Способ получения комплекса технеция-99м с октреотидом для диагностики нейроэндокринных опухолей

Авторы патента:


Способ получения комплекса технеция-99м с октреотидом для диагностики нейроэндокринных опухолей
Способ получения комплекса технеция-99м с октреотидом для диагностики нейроэндокринных опухолей

Владельцы патента RU 2655392:

федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский Томский политехнический университет" (RU)

Изобретение относится к области фармацевтической химии, в частности к способу получения комплекса технеция-99м с октреотидом, который применяется для диагностики нейроэндокринных опухолей. Способ включает использование октреотида, модифицированного хелатирующим агентом, добавление олова(II) дихлорида дигидрата, связывание полученного реагента с технецием-99м. Октреотид модифицируют хелатирующим агентом сукцинимид-1-ил-6-(бис(пиридин-2-илметил)амино)гексаноатом в среде диметилформамида в присутствии триэтиламина при комнатной температуре в течение не менее 24 ч при перемешивании. Полученный раствор очищают полупрепаративно, используя жидкостную хроматографию, методом лиофилизации проводят отгонку летучих растворителей и высушивание. К октреотиду, модифицированному хелатирующим агентом, добавляют цитрат натрия и олова(II) дихлорида дигидрат, смешивают их, получают жидкий реагент, который стерилизуют фильтрацией и лиофилизируют с предварительной заморозкой до -50°С, а затем добавляют к полученному лиофилизату натрия пертехнетат с концентрацией технеция-99м 1 ГБк/мл и инкубируют в течение не менее 30 мин при комнатной температуре. Изобретение позволяет повысить радиохимическую чистоту и выход комплекса технеция-99м с октреотидом. 2 пр.

 

Изобретение относится к области фармацевтической химии, в частности к составам и способам получения радиоактивных препаратов медицинского назначения для радионуклидной диагностики нейроэндокринных опухолей.

Известен способ получения комплекса 99mTc-HYNIC-TOC технеция-99м с октреотидом для диагностики нейроэндокринных опухолей (Laura T.U.H. Melero, Emiko Muramoto and Elaine Bortoleti de Araujo. Preliminary studies of EDDA-Tricine-Hynic-[Tyr3]octreotide labeled with technetium-99m: radiopharmaceutical development for the diagnostic of neuroendocrine tumours // 2007 International Nuclear Atlantic Conference - INAC 2007 Santos, SP, Brazil, September 30 to October 5, 2007 BRASILEIRA DE ENERGIA NUCLEAR - ABEN ISBN: 978-85-99141-02-1), выбранный в качестве прототипа, включающий введение в реакционный сосуд последовательно 20 мкг октреотида, модифицированного хелатирующим агентом Hynic, производного соматостатина в 10%-ном растворе этанола, 10 мг этилендиамин-n,n'-диуксусной кислоты (EDDA) в 0,1 н. растворе NaOH, 20 мг трицина в 0,2 н. растворе натриевого фосфатного буфера с рН 6,2, 15 мкг SnCl2⋅2H2O в 0,1 н. растворе HCl и 1110 МБк TcO4- и кипячение полученной смеси на водяной бане. Радиохимическая чистота готового продукта составила 92,12%.

Недостатки этого способа:

- препарат до введения в него радиоизотопа технеция-99м находится в жидкой фазе, что ограничивает его срок годности;

- для модификации октреотида хелатирующим агентом HYNIC используется большое количество вспомогательных веществ;

- кипячение радиоактивного препарата в течение 10 минут в кипящей водяной бане является особо радиационно-опасной работой.

Техническая проблема, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, заключается в разработке способа получения комплекса технеция-99м с октреотидом для диагностики нейроэндокринных опухолей, позволяющего уменьшить количество радиационно-опасных технологических операций.

Предложенный способ получения комплекса технеция-99м с октреотидом для диагностики нейроэндокринных опухолей так же, как в прототипе, включает использование октреотида, модифицированного хелатирующим агентом, добавление олова(II) дихлорида дигидрата, связывание полученного реагента с технецием-99м.

Согласно изобретению октреотид модифицируют хелатирующим агентом сукцинимид-1-ил-6-(бис(пиридин-2-илметил)амино)гексаноатом в среде диметилформамида в присутствии триэтиламина при комнатной температуре в течение не менее 24 ч при перемешивании. Полученный раствор очищают полупрепаративно, используя жидкостную хроматографию. Методом лиофилизации проводят отгонку летучих растворителей и высушивание. К октреотиду, модифицированному хелатирующим агентом, добавляют цитрат натрия и олова(II) дихлорида дигидрат, смешивают их, получают жидкий реагент, который стерилизуют фильтрацией и лиофилизируют с предварительной заморозкой до -50°С. Затем добавляют к полученному лиофилизату натрия пертехнетат с концентрацией технеция-99м 1 ГБк/мл и инкубируют в течение не менее 30 мин при комнатной температуре.

Полученный комплекс технеция-99м с DPAH-модифицированным октреотидом имеет следующую формулу:

где DPAH - хелатирующий центр, способный образовывать комплекс с технецием-99м и связанный амидной связью с α-аминогруппой фенилаланина.

Модификация октреотида сукцинимид-1-ил 6-(бис(пиридин-2-илметил)амино)гексаноатом является по своей сути синтезом амидной связи, протекающим в кинетической области, и скорость ее реакции прямо пропорциональна температуре, концентрации и давлению, поэтому при комнатной температуре с соблюдением стехиометрических концентраций при атмосферном давлении для максимального выхода модифицированного октреотида требуется 24 ч при условии поддержания однородности реакционной смеси.

При использовании хелатирующего агента HYNIC, как и в прототипе, для получения прочной связи в комплексе с технецием-99м, имеющим высокую радиохимическую чистоту, необходимо проводить радиационно-опасную технологическую операцию - кипячение продукта в течение 10 минут. Исключить данную операцию удалось за счет использования сукцинимид-1-ил-6-(бис(пиридин-2-илметил)амино)гексаноата, при котором высокая радиохимическая чистота достигается инкубированием при комнатной температуре в течение не менее 30 мин - времени, достаточного для связывания технеция-99м с хелатирующим центром (DPAH). Увеличение температуры способствует также увеличению скорости протекания несколько нежелательных параллельных и последовательных реакций, связанных с разложением хелатирующего агента, в результате, кроме комплекса технеция-99м с октреотидом, получаются побочные продукты. Увеличение времени инкубирования до 40-50 минут неэффективно ввиду малого срока жизни изотопа технеция-99м.

В прототипе при получении комплекса технеция-99м с октреотидом для диагностики нейроэндокринных опухолей при взаимодействии семивалентного технеция-99м с двухвалентным оловом в водной среде происходит дополнительное образование коллоида типа (-O-TcO-O-SnCl2-O-ТсО-)n, где n=2, 3 - число, зависящее от рН раствора. Образование коллоида происходит также вследствие гидролиза избытка вводимого в реакционную смесь SnCl2 и, как следствие, ведет к увеличению содержания гидролизованного 99mTcO2, адсорбированного на коллоиде, что приводит к нецелевому накоплению радиоактивности в печени при радиодиагностических процедурах. Устранение этого эффекта достигнуто путем предложенной лиофилизации реагента при низких температурах, сохраняющей его структурную целостность и биологическую активность, и уже введения радиоизотопа технеция-99м, содержащегося в физиологическом растворе, в лиофилизат, а не в жидкий реагент, как в прототипе.

Предлагаемый способ получения комплекса технеция-99м с октреотидом для диагностики нейроэндокринных опухолей позволяет получать продукт с высокой радиохимической чистотой (более 96%).

Технический результат от предлагаемого изобретения состоит в повышении радиохимической чистоты и выхода комплекса технеция-99м с октреотидом и удобстве приготовления комплекса для практического применения медицинским персоналом в условиях больницы без использования дополнительного оборудования (мешалка, шейкер, вортекс, качалка).

Пример 1. В реакционном сосуде, снабженном мешалкой, 9,8⋅10-3 ммоль октреотида (производитель АО «Фарм-Синтез») растворили в 2 мл диметилформамида, добавили 0,1 ммоль триэтиламина, 0,049 ммоль сукцинимид-1-ил-6-(бис(пиридин-2-илметил)амино)гексаноата и выдержали при комнатной температуре в течение 24 часов при периодическом перемешивании. По окончании синтеза отобрали пробу и провели контроль полученного полупродукта методом ВЭЖХ на хроматографе Ultimate 3000 (время выхода продукта Rf=13,29 мин, колонка С18(2) Luna 5 мкм, 100 , 250×4.6 мм, градиент концентрации: 0 мин 100% А (0% В), 5 мин 80% А (20% В), 10 мин 65% А (35% В), 15 мин 50% А (50% В), 25 мин 20% А (80% В), 30 мин 0% А (100% В), 32 мин 95% А (5% В), где система А - 0,1% TFA и система Б - 0,1% TFA/ацетонитрил, скорость потока 1 мл/мин). Затем провели очистку полученного полупродукта полупрепаративно с использованием системы ВЭЖХ Ultimate 3000 с системой сбора фракций (колонка С18(2) Luna 10 мкм, 100 , 250×10 мм, градиент концентрации 0 мин 100% А (0% В), 5 мин 80% А (20% В), 10 мин 65% А (35% В), 15 мин 50% А (50% В), 25 мин 20% А (80% В), 30 мин 0% А (100% В), 32 мин 95% А (5% В), где система А - 0,1% TFA и система Б - 0,1% TFA/ацетонитрил, скорость потока 12 мл/мин). По окончании очистки фракции, соответствующие целевому продукту, объединили и определили выход DPAH-модифицированного октреотида (молекулярный вес m/z=1314,4), который составил 60,15%. Отгонку летучих растворителей и высушивание DPAH-модифицированного октреотида проводили методом лиофилизации в лиофильной сушке типа FreeZone 2,5L. Лиофилизат DPAH-модифицированного октреотида имеет следующую структуру:

Затем готовили лиофилизат на основе полученного DPAH-модифицированного октреотида технецием-99м. Во флакон вместимостью 10 мл внесли 100 мкл DPAH-модифицированного октреотида с концентрацией 0,2 мг/мл (20 мкг), добавили 80 мкл цитрата натрия с концентрацией 100 мг/мл (8 мг) и 60 мкл свежеприготовленного раствора олова(II) дихлорида дигидрата с концентрацией 7 мг/мл (0,42 мг). Полученную смесь стерилизовали через фильтр Steriflip-GP Filter Unit. 0,22 мкм во флакон вместимостью 10 мл. После этого флакон поместили в лиофильную сушку FreeZone 2,5L и провели предварительную заморозку смеси до температуры -50°С, а затем лиофилизировали до полного удаления влаги.

После извлечения флакона из сушки к полученному лиофилизату добавили 2 мл натрия пертехнетата с содержанием технеция-99м 2000 МБк и инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре.

Выход реакции мечения - радиохимическую чистоту полученного продукта - оценивали методом тонкослойной хроматографии в ацетоне и смеси C2H5OH:25%NH4OH:H2O (2:1:5) с последующим изучением распределения активности технеция-99м по длине радиохроматограмм. Радиохимическую чистоту меченого продукта рассчитывали по разнице общей активности технеция-99м в пробе препарата и суммы концентраций невосстановленных пертехнетат ионов и коллоида гидролизованного технеция-99м (СГТ). Расчеты, сделанные по этим радиохроматограммам, показали, что общее содержание примесей невосстановленных пертехнетат ионов и гидролизованного технеция-99м в препарате составляет 3,8%, а его радиохимическая чистота - 96,2%.

Полученный в результате проведенных операций комплекс технеция-99м с DPAH-модифицированным октреотидом имеет следующий состав: технеция-99м - 1,0 ГБк/мл, DPAH-модифицированного октреотида - 10 мг/мл, олова(II) дихлорида дигидрата - 0,21 мг/мл, натрия цитрата - 4,0 мг/мл.

Пример 2. Получение комплекса технеция-99м с октреотидом проводили так же, как и в примере 1, с тем отличием, что лиофилизацию смеси DPAH-модифицированного октреотида, цитрата натрия и олова(II) дихлорида дигидрата осуществляли без предварительного замораживания. Отсутствие стадии предварительной заморозки снизило радиохимическую чистоту до 89,0%, что хуже, чем в примере 1 и прототипе.

Способ получения комплекса технеция-99м с октреотидом для диагностики нейроэндокринных опухолей, включающий использование октреотида, модифицированного хелатирующим агентом, добавление олова(II) дихлорида дигидрата, связывание полученного реагента с технецием-99м, отличающийся тем, что октреотид модифицируют хелатирующим агентом сукцинимид-1-ил-6-(бис(пиридин-2-илметил)амино)гексаноатом в среде диметилформамида в присутствии триэтиламина при комнатной температуре в течение не менее 24 ч при перемешивании, полученный раствор очищают полупрепаративно, используя жидкостную хроматографию, методом лиофилизации проводят отгонку летучих растворителей и высушивание, к октреотиду, модифицированному хелатирующим агентом, добавляют цитрат натрия и олова(II) дихлорида дигидрат, смешивают их, получают жидкий реагент, который стерилизуют фильтрацией и лиофилизируют с предварительной заморозкой до -50°С, а затем добавляют к полученному лиофилизату натрия пертехнетат с концентрацией технеция-99м 1 ГБк/мл и инкубируют в течение не менее 30 мин при комнатной температуре.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии и химико-фармацевтической промышленности. Предложено применение синтетических пептидов в качестве специфических ингибиторов клатрина.

Изобретение относится к области фармацевтической технологии и относится к ацетату KIFGSLAFL в форме твердого аморфного вещества, способу его получения и фармацевтическому препарату пептидной вакцины, содержащему указанный ацетат.

Изобретение относится к применению соединения с химической формулой Tyr-dAla-Phe-Gly-Phe-Leu-NH2 в качестве средства, увеличивающего устойчивость сердца к реперфузионному повреждению, например, для уменьшения повреждения миокарда при ишемии/реперфузии у пациентов с острым инфарктом миокарда, в ходе кардиохирургических вмешательств с использованием искусственного кровообращения и при трансплантации сердца.

Настоящее изобретение относится к иммунологии. Предложены антитело и его фрагмент, которые связываются с фосфо-эпитопом на белке Тау, а также кодирующие их полинуклеотиды; линии клеток, продуцирующие антитела; вектор, содержащая его клетка-хозяин и способ получения антитела и его функционального фрагмента.

Изобретение относится к новым пептидам, обладающие активностью агонистов NPR-B, которые могут быть использованы для лечения и профилактики нарушений, опосредованных натрийуретическими пептидами, например, таких как глаукома, гипертензия глаза и оптические нейропатии.

Изобретение относится к соединениям формулы (I), их солям, фармацевтическим композициям, и их применению в качестве агонистов V1a-рецепторов вазопрессина при лечении, например, осложнений цирроза, включая бактериальный перитонит, HRS2 (гепаторенальный синдром II типа) и рефрактерный асцит.

Настоящее изобретение относится к биохимии, в частности к выделенному пептиду, обладающему способностью к индукции цитостатических Т-лимфоцитов (CTL) в присутствии антигенпрезентирующих клеток (APC), несущих HLA-A*0201 или HLA-A*2402 антиген.

Изобретение относится к выделенным пептидам, способным вызывать антигенспецифический Т-клеточный ответ на человеческий циклин A1 (CCNA1). Предложены композиции и способы для индукции антигенспецифических Т-клеточных ответов против человеческого циклина A1 (CCNA1), который в данном документе определяется как антиген, ассоциированный с лейкемией, на основании его сверхэкспрессии при остром миелоидном лейкозе (AML), в том числе в лейкемических стволовых клетках (LSC) и в иммунологически привилегированных клетках семенника, но не в других нормальных типах клеток.

Изобретение относится к композициям с высокой степенью проникновения или пролекарствам с высокой степенью проникновения на основе пептида или родственного пептиду соединения, которые содержат функциональную единицу, линкер и транспортную единицу.

Изобретение относится к области биохимии, конкретно к новому биологически активному соединению - пептиду, обладающему лечебным действием против болезни Альцгеймера формулы Ala-Trp-Lys-Val-Leu-Ser-Pro-Gln-Gly-Gly, и может быть использовано для создания препарата для терапии болезни Альцгеймера.
Изобретение относится к новому жидкому реагенту для получения органо-неорганических перовскитов, которые могут быть использованы для светопоглощающих материалов в солнечной энергетике.

В настоящем изобретении предложен способ получения композиций карбоксилатов переходных металлов путем объединения в полярном апротонном первом растворителе соединения-предшественника переходного металла и карбоксилата металла Группы 1 или Группы 2 в, по существу, бескислотных и, по существу, безводных условиях с получением смеси, содержащей композицию карбоксилата переходного металла.
Изобретение относиться способу получения трис(2-карбоксиэтил)фосфиновых октаэдрических халькогенидных кластерных комплексов рения состава Н16[{Re6Q8}(Р(СН2СН2СОО)3)6] (Q=S, Se).

Изобретение относится к медицине, в частности к применению мази, получаемой путем смешения намагничивающегося металл-саленового комплексного соединения с основой в качестве антибластомного лекарственного средства.

Изобретение относится к способу получения металлоорганических каркасных соединений с октакарбоксифталоцианинатом металла в качестве основной структурной единицы.

Предложен способ получения порошкообразных соединений железа и марганца, хорошо растворяющихся в воде, применимых в качестве удобрений в сельском хозяйстве. Предложенный способ получения порошкообразных водорастворимых аминных комплексов трис(оксиэтилидендифосфоната) дижелеза(III) Fe2(H2L)3⋅mAm⋅nH2O, трис(оксиэтилидендифосфоната) железа(III) Fe(H3L)3⋅kAm⋅nH2O, оксиэтилидендифосфоната марганца(II) MnH2L⋅qAm⋅nH2O, бис(оксиэтилидендифосфоната) марганца(II) Mn(H3L)2⋅pAm⋅nH2O, где L - анион оксиэтилидендифосфоновой кислоты (НО)2(O)РС(СН3)(ОН)Р(O)(ОН)2, включает перемешивание водной суспензии малорастворимых тетрагидрата трис(оксиэтилидендифосфоната) дижелеза(III) Fe2(H2L)3⋅4H2O, или тетрагидрата трис(оксиэтилидендифосфоната) железа(III) Fe(H3L)3⋅4H2O, или дигидрата оксиэтилидендифосфоната марганца(II) MnH2L⋅4H2O, или тетрагидрата бис(оксиэтилидендифосфоната) марганца(II) Mn(H3L)2⋅4H2O с добавкой промотора растворимости (амина - Am) до полного растворения суспензии и образования гомогенного раствора, фильтрование раствора, упаривание, высушивание твердого продукта при атмосферном давлении на воздухе при температуре 95-110°С и измельчение полученной сухой массы, отличающийся тем, что в качестве промотора растворимости используют органический амин, выбранный из моноэтаноламина, трис(гидроксиметил)аминометана, 2,2'-(этилендиокси)бис(этиламина), где m=5, 6, n=0, 2, 4, k=6, р=3, q=1, 2, причем амин добавляют к суспензии малорастворимого комплекса в самом начале процесса.

Изобретение относится к способу получения аминокислотных хелатных соединений. Способ характеризуется тем, что оксиды металлов, и/или карбонаты металлов, и/или сульфаты металлов, и/или хлориды металлов, и/или гидроксиды металлов в твердой форме механически активируют и затем активированные оксиды металлов и/или карбонаты металлов, и/или гидроксиды металлов, и/или сульфаты металлов, и/или хлориды металлов совместно с аминокислотами переводят в твердую форму и превращают в аминокислотные хелатные соединения в твердофазной реакции.

Изобретение относится к соединению, представленному формулой , или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвату. Значения радикалов следующие: Rt - Н, C1-C8 алкильная группа, ион аммония, ион щелочного или щелочноземельного металла; R84 - незамещенный C1-8 алкил; R - С1-8 гидроксиалкил, C1-8 алкоксиалкил, C1-8 аминоалкил, (CH2)8(NHC(S)NH)Ph(SO2NH2), (CH2)dPh(SO2NH2), (CH2)5C(O)NH-(1-ацетилпирролидин-2-ил)борная кислота, (1-ацетилпирролидин-2-ил)борная кислота, (CH2)4CH(NH2)CO2H, (CH2)3CH(NH2)CO2H, (CH2)2CH(NH2)CO2H, -(CH2)d-R80, -C(O)(CH2)d-R80, или аминокислотный радикал; R80 - карбоксилат, С6-10 арил, 3-6 членный гетероциклил, аминокислота; d представляет собой целое число в интервале от 0 до 12 включительно; и R82, R83, R85 и R86 - водород, или замещенный или незамещенный алкил, простой эфир, сложный эфир, СН2СН2ОСН2СН3, СН2СН(ОСН3)2, -(CH2)d-R80, или (CH2)dR87; где R87 представляет собой фосфонат или фосфинат.

Изобретение относится к соединениям формулы I, II или IV где значения радикалов W, V, Ra, Rb, X, L, Rt, A представлены в формуле изобретения. Заявленные соединения распознают и связывают CA-IX протеин, могут включать радиоактивный элемент для радионуклидной визуализации или терапевтического применения.

Изобретение относится к новым радиофармацевтическим соединениям структурной формулы I. В формуле I R обозначает Н или (C1-C8)алкильную группу; W обозначает связь, -CH(NH2)-, -C(O)-NH-CH(COOH)-, -O-(CH2)n-O-(CH2)n- или -(CH2)nO(CH2)nO(CH2)n; Z обозначает -NHC(O)-, -NH-C(O)-CH(NH2)- или -C(O)-NH-CH(COOH)-; e целое число от 1 до 4; f целое число от 0 до 10; g целое число от 0 до 10; n целое число от 0 до 2; значения радикала NRaRb приведены в формуле изобретения.

Группа изобретений относится к области медицины, в частности к способу визуализации позитронно-эмиссионной томографией (ПЭТ) LRRK2 в ткани объекта, согласно которому: вводят соединение формулы I где m - это 0 или 1; X - это -NH; R1 - это С1-6 алкил, С3-6 циклоалкил; R2 - это гало-С1-6 алкил; R3 - это -OR4; R4 - это С1-6 алкил; гало-С1-6 алкил; n - это 0 или 1; R5 и R6 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют морфолино; и R7 представляет собой гало; или его фармацевтически приемлемую соль объекту, где соединение включает по меньшей мере одну С11 или F18 метку; позволяют соединению проникнуть в ткань объекта и собирают изображение ПЭТ ткани ЦНС или головного мозга.

Изобретение относится к области фармацевтической химии, в частности к способу получения комплекса технеция-99м с октреотидом, который применяется для диагностики нейроэндокринных опухолей. Способ включает использование октреотида, модифицированного хелатирующим агентом, добавление олова дихлорида дигидрата, связывание полученного реагента с технецием-99м. Октреотид модифицируют хелатирующим агентом сукцинимид-1-ил-6-амино)гексаноатом в среде диметилформамида в присутствии триэтиламина при комнатной температуре в течение не менее 24 ч при перемешивании. Полученный раствор очищают полупрепаративно, используя жидкостную хроматографию, методом лиофилизации проводят отгонку летучих растворителей и высушивание. К октреотиду, модифицированному хелатирующим агентом, добавляют цитрат натрия и олова дихлорида дигидрат, смешивают их, получают жидкий реагент, который стерилизуют фильтрацией и лиофилизируют с предварительной заморозкой до -50°С, а затем добавляют к полученному лиофилизату натрия пертехнетат с концентрацией технеция-99м 1 ГБкмл и инкубируют в течение не менее 30 мин при комнатной температуре. Изобретение позволяет повысить радиохимическую чистоту и выход комплекса технеция-99м с октреотидом. 2 пр.

Наверх