мг (1,1 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 22 мг (0,22 масс. %), 38,3 мг янтарной кислоты (0,383 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 16. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 38,76 кг димеглюмина сукцината, 1,8 кг инозина, 0,9 кг никотинамида, 0,18 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,504 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=6,0 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 3876 мг димеглюмина сукцината (38,76 масс. %), инозина 180 мг (1,8 масс. %), никотинамида 90 мг (0,9 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 18 мг (0,18 масс. %), 50,4 мг янтарной кислоты (0,504 масс. %),воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 17. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 47,37 кг димеглюмина сукцината, 2,2 кг инозина, 1,1 кг никотинамида, 0,22 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,620 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=6,0 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 4737 мг димеглюмина сукцината (47,37 масс. %), инозина 220 мг (2,2 масс. %), никотинамида 110 мг (1,1 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 22 мг (0,22 масс. %), 62,0 мг янтарной кислоты (0,62 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 18. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 38,76 кг димеглюмина сукцината, 1,8 кг инозина, 0,9 кг никотинамида, 0,18 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,795 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=5,8 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 3876 мг димеглюмина сукцината (38,76 масс. %), инозина 180 мг (1,8 масс. %), никотинамида 90 мг (0,9 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 18 мг (0,18 масс. %), 79,5 мг янтарной кислоты (0,795 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 19. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 47,37 кг димеглюмина сукцината, 2,2 кг инозина, 1,1 кг никотинамида, 0,22 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,971 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=5,8 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 4737 мг димеглюмина сукцината (47,37 масс. %),инозина 220 мг (2,2 масс. %), никотинамида 110 мг (1,1 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 22 мг (0,22 масс. %), 97,1 мг янтарной кислоты (0,97 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 20. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 38,76 кг димеглюмина сукцината, 1,8 кг инозина, 0,9 кг никотинамида, 0,18 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 1,231 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=5,6 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 3876 мг димеглюмина сукцината (38,76 масс. %), инозина 180 мг (1,8 масс. %), никотинамида 90 мг (0,9 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 18 мг (0,18 масс. %), 123,1 мг янтарной кислоты (1,231 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 21. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 47,37 кг димеглюмина сукцината, 2,2 кг инозина, 1,1 кг никотинамида, 0,22 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 1,498 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=5,6 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 4737 мг димеглюмина сукцината (47,37 масс. %),инозина 220 мг (2,2 масс. %), никотинамида 110 мг (1,1 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 22 мг (0,22 масс. %), 149,8 мг янтарной кислоты (1,498 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Проведенное исследование показало, что для получения стабильной композиции интервал рН должен составлять от 6,0 до 7,0, при котором не наблюдается существенного снижения количественного содержания активных компонентов и превышения неидентифицированных примесей более 2,0 масс. %. При этом содержание стабилизатора - янтарной кислоты составляет 0,01-0,62 масс. %. Если содержание янтарной кислоты в растворе более 0,62% при значениях рН=5,8 и ниже, происходит частичное разрушение активных компонентов с образованием неидентифицированных примесей свыше 2,0 масс. %.

Для обеспечения гарантированной стерильности композиции со стабилизатором янтарной кислотой проведено исследование влияния режимов стерилизации препарата водяным паром под давлением на стабильность при хранении. Для этого использовали композиции по примерам 22-27 с различным содержанием янтарной кислоты в диапазоне рН от 7,0 до 6,0.

Пример 22. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 43,0 кг димеглюмина сукцината, 1,0 кг никотинамида, 2,0 кг инозина, 0,2 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,013 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=7,0 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 3300,0 мг димеглюмина сукцината (33,0 масс. %),инозина 200 мг (2,0 масс. %), никотинамида 100 мг (1,0%), рибофлавина мононуклеотида натрия 20 мг (0,2 масс. %), 1,3 мг янтарной кислоты (0,013 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 23. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 43,0 кг димеглюмина сукцината, 1,0 кг никотинамида, 2,0 кг инозина, 0,2 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,035 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=6,8 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 3300,0 мг димеглюмина сукцината (33,0 масс. %), инозина 200 мг (2,0 масс. %), никотинамида 100 мг (1,0%), рибофлавина мононуклеотида натрия 20 мг (0,2 масс. %), 3,5 мг янтарной кислоты (0,035 масс. %), воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 24. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 43,0 кг димеглюмина сукцината, 1,0 кг никотинамида, 2,0 кг инозина, 0,2 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,106 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=6,6 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 3300,0 мг димеглюмина сукцината (33,0 масс. %), инозина 200 мг (2,0 масс. %), никотинамида 100 мг (1,0%), рибофлавина мононуклеотида натрия 20 мг (0,2 масс. %), 10,6 мг янтарной кислоты (0,106 масс. %),воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 25. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 43,0 кг димеглюмина сукцината, 1,0 кг никотинамида, 2,0 кг инозина, 0,2 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,204 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=6,4 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 3300,0 мг димеглюмина сукцината (33,0 масс. %), инозина 200 мг (2,0 масс. %), никотинамида 100 мг (1,0 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 20 мг (0,2 масс. %), 20,4 мг янтарной кислоты (0,204 масс. %),воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 26. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 43,0 кг димеглюмина сукцината, 1,0 кг никотинамида, 2,0 кг инозина, 0,2 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,346 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=6,2 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 3300,0 мг димеглюмина сукцината (33,0 масс. %), инозина 200 мг (2,0 масс. %), никотинамида 100 мг (1,0 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 20 мг (0,2 масс. %), 34,6 мг янтарной кислоты (0,346 масс. %),воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Пример 27. В емкостной аппарат с мешалкой вместимостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 43,0 кг димеглюмина сукцината, 1,0 кг никотинамида, 2,0 кг инозина, 0,2 кг рибофлавина мононуклеотида до полного растворения компонентов, вводят 0,560 кг янтарной кислоты до получения раствора с показателем рН=б,0 и доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 10 мл и запаивают. Каждая ампула содержит 3300,0 мг димеглюмина сукцината (33,0 масс. %), инозина 200 мг (2,0 масс. %), никотинамида 100 мг (1,0 масс. %), рибофлавина мононуклеотида натрия 20 мг (0,2 масс. %), 56,0 мг янтарной кислоты (0,56 масс. %),воду для инъекций до 100,0 масс. %.

Ампулы с композициями, полученными по примерам 22-27 были разделены на 4 части и подвергнуты термической стерилизации водяным паром в следующих режимах: стандартном фармакопейном 121±1°С 8 минут и альтернативных 116±1°С, 110±1°С и 100±1°С 8 минут. Для исследования стабильности полученных образцов препарата их выдерживали в климатическом оборудовании при температуре 25°С течение 2-х лет. Количественное содержание димеглюмина сукцината, никотинамида, инозина и примесей определяли методом ВЭЖХ. Количественное содержание рибофлавина мононуклеотида определяли спектрофотометрическим методом. Результаты представлены в таблице 5.

- композиция стабильна

+ композиция нестабильна

Исследования показали, что композиции, полученные по примерам 22-27, не выдерживают стандартный режим термической стерилизации (121±1°С, 8 мин) - происходит снижение содержания рибофлавина мононуклеотида натрия более чем на 5% по отношению к исходному содержанию. Наблюдается рост образования продуктов деградации никотинамида и инозина - никотиновой кислоты и гипоксантина соответственно и неидентифицированных примесей более 2,0 масс. %. Режимы 110±1°С и 100±1°С, 8 минут обеспечивает сохранение активных компонентов в пределах спецификации и приемлемый уровень примесей в растворе во всем диапазоне рН от 7,0 до 6,0. Режим стерилизации 116±1°С обеспечивает стабильность только композиций 23-25 с рН от 6,8-6,4. Композиции, полученные по примерам 22, 26, 27 не выдерживают этот режим стерилизации ввиду существенного снижения количественного содержания рибофлавина мононуклеотида.

Для сравнительного изучения биологической активности и безопасности композиций использовали состав, полученный по примеру, приведенному в описании патента ЕА 001099 (прототип) и заявленную лекарственную композицию, полученную по примеру 24.

Опыт 1. Изучение острой токсичности заявленной композиции в сравнении с композицией по прототипу.

Учитывая, что значение острой токсичности является одним из ключевых клинико-фармакологических показателей лекарственного препарата, используемого при лечении неотложных состояний, необходимо прежде всего оценить острую токсичность предложенной композиции. Изучение острой токсичности проводили в соответствии с рекомендациями [Guide to experimental (preclinical) studying of new pharmacological substances. Moscow, ZAOIIA Remedium Publ., 2004. 398 p. (InRussian).]

Опыт проводили на самцах нелинейных крыс WISTAR средним весом 160-190 г. Всего было сформировано 10 парных групп по 12 животных. Композицию и прототип вводили болюсно внутривенно нарастающими дозами с определением ключевых параметров острой токсичности. По методу Литчфилда и Уилкоксона определялась доза ЛД50, вызывающая гибель 50 масс. % животных и расчетные параметры LD16 и LD84. Сравнительные данные острой токсичности заявляемой композиции и прототипа представлены в таблице 6.

Примечание: а - достоверно при р≤0.05

Проведенные исследования показали, что при болюсном внутривенном введении значение ключевого параметра токсичности LD50 меньше на 18,27%, у заявленной композиции, чем у состава по прототипу. Полученные расчетные значения параметров острой токсичности при болюсном внутривенном введении LD84 и LD16 также подтверждают меньшую токсичность LD100 композиции в сравнении с прототипом.

Опыт 2. Исследование цитопротекторного действия заявленной композиции при ишемии в культуре фибробластов человека.

Для сравнительного исследования цитопротекторного действия заявленной композиции по сравнению с составом прототипа и контрольной группой была использована модифицированная модель ишемии реперфузии в культуре клеток фибробластов.

Фибробласты, полученные из десны здорового донора стандартным методом (Патент РФ 2320720) культивировали общепринятым методом в пластиковых флаконах Карреля (SIGMA, USA) в полноценной ростовой питательной среде MEM (фирмы Биолот, РФ), содержащей 12% сыворотки эмбрионов телят (GIBCO, USA), 100 ед./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина (GIBCO, USA) и 0,3 мг/мл L-глутамина (Биолот, РФ). Питательную среду меняли каждые семь дней. Для исследования на модели ишемии-реперфузии применяли только клетки после 6-7 пассажей.

Было сформировано две группы клеток фибробластов по 60 пластиковых флаконов Карреля. Выращенные клетки дважды отмывали от среды культивирования MEM фосфатно-солевым буфером (PBS) при 37°С и помещали в ростовую среду DMEM (GIBCO, USA), предварительно барботированную азотом для удаления остатков растворенного кислорода. Для моделирования ишемии культуру фибробластов подвергали часовому (группа А - 60 флаконов) или трехчасовому культивированию (группа В - 60 флаконов) при 37°С путем замещения кислородной атмосферы азотом. После окончания культивирования в условиях ишемии для оценки цитопротекторного эффекта предложенной композиции в сравнении с прототипом, во флаконы Карреля групп А и В соответственно добавляли 2,0 мкг/мл (первая подгруппа, 18 флаконов) заявляемой композиции или 2,0 мкл/мл (вторая подгруппа, 18 флаконов) прототипа, а третью подгруппу (24 флакона) продолжали культивировать без добавления цитопротекторов и использовали в качестве контроля. Образцы фибробластов всех трех групп для моделирования процесса реперфузии далее подвергали процессу реоксигенации в нормоксических условиях в течение 24 часов. Далее полученную культуру фибробластов дважды отмывали от среды культивирования MEM фосфатно-солевым буфером (PBS) при 37°С и далее исследовали витальность клеток после ишемии-реперфузии. Витальность образцов культивированных фибробластов во всех исследуемых группах после суточной реперфузии фиксировали, добавляя к клеточной суспензии культивированных фибробластов 0,5% раствор трипанового синего с объемным коэффициентом разведения 1:1. Далее одну каплю тщательно перемешанной суспензии клеток помещали в камеру Горяева и выполняли визуальный подсчет количества окрашенных и неокрашенных фибробластов используя пять больших квадратов камеры.

Для расчета витальности образцов использовали данные полученные отдельно для каждого большого квадрата камеры Горяева. Данные полученные для каждого квадранта считали как одно определение. Витальность клеток определяли по формуле для каждого образца, V=(1-(Q1:Q2))×100%, где V - витальность, Q1 - количество окрашенных трипановым синим фибробластов, Q2 - общее количество фибробластов. Результаты исследования витальности фибробластов при ишемии-реперфузии представлены в таблице 7.

Примечание:

а - разница достоверна по сравнению с контрольной группой

b - разница достоверна между прототипом и заявляемой композиций

Проведенные исследования цитопротекторного действия заявленной композиции показали, что при шестидесятиминутной ишемии и композиция и прототип оказывают достоверное защитное действие, повышая выживаемость фибробластов на 8,58% и 3,06% соответственно по сравнению с контрольной группой. При более продолжительной ишемии в культуре фибробластов заявленная композиция показывает в два раза более выраженный защитный эффект по сравнению с прототипом, достоверно повышая выживаемость фибробластов на 66,7%, прототип - на 33,3%.

Таким образом, лекарственная композиция цитопротекторного действия в виде водного раствора, содержащая в качестве активного компонента новое соединение димеглюмина сукцинат, обладает высокой биологической активностью и безопасностью. При этом способ получения композиции обеспечивает ее стабильность при хранении, снижение риска образования токсичных примесей и микробной контаминации.

1. Лекарственная композиция цитопротекторного действия в виде водного раствора, содержащая инозин, никотинамид, рибофлавина мононуклеотид натрия, янтарную кислоту и биологически активное соединение, отличающаяся тем, что в качестве биологически активного соединения она содержит димеглюмина сукцинат формулы [HOCH2(CHOH)4CH2NH2CH3]+2[OOC(CH2)2COO]2-, при следующем соотношении компонентов, масс. %:

Димеглюмина сукцинат 38,76-47,37
Инозин 1,80-2,20
Никотинамид 0,90-1,10
Рибофлавина мононуклеотид натрия 0,18-0,22
Янтарная кислота 0,01-0,62
Вода для инъекций до 100

2. Способ получения лекарственной композиции по п. 1, заключающийся в растворении в воде для инъекций димеглюмина сукцината, инозина, никотинамида, рибофлавина мононуклеотида натрия, добавлении к полученному раствору янтарной кислоты до получения стабильного раствора со значением pH в диапазоне от 6,0 до 7,0 и стерилизующей фильтрацией, с последующим проведением термической стерилизации полученного раствора при температуре от 100 до 116°С.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к фармацевтике, а именно к препарату, который может быть использован в медицине. Предложено: применение гранул соли двух- или трехвалентного металла альгината размером 0,1-2 мм в качестве сорбента липидов, ингибирующего их расщепление; фармацевтическая композиция для снижения всасывания липидов в желудочно-кишечном тракте, содержащая указанные гранулы в эффективном количестве и фармацевтически допустимые вспомогательные вещества и лекарственный препарат для лечения ожирения, представляющий собой твердую пероральную лекарственную форму с фармацевтической композицией.

Изобретение относится к медицине, а именно к токсикологии, и может быть использовано для снижения мутагенного воздействия кадмия в эксперименте на дрозофилу. Для этого в организм, зараженный кадмием, вводят цефтриаксон в терапевтической дозе 0,008 мг в смеси с настоем сухой травы цикория, в количестве 0,3 мл на 100 г живого веса в течение 7 дней, при этом настой сухой травы цикория готовят следующим образом: сушеную траву цикория измельчают, берут 1-2 чайные ложки, заливают 100 мл кипятка и настаивают на водяной бане, остывший настой отфильтровывают.

Изобретение относится к медицине, в частности к токсикологии. Предложен способ снижения неблагоприятных эффектов комбинированного действия наночастиц оксидов меди (CuO), цинка (ZnO) и свинца (PbO) на организм в группах риска, охватывающих лиц, которые подвергаются такому воздействию в производственных условиях.

Изобретение относится к биотехнологии и фармакологии и касается применения 5-аминоимидазол-4-карбоксамидрибофуранозида (АИКАР) в качестве геропротектора в питательной среде для модельных животных.

Изобретение относится к области медицины и фармакологии и касается средства профилактики и ранней терапии острых поражений, вызванных резорбтивным действием сернистого иприта.

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к неврологии и токсикологии, и касается лечения неврологических заболеваний металлопорфиринами. Для этого вводят эффективное количество соединения AEOL10150.

Изобретение относится к ветеринарной токсикологии и микробиологии, в частности к препарату для профилактики и лечения микотоксикозов мелкого рогатого скота. Препарат включает гуминовые кислоты, мелкодисперсный кремнезем, селен, взятый в малоразмерном состоянии и нулевой валентности, жирорастворимый витамин Е и воду дистиллированную.

Изобретение относится к медицине, фармации, неврологии. Предложено применение (S)-2,6-диаминогексановой кислоты 3-метил-1,2,4-триазолил-5-тиоацетата в качестве активной основы лекарственных средств профилактики и лечения нарушений жизнеобеспечивающих функций центральной нервной системы при тяжелых формах острого отравления этанолом.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к получению энтеросорбента для направленной сорбции холерного экзотоксина. Энтеросорбент для направленной сорбции холерного экзотоксина, полученный путем иммобилизации методом адсорбции антитоксического противохолерного иммуноглобулина G, выделенного из сыворотки крови животных, иммунизированных холерным токсином, на микрочастицах размером 200-300 нм предварительно подготовленного кислоторастворимого хитозана в соотношении 0,08-0,1:1.

Изобретение относится к области медицинской радиологии и может быть использовано для профилактики острой лучевой болезни, вызываемой внешним облучением. Предложено применение в качестве средства профилактики острой лучевой болезни тизанидина - 5-Хлор-4-(2-имидазолин-2-ил-амино)-2,1,3-бензотиадиазола гидрохлорида в виде официнальных лекарственных препаратов «Тизанидин Тева», «Сирдалуд» и «Тизалуд».

Изобретение относится к водорастворимому комплексу каррагинан-гистохром при весовом соотношении указанных компонентов 5:1, обладающему пролонгированным гастропротекторным, кардиопротекторным и антиоксидантным действием.

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой противовирусную фармацевтическую композицию для лечения вируса гепатита С у субъекта, нуждающегося в этом, которая содержит эффективное количество пролекарства, выбранного из циклобутил (S)-2-{[(2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидро-2Н-пиримидин-1-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метил-тетрагидрофуран-2-илметокси]-фенокси-фосфориламино}-пропаноата общей формулы 1, и/или циклобутил (S)-2-{(S)-[(2R,3R,4R,5R)-5-(3,4-дигидро-2,4-диоксо-2H-пиримидин-1-ил)-3-гидрокси-4-метил-4-фтор-тетрагидро-фуран-2-илметокси]-фенокси-фосфориламино}-пропаноата формулы 1.1, и/или циклобутил (S)-2-{(R)-[(2R,3R,4R,5R)-5-(3,4-дигидро-2,4-диоксо-2H-пиримидин-1-ил)-3-гидрокси-4-метил-4-фтор-тетрагидро-фуран-2-илметокси]-фенокси-фосфориламино}-пропаноата формулы 1.2, их кристаллическую или поликристаллическую форму и фармацевтически приемлемый носитель. Группа изобретений также включает способ лечения гепатита С у субъекта, нуждающегося в этом, включающий в себя последовательное или одновременное введение терапевтически эффективного количества противовирусной фармацевтической композиции, описанной выше.

Изобретение относится к области ветеринарии. Описана жидкая гомогенная фаза для трансдермальных фармацевтических композиций, которая обеспечивает абсорбцию физиологически активных веществ через кожные покровы животного при отсутствии раздражающего эффекта, обладает свойствами, препятствующими слизыванию животными, и имеет значение pH в пределах от 4 до 6.

Группа изобретений относится к области медицины и предназначена для обработки ран и/или для использования при хирургических операциях. Антисептическая композиция содержит гидролизат коллагена, одну или несколько фармацевтически приемлемых солей альгиновой кислоты, один или несколько антисептиков в фармацевтически приемлемом носителе на водной основе, а также от около 2 до около 7% мас.

Группа изобретений относится к области медицины и предназначена для обработки ран и/или для использования при хирургических операциях. Антисептическая композиция содержит один или несколько антисептиков, от около 5 до около 10% мас.

Группа изобретений относится к области фармацевтики и может быть использована в ветеринарии для регуляции половой охоты у мелких домашних животных, преимущественно у кошек и собак.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой применение 2-хлорпрокаина или его фармацевтически приемлемых солей для производства инъекционного фармацевтического водного раствора, не содержащего консервирующих веществ и антиоксидантов, имеющего значение pH от 3 до 4 и предназначенного для центральной локорегионарной анестезии у людей с помощью интратекального введения по меньшей мере дозы 15-80 мг в день повторно в течение периода времени от 3 до 7 дней.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине и представляет собой препарат для лечения туберкулеза, включающий изониазид, воду для инъекций, метионин, янтарную кислоту и натрия сукцинат, причем компоненты в препарате находятся в определенном соотношении, в г.

Группа изобретений относится к медицине. Описана композиция в виде вязкоупругого геля с когезионно связанными частицами, содержащая: i) сшитую гиалуроновую кислоту или одну из ее солей с концентрацией в интервале от 1 до 4% (масса/объем); ii) гидроксиапатит с концентрацией в интервале от 5 до 60% (масса/объем), причем гидроксиапатит находится в виде частиц со средним размером, меньшим или равным 200 мкм; и указанная приемлемая для инъекций стерильная водная композиция обладает вязкоупругими свойствами, так что tan δ при частоте 1 Гц меньше или равен 0,60.

Изобретение относится к стабильной водной композиции, содержащей гиалуронидазу, стабилизатор для гиалуронидазы и воду в качестве растворителя. Гиалуронидаза экстрагирована из семенников одного или более млекопитающих, исключая человека, и имеет чистоту 95% или более и специфическую активность 70000 МЕ/мг или более.
Изобретение относится в области нанотехнологии и пищевой промышленности. Способ получения нанокапсул спирулины в каррагинане характеризуется тем, что в качестве оболочки нанокапсул используют каррагинан, а в качестве ядра - спирулину, при этом порошок спирулины медленно добавляют в суспензию каррагинана в бензоле в присутствии 0,01 г Е472с в качестве поверхностно-активного вещества, затем перемешивают при 1000 об/мин, после приливают хлороформ, после чего полученную суспензию отфильтровывают и сушат при комнатной температуре, при этом массовое соотношение ядро:оболочка составляет 1:1, или 1:3, или 1:5.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине и представляет собой лекарственную композицию цитопротекторного действия в виде водного раствора, содержащую инозин, никотинамид, рибофлавина мононуклеотид натрия, янтарную кислоту и биологически активное соединение. Согласно изобретению в качестве биологически активного соединения она содержит димеглюмина сукцинат формулы [HOCH24CH2NH2CH3]+2[OOC2COO]2-, причем компоненты в композиции находятся в определенном соотношении, в мас. . Изобретение обеспечивает получение композиции, обладающей высокой биологической активностью, безопасностью и стабильностью. 2 н.п. ф-лы, 7 табл., 27 пр.

Наверх