Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus α - продуцент моноклональных антител, специфичных к раково-тестикулярному антигену человека gage



Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus α - продуцент моноклональных антител, специфичных к раково-тестикулярному антигену человека gage
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus α - продуцент моноклональных антител, специфичных к раково-тестикулярному антигену человека gage
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus α - продуцент моноклональных антител, специфичных к раково-тестикулярному антигену человека gage
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus α - продуцент моноклональных антител, специфичных к раково-тестикулярному антигену человека gage
C12N2510/02 - Микроорганизмы или ферменты; их композиции (биоциды, репелленты или аттрактанты или регуляторы роста растений, содержащие микроорганизмы, вирусы, микробные грибки, ферменты, агенты брожения или вещества, получаемые или экстрагируемые из микроорганизмов или из материала животного происхождения A01N 63/00; пищевые составы A21,A23; лекарственные препараты A61K; химические аспекты или использование материалов для бандажей, перевязочных средств, впитывающих подкладок или хирургических приспособлений A61L; удобрения C05); размножение, консервирование или сохранение микроорганизмов (консервирование живых тканей или органов людей или животных A01N 1/02); мутации или генная инженерия; питательные среды (среды для микробиологических испытаний C12Q)

Владельцы патента RU 2652885:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Блохина" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина " Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к гибридомной технологии, и представляет собой штамм гибридных клеток mus musculus α - продуцент моноклональных антител к раково-тестикулярному антигену человека GAGE. Штамм депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИгенетика Минобрнауки России (БРЦ ВКПМ) под номером Н-174. Изобретение позволяет получить высокоспецифичные моноклональные антитела, которые могут использоваться в экспериментальной онкологии для изучения структурно-функциональных свойств белков семейства GAGE в культурах клеток и клинических образцах. 3 ил., 2 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к гибридомной технологии, и касается получения штамма гибридных клеток, продуцирующих моноклональные антитела к раково-тестикулярному антигену человека GAGE.

Моноклональные антитела (МКА) являются высокоспецифичными антителами, образованными одной гибридной антителообразующей клеткой, иммортализованной путем слияния с миеломной линией, к определенному антигену, которые синтезируются специально создаваемыми линиями клеток-продуцентов [Кеннет Р.Г., Мак-Керн Т. Дж., Бехтол К.Б. Моноклональные антитела: Гибридомы: новый уровень биологического анализа. М., Медицина, 1983; Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. М.: Мир, 2000; Milstein С. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature 256, 495-497, 1975].

Применение МКА широко распространено в онкологии для изучения опухолевых антигенов, иммунодиагностики и иммунотерапии опухолей [Барышников А.Ю., Тоневицкий А.Г. Моноклональные антитела в лаборатории и клинике. М.: Медицина, 1997]. Следовательно, получение новых гибридом всегда актуально.

Моноклональные антитела, продуцируемые гибридомами, используются для выявления основных структурно-функциональных свойств белков, в том числе и GAGE. Белки семейства GAGE относятся к группе раково-тестикулярных антигенов человека и насчитывают около 16 членов на данный момент. Белки семейства GAGE могут быть потенциальными антигенами для иммунотерапии широкого спектра онкологических заболеваний, так как экспрессируются в различных типах опухолей, но не в нормальных тканях, а также вызывают иммунный ответ [Van den Eynde В, Peeters О, De Backer О, Gaugler В, Lucas S, Boon T. A new family of genes coding for an antigen recognized by autologous cytolytic T -lymphocytes on a human melanoma. J Exp Med, 1995; 182; c. 689-698]. Для оценки прогностических и терапевтических свойств антигенов семейства GAGE необходима проверка их экспрессии в опухолевых клетках на уровне белка, что может быть реализовано с помощью высокоспецифичных антител.

Задачей изобретения является получение штамма гибридных клеток, продуцирующего МКА к раково-тестикулярному антигену человека GAGE.

Поставленная задача решается тем, что предложен новый штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus α - продуцент моноклональных антител к раково-тестикулярному антигену человека GAGE.

Технический результат заявляемого изобретения состоит в расширении арсенала штаммов гибридом, продуцирующих МКА к раково-тестикулярному антигену человека GAGE, используемых для научно-исследовательских и медицинских целей, для иммуноферментной диагностики и контроля течения заболеваний.

Аналогов заявляемого штамма гибридомы - продуцента моноклональных антител к раково-тестикулярному антигену человека GAGE - не обнаружено.

Заявляемому штамму гибридомных культивируемых клеток животных mus musculus присвоено название 4G1-D2. Полученная новая гибридома 4G1-D2 - продуцент МКА к раково-тестикулярному антигену человека GAGE - обладает стабильными культуральными и морфологическими характеристиками, хранится во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИгенетика Минобрнауки России (БРЦ ВКПМ) под номером Н-174, дата депонирования 02 мая 2017 г. Полученная гибридома 4G1-D2 может использоваться при создании диагностических тест-систем с целью мониторинга при проводимой терапии и характеризуется следующими свойствами.

Штамм 4G1-D2 получали путем слияния клеток мышиной миеломы NS-1 с клетками селезенки мышей линии Balb/C, иммунизированных внутрибрюшинно рекомбинантным белком человека GAGE. Слияние проведено с помощью полиэтиленгликоля ПЭГ-1500. Селекция гибридных клеток проведена с помощью селективной среды ГАТ (гипоксантин - аминоптерин - тимидин). Штамм прошел 3 клонирования, позитивных клонов не менее 80%. Штамм синтезирует МКА, специфически взаимодействующие в твердофазном иммуноферментном анализе с рекомбинантным белком человека GAGE.

Гибридные клетки штамма 4G1-D2 растут в виде суспензии in vitro или в виде асцитной опухоли в перитонеальной полости после внутрибрюшинного введения гибридных клеток штамма 4G1-D2 сингенным мышам Balb/C.

Для культивирования штамма 4G1-D2 использовали культуральные флаконы. Во флаконы площадью 25 и 75 см2 вносили гибридные клетки штамма 4G1-D2 в количестве 1×106. В качестве культуральной среды использовали среду RPMI-1640, содержащую 20% телячьей эмбриональной сыворотки (ЭТС). Гибридные клетки штамма 4G1-D2 культивировали при t 37°C в атмосфере, содержащей 5% СО2. Частота пассирования - 2-3 суток. Кратность пересева - 1:2-1:4.

За 14 дней до введения гибридных клеток штамма 4G1-D2 мышам линии BALB/C предварительно вводили внутрибрюшинно пристан - 2,6,10,14-тетраметилпентадекан в дозе 0,3-0,5 мл на одну мышь. Далее мышам вводили внутрибрюшинно гибридные клетки штамма 4G1-D2 в дозе (5-10)×106 клеток на одну мышь. Асцитную жидкость, содержащую МКА-продуценты GAGE, забирали через 9-12 дней после введения.

Секрецию МКА-продуцентов GAGE штамма 4G1-D2 определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА). Секреция МКА-продуцентов GAGE на 7 день культивирования in vitro составляла 10-15 мкг/мл, титр МКА при культивировании in vitro в соотношении 1:1000-1:2000 (ИФА). Секреция МКА в асцитной жидкости при выращивании in vivo составила 6-10 мг/мл, титр МКА в асцитной жидкости при выращивании in vivo - в соотношении 1:106-1:107 (ИФА).

Получено МКА класса IgG1, легкая цепь - каппа, специфичность - GAGE.

Штамм 4G1-D2 сохраняли посредством криоконсервации в жидком азоте. За 24 часа до замораживания гибридные клетки штамма 4G1-D2 пассировали с кратностью рассева 1:2. Осажденные центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5-7 мин гибридные клетки штамма 4G1-D2 ресуспендировали в криозащитной среде, содержащей 90% телячьей эмбриональной сыворотки (ЭТС) и 10% диметилсульфоксида (DMSO), и разливали в пластиковые ампулы по 1 мл в концентрации (5-10)×106 клеток/мл, помещали в теплоизолирующий материал (пенополиуретан) и переносили в низкотемпературный холодильник при температуре -70°С на 24 часа. Для длительного хранения гибридные клетки штамма 4G1-D2 переносили в жидкий азот при температуре -196°С.

Для восстановления штамма 4G1-D2 проводили его быстрое размораживание при температуре 37°С. Гибридные клетки штамма 4G1-D2 разводили в 10 мл бессывороточной среды, осаждали центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5-7 мин и ресуспендировали в 5 мл культуральной среды, содержащей 20% ЭТС, в концентрации (3-4)×105 клеток/см2 и переносили в культуральный флакон. Жизнеспособность восстановленных гибридных клеток штамма 4G1-D2 составляла 70-80%, определяли по дифференциальной окраске гибридных клеток штамма 4G1-D2 с использованием 0,4% раствора трипанового синего, рН=7,2-7,3.

Стабильность продуцирования антител гибридными клетками штамма 4G1-D2 сохранялась на протяжении 25 пассажей в культуре клеток и 5 пассажей на мышах линии BALB/C.

При исследовании на контаминацию штамма 4G1-D2 в культуре штамма бактерий и грибов, а также заражения микоплазмой не обнаружено.

При кариологическом исследовании штамма 4G1-D2 модальное число хромосом составило 76. Маркерных хромосом не выявлено.

Для оценки сохранения реактивности МКА штамма 4G1-D2 с GAGE проводили иммуноферментный тест на связывание полученных МКА с GAGE: стенки лунок полистиролового планшета покрывали рекомбинантным белком GAGE1, вносили моноклональное антитело, затем конъюгат антимышиного иммуноглобулина с пероксидазой хрена и субстрат перекиси водорода с тимедин-3,3,5,5-тетраметилбензидином (ТМБ). При положительной реакции появлялось голубое окрашивание.

Рекомбинантный белок GAGE1 получали путем его экспрессии в составе в штамме-продуценте Е. coli, культивируя штамм BL21(DE3)pLysS, трансформированный плазмидой pGAGE1. Рекомбинантный белок GAGE1 был очищен хроматографически на колонке с Ni-агарозой после разрушения клеток продуцента ультразвуком и удаления клеточного дебриса.

Изобретение иллюстрируется фиг. 1-3 и табл. 1, 2.

На фиг. 1 представлена обзорная микроскопия гибридизации клеток мышиной миеломы NS-1 с клетками селезенки мышей линии Balb/C, иммунизированных внутрибрюшинно рекомбинантным белком GAGE1: А - клетки селезенки (спленоциты), Б - клетки миеломы, В - гибридизация спленоцитов с клетками миеломы.

На фиг. 2 показана полученная гибридома 4G1-D2. Гибридные клетки представляют собой крупные округлые клетки с узким ободком базофильной цитоплазмы, растут в виде конгломератов клеток по типу «гроздьев винограда». Ядра гиперхромные, неправильно-овальной формы, крупные, с грубой структурой ядерного хроматина.

На фиг. 3 представлен иммуноблот с МКА 4G1-D2. Дорожка А - рекомбинантный тиоредоксин человека, дорожка Б - рекомбинантный белок человека GAGE1, дорожка В - рекомбинантный белок человека GAGE2D.

В табл. 1 представлены результаты оценки связывания антител гибридомы 4G1-D2 с антигеном GAGE1 в культуральной жидкости (супернатанты) методом твердофазного ИФА.

В табл. 2 представлены результаты оценки связывания антител гибридомы 4G1-D2 с антигеном GAGE в асцитной жидкости методом твердофазного ИФА.

Пример 1. Получение штамма гибридомы 4G1-D2

Иммунизация

Мышей линии BALB/C в возрасте 3-4 месяцев трехкратно иммунизировали рекомбинантным белком GAGE1 по схеме: внутрибрюшинно вводили мышам 50 мкг рекомбинантного белка GAGE1 в полном адъюванте Фрейнда; через 21 сутки повторно внутрибрюшинно вводили 20 мкг рекомбинантного белка GAGE1 в неполном адъюванте Фрейнда; через 21 сутки внутривенно вводили мышам 20 мкг рекомбинантного белка GAGE в физиологическом растворе. На третий день после последней инъекции забирали для проверки на специфическую активность кровь у иммунизированных мышей. Титры специфических антител в сыворотках мышей определяли с помощью непрямого твердофазного ИФА, используя в качестве отрицательного контроля сыворотку крови неиммунизированной мыши в титре 1:100.

Гибридизацию проводили в стерильном боксе. На 4-й день после последней внутривенной инъекции извлекали селезенку мыши и проводили гибридизацию спленоцитов мыши в количестве 107 с клетками миеломной линии в количестве 106 в присутствии 1 мл раствора полиэтиленгликоля (ПЭГ/ДМСО, Sigma) в течение 1 минуты. Для слияния использовали перевиваемую клеточную линию мышиной миеломы NS-1, дефектную по гену ГГФРТ (гипоксантин-гунинфосфорибозилтрансфераза), т.е. не способную к синтезу ДНК. Миелома NS-1 синтезирует, но не секретирует легких цепей иммуноглобулинов. В результате слияния с родительскими лимфоцитами этот дефект устраняется. Таким образом, только гибридные клетки способны расти в селективной среде ГАТ. Гибридизацию проводят по методу Kohler G., Milstain С. [Kohler G., Milstain С., 1975]. Миеломные клетки дважды отмывали средой RPMI 1640 и смешивали с клетками селезенки в соотношении 1:10. Полученную смесь клеток отмывали средой RPMI 1640 и помещали в среду RPMI 1640 в объеме 20 мл в пробирку объемом 50 мл, центрифугировали при 800 об/мин в течение 3 минут и после инкубировали в течение 20 мин при температуре 37°С. Затем среду RPMI 1640 удаляли и к осажденным клеткам добавляли медленно, по каплям, в течение 1 минуты 1 мл 50% полиэтиленгликоля, предварительно прогретого при температуре 37°С. Затем в пробирку с клетками, обработанными полиэтиленгликолем, медленно добавляли 20 мл среды RPMI 1640. Далее клетки 2 раза отмывали, не встряхивая, при 800 об/мин в течение 3 мин, добавляли среду ГАТ с 20% культуральной среды и оставляли на 2 часа при температуре 37°С. После этого клетки ресуспендировали и разливали по 0,2 мл в концентрации (1-1,5)×105 клеток в лунки 96-луночного планшета. На 8-й день из среды удаляли ГАТ и далее культивирование проводили на среде RPMI-1640 с 20% ЭТС, 2 мМ/L-глутамина, 50 мкг/мл гентамицина. Полученные гибридные клетки инкубировали при температуре 37°C в атмосфере 5% СО2. Замену среды в лунках с гибридомными клонами проводили каждые 2-3 дня. Видимые колонии появлялись через 10-14 дней.

Для отбора положительных гибридных клонов, продуцирующих МКА, использовали непрямой твердофазный ИФА. В лунки 96-луночного полистиролового планшета вносили по 100 нг рекомбинантного белка GAGE, приготовленного на 0,01 М карбонатном буфере, рН 9,6, в объеме 100 мкл, и затем выдерживали при температуре 4°С в темноте в течение 16-18 ч. Лунки планшета отмывали фосфатно-солевым буферным раствором, содержащим 0,1% Твина-20 (ФСБ-Т) и 3% бычьего сывороточного альбумина (БСА). В лунки планшета вносили по 100 мкл культуральной жидкости МКА и инкубировали при температуре 37°C в течение 2 часов, отмывали ФСБ-Т и добавляли пероксидазный конъюгат антител к IgG мыши в разведении 1:1500. Инкубировали при температуре 37°C 1 час. После каждого этапа несвязавшиеся реагенты отмывали ФСБ-Т. В качестве хромогена использовали тетраметилбензидин (ТМБ). Интенсивность окраски в лунках определяли после остановки реакции 1М H2SO4 на спектрофотометре Multiscan МСС при длине волны 450 нм (табл. 1).

Клонирование гибридом состояло из 2-х этапов: приготовление питательного слоя (фидер) с использованием тимоцитов; клонирование гибридом методом лимитирующих разведений.

Из одной вилочковой железы мыши выделяли около 106 клеток. Вносили по 100 мкл суспензии клеток тимуса в лунки 96-луночного планшета, кроме краевых лунок. В краевые лунки вносят по 200 мкл среды RPMI 1640, содержащей антибиотики (для предотвращения испарения влаги и концентрирования рабочей среды в лунках, содержащих клетки). Инкубируют планшет с фидерным слоем в CO2-инкубаторе 24 часа. На следующий день, проверив тимоциты под микроскопом и убедившись, что они не загрязнены, приступили к клонированию гибридомных клеток. Готовили суспензии гибридомных клеток, ресуспендируя клеточный осадок в полной рабочей среде: 1 мл суспензии с концентрацией 103 клеток в 1 мл, 1 мл суспензии с концентрацией 102 клеток в 1 мл, 1 мл суспензии с концентрацией 500 клеток в 1 мл, 1 мл суспензии с концентрацией 50 клеток, 1 мл суспензии с концентрацией 10 клеток в 1 мл и 1 мл суспензии с концентрацией 5 клеток в 1 мл. Меняли в лунках среду через день, осторожно, избегая перекрестной контаминации лунок, чтобы не нарушить клеточный слой, поскольку гибридные клетки растут на фидерном слое в виде отдельных колоний. На 10-й, 14-й день проверяли супернатанты полученных гибридных клонов на антителообразующую активность (ИФА). Клонирование считается удачным, если рост гибридных клонов отмечен в 30% лунок. Отбирали колонии, выросшие в лунках, которые засевали с наименьшим количеством клеток на лунку. Если гибридных клонов выявлено больше, чем в 30% лунок, клонирование повторяли. Для наращивания гибридомные клоны переносили в стерильные культуральные флаконы площадью 75 см2 уже в неполной рабочей среде (с содержанием сыворотки 10%). Наращивание гибридных клеток необходимо для замораживания полученных стабильных клонов и для введения мышам линии BALB/C для получения асцитной жидкости, содержащей антитела. Флаконы с гибридомными клетками помещают в СО2-инкубатор. При последующем культивировании клеток среду меняли 2-3 раза в неделю.

Пример 2. Получение МКА 4G1-D2

За 1-2 нед. до введения гибридомных клеток, выращенных в культуре, мышам линии BALB/C в возрасте 3-4 мес. проводили интраперитонеальную инъекцию 0,3-0,5 мл минерального масла (пристана) либо за 3 дня до введения - вазелиновое масло по 0,2 мл на каждую мышь для лучшей приживаемости гибридомных клеток и во избежание развития солидных (твердых) опухолей. В процессе развития асцитной опухоли клетки гибридомы оздоравливаются и избавляются от бактериальной и вирусной инфекций. Скорость роста клеток, извлеченных из асцита, обычно значительно выше, чем до введения их в перитонеальную полость. Если вместо асцитной жидкости образовалась солидная опухоль, ее извлекали, гомогенизировали и вводили другим мышам. Каждой мыши вводили 106-107 гибридомных клеток в среде RPMI1640. Гибридома растет в виде асцитной опухоли, и асцитная жидкость содержит антитела в концентрации, приблизительно в 10-500 раз превышающей таковую в культуральной жидкости. Через 7-10 дней после введения гибридомных клеток у мышей собирали асцит, проверяли на антителопродуцирующую активность методом твердофазного ИФА (табл. 2). Часть полученной асцитной жидкости замораживали и хранили при температуре -30°С, а осадок клеток замораживали либо снова вводили мышам для дальнейшей наработки антител.

Пример 3. Иммуноблот с МКА 4G1-D2. Определение специфической активности в отношении рекомбинантных белков человека GAGE1 и GAGE2D

Рекомбинантные белки человека GAGE1, GAGE2D и тиоредоксин, полученные из одного источника, разгоняли в 12% полиакриламидном геле по методу Лэммли [Laemmli, U.К. (1970). Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 227(5259):680-685], после чего переносили на нитроцеллюлозную мембрану (GE Healthcare Life Sciences, Amersham, Germany) на аппарате Mini Trans-Blot (BIO RAD, США). Далее мембрану блокировали раствором 5% бычьего сывороточного альбумина (БСА) в 0,01 М фосфатно-солевом буфере (рН-7,4) и последовательно инкубировали с МКА 4G1-D2 при комнатной температуре 2 часа, затем с пероксидазным конъюгатом к целой молекуле IgG мыши (Sigma, США) при комнатной температуре 1 час с промежуточными трехкратными промываниями в 0,01 М фосфатно-солевом буфере, содержащем 0,1% Твина-20, после каждой инкубации. Визуализацию реакции проводили раствором субстратной смеси на основе диаминобензидина (0,05% диаминобензидина (Sigma, США), 0,015% Н2О2, 0,01 М фосфатно-солевой буфер, рН-7,4). Реакцию останавливали промывкой дистиллированной водой.

Как показал проведенный анализ, МКА 4G1-D2 специфически взаимодействовали с рекомбинантными белками человека GAGE1 и GAGE2D и не давали перекрестную реакцию с рекомбинантным тиоредоксином человека, имеющим сходный молекулярный вес (фиг. 3).

Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus α - продуцент моноклональных антител, специфичных к раково-тестикулярному антигену человека GAGE, депонированный во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИгенетика Минобрнауки России (БРЦ ВКПМ) под номером Н-174.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биохимии. Заявлено антитело, связывающееся с клаудином 6 (CLDN6) и ингибирующее рост опухоли in vivo.
Изобретение относится к области биохимии. Заявлен штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus Francisella tularensis.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus L.

Изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии. Предложен штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus L.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлен штамм культивируемых гибридных клеток животных Mus musculus XT 3Е5 - продуцент моноклональных антител изотипа G 2a к В-субъединице холерного токсина.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлен штамм культивируемых гибридных клеток животных Mus musculus XT 2Е5 - продуцент моноклональных антител изотипа G 1 к В - субъединице холерного токсина.
Изобретение относится к области иммунологии и представляет собой штамм F26 постоянной гибридомной линии клеток мыши Mus. musculus - продуцент моноклональных антител мыши к олигополисахаридному (ОПС) антигену B.
Изобретение относится к области биохимии, в частности к моноклональным антителам, связывающимся с с-Met, способных ингибировать как лиганд-зависимую, так и лиганд-независимую активацию с-Меt.

Изобретение относится к биотехнологии. Представлено моноклональное антитело против интерлейкина-6 человека, содержащее гипервариабельные участки тяжелой цепи CDRH-1: GFSLSTSGMGVG; CDRH-2: HIWWDDDKYYNPSLKS; и CDRH-3: RANYGTSYDYGMDY; и гипервариабельные участки легкой цепи CDRL-1: KASQSVSDVLT; CDRL-2: YASNRYT; и CDRL-3: QQGYRSPYT.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению вектора экспрессии, содержащего (а) нуклеотидную последовательность С68 и (б) мультиантигенную конструкцию ДНК, кодирующую иммуногенные полипептиды простатоассоциированных антигенов (РАА), что может быть использовано в медицине.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен мультиэлементный референтный материал и способ его получения.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен экспрессионный плазмидный лентивирусный вектор для гетерологичной экспрессии рекомбинантного человеческого белка CD44 в клетках млекопитающих.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлено антитело, связывающееся с клаудином 6 (CLDN6) и ингибирующее рост опухоли in vivo.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ определения безопасности пробиотических микроорганизмов, в котором в качестве тест-систем используются культуры клеток млекопитающих и человека.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к области гигиенической безопасности объектов пищевого назначения. Предложен способ определения безопасности пищевых ингредиентов, в котором в качестве тест-систем используются культуры клеток млекопитающих и человека.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлен штамм гибридных клеток животных Mus musculus 1G7 - продуцент моноклональных антител к ботулиническому токсину типа В.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлен штамм гибридных клеток животных Mus.

Изобретение относится к биотехнологии и касается штамма клеток CHO-IL7/13. Охарактеризованный штамм получен трансфекцией клеток CHOdhfr плазмидой pIPvES-DHFR/IL7, содержащей ген интерлейкина-7 человека.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к антителу или его функциональному фрагменту, направленным против эпитопа стафилококка золотистого, а также к их применению для обнаружения стафилококка золотистого.

Изобретение относится к биотехнологии, медицине, в частности к применению подкожного ксенографта клеточной линии беспигментной меланомы кожи человека mel Rac с мутацией гена NRAS и с адаптацией к росту со стабильной кинетикой у иммунодефицитных мышей Balb/c nude для доклинического изучения таргетных противоопухолевых средств.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к гибридомной технологии, и представляет собой штамм гибридных клеток mus musculus α - продуцент моноклональных антител к раково-тестикулярному антигену человека GAGE. Штамм депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИгенетика Минобрнауки России под номером Н-174. Изобретение позволяет получить высокоспецифичные моноклональные антитела, которые могут использоваться в экспериментальной онкологии для изучения структурно-функциональных свойств белков семейства GAGE в культурах клеток и клинических образцах. 3 ил., 2 табл., 3 пр.

Наверх