Способ получения биологически активных веществ из грибов




Владельцы патента RU 2657431:

Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "СФМ") (RU)
Общество с ограниченной ответственностью "Микопро" (ООО "Микопро") (RU)

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения биологически активных веществ из грибов. Способ получения биологически активных веществ из грибов включает измельчение грибного сырья до частиц размером не более 0,2 мм, далее измельченное сырье замораживают при температуре 15-20˚С в течение не менее 2-х часов, замороженное сырье облучают потоком ускоренных электронов с энергией 2,5-5 МэВ и дозе 16-20 Мрад, полученных в импульсном линейном ускорителе, после смешивают обработанное грибное сырье с жидким экстрагентом и выдерживают смеси в течение времени, при температуре и давлении, достаточных для наибольшего выхода целевых биологически активных веществ из сырья и растворения их в жидком экстрагенте с последующим отделением целевого продукта от экстрагента. Вышеописанный способ позволяет увеличить выход целевых биологически активных веществ из грибного сырья. 1 з.п. ф-лы, 5 табл., 4 пр.

 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается способа получения биологически активных веществ (БАВ) из мицелия и плодовых тел грибов. На протяжении столетий человечество ценило грибы в качестве источника пищи и лекарственных препаратов. В последнее десятилетие наблюдается усиление интереса к лекарственным веществам, получаемым из базидиальных грибов, направленных на лечение и профилактику ряда тяжелых и трудноизлечимых заболеваний. Фармакологическое действие высших грибов, базидиомицетов, отличается большим разнообразием при низкой токсичности для человека. Во многих видах грибов было идентифицировано множество биоактивных молекул, включая противоопухолевые вещества. Известно около 200 видов грибов (Auricularia polytrichia, Cordiceps sinensis, Flammulina velutipes, Grifola frondosa, Ganoderma lucidum, Hipzigus marmoreus, Hericium erinaceus, Inonotus obliquus, Lentinus edodes, Poria cocos, Pleurotus ostreatus, Polyporus umbellatus, Trametes versicolor и др.), компоненты которых оказывают иммуномодулирующее, противоопухолевое, противовирусное, антидиабетическое воздействие на организм человека (Stames P. Fungi perfecti. The best in gourment and medicinal mushrooms. Olympia: Olympiapress, 1999. - 38 p.).

Полисахариды - наиболее хорошо изученные сильнодействующие вещества, извлеченные из грибов, обладающих противоопухолевыми и иммуномодулирующими свойствами. В частности, показано, что полисахаридные фракции, выделенные из клеточных стенок плодовых тел вешенки Pleurotus ostreatus, ингибируют рост саркомы-180 у мышей, а также активны в отношении вируса иммунодефицита человека и вируса гриппа (Теплякова Т.В., Косогова Т.А. Высшие грибы Западной Сибири - перспективные объекты для биотехнологии лекарственных препаратов. Новосибирск, 2014. - 298 с.).

Известен способ получения фракции полисахаридов, обладающей иммуномодулирующими свойствами, из сухого порошка плодовых тел Pleurotus ostreatus (патент РФ 2189825, МПК А61К 36/06, опубл. 27.09.2002). Полисахаридную фракцию выделяли посредством двукратной обработки 100 г порошка в 350 мл кипящей дистиллированной воды в течение 3-х часов с последующей очисткой диализом и гель-фильтрацией. Выход целевого продукта, биологически активных полисахаридов, составил 5,8% от массы исходного сырья.

Недостатком данной технологии является низкий выход полисахаридов, обусловленный неполным извлечением целевого продукта.

Наиболее близким аналогом (прототипом) является способ выделения полифенолкарбонового комплекса (ПФК) из склероциев чаги (патент РФ №2502516, МПК А61К 36/06, опубл. 27.12.2013), в котором измельченную чагу заливают водой в массовом соотношении (0,5-1,5)-(3,5-4,5), замораживают при температуре минус 16±3°C в течение 1-4 часов, настаивают 1-2 часа при температуре 65-75°C, фильтруют, фильтрат подкисляют 25% хлористоводородной кислотой до pH 1,0-2,0, перемешивают, отстаивают 12-15 часов и фильтруют. Максимальный выход ПФК, полученного данным способом, составил 35% от сухого веса сырья.

Однако способ-прототип обеспечивает неполное извлечение ПФК из сырья.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является увеличение выхода целевых биологически активных веществ из грибного сырья.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе получения биологически активных веществ из грибов, включающем измельчение грибного сырья до размера частиц не более 0,2 мм, смешивание измельченного грибного сырья с жидким экстрагентом и выдерживание смеси в течение времени, температуре и давлении, достаточными для наибольшего выхода целевых биологически активных веществ из сырья и растворения их в жидком экстрагенте с последующим отделением целевого продукта от экстрагента, согласно изобретению после измельчения грибное сырье замораживают, а перед смешиванием с жидким экстрагентом измельченное и замороженное грибное сырье облучают дозой 16-20 Мрад потоком ускоренных электронов, полученных в импульсном линейном ускорителе электронов с энергией ускоренных электронов 2,5-5 МэВ.

В качестве импульсного линейного ускорителя электронов используют ускоритель электронов ИЛУ-10, который имеет среднюю мощность пучка 50 кВт, средний ток пучка 15 мА и потребляемую мощность 150 кВт.

Техническое решение направлено на более эффективное использование лекарственного грибного сырья, способствуя более полному извлечению биологически активных веществ из грибов. Отличительной особенностью способа является его универсальность, позволяющая облегчить экстракцию биологически активных веществ из любого грибного сырья. Поток электронов легче разрушает супрамолекулярные комплексы, образующие каркас грибных тканей в замороженном состоянии, и, тем самым, способствует существенному облегчению диффузии экстрактивных веществ в растворитель (экстрагент). Предварительное замораживание измельченного сырья и обработка его в ускорителе позволяет ускорить процессы экстракции целевых продуктов и обеспечить более полное их извлечение без потерь биологической активности полезных веществ.

Способ получения биологически активных веществ (БАВ) из грибов реализован в примере 1 (получение БАВ из плодовых тел вешенки) и примере 2 (получение БАВ из склероции чаги Inonotus obliquus).

Результаты экспериментов, приведенные в таблицах, обработаны с помощью программы «Statistica 6.0» при доверительной вероятности Р=0,95, n=4 (n - количество экспериментов).

Пример 1. В работе использовали высушенные плодовые тела вешенки обыкновенной (Pleurotus ostreatus КТ-3). Плодовые тела измельчали на мельнице MF-10 basic IKA с диаметром сита до 0,25 мм.

Одну часть использовали в качестве контроля, а другие части замораживали слоями при температуре минус 15-20°C в течение не менее 2-х часов и облучали различными дозами (измеренными в Мрад) в потоке ускоренных электронов в импульсном линейном ускорителе электронов ИЛУ-10 (табл. 1).

После обработки в ускорителе из образцов были получены суммарные полисахариды по следующей методике: 5,0 г измельченного плодового тела суспендировали в 50 мл дистиллированной воды, выдержали в термостате в течение 3 часов при температуре 80-95°C и 9 часов при температуре 96-98°C; после остывания центрифугировали при 4000 об/мин в течение 20 мин. Затем производили очистку полисахаридной фракции переосаждением этиловым спиртом и диализом.

Результаты

Выход суммарных полисахаридов в процентах от исходного сырья представлен в таблице 2. Выход суммарных полисахаридов растет прямо пропорционально дозе облучения. При максимальной дозе 20 Мрад выход полисахаридов в 3,1 раза выше, чем в контроле, не подвергавшемся облучению.

Таким образом, предварительное облучение образцов в ускорителе способствует более полному извлечению фракции полисахаридов из грибного сырья.

Пример 2. В работе использовали высушенные склероции чаги (Inonotus obliquus). Склероции измельчили на мельнице MF-10 basic IKA с диаметром пор сита до 0,25 мм. Одну часть использовали в качестве контроля, а другие части замораживали слоями при температуре минус 15-20°C в течение не менее 2-х часов и облучали различными дозами (измеренными в Мрад) в потоке ускоренных электронов в импульсном линейном ускорителе электронов ИЛУ-10. После обработки в ускорителе из образцов был выделен полифенолкарбоновый комплекс (ПФК) по следующей методике: образцы заливали раствором 2% NaOH (1:10) и прогревали на водяной бане в течение 5 часов; осадок отделяли центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 минут; затем промывали водой (1:10) и снова центрифугировали. Объединенный экстракт ПФК осаждали путем закисления водного экстракта соляной кислотой до pH 2,0-2,2 с последующим центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 минут. Очистку ПФК проводили посредством трехкратного переосаждения по следующей схеме: осадок растворяли в 0,1% NaOH (1:50) и снова осаждали соляной кислотой. Результаты, выход ПФК в процентах от исходного сырья (по сухому веществу), представлены в таблице 3.

Выход меланинов растет прямо пропорционально дозе облучения. При максимальной дозе 20 Мрад выход меланинов в 1,4 раза выше, чем в контрольном образце, не подвергавшемся облучению.

Далее в примерах 3 и 4 приведены экспериментальные данные, подтверждающие сохранение антивирусной активности БАВ из грибов после облучения ускоренными электронами.

Пример 3. Подготовленные образцы полисахаридов вешенки (как описано в примере 1) тестировали в отношении вируса гриппа A/H1N1/California/2009 в культуре клеток MDCK (клетки почки собаки). Результаты представлены в таблице 4.

Примечания: ТС50 - токсическая концентрация образцов, при которой погибает 50% неинфицированных клеток MDCK; IC50 - концентрация сухих веществ в образцах, подавляющая развитие 50% вируса гриппа; IS - индекс селективности, определяется как отношение ТС50/IC50.

Сравнительное тестирование антивирусной активности образцов полисахаридов показало, что облучение, в данном диапазоне, не оказывает существенного влияния на антивирусную активность. Даже при максимальной поглощенной дозе (20 Мрад) образец сохраняет активность, сравнимую с контролем.

Пример 4. Подготовленные образцы ПФК чаги (как описано в примере 2) тестировали в отношении вируса гриппа A/H1N1/California/2009 в культуре клеток MDCK (клетки почки собаки). Результаты представлены в таблице 5.

Примечания: ТС50 - токсическая концентрация образцов, при которой погибает 50% неинфицированных клеток MDCK; IC50 - концентрация сухих веществ в образцах, подавляющая развитие 50% вируса гриппа; IS - индекс селективности, определяется как отношение ТС50/ IC50.

Сравнительное тестирование антивирусной активности образцов меланинов показало, что облучение не оказывает существенного влияния на антивирусную активность. Среднее значение индекса селективности для облученных образцов составляет 27,6, что близко к значению индекса селективности контроля (29,5).

1. Способ получения биологически активных веществ из грибов, включающий измельчение грибного сырья, смешивание измельченного грибного сырья с жидким экстрагентом и выдерживание смеси в течение времени, при температуре и давлении, достаточных для наибольшего выхода целевых биологически активных веществ из сырья и растворения их в жидком экстрагенте с последующим отделением целевого продукта от экстрагента, отличающийся тем, что измельчение сухого грибного сырья проводят до размера частиц не более 0,2 мм, измельченное сухое грибное сырье замораживают слоями при температуре минус 15-20°С в течение не менее 2-х часов, а перед смешиванием с жидким экстрагентом измельченное и замороженное грибное сырье облучают потоком ускоренных электронов с энергией 2,5-5 МэВ и дозой 16-20 Мрад, полученных в импульсном линейном ускорителе электронов.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве импульсного линейного ускорителя электронов используют ускоритель электронов ИЛУ-10, который имеет среднюю мощность пучка 50 кВт, средний ток пучка 15 мА и потребляемую мощность 150 кВт.



 

Похожие патенты:

Изобретение может быть использовано в химической промышленности. Способ получения наноструктурированных порошков ферритов включает получение смеси соли азотной кислоты и по крайней мере одного оксидного соединения металла, ультразвуковую обработку, термообработку и фильтрацию.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения биологически активных продуктов из пантов. Способ получения биологически активных продуктов из пантов характеризуется тем, что в качестве сырья используют свежесрезанные панты и кожу или консервированные основу и кожу, при этом сырье подвергают переработке, сначала путем ферментативного гидролиза каждого вида сырья отдельно под воздействием ультразвуковых колебаний, сначала под действием фермента СГ-50 и далее фермента папаина, гидролизаты каждого сырья после ферментативного гидролиза фильтруют, а жмыхи направляют на дальнейшую переработку, где каждый жмых отдельно подвергают спиртовой экстракции, после чего проводят фильтрацию и экстракты от каждого вида сырья объединяют с экстрактами, полученными после ферментативного гидролиза, а жмыхи по отдельности подвергают высокотемпературной водной экстракции, а после фильтрации каждого экстракта их объединяют с экстрактами от предыдущих стадий переработки, причем жмыхи от переработки основы панта сушат в вакууме и измельчают, а жмых от переработки кожи утилизируют, при определенных условиях.

Изобретение относится к области нефтепереработки, в частности к извлечению металлов из тяжелого нефтяного сырья, и может быть использовано при обогащении углеродсодержащего сырья различного происхождения.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения биологически активного продукта из кожи марала. Способ получения биологически активного концентрата из кожи маралов, заключающийся в том, что кожу измельчают до состояния фарша и подвергают ферментативному гидролизу с последующей экстракцией под действием ультразвуковых колебаний, при этом ферментативный гидролиз проводят в присутствии ферментов пепсина и папаина, причем фермент пепсин вводится в процесс в начале экстрагирования смеси, а папаин - в середине временного периода процесса экстракции, после фильтрации осуществляют сушку экстракта при определенных условиях.

Изобретение относится к технологии получения окислительно-стойких ультравысокотемпературных керамических композиционных материалов состава MB2/SiC, где М=Zr и/или Hf с нанокристаллическим карбидом кремния, которые могут быть использованы в качестве окислительно-, химически- и эрозионно-стойких материалов в потоках воздуха при температурах выше 2000°С, для создания авиационной, космической и ракетной техники, отопительных систем, теплоэлектростанций, а также в технологиях атомной энергетики, в химической и нефтехимической промышленности.

Изобретение относится к области обогащения полезных ископаемых, в частности к извлечению ультрадисперсных алмазов из сырья импактного происхождения, и может быть использовано при переработке кимберлитовых руд.

Изобретение относится к технологии получения соединений, относящихся к группе сложных оксидов со структурой граната, легированных щелочными и щелочноземельными элементами и элементами 3d группы, которые могут быть применены для изготовления различных люминесцентных материалов в оптоэлектронике, в том числе для изготовления светодиодных источников освещения.

Изобретение относится к устройству (1), предназначенному для манипулирования объектами (О), находящимися в канале (2) внутри текучей среды (F), в частности жидкости. Устройство включает в себя - канал (2), идущий вдоль продольной оси (X), причем канал (2) имеет поперечное сечение с шириной (L), измеренной вдоль первой поперечной оси (Y), и толщиной (е), измеренной вдоль второй поперечной оси (Z), перпендикулярной к первой.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения биологически активного экстракта из продукции пантового оленеводства. Способ получения биологически активного экстракта из продукции пантового оленеводства включает совместную водную экстракцию измельченных до состояния фарша хвостов, половых органов самцов, маток с плодами и околоплодной жидкостью, сухожилий, кожи пантов и мяса под действием ультразвуковых колебаний в присутствии фермента пепсина, при этом процесс экстрагирования начинают с экстракции сухожилий при последующем поэтапном вводе в экстрагируемую массу через час от начала процесса - кожи пантов, через два часа - хвостов и половых органов самцов, через четыре часа - маток с плодами и околоплодной жидкостью и через шесть часов - мяса, при этом каждый вид сырья перед вводом в процесс экстрагирования смешивается с водой и с ферментом пепсином, а по истечении 12 часов от начала процесса производят фильтрацию экстракта при определенных условиях.

Изобретение относится к технологии переработки пантов марала, изюбра, северного оленя для получения биологически активного концентрата в виде порошка и может быть использовано в медицине и ветеринарии.

Изобретение относится к химической переработке древесных отходов, в частности, к комплексной переработке коры лиственницы с получением ценных химических продуктов.

Изобретение относится к фармакологической промышленности, в частности к средству, обладающему противотуберкулезным действием. Средство, обладающее противотуберкулезным действием, представляет собой сухой экстракт, полученный путем измельчения кроющих листьев початков антоциановой диплоидной формы кукурузы, экстракции спиртом 96% на водяной бане до кипения и кипячения в течение 14-15 минут, выпаривания при температуре 55-60°С, разведения выпаренного остатка сначала дистиллированной водой при температуре 40-50°С, затем добавления хлороформа в пропорции 4/5 части воды и 1/5 части хлороформа, охлаждения до комнатной температуры и центрифугирования со скоростью 1500 оборотов в минуту в течение 15 минут с последующим отделением водной фракции и высушиванием ее.

Изобретение относится к технологии переработки растительного сырья, конкретно к способу получения биологически активных веществ и кормовой муки из древесной зелени различных пород.

Изобретение относится к технологии переработки растительного сырья, конкретно к способу получения биологически активных веществ и кормовой муки из древесной зелени различных пород.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к противовоспалительному средству. Противовоспалительное средство, представляющее собой настойку из высушенной и измельченной надземной части копеечника кустарникового, полученную методом перколяции с использованием в качестве экстрагента 70% этилового спирта, при соотношении сырье : экстрагент 1:10, при этом на стадии намачивания 10 г сырья заливают 11,29 мл 70%-го этилового спирта.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средствам (варианты) и композиции, улучшающим вазодиалатирующую, антитромбическую, противовоспалительную функции эндотелия.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой способ получения экстракта Albizzia chinensis (Osbeck) Merr (альбиции китайской), включающий экстрагирование коры ствола Albizzia chinensis (Osbeck) Merr 80-95% EtOH в H2O с получением экстракта, при этом объемное/массовое отношение EtOH к коре ствола Albizzia chinensis составляет от 3:1 до 5:1; и очистку полученного экстракта с помощью колоночной хроматографии с полиамидным адсорбентом при элюировании последовательно 10-30% и 40-80% раствором EtOH в Н2О, при этом на стадии очистки указанный экстракт растворяют в 10-30% EtOH/H2O.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения биологически активных продуктов из пантов. Способ получения биологически активных продуктов из пантов характеризуется тем, что в качестве сырья используют свежесрезанные панты и кожу или консервированные основу и кожу, при этом сырье подвергают переработке, сначала путем ферментативного гидролиза каждого вида сырья отдельно под воздействием ультразвуковых колебаний, сначала под действием фермента СГ-50 и далее фермента папаина, гидролизаты каждого сырья после ферментативного гидролиза фильтруют, а жмыхи направляют на дальнейшую переработку, где каждый жмых отдельно подвергают спиртовой экстракции, после чего проводят фильтрацию и экстракты от каждого вида сырья объединяют с экстрактами, полученными после ферментативного гидролиза, а жмыхи по отдельности подвергают высокотемпературной водной экстракции, а после фильтрации каждого экстракта их объединяют с экстрактами от предыдущих стадий переработки, причем жмыхи от переработки основы панта сушат в вакууме и измельчают, а жмых от переработки кожи утилизируют, при определенных условиях.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к средству, обладающему антиоксидантным действием. Средство, обладающее антиоксидантным действием, полученное из корневищ куркумы длинной путем циркуляционной экстракции 100,0 г суховоздушного сырья с влажностью не более 8%, 96% этиловым спиртом, подкисленным 0,1 М раствором хлороводородной кислоты в соотношении: 1,0 мл раствора хлороводородной кислоты на 100,0 мл экстрагента, в течение 3,0 часов, с последующим сгущением извлечения на ротационном испарителе под вакуумом до остаточной влаги в продукте не более 25%.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения экстракта из коры дуба, подавляющего зоопатогенные бактерии. Способ получения экстракта из коры дуба, подавляющего зоопатогенные бактерии, включающий обработку предварительно измельченной коры дуба электрохимически активированным катодным водным раствором с рН 7-8 Eh=-300…-450 мВ, при оптимальном соотношении сырье-раствор 1:8-1:15, при постоянном перемешивании в течение не менее 600 сек, и последующую обработку подготовленной суспензии ультразвуком с частотой 22 кГц и интенсивностью ультразвукового воздействия в течение 50-70 Вт/см2 в течение 420-600 сек.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и ветеринарии и представляет собой биологически активное средство для обработки сосков вымени, содержащее глицерин и воду дистиллированную, отличающееся тем, что содержит поливиниловый спирт марки 15/88, сосновую хвою и 0,05 % хлоргексидин, причем компоненты в средстве находятся в определенном соотношении.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения биологически активных веществ из грибов. Способ получения биологически активных веществ из грибов включает измельчение грибного сырья до частиц размером не более 0,2 мм, далее измельченное сырье замораживают при температуре 15-20˚С в течение не менее 2-х часов, замороженное сырье облучают потоком ускоренных электронов с энергией 2,5-5 МэВ и дозе 16-20 Мрад, полученных в импульсном линейном ускорителе, после смешивают обработанное грибное сырье с жидким экстрагентом и выдерживают смеси в течение времени, при температуре и давлении, достаточных для наибольшего выхода целевых биологически активных веществ из сырья и растворения их в жидком экстрагенте с последующим отделением целевого продукта от экстрагента. Вышеописанный способ позволяет увеличить выход целевых биологически активных веществ из грибного сырья. 1 з.п. ф-лы, 5 табл., 4 пр.

Наверх