Способ подготовки эритроцитов для использования в флуоресцентной микроскопии

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для подготовки эритроцитов при проведении метода флуоресцентной in situ гибридизации (FISH). Для этого полученную от пациента кровь трехкратно отмывают центрифугированием при 1000 об/мин в фосфатно-солевом буфере с рН 7,4 в течение 5 мин. Затем доводят до одномиллионной концентрации клеток в миллилитре. После чего пробу объемом 1 мл осаждают центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 мин. Ресуспендируют в 400 мкл 0,5% раствора глутарового альдегида и фиксируют в течение 30 мин при 25°С. Фиксированные эритроциты промывают фосфатно-солевым буфером с рН 7,4. Затем снова ресуспендируют в растворах этанола с восходящей концентрацией 50, 80 и 100% по 400 мкл каждого раствора с последующей инкубацией в течение 10 мин при 4°С. Затем эритроциты снова промывают в фосфатно-солевом буфере с рН 7,4 центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 мин и ресуспендируют в 300 мкл дистиллированной воды. Изобретение позволяет выделить эритроциты из исследуемых образцов крови без изменения их размера и формы с сохранением четко выраженных границ клеток и центральной впадины диска и выявить бактерии на поверхности и внутри эритроцитов при проведении диагностики септических состояний пациентов. 4 ил., 2 пр., 1 табл.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике бактериологических лабораторий в лечебных учреждениях, НИИ и может быть использовано для изучения взаимодействия про- и эукариот методом флуоресцентной микроскопии для выявления микроорганизмов при развитии бактериемии и сепсиса.

На сегодняшний день актуальной остается проблема взаимодействия про- и эукариот. Разные виды микроорганизмов могут поражать различные типы клеток организма хозяина, в основном эпителиальные, дендритные клетки и макрофаги [Розов С.М., Дейнеко Е.В. Бактериальные внутриклеточные патогены: стратегии нападения и защиты // Успехи современной биологии. 2015, т. 135, №5, С. 464-479]. Но в последнее время все чаще можно встретить работы, где описывают нахождение микроорганизмов внутри эритроцитов [Potgieter М., Bester J., Douglas В. Kell, Pretorius E. The dormant blood microbiome in chronic, inflammatory diseases // Microbiology Reviews. 2015, fuv013, №39, P. 567-591], например, Bartonella bacilliformis [Dechio С. Infection-associated type IV secretion systems of Bartonella and their diverse roles in host cell interaction // Cell Microbiol. 2008, m. 10, №8, P. 1591-1598], Brucella melitensis [Vitry M.A, Hanot Mambres D., Deghelt M., Hack K., Machelart A., Lhomme F., et al. Brucella melitensis invades murine erythrocytes during infection // Infect Immun. 2014, №82, P. 3927-38], Streptococcus pneumoniae [Yamaguchi M., Terao Y, Mori-Yamaguchi Y, Domon H, Sakaue Y, Yagi T, et al. Streptococcus pneumoniae invades erythrocytes and utilizes them to evade human innate immunity // PLoS One. 2013, №8, P. 77282], Mycoplasma suis [Zhang Y, Zou Y, Ma P., Muhammad KM., Li Y, Jiang P. Identification of Mycoplasma suis MSG1 interaction

proteins on porcine erythrocytes // Arch Microbiol. 2014, №80, P. 7551-60], Staphylococcus epidermidis [Щуплова E.A., Стадников A.A., Фадеев С.Б. Роль биологических свойств Staphylococcus epidermidis во внутриэритроцитарной инвазии и изменении активности каталазы и супероксиддисмутазы эритроцитов при экспериментальной генерализованной инфекции // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2015, т. 159, №1, С. 79-82], часто приводящие к развитию бактериемии и сепсиса [Рудное В.А. Сепсис: современные подходы к диагностике и интенсивной терапии // Вестник анестизиологии и реанимотологии. 2010; т. 7 №1, С. 48-57]. Для изучения взаимодействия бактерий с эритроцитами используют разные методы и виды микроскопии: световую, электронную, атомно-силовую, люминесцентную, конфокальную лазерную сканирующую и другие. Известен метод флуоресцентной in situ гибридизации (fluorescent in situ hybridization, FISH), позволяющий одновременно обнаружить бактерии в кровотоке у септических больных и на молекулярно-генетическом уровне провести их идентификацию. При регистрации результатов FISH также необходима флуоресцентная микроскопия [Гаврилов С.Н, Скачкова Т.С., Шипулина О.Ю., Савочкина Ю.А., Шипулин Г.А., Малеев В.В. Современные молекулярно-генетические методы, используемые для этиологической диагностики сепсиса // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2016, №2, С. 91-99]. Для каждого вида микроскопии необходимы соответствующие способы подготовки эритроцитов, особенно если дальнейшие манипуляции подразумевают использование высокого температурного режима до 60°С и выше, например при FISH. Однако способы подготовки эритроцитов для исследования оказывают влияние на морфологические характеристики клетки, изменяя форму, размер и глубину центральной впадины диска. В доступных литературных источниках приводятся противоречивые данные о способах фиксации, концентрации фиксатора, длительности фиксации эритроцитов для флуоресцентной микроскопии.

Известны способы фиксации эритроцитов при использовании атомно-силовой микроскопии [Белоусова О.Д., Толмачев И.А., Гайдаш А.А., Левичев В.В. и др. Особенности подготовки проб крови для исследования морфологических параметров и структуры мембран эритроцитов методом атомно-силовой микроскопии // WWW.MEDLINE.RU, Судебная медицина. 2012, т. 13, С. 954-966]. Авторы использовали два способа приготовления мазков и различные варианты их фиксации. Один способ стандартный, при котором мазки из цельной крови готовили на обезжиренных стеклянных подложках (покровных стеклах) и высушивали на воздухе при температуре 24°С в течение 10 мин, далее часть мазков фиксировали на стеклянной подложке 96% этиловым спиртом, другую часть глутаровым альдегидом с различной концентрацией от 0,5 до 2,5% и различной экспозицией фиксатора (от 30 с до 90 мин). После фиксации раствором глутарового альдегида часть мазков была промыта в этиловом спирте в возрастающих концентрациях от 30 до 80%. На завершающем этапе химической фиксации мазки крови высушивали на воздухе при температуре окружающего воздуха 24°С.

Недостатком способа является низкая возрастающая концентрация раствора этилового спирта от 30 до 80%, при которой происходит недостаточная химическая фиксация для проведения дальнейших манипуляций, связанных с применением высоких температур до 60°С, например, метод флуоресцентной in situ гибридизации.

Другой недостаток заключается в том, что имеется дополнительный этап - фиксирование эритроцитов 96% этиловым спиртом к стеклянной подложке, что является лишним для подготовки эритроцитов при использовании флуоресцентной микроскопии. Время экспозиции фиксатора слишком «растянуто» от 30 с до 90 мин, что для подготовки эритроцитов к флуоресцентной микроскопии не подходит.

Другой способ - иммерсионный, при котором цельную кровь в количестве 20 мкл помещали в емкости с 2 мл фиксирующей жидкости. В качестве основной фиксирующей жидкости был использован водный раствор

глутарового альдегида в концентрациях от 0,5 до 2,5%. После экспозиции цельной крови в указанных растворах (от 30 с до 90 мин) готовили мазки и высушивали их на воздухе при 24°С в течение 10 мин.

В данном способе недостатком, как и в первом, является то, что авторы высушивали мазки на воздухе при 24°С в течение 10 мин, а для приготовления образцов крови для флуоресцентной микроскопии высушивание не подходит, так как у эритроцитов при дальнейших манипуляциях могут изменяться морфологические параметры клеток. Время экспозиции очень «размыто» (от 30 с до 90 мин), хотя достаточно 30 мин [Лобов И.А., Давлеткилъдеев Н.А. Влияние способа подготовки образца на морфофункционалъные характеристики эритроцитов при исследовании методом атомно-силовой микроскопии // Вестник Омского университета. 2013, №2, С. 129-132].

Известен способ подготовки эритроцитов для проведения реакции непрямой иммуннофлуоресценции с использованием конфокальной лазерной сканирующей микроскопии [Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Щуплова Е.А. Антигемоглобиновая активность бактерий при взаимодействии с эритроцитами и ее роль в патогенезе анемии при инфекции // Гематол. и трансфузиол., 2011, т. 56, №1, С. 3-6]. В данном способе авторы использовали для фиксации 4% раствор параформальдегида и затем 96% раствор этанола.

Недостатком данного способа является то, что после фиксации 4% раствором параформальдегида сильно изменяются морфологические параметры эритроцитов, под люминесцентным микроскопом обнаруживаются размытые контуры клеток (фиг. 1).

Другим недостатком является то, что после добавления 96% раствора этанола эритроциты чаще приобретают звездчатую форму (астроциты) и становится трудно изучать взаимодействие бактерий с эритроцитами (фиг. 2).

Однако представленные способы недостаточно хорошо фиксируют мембрану эритроцитов для проведения методов, использующих высокий температурный диапазон. В связи с чем, актуальным является разработка способа подготовки эритроцитов для методов флуоресцентной микроскопии, а также

их использования в методах флуоресцентой in situ гибридизации, при проведении которых температура нагрева доходит до 60°С.

Задачей заявляемого технического решения является создание способа подготовки эритроцитов, исключающего изменений морфологических параметров (формы и размера) клеток, устойчивых к высоким температурным воздействиям во время проведения FISH, а также для использования эритроцитов при других методах флуоресцентной микроскопии.

Для решения указанной задачи в заявляемом способе полученную от пациента кровь, трехкратно отмывали центрифугированием при 1000 об/мин в фосфатно-солевом буфере с рН=7,4 в течение 5 мин, доводили до одномиллионной концентрации клеток в миллилитре, затем пробу объемом 1 мл осаждали центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 мин и ресуспендировали в 400 мкл 0,5% раствора глутарового альдегида, фиксировали в течение 30 мин при 25°С, фиксированные эритроциты промывали фосфатно-солевым буфером с рН=7,4, ресуспендировали в растворах этанола с восходящей концентрацией 50, 80 и 100% по 400 мкл каждого раствора с последующей инкубацией в течение 10 мин при 4°С, затем эритроциты снова промывали в фосфатно-солевом буфере с рН=7,4 центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 мин и ресуспендировали в 300 мкл дистиллированной воды, далее опытные образцы обрабатывали для проведения метода флуоресцентной in situ гибридизации и регистрацию результатов проводили с помощью люминесцентной или конфокальной лазерной сканирующей микроскопии.

Технический результат от реализации изобретения выражается в создании способа подготовки эритроцитов для проведения метода флуоресцентной in situ гибридизации (FISH) с возможностью обнаружения эритроцитов соответствующего размера и формы, с четко выраженными границами клеток, глубиной центральной впадины диска. При таком способе подготовки эритроцитов возможно выявление бактерий на поверхности и внутри эритроцитов,

а также одновременная их идентификация при использовании методов флуоресцентной микроскопии.

Авторы экспериментально разработали оптимальный протокол, обеспечивающий наиболее эффективные этапы подготовки эритроцитов, исключающий их лизис, к проведению дальнейших манипуляций для флуоресцентной микроскопии. Авторы подобрали условия необходимые при получении качественных образцов крови для выявления бактерий, локализованных на поверхности или внутри эритроцитов, используя метод FISH, и регистрируя с помощью люминесцентной или конфокальной лазерной сканирующей микроскопии. Авторы для работы брали только свежевыделенные эритроциты, так как эритроциты со сроком хранения несколько дней не выдерживали этапы фиксации и изменяли свою форму и размер. Далее авторы подобрали режим фиксации эритроцитов, для того чтобы они выдерживали температуру нагрева до 60°С и не лизировались. Для этого авторы использовали 0,5% раствор глутарового альдегида, время инкубации опытных образцов составило 30 мин при 25°С. Авторы установили, что при фиксации 0,5% раствором глутарового альдегида эритроциты оставались красно-розового цвета, сохраняли четко выраженные контуры и характерное двояковогнутое углубление в середине клетки (фиг. 3).

После обработки 0,5% раствором глутарового альдегида авторы использовали раствор этанола с последовательно увеличивающимися концентрациями: 50, 80 и 100% раствор. Время инкубации в каждом растворе составляло 10 мин при 4°С. Авторы установили, что комбинация, состоящая из 0,5% раствора глутарового альдегида с последующим добавлением раствора этанола с восходящими концентрациями 50, 80 и 100% способствует укреплению мембран эритроцитов и не приводит к образованию астроцитоза, микро-макроцитоза, а также пойкилоцитозу. Результаты исследования представлены в таблице 1.

В опытных образцах авторы наблюдали эритроциты с типичной для них формой и размером, а также с четко выраженным углублением в середине клетки. Авторы обнаружили адгезию бактерий (S. epidermidis 7) к эритроцитам и в некоторых образцах внутриэритроцитарно расположенные бактерии (фиг. 4).

Способ осуществляется следующим образом:

1) Кровь от пациента трехкратно отмывают центрифугированием при 1000 об/мин мин в фосфатно-солевом буфере с рН=7,4 в течение 5 и доводят до одномиллионной концентрации клеток в миллилитре.

2) Пробу объемом 1 мл осаждают центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 мин и ресуспендируют в 400 мкл 0,5% раствора глутарового альдегида, фиксируют в течение 30 мин при 25°С.

3) Фиксированные эритроциты промывают фосфатно-солевым буфером с рН=7,4 и ресуспендируют в растворах этанола с восходящей

концентрацией 50, 80 и 100% по 400 мкл каждого раствора с последующей инкубацией в течение 10 мин при 4°С.

4) Эритроциты промывают в фосфатно-солевом буфере с рН=7,4 центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 мин и ресуспендируют в 300 мкл дистиллированной воде.

Примеры конкретного выполнения способа.

Пример 1. Больной Г., 1959 г.р. поступил в ООКБ №1 с диагнозом: «Апостематозный пиелонефрит, сепсис». Взяли кровь у больного и подготовили эритроциты по разработанному способу для дальнейшего проведения метода флуоресцентной in situ гибридизации (FISH). При таком способе подготовки эритроцитов возможно выявление бактерий на поверхности и внутри эритроцитов, а также одновременная их идентификация, что позволит подтвердить поставленный диагноз у больного. Для проведения исследования полученную от пациента кровь трехкратно отмывали центрифугированием при 1000 об/мин в фосфатно-солевом буфере с рН=7,4 в течение 5 мин, доводили до одномиллионной концентрации клеток в миллилитре, затем пробу объемом 1 мл осаждали центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 мин и ресуспендировали в 400 мкл 0,5% раствора глутарового альдегида, фиксировали в течение 30 мин при 25°С, фиксированные эритроциты промывали фосфатно-солевым буфером с рН=7,4, ресуспендировали в растворах этанола с восходящей концентрацией 50, 80 и 100% по 400 мкл каждого раствора с последующей инкубацией в течение 10 мин при 4°С, затем эритроциты снова промывали в фосфатно-солевом буфере с рН=7,4 центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 мин и ресуспендировали в 300 мкл дистиллированной воды. С помощью разработанного способа эритроциты подготовили для проведения метода FISH. Для этого полученные аликвоты по 100 мкл фиксированных клеток осаждали центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 мин и ресуспендировали в 100 мкл буферного раствора для гибридизации (0,9 М NaCl и 20 mM Tris-HCl, рН=7), содержащего 500 нМ ДНК-зонд, меченный на

5'-конце флуоресцеина изотиоцианатом (FITC). Далее проводили гибридизацию при 56°С в течение 5 ч. После гибридизации клетки центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 мин и добавляли 500 мкл промывочного раствора для удаления ДНК-зонда, не связавшихся с ДНК бактериями в исследуемом образце крови, инкубировали в течение 30 мин при 56°С.После гибридизации клетки центрифугировали и ресуспендировали в 300 мкл дистиллированной воды. Эритроциты дополнительно окрашивали синим Эванса, обеспечивающего красное свечение клеток. Регистрацию результатов FISH проводили с помощью конфокального лазерного сканирующего микроскопа Olympus FV 1000 (Olympus Corporation, Япония) с использованием 100 х иммерсионного объектива (числовая апертура 1,4). В результате исследования в образце крови пациента с помощью разработанного способа наблюдали эритроциты с типичной для них формой и размером, а также с четко выраженным углублением в середине клетки, обнаружили адгезию бактерий к эритроцитам и их внутриэритроцитарное расположение. Было сделано заключение о том, что разработанный способ подготовки эритроцитов позволяет получить качественные эритроциты для их использования в методе флуоресцентной in situ гибридизации, что способствует подтверждению поставленного диагноза.

Пример 2. Больная Я., 1953 г.р. поступила в ООКБ №1 с предположительным диагнозом: «Сепсис». У больной была взята кровь для исследования. Образец крови пациентки обрабатывали согласно примеру 1. В результате исследования наблюдали эритроциты правильной формы и размером, а также с четкими границами клеток и характерному углублению в середине эритроцита. В исследуемом образце крови не обнаружили эритроциты с признаками астроцитоза, микро-, макроцитоза, пойкилоцитоза а также не наблюдали бактерий со специфическим свечением. Предполагаемый диагноз у больной не подтвердился. Было сделано заключение о том, что разработанный способ подготовки эритроцитов позволяет получить качественные эритроциты для использования в флуоресцентной in situ гибридизации.

Таким образом, заявляемый способ позволяет повысить качество подготовки эритроцитов в исследуемых образцах крови для проведения флуоресцентной in situ гибридизации, а также для других методов флуоресцентной микроскопии, что может способствовать точности диагностики при септических состояниях пациентов и может быть использован в клинических лабораториях лечебных учреждений, а также в НИИ при изучении взаимодействий про- и эукариот.

Способ подготовки эритроцитов для проведения метода флуоресцентной in situ гибридизации (FISH), заключающийся в том, что полученную от пациента кровь трехкратно отмывают центрифугированием при 1000 об/мин в фосфатно-солевом буфере с рН =7,4 в течение 5 мин, доводят до одномиллионной концентрации клеток в миллилитре, затем пробу объемом 1 мл осаждают центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 мин и ресуспендируют в 400 мкл 0,5% раствора глутарового альдегида, фиксируют в течение 30 мин при 25°С, фиксированные эритроциты промывают фосфатно-солевым буфером с рН =7,4, ресуспендируют в растворах этанола с восходящей концентрацией 50, 80 и 100% по 400 мкл каждого раствора с последующей инкубацией в течение 10 мин при 4°С, затем эритроциты снова промывают в фосфатно-солевом буфере с рН =7,4 центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 мин и ресуспендируют в 300 мкл дистиллированной воды.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к иммунологии, вирусологии, биотехнологии и лабораторной диагностике в медицине и может быть использовано для диагностики параметров врожденного иммунитета и при различных заболеваниях инфекционной (вирусной, бактериальной, грибковой) и неинфекционной (аллергической, аутоиммунной, онкологической) этиологии.

Изобретение относится к области медицины, в частности к исследованию крови, и может быть использовано для диагностики болезни Виллебранда. Способ диагностики болезни Виллебранда (субтип 2N) заключается в том, что для выявления указанного субтипа используется тромбоэластография до и после двухкратной инфузии концентрата фактора Виллебранда (ФВ) в дозе 40-50 МЕ/кг, а диагностику осуществляют определением показателя Ratio как отношение времени рекальцификации крови (при записи тромбоэластограммы) до двухкратной инфузии ко времени рекальцификации крови после двукратной инфузии концентрата ФВ, и при значении показателя Ratio больше 1,3 диагностируют болезнь Виллебранда (субтип 2N).
Изобретение относится к медицине, а именно к трансфузиологии, и предназначается для использования в лечебных учреждениях при прогнозировании потребности в аллогенных эритроцитсодержащих компонентах крови в интраоперационном и раннем послеоперационном периодах при хирургической коррекции клапанной патологии у взрослых пациентов.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования частоты обострений при хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ). Используют результаты теста с оценкой расстояния, пройденного пациентом за 6 минут, проводят оценку по шкалам влияния, симптомов и активности, рассчитывают количество выкуриваемых пачек сигарет в год, устанавливают факт курения на момент обследования, осуществляют орофарингеальный мазок с задней стенки глотки с выделением ДНК и секвенированием по V3-V4 участкам бактериального гена 16S рРНК определяют количество операционных таксономических единиц семейства Propionibacteriaceae, семейства Acidaminobacteraceae, рода Bradyrhizobium, рода Treponema, рода Ruminococcus, вида Rothia mucilaginosa, вида Brevundimonas diminuta, вида Pseudomonas viridiflava, вида Acinetobacter schindleri, рода Sphingopyxis alaskensis.

Изобретение относится к клинической медицине, а именно к анестезиологии и реанимации, как способ прогнозирования развития артериальной гипотонии у беременных юного возраста при спинномозговой анестезии во время операции кесарево сечение.
Изобретение относится к медицине, а именно к трансфузиологии, и предназначается для использования в лечебных учреждениях при прогнозировании потребности в аллогенных эритроцитсодержащих компонентах крови в интраоперационном и раннем послеоперационном периодах при плановых кардиохирургических вмешательствах у взрослых пациентов.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования наличия хромосомных аномалий в эмбрионах удовлетворительного и плохого качества в программе экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для диагностики болезни Парксинсона. Для этого проводят забор периферической крови, выделяют однородную фракцию CD45+ клеток с лизированием выделенной клеточной фракции.

Изобретение относится к области биотехнологии и предназначено для определения индекса фрагментации ДНК сперматозоидов у животных-производителей. Осуществляют подготовку мазка спермопробы к окрашиванию и приготовление красителя смешиванием раствора лимонной кислоты, гидрофосфата натрия и 1%-го акридин оранжевого.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу детекции комплекса Mycobacterium tuberculosis. Способ детекции комплекса Mycobacterium tuberculosis, включает иммунологический анализ специфического для комплекса Mycobacterium tuberculosis белка, где внеклеточную секрецию указанного белка осуществляют посредством термической обработки биологического образца, содержащего комплекс Mycobacterium tuberculosis, при 45-50°C в течение от 15 до 60 минут.

Изобретение относится к области биотехнологии и предназначено для определения индекса фрагментации ДНК сперматозоидов у животных-производителей. Осуществляют подготовку мазка спермопробы к окрашиванию и приготовление красителя смешиванием раствора лимонной кислоты, гидрофосфата натрия и 1%-го акридин оранжевого.

Изобретение относится к детектированию аффинностей связывания. Устройство (1) для применения при обнаружении аффинностей связывания содержит подложку (2), не имеющую волновода.
Изобретение относится к области создания визуальных эффектов. Способ создания стабильного и долговременного художественного визуального эффекта диффузного свечения поверхности художественно-архитектурного объекта под воздействием внешнего возбуждающего УФ-А (365-385 нм) и/или ИК-А (760-1000 нм) излучения включает нанесение нескольких оптически прозрачных полимерных слоев, в состав прилегающего к поверхности слоя/слоев входят оптически прозрачная полимерная основа, содержащая органические и/или неорганические люминофор/люминофоры, имеющие флуоресценцию с положительным сдвигом Стокса, до 100 нм, и/или с аномально большим сдвигом Стокса, свыше 100 нм, и/или люминофоры, имеющие антистоксовую флуоресценцию, т.е.
Изобретение относится к области создания визуальных эффектов. Способ создания стабильного и долговременного художественного визуального эффекта диффузного свечения поверхности художественно-архитектурного объекта под воздействием внешнего возбуждающего УФ-А (365-385 нм) и/или ИК-А (760-1000 нм) излучения включает нанесение нескольких оптически прозрачных полимерных слоев, в состав прилегающего к поверхности слоя/слоев входят оптически прозрачная полимерная основа, содержащая органические и/или неорганические люминофор/люминофоры, имеющие флуоресценцию с положительным сдвигом Стокса, до 100 нм, и/или с аномально большим сдвигом Стокса, свыше 100 нм, и/или люминофоры, имеющие антистоксовую флуоресценцию, т.е.

Изобретение относится к области генерации оптического излучения и касается способа получения фотолюминесценции отдельных центров окраски в алмазе. Способ включает в себя воздействие на алмазный образец возбуждающим излучением и сбор излучения центров окраски с лицевой поверхности образца с помощью оптической системы.

Изобретение относится к области генерации оптического излучения и касается способа получения фотолюминесценции отдельных центров окраски в алмазе. Способ включает в себя воздействие на алмазный образец возбуждающим излучением и сбор излучения центров окраски с лицевой поверхности образца с помощью оптической системы.

Изобретение относится к способу и датчику для проверки ценного документа, который перемещается относительно датчика. Датчик выполнен для одновременного обнаружения люминесценции в двух различных спектральных диапазонах на одном и том же месте обнаружения.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к виноградарству и селекции. В способе измеряют величину фотохимической активности тканей растений.

Изобретение относится к экологии, лимнологии, океанологии и может быть использовано в качестве устройства для проведения in situ исследований антропогенной загрязненности природных акваторий с морской и пресной водой.

Изобретение относится к экологии, лимнологии, океанологии и может быть использовано в качестве устройства для проведения in situ исследований антропогенной загрязненности природных акваторий с морской и пресной водой.

Изобретение относится к области технической физики и касается способа определения ориентации квантовых систем в кристаллах. Способ включает в себя возбуждение фотолюминесценции квантовых систем образца излучением, волновой вектор которого ориентирован перпендикулярно оптической оси кристалла, ее регистрацию с пространственным разрешением вдоль волнового вектора, измерение глубины пространственной модуляции интенсивности люминесценции. Направление наблюдения люминесценции выбирают перпендикулярным оптической оси и волновому вектору. Вращая образец относительно оптической оси, находят его положение, в котором глубина модуляции равна нулю, и фиксируют это направление. Затем образец поворачивают относительно оптической оси в положение, соответствующее максимуму глубины модуляции люминесценции, и в этом положении измеряют зависимость глубины модуляции от угла между оптической осью кристалла и направлением электрического вектора возбуждающего излучения. Находят величину угла, соответствующего максимуму этой зависимости, и по этой величине с помощью градуировочного графика определяют угол ориентации квантовых систем по отношению к оптической оси кристалла. Технический результат заключается в обеспечении возможности однозначного определения ориентации квантовых систем в одноосных кристаллах. 8 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для подготовки эритроцитов при проведении метода флуоресцентной in situ гибридизации. Для этого полученную от пациента кровь трехкратно отмывают центрифугированием при 1000 обмин в фосфатно-солевом буфере с рН 7,4 в течение 5 мин. Затем доводят до одномиллионной концентрации клеток в миллилитре. После чего пробу объемом 1 мл осаждают центрифугированием при 1000 обмин в течение 5 мин. Ресуспендируют в 400 мкл 0,5 раствора глутарового альдегида и фиксируют в течение 30 мин при 25°С. Фиксированные эритроциты промывают фосфатно-солевым буфером с рН 7,4. Затем снова ресуспендируют в растворах этанола с восходящей концентрацией 50, 80 и 100 по 400 мкл каждого раствора с последующей инкубацией в течение 10 мин при 4°С. Затем эритроциты снова промывают в фосфатно-солевом буфере с рН 7,4 центрифугированием при 1000 обмин в течение 5 мин и ресуспендируют в 300 мкл дистиллированной воды. Изобретение позволяет выделить эритроциты из исследуемых образцов крови без изменения их размера и формы с сохранением четко выраженных границ клеток и центральной впадины диска и выявить бактерии на поверхности и внутри эритроцитов при проведении диагностики септических состояний пациентов. 4 ил., 2 пр., 1 табл.

Наверх