Штамм базидиомицета laetiporus sulphureus вкпм f-1286 - продуцент липидов

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм базидиомицета Laetiporus sulphureus МТ-11.01, обладающий способностью продуцировать липиды в условиях погруженного культивирования, депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ГосНИИгенетика под номером ВКПМ F-1286. Штамм базидиомицета Laetiporus sulphureus ВКПМ F-1286 может быть использован в качестве сырья для получения биодизельного топлива, в медицине, фармацевтике и в парфюмерно-косметической, пищевой и химической промышленностях. Изобретение позволяет повысить выход липидов. 2 табл., 5 пр.

 

Область техники

Изобретение относится к биотехнологии и касается штамма базидиомицета Laetiporus sulphureus, продуцирующего липиды. Липиды, полученные микробиологическим путем, могут быть использованы в качестве сырья для получения биодизельного топлива, в медицине, фармацевтике и в парфюмерно-косметической, пищевой и химической промышленностях.

Уровень техники

Известны штаммы базидиомицетов Ganoderma tsugae var.jannieae Tay-1 [Wasser S.P. et al. New Ganoderma tsugae var. jannieae strain Tay-1 and biologically active biomass and extracts therefrom. WO 2009017462 A2. - 2007] и Pleurotus ostreatus CBS 101937 [Wasser S.P. et al. For higher Basidiomycetes mushrooms grown as biomass in submerged culture. US 6372964 B1 - 2002], содержащие в составе мицелия до 10,2 и 7,2% липидов от сухого веса грибов, соответственно. Недостатком указанных штаммов является низкое содержание липидной фракции.

Наиболее близким к заявленному штамму является штамм Laetiporus sulphureus LS 1-06, способный накапливать в составе мицелия до 8,4% липидов от сухого веса грибов. Недостатком указанного штамма является низкая скорость роста и низкое содержание липидной фракции [Уфимцева О.В., Миронов П.В. Получение биомассы мицелия грибов вешенки обыкновенной Р 05/88 Pleurotus ostreatus и серно-желтого трутовика LS 1-06 Laetiporus sulphureus в глубинных условиях //Хвойные бореальной зоны. - 2009. - Т. 26. - №. 2. - С. 294-296].

Раскрытие изобретения

Задачей настоящего изобретения является получение нового штамма базидиомицета Laetiporus sulphureus, продуцирующего липиды в условиях погруженного культивирования.

Поставленная задача решается штаммом базидиального гриба Laetiporus sulphureus ВКПМ F-1286 (Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ГосНИИгенетика), продуцирующего липиды в условиях погруженного культивирования.

Техническим результатом заявляемого изобретения является выделение штамма базидиомицета Laetiporus sulphureus, продуцирующего липиды в условиях погруженного культивирования с максимальным выходом липидной фракции до 24% от веса воздушно высушенной биомассы, а также в расширении арсенала технических средств заявляемого назначения.

Осуществление изобретения

Новый штамм Laetiporus sulphureus выделен из природного плодового тела, найденного на стволе Querqus robur. Кусочки гриба, вырезанные из середины плодового тела, в асептических условиях были перенесены на селективную плотную питательную среду (сусловый агар), содержащую 30 мг/л цефотаксима. Выросший мицелий был идентифицирован как чистая базидиальная культура по наличию пряжек на мицелии. Таксономическая принадлежность заявляемого штамма к виду Laetiporus sulphureus подтверждена молекулярно-генетическим методом. Штамм базидиального гриба Laetiporus sulphureus депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ГосНИИгенетика и имеет регистрационный номер ВКПМ F-1286.

Характеристики штамма Laetiporus sulphureus.

Выделенный штамм относится к отделу Basidiomycota, подотделу Agaricomycotina, классу Agaricomycetes, порядку Polyporales, роду Laetiporus, виду sulphureus. Вид L. sulphureus не патогенен для человека и не образует токсичные метаболиты ни на одной из стадий морфогенеза.

Условия культивирования: сусловый агар, температура +28°С.

Условия хранения: в пробирках с сусловым агаром при +4°С в течение 12-18 месяцев без пересева.

Макроморфологические признаки: колония округлая, концентрически зональная, пушится вокруг инокулюма, профиль слабоприподнятый, воздушный мицелий бледно-оранжевого цвета, цвет субстратного мицелия бесцветный, по мере старения мицелий становится ярко-оранжевым за счет наличия пигментов-каратиноидов.

Микроморфологические признаки: гифы воздушного мицелия до 5-6 мкм в диаметре, длинные, отсутствие пряжек на гифах, характерно образование бластоспор.

При культивировании штамма в жидкой среде окрашивает среду в ярко-оранжевый цвет (за счет наличия пигментов-каратиноидов).

Вегетативный мицелий базидиомицета выращивают в погруженной культуре в асептических аэробных условиях. Культивирование осуществляют в качалочных колбах объемом 750 мл на орбитальной качалке при температуре 28°С. Среда для погруженного культивирования содержит: глюкозу - 10-30 г/л, соевую муку - 5-15 г/л, дигидрофосфат калия - 2-3 г/л, сульфат магния - 0,2-0,3 г/л и водопроводную воду. Значение рН среды доводят до 5,5-6,2. Питательную среду автоклавируют при температуре 121°С в течение 30 минут. Длительность процесса получения жидкого посевного мицелия составляет 10 суток, ферментации - 6 суток.

Биомассу отделяют от культуральной жидкости фильтрованием через лавсановую ткань. Липиды выделяют из влажной биомассы (влагосодержание 80-85%) по методу Фолча [Folch J. et al. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues //J biol chem. - 1957. - Vol. 226. - №. 1. - pp. 497-509].

Сведения, подтверждающие возможность осуществления предлагаемого изобретения.

Пример 1. Получение погруженного мицелия L. sulphureus.

Погруженное культивирование штамма L. sulphureus проводят на орбитальном шейкере со скоростью вращения 250 об/мин при температуре 28°С в качалочных колбах объемом 750 мл, содержащих 100 мл питательной среды следующего состава: глюкоза - 20 г/л, соевая мука - 10 г/л, дигидрофосфат калия - 2,5 г/л и сульфат магния - 0,25 г/л. Уровень рН среды доводят до 5,5-6,2. Процесс погруженного культивирования проводят в два этапа. На первом этапе получают жидкий посевной материал, на втором этапе осуществляют ферментацию.

Для приготовления посевного материала используют культуру, выращенную в пробирках на сусловом агаре. Кусочки агара размером не более 3×3 мм в количестве 30-40 штук асептически вносят в качалочные колбы, содержащие 100 мл питательной среды, и культивируют в течение 10 суток. Затем 10 л посевного материала в асептических условиях вносят в качалочные колбы, содержащие 100 мл питательной среды, и культивируют в течение 6 суток. Выход воздушно высушенной биомассы составляет 4,1 г/л питательной среды на 6 сутки ферментации. Содержание суммарных липидов в погруженном мицелии, определенное весовым методом, составляет 24% от веса воздушно высушенной биомассы.

Пример 2. Получение погруженного мицелия L. sulphureus.

Получение погруженного мицелия L. sulphureus проводят, как описано в примере 1, но глюкозу, соевую муку, дигидрофосфат калия и сульфат магния в питательную среду вносят в количестве 10 г/л, 5 г/л, 3 г/л и 0,3 г/л, соответственно. Выход воздушно высушенной биомассы составляет 3,7 г/л питательной среды на 6 сутки ферментации. Содержание суммарных липидов в погруженном мицелии, определенное весовым методом, составляет 18,1% от веса воздушно высушенной биомассы.

Пример 3. Получение погруженного мицелия L. sulphureus.

Получение погруженного мицелия F. pinicola проводят, как описано в примере 1, но глюкозу, соевую муку, дигидрофосфат калия и сульфат магния в питательную среду вносят в количестве 30 г/л, 15 г/л, 2 г/л и 0,2 г/л, соответственно. Выход воздушно высушенной биомассы составляет 3,9 г/л питательной среды на 6 сутки ферментации. Содержание суммарных липидов в погруженном мицелии, определенное весовым методом, составляет 17,2% от веса воздушно высушенной биомассы.

Пример 4. Получение липидов L. sulphureus

Получают погруженную культуру L. sulphureus, как описано в примере 1. Биомассу отделяют от культуральной жидкости фильтрованием через лавсановую ткань и однократно промывают дистиллированной водой. Навеску влажной биомассы (влагосодержание 80-85%) растирают с песком в жидком азоте до пастообразного состояния и экстрагируют смесью хлороформа и метанола (1:1 по объему). Экстракт фильтруют через бумажный фильтр, твердый остаток подвергают повторной экстракции. К объединенному фильтрату добавляют дистиллированную воду. Водно-метанольную и хлороформную фазу разделяют в делительной воронке. Хлороформный слой, содержащий липиды, сушат над слоем безводного сульфата натрия, растворитель упаривают на вакуумном ротационном испарителе.

Пример 5. Динамика накопления липидов штаммом L. sulphureus

Получают погруженную культуру L. sulphureus, как описано в примере 1. Отбор проб для определения содержания липидов в мицелии проводят каждые 24 часа. Липиды из биомассы выделяют, как описано в примере 5. Максимальный выход липидной фракции составляет 21,3% от веса воздушно высушенной биомассы на 6 сутки культивирования (таблица 1).

Жирно-кислотный состав липидов, выделенных из L. sulphureus, определяют методом газовой хроматографии. В составе липидной фракции преобладают линолевая, олеиновая и пальмитиновая кислоты (таблица 2).

Таким образом, выделен штамм базидиомицета Laetiporus sulphureus, продуцирующий липиды в условиях погруженного культивирования с максимальным выходом липидной фракции до 24% от веса воздушно высушенной биомассы.

Штамм базидиального гриба Laetiporus sulphureus ВКПМ F-1286 (Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ГосНИИгенетика), продуцирующего липиды в условиях погруженного культивирования.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен микросенсор и способ для определения концентрации клеток плесневых грибов в водных и воздушных средах, а также способ получения данного микросенсора.

Группа изобретений относится к вариантам дрожжевой клетки рода сахаромицетов, способной к размножению в аэробных условиях на субстрате, содержащем по меньшей мере один C5-сахар, и применению такой клетки.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Штамм Gluconacetobacter intermedius, продуцирующий бактериальную целлюлозу, депонирован в Национальном Институте передовой промышленной науки и технологии (Япония) под регистрационным номером SIID 9587.
Изобретение относится к микробиологии. Диагностическая питательная среда для дифференциации возбудителя сибирской язвы по капсуло- и токсинообразованию содержит сухой питательный бульон, дрожжевой экстракт, NaCl, агар-агар, L-аланин, инозин, 20 %-ный раствор D-сорбита, 1,6% раствор бромтимолового синего, 10%-ный раствор натрия двууглекислого, полимиксина сульфат, сыворотку крупного рогатого скота и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов.
Изобретение относится к биотехнологии. Способ предусматривает раздельное глубинное культивирование штаммов Bacillus subtilis ВКПМ В-8130, Bacillus subtilis ВКПМ В-2984, Bacillus licheniformis ВКПМ В-4162, Bacillus megaterium ВКПМ В-204 и Lactobacillus plantarum ВКПМ В-5337 на питательных средах заданного состава.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения лакокрасочного водоразбавляемого материала с биоцидными свойствами.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ снижения содержания селена в биомассе после ферментации содержащего СО газообразного субстрата.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен штамм клубеньковых бактерий Bradyrhizobium diazoefficiens CCM GS-4, который обладает способностью образовывать клубеньки с растениями сои.

Предложены штамм мицелиального гриба Trichoderma Longibrachiatum TW-14-220T - продуцент комплекса ферментов эндоглюканаз, бета-глюканаз и ксиланаз, разрушающих некрахмальные полисахариды, и способ получения кормового ферментного препарата с использованием штамма мицелиального гриба Trichoderma longibrachiatum TW-14-220T.

Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к способу получения гетеротетрамерного рекомбинантного стрептавидина. Настоящий способ предусматривает создание двух плазмид, одна из которых кодирует стрептавидин мутантного типа, а другая – стрептавидин дикого типа, трансформацию указанными плазмидами клеток E.coli, индукцию синтеза стрептавидинов, выделение периплазматической фракции клеток и очистку гетеротетрамерного стрептавидина на аффинном сорбенте.

Предложены штамм мицелиального гриба Trichoderma Longibrachiatum TW-14-220T - продуцент комплекса ферментов эндоглюканаз, бета-глюканаз и ксиланаз, разрушающих некрахмальные полисахариды, и способ получения кормового ферментного препарата с использованием штамма мицелиального гриба Trichoderma longibrachiatum TW-14-220T.

Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к генетической конструкции для обеспечения экспрессии целевых гомологичного и гетерологичного генов в клетках реципиентного гриба Penicillium verruculosum.

Изобретение относится к биотехнологии, прикладной микробиологии и может быть использовано для получения эфирного масла. Предложен штамм гриба Eremothecium gossypii ВКПМ F-1321, являющийся продуцентом эфирного масла, аналогичного розовому маслу крымского происхождения.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения биопестицидного препарата предусматривает глубинное и/или глубинно-поверхностное культивирование штамма Beauveria bassiana (ВКПМ F-145) на питательной среде, содержащей пивную барду или смесь молочной сыворотки и пивной барды, а также минеральный комплекс и дизельное топливо или Твин-80 и воду при заданном соотношении компонентов, с последующим концентрированием культуральной жидкости до показателя не менее 107 КОЕ/мл и получением препарата в сухой форме путем высушивания препарата на носителе.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к переработке биомассы. Предложен способ получения фермента.

Изобретение относится к области лесного хозяйства и биоиндикации, в частности к оценке содержания элементов группы тяжелых металлов в атмосферном воздухе по степени их накопления слоевищами эпифитных лишайников.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения лакказ предусматривает погружное культивирование Rhizoctonia solani F-895 в минеральной питательной среде с добавлением в качестве натурального источника углерода и энергии по крайней мере одного компонента, выбранного из ряда: белокочанная капуста, горох, фасоль, картофель, томатная паста, до получения максимальной активности лакказ в культуральной жидкости с последующим отделением культуральной жидкости от мицелия центрифугированием.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Eremothecium ashbyi Guill.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен рекомбинантный штамм мицелиального гриба Penicillium canescens СL14 ВКМ F-4706D, продуцирующий бактериальную термофильную целлюлазу Cel5L из Clostridium thermocellum с молекулярной массой 48 кДа.
Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения органического пигмента для окраски полимерных материалов предусматривает выращивание штамма пигментсодержащего гриба Hypomyces odoratus ВКПМ F-242 на питательной среде, содержащей разваренное зерно пшеницы или овса, отруби пшеничные или ржаные, березовые опилки, измельченные кукурузные кочерыжки, макро– и микроэлементы и водопроводную воду при заданном соотношении компонентов, в условиях твердофазного культивирования при температуре 22-24°C в течение 7-10 дней и рН среды 6,0-6,2.
Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены способ получения биосорбента и биосорбент для очистки воды от углеводородных загрязнений. Способ включает предварительную сушку измельченного до фракций 1-1,5 мм торфа при 40-50°С до влажности не более 3%, пиролиз под вакуумом при температуре 210-250°С, затем его внесение в суспензию консорциума нефтеокисляющих микроорганизмов штаммов Candida maltosa ВКПМ Y-3446 и Dietzia maris ВКПМ Ac-1824, взятых в соотношении 1:1. Биосорбент получен указанным способом. Изобретения обеспечивают увеличение сорбционной емкости биосорбента и повышение эффективности очистки водоемов от углеводородных загрязнений. 2 н.п. ф-лы, 3 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм базидиомицета Laetiporus sulphureus МТ-11.01, обладающий способностью продуцировать липиды в условиях погруженного культивирования, депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ГосНИИгенетика под номером ВКПМ F-1286. Штамм базидиомицета Laetiporus sulphureus ВКПМ F-1286 может быть использован в качестве сырья для получения биодизельного топлива, в медицине, фармацевтике и в парфюмерно-косметической, пищевой и химической промышленностях. Изобретение позволяет повысить выход липидов. 2 табл., 5 пр.

Наверх