Способ получения биопрепарата для обработки растений

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Способ предусматривает культивирование штамма мицелиального гриба Trichoderma asperellum OPF-19 (регистрационный номер ВКПМ: F-1323) на жидкой питательной среде, содержащей источники всех необходимых элементов питания, в условиях постоянного перемешивания и аэрации до максимального конидиеобразования и автолиза мицелия. При этом культивирование проводят последовательно в ферментерах с 10-кратным увеличением объема. В финишном ферментере после 20-24 ч культивирования увеличивают аэрацию, а после истощения источника углерода увеличивают скорость перемешивания и продолжают культивирование до максимального конидиеобразования и автолиза мицелия. По окончании культивирования осуществляют розлив продукта через фильтр из нейлоновой сетки с диаметром отверстий 0,2-0,5 мм с получением жидкого биопрепарата. Изобретение позволяет увеличить срок хранения культуры и повысить урожайность сельскохозяйственной культуры. 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии, в частности к производству биопрепаратов на основе живых микроорганизмов.

Биологические препараты для растениеводства привлекают к себе все больше внимания со стороны производителей сельскохозяйственной продукции, и их рынок с каждым годом постепенно растет. Низкий рост потребления биотехнологических продуктов такого рода связан не только с определенной «непредсказуемостью» эффекта от использования живых организмов, но и с многими проблемами их промышленного производства и получения товарной формы, удобной для практического применения, особенно при полностью механизированной обработке посевного материала и самих растений в период вегетации на больших площадях сельскохозяйственных угодий.

В настоящее время выделено и описано очень большое число штаммов микроорганизмов, которые могли бы стать основой для биоудобрений, биофунгицидов, биоинсектицидов; многие микробы обладают комплексной биологической активностью по отношению к растениям, но способы получения биопрепаратов для подавляющего большинства из них не разработаны. В этом плане технологии получения биопрепаратов как в жидкой, так и в сухой форме на основе бактерий проработаны лучше, чем аналогичных продуктов на основе мицелиальных грибов. Это объясняется биологией и особенностями жизненного цикла микромицетов, являющихся более высокоорганизованными организмами, по сравнению с бактериями. Поэтому технологические подходы для массового культивирования и наработки биомассы, успешно применяемые для бактерий, не всегда могут быть использованы с той же эффективностью при работе с грибами. При этом отказываться от производства биопрепаратов на основе микроскопических грибов нецелесообразно, так как они в ряде случаев оказываются более эффективными, например, в условиях кислых почв. Давно и с успехом применяются для защиты растений от фитопатогенных микроорганизмов и повышения их продуктивности различные представители рода Trichoderma.

Известен способ производства микробиологических препаратов (Патент РФ №2077204, опубл. 20.04.1997), предусматривающий подготовку посевной культуры микроорганизмов из штамма-продуцента и питательной среды, содержащей водорастворимые углеводы, источник органического азота, соли и воду, внесение посевной культуры в питательную среду, ее культивирование и выделение продукта из культуральной жидкости, отличающийся тем, что питательная среда содержит не менее 2 мас. водорастворимых углеводов и не менее 0,005 мас. аминного азота, при этом общее количество углеводов не превышает 18 мас., а общий азот составляет не более 2,7 мас., при этом возможно использование микроорганизмов видов Trichoderma lignorum, Trichoderma harzianum, Trichoderma koningii и смешение культуральной жидкости с созревающим или зрелым биогумусом. Недостатком этого способа является низкий титр получаемых продуктов на основе грибов рода Trichoderma - всего 1-2×107 спор/г, и необходимость введения в культуральную жидкость в процессе или по завершении культивирования дополнительных компонентов, таких как зрелый или созревающий биогумус, стерилизация которого является проблематичной, а отказ от нее приведет к неопределенному микробиологическому составу конечного продукта.

Известен способ защиты растений огурца и томата от фитопатогенов (Патент РФ №2094991, опубл. 10.11.1997) путем обмазки их пастообразным препаратом триходермина на основе гриба Trichoderma harzianum, штамм ВКМ Р-2477Д. Способ получения указанного препарата предполагает выращивание микромицета на увлажненных зернах ячменя или пшеницы в бутылях или банках в течение 5-7 суток, сушку и размол биопрепарата на шаровой мельнице с последующим смешением полученного порошка с водой и карбоксиметилцеллюлозой для получения препарата пастообразной консистенции. Недостатком этого способа является нетехнологичность получения культуры штамма, неизвестный титр препарата, ограниченность применения из-за пастообразной консистенции конечного продукта.

Известен штамм гриба Nectria Pityrodes Montagne, используемый в качестве биофунгицида (варианты), биофунгицид, способ его получения (варианты), способ подавления грибковой инфекции у растений, метод скрининга фунгицидных микроорганизмов (Патент РФ №2154381, опубл. 20.08.2000). Способ получения биопрепарата предполагает по одному из вариантов культивирование гриба в жидкой питательной среде в колбах Эрленмейера 7-12 дней, отделение биомассы и смешение ее с твердым сухим носителем или, по другому варианту, твердофазное культивирование гриба в течение 20 дней. В любом случае после окончания культивирования препарат необходимо высушивать и размалывать до порошкообразного состояния. Недостатком этого способа является низкий титр продукта (107 КОЕ/г), нетехнологичность этапа сушки при комнатной температуре в стерильной атмосфере, требующей при промышленном производстве специально оборудованных больших площадей.

Известен препарат для защиты растений от болезней (Патент РФ №2170511, опубл. 20.07.2001), содержащий активное начало на основе штамма гриба Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray 16 ЦКМ F-59M, карбоксиметилцеллюлозу и соли магния. Способ получения предполагает глубинное культивирование штамма в течение 40 часов до максимального накопления биомассы с последующим отделением остатков питательной среды сепарированием, смешением с карбоксиметилцеллюлозой в качестве прилипателя и хлористым магнием в качестве стабилизатора. Недостатком указанного способа является то, что биомасса штамма представлена в основном мицелием гриба, что требует введения в препарат дополнительных компонентов для получения приемлемой препаративной формы, а также ограничивает срок хранения препарата. Кроме того, неизвестен титр и расходные нормы получаемого продукта.

Известен штамм микромицета Trichoderma viride, шт. 23, обладающий фунгицидными свойствами для получения комплексного биопрепарата со свойствами фунгицида и бактериального удобрения, способ получения комплексного биопрепарата, комплексный биопрепарат со свойствами фунгицида и бактериального удобрения. Способ получения такого биопрепарата предполагает совместное культивирование Trichoderma viride, шт. 23 и Azotobacter chroococcum на твердом субстрате - свекловичном жоме с питательными добавками и микроэлементами. Недостатком данного способа является то, что получаемый в результате его осуществления продукт имеет неопределенную препаративную форму, что ограничивает способы его применения разбрасыванием и поливом при разведении водой. Кроме того, неизвестен срок хранения препарата.

Известен биопрепарат для борьбы с фитопатогенными грибами, возбудителями сосудистых болезней и корневых гнилей растений на основе (Gliocladium catenulatum Gilmann et Abbott ГНУ ВНИИСХМ Россельхозакадемии D 553 (Патент РФ №2327736, опубл. 27.06.2008) и способы глубинного (Патент РФ №2309589) и твердофазного получения препарата (Патент РФ №2309590, опубл. 10.11.2007). Способ глубинного получения биопрепарата включает выращивание гриба Gliocladium catenulatum путем выращивания посевного материала, инокулюма и биомассы гриба с дальнейшим глубинным выращиванием указанной биомассы в ферментерах в течение 72 часов, после чего в культуральную жидкость добавляют наполнители мел и вермикулит, биомассу с наполнителями сепарируют, сушат и размалывают. Способ твердофазного получения препарата отличается от вышеописанного тем, что после наработки биомассы в ферментере следует этап доращивания этой биомассы в течение 5-7 суток на твердом субстрате, в качестве которого выступает смесь вермикулита с отрубями, увлажненная раствором солей. В результате получают препарат с титром 1-5×108 конидий/г в зависимости от способа получения. К недостаткам описанных способов можно отнести то, что получаемый в результате их осуществления продукт имеет ограниченные возможности для применения, в частности не предназначен для опрыскивания вегетирующих растений. Недостатком способа глубинного получения препарата также является исключение из состава препарата среды культивирования на этапе сепарирования, в результате чего продукт оказывается лишен ценных метаболитов гриба с росторегулирующими и фунгицидными свойствами. Недостатком способа твердофазного получения препарата является длительный период культивирования гриба сначала на жидком, а затем на твердом субстрате.

Известен самоконсервирующийся биопрепарат для защиты растений от болезней (варианты) и способ его получения (варианты) (Патент РФ №2380906, опубл. 10.02.2010). Способ получения заключается в том, что культивируют штамм гриба-антагониста родов Trichoderma или Gliocladium в жидкой среде и концентрируют полученную биомассу, отличающийся тем, что культивирование проводят в течение 20-48 часов до получения биомассы гриба в вегетативной форме, к концентрированной биомассе добавляют, по крайней мере, одно вещество, способствующее спорообразованию и обеспечивающее переход вегетативной формы грибов-антагонистов в споровую форму в ходе хранения препарата, которое осуществляют при доступе воздуха, в качестве которого используют органическую или неорганическую кислоту, создающую рН среды от 2,0 до 5,0, и/или ингибитор клеточного метаболизма, и/или сорбент. Недостатком указанного способа является то, что в процессе хранения препарат подвергается слабо контролируемым изменениям, в результате чего потребительские качества конечного продукта оказываются непредсказуемыми. Кроме того, неизвестен срок хранения до применения, требуемый для приобретения препаратом достаточного количества поверхностных конидий. Также не совсем понятна препаративная форма получаемого продукта, расходные нормы и способы применения.

Известен способ получения биологического средства для защиты растений от фитопатогенов и нематод на основе штамма гриба рода Trichoderma и биологическое средство, полученное способом (Патент РФ №2534213, опубл. 27.11.2014). Способ включает приготовление посевного материала штамма гриба рода Trichoderma, приготовление препарата в жидкой либо сыпучей форме на основе посевного материала, а также перемешивание препарата с минеральным, органическим или бактериальным удобрением, в результате чего получают биологическое средство. Получение биопрепарата в жидкой форме осуществляют либо с помощью глубинного культивирования гриба в ферментере, либо посредством смыва водой поверхностных конидий, полученных при твердофазном культивировании гриба. В первом случае недостатком способа является то, что получаемый продукт представляет собой смесь мицелия, покоящихся структур и метаболитов, что из-за присутствия мицелия ограничивает сроки хранения и возможности применения препарата. Получение жидкого препарата путем смыва поверхностных конидий, образуемых грибом при росте на твердом субстрате, нетехнологично. Вариант получения биопрепарата, предполагающий твердофазное получение культуры гриба, также не технологичен, поскольку предполагает наработку биомассы в емкостях типа стеклянных бутылей. Кроме того, получаемые по указанным вариантам способов продукты могут существенно отличаться по титру в зависимости от партии (разброс 106-109 КОЕ/мл), что не может не сказываться на эффективности их применения. Также указано, что для роста культур и эффективной реализации технического результата препарата на основе штаммов гриба рода Trichoderma необходимо использование в составе средства минеральных, органических и бактериальных удобрений, что ставит под сомнение эффективность самого штамма-продуцента.

Прототипом заявленного изобретения можно считать способ получения триходермина (Патент РФ №2035145, опубл. 20.05.1995) в жидкой форме путем глубинного культивирования микроскопических грибов Trichoderma lignorum на питательной среде, содержащей источники углерода, органического азота, фосфаты, сернокислый магний, азотнокислый аммоний и воду, до максимального накопления мицелиальной массы или спорообразования с последующим концентрированием культуральной жидкости до содержания сухих веществ 6-10% и введением в концентрат 4-10 мас. глицерина и 0,1-1,0 мас. полиэтиленоксида или 1-3 мас. поливинилпирролидона. Недостатком способа-прототипа является необходимость этапа концентрирования биомассы, в результате чего теряется часть питательной среды с биологически активными метаболитами гриба, наличие в получаемом продукте мицелия гриба, что существенно снижает срок хранения препарата и ограничивает способы его применения, а также необходимость добавления в препарат дорогостоящего компонента поливинилпирролидона.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа получения жидкого биопрепарата на основе представителя рода Trichoderma. Достигаемый технический результат - получение эффективного жидкого биопрепарата на основе штамма гриба Trichoderma, в котором практически отсутствует мицелий гриба, а действующим началом являются покоящиеся структуры - конидии, что улучшает потребительские качества и расширяет возможности его применения, так как в этом случае биопрепарат представляет собой мелкодисперсную суспензию, которую возможно применять в том числе для ручного и механизированного опрыскивания вегетирующих растений и пожнивных остатков, не опасаясь закупоривания форсунок опрыскивателей; кроме того, срок хранения биопрепарата увеличивается до 9 месяцев при температуре +4-+10°C.

Данный технический результат достигается тем, что в качестве действующего начала биопрепарата используется штамм Trichoderma asperellum OPF-19 (регистрационный номер ВКПМ: F-1323), культивирование которого осуществляют глубинным способом в ферментере, индуцируя в определенный момент образование конидий посредством усиления аэрации культуральной жидкости, доводят процесс до максимального выхода конидий и автолиза мицелия, после чего разливают препарат по канистрам, используя в качестве фильтра нейлоновую сетку с диаметром отверстий 0,2-0,5 мм.

Способ получения биопрепарата заключается в следующем. Первоначально культуру гриба выращивают в пробирках на скошенном картофельно-глюкозном агаре при 27°C в течение 7 суток. За это время T. asperellum OPF-19 формирует зрелые поверхностные конидии, полностью покрывающие скошенную поверхность среды, благодаря чему культуру можно использовать в качестве посевного материала в течение года при условии ее хранения при +4°C. Далее готовят маточную культуру, для чего в пробирку с посевным материалом наливают 8-10 мл стерильного физиологического раствора или стерильной воды, делают смыв и распределяют его по колбам с полусинтетической питательной средой следующего состава (г/л): дрожжевой экстракт - 7, патока, или меласса, или гидрол, или солодовый экстракт - 20, NaNO3 - 2, K2HPO4 - 1, MgSO4 - 0,5, KCl - 0,5, FeSO4 - 0,01, pH перед стерилизацией доводят до 7,5. Маточную культуру выращивают при 27°C на качалке с круговым типом перемешивания в течение 18-24 часов. За это время большая часть конидий прорастает, мицелий начинает активно развиваться, но уплотненных мицелиальных агрегатов не образуется. Затем маточной культурой засевают стартовый ферментер в количестве 10% от объема питательной среды, культивируют при 27°C, аэрации 0,6-0,8 л воздуха на 1 л питательной среды в минуту и скорости перемешивания 200 об/мин в 20-24 часов, не достигая максимального накопления биомассы и полного истощения источника углерода. После этого культуру переливают в следующий ферментер, объем которого больше объема предыдущего в 10 раз, в количестве 10% от объема питательной среды и культивируют таким же образом. Аналогичным образом поступают с культурой во всех промежуточных ферментерах в линии, вплоть до финишного ферментера, в котором скорость перемешивания в первые 20-24 часа поддерживается на уровне около 100 об/мин, а после первых 20-24 часов культивирования вначале увеличивают аэрацию до 1-1,2 л воздуха на 1 л питательной среды в минуту, индуцируя и поддерживая таким образом процесс конидиеобразования, а после истощения источника углерода увеличивают скорость перемешивания до 110-150 об/мин, что обеспечивает усиление механической фрагментации мицелия и способствует его автолизу. Более низкие скорости перемешивания в финишном ферментере связаны исключительно с конструкционными особенностями больших ферментеров объемом от 1 м3 и выше, которые определяют возможности их эксплуатации. Культивирование в таких условиях продолжают еще 50-55 часов до максимального накопления конидий и автолиза мицелия. Поскольку полного автолиза мицелия в культуре не происходит, в разливочный шланг помещается магистральный фильтр из нейлоновой сетки с диаметром отверстий 0,2-0,5 мм, которая эффективно задерживает остатки мицелия и позволяет разлить, не закупориваясь, не менее 3 м3 продукта. Поскольку препарат представляет собой суспензию конидий в культуральной жидкости, введение дополнительных компонентов для стабилизации биомассы или увеличения сроков хранения не требуется. При хранении препарата прорастания конидий не происходит, так как в культуральной жидкости не остается легкодоступных растворенных сахаров. Титр получаемого препарата составляет 1-3×108 конидий/мл.

Эффективность получаемого по предлагаемому способу биопрепарата иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1

Испытания эффективности биопрепарата, полученного по предлагаемому способу, проводили в мелкоделяночном эксперименте на растениях ярового ячменя сорта Раушан в Лаишевском районе республики Татарстан на опытных полях ФГБНУ ТатНИИСХ в 2016 году. Схема обработки растений была следующей:

Вариант Норма применения
1. Биопрепарат, полученный по предлагаемому способу 0,5 л/т + 1 л/га + 1/га протравливание + опрыскивание
2. Фитоспорин-M, Ж (стандарт) 1,5 л/т + 1,5 л/га + 1,5 л/га протравливание + опрыскивание
3. Контроль (без обработки) - -

Оценивали эффективность биопрепарата против корневых гнилей растений на различных этапах вегетации, а также влияние на урожайность растений. Результаты представлены в таблице 1.

Приведенные результаты свидетельствуют об эффективности применения нового биопрепарата, полученного по предлагаемому способу, в качестве средства, сдерживающего развитие корневых гнилей ярового ячменя и повышающего его урожайность.

Пример 2.

Эффективность биопрепарата, полученного по предлагаемому способу, проверяли в мелкоделяночном опыте на кукурузе сорта Краснодарский 377 АМВ (F1) в Краснодарском крае на опытных полях ВНИИБЗР в 2016 году.

Схема обработки растений была следующей:

Вариант Норма применения
1. Биопрепарат, полученный по предлагаемому способу 1 л/т + 1 л/га + 1/га протравливание + опрыскивание
2. Фитоспорин-M, Ж (стандарт) 10 таб./т + 100 таб./га + 100 таб./га протравливание + опрыскивание
3. Контроль (без обработки) - -

Оценивали влияние биопрепарата на урожайность и элементы структуры урожая. Результаты представлены в таблице 2.

Согласно приведенным данным биопрепарат на основе T. asperellum OPF-19, получаемый по предлагаемому способу, способствует существенному увеличению массы зерна кукурузы, обусловливая таким образом повышение урожайности данной культуры.

1. Способ получения биопрепарата для обработки растений, включающий культивирование штамма гриба Trichoderma asperellum OPF-19, регистрационный номер ВКПМ F-1323, на жидкой питательной среде, содержащей источники всех необходимых элементов питания, в условиях аэрации и перемешивания, которое проводят последовательно в ферментерах с 10-кратным увеличением объема, при этом в финишном ферментере после первых 20-24 часов культивирования увеличивают аэрацию до 1-1,2 л воздуха на 1 л питательной среды в минуту, а затем, после истощения источника углерода, увеличивают скорость перемешивания до 110-150 об/мин и продолжают культивирование в течение 50-55 ч до максимального накопления конидий и автолиза мицелия, после чего осуществляют розлив продукта с использованием разливочного шланга с вмонтированным магистральным фильтром из нейлоновой сетки с диаметром отверстий 0,2-0,5 мм, предотвращающий попадание остатков мицелия в продукт.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что выращивание маточной культуры и последующие культивирования во всех ферментерах, кроме финишного, проводят в течение 20-24 часов, не достигая максимального накопления биомассы и истощения источника углерода.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биохимии и биотехнологии, в частности к рекомбинантной плазмидной ДНК pET15/N-Dest+. Указанная плазмидная ДНК предназначена для экспрессии в клетках Escherichia coli гена дестабилазы медицинской пиявки Hirudo medicinalis.
Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены способ получения биосорбента и биосорбент для очистки воды от углеводородных загрязнений.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм базидиомицета Laetiporus sulphureus МТ-11.01, обладающий способностью продуцировать липиды в условиях погруженного культивирования, депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ГосНИИгенетика под номером ВКПМ F-1286.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен микросенсор и способ для определения концентрации клеток плесневых грибов в водных и воздушных средах, а также способ получения данного микросенсора.

Группа изобретений относится к вариантам дрожжевой клетки рода сахаромицетов, способной к размножению в аэробных условиях на субстрате, содержащем по меньшей мере один C5-сахар, и применению такой клетки.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Штамм Gluconacetobacter intermedius, продуцирующий бактериальную целлюлозу, депонирован в Национальном Институте передовой промышленной науки и технологии (Япония) под регистрационным номером SIID 9587.
Изобретение относится к микробиологии. Диагностическая питательная среда для дифференциации возбудителя сибирской язвы по капсуло- и токсинообразованию содержит сухой питательный бульон, дрожжевой экстракт, NaCl, агар-агар, L-аланин, инозин, 20 %-ный раствор D-сорбита, 1,6% раствор бромтимолового синего, 10%-ный раствор натрия двууглекислого, полимиксина сульфат, сыворотку крупного рогатого скота и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов.
Изобретение относится к биотехнологии. Способ предусматривает раздельное глубинное культивирование штаммов Bacillus subtilis ВКПМ В-8130, Bacillus subtilis ВКПМ В-2984, Bacillus licheniformis ВКПМ В-4162, Bacillus megaterium ВКПМ В-204 и Lactobacillus plantarum ВКПМ В-5337 на питательных средах заданного состава.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения лакокрасочного водоразбавляемого материала с биоцидными свойствами.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ снижения содержания селена в биомассе после ферментации содержащего СО газообразного субстрата.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм базидиомицета Laetiporus sulphureus МТ-11.01, обладающий способностью продуцировать липиды в условиях погруженного культивирования, депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ГосНИИгенетика под номером ВКПМ F-1286.

Предложены штамм мицелиального гриба Trichoderma Longibrachiatum TW-14-220T - продуцент комплекса ферментов эндоглюканаз, бета-глюканаз и ксиланаз, разрушающих некрахмальные полисахариды, и способ получения кормового ферментного препарата с использованием штамма мицелиального гриба Trichoderma longibrachiatum TW-14-220T.

Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к генетической конструкции для обеспечения экспрессии целевых гомологичного и гетерологичного генов в клетках реципиентного гриба Penicillium verruculosum.

Изобретение относится к биотехнологии, прикладной микробиологии и может быть использовано для получения эфирного масла. Предложен штамм гриба Eremothecium gossypii ВКПМ F-1321, являющийся продуцентом эфирного масла, аналогичного розовому маслу крымского происхождения.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения биопестицидного препарата предусматривает глубинное и/или глубинно-поверхностное культивирование штамма Beauveria bassiana (ВКПМ F-145) на питательной среде, содержащей пивную барду или смесь молочной сыворотки и пивной барды, а также минеральный комплекс и дизельное топливо или Твин-80 и воду при заданном соотношении компонентов, с последующим концентрированием культуральной жидкости до показателя не менее 107 КОЕ/мл и получением препарата в сухой форме путем высушивания препарата на носителе.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к переработке биомассы. Предложен способ получения фермента.

Изобретение относится к области лесного хозяйства и биоиндикации, в частности к оценке содержания элементов группы тяжелых металлов в атмосферном воздухе по степени их накопления слоевищами эпифитных лишайников.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения лакказ предусматривает погружное культивирование Rhizoctonia solani F-895 в минеральной питательной среде с добавлением в качестве натурального источника углерода и энергии по крайней мере одного компонента, выбранного из ряда: белокочанная капуста, горох, фасоль, картофель, томатная паста, до получения максимальной активности лакказ в культуральной жидкости с последующим отделением культуральной жидкости от мицелия центрифугированием.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Eremothecium ashbyi Guill.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен рекомбинантный штамм мицелиального гриба Penicillium canescens СL14 ВКМ F-4706D, продуцирующий бактериальную термофильную целлюлазу Cel5L из Clostridium thermocellum с молекулярной массой 48 кДа.

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Пестицидная синергическая смесь содержит в качестве активных компонентов:2) одно инсектицидное соединение IB, выбранное из группы, состоящей изМ-3 модуляторов каналов переноса для ионов натрия из класса пиретроидов: акринатрин, аллетрин, д-цис-транс аллетрин, д-транс аллетрин, бифентрин, биоаллетрин, биоаллетрин S-циклопентенил, биоресметрин, циклопротрин, цифлутрин, бета-цифлутрин, цигалотрин, лямбда-цигалотрин, гамма-цигалотрин, циперметрин, альфа-циперметрин, бета-циперметрин, тета-циперметрин, зета-циперметрин, цифенотрин, дельтаметрин, момфтортрин, эмпентрин, эсфенвалерат, этофенпрокс, фенпропатрин, фенвалерат, флуцитринат, флуметрин, тау-флувалинат, галфенпрокс, имипротрин, меперфлутрин, метофлутрин, перметрин, фенотрин, праллетрин, профлутрин, пиретрин (пиретрум), ресметрин, силафлуофен, тефлутрин, тетраметилфлутрин, тетраметрин, тралометрин, трансфлутрин, DDT и метоксихлор;М-23 ингибиторов митохондриального переноса электронов II комплекса: циенопирафен, цифлуметофен или пифлубумид; иМ-24 модуляторов рианодиновых рецепторов из класса диамидов: флубендиамид, хлорантранилипрол (ринаксипир), циантранилипрол (циазипир),(R)-3-хлор-N1-{2-метил-4-[1,2,2,2-тетрафтор-1-(трифторметил)этил]фенил}-N2-(1-метил-2-метилсульфонилэтил)фталамид, (S)-3-хлор-N1-{2-метил-4-[1,2,2,2-тетрафтор-1-(трифторметил)этил]фенил}-N2-(1-метил-2-метилсульфонилэтил)фталамид, 3-бром-N-{2-бром-4-хлор-6-[(1-циклопропилэтил)карбамоил]фенил}-1-(3-хлорпиридин-2-ил)-1Н-пиразол-5-карбоксамид, метил-2-[3,5-дибром-2-({[3-бром-1-(3-хлорпиридин-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил]карбонил}амино)бензоил]-1,2-диметилгидразинкарбоксилат, N2-[2-(3-хлор-2-пиридил)-5-[(5-метилтетразол-2-ил)метил]пиразол-3-ил]-5-циано-N1,3-диметил-фталамид, N2-(1-циано-1-метилэтил)-N1-(2,4-диметилфенил)-3-йод-фталамид, 3-хлор-N2-(1-циано-1-метилэтил)-N1-(2,4-диметилфенил), 2-(3-хлор-2-пиридил)-N-[4-циано-2-метил-6-(метилкарбамоил)фенил]-5-[[5-(трифторметил)тетразол-2-ил]метил]пиразол-3-карбоксамид, N-[2-(трет-бутилкарбамоил)-4-хлор-6-метилфенил]-2-(3-хлор-2-пиридил)-5-(фторметокси)пиразол-3-карбоксамид, 5-бром-N-[2,4-дихлор-6-(метилкарбамоил)фенил]-2-(3,5-дихлор-2-пиридил)пиразол-3-карбоксамид, 5-хлор-2-(3-хлор-2-пиридил)-N-[2,4-дихлор-6-[(1-циано-1-метилэтил)карбамоил]фенил]пиразол-3-карбоксамид, N-[2-(5-амино-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-4-хлор-6-метилфенил]-5-бром-2-(3-хлор-2-пиридил)пиразол-3-карбоксамид;М-25 других: афидопиропен, 2-(5-этилсульфинил-2-фтор-4-метилфенил)-5-метил-1,2,4-триазол-3-амин, 1-(5-этилсульфинил-2,4-диметилфенил)-3-метил-1,2,4-триазол, трифлумезопирим, 8-хлор-N-[2-хлор-5-метоксифенил)сульфонил]-6-трифторметил)-имидазо[1,2-а]пиридин-2-карбоксамид, 5-[3-[2,6-дихлор-4-(3,3-дихлораллилокси)фенокси]пропокси]-1Н-пиразол, N-[1-[(6-хлор-3-пиридил)метил]-2-пиридилиден]-2,2,2-трифтор-ацетамид, N-[1-[(6-хлор-3-пиридил)метил]-2-пиридилиден]-2,2,3,3,3-пентафтор-пропанамид, N-[1-[(6-бром-3-пиридил)метил]-2-пиридилиден]-2,2,2-трифтор-ацетамид, N-[1-[(2-хлорпиримидин-5-ил)метил]-2-пиридилиден]-2,2,2-трифтор-ацетамид, N-[1-[(6-хлор-5-фтор-3-пиридил)метил]-2-пиридилиден]-2,2,2-трифтор-ацетамид, 2,2,2-трифтор-N-[1-[(6-фтор-3-пиридил)метил]-2-пиридилиден]ацетамид, 2-хлор-N-[1-[(6-хлор-3-пиридил)метил]-2-пиридилиден]-2,2-дифтор-ацетамид, N-[1-[1-(6-хлор-3-пиридил)этил]-2-пиридилиден]-2,2,2-трифтор-ацетамид, N-[1-[(6-хлор-3-пиридил)метил]-2-пиридилиден]-2,2-дифтор-ацетамид; 11-(4-хлор-2,6-диметилфенил)-12-гидрокси-1,4-диокса-9-азадиспиро[4.2.4.2]-тетрадец-11-ен-10-он, 3-(4'-фтор-2,4-диметилбифенил-3-ил)-4-гидрокси-8-окса-1-азаспиро[4.5]дец-3-ен-2-он, 2-(5-фтор-3-пиридил)-5-(6-пиримидин-2-ил-2-пиридил)тиазол гидрофторид, 2-(3-пиридил)-5-(6-пиримидин-2-ил-2-пиридил)тиазол, 5-[6-(1,3-диоксан-2-ил)-2-пиридил]-2-(3-пиридил)тиазол, 4-[5-[3-хлор-5-(трифторметил)фенил]-5-(трифторметил)-4Н-изоксазол-3-ил]-N-[2-оксо-2-(2,2,2-трифторэтиламино)этил]нафталин-1-карбоксамид, 4-[5-(3,5-дихлорфенил)-5-(трифторметил)-4Н-изоксазол-3-ил]-2-метил-N-[2-оксо-2-(2,2,2-трифторэтиламино)этил]бензамид, 4-[5-(3,5-дихлорфенил)-5-(трифторметил)-4Н-изоксазол-3-ил]-2-метил-N-(1-оксотиэтан-3-ил)бензамид, метальдегид;и4) Beauveria bassiana PPRI 5339 в качестве соединения II.

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Способ предусматривает культивирование штамма мицелиального гриба Trichoderma asperellum OPF-19 на жидкой питательной среде, содержащей источники всех необходимых элементов питания, в условиях постоянного перемешивания и аэрации до максимального конидиеобразования и автолиза мицелия. При этом культивирование проводят последовательно в ферментерах с 10-кратным увеличением объема. В финишном ферментере после 20-24 ч культивирования увеличивают аэрацию, а после истощения источника углерода увеличивают скорость перемешивания и продолжают культивирование до максимального конидиеобразования и автолиза мицелия. По окончании культивирования осуществляют розлив продукта через фильтр из нейлоновой сетки с диаметром отверстий 0,2-0,5 мм с получением жидкого биопрепарата. Изобретение позволяет увеличить срок хранения культуры и повысить урожайность сельскохозяйственной культуры. 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

Наверх