Способ определения концентрации пептидов в суппозиториях

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно анализу фармацевтических препаратов, и может быть использовано для количественного определения содержания биорегуляторных пептидов в суппозиториях на основе полиэтиленгликоля (ПЭГ). Для этого суппозитории измельчают и растворяют в физиологическом растворе при нагревании на водяной бане до температуры не выше 70°С. Затем из полученного водного раствора экстрагируют ПЭГ органическим растворителем, в качестве которого могут быть использованы бензол, хлороформ, метиленхлорид, ацетонитрил, четыреххлористый углерод или диметилформамид. Содержание пептидов в водной фазе определяют спектрофотометрически при длине волны 750 нм относительно стандартного раствора альбумина. Изобретение обеспечивает повышение точности количественного определения содержания биорегуляторных пептидов в суппозиториях. 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 1 пр.

 

Заявляемое изобретение относится к измерениям и испытаниям, в частности к получению и подготовке образцов пептидов для количественного определения их содержания в суппозиториях.

Комплекс биорегуляторных пептидов, выделяемых из семенников крупного рогатого скота (молодых бычков), применяется как средство для лечения заболеваний предстательной железы как в виде раствора для инъекций и таблеток, так и (чаще всего) в форме суппозиториев. Суппозитории могут быть изготовлены на жировой основе или на водорастворимой полимерной, например на основе полиэтиленгликоля (ПЭГ). Производитель подвергает изготовленные суппозитории анализу на содержание лекарственного вещества, в данном случае - комплекса биорегуляторных пептидов, выделенных из семенников крупного рогатого скота.

Известен способ определения концентрации пептидов в суппозиториях, изготовленных с использованием носителя - полиэтиленгликоля, основанный на том, что пептиды нерастворимы в органических растворителях. Способ включает измельчение определенного количества суппозиториев, расплавление измельченной массы нагревом на водяной бане, экстракцию из расплава полиэтиленгликоля с помощью органического растворителя, например хлороформа, отделение пептидов фильтрованием, растворение осажденных на фильтре пептидов в воде и УФ-спектрофотометрическое определение их содержания [Фармакопейная статья предприятия ЛС-000925-04041].

Однако указанный способ дает существенный разброс результатов в параллельных пробах, что можно объяснить только тем, что пептиды и ПЭГ образуют связь (ПЭГелирование пептидов), в результате чего пептиды частично экстрагируются в органическую фазу из расплава вместе с ПЭГ, а это искажает результаты количественного определения (не выполняются критерии правильности и сходимости).

Результат, на достижение которого направлено заявляемое изобретение, заключается в повышении точности количественного определения содержания биорегуляторных пептидов в суппозиториях на основе ПЭГ.

Указанная цель достигается тем, что в способе определения концентрации биорегуляторных пептидов в суппозиториях, в которых носителем является полиэтиленгликоль (ПЭГ), включающем измельчение суппозиториев, экстракцию ПЭГ органическим растворителем и количественное определение пептидов в водной фазе методом УФ-спектрофотометрии, измельченные суппозитории предварительно растворяют в физиологическом растворе при нагревании на водяной бане до температуры не выше 70°С и экстрагируют ПЭГ органическим растворителем из полученного водного раствора.

В качестве органического растворителя, экстрагирующего ПЭГ из водного раствора, можно использовать бензол, метиленхлорид, хлороформ, ацетонитрил, четыреххлористый углерод и диметилформамид, преимущественно хлороформ и метиленхлорид.

Способ осуществляется следующим образом.

Тщательно измельчают 20 суппозиториев.

Около 3,8 г (точная навеска) измельченных суппозиториев помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 20 мл физиологического раствора (0,9%-ный раствор NaCl в воде), нагревают на водяной бане при температуре 70°С до расплавления основы, перемешивают и дают остыть до комнатной температуры. Доводят объем раствора до метки и плавно перемешивают, не допуская образования пены. В делительную воронку помещают 25 мл растворителя, например метиленхлорида, прибавляют испытуемый раствор и экстрагируют ПЭГ, используя шейкер, в течение 5 минут со скоростью 100 об/мин. После разделения слоев нижний органический слой отбрасывают. Далее в воронку прибавляют новую порцию метиленхлорида и повторяют экстракцию при тех же условиях еще 5 раз, каждый раз добавляя 25 мл метиленхлорида. Водный раствор сливают в мерную колбу вместимостью 50 мл, через фильтр «желтая лента», предварительно смоченный водой, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Содержание пептидов определяют спектрофотометрически при длине волны 750 нм относительно стандартного раствора альбумина.

В таблице приведены данные определения биорегуляторных пептидов в девяти пробах одной партии суппозиториев заявляемым способом; для сравнения в таблице приведены также данные испытаний девяти проб той же партии суппозиториев, выполненные в соответствии с Фармакопейной статьей предприятия ЛС-000925-04041.

Из представленных в таблице результатов анализа видно, что заявляемый способ определения биорегуляторных пептидов отличается большей точностью, поскольку при растворении суппозиториев в физиологическом растворе, по-видимому, происходит разрыв связей между пептидами и ПЭГ, и полное высвобождение пептидов позволяет определять их содержание с меньшим искажением и разбросом результатов.

1. Способ определения концентрации пептидов в суппозиториях, в которых носителем является полиэтиленгликоль (ПЭГ), включающий измельчение суппозиториев, экстракцию ПЭГ органическим растворителем и количественное определение пептидов в водной фазе методом УФ-спектрофотометрии, отличающийся тем, что измельченные суппозитории предварительно растворяют в физиологическом растворе при нагревании на водяной бане до температуры не выше 70°C и экстрагируют ПЭГ органическим растворителем из полученного водного раствора.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя берут растворитель, выбранный из группы, включающей бензол, хлороформ, метиленхлорид, ацетонитрил, четыреххлористый углерод и диметилформамид.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике дисахаридазной недостаточности. Для этого способ включает исследование мембранных ферментов, ответственных за переваривание лактозы, мальтозы, крахмала и сахара в ткани кишки.

Изобретение относится к области медицины и раскрывает способ определения активности перекисного окисления липидов в ногтевых пластинках живых людей. Способ включает механическое измельчение состриженных ногтевых пластинок живых людей, экстракцию раствором, содержащим фосфатный буфер (pH 7,4) и 96° этиловый спирт в соотношении 5:1 соответственно, диализ смеси, проведение хемилюминесцентного анализа получаемого экстракта, при котором определяют интенсивность быстрой вспышки (Ф max, отн.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается определения риска летальности при гнойно-септических инфекциях. Для этого проводят заражение кроликов путем подкожного введения взвеси бактерий P.

Изобретение относится к медицине и предназначено для определения исхода острого деструктивного панкреатита (ОДП). У больных с ОДП в первые сутки после постановки диагноза в нейтрофилах венозной крови больных с помощью биолюминесцентного метода определяют активности НАДФ- и НАДФН-зависимой глутаматдегидрогеназы, после чего рассчитывают соотношение активностей дегидрогеназ.

Группа изобретений относится к биотехнологии и медицине. Предложены композиция, набор и способ для обнаружения присутствия биопленки в жизнеспособных тканях.

Изобретение относится к медицине, в частности к дерматовенерологии, и представляет собой способ определения степени тяжести псориатической онихии, заключающийся в том, что ногтевые пластинки кистей обрабатывают смесью диэтиловый эфир - этанол в соотношении 1:1, состригают, измельчают, 30 мг измельченных ногтевых пластинок экстрагируют раствором, содержащим 5 мл фосфатного буфера с рН 7,4 и 1 мл 96° этилового спирта, выдерживают на кипящей водяной бане в течение 10 минут, фильтруют смесь через фильтровальную бумагу, затем проводят хемилюминесцентный анализ полученного экстракта с оцениванием интенсивности быстрой вспышки (Фmax, отн.

Группа изобретений относится к медицине и касается тест-системы для скрининга химических соединений на наличие ингибирующей активности в отношении PARP-1 на основе FRET-микроскопии единичных частиц (spFRET), представляющей собой смесь, включающую комплекс мононуклеосомы на нуклеосом-позиционирующей ДНК-матрице, меченной парой флуорофоров, формирующих донор-акцепторные пары для реализации эффекта FRET; белок PARP-1 и его субстрат - НАД+.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способа прогнозирования исхода люминального В и трижды негативного рака молочной железы у пациенток, не получавших в неоадъювантном режиме химио- или гормонотерапию.
Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для видовой идентификации микобактерий у пациентов, инфицированных микобактериями туберкулеза.

Изобретение относится к области биофизики, а именно к медицинской физики, и описывает способ прогнозирования эффективности химиотерапии у детей, больных острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ), в частности прогнозирования рисков возникновения лекарственной резистентности при проведении химиотерапии у пациентов с ОЛЛ с помощью исследования свойств биологических жидкостей физическими методами.

Изобретение относится к области гидродинамики жидкостей, в частности к способам оценки эффективности гидродинамического сопротивления углеводородных жидкостей, и может быть использовано при создании гидродинамических стендов для изучения углеводородных жидкостей и испытания присадок к ним, снижающих гидродинамическое сопротивление.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гемостазиологии, и предназначено для определения степени активации тромбоцитов на момент исследования, адгезии, агрегации и ретракции тромбоцитов с помощью низкочастотной пьезотромбоэластографии на аппаратно-программном комплексе для клинико-диагностических исследований реологических свойств крови АРП-01М «Меднорд».

Изобретение относится к гигиене труда и медицине, в частности к способам оценки эффективности проведенных медико-профилактических мероприятий по снижению профессионального риска здоровью, обусловленного артериальной гипертензией (АГ) у работников, занятых на выполнении подземных горных работ.
Изобретение относится к медицине и клинической биохимии и может быть использовано в лабораторной диагностике для определения циркулирующих модифицированных липопротеидов низкой плотности (цмЛПНП) с диагностическими и терапевтическими целями.

Изобретение относится к медицинской биотехнологии и может быть использовано в системах водообеспечения длительно функционирующих автономных гермозамкнутых космических и наземных обитаемых объектов.

Группа изобретений относится к обнаружению и мониторингу газов и паров в окружающем воздухе. Представлен сенсорный блок для обнаружения газа, снабженный герметичным измерительным каналом, газовым входом для ввода газа в измерительный канал, газовым выходом для вывода газа из измерительного канала и насосным блоком для создания разрежения в измерительном канале, при этом измерительный канал включает в себя датчик газа для обнаружения газа и нагревательный блок для нагревания датчика газа, при этом сенсорный блок выполнен с возможностью эксплуатации в измерительном режиме и в режиме регенерации, и при этом в режиме регенерации в измерительном канале создается разрежение и нагревается датчик газа.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается нового штамма вируса ящура Aphtae epizooticae типа О сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, депонированного в коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером штамм ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 (производственный), (контрольный КРС - К-КРС), (контрольный свиной - К-СВ).

Группа изобретений относится к биотехнологии и медицине. Предложены способы прогнозирования ответа субъекта-человека, страдающего, предположительно страдающего раком эндометрия, или с риском развития рака эндометрия, на терапию, включающую ленватиниб или его фармацевтически приемлемую соль (варианты).

Изобретение относится к нагревательному устройству для прибора для измерения методом спектрометрии. Данное нагревательное устройство отличается тем, что оно выполнено в виде мягкого оптического элемента (1), который включает в себя мягкую гибкую опору (10) с верхней стороной (10a) и нижней стороной (10b).
Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики миелодиспластического синдрома. В мононуклеарных фракциях клеток пациентов определяют экспрессию VEGF-A, VEGFR1 и VEGFR2.

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, в частности к способу получения препарата натуральных половых феромонов хряка. Способ включает измельчение и гомогенизацию семенников, корней пастернака посевного и сельдерея корневого, инкубирование полученной массы при температуре 37-39°C в течение 60 мин, добавление мочи половозрелых хряков, перемешивание и отжим в прессе с ячейками 0,7×0,7 мм.

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно анализу фармацевтических препаратов, и может быть использовано для количественного определения содержания биорегуляторных пептидов в суппозиториях на основе полиэтиленгликоля. Для этого суппозитории измельчают и растворяют в физиологическом растворе при нагревании на водяной бане до температуры не выше 70°С. Затем из полученного водного раствора экстрагируют ПЭГ органическим растворителем, в качестве которого могут быть использованы бензол, хлороформ, метиленхлорид, ацетонитрил, четыреххлористый углерод или диметилформамид. Содержание пептидов в водной фазе определяют спектрофотометрически при длине волны 750 нм относительно стандартного раствора альбумина. Изобретение обеспечивает повышение точности количественного определения содержания биорегуляторных пептидов в суппозиториях. 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 1 пр.

Наверх