Способ определения и обнаружения в моче антиретровирусных лекарственных средств в комбинированных сочетаниях


G01N1/28 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2655804:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Иркутский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в химико-токсикологических и контрольно-аналитических лабораториях для разделения, идентификации и анализа лекарственных средств. Способ определения и обнаружения в моче абакавира, ламивудина, зидовудина и ставудина в комбинированных сочетаниях путем хроматографирования в тонком слое сорбента раствора определяемых веществ и стандартных образцов веществ-свидетелей отличается тем, что готовят испытуемый раствор путем изолирования определяемых веществ из мочи хлороформом и насыщенным раствором аммония сульфата при рН 8,0, проводят хроматографирование в тонком слое сорбента на пластинках «Сорбфил» в системе растворителей этилацетат-дихлорметан-25% раствор аммиака в соотношении 17:4:1 и обнаружение зон веществ на хроматограмме в УФ-свете. 1 пр.

 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины и может быть использовано в химико-токсикологических и контрольно-аналитических лабораториях для разделения, идентификации и анализа абакавира, ламивудина, зидовудина и ставудина в комбинированных сочетаниях.

Широкое применение в медицинской практике находят антиретровирусные лекарственные средства из класса нуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы. Среди них ведущее положение занимают абакавир, ламивудин, зидовудин, ставудин, которые нашли применение при лечении заболеваний, вызываемых вирусами иммунодефицита человека (ВИЧ-1 и ВИЧ-2). Длительное применение антиретровирусных лекарственных средств, наличие большого числа нежелательных реакций, а также сочетание их с другими лекарственными средствами может привести к острому отравлению или смерти. Наиболее часто всречаются случаи отравления абакавиром, ламивудином, зидовудином и ставудином в сочетании с психотропными, обезболивающими, седативными лекарственными средствами амитриптилином, респиридоном, азалептином, галоперидолом, неулептилом, милипрамином, хлорпртексеном, флуоксетином, ибупрофеном, фенобарбиталом.

Одной из актуальных проблем химико-токсикологического и фармацевтического анализа является разработка новых и усовершенствование существующих способов идентификации комбинированных сочетаний лекарственных средств. Для химико-токсикологического и аналитического контроля целесообразно использовать простые, но надежные и производительные экспрессные методики анализа.

Среди современных методов химико-токсикологического и фармацевтического анализа важное место занимает хроматография в тонком слое сорбента, которая широко применяется как для целей разделения, так и для идентификации лекарственных средств в комбинированных сочетаниях.

Известен способ идентификации абакавира, который заключается в приготовлении водного раствора испытуемого вещества с последующим хроматографированием на пластинках для ВЭТСХ, покрытых слоем силикагеля 60F254 фирмы Merck в системе растворителей ацетон-метанол-аммония гидроксид-хлороформ (55:5:6:34) и идентификацией УФ-светом (НД 42-10406-05 «Таблетки абакавира, покрытые оболчкой, 300 мг»).

Наиболее близким является способ определения циннаризина в комбинированных сочетаниях с психотропными лекарственными средствами путем приготовления растворов испытуемых веществ с последующим хроматографированием на хроматографических пластинках «Армсорб» в системе растворителей н-гептан-этанол 95%-25% раствор аммиакака (6:2:2) и идентификацией в УФ-свете при длине волны 254 нм и реактивом Драгендорфа (Чмелевская Н.В., Илларионова Е.А., Цыренов Б.М. Разработка методик обнаружения циннаризина в комбинированных сочетаниях с психотропными лекарственными средствами // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. трудов. - Пятигорск, 2012. - Вып. 67. - С. 290-291). В этой работе предложен способ хроматографирования в тонком слое сорбента для разделения и идентификации циннаризина в сочетании с амитриптилином, аминазином, азалептином, галоперидолом, трифтазином и неулептином, который оказался неселективным для определения абакавира, ламивудина, зидовудина и ставудина в сочетании с психотропными, обезболивающими, седативными лекарственными средствами амитриптилином, респиридоном, азалептином, галоперидолом, неулептилом, милипрамином, хлорпртексеном, флуоксетином, ибупрофеном, фенобарбиталом. Предложенные автором условия хроматографирования не позволяют разделить исследуемые комбинированные сочетания антиретровирусных лекарственных средств после изолирования их из мочи.

В предлагаемом способе авторы используют в качестве растворителя для изолирования испытуемых растворов из мочи - хлороформ и насыщенный раствор аммония сульфата при рН 8, чувствительность определения в 2,5 раз выше, чем в прототипе, показана возможность хроматографирования на пластинках «Сорбфил» в системе растворителей этилацетат-дихлорметан-25% раствор аммиака в соотношении 17:4:1 и идентификацией в УФ-свете при длине волны 254 нм.

Использование в качестве растворителя хлороформа и насыщенного раствора аммония сульфата при рН 8,0 и системы растворителей этилацетат-дихлорметан-25% раствор аммиака (17:4:1) позволяет четко разделить пятна определяемых веществ, что повышает селективность, объективность и чувствительность анализа, которая составила 0,02 мкг/мл.

Технический результат достигается путем изолирования из мочи определяемых веществ и приготовления растворов стандартных образцов сравнения с последующим их хроматографированием и обнаружением УФ-светом.

Новым в достижении технического результата является то, что изолирование испытуемых веществ из мочи осуществляют хлороформом и насыщенным раствором аммония сульфата при рН 8,0.

Новым является также то, что в качестве подвижной фазы используют систему растворителей этилацетат-дихлорметан-25% раствор аммиака в соотношении 17:4:1.

Исследуемые лекарственные вещества характеризуются наличием в молекулах различных функциональных групп и поэтому отличаются физико-химическими свойствами. Исходя из этого, оптимальным методом их разделения следует считать метод хроматографии в тонком слое сорбента, который характеризуется экспрессностью, селективностью, высокой чувствительностью, несложным аппаратурным оснащением, простотой выполнения.

Тонкослойная хроматография (ТСХ) является наиболее распространенным методом анализа лекарственных, наркотических веществ и их метаболитов в биологических объектах и на этапе скрининга служит преобладающим источником информации. Данный метод применяется в общем и частном скрининге.

Для выбора условий разделения исследуемых веществ методом ТСХ использовали пластины на основе силикагеля «Сорбфил», которые имеют высокую степень активности, стандартизированную толщину сорбента.

Детекцию пятен проводили путем просмотра пластин в УФ-свете при длине волны 254 нм.

Предварительно нами была определена хроматографическая подвижность исследуемых веществ в общих системах растворителей, наиболее часто применяемых для веществ основного характера в химико-токсикологическом анализе.

В качестве общих систем использовали:

I. Бензол-диоксан-25% раствор аммиака (12:7:1);

II. Этилацетат-хлороформ-25% раствор аммиака (17:2:1,5);

III. Хлороформ-этанол-25% раствор аммиака (30:30:1);

IV. Толуол-ацетон-25% раствор аммиака (50:50:1);

V. Этилацетат-ацетон-этанол-25% раствор аммиака (50:45:4:1);

VI. Этанол-25% раствор аммиака (49,25:0,75);

VII. Этилацетат-метанол-25% раствор аммиака (17:2:1).

Система этилацетат-хлороформ-25% раствор аммиака (17:2:1,5) является наиболее подходящей из выше перечисленных сочетаний для разделения исследуемых лекарственных веществ. Данная система может быть рекомендована в скрининге при проведении ненаправленного анализа. В остальных общих системах, разделение исследуемых веществ идет недостаточно четко, наблюдается размытие зон адсорбции, а также наличие «хвостов».

Для увеличения значения ΔRf между зонами исследуемых веществ провели варьирование количеством частей подвижной фазы этилацетат-хлороформ-25% раствор аммиака (17:2:1,5) (базовая система).

Увеличение количества этилацетата в системе привело к росту подвижности таких лекарственных веществ как тофизопам, респиридон, мелипрамин, ставудин, подвижность тофизопама и фенобарбитала при этом практически не изменилась, а подвижность других лекарственных веществ уменьшилась. Таким образом, варьирование количеством этилацетата в системе не привело к существенному увеличению ΔRf между зонами, а в некоторых случаях даже уменьшило разделяющую способность исследуемых соединений.

Изменение в системе количества хлороформа от двух до шести частей приводит к увеличению подвижности таких лекарственных веществ, как ламивудин, флуоксетин, к уменьшению подвижности тофизопама, спитомина, фенобарбитала, неулептила, милипрамина и практически не повлияло на поведение абакавира, зидовудина, ставудина, хлорпротексена, респиридона, азалептина и ибупрофена. В ходе дальнейших экспериментальных исследований провели замену хлороформа на дихлорметан. Определено, что лучшей разделяющей способностью обладает система, в которой дихлорметана 4 части.

Учитывая тот факт, что исследуемые нами лекарственные препараты обладают основными свойствами, в ходе дальнейших исследований провели варьирование количеством аммиака в системе. Изменение количества 25% раствора аммиака в системе по-разному сказывается на хроматографической подвижности исследуемых лекарственных веществ. Хроматографическая подвижность тофизопама, респиридона, ставудина, ибупрофена снижается при увеличении количества аммиака в системе, а азалептина, амитиптиллина, милипрамина, хлорпротексена, флуоксетина, фенобарбитала, азалептина, неулептина, наоборот, увеличивается. Лучшей разделяющей способностью обладает система, в которой количество аммиака составляет 1,0. В результате проведенных экспериментов найдена подвижная фаза этилацетат-дихлорметан-25% раствор аммиака (17:4:1), позволяющая разделить комбинированные сочетания абакавира, ламивудина, зидовудина, ставудина и психотропных, обезболивающих и седативных лекарственных веществ, наиболее часто применяемых при лечении ВИЧ-зависимых, и получить зоны веществ правильной формы.

Сопоставительный анализ с прототипом показывает, что заявляемое техническое решение отличается тем, что в качестве растворителя для изолирования определяемых веществ используют хлороформ и насыщенный раствор аммония сульфата при рН 8.0, хроматографирование проводят в системе этилацетат-дихлорметан-25% раствор аммиака в соотношении 17:4:1, что соответствует критерию изобретения «новизна».

Новая совокупность признаков обеспечивает повышение селективности, объективности и чувствительности анализа, что соответствует критерию «промышленная применимость».

При анализе известных решений было выявлено, что в них отсутствуют сведения о влиянии отличительных признаков на достижение поставленного технического результата, следовательно, изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Способ осуществляют следующим образом. 10 мл мочи, содержащей смесь исследуемых веществ, переносят в делительную воронку, добавляют 25% раствор аммиака до рН 8,0, 10 мл насыщенного раствора аммония сульфата, 30 мл хлороформа и затем проводят экстракцию однократно в течение 3 минут. Хлороформные извлечения переносят в фарфоровую чашку и оставляют при комнатной температуре до удаления органического растворителя. Полученный сухой остаток растворяют в 2 мл хлороформа и перемешивают.

На линию старта пластинки «Сорбфил» размером 10×10 см микропипеткой наносят по 0,4 мл раствора смеси. Рядом наносят по 0,4 мл растворов стандартных образцов веществ-свидетелей (СОВС) в хлороформе, содержащихся в смеси. Пластинку сушат на воздухе в течение 5 минут, а затем помещают в хроматографическую камеру со смесью растворителей: этилацетат-дихлорметан-25% раствор аммиака (17:4:1) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт растворителя пройдет почти до конца пластинки, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 20 минут и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.

Для приготовления растворов стандартных образцов веществ-свидетелей (СОВС) берут 0,2 мкг СОВС и растворяют в 10 мл хлороформа.

Предлагаемый способ поясняется следующими примерами.

Пример 1. Готовят растворы извлечения из мочи и растворы веществ свидетелей, описанным выше способом. Хроматографируют испытуемые растворы, используя оптимальную систему растворителей. Далее обнаруживают зоны веществ на хроматограмме УФ-светом.

На хроматограмме обнаружены зоны веществ со следующими значениями Rf: абакавир 0,15±0,01; ламивудин 0,10±0,01; зидовудин 0,35±0,03; ставудин 0,20±0,02; респиридон 0,48±0,01; ибупрофен 0,05±0,02; фенобарбитал 0,31±0,01; амитриптилин 0,74±0,02; милипрамин 0,54±0,02; азалептин 0,44±0,02; хлорпротиксен 0,59±0,02; флуоксетин 0,39±0,02; спитомин 0,64±0,01; тофизопам 0,79±0,02; галоперидол 0,70±0,01; неулептил 0,26±0,01.

Данные примеры подтверждают, что предлагаемый способ может быть использован для химико-токсикологического и фармацевтического анализа абакавира, ламивудина, зидовудина и ставудина в комбинированных сочетаниях с психотропными, обезболивающими, седативными лекарственными средствами амитриптилином, респиридоном, азалептином, галоперидолом, неулептилом, милипрамином, хлорпртексеном, флуоксетином, ибупрофеном, фенобарбиталом.

Таким образом, предлагаемый способ определения и обнаружения абакавира, ламивудина, зидовудина и ставудина в комбинированных сочетаниях после извлечения их из мочи с использованием тонкослойной хроматографии позволяет повысить селективность, объективность и чувствительность анализа.

Способ определения и обнаружения в моче абакавира, ламивудина, зидовудина и ставудина в комбинированных сочетаниях путем хроматографирования в тонком слое сорбента раствора определяемых веществ и стандартных образцов веществ-свидетелей, отличающийся тем, что готовят испытуемый раствор путем изолирования определяемых веществ из мочи хлороформом и насыщенным раствором аммония сульфата при рН 8,0, проводят хроматографирование в тонком слое сорбента на пластинках «Сорбфил» в системе растворителей этилацетат-дихлорметан-25% раствор аммиака в соотношении 17:4:1 и обнаружение зон веществ на хроматограмме в УФ-свете.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам стандартизации лекарственных препаратов, лекарственного растительного сырья, фитопрепаратов и биологически активных добавок по содержанию моносахаридов (глюкозы, ксилозы и рамнозы), и может быть использовано в фармацевтическом анализе, в химико-фармацевтической промышленности.

Изобретение относится к ветеринарной токсикологии и может быть использовано при определении содержания левомицетина в кормах животного происхождения. Заявленный способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии включает отбор пробы корма массой от 200 до 500 мг, гомогенизацию, экстракцию 95% этанолом, фильтрацию экстракта, обезвоживание сернокислым натрием, упаривание, растворение сухого остатка в этилацетате, введение растворенного сухого остатка в жидкостный хроматограф с детектором спектрофотометрическим UVV 104М и колонкой Диасфер-110С-16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм, с использованием элюента: смеси ацетонитрил-вода-диэтиламин в соотношении 30:70:0,1, обработку результатов анализа.

Изобретение относится к способу определения подлинности сиропа пижмы обыкновенной. Указанный способ предполагает определение в сиропе методом тонкослойной хроматографии доминирующего компонента цветков пижмы обыкновенной - флавоноида тилианина, который предварительно извлекают путем обработки сиропа равным количеством ацетона.

Изобретение относится к способам стандартизации лекарственных препаратов, биологически активных добавок, премиксов, лекарственного растительного сырья, растительных масел, масляных экстрактов, изделий пищевой, химической и косметологической отраслей промышленности по содержанию основных жирорастворимых витаминов и может быть использовано в фармацевтической, химической, косметологической и пищевой отраслях промышленности для определения подлинности и степени чистоты жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии в одно- и многокомпонентных препаратах.
Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для обнаружения и количественного определения кодеина в различных объектах, в частности в лекарственных препаратах.

Настоящее изобретение относится к области биохимии и описывает способ количественного определения классов липидов и подклассов фосфолипидов в биологических материалах, заключающийся в том, что методом тонкослойной хроматографии разделяют общие липиды на классы и фосфолипиды на подклассы, проявляют их на хроматограмме и количество определяют с использованием денситометрии, причем липиды, остающиеся на старте после разделения общих липидов на классы, сдвигают на 0,5 см выше, проявляют классы липидов и подклассы фосфолипидов на хроматограмме парами йода и рассчитывают площади пиков, соответствующие интенсивности окраски треков на хроматограмме с помощью денситометра, а количество общих фосфолипидов, других классов липидов и подклассов фосфолипидов определяют расчетным методом, выделяя линиями каждый трек отдельно и производят суммарный расчет площадей треков, берут эту цифру за 100% и определяют процент каждого класса липидов от общих липидов или каждого подкласса фосфолипидов от общих фосфолипидов, составляя пропорцию.

Изобретение относится к области аналитической химии и предназначено для выделения монослоя вещества для целей последующего анализа свойств вещества. Способ выделения монослоя вещества включает нанесение жидкой пробы с растворенным в ней веществом на линию старта на хроматографическую пластину, содержащую слой сорбента.

Изобретение относится к области хроматографического анализа веществ и позволяет осуществить анализ органических веществ. Способ хроматографического анализа органических веществ включает растворение исследуемого органического вещества в летучем растворителе с получением раствора пробы, последующее нанесение капли раствора пробы на хроматографическую пластину со слоем сорбента, при этом в качестве растворителя выбирают вещество, не вступающее в химическое взаимодействие с пробой и сорбентом, последующий качественный и количественный анализ проявившихся колец.

Изобретение относится к тонкослойной хроматографии (TCX) и может быть использовано в аналитической химии и в физической химии. Сэндвич-камера с контрпластинкой для TCX содержит разделяющую хроматографическую пластинку с адсорбционным слоем на подложке и контрпластинку - хроматографическую пластинку с адсорбционным слоем на подложке.

Изобретение относится к тонкослойной хроматографии (ТСХ) и может быть использовано в аналитической химии. Способ разделения исследуемой смеси методом тонкослойной хроматографии включает нанесение исследуемой смеси на разделяющую хроматографическую пластинку и последующее разделение компонентов исследуемой смеси подвижной фазой в сэндвич-камере, включающей разделяющую хроматографическую пластинку и сухую контрпластинку, которая не касается подвижной фазы.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ определения показаний для открытой биопсии яичка у больных необструктивной азооспермией, включающий определение ряда биомаркеров, отличающийся тем, что рассчитывают значение дискриминантной функции по формулеf=age×0,003+lh×0,119-fsh×0,020+tf×0,002+shbg×0,058+prl×0,004-3,479,где f - значение дискриминантной фукции; age - возраст (лет); lh - уровень ЛГ в плазме крови (МЕ/л); fsh - уровень фолликулостимулирующего гормона в плазме крови (МЕ/л); tf - уровень свободной фракции тестостерона в плазме крови (пмоль/л); shbg - уровень секс-стероид связывающего глобулина в плазме крови (нмоль/л); prl - уровень пролактина в плазме крови (мМЕ/л).

Изобретение относится к области строительства, а именно для определения с помощью механических испытаний на ударную вязкость пригодности элементов конструкций, изготовленных из тонколистового проката толщиной от 0,4 до 2,9 мм, для применения в районах Крайнего Севера и приравненных к ним местностях, где расчетная температура достигает минус 65°C.

Изобретение относится к области медицины, в частности к медицинской генетике, и предназначено для ранней генетической диагностики риска развития сахарного диабета (СД) 2 типа.

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к способам идентификации корицы цейлонской, китайской, индонезийской и вьетнамской. Для этого образцы корицы анализируют методом изотопной масс-спектрометрии, при этом определяют изотопный состав углерода (δ13С), азота (δ15N) и кислорода (δ18О).

Изобретение относится к технологиям визуально-измерительного контроля (ВИК), позволяющим по зарегистрированным изображениям обнаружить искомые элементы поверхности контролируемых объектов в труднодоступных внутренних полостях различных технических устройств и сооружений и измерить геометрические характеристики этих элементов.
Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки эффективности антикоагулянтной терапии у больных с фибрилляцией предсердий (ФП), перенесших инсульт, отличающийся тем, что перед назначением антикоагулянтной терапии новыми пероральными антикоагулянтами (НПОАК) у пациента проводят взятие крови из периферической вены, 10 мкл которой помещают в камеру Горяева с зеркальным напылением и анализируют с помощью лазерного фазово-интерференционного микроскопа, измеряя фазовую высоту 40-50 эритроцитов в пробе; определяют среднюю максимальную dY1 и среднюю минимальную dY2 фазовую высоту эритроцитов, рассчитывают коэффициент оксигенации эритроцитов dY2/dY1; значения dY2/dY1 от 0,085 до 0,2 считают нормальными; значения dY2/dY1<0,085 и значения dY2/dY1>0,2 свидетельствуют о нарушении реологических свойств крови; через 17 недель после начала терапии НПОАК исследование повторяют; достижение или сохранение значений dY2/dY1 от 0,085 до 0,2 считают признаком эффективности терапии, а значения dY2/dY1<0,085 и значения dY2/dY1>0,2 свидетельствуют о ее неэффективности.

Изобретение относится к области физико-химического анализа. Предложен способ определения состава поверхностного слоя двухкомпонентной наночастицы сферической формы в матрице, согласно которому с целью установления размерной зависимости состава поверхностного слоя наночастицы, сплав, содержащий наноразмерные частицы, подвергают термическому отжигу, определяют состав наночастицы и матрицы, а также средний радиус наночастицы.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложена система и способ для сбора нуклеиновой кислоты из образца текучей среды организма, а также стерильная съемная крышка для приемника для сбора отходов.

Изобретение относится к измерительному устройству и к способу отбора образцов. Способ содержит следующие этапы: а) добавление образца в камеру, в которой обеспечены магнитные частицы, при этом образец содержит целевой компонент, и камера имеет поверхность обнаружения; b) приложение силы магнитного поля к магнитным частицам, чтобы притянуть магнитные частицы к поверхности обнаружения.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, в частности к новым вариантам глюкозооксидазы из Aspergillus niger с улучшенными свойствами, а именно термостабильностью и собственной глюкозооксидазной активностью.

Изобретение относится к области физико-химического анализа материалов, более конкретно к определению термодинамической активности (в дальнейшем активности) компонентов в поверхностном слое наночастицы, находящейся в матрице в бинарной системе в равновесных условиях. Согласно заявленному способу подвергают термическому отжигу двухкомпонентный сплав, содержащий дисперсные частицы сферической формы в нанометровом диапазоне в дисперсионной среде (матрице). Определяют состав наночастицы и матрицы, а также средний радиус наночастицы и по формуле: где , , - термодинамическая активность i-го компонента в поверхностном слое, наночастице и матрице соответственно, σ - поверхностное натяжение наночастицы в матрице, σ0i - поверхностное натяжение наночастицы в собственной матрице i-го компонента, , ω0i, δ0i - молярная поверхность и параметр Толмена на границе фаз α и β чистого i-го компонента, r - радиус наночастицы (радиус поверхности натяжения), T - температура, R - газовая постоянная, , - молярный объем i-го компонента в фазе ν (ν=α, β, σ), находят искомую величину. Технический результат – повышение точности и информативности получаемых данных. 1 табл.
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 2017-04-11 2018-06-11T01:31:54
Наверх