Этиловый эфир (5z)-2-амино-5-[1-бром-2-(4-бромфенил)-2-оксоэтилиден]- 4-оксо-1н-4,5-дигидрофуран-3-карбоновой кислоты, проявляющий противогрибковую активность
Владельцы патента RU 2654207:
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Пермская государственная фармацевтическая академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ПГФА) (RU)
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Пермский государственный национальный исследовательский университет" (ПГНИУ) (RU)
Изобретение относится к производным 2-аминофурана, а именно к новым биологически активным веществам - этиловому эфиру (5Z)-2-амино-5-[1-бром-2-(4-бромфенил)-2-оксоэтилиден]-4-оксо-1H-4,5-дигидрофуран-3-карбоновой кислоты формулы I , который может найти применение в качестве лекарственного противогрибкового препарата. Соединение (I) получают взаимодействием этилового эфира (5E)-2-амино-5-[2-(4-бромфенил)-2-оксоэтилиден]-4-оксо-1H-4,5-дигидрофуран-3-карбоновой кислоты с бромом в среде хлороформа. Это соединение представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, растворимое в диметилформамиде, уксусной кислоте, при нагревании - в этаноле, устойчивое при хранении. Технический результат - получение соединения, обладающего выраженным противогрибковым действием с минимальной подавляющей концентрацией 2.0 мкг/мл в отношении Candida albicans АТСС 10231, 1.0 мкг/мл в отношении Candida albicans АТСС 885-653. 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области органической химии, к производным 2-аминофурана, а именно к новым биологически активным веществам - этиловому эфиру (5z)-2-амино-5-[1-бром-2-(4-бромфенил)-2-оксоэтилиден]-4-оксо-1H-4,5-дигидрофуран-3-карбоновой кислоты формулы:
Соединение обладает противогрибковой активностью и, следовательно, может найти применение в качестве лекарственного противогрибкового препарата.
Известны структурные аналоги заявляемого соединения, получаемые взаимодействием 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандионов с циануксусным эфиром [Иванов Д.В., Игидов Н.М., Рубцов А.Е. Синтез производных 2-амино-5-(2-арил-2-оксоэтилиден)-4-оксо-1H-4,5-дигидрофуран-3-карбоновых кислот рециклизацией 5-арилфуран-2,3-дионов под действием производных цианоуксусной кислоты // Журн. орган, химии - 2016. - Т. 52, вып. 5. - С. 691-695]
В качестве эталона сравнения нами был взят противогрибковый препарат флуконазол [Celeste De Monte, Simone Carradori, Bruna Bizzarri, Adriana Bolasco et al / Anti-Candida activity and cytotoxicity of a large library of new N-substituted-1,3-thiazolidin-4-one derivatives // European Journal of Medicinal Chemistry 2016, 107, P. 82-96].
Задачей предлагаемого изобретения является получение нового, не описанного ранее этилового эфира (5z)-2-амино-5-[1-бром-2-(4-бромфенил)-2-оксоэтилиден]-4-оксо-1H-4,5-дигидрофуран-3-карбоновой кислоты, обладающего противогрибковым действием.
Поставленная задача достигается взаимодействием этилового эфира (5Е)-2-амино-5-[2-(4-бромфенил)-2-оксоэтилиден]-4-оксо-1H-4,5-дигидрофуран-3-карбоновой кислоты с бромом в среде хлороформа по схеме:
Пример 1. Получение соединения (I).
К 3 ммоль (1,10 г) этилового эфира (5Е)-2-амино-5-[2-(4-бромфенил)-2-оксоэтилиден]-4-оксо-1H-4,5-дигидрофуран-3-карбоновой кислоты II, растворенного в 40 мл абсолютного хлороформа, добавляли 10%-ный избыток брома (3,3 ммоль, 0,528 г) и кипятили в течение 20-30 минут до окончания выделения бромоводорода. Растворитель упаривали, сухой остаток перекристаллизовывали из этанола.
Получали 0,67 г (48%) бесцветного кристаллического вещества (I) с Тпл 232-234°С. C15H11Br2NO5. ИК-спектр, см-1: 3356 (NH), 1716 (СООС2Н5), 1692, 1674, 1606, 1587 (С=С, С=O). Спектр ЯМР 1Н, δ, м.д.: 1,17 (т, 3Н, COOCH2CH3), 4,12 (кв, 2Н, СООСН2СН3), 7,77 (м, 2Наром.), 7,87 (м, 2Наром.), 8,90 (с, 1Н, NH), 10,14 (с, 1H, NH).
Спектр ЯМР 13С, δ, м.д.: 14,18, 58,96, 86,85, 99,86, 128,66, 131,01, 132,17, 132,89, 147,20, 162,49, 172,40, 174,59, 187,26.
Заявляемое соединение представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, растворимое в ДМФА, уксусной кислоте, при нагревании - в этиловом спирте, устойчивое при хранении.
Пример 2. Исследование биологической активности.
Токсичность изучали на белых мышах (самках) массой 16-18 г при однократном внутрибрюшинном введении в виде взвеси в 2% крахмальной слизи. За животными вели наблюдение в течение 10 суток, фиксируя поведение, интенсивность и характер двигательной активности, наличие и характер судорог, координацию движений, тонус скелетной мускулатуры, реакции на тактильные, звуковые и световые раздражители, частоту и глубину дыхательных движений, ритм сердечных сокращений, состояние волосяного и кожного покрова, окраску видимых слизистых оболочек, потребление воды и пищи, изменение массы тела. Для исследуемого соединения 1 ЛД50 составляет >1200 мг/кг.
Рассчитывали острую токсичность, соблюдая рекомендации государственного фармакологического комитета по изучению общетоксического действия биологически активных веществ [Методические рекомендации по изучению общетоксического действия фармакологических средств. Утв. 25,12,97 / Вестн. фармакоп. комитета. - 1998. -№1. - С. 27-32].
Согласно классификации токсичности препаратов соединения I относятся к V классу практически нетоксичных препаратов [Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии: Справочник. М., 1977. - с. 196].
Противогрибковую активность определяли методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде Сабуро [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. - Ч. 1. - М.: Гриф и К, 2012. - С. 576-578]. Для испытуемого соединения (I) были определены минимальные подавляющие концентрации (МПК) в отношении фармакопейных штаммов С.albicans АТСС 885-653, С.albicans АТСС 10231, полученных из НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина ФГБОУ ВО СЗГМУ им. И.И. Мечникова Минздрава России, а также в отношении клинических штаммов С. krusei (1), С. krusei (2). Посевы производили в жидкую среду Сабуро с различной концентрацией испытуемых соединений. Исследуемые соединения в количестве 0,05 г растворяли в 5 мл диметилсульфоксида, 1 мл полученного разведения 1:100 соединяли с 4 мл жидкой среды Сабуро. Далее готовили ряд серийных разведений соединений с двукратно уменьшающейся концентрацией.
Культуры выращивали в пробирках на скошенной агаризированной среде (плотная среда Сабуро). Для определения противогрибковой активности использовалась 48-часовая культура. Для приготовления рабочей взвеси микроорганизмов производили смыв выросшей культуры изотоническим раствором натрия хлорида и устанавливали плотность микробной взвеси по стандарту мутности 5 единиц. Далее из полученной микробной взвеси готовили рабочий раствор с концентрацией 5×105 КОЕ/мл. Данную взвесь вносили в количестве 0,1 мл в пробирки с серийными разведениями изучаемых соединений. Таким образом, микробная нагрузка при определении противогрибковой активности составила 2-2,5×104 КОЕ/мл.
Учет результатов производили через 48 часов выдержки контрольных и опытных пробирок в термостате при температуре 24°С±1°С. Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) устанавливали по отсутствию признаков роста на питательной среде: последняя пробирка с задержкой роста (прозрачная) соответствует МПК соединения в отношении данного штамма.
Фунгистатический эффект исследуемого соединения I сравнивали с действием флуконазола [Celeste De Monte, Simone Carradori, Bruna Bizzarri, Adriana Bolasco et al. / Anti-Candida activity and cytotoxicity of a large library of new N-substituted-1,3-thiazolidin-4-one derivatives // European Journal of Medicinal Chemistry 2016, 107, P. 82-96]. Результаты испытаний представлены в таблице 1.
Как видно из таблицы 1, заявляемое соединение (I) при практической равной токсичности по противогрибковой активности сравнимо с препаратом сравнения - флуконазолом по отношению к Candida albicans АТСС 10231, Candida krusei (1, 2) и превосходит его по отношению к Candida albicans АТСС 885-653.
Следовательно, заявляемое соединение может найти применение в медицине в качестве противогрибкового лекарственного средства.
Этиловый эфир (5Z)-2-амино-5-[1-бром-2-(4-бромфенил)-2-оксоэтилиден]-4-оксо-1H-4,5-дигидрофуран-3-карбоновой кислоты формулы
обладающий противогрибковой активностью.