Слабозакристаллизованная β-модификация (s)-изопропил 2-((s)-(((2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, способ её получения и фармацевтическая композиция на её основе

Изобретение относится к новой безводной модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата для лечения хронического вирусного гепатита С, способу ее получения и фармацевтической композиции на ее основе, которые могут быть использованы в фармацевтической промышленности. Предложена новая β-модификация (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, характеризующаяся следующим набором межплоскостных расстояний (d, ) и соответствующих им интенсивностей (Iотн, %):

и наличием двух эндотермических эффектов на кривой ДСК при температурах 39,7-48,1°C и 120,7-125,9°C с улучшенной эффективностью. Предложен новый эффективный способ получения указанной формы, характеризующийся тем, что софосбувир растворяют в органическом растворителе при 25-70°C, смешивают полученный раствор с дистиллированной водой в соотношении 1:2-1:10, замораживают при скорости охлаждения не ниже 60 град/мин, подвергают сублимационной сушке и дополнительно отжигают при температурах 50-85°C в течение не менее 1 ч с последующим охлаждением до комнатной температуры со скоростью не выше 5 град/ч. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 4. табл., 6 ил., 5 пр.

 

Изобретение относится к органической химии и касается новой слабозакристаллизованной модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата [софосбувир (международное непатентованное название)], названной нами слабозакристаллизованной β-модификацией, способа ее получения и фармацевтической композиции на ее основе, которая может быть использована в фармацевтической промышленности и медицине в качестве нуклеотидного ингибитора полимеразы для лечения хронического вирусного гепатита С.

Термин «слабозакристаллизованная» был представлен в названии новой модификации в связи с тем, что на дифрактограмме полученной новой модификации софосбувира присутствуют уширенные дифракционные максимумы в отличие от рентгенограмм известных кристаллических модификаций, где пики хорошо выражены или присутствует рентгеноаморфное гало без максимумов в случае аморфной модификации. Если бы полученный нами порошок был аморфным, то на термоаналитических кривых четких пиков не было бы. Было бы смещение базовой линии ДСК - кривых, связанных со стеклованием [http://www.pslc.ws/russian/dsc.htm].

Известны производные нуклеозидов фосфороамидаты и их фармацевтически приемлемые соли в качестве нуклеотидного ингибитора полимеразы, способы их получения и содержащие их фармацевтические композиции для лечения хронического вирусного гепатита С. (RU 2478104 С2 от 27.03.2013 г; RU 2009139968 А от 10.05.2011 г.; WO 2008/121634 А2 от 9.10.2008 г.; US 7429572 В2 от 25.09.2008 г. и др.).

Однако в этих патентах синтезируемые вещества не охарактеризованы на предмет их принадлежности к той или иной полиморфной модификации.

Известны кристаллические и аморфные модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2H)-ил)-4-фтop-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата в виде сольватов, а также соли софосбувира с фармацевтически приемлемыми кислотами. (ЕА 2011/71417 А1 от 25.05.2012 г; WO 2011/123645 А2 от 6.10.2011 г.; WO 2016/023905 А1 от 18.02.2016 г. и др.)

Однако все эти формы отличаются от заявляемой новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диoкco3,4-дигидpoпиpимидин-(2H)-ил)-4-фтop-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата химическим составом.

Наиболее близкими к заявляемой новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата являются полиморфные модификации софосбувира: кристаллические формы: Форма 1; Форма 6; Форма 7; Форма 8; Форма А; Форма С; Форма D; Форма Е; Форма М; Форма M1; Форма М; Форма Z-1; кристаллическая форма и аморфная форма (WO 2010/135569 А1 от 25.11.2010 г.; WO 2015/025853 А1 от 5.03.2015 г.; WO 2015/097605 А1 от 2.07.2015 г.; WO 2015/099989 А1 от 2.07.2015 г.; CN 104125252 А от 5.11.2014 г.; WO 2016/035006 А1 от 10.03.2016 г.; WO 2015/126995 А1 от 27.08.2015 г.; WO 2015/191945 А2 от 17.12.2015 г.; WO 2016/038542 А2 от 17.03.2016 г.; WO 2016/008461 А1 от 21.01.2016 г.; CN 104277088 А от 14.01.2015 г.; WO 2016/023906 А1 18.02.2016 г. и др.).

Известные кристаллические модификации софосбувира характеризуются физико-химическими методами анализа такими, как: ядерным магнитным резонансом (ЯМР) - совокупностью химических сдвигов (м.д.), высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ) - временами удерживания (мин), рентгенофазовым анализом (РФА) - наборами углов (2θ, град.), межплоскостных расстояний (d, ) и их интенсивностью (I, имп./мин; Iотн,=Ii/Imax×100, %) или непосредственно рентгенограммами (получение дифрактограмм авторы вышеприведенных патентов проводили на Сu Kα - излучении), термоаналитическими исследованиями (температурами тепловых эффектов) и другими.

Сходство заявляемой новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, с известными кристаллическими и аморфной модификациями софосбувира заключается в идентичности их химических составов.

Отличие заявляемой новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, от известных кристаллических и аморфной модификаций софосбувира заключается в различии их дифрактограмм рентгенофазового анализа (РФА): определенного набора углов 2θ (град.) - межплоскостных расстояний (d, ), и их интенсивностью (Iотн,=Ii/Imax×100, %), а также в различии кривых дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК). Кривая ДСК новой слабозакристаллизованной β - модификации софосбувира характеризуется двумя эндотермическими эффектами.

Известные кристаллические модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата представляют собой порошки белого или почти белого цвета, без запаха, легко растворимые в ацетоне и этаноле, растворимые в изопропаноле, мало растворимые в воде.

Рассмотренные выше модификации софосбувира получают из исходных компонентов или одну из другой в растворах, варьируя тип растворителей, условия приготовления растворов, а также условия выделения целевого продукта из органических растворителей или их смесей различными методами, такими, как кристаллизацией из растворов с последующим фильтрованием, промыванием и, далее, сушкой на воздухе, вакуумной сушкой, распылительной сушкой или сублимационной сушкой (WO 2010/135569 А1 от 25.11.2010 г.; WO 2015/025853 А1 от 5.03.2015 г.; WO 2015/099989 А1 от 2.07.2015 г.; CN 104125252 А от 5.11.2014 г.; WO 2016/035006 А1 от 10.03.2016 г.; WO 2015/126995 А1 от 27.08.2015 г.; WO 2015/191945 А2 от 17.12.2015 г.; WO 2016/038542 А2 от 17.03.2016 г.; WO 2016/008461 А1 от 21.01.2016 г.; CN 104277088 А от 14.01.2015 г.; WO 2016/023905 А1 18.02.2016 г.; WO 2016/023906 А1 от 18.02.2016 г. и др.).

Наиболее близким по технической сущности является способ получения аморфной формы (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, заключающийся в том, что софосбувир растворяют в смеси воды и органического растворителя, используя ультразвук для ускорения растворения, гомогенный раствор замораживают в бане с жидким азотом и лиофилизируют (подвергают сублимационной сушке) при -36°С и давлении от 0 до 2 мбар. Скорости замораживания гомогенного раствора и продолжительность лиофилизации авторы патента не указали (WO 2016/023905 А1 от 18.02.2016 г.).

Отличие способа получения заявляемой новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата от способа получения известных кристаллических форм софосбувира состоит в том, что софосбувир растворяют в органическом растворителе при 25°С-70°С, смешивают полученный раствор с дистиллированной водой в соотношении 1:2 - 1:10, замораживают при скорости охлаждения не ниже 60 град/мин, подвергают сублимационной сушке и дополнительно отжигают при температурах (50-85)°С в течение не менее 1 часа с последующим охлаждением до комнатной температуры со скоростью не выше 5 град./час.

Отличие заявляемой фармацевтической композиции в качестве нуклеотидного ингибитора полимеразы для лечения хронического вирусного гепатита С на основе (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата от известных композиций (Инструкция применения препарата софосбувира: Совальди®/Sovaldi®, Виропак®/МРI Viropack®, Hepcinat®, Hopetavir® и др.) состоит в том, что в качестве действующего вещества используют терапевтически эффективное количество новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата (софосбувира).

Целью изобретения является получение новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диoкco3,4-дигидpoпиpимидин-(2H)-ил)-4-фтop-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, разработка способа ее получения и применение ее в фармацевтической композиции в качестве нуклеотидного ингибитора полимеразы для лечения хронического вирусного гепатита С.

Поставленная цель достигнута настоящим изобретением, а именно получением новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, характеризующейся следующим набором межплоскостных расстояний (d, ) и соответствующих им интенсивностей (Iот.,=Imах×100, %): - 15,95%; - 17,80%; - 21,57%; - 26,61%; - 28,21%; - 31,14%; - 40,14%; - 36,18%; - 39,89%; - 43,59%; -40,40%; - 46,78%; - 54,75%; - 46,01%; - 55,33%; - 79,00%; - 100,00%; - 86,15%; - 98,40%; - 84,56%; - 94,38%; - 90,68%; - 89,60%; - 75,49%; - 62,48%; - 57,69%; - 54,50%; - 47,35%; - 46,01%; - 46,27%; - 38,54%; - 40,71%; - 25,82%; - 25,82%; - 25,06%; - 27,38%; - 25,02%; - 23,68%; - 22,85%; - 21,83%, и наличием двух эндотермических эффектов на кривой ДСК при температурах (39,7-48,1)°С и (120,7-125,9)°С.

Поставленная цель достигнута также разработкой способа получения новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)-фосфориламино)пропаноата, который состоит в том, софосбувир растворяют в органическом растворителе при 25°С-70°С, смешивают полученный раствор с дистиллированной водой в соотношении 1:2 - 1:10, замораживают при скорости охлаждения не ниже 60 град/мин, подвергают сублимационной сушке и дополнительно отжигают при температурах (50-85)°С в течение не менее 1 часа с последующим охлаждением до комнатной температуры со скоростью не выше 5 град./час.

Кроме того, поставленная цель достигнута применением новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата для приготовления фармацевтической композиции в качестве нуклеотидного ингибитора полимеразы для лечения хронического вирусного гепатита С. Указанная композиция содержит слабозакристаллизованную β - модификацию софосбувира в терапевтически эффективном количестве и, по крайней мере, один фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, вспомогательное вещество или наполнитель.

Из патентной и научно-технической литературы не известна слабозакристаллизованная β - модификация N(S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, способ ее получения и применение ее в фармацевтической композиции в качестве нуклеотидного ингибитора полимеразы для лечения хронического вирусного гепатита С.

Нами обнаружена новая, не известная ранее, слабозакристаллизованная β - модификация (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, характеризующаяся определенным набором дифракционных максимумов (d, ) и их интенсивностью (Iотн,%) и наличием двух эндотермических эффектов на кривой ДСК, предложены способ ее получения и применение ее для приготовления фармацевтической композиции в качестве нуклеотидного ингибитора полимеразы для лечения хронического вирусного гепатита С.

Заявляемая новая, не известная ранее, слабозакристаллизованная β - модификация (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата представляют собой порошок белого или почти белого цвета, без запаха, легко растворимый в ацетоне и этаноле, растворимый в изопропаноле, мало растворимый в воде.

Для пояснения сущности заявляемого технического решения к описанию приложены следующие таблицы и рисунки:

Таблица 1. Углы 2θ, град., межплоскостные расстояния (d, ) и их интенсивности (Iотн, %) известных модификаций софосбувира по литературным данным.

Таблица 2. Углы 2θ, град., межплоскостные расстояния (d, ) и их интенсивности (Iотн, %) известной кристаллической модификации софосбувира (Форма I), которую использовали в качестве исходного вещества.

Таблица 3. Углы 2θ, межплоскостные расстояния (d, ) и их интенсивности (Iотн, %) новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата.

Таблица 4. Результаты термоаналитических исследований известных модификаций софосбувира по литературным данным.

Рис. 1. ЯМР 1Н - спектр известной кристаллической модификации софосбувира (Форма I), которую использовали в качестве исходного вещества.

Рис. 2. ЯМР 1Н - спектр новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата.

Рис. 3. Дифрактограмма известной кристаллической модификации софосбувира (Форма I), которую использовали в качестве исходного вещества.

Рис. 4. Типичная дифрактограмма новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата.

Рис. 5. Термограмма известной кристаллической модификации софосбувира (Форма 1), которую использовали в качестве исходного вещества.

Рис. 6. Типичная термограмма новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата.

Для идентификации полученного вещества был проведен комплекс физико-химических методов анализа.

Первоначально, методами ядерного магнитного резонанса (ЯМР 1Н) и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) была установлена идентичность химических формул известной кристаллической модификации софосбувира (Форма 1), которую использовали в качестве исходного вещества, и новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)-фосфориламино)пропаноата.

Определение химических сдвигов исходного софосбувира (Форма 1) и полученного из него вещества было проведено в его насыщенном растворе в дейтерированном диметилсульфоксиде (ДМСО-D6) на ЯМР-спектрометре высокого разрешения VXR-400 фирмы "VARIAN" (США). Полученные данные приведены на рис. 1 и 2, соответственно. Сравнение результатов, представленных на рис. 1 [известная кристаллическая модификация софосбувира (Форма 1)], с данными, приведенными на рис. 2 [новая, не известная ранее, слабозакристаллизованная β - модификация (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата показывает, что ЯМР - 1Н - спектры исходного и полученного нами вещества практически идентичны, т.е. полученное вещество является (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноатом.

Хроматографическую подвижность известной кристаллической модификации софосбувира (Форма 1), которую использовали в качестве исходного вещества и, полученной из нее, новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата определяли методом ВЭЖХ на хроматографе Shimadzu LC - 20А с детектором SPD-М20А и с колонкой длиной 150 мм, диаметром 4,6 мм, сорбентом XSelect HSS Т3, 3,5 мкм с детектированием при длине волны 260,8 нм. В качестве подвижной фазы А использовали 0,05% раствор ортофосфорной кислоты в воде, подвижной фазы В - ацетонитрил и в качестве растворителя проб - ацетатный буферный раствор с рН=4 : метанол=60:40 при 25°С и скорости 1,3 мл/мин. Объем испытуемой пробы составил 5 мкл с концентрацией 1,0 мг/мл. Оказалось, что хроматограммы известной кристаллической модификации софосбувира (Форма 1), которую использовали в качестве исходного вещества и новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата содержат по одному пику основного компонента с характерными временами удерживания 16,187 мин и 16,167 мин, соответственно. Эти величины времен удерживания, в пределах ошибки определения - 0,06%, одинаковы. Чистота исследованных образцов, определенных методом ВЭЖХ составили 100,00% (исходное вещество) и 99,97% (новая, не известная ранее, слабозакристаллизованная β - модификация софосбувира).

Проведенные методом ВЭЖХ эксперименты, свидетельствуют о том, что при получении новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата из исходного вещества - известной кристаллической модификации софосбувира (Форма 1), разложения исходного вещества не происходит.

Таким образом, экспериментальные результаты ядерного магнитного резонанса (ЯМР-1Н) и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) однозначно свидетельствуют о том, что полученное вещество является (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноатом.

Для подтверждения того, что полученное вещество является новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификацией (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диoкco3,4-дигидpoпиpимидин-(2H)-ил)-4-фтop-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, были проведены рентгенофазовый анализ (РФА) и термоаналитические исследования.

Рентгенофазовый анализ (РФА) известной кристаллической модификации софосбувира (Форма 1), которую использовали в качестве исходного вещества и полученного из нее соединения проводили на дифрактометре Rigaku D/MAX-2500 (Rigaku, Япония) на СuKα излучении (λ=1,54056 ).

Полученные данные РФА для софосбувира, который использовали в качестве исходного вещества, приведены в табл. 2 и на рис. 3. Сравнение результатов РФА, представленных в табл. 2 и в табл. 1 (литературные данные), однозначно свидетельствует о том, что в качестве исходного вещества была использована известная кристаллическая модификация софосбувира - Форма 1. Результаты рентгенофазового анализа порошка, полученного из известной кристаллической модификации софосбувира (Форма 1) представлены в табл. 3 и на рис. 4. Сравнение полученных данных, представленных в табл. 3, табл. 2 и табл. 1, а также на рис. 3, рис. 4 и на рисунках, приведенных в литературных источниках (WO 2010/135569 А1 от 25.11.2010 г.; WO 2015/025853 А1 от 5.03.2015 г.; WO 2015/097605 А1 от 2.07.2015 г.; WO 2015/099989 А1 от 2.07.2015 г.; CN 104125252 А от 5.11.2014 г.; WO 2016/035006 А1 от 10.03.2016 г.; WO 2015/126995 А1 от 27.08.2015 г.; WO 2015/191945 А2 от 17.12.2015 г.; WO 2016/038542 А2 от 17.03.2016 г.; WO 2016/008461 А1 от 21.01.2016 г.; CN 104277088 А от 14.01.2015 г.; WO 2016/023906 А1 18.02.2016 г. и др.) свидетельствует о том, что полученный порошок софосбувира является новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификацией (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата.

Таким образом, экспериментальные результаты рентгенофазового анализа однозначно свидетельствуют о том, что полученное вещество является новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификацией (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2H)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата. Она характеризуется отличной от других кристаллических модификаций софосбувира, совокупностью межплоскостных расстояний (d, ) и соответствующих им интенсивностей (Iотн, %): - 15,95%; - 17,80%; - 21,57%; - 26,61%; - 28,21%; - 31,14%; - 40,14%; - 36,18%; - 39,89%; - 43,59%; - 40,40%; - 46,78%; - 54,75%; - 46,01%; - 55,33%; - 79,00%; - 100,00%; - 86,15%; - 98,40%; - 84,56%; - 94,38%; -90,68%; - 89,60%; - 75,49%; - 62,48%; - 57,69%; - 54,50%; - 47,35%; - 46,01%; - 46,27%; - 38,54%; - 40,71%; - 25,82%; - 25,82%; - 25,06%; - 27,38%; - 25,02%; - 23,68%; - 22,85%; - 21,83%.

Термоаналитические исследования известной кристаллической модификации софосбувира (Форма 1), которую использовали в качестве исходного вещества и полученного из нее соединения проводили на DSC 204 F1 Рое-nix (NETZSCH, Германия) в токе аргона при повышении температуры со скоростью 10 град/мин. В качестве держателей образцов использовали алюминиевые кюветы. Навеска пробы составляла (5-10) мг. Полученные данные приведены на рис. 5 и рис. 6. Видно, что на кривой дифференциальной сканирующей калориметрии новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата (рис. 6) наблюдаются 2 эндотермических пика при температурах (39,7-48,1)°С и (120,7-125,9)°С, а на кривой ДСК известной кристаллической модификации софосбувира - Формы 1 присутствует только один эндотермический пик при (97,4-106,7)°С (см. рис. 5). Отметим, что согласно литературным источникам, представленным в табл. 4, на термограммах известных кристаллических модификаций присутствуют по одному эндотермическому пику.

Таким образом, проведенные термоаналитические эксперименты показали, что полученная новая, не известная ранее, слабозакристаллизованная β - модификация (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата характеризуется наличием двух эндотермических эффектов на кривой ДСК при температурах (39,7-48,1)°С и (120,7-125,9)°С в отличии от известных модификаций софосбувира.

Приведенные экспериментальные данные рентгенофазового анализа и термоаналитических исследований однозначно свидетельствуют о том, что полученная новая, не известная ранее, слабозакристаллизованная β - модификация (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата характеризуется отличной от других кристаллических модификаций софосбувира совокупностью межплоскостных расстояний и соответствующих им интенсивностей и наличием двух эндотермических эффектов на кривой ДСК.

Способ получения новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, заключается в том, что софосбувир растворяют в органическом растворителе при 25°С-70°С, смешивают полученный раствор с дистиллированной водой в соотношении 1:2 - 1:10, замораживают при скорости охлаждения не ниже 60 град/мин, подвергают сублимационной сушке и дополнительно отжигают при температурах (50-85)°С в течение не менее 1 часа с последующим охлаждением до комнатной температуры со скоростью не выше 5 град./час.

Отличие способа получения заявляемой новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диoкco3,4-дигидpoпиpимидин-(2H)-ил)-4-фтop-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата от способа получения известных кристаллических форм софосбувира состоит в том, что софосбувир растворяют в органическом растворителе при 25°С-70°С, смешивают полученный раствор с дистиллированной водой в соотношении 1:2 - 1:10, замораживают при скорости охлаждения не ниже 60 град/мин, подвергают сублимационной сушке и дополнительно отжигают при температурах (50-85)°С в течение не менее 1 часа с последующим охлаждением до комнатной температуры со скоростью не выше 5 град./час.

Предложенный способ получения, заключающийся в том, что софосбувир растворяют в органическом растворителе при 25°С-70°С, смешивают полученный раствор с дистиллированной водой в соотношении 1:2 - 1:10, замораживают при скорости охлаждения не ниже 60 град/мин, подвергают сублимационной сушке и дополнительно отжигают при температурах (50-85)°С в течение не менее 1 часа с последующим охлаждением до комнатной температуры со скоростью не выше 5 град./час, позволяет получить новую, не известную ранее, слабозакристаллизованную β - модификацию (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфорил-амино)пропаноата.

В качестве органического растворителя возможно использование низших спиртов, ацетона, ацетонитрила, диметилсульфоксида и других, которые смешиваются с водой.

Приготовление раствора софосбувира при повышенных температурах было использовано для ускорения процесса растворения (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диoкco3,4-дигидpoпиpимидин-(2H)-ил)-4-фтop-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата.

Уменьшение температуры раствора софосбувира в органическом растворителе ниже 25°С (комнатной температуры) не целесообразно поскольку требует дополнительных затрат энергии на охлаждение системы.

Увеличение температуры раствора софосбувира в органическом растворителе выше 70°С также не целесообразно из-за необходимости применения специального оборудования.

Смешивание органического раствора софосбувира в органическом растворителе с водой в соотношении менее 1:2 приводит к тому, что в этих условиях образуется одна из известных модификаций софосбувира. Получить новую, не известную ранее, слабозакристаллизованную β - модификацию (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата в чистом виде не удается.

Смешивание органического раствора софосбувира в органическом растворителе с водой в соотношении более 1:10 не приводит к увеличению выхода целевого продукта - новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата и лишь удорожает производство.

Уменьшение скорости замораживания ниже 60 град/мин скорость криокристаллизации раствора софосбувира уменьшается и приближается к равновесному процессу. Это приводит к получению уже известных модификаций. Получить новую, не известную ранее, кристаллическую β - модификацию (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата в чистом виде не удается. Отметим, что известный способ замораживания раствора, содержащий софосбувир (WO 2016/023905 А1 18.02.2016 г.) предполагает замораживание в бане с жидким азотом. В этих условиях, как правило, реализуется скорость замораживания не выше 50 град./мин.

Сублимационная сушка замороженного раствора софосбувира необходима для получения сухого порошка, который в дальнейшем позволяет формировать собственно новую, не известную ранее, слабозакристаллизованную β - модификацию (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата. Предпочтительным режимом сублимационной сушки является процесс, которую проводят при температурах: на конденсаторе -42°С… -56°С; на продукте -196…+50°С и остаточном давлении в камере (9-3)×10-2 Торр в течение 22-26 ч.

Дополнительный отжиг продуктов сублимационной сушки при температурах (50-85)°С в течение не менее 1 часа с последующим охлаждением до комнатной температуры со скоростью не выше 5 град./час, позволяет получить собственно новую, не известную ранее, слабозакристаллизованную β - модификацию (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата.

Уменьшение температуры дополнительного отжига продуктов сублимационной сушки ниже 50°С приводит к тому, что в этих условиях образуется одна из известных модификаций софосбувира. Получить новую, не известную ранее, слабозакристаллизованную β - модификацию (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диoкco3,4-дигидpoпиpимидин-(2H)-ил)-4-фтop-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата в чистом виде не удается.

Увеличение температуры дополнительного отжига продуктов сублимационной сушки выше 85°С приводит к тому, что в этих условиях образуется одна из известных модификаций софосбувира. Получить новую, не известную ранее, слабозакристаллизованную β - модификацию (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диoкco3,4-дигидpoпиpимидин-(2H)-ил)-4-фтop-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата в чистом виде не удается.

Выдержка продуктов сублимационной сушки при температурах (50-85)°С в течение менее 1 часа приводит к тому, что в этих условиях образуется одна из известных модификаций софосбувира. Получить новую, не известную ранее, слабозакристаллизованную β - модификацию (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата в чистом виде не удается.

Увеличение скорости охлаждения порошка от температуры (50-85)°С до комнатной температуры со скоростью выше 5 град./час приводит к тому, что в этих условиях образуется одна из известных модификаций софосбувира. Получить новую, не известную ранее, слабозакристаллизованную β - модификацию (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата в чистом виде не удается.

Возможность осуществления предлагаемого изобретения иллюстрируется следующими примерами, но не ограничивается ими.

Пример 1. В 35 мл органического растворителя - метилового спирта марки «ХЧ» ГОСТ 2222-95 фирмы «ООО Вектон-М, РФ» при перемешивании растворяют 0,35 г известной кристаллической модификации софосбувира (Форма 1) при 25°С, смешивают полученный раствор с 70 мл дистиллированной воды (соотношение 1:2) и замораживают со скоростью 60 град./мин вливанием сразу всего объема раствора в предварительно наполненный жидким азотом (Ткип=-196°С), но не охлажденный предварительно, поддон из нержавеющей стали. Замороженный продукт на поддоне переносят в сублимационную камеру и подвергают сублимационной сушке при температуpax: на конденсаторе -52°С…-56°С; на продукте -196°С…+30°С и остаточном давлении в камере (9-5)⋅10-2 Торр в течение 26 ч. Продукт сублимационной сушки - легкий, пушистый порошок белого цвета, помещают в химический термостойкий стакан вместимостью 100 мл, вносят его в предварительно разогретый до 50°С сушильный шкаф, выдерживают при этой температуре в течение 1 часа и охлаждают до комнатной температуры в течение 12,5 часов (скорость охлаждения - 2 град/час). Выход продукта составил 0,34 г (97,1 мас. %). По данным РФА полученное вещество характеризуется типичной дифрактограммой, представленной на рис. 4 и набором межплоскостных расстояний и их интенсивностями, совпадающих с соответствующими значениями для новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, представленными в табл. 3. По данным термоаналитических исследований полученное вещество характеризуется типичной кривой дифференциальной сканирующей калориметрии, представленной на рис. 6, характеризующей новую, не известную ранее, слабозакристаллизованную β - модификацию (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диoкco3,4-дигидpoпиpимидин-(2H)-ил)-4-фтop-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата. Температуры эндотермических пиков полученного порошка равны (39,7-48,1)°С и (120,7-125,9)°С. По данным ВЭЖХ чистота полученной новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации софосбувира составляет 99,98%.

Пример 2. В 60 мл органического растворителя - ацетонитриле, марки «ХЧ» ТУ 6-094326-76 фирмы «ООО Компонент - Реактив, РФ», при перемешивании растворяют 0,90 г известной кристаллической модификации софосбувира (Форма 1) при 70°С, смешивают полученный раствор с 300 мл дистиллированной воды (соотношение 1:5) и замораживают со скоростью (2-3)×102 град/мин вливанием раствора небольшими порциями в предварительно охлажденный и наполненный жидким азотом (Ткип=-196°С) поддон из нержавеющей стали. Замороженный продукт на поддоне переносят в сублимационную камеру и подвергают сублимационной сушке при температурах: на конденсаторе -45°С…-51°С; на продукте - 196°С…+50°С и остаточном давлении в камере (9-5)⋅10-2 Торр в течение 22 ч. Продукт сублимационной сушки - легкий, пушистый порошок белого цвета, помещают в химический термостойкий стакан вместимостью 250 мл, вносят его в предварительно разогретый до 85°С сушильный шкаф, выдерживают при этой температуре в течение 2 часов и охлаждают до комнатной температуры в течение 12,0 часов (скорость охлаждения - 5 град/час). Выход продукта составил 0,87 г (96,7 мас. %). По данным РФА полученное вещество характеризуется типичной дифрактограммой, представленной на рис. 4 и набором межплоскостных расстояний и их интенсивностями, совпадающих с соответствующими значениями для новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, представленными в табл. 3. По данным термоаналитических исследований полученное вещество характеризуется типичной кривой дифференциальной сканирующей калориметрии, представленной на рис. 6, характеризующей новую, не известную ранее, слабозакристаллизованную β - модификацию (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диoкco3,4-дигидpoпиpимидин-(2H)-ил)-4-фтop-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата. Температуры эндотермических пиков полученного порошка равны (37,5-49,3)°С и (118,4-124,2)°С. По данным ВЭЖХ чистота полученной новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации софосбувира составляет 99,96%.

Пример 3. В 40 мл органического растворителя - диметилсульфоксиде (ДМСО), марки «ХЧ» ТУ 6-09-3818-77 производства «ООО НПП Викинг, РФ», при перемешивании растворяют 0,50 г известной кристаллической модификации софосбувира (Форма 1) при 60°С, смешивают полученный раствор с 400 мл дистиллированной воды (соотношение 1:10) и замораживают со скоростью примерно 103 град/мин распылением раствора пневматической форсункой при избыточном давлении 0,4 кг/см2 в реактор, наполненный жидким азотом (Ткип=-196°С). Замороженный продукт переносят в поддон из нержавеющей стали и подвергают сублимационной сушке при температурах: на конденсаторе -52°С…-56°С; на продукте -196°С…+40°С, и остаточном давлении в камере (6-3)⋅10-2 Торр в течение 24 ч. Продукт сублимационной сушки - легкий, пушистый порошок белого цвета, помещают в химический термостойкий стакан вместимостью 250 мл, вносят его в предварительно разогретый до 70°С сушильный шкаф, выдерживают при этой температуре в течение 3 часов и охлаждают до комнатной температуры в течение 15,0 часов (скорость охлаждения - 3,0 град/час). Выход продукта составил 0,47 г (94,0 мас. %). По данным РФА полученное вещество характеризуется типичной дифрактограммой, представленной на рис. 4 и набором межплоскостных расстояний и их интенсивностями, совпадающих с соответствующими значениями для новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, представленными в табл. 3. По данным термоаналитических исследований полученное вещество характеризуется типичной кривой дифференциальной сканирующей калориметрии, представленной на рис. 6, характеризующей новую, не известную ранее, слабозакристаллизованную β - модификацию (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диoкco3,4-дигидpoпиpимидин-(2H)-ил)-4-фтop-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата. Температуры эндотермических пиков полученного порошка равны (40,8-46,9)°С и (121,8-127,1)°С. По данным ВЭЖХ чистота полученной новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации софосбувира составляет 99,97%.

Пример 4. В 200 мл органического растворителя - этилового спирта 95% ГОСТ 51652 - 2000 фирмы «ООО СпиртТорг, РФ» при перемешивании растворяют 15,00 г известной кристаллической модификации софосбувира (Форма 1) при 40°С, смешивают полученный раствор с 1800 мл дистиллированной воды (соотношение 1:9) и замораживают со скоростью (2-3)×102 град/мин вливанием раствора небольшими порциями в предварительно охлажденные и наполненные жидким азотом (Ткип=-196°С) поддоны из нержавеющей стали. Замороженный продукт на поддонах переносят в сублимационную камеру и подвергают сублимационной сушке при температурах: на конденсаторе -45°С…-50°С; на продукте -196°С…+30°С и остаточном давлении в камере (9-5)⋅10-2 Торр в течение 25 ч. Продукт сублимационной сушки - легкий, пушистый порошок белого цвета, помещают в химический термостойкий стакан вместимостью 1000 мл, вносят его в предварительно разогретый до 80°С сушильный шкаф, выдерживают при этой температуре в течение 1,5 часов и охлаждают до комнатной температуры в течение 25,0 часов (скорость охлаждения - 2,2 град/час). Выход продукта составил 14,80 г (98,7 мас. %). По данным РФА полученное вещество характеризуется типичной дифрактограммой, представленной на рис. 4 и набором межплоскостных расстояний и их интенсивностями, совпадающих с соответствующими значениями для новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диoкco3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, представленными в табл. 3. По данным термоаналитических исследований полученное вещество характеризуется типичной кривой дифференциальной сканирующей калориметрии, представленной на рис. 6, характеризующей новую, не известную ранее, слабозакристаллизованную β - модификацию (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диoкco3,4-дигидpoпиpимидин-(2H)-ил)-4-фтop-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата. Температуры эндотермических пиков полученного порошка равны (39,5-48,3)°С и (120,5-125,7)°С. По данным ВЭЖХ чистота полученной новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации софосбувира составляет 99,97%.

Пример 5. Фармацевтическая композиция. Для приготовления 10,00 г известной композиции, включающей в качестве действующего вещества кристаллическую модификацию софосбувира и вспомогательные вещества в соотношении (мас. %):

Действующее вещество софосбувир 33,33
Маннитол 30,00
Целлюлоза микрокристаллическая 29,67
Кроскармеллоза натрия 5,00
Кремния диоксид коллоидный 0,50
Магний стеарат 1,50

3,33 г порошка новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диoкco3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата смешивают в течение 10 минут в керамической ступке с вспомогательными веществами: 3,00 г маннитолом (по фармакопее США и Европейской фармакопее), 2,97 г целлюлозой микрокристаллической (по фармакопее США и Европейской фармакопее), 0,50 г кроскармеллозой натрия (по фармакопее США и Европейской фармакопее), 0,05 г кремния диоксида коллоидного (по фармакопее США и Европейской фармакопее) и 0,15 г магния стеарата (по ТУ 6-09-16-1533-90). Полученную смесь подвергали физико-химическим и биологическим методам анализа. По данным РФА в полученной смеси присутствует вещество, которое характеризуется набором межплоскостных расстояний и их интенсивностями, совпадающих с соответствующими значениями для новой, не известной ранее, слабозакристаллизованной β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, представленными в табл. 3.

Аналогичным способом и идентичным по составу была приготовлена композиция на основе известной кристаллической модификации софосбувира (Форма 1), которую использовали в качестве исходного вещества. По данным РФА в полученной смеси присутствует вещество, которое характеризуется набором межплоскостных расстояний и их интенсивностями, совпадающих с соответствующими значениями для известной модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата (Форма 1), представленными в табл. 2.

Биологические эксперименты проводили на кроликах-самцах массой 2,0-2,5 кг. Для получения надежных результатов в параллельных сериях опытов использовали не менее 5ти кроликов. Определение времени появления софосбувира в крови проводили методом in vivo при пероральном введении композиции с последующим забором плазмы из ушной раковины. Во всех случаях количество вводимого в животное действующего вещества составляло 37,50 мг смеси (12,38 мг софосбувира). Оказалось, что для композиции, содержащей новую, не известную ранее, кристаллическую β - модификацию (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата в крови кроликов равно (14±4) мин, а для известной композиции, содержащей в качестве действующего вещества известную кристаллическую модификацию софосбувира (Форма 1) - (25±4) мин.

Таким образом, нами обнаружена новая, не известная ранее, слабозакристаллизованная β - модификация (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, предложены способ ее получения и применение ее для приготовления фармацевтической композиции в качестве нуклеотидного ингибитора полимеразы для лечения хронического вирусного гепатита С.

Полученная новая, не известная ранее, слабозакристаллизованная β - модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата характеризуется, отличным от известных кристаллических модификаций софосбувира набором межплоскостных расстояний (d, ) и соответствующих им интенсивностей (Iотн, %): - 15,95%; - 17,80%; - 21,57%; - 26,61%; - 28,21%; - 31,14%; - 40,14%; - 36,18%; - 39,89%; - 43,59%; - 40,40%; - 46,78%; - 54,75%; - 46,01%; - 55,33%; - 79,00%; - 100,00%; - 86,15%; - 98,40%; - 84,56%; - 94,38%; -90,68%; - 89,60%; - 75,49%; - 62,48%; - 57,69%; - 54,50%; - 47,35%; - 46,01%; - 46,27%; - 38,54%; - 40,71%; - 25,82%; - 25,82%; - 25,06%; - 27,38%; - 25,02%; - 23,68%; - 22,85%; - 21,83%, и наличием двух эндотермических эффектов на кривой ДСК при температурах (39,7-48,1)°С и (120,7-125,9)°С.

Кроме того, новая, не известная ранее, слабозакристаллизованная β - модификация (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата отличается повышенной биологической активностью в составе фармацевтической композиции по сравнению с действием известной кристаллической модификации софосбувира (Форма 1), которую использовали в качестве исходного вещества.

Из вышеизложенного можно сделать вывод о том, что заявляемая новая, не известная ранее, слабозакристаллизованная β - модификация (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, способ ее получения и применение ее для приготовления фармацевтической композиции в качестве нуклеотидного ингибитора полимеразы для лечения хронического вирусного гепатита С являются новыми и удовлетворяют критериям «изобретательский уровень» и «промышленная применимость».

1) WO 2010/135569 А1 от 25.11.2010 г.

2) WO 2015/025853 A1 от 5.03.2015 г.; 3) US 2015/0175646 от 25.06.2015 г.; 4) CN 104125252 А от 5.11.2014 г.;

5) WO 2016/035006 А1 от 10.03.2016 г.; 6) WO 2015/126995 А1 от 27.08.2015 г.

6) WO 2015/126995 A1 от 27.08.2015 г.; 7) WO 2015/191945 A2 от 17.12.2015 г.; 8) WO 2016/038542 А2 от 17.03.2016 г.; 9) WO 2016/008461 A1 от 21.01.2016 г.

10) CN 104277088 А от 14.01.2015 г.; 11) WO 2016/023906 A1 18.02.2016 г.

1. Слабозакристаллизованная β-модификация (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4- метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, характеризующаяся следующим набором межплоскостных расстояний (d, ) и соответствующих им интенсивностей (Iотн, %):и наличием двух эндотермических эффектов на кривой ДСК при температурах 39,7-48,1°C и 120,7-125,9°C.

2. Способ получения слабозакристаллизованной β-модификации (S)-изопропил 2-((S)- (((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата по п. 1, характеризующийся тем, что софосбувир растворяют в органическом растворителе при 25-70°C, смешивают полученный раствор с дистиллированной водой в соотношении 1:2-1:10, замораживают при скорости охлаждения не ниже 60 град/мин, подвергают сублимационной сушке и дополнительно отжигают при температурах 50-85°C в течение не менее 1 ч с последующим охлаждением до комнатной температуры со скоростью не выше 5 град/ч.

3. Способ по п. 2, характеризующийся тем, что сублимационную сушку замороженного раствора софосбувира проводят при температурах: на конденсаторе (-43)-(-56)°C; на продукте (-196)-(+50)°C и остаточном давлении в камере (9-3)×10-2 Topp в течение 22-26 ч.

4. Применение слабозакристаллизованной β-модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4- метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата по п. 1 для приготовления фармацевтической композиции в качестве нуклеотидного ингибитора полимеразы для лечения хронического вирусного гепатита С.



 

Похожие патенты:

Настоящее изобретение относится к изопропиловому эфиру (S)-2-{[(2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидро-2Н-пиримидин-1-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метил-тетрагидрофуран-2-илметокси]-фенокси-фосфориламино}-пропионовой кислоты и его стереоизомеру, которые могут использоваться для лечения вирусных инфекций у млекопитающих, способу его получения, композициям на его основе и его использованию для лечения вирусных заболеваний.

Настоящее изобретение относится к новому пролекарству, представляющему собой циклобутил (S)-2-{[(2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидро-2Н-пиримидин-1-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метил-тетрагидрофуран-2-илметокси]-фенокси-фосфориламино}-пропаноат общей формулы 1, его стереоизомер, кристаллическую или поликристаллическую форму.

Изобретение относится к противовирусным производным общей формулы I ,где R1 выбран из C1-6алкила; R2 выбран из атома галогена; R3 выбран из ОН, Н и C1-4алкокси; R4 выбран из Н, C1-6алкила и галогенсодержащего C1-6алкила; R5 выбран из C1-6алкила и галогенсодержащего C1-6алкила; R6 представляет собой фенил-Y-, где Y отсутствует или выбран из C1-6алкила, C2-6алкенила, C2-6алкинила, C2-6алкенил-(CO)-, C2-6алкинил-(СО)-, О, S, амино- и -N(C1-6алкил), фенил необязательно замещен группами, выбранными из C1-6алкила, атома галогена, нитро, C1-6алкокси, циано, С2-6алкенила, С2-6алкинила, C1-6ациламино, галогенсодержащего С1-6алкила, галогенсодержащего C1-6алкокси, амино, N(C1-6алкил)2 и С1-6алкил NHCO, или указанный фенил объединен с пяти- или шестичленным циклом с образованием бензо-пятичленного цикла или бензо-шестичленного цикла; гетероциклил-Y-, где Y отсутствует или выбран из C1-6алкила, C2-6алкенила, C2-6алкинила, C2-6алкенил-(CO)-, C2-6алкинил-(СО)-, О, S, амино- и -N(C1-6алкил), или гетероциклил вместе с присоединенной к нему группой Y образуют бициклический гетероцикл, при этом указанный гетероциклил необязательно замещен группами, выбранными из C1-6алкила, атома галогена, нитро, C1-6алкокси, циано, С2-6алкенила, С2-6алкинила, С1-6ациламино, галогенсодержащего C1-6алкила, галогенсодержащего C1-6алкокси, амино, N(C1-6алкил)2 и С1-6алкил NHCO; С1-6алкил-OC(O)-C2-6 алкенил- и C1-6алкил-O-C(O)-C2-6алкенил-С(О)-, где C1-6алкил необязательно замещен группами, выбранными из C1-6алкила, атома галогена, нитро, C1-6алкокси, циано, С2-6алкенила, С2-6алкинила, С1-6ациламино, галогенсодержащего C1-6алкила, галогенсодержащего C1-6алкокси, амино, N(C1-6алкил)2 и С1-6алкил NHCO; и R7 выбран из Н, атома галогена, C1-6алкила, галогенсодержащего C1-6алкила, C1-6алкокси, галогенсодержащего C1-6алкокси, NO2, CN, С1-6алкил-NH-CO-, гидрокси, моно-C1-6алкиламино, ди-C1-6алкиламино, С1-6алкил-S-, C2-6-алкенил-S, С2-6алкинил-S, С1-6алкил-SO-, С2-6алкенил-SO-, С2-6алкинил-SO-, С1-6алкил-SO2-, C2-6алкенил-SO2-, C2-6алкинил-SO2-, С1-6алкил-OSO2-, С2-6алкенил-OSO2-, C2-6алкинил-OSO2-.

Изобретение относится к соединениям, применимым в том числе в фармацевтических композициях для лечения заболеваний, вызванных вирусом денге, формул: где: R1 представляет собой арил, где указанный арил представляет собой фенил или нафтил, возможно замещенный одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из следующих: С1-6алкокси; R1a представляет собой С1-6алкил; R1b представляет собой -OR1a или -N(R1a)2; R2a и R2b (i) независимо выбраны из группы, состоящей из следующих: водород, С1-10алкил, -(CH2)mC(=O)R1b и арил-С1-3алкил; R3 представляет собой С1-10алкил или арил-С1-3алкил, где указанный арил представляет собой фенил; R4 представляет собой водород; R6 представляет собой А, В, С или D, где R8 представляет собой водород или С1-3алкил; R5 и R7 независимо выбраны из водорода, С(=О)С1-6алкила; m равен от 0 до 3; или его фармацевтически приемлемой соли.

Изобретение относится к С3алкиловым эфирам (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионовой кислоты общей формулы 1 и их фармацевтически приемлемым солям.

Изобретение относится к соединениям для лечения гепатита С формулы I: его стереоизомерным формам, фармацевтически приемлемым солям или сольватам, где R1 представляет собой водород; R2 представляет собой водород, нафтил или фенил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из галогена и C1-C6алкила; R3 и R4 представляют собой водород или C1-C6алкил; R5 представляет собой C1-C10алкил, необязательно замещенный C1-C6алкоксигруппой, C3-C7циклоалкил или бензил; R8 представляет собой водород.

Изобретение относится к новым соединениям общей формулы 1 или их стереоизомерам или фармацевтически приемлемым солям, обладающим свойствами ингибитора РНК полимеразы HCV NS5B, и к способам их получения.

Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии и медицины и касается новых биологически активных соединений, а именно солей 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина.

Предложенная группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложены способы получения вирусоподобной частицы вируса бешенства (VLP) в растении или части растения, вирусоподобные частицы (VLP), полученные с их помощью, композиция, содержащая указанные вирусоподобные частицы (VLP), и способ индукции иммунитета к инфекции, вызванной вирусом бешенства.

Изобретение относится к новым соединениям формулы (I), которые обладают свойствами ингибитора активности РНК полимеразы вируса и репликации вирусов РНК-содержащих вирусов, таких как ортомиксовируса, парамиксовируса, аренавируса, буньявируса, флавивируса, филовируса, тогавируса, пикорнавируса и коронавируса, аденовируса, риновируса, вируса гепатита А, вируса гепатита С, вируса полиомиелита, вируса кори, вируса Эбола, вируса Коксаки, вируса лихорадки Западного Нила, вируса оспы, вируса желтой лихорадки, вируса лихорадки Денге, вируса гриппа А, вируса гриппа В, вируса Ласса, вируса лимфоцитарного хориоменингита, вируса Хунин и др.

Настоящее изобретение относится к изопропиловому эфиру (S)-2-{[(2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидро-2Н-пиримидин-1-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метил-тетрагидрофуран-2-илметокси]-фенокси-фосфориламино}-пропионовой кислоты и его стереоизомеру, которые могут использоваться для лечения вирусных инфекций у млекопитающих, способу его получения, композициям на его основе и его использованию для лечения вирусных заболеваний.

Изобретения относятся к области иммунологии и вирусологии. Представленные однодоменые и олигомерные антитела содержат антигенсвязывающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, на основе которых созданы композиции, предназначенные для профилактики и лечения инфекции млекопитающих, вызванной вирусом Эбола.

Изобретение относится к новому соединению формулы (I) и его фармацевтически приемлемой соли, обладающим свойствами индуктора интерферона α (IFN-α) и фактора некроза опухолей α (TNF-α).

Изобретение относится к форзициазида сульфату и его производным, представленным следующей формулой, где R представляет собой Na+, K+ или NH+, и способу их получения, а также к противовирусному лекарственному средству на их основе и его применению.

Изобретение относится к новым синтетическим соединениям, а именно к N-ацилпроизводному дипептида, представляющего собой циклогексилоксикарбонил-пролил-триптофан (Cho-Pro-Trp-OH).

Изобретение относится к области медицины и генной терапии, а именно к иммунологии, и может быть использовано для лечения инфекции, вызванной вирусом гепатита С (ВГС).

Изобретение относится к конкретным соединениям и их фармацевтически приемлемым солям, приведенным в формуле изобретения. Соединения по изобретению предназначены для изготовления фармацевтической композиции, набора или лекарственного средства.

Изобретение относится к новым производным 5-аминоурацила, содержащим в положении N1 4-(фенокси)бензильный или ω-(фенокси)алкильный заместитель, соответствующим общей структурной формуле (I).

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой противовирусную фармацевтическую композицию для лечения вируса гепатита С у субъекта, нуждающегося в этом, которая содержит эффективное количество пролекарства, выбранного из циклобутил (S)-2-{[(2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидро-2Н-пиримидин-1-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метил-тетрагидрофуран-2-илметокси]-фенокси-фосфориламино}-пропаноата общей формулы 1, и/или циклобутил (S)-2-{(S)-[(2R,3R,4R,5R)-5-(3,4-дигидро-2,4-диоксо-2H-пиримидин-1-ил)-3-гидрокси-4-метил-4-фтор-тетрагидро-фуран-2-илметокси]-фенокси-фосфориламино}-пропаноата формулы 1.1, и/или циклобутил (S)-2-{(R)-[(2R,3R,4R,5R)-5-(3,4-дигидро-2,4-диоксо-2H-пиримидин-1-ил)-3-гидрокси-4-метил-4-фтор-тетрагидро-фуран-2-илметокси]-фенокси-фосфориламино}-пропаноата формулы 1.2, их кристаллическую или поликристаллическую форму и фармацевтически приемлемый носитель. Группа изобретений также включает способ лечения гепатита С у субъекта, нуждающегося в этом, включающий в себя последовательное или одновременное введение терапевтически эффективного количества противовирусной фармацевтической композиции, описанной выше.

Изобретение относится к новой безводной модификации -изопропил 2---5--ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-фосфориламино)пропаноата для лечения хронического вирусного гепатита С, способу ее получения и фармацевтической композиции на ее основе, которые могут быть использованы в фармацевтической промышленности. Предложена новая β-модификация -изопропил 2---5--ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-фосфориламино)пропаноата, характеризующаяся следующим набором межплоскостных расстояний и соответствующих им интенсивностей : и наличием двух эндотермических эффектов на кривой ДСК при температурах 39,7-48,1°C и 120,7-125,9°C с улучшенной эффективностью. Предложен новый эффективный способ получения указанной формы, характеризующийся тем, что софосбувир растворяют в органическом растворителе при 25-70°C, смешивают полученный раствор с дистиллированной водой в соотношении 1:2-1:10, замораживают при скорости охлаждения не ниже 60 градмин, подвергают сублимационной сушке и дополнительно отжигают при температурах 50-85°C в течение не менее 1 ч с последующим охлаждением до комнатной температуры со скоростью не выше 5 градч. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 4. табл., 6 ил., 5 пр.

Наверх