Препарат для предотвращения образования глиальных рубцов



Препарат для предотвращения образования глиальных рубцов
Препарат для предотвращения образования глиальных рубцов

Владельцы патента RU 2651756:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение Высшего Образования Кубанский Государственный Медицинский Университет Министерства Здравоохранения Российской Федерации, КубГМУ (RU)
Занин Сергей Александрович (RU)
Читанава Тамара Вангельевна (RU)
Шамоян Гоар Московна (RU)
Трофименко Артем Иванович (RU)
Каде Азамат Халидович (RU)
Егиев Иван Хачатурович (RU)
Чечелян Валерий Наириевич (RU)
Джопуа Максим Астамурович (RU)

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине, в частности к неврологии и нейрохирургии, и представляет собой препарат для предотвращения образования глиальных рубцов, содержащий D-аспарагин и высокоочищенную воду, где на 1000 мл препарата содержится 5 г сухого порошка D-аспарагина, остальное - высокоочищенная вода. Изобретение обеспечивает значительное торможение белкового синтеза и, как следствие, пролиферации клеток глии, в результате чего достигается предотвращение образования глиальных рубцов, а также устранение таких побочных эффектов, как токсичность и ингибирование митотических реакций. 1 пр., 4 ил.

 

Предлагаемое изобретение относится к области экспериментальной медицины, а именно к неврологии и нейрохирургии, может быть использовано в комплексной терапии при остром повреждении спинного мозга различного генеза для предотвращения образования глиального рубца.

Ключевой причиной неблагоприятного прогноза в восстановлении неврологического дефицита у пациентов с острым повреждением спинного мозга является формирование глиального рубца на месте очага повреждения ткани спинного мозга. Глиальный рубец является как механическим, так и молекулярным (синтез веществ, тормозящих рост аксонов) барьером для прорастания аксонов дистально от очага повреждения (Бэр М. Нейропротекция. Модели, механизмы, терапия / М. Бэр - Москва. Бином Лаборатория знаний, 2014. - 436 с.).

Разработка препаратов, способных предотвратить образование глиального рубца, является перспективным направлением современной медицинской науки. Традиционно используемые в начальный период острого повреждения ЦНС нейропротективные и глиопротективные препараты, главной целью назначения которых является стимуляция регенерации ЦНС, не способны стимулировать эффективную регенерацию аксонов, ремиелинизацию проводящих путей ЦНС и предотвратить формирование глиального рубца (Бэр М. Нейропротекция. Модели, механизмы, терапия / М. Бэр - Москва. Бином Лаборатория знаний, 2014. - 436 с.).

До настоящего времени для решения проблемы неврологического дефицита применялись методы, направленные на активацию аксонального роста и восстановление непрерывности проводящих путей в поврежденном спинном мозге за счет имплантации в зону перерыва коллагенового матрикса «Сферо®ГЕЛЬ», трансплантации различных экзогенных материалов, участков периферического нерва, ганглиев, интратекальной трансфузии аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (Бэр М. Нейропротекция. Модели, механизмы, терапия / М. Бэр - Москва. Бином Лаборатория знаний, 2014. - 436 с.).

Но даже при использовании эффективных стимуляторов регенерации нервной ткани глиальный рубец на месте очага повреждения спинного мозга формируется быстрее, чем регенерируют аксоны. Таким образом, растущие аксоны «упираются» в образованный рубец и реиннервации дистальных от очага повреждения нервной ткани участков спинного мозга не происходит.

Не вызывает сомнений предотвращение глиозной трансформации спинного мозга после его острого повреждения.

Существующие подходы, направленные на предотвращение образования глиального рубца, подразделяют на 2 группы: 1) использование средств, воздействующих на клетки в области очага повреждения спинного мозга (цитостатики, моноклональные антитела к цитокинам, участвующие в развитии глиоза и их рецепторов, низкодозовое рентгеновское излучение); 2) препараты, модифицирующие состав межклеточного матрикса (бактериальная хондроитиназа, 2-2'-дипиридин - хелатор железа и ингибитор отложения коллагена IV, моноклональные антитела, нейтрализующие активность ингибиторного миелинового белка Nogo-A) (Бэр М. Нейропротекция. Модели, механизмы, терапия / М. Бэр - Москва. Бином Лаборатория знаний, 2014. - 436 с.).

За ближайший аналог нами приняты препараты из группы антиметаболитов. В основном препараты данной группы содержат 0,05 г активного вещества и вспомогательные вещества: желатин; крахмал картофельный; сахар молочный; кальция стеарат. Препараты представляют собой структурные аналоги аденина, гипоксантина и гуанина, входящие в состав нуклеиновых кислот. Их действие направлено на ингибирование критических процессов, необходимых для протекания репликации ДНК и деления клетки. Основной их областью применения является онкология, но в связи с выраженной иммуносупрессивной и противовоспалительной активностью также применяются в ревматологии, а также в трансплантологии.

Каждый из перечисленных ранее подходов, направленных на торможение образования глиального рубца, имеет определенные недостатки: низкая эффективность действия, низкая специфичность, серьезные побочные эффекты, высокая стоимость и низкая доступность.

Основными недостатками цитостатической терапии являются: высокая токсичность, ингибирование митотических реакций как в растущих (молодых), так и в зрелых клетках. (Антосюк О.Н., Марвин А.М., Марвин Н.А. Сравнительный анализ воздействия цитостатических препаратов на нестабильность генома Drosophila melanogaster // Биомедицина. 2014. №3 С. 83-91.)

Задачи:

1) Устранение неблагоприятных побочных эффектов (токсичность, ингибирование митотических реакций, снижение себестоимости, повышение эффекта, предотвращение образования глиальных рубцов);

2) Обеспечение эффективности и безопасности препарата;

3) Исключение дополнительного ввода различных веществ как вспомогательной терапии.

Предложенный препарат включает водный раствор D-аспарагина для внутривенного применения. Раствор содержит целевой компонент АК D-аспарагин в виде сухого порошка, на 1000 мл:

- АК D-аспарагин - 5 г,

- остальное - высокоочищенная вода.

Химическая формула D-аспарагина: C4H8N2O3, представляющий собой белый кристаллический порошок без запаха, хорошо растворимый в воде, химическое название моноамид аспарагиновой кислоты.

Препарат получают путем растворения 5 г сухого порошка D-аспарагина в 1000 мл высокоочищенной воды. После растворения препарат оставляют на 1 сутки в термостате при температуре 40°С, после чего его можно использовать.

Технической характеристикой действия препарата является: ингибирование пролиферации клеток D-аспарагином, что обусловлено тем фактом, что в незрелых глиоцитах отмечается низкая ферментативная активность систем по нейтрализации D-аспарагиновой кислоты, что позволяет при высоком уровне ее экзогенного поступления значительно затормозить белковый синтез и, как следствие, пролиферацию клеток глии (D'Aniello, А. & Giuditta, А. (1977). Identification of D-aspartic acid in the brain of Octopus vulgaris Lam. J. Neurochem. 29, 1053-1057). Антипролиферативные свойства D-аспарагина сравнимы лишь с эффектом при использовании цитостатической терапии, однако побочных эффектов, которые вызываются при ее использовании, в ходе эксперимента с D-аспарагином не было выявлено.

Эксперименты проведены на 60 белых нелинейных самцах крыс средней массой 346±75 г. Характеристика групп животных: группа №1 (интактные) - из 20 крыс, спинной мозг которых использован в качестве контрольного; группа №2 (сравнения) - из 20 крыс, которым воспроизводили фокальный фототромбоз кровеносных сосудов грудного отдела спинного мозга с последующим изъятием участка спинного мозга на 17 сутки; группа №3 (опытная) - из 20 животных, которым выполняли моделирование спинального инсульта с последующим внутривенным введением (в вены хвоста) 0,5% раствора D-аспарагина (курсовая доза 21,7 мг/кг) с 3 по 6 сутки и изъятием спинного мозга на 17 сутки.

Моделирование спинального инсульта проводили по модифицированной методике М. Von Euler, путем фототромбоза сосудов грудного отдела спинного мозга лазером с длиной волны 514 нм. В качестве фотосенсибилизатора использован эритрозин, для ингибирования фибринолиза применяли транексамовую кислоту (Von Euler М. Morphological characterization of the evolving rat spinal cord injury after photochemically induced ischemia // Acta Neuropathol. - 1997 Sep; 94(3). - P. 232-239). Для операции применялся золетил-ксилазиновый наркоз.

Эвтаназию крыс проводили на 17 сутки эксперимента. Забор спинного мозга проводили с помощью его выталкивания фосфатным буфером, вводимым через канюлю шприца на 10 мл, вставленную в поясничный отдел позвоночника (Kennedy H.S. A method for removing the brain and spinal cord as one unit from adult mice and rats // Lab Anim (NY). - 2011. - Feb; 40(2):53-7. doi: 10.1038/laban0211-53). После извлечения спинной мозг помещали в цинк-формалиновый фиксатор с сульфатом цинка (Kierman J.A. Histological and histochemical methods. Theory and practice. - London: Scion Publishing Ltd. - 2008. - 606 p.). Выполняли проводку полученных образцов через изопропанол-минеральное масло, с последующей их заливкой в парафин. Парафиновые блоки нарезали на срезы толщиной 10 мкм на микротоме МПС-2 (СССР). Окрашивание микропрепаратов проводили гематоксилином и эозином. Для фотографии микропрепаратов использовали микроскоп Микмед-5 (Россия) и окулярную камеру Levenhuk-230 (США). Для анализа фотографий микропрепаратов применяли фоторедактор GIMP2. Используя инструмент «сетка», проводили подсчет клеток по ячейкам наложенной на фото сетки, ячейки которой предварительно были откалиброваны с помощью объект-микрометра.

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием программного обеспечения «Statistica 10 version» фирмы «Stat Soft Inc.», с помощью параметров: медианы (Me), процентилей (р25 и р75), доверительного интервала 95 (ДИ 95). Для проверки гипотезы о гауссовом распределении показателей в исследуемых группах использовали критерий Шапиро-Уилка. В связи с тем, что распределение значений исследуемых показателей в группах отличалось от нормального, их сравнение проводили по непараметрическому критерию Колмогорова-Смирнова, с установлением уровня значимости *р≤0,05.

На микропрепаратах спинного мозга, полученных от крыс из группы №2 (без применения D-аспарагина), прослеживаются явления выраженной глиозной трансформации спинного мозга. В области проводящих путей наблюдается большое скопление клеток глии (предположительно астроцитов), образующих ячеистые структуры, что свидетельствует о процессе формирования глиального рубца в области очага фототромбоза сосудов спинного мозга (см. рисунок 1 при увеличении X100, рисунок 2, при увеличении Х400).

На микропрепаратах спинного мозга, полученных от крыс из группы №3 (с применением D-аспарагина), наблюдается маленький очаг глиоза, который незначительно нарушает ход проводящих путей. При этом в области очага фототромбоза сосудов грудного отдела спинного мозга, в сравнении с микропрепаратами из группы №2 (без применения D-аспарагина), видно значительно меньшее количество клеток глии, прослеживаются отдельные аксоны, проходящие сквозь область формирующегося глиального рубца (см. рисунок 3, при увеличении X100, 4, при увеличении Х400).

При сравнении численности клеток на микропрепаратах в области очага фототромбоза спинного мозга, полученных от крыс из группы №2 (D-аспарагин не применялся), и на микропрепаратах спинного мозга, полученных от крыс из группы №3 (использован D-аспарагин в курсовой дозе 21,7 мг/кг), видны значительные различия. Плотность распределения клеток глии в очаге фототромбоза на микропрепаратах спинного мозга у крыс из группы №3 (получали D-аспарагин) в три раза ниже в сравнении с данным показателем у крыс из группы №2 (без D-аспарагина), (р≤0,01). Таким образом, плотность распределения клеток в области очага фототромбоза спинного мозга на микропрепаратах из группы №3 (получали D-аспарагин) приближается к величине показателя, полученного в группе №1 (контроль), статистически значимой разницы количества клеток между группой №1 (контроль) и группой №3 (получали D-аспарагин) не выявлено (р≥0,01).

Пример. Нелинейный самец крысы массой 246 г был прооперирован с моделированием фототромбоза сосудов грудного отдела спинного мозга лазером с длиной волны 514 нм. Для операции применяли золетил-ксилазиновый наркоз. С 3 по 6 день после операции вводили 0,5% раствор D-аспарагина внутривенно в вены хвоста. Эвтаназия была проведена на 17 сутки, после чего, с помощью выталкивания фосфатным буфером, вводимым через канюлю шприца, вставленного в поясничный отдел, забирали спинной мозг. Затем выполнили проводку образца через изопропанол-минеральное масло, окрасили полученный микропрепарат, сфотографировали с помощью камеры Levenhuk-230 (США) и провели статистическую обработку полученных результатов с помощью программы «Statistica 10 version». Результаты эксперимента подтверждены рис. 3-4, где рис. 3 показывает область формирующегося глиального рубца, меньшую плотность клеток глии и частично сохраненные аксоны, проходящие сквозь область формирующегося глиального рубца под увеличением в XI00 (окраска гематоксилином эозином). На рис. 4 видны проходящие сквозь область рубца аксоны, под увеличением Х400 (окраска гематоксилином эозином).

Таким образом, внутривенное введение 0,5% раствора D-аспарагина в курсовой дозе 21,7 мг/кг с 3 по 6 сутки от начала экспериментального спинального инсульта, по данным гистологического исследования спинного мозга, проведенного на 17 сутки течения патологии, сопровождается значительно меньшей выраженностью процессов глиозной трансформации, в сравнении с крысами, D-аспарагин не получавших.

Препарат для предотвращения образования глиальных рубцов, содержащий целевой компонент D-аспарагин в сухом порошке, на 1000 мл:

D-аспарагин 5 г
остальное высокоочищенная вода



 

Похожие патенты:

Данное изобретение относится к иммунологии. Предложена выделенная молекула антитела, которая является селективной в отношении связывания человеческого бета-амилоидного 1-42 пептида (Aβ1-42), а не человеческого бета-амилоидного 1-40 пептида (Aβ1-40).

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии и неврологии, и касается применения форболового эфира для лечения инсульта. Для этого вводят эффективное количество форболового эфира формулы Это обеспечивает эффективное лечение инсульта и его неврологических осложнений за счет модулирования фактора NF-kB и активности цитокинов Th1.
Изобретение относится к новым производным хиназолинона, выбранным из группы соединений, указанной ниже, или их фармацевтически приемлемых солей. Соединения обладают свойствами ингибитора танкираз (TANK) и могут быть использованы для лечения и/или предотвращения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечно-сосудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления, опосредованных активностью танкираз (TANK).

Изобретение относится к новому производному 2,4-замещенного фенилен-1,5-диамина формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, обладающим активностью ингибитора в отношении тирозинкиназы EGFR.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к церебропротекторному средству. Применение изокверцитрина формулы в качестве средства, обладающего церебропротекторным действием.

Изобретение относится к соединениям формулы (I) или его фармацевтически приемлемым солям в которой Rx представляет водород или C1-C3 алкил; Ry представляет C1-C3 алкил; X1 представляет N или CRx1; X2 представляет CRx2; Y1 представляет N или CRu; где Ru представляет водород; A1 представляет CR1, A2 представляет CR2, A3 представляет CR3 и A4 представляет N или CR4, при условии, что ноль, один из A1, A2, A3 и A4 является N; L1 отсутствует или означает CH2, C(O), C(H)(OH), (CH2)mO или (CH2)mN(Rz), где Rz представляет водород; G1 представляет С1-C6 алкил, С1-C6алкоксиС1-C6 алкил, G1a или -(C1-C6 алкиленил)-G1a; где каждый G1a независимо представляет фенил, 9-10-членный бициклический арил, необязательно частично ненасыщенный; 5-6-членный гетероарил с одним-двумя гетероатомами, выбранными из N; бициклический 9-10-членный гетероарил с одним-тремя гетероатомами, выбранными из N, S; 4-6-членный гетероцикл с одним-двумя гетероатомами, выбранными независимо из N, O и S; 10-членный спироциклический гетероциклил с двумя гетероатомами, выбранными из О; С3-C7циклоалкил; бициклический 7-членный циклоалкил, трициклический 10-членный циклоалкил, и каждый G1a независимо является незамещенным или замещенным 1, 2, 3 Rw.

Группа изобретений относится к медицине и лечебному питанию. Предложено применение композиции, содержащей (i) нуклеозидный аналог, выбранный из группы уридина, дезоксиуридина, фосфатов уридина (UMP, dUMP, UDP, UTP), урацила и ацилированных производных уридина, (ii) ω-3 полиненасыщенную жирную кислоту, выбранную из группы DHA, DPA и EPA, (iii) витамин B, выбранный из группы витамина B6, витамина B12 и витамина B9, (iv) фосфатидилхолин, (v) антиоксидант, выбранный из группы витамина С, витамина Е и селена, и (vi) холин, при условии, что массовое отношение фосфатидилхолина к холину составляет более 0,1, для профилактики или лечения немощности у пациента с одновременным увеличением или поддержанием индекса массы тела у пациента без необходимости увеличения потребления калорий, при этом данная композиция предназначена для введения человеку, страдающему расстройством, выбранным из группы: деменции и болезни Альцгеймера, при этом такой человек имеет индекс массы тела (BMI) ниже 26, и где немощность определяется по соответствию по меньшей мере двум критериям, выбранным из группы: мышечной слабости, чувства чрезмерного переутомления или усталости, ненормально низкой физической активности, медленной или неустойчивой походки, потери массы и неврологической дисфункции; применение указанной композиции для вышеперечисленных назначений (3 варианта); питательная композиция для применения по вышеуказанному назначению.

Изобретение относится к медицине и касается пептида с последовательностью Abu-Ser-Ser-Val-Lys-Val-Ser-Abu (Abu – α-аминомасляная кислота), соответствующего консервативному участку домена VH тяжелой цепи иммуноглобулинов человека, предназначенного для лечения рассеянного склероза у человека.
Настоящее изобретение относится к порошку для растворения перед применением для препаратов для инъекций, содержащему мелатонин, по меньшей мере один водорастворимый эксципиент и по меньшей мере один водорастворимый сурфактант, для лечения неонатального церебрального инфаркта.

Изобретение относится к области фармацевтики и медицины и касается способа введения полипептида, содержащего подобный эпидермальному фактору роста (EGF-подобный) домен, млекопитающему, где указанный способ включает: введение полипептида после неврологического повреждения у указанного млекопитающего и начало введения в пределах подострого окна после неврологического повреждения.

Изобретение относится к области медицины и фармацевтики. Предложено применение иминопроизводных камфоры общей формулы (I), где n=1, 2, 3, 4, 5, в качестве ингибиторов репродукции вируса гриппа штамм A/California/07/09 (H1N1) pdm09 и и A/Puerto Rico/8/34 (H1N1).

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к вариантам сухой композиции для получения раствора для промывания кишечника, пополняющего электролит в организме, которая содержит на один литр раствора или водного разбавителя 0,15-1,5 г бикарбоната калия, 1,0-3,5 г бикарбоната натрия, 1,0-4,0 г лимонной кислоты, 0,1-1,0 г хлорида натрия, 50-140,0 г полиэтиленгликоля и 1,0-50,0 г сахарного спирта, выбранного из ксилита, эритрита, рибита, арабита и их смесей; к раствору для промывания кишечника и пополняющему электролит в организме, содержащему указанную сухую композицию; а также к способу очищения кишечника пациента при подготовке к колоноскопии или медицинской, хирургической или радиологической процедуре, включающему введение пациенту эффективного количества такого раствора.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине и представляет собой лекарственную композицию цитопротекторного действия в виде водного раствора, содержащую инозин, никотинамид, рибофлавина мононуклеотид натрия, янтарную кислоту и биологически активное соединение.

Изобретение относится к водорастворимому комплексу каррагинан-гистохром при весовом соотношении указанных компонентов 5:1, обладающему пролонгированным гастропротекторным, кардиопротекторным и антиоксидантным действием.

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой противовирусную фармацевтическую композицию для лечения вируса гепатита С у субъекта, нуждающегося в этом, которая содержит эффективное количество пролекарства, выбранного из циклобутил (S)-2-{[(2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидро-2Н-пиримидин-1-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метил-тетрагидрофуран-2-илметокси]-фенокси-фосфориламино}-пропаноата общей формулы 1, и/или циклобутил (S)-2-{(S)-[(2R,3R,4R,5R)-5-(3,4-дигидро-2,4-диоксо-2H-пиримидин-1-ил)-3-гидрокси-4-метил-4-фтор-тетрагидро-фуран-2-илметокси]-фенокси-фосфориламино}-пропаноата формулы 1.1, и/или циклобутил (S)-2-{(R)-[(2R,3R,4R,5R)-5-(3,4-дигидро-2,4-диоксо-2H-пиримидин-1-ил)-3-гидрокси-4-метил-4-фтор-тетрагидро-фуран-2-илметокси]-фенокси-фосфориламино}-пропаноата формулы 1.2, их кристаллическую или поликристаллическую форму и фармацевтически приемлемый носитель. Группа изобретений также включает способ лечения гепатита С у субъекта, нуждающегося в этом, включающий в себя последовательное или одновременное введение терапевтически эффективного количества противовирусной фармацевтической композиции, описанной выше.

Изобретение относится к области ветеринарии. Описана жидкая гомогенная фаза для трансдермальных фармацевтических композиций, которая обеспечивает абсорбцию физиологически активных веществ через кожные покровы животного при отсутствии раздражающего эффекта, обладает свойствами, препятствующими слизыванию животными, и имеет значение pH в пределах от 4 до 6.

Группа изобретений относится к области медицины и предназначена для обработки ран и/или для использования при хирургических операциях. Антисептическая композиция содержит гидролизат коллагена, одну или несколько фармацевтически приемлемых солей альгиновой кислоты, один или несколько антисептиков в фармацевтически приемлемом носителе на водной основе, а также от около 2 до около 7% мас.

Группа изобретений относится к области медицины и предназначена для обработки ран и/или для использования при хирургических операциях. Антисептическая композиция содержит один или несколько антисептиков, от около 5 до около 10% мас.

Группа изобретений относится к области фармацевтики и может быть использована в ветеринарии для регуляции половой охоты у мелких домашних животных, преимущественно у кошек и собак.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой применение 2-хлорпрокаина или его фармацевтически приемлемых солей для производства инъекционного фармацевтического водного раствора, не содержащего консервирующих веществ и антиоксидантов, имеющего значение pH от 3 до 4 и предназначенного для центральной локорегионарной анестезии у людей с помощью интратекального введения по меньшей мере дозы 15-80 мг в день повторно в течение периода времени от 3 до 7 дней.

Группа изобретений относится к медицине и касается комбинации (i) антитела, специфичного для CD38, содержащего HCDR1 с последовательностью GFTFSSYYMN (SEQ ID N0:1), HCDR2 с последовательностью GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO:2), HCDR3 с последовательностью DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO:3), LCDR1 с последовательностью SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO:4), LCDR2 с последовательностью GDSKRPS (SEQ ID NO:5) и LCDR3 с последовательностью QTYTGGASL (SEQ ID NO:6), и (ii) мелфалана, для лечения множественной миеломы.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине, в частности к неврологии и нейрохирургии, и представляет собой препарат для предотвращения образования глиальных рубцов, содержащий D-аспарагин и высокоочищенную воду, где на 1000 мл препарата содержится 5 г сухого порошка D-аспарагина, остальное - высокоочищенная вода. Изобретение обеспечивает значительное торможение белкового синтеза и, как следствие, пролиферации клеток глии, в результате чего достигается предотвращение образования глиальных рубцов, а также устранение таких побочных эффектов, как токсичность и ингибирование митотических реакций. 1 пр., 4 ил.

Наверх