Использование стволовых клеток, полученных из жировой ткани и выращенных ex-vivo, для косметического липофилинга молочной железы или липофилинга и/или омоложения лица


A61L2400/06 - Способы и устройства для стерилизации материалов и предметов вообще; дезинфекция, стерилизация или дезодорация воздуха; химические аспекты, относящиеся к бандажам, перевязочным средствам, впитывающим прокладкам, а также к хирургическим приспособлениям; материалы для бандажей, перевязочных средств, впитывающих прокладок или хирургических приспособлений (консервирование тел людей или животных или дезинфекция, характеризуемые применяемыми для этого веществами A01N; консервирование, например стерилизация пищевых продуктов A23; препараты и прочие средства для медицинских, стоматологических или гигиенических целей A61K; получение озона C01B 13/10).

Владельцы патента RU 2660561:

СТЕМФОРМ АПС (DK)

Изобретение относится к области косметологии и представляет собой способ получения композиции, содержащей стволовые клетки, полученные из жировой ткани (ASC), первичной культуры (Р0), выращенные ex-vivo, смешанные с отобранной жировой тканью, включающий: выращивание ASC ex-vivo из выделенной стромальной сосудистой фракции (SVF) в питательной среде, состоящей из модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM) или альфа-минимальной питательной среды (α-МЕМ), 1-5% пенициллин-стрептомицина, 1-5 МЕ/мл гепарина без консервантов и 2-20% объединенного человеческого тромбоцитарного лизата (pHPL), сбор указанных ASC в первичном пассаже (Р0) и смешивание указанных ASC с отобранной жировой тканью в соотношении 20×106 - 20×107 ASC/мл жира, а также композицию для применения в качестве агента для обогащенного стволовыми клетками липофилинга молочной железы или филинга стволовыми клетками молочной железы, косметический способ обогащенного стволовыми клетками липофилинга молочной железы или филинга стволовыми клетками молочной железы, косметический способ обогащенного стволовыми клетками липофилинга лица или филинга стволовыми клетками лица и косметический способ введения агента в кожу. Изобретение обеспечивает коррекцию объемных дефектов, а также увеличение существующего объема молочной железы и омоложение лица. 6 н.п. ф-лы.

 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к филингу мягких тканей с использованием стволовых клеток, полученных из жировой ткани и выращенных ex-vivo, или жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo. Они могут быть использованы для косметического филинга/увеличения молочной железы или для филинга и/или омоложения лица.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Коррекция объемных дефектов и увеличение существующего объема является актуальной проблемой в пластической хирургии. При коррекции дефектов объема или увеличении существующей ткани часто бывает необходимо использовать наполняющий материал, так называемый филлер или имплантат. Аутологическая жировая трансплантация (липофилинг) позволяет возмещать и увеличивать объем мягких тканей (например, косметическое увеличение молочной железы) и все чаще используется как в эстетической, так и в реконструктивной хирургии. Аутологическая жировая ткань рассматривается в качестве идеального наполнителя для увеличения объема мягких тканей, благодаря ее биосовместимости, универсальности, естественному виду, неиммуногенности, дешевизне и незатруднительному получению с низким уровнем осложнений со стороны донорского участка1, 2. Трансплантированный жировой трансплантат, однако, имеет непрогнозируемый и часто низкий показатель выживаемости, поэтому исследователи приложили усилия для поиска новых способов повышения его жизнеспособности. Исследование ксеногенного жирового трансплантата, обогащенного стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), у животных продемонстрировало валидность и воспроизводимость метода, в результате которого достигается увеличение остаточного объема трансплантата по сравнению с необогащенным аналогом3. Результаты недавнего исследования с участием людей продемонстрировали и подтвердили преимущества и поразительный эффект добавления ASC к жировому трансплантату для увеличения остаточного объема и лучшего качества трансплантированной ткани4.

В косметической индустрии растворы, пригодные для косметического филинга/омоложения лица, являются преимущественно искусственными (например, ботулинический токсин типа А, гиалуроновая кислота, коллаген, кальция гидроксилапатит, полимолочная кислота, микросферы полиметилметакрилат-метакрилата). Таким образом, из-за низкой гибкости и биосовместимости результаты часто оказываются неестественными. Искусственные наполнители разрушаются с течением времени с возможными нежелательными физическими побочными эффектами: от различных болезненных симптомов до косметологических дефектов. Аутологическая жировая ткань рассматривается в качестве идеального наполнителя, как описано выше. Тем не менее, исходы операции у пациентов, которым для филинга/омоложения лица применялся аутологический жир (т.е. без обогащения стволовыми клетками), могут в конечном итоге характеризоваться непропорциональностью, в связи с непрогнозируемым показателем выживаемости трансплантата.

Некоторые хирурги предлагают использование лучшего и более прогнозируемого трансплантата, который может быть получен путем добавления к трансплантату так называемой стромальной сосудистой фракции (SVF)5, 6. SVF представляет собой клеточный осадок, который образуется в процессе отбора жировой ткани путем липосакции и ферментативного расщепления жировых клеток с помощью коллагеназы. SVF, как известно, содержит небольшое количество стволовых клеток, полученных из жировой ткани (ASC).

Важно различать следующие понятия:

1) Обычный липофилинг: только жир

2) Клеточно-ассоциированный липотрансфер: Жир+SVF

3) Стволовые клетки, обогащающие липофилинг: Жир+ASC, выращенные ex-vivo

4) Филинг стволовыми клетками: ASC, выращенные ex-vivo

Настоящая патентная заявка относится только к вышеизложенным понятиям 3) и 4).

Определение стволовых клеток, упомянутых в настоящей патентной заявке.

Клетки, прикрепленные к поверхности культуры при посеве и культивировании стромальной сосудистой фракции.

Для применения в области молочной железы и лица могут быть использованы аутологические или аллогенные клетки.

Настоящее изобретение особенно пригодно для косметического филинга лица и омоложения и косметического филинга/увеличения молочной железы.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к композиции, содержащей стволовые клетки, полученные из жировой ткани и выращенные ex-vivo (ASC), или стволовые клетки, полученные из жировой ткани и выращенные ex-vivo (ASC), смешанные с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×104-2,0×108 ASC/мл жира; например 1,0×105-2,0×107, и использованию стволовых клеток, полученных из жировой ткани и выращенных ex-vivo, или жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, в качестве агента для косметического филинга/увеличения молочной железы или филинга/омоложения лица.

Хирургическая процедура для отбора ASC

Пациенты подвергаются минимальной липосакции в амбулаторных условиях.

Липоаспираты отбирают с помощью стандартных стерильных методов липосакции. Через разрезы увлажняющий раствор проникает в подкожно-жировую клетчатку. Липоаспират получают с помощью стандартного устройства для липосакции (например, Vibrasat®) и герметично упаковывают в стерильный контейнер. Липоаспират транспортируют в клиническую лабораторию стволовых клеток.

Изоляция и культивирование ASC

Изоляция ASC и выращивание ex vivo будут осуществляться в соответствии с утвержденным протоколом, в лаборатории, отвечающей принципам надлежащей производственной практики (GMP) и клинического выращивания стволовых клеток, в помещениях для проведения клеточной терапии.

Липоаспират промывают фосфатно-солевым буферным раствором (PBS) и центрифугируют. Для выделения стромальной сосудистой фракции (SVF) супернатант инкубируют и ферментативно расщепляют с помощью коллагеназы (категория GMP). Ферментативная активность нейтрализуется с помощью питательной среды. Суспензию фильтруют с использованием фильтра 60-100 pm и центрифугируют. Клеточный осадок ресуспендируют в среде культивирования и подсчитывают клетки осадка, которые содержат SVF. В альтернативном способе изоляции SVF используется замкнутая система, например система GID SVF-1™. SVF высевают в культуральную среду, состоящую из модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM) или альфа-минимальной питательной среды (α-МЕМ), 1-5% пенициллин-стрептомицина, 1-5 МЕ/мл гепарина без консервантов и 2-20% объединенного человеческого тромбоцитарного лизата pHPL или любой другой альтернативной питательной среды, например эмбриональной телячьей сыворотки. Первичные культуры (Р0) инкубируют. Неадгезивные клетки отбраковывают, флаконы клеточных культур тщательно промывают PBS и заменяют среду. Среду меняют каждые 3-7 дней. Во время культивирования и в день отбора ASC каждый культуральный флакон/набор будет проверяться на патогенную контаминацию.

Получение pHPL

pHPL может быть изготовлен, как описано Schallmoser et al.7, с незначительными модификациями. Вкратце, после получения информированного согласия у здоровых доноров крови отбирают компоненты цельной крови. Вся донорская кровь тестируется на маркеры инфекционных заболеваний, в соответствии с действующим законодательством. Лейкоцитарные пленки отделяются от эритроцитов и плазмы. Четыре набора лейкоцитарных пленок объединяют с 1 набором плазмы в 1 наборе обогащенной тромбоцитами плазме (PRP) и хранят при температуре от -20°C до -80°C. Минимум десять наборов PRP оттаивают на водяной бане, а затем объединяют в отдельную партию PRP. Объединенную партию PRP аликвотируют на более мелкие фракции и замораживают при температуре от -20°C до -80°C. Далее, все аликвотированные контейнеры из отдельной объединенной партии PRP оттаивают на водяной бане и центрифугируют (например, при 4000 г в течение 15 мин) для осаждения фрагментов тромбоцитов. Наконец, pHPL-содержащий супернатант переносят в новые контейнеры и хранят при температуре от -40°C до -80°C для последующего использования в приготовлении клеточной культуральной среды.

Процедура отбора ASC

ASC собирают в Р0-Р4. Все флаконы/наборы культур клеток промывают PBS, а клетки отделяют от поверхности пластика с использованием либо химического вещества (например, TrypLE Select), либо с помощью физической обработки. Суспензию, содержащую ASС, центрифугируют (например, при 300 г в течение 5 мин), супернатант удаляют, а осадок клеток собирают после ресуспендирования в PBS. Клеточный осадок ASC промывают PBS, центрифугируя ASC и отбраковывая супернатант после каждой процедуры промывки. Клетки подсчитывают три раза и вычисляют среднее количество. Перед допуском к клиническому использованию ASC будут подвергаться тщательному контролю, включая: 1) гарантирование отсутствия патогенной контаминации, 2) показатели жизнеспособности ASC более чем 90%, 3) наличие морфологических признаков, которые должны быть присущи ASC. ASC будут транспортироваться в специальных стерильных контейнерах.

Липосакция, подготовка трансплантата и проведение процедуры липофилинга Хирургическая процедура проводится под местной или общей анестезией. Липоаспираты отбирают с помощью стандартных стерильных методов липосакции. Увлажняющий раствор (например, раствор Кляйнс (Kleins) с помощью тупоконечного инфильтратора через разрезы инфильтрируют в донорский участок. Отборочная канюля представляет собой инструмент 2-5 мм в диаметре с тупым кончиком, присоедененный к устройству сбора (например, Vibrasat®). При необходимости липоаспират промывают солевым раствором. Собранный липоаспират либо оставляют для осаждения и формирования, либо центрифугируют (например, при 100 г в течение 5 мин). После процедуры разделения, жировой слой (верхний уровень) сцеживают, а водный слой (нижний уровень) также выпускают из шприцев. Средний слой, состоящий преимущественно из жирового трансплантата, используется для трансплантации.

Применение изобретения:

Косметический филинг молочной железы: Собранную жировую ткань смешивают с собранными и выращенными ex-vivo ASC в соотношении 5,0×104-2,0×108 ASC/мл жира, предпочтительно в соотношении 1,0×105-2,0×107 ASC/мл жира, и вводят аликвотами в молочную железу для косметического увеличения.

Пример методики инъекции

Обогащенный жировой трансплантат вводят горизонтально (параллельно к телу) в молочную железу, используя длинную иглу, чтобы избежать повреждения структуры за пределами ткани молочной железы. Игла вводится в переменных направлениях и плоскостях через несколько точек по всему краю ареолы и через несколько точек под молочной с целью достижения естественного распределения трансплантата.

Для филинга лица и коррекции морщин: собранную жировую ткань смешивают с собранными и выращенными ex-vivo ASC в соотношении 5,0×104-2,0×108 ASC/мл жира для стандартного филинга, предпочтительно в соотношении 1,0×105-2,0×107 ASC/мл жира. Количество стволовых клеток будет выращиваться в зависимости от необходимой степени филинга: чем меньший необходим объем филинга, тем выше концентрация ASC. Если желаемым эффектом является исключительно улучшение качества ткани, для равномерного распределения клеток будут использоваться только ASC, растворенные в PBS.

Пример методики инъекции

Жировые трансплантаты, используемые в качестве наполнителя, вводят горизонтально (параллельно поверхности) длинной иглой аликвотами, во избежание повреждения структуры за пределами целевой области. Игла вводится в переменных направлениях и плоскостях через несколько точек с целью достижения естественного распределения трансплантата.

При использовании исключительно для улучшения качества ткани, растворенные ASC вводятся в дерму и субдермально с помощью тонкой острой иглы и равномерно распределяются в целевой области.

Разрез и место инъекции зашивают и на донорский участок (а в некоторых случаях - и на реципиентный участок) накладывают послеоперационное компрессионное белье.

Клинические преимущества и новизна изобретения

ASC (выращенные ex-vivo), обогащающие жировые трансплантаты, или ASC в качестве моноагента никогда не использовались в клинике для инъекций в молочную железу или в лицо, не были описаны в литературе, и до представления патента США 61/839578 ни один автор не выдвинул идею такого клинического применения. Идея обогащения жировых трансплантатов выращенными ex-vivo ASC с целью улучшения выживаемости и качества жировых трансплантатов была продемонстрирована в мышиной модели3 и в недавнем исследовании обоснованности концепции на людях4. Хотя, как уже упоминалось выше, данных о клиническом применении настоящего изобретения нет (имеется ввиду косметический филинг молочной железы и лица). Следует подчеркнуть, что данное изобретение (то есть использование ASC, выращенных ex-vivo, с целью филинга/омоложения лица и косметического филинга/увеличения молочной железы) значительно отличается от применения свежеизолированых SVF, включая небольшую фракцию невыращенных ASC, для обычного так называемого "клеточноопосредованного липофилинга". Этот метод был описан в литературе, и применялся для организма человека с непрогнозируемыми клиническими исходами, не характеризуясь достоверно более высокой эффективностью по сравнению с обычным липофиллингом8. Обоснование использования клеток ASC, выращенных ex-vivo, для филинга лица, приведено в исследованиях, упомянутых выше, демонстрирующих выживаемость стволовых клеток после инъекции, в отличие от жировых клеток. Кроме того ASC сильно устойчивы к гипоксии и физическим воздействиям9-11. При использовании стволовых клеток отдельно в качестве наполнителя может быть достигнут надежный остаточный объем/увеличение.

Существует много клинических преимуществ применения биосовместимого устойчивого наполнителя для молочной железы и лица, включая естественный вид, неиммуногенность, избежание побочных эффектов искусственного материала, а сама процедура может быть аутологической. Большинство пациентов имеют естественные жировые запасы на животе, бедрах, руках и ягодицах, которые могут быть использованы. Таким образом, пациенты получают строго индивидуальное и желаемое обновление рельефа тела. Аутологическая жировая ткань может быть легко пересажена путем простой липосакции и последующей инъекции, с незначительным дискомфортом для пациентов и минимальным риском развития побочных эффектов.

Примеры

Результаты исследования - Исследование обоснованности концепции (по аналогии с дизайном исследования, описанного, например, Kolle SF, Fischer-Nielsen А, Mathiasen АВ, et al. Обогащение аутологичных жировых трансплантатов стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, с целью выживания трансплантата: рандомизированное плацебо-контролируемое исследование. Lancet 2013; 382: 1113-20):

Цель исследования:

Жировые трансплантаты, обогащенные высокой дозой аутологических стволовых клеток, полученных из жировой ткани и выращенных ex-vivo (ASC), в сравнении с необогащенными жировыми трансплантатами (обычная пересадка жировой ткани).

Дизайн исследования:

Для каждого участника исследования были приготовлены очищенные жировые трансплантаты, один из которых обогащен ASC, а другой - не обогащен ASC (контроль). Жировые трансплантаты вводили подкожно.

Выбирали концентрацию 20×106 ASCs на мл обогащенного жирового трансплантата - примерно в 2000 раз выше физиологического уровня.

Объемы введенных жировых трансплантатов измеряли с помощью магнитно-резонансной томографии (МРТ) сразу после инъекции и через 121 день по сравнению с исходным результатом МРТ.

Результат:

Установлено, что по сравнению с контрольными трансплантатами остаточные объемы ASC-обогащенных жировых трансплантатов достоверно больше. Никаких серьезных побочных эффектов не регистрировали.

Аспекты:

В соответствии с вышеизложенным настоящее изобретение может быть дополнительно описано с помощью следующих аспектов, в которых при упоминании стволовых клеток следует понимать как аутологические, так и аллогенные клетки, если не указано иное.

1. Жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, для применения в способе филинга молочной железы.

2. Жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, или стволовые клетки, полученные из жировой ткани и выращенные ex-vivo, для применения в способе филинга лица.

3. Композиция, содержащая жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), или стволовые клетки, полученные из жировой ткани и выращенные ex-vivo (ASC), смешанные с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×104-2,0×108 ASC/мл жира.

4. Использование жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, для филинга молочной железы.

5. Использование жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, для филинга лица.

6. Использование жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, в качестве наполнителя при филинге молочной железы.

7. Использование жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, или стволовых клеток, полученных из жировой ткани и выращенных ex-vivo, в качестве наполнителя при филинге лица.

8. Использование жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, или стволовых клеток, полученных из жировой ткани и выращенных ex-vivo, для косметического филинга молочной железы.

9. Использование жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, или стволовых клеток, полученных из жировой ткани и выращенных ex-vivo, для косметического филинга лица.

10. Использование жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, или стволовых клеток, полученных из жировой ткани и выращенных ex-vivo, в изготовлении лекарственного средства для лечения признаков старения.

11. Способ филинга молочной железы, отличающийся тем, что жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), смешивают с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×104-2,0×108 ASC/мл жира, и отличающийся тем, что жир вводят аликвотами или в виде нитей с помощью длинной иглы горизонтально (параллельно телу), в переменных направлениях и плоскостях через несколько точек по всему краю ареолы и через несколько точек под молочной железой с целью достижения естественного распределения трансплантата.

12. Способ филинга лица, отличающийся тем, что жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), или стволовые клетки, полученные из жировой ткани и выращенные ex-vivo (ASC), смешивают с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×104-2,0×108 ASC/мл жира или растворяют в PBS с целью равномерного распределения клеток, и отличающийся тем, что жировые трансплантаты вводятся аликвотами или в виде нитей с помощью длинной иглы горизонтально (параллельно поверхности), в переменных направлениях и плоскостях через несколько точек, с целью достижения естественного распределения трансплантата.

13. Способ филинга лица, отличающийся тем, что жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), или стволовые клетки, полученные из жировой ткани, выращенные ex-vivo (ASC), смешивают с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×104-2,0×108 ASC/мл жира, или растворяют в PBS с целью равномерного распределения клеток, и отличающийся тем, что растворенные ASС вводятся в дерму с помощью тонкой острой иглы и равномерно распределяются в целевой области; разрез и место инъекции зашивают, а на донорский участок (а в некоторых случаях - и на реципиентный участок) накладывают послеоперационные повязки.

14. Косметический способ филинга молочной железы, отличающийся тем, что жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), смешивают с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×104-2,0×108 ASC/мл жира, и отличающийся тем, что жир вводят аликвотами или в виде нитей с помощью длинной иглы горизонтально (параллельно телу), вставляя иглу в переменных направлениях и плоскостях в несколько точек по всему краю ареолы и в несколько точек под молочной железой с целью достижения естественного распределения трансплантата.

15. Косметический способ филинга лица, отличающийся тем, что жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), или стволовые клетки, полученные из жировой ткани, выращенные ex-vivo (ASC), смешивают с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×104-2,0×108 ASC/мл жира или растворяют в PBS с целью равномерного распределения клеток, и отличающийся тем, что жировые трансплантаты вводятся аликвотами или в виде нитей с помощью длинной иглы горизонтально (параллельно поверхности) во избежание повреждения структуры вне целевой области, вставляя иглу в несколько точек в переменных направлениях и плоскостях с целью достижения естественного распределения трансплантата.

16. Косметический способ филинга лица, отличающийся тем, что жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), или стволовые клетки, полученные из жировой ткани, выращенные ex-vivo (ASC), смешивают с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×104-2,0×108 ASC/мл жира, или растворяют в PBS с целью равномерного распределения клеток, и отличающийся тем, что растворенные ASC вводятся в дерму с помощью тонкой острой иглы и равномерно распределяются в целевой области; разрез и место инъекции зашивают, а на донорский участок (а в некоторых случаях - и на реципиентный участок) накладывают послеоперационные повязки

17. Косметический способ введения агента в кожу, отличающийся тем, что агент содержит жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, или стволовые клетки, полученные из жировой ткани, выращенные ex-vivo.

18. Косметический способ введения агента в кожу, отличающийся тем, что агент содержит жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), или стволовые клетки, полученные из жировой ткани, выращенные ex-vivo (ASC), и смешанные с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×104-2,0×108 ASC/мл жира.

19. Способ липофилинга кожи с использованием жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), или стволовых клеток, полученных из жировой ткани и выращенных ex-vivo.

20. Способ липофилинга кожи с использованием композиции, содержащей жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), или стволовые клетки, полученные из жировой ткани, выращенные ex-vivo (ASC), и смешанные с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×104-2,0×108 ASC/мл жира.

Литература

1. Leuchter I, Schweizer V, Hohlfeld J, Pasche P. Treatment of velopharyngeal insufficiency by autologous fat injection. Eur Arch Otorhinolaryngol 2010; 267: 977-83.

2. Coleman SR. Structural fat grafts: the ideal filler? Clin Plast Surg 2001; 28:111-9.

3. Lu F, Li J, Gao J, et al. Improvement of the survival of human autologous fat transplantation by using VEGF-transfected adipose-derived stem cells. Plast Reconstr Surg 2009; 124: 1437-46.

4. Kolle SF, Fischer-Nielsen A, Mathiasen AB, et al. Enrichment of autologous fat grafts with ex-vivo expanded adipose tissue-derived stem cells for graft survival: a randomised placebo-controlled trial. Lancet 2013; 382: 1113-20.

5. Yoshimura K, Sato K, Aoi N, Kurita M, Hirohi T, Harii K. Cell-assisted lipotransfer for cosmetic breast augmentation: supportive use of adipose-derived stem/stromal cells. Aesthetic Plast Surg 2008; 32: 48-55.

6. Matsumoto D, Sato K, Gonda K, et al. Cell-assisted lipotransfer: supportive use of human adipose-derived cells for soft tissue augmentation with lipoinjection. Tissue Eng 2006; 12: 3375-82.

7. Schallmoser K, Bartmann C, Rohde E, et al. Human platelet lysate can replace fetal bovine serum for clinical-scale expansion of functional mesenchymal stromal cells. Transfusion 2007; 47: 1436-46.

8. Peltoniemi HH, Salmi A, Miettinen S, et al. Stem cell enrichment does not warrant a higher graft survival in lipofilling of the breast: a prospective comparative study. J Plast Reconstr Aesthet Surg 2013; 66: 1494-503.

9. Rehman J, Traktuev D, Li J, et al. Secretion of angiogenic and antiapoptotic factors by human adipose stromal cells. Circulation 2004; 109: 1292-8.

10. Rasmussen JG, Frobert O, Pilgaard L, et al. Длительное гипоксического культуры и трипсинизации увеличить проангиогенных потенциал человека жировой ткани стволовых клеток. Cytotherapy 2010 года.

11. Thangarajah Н, Vial IN, Chang Е, et al. IFATS collection: adipose stromal cells adopt a proangiogenic phenotype under the influence of hypoxia. Stem Cells 2009; 27: 266-74.

1. Способ получения композиции, содержащей стволовые клетки, полученные из жировой ткани (ASC), первичной культуры (Р0), выращенные ex-vivo, смешанные с отобранной жировой тканью, включающий:

- выращивание ASC ex-vivo из выделенной стромальной сосудистой фракции (SVF) в питательной среде, состоящей из модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM) или альфа-минимальной питательной среды (α-МЕМ), 1-5% пенициллин-стрептомицина, 1-5 МЕ/мл гепарина без консервантов и 2-20% объединенного человеческого тромбоцитарного лизата (pHPL),

- сбор указанных ASC в первичном пассаже (Р0), и

- смешивание указанных ASC с отобранной жировой тканью в соотношении 20×106 - 20×107 ASC/мл жира.

2. Композиция для применения в качестве агента для обогащенного стволовыми клетками липофилинга молочной железы или филинга стволовыми клетками молочной железы, агента для обогащенного стволовыми клетками липофилинга лица или филинга стволовыми клетками лица, для косметического филинга молочной железы или для косметического филинга лица, содержащая стволовые клетки, полученные из жировой ткани (ASC), первичной культуры (Р0), выращенные ex-vivo, смешанные с отобранной жировой тканью в соотношении по меньшей мере 20×106 - 20×107 ASC/мл жира, где указанные стволовые клетки, полученные из жировой ткани (ASC), первичной культуры (Р0), выращенные ex-vivo, культивируют в питательной среде, состоящей из модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM) или альфа-минимальной питательной среды (α-МЕМ), 1-5% пенициллин-стрептомицина, 1-5 МЕ/мл гепарина без консервантов и 2-20% объединенного человеческого тромбоцитарного лизата (pHPL), и собирают в первичном пассаже (Р0).

3. Косметический способ обогащенного стволовыми клетками липофилинга молочной железы или филинга стволовыми клетками молочной железы, где стволовые клетки, полученные из жировой ткани (ASC), первичной культуры (Р0), выращенные ex-vivo, смешивают с отобранной жировой тканью в соотношении по меньшей мере 20×106 - 20×107 ASC/мл жира, где указанные стволовые клетки, полученные из жировой ткани (ASC), первичной культуры (Р0) культивируют в питательной среде, состоящей из модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM) или альфа-минимальной питательной среды (α-МЕМ), 1-5% пенициллин-стрептомицина, 1-5 МЕ/мл гепарина без консервантов и 2-20% объединенного человеческого тромбоцитарного лизата (pHPL), и собирают в первичном пассаже (Р0), и где жир вводят аликвотами или в виде нитей с помощью длинной иглы горизонтально, параллельно телу, вставляя иглу в переменных направлениях и плоскостях в несколько точек по всему краю ареолы и в несколько точек под молочной железой с целью достижения равномерного и естественного распределения трансплантата.

4. Косметический способ обогащенного стволовыми клетками липофилинга лица или филинга стволовыми клетками лица, где стволовые клетки, полученные из жировой ткани (ASC), первичной культуры (Р0), выращенные ex-vivo, смешивают с отобранной жировой тканью в соотношении по меньшей мере 20×106 - 20×107 ASC/мл жира, где указанные стволовые клетки, полученные из жировой ткани (ASC), первичной культуры (Р0) культивируют в питательной среде, состоящей из модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM) или альфа-минимальной питательной среды (α-МЕМ), 1-5% пенициллин-стрептомицина, 1-5 МЕ/мл гепарина без консервантов и 2-20% объединенного человеческого тромбоцитарного лизата (pHPL), и собирают в первичном пассаже (Р0), и где жировые трансплантаты вводят аликвотами или в виде нитей с помощью длинной иглы горизонтально, параллельно поверхности, во избежание повреждения структур вне целевой области, вставляя иглу в несколько точек в переменных направлениях и плоскостях с целью достижения равномерного и естественного распределения трансплантата.

5. Косметический способ обогащенного стволовыми клетками липофилинга лица или филинга стволовыми клетками лица, где стволовые клетки, полученные из жировой ткани (ASC), первичной культуры (Р0), выращенные ex-vivo, смешивают с отобранной жировой тканью в соотношении по меньшей мере 20×106 - 20×107 ASC/мл жира, где указанные стволовые клетки, полученные из жировой ткани (ASC), первичной культуры (Р0) культивируют в питательной среде, состоящей из модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM) или альфа-минимальной питательной среды (α-МЕМ), 1-5% пенициллин-стрептомицина, 1-5 МЕ/мл гепарина без консервантов и 2-20% объединенного человеческого тромбоцитарного лизата (pHPL), и собирают в первичном пассаже (Р0), и где ASC вводят в дерму с помощью тонкой острой иглы и равномерно распределяют в целевой области, и разрез и места инъекций зашивают, и на донорские участки, а в некоторых случаях - и на реципиентные участки, накладывают послеоперационное компрессионное белье.

6. Косметический способ введения агента в кожу, где агент содержит стволовые клетки, полученные из жировой ткани (ASC), первичной культуры (Р0), выращенные ех-vivo, смешанные с отобранной жировой тканью в соотношении по меньшей мере 20×106 - 20×107 ASC/мл жира, где указанные стволовые клетки, полученные из жировой ткани (ASC), первичной культуры (Р0), выращенные ex-vivo, культивируют в питательной среде, состоящей из модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM) или альфа-минимальной питательной среды (α-МЕМ), 1-5% пенициллин-стрептомицина, 1-5 МЕ/мл гепарина без консервантов и 2-20% объединенного человеческого тромбоцитарного лизата (pHPL), и собирают в первичном пассаже (Р0), включающий инъекцию указанного агента пациенту.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к области продуктов для личной гигиены, предназначенных для обработки полости рта перкислотным средством, способу получения такого средства и пергидролитическому ферменту в форме гибридного белка для его получения.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой композицию, содержащую консервирующую систему, для подавления роста микроорганизмов, где консервирующая система содержит салицилатную соль и бензоатную соль, при этом общее содержание салицилатной соли и бензоатной соли составляет от 0,2 до 0,5 мас.% от общей массы композиции, и при этом молярное отношение салицилата к бензоату составляет от 1:6 до 1:2,3, а рН композиции равен 5 или менее.

Изобретение относится к области косметологии и дерматологии и представляет собой композицию для лечения заболеваний кожи в связи с дефицитом физиологических запасов витамина А в коже, содержащую в качестве активного ингредиента ретинальдегид и глицилглицинолеамид и по меньшей мере один дерматологически приемлемый носитель.

Изобретение относится к косметической промышленности и представляет собой косметическую композицию для увлажнения и заживления кожи, содержащая D-пантенол, низкомолекулярную гиалуроновую кислоту 15-40 кДа или гиалуронат натрия, водный экстракт радиолы розовой, комплекс консервантов и воду, причем компоненты в композиции находятся в определенном соотношении, мас.%.

Изобретение относится к косметической промышленности и представляет собой косметическую композицию против себорейных проявлений на коже, содержащую комплекс 50%-ных водных органических экстрактов шлемника байкальского, лимонника китайского, пятилистника кустарникового, кортузы сибирской, можжевельника сибирского, змееголовника молдавского, лопуха, крапивы двудомной и следующего комплекса консервантов: бензоата натрия, сорбата калия, бензойной кислоты, дегидроуксусной кислоты, в соотношении 2:1:1:1:1:1:1:1:0,01 соответственно.
Изобретение относится к области косметологии и дерматологии и представляет собой композицию для ухода за кожей, содержащую дерматологически приемлемый носитель и по меньшей мере первый и второй интерферирующий пигмент, причем общее содержание интерферирующих пигментов составляет от 1% до 4% по массе, причем цветность композиции больше или равна 3,7, и причем композиция имеет степень изменения цвета здоровой кожи (СИЦЗК) менее или равную 2,4, и причем первый интерферирующий пигмент имеет угол цветового тона h° в диапазоне 185°-215°, и второй интерферирующий пигмент имеет угол цветового тона h° в диапазоне 80°-95°.

Настоящее изобретение относится к композициям для ухода за волосами, содержащим соединение, полученное путем осуществления реакции диакрилата или диметакрилата формулы с амином формулы H2N-R2, где R1 представляет собой водород или метил; R2 представляет собой С1-С20алкил, необязательно замещенный: гидроксилом, силоксилом, С1-С20алкокси, замещенным гидроксилом, аминоС1-С20алкилом, замещенным от одной до двух гидроксильными группами, С6-С10арилом, замещенным С1-С20алкокси, или С5-С10гетероарилом, содержащим один гетероатом азота; и A содержит фрагмент каучука, имеющий молекулярную массу в диапазоне от 1000 до 10000 г/моль, выбранный из группы, состоящей из бутадиеновых и изопреновых звеньев.

Изобретение относится к области косметологии. Состав для коррекции дефектов кожи, включающий гиалуроновую кислоту и глицерин, согласно изобретению дополнительно содержит пальмитоил дипептид-5 диаминобутироил гидрокситреонин, пальмитоил дипептид-5 диаминогидроксибутират, пальмитоил трипептид-5, рекомбинантный фактор роста фибробластов основной, рекомбинантный эпидермальный фактор роста и питательную среду DMEM F12, причем компоненты в составе находятся в определенном соотношении, масс.
Изобретение относится к стоматологии и гигиене и предназначено для чистки, отбеливания и дезинфекции установленных и съемных зубных протезов, других стоматологических конструкций и хирургических инструментов.
Изобретение относится к косметической промышленности и представляет собой способ получения красителя для татуировки, отличающийся тем, что в базовый состав красителя для татуировки добавляют элементарный углерод, извлеченный из растительного, и/или животного, и/или человеческого материала.

Изобретение относится к области композиционных материалов, а именно к материалам, применяемых в медицине, в частности в офтальмологии, для изготовления интраокулярных линз, предназначенных для коррекции зрения после удаления катаракты.

Изобретение относится к медицине, в частности к биомедицинскому материаловедению, и раскрывает метод получения гидрогелей с заданными механическими свойствами и архитектоникой.

Изобретение относится к области медицинской техники, а именно технологии формирования пористых биоинертных металлических покрытий на внутрикостных частях титановых имплантируемых конструкций.

Изобретение относится к медицинским протезам и может быть использовано для восполнения дефицита тканей в области удаленного сосково-ареолярного комплекса (САК) у пациенток, перенесших операцию на молочной железе.

Изобретение относится к биотехнологии. Описана биоинженерная конструкция для восстановления больных или поврежденных тканей.

Изобретение относится к области медицины, а именно к пластической офтальмохирургии. Для хирургического лечения выворота нижнего века проводят расщепление нижнего века на две пластинки: кожно-мышечную и конъюнктивально-хрящевую и введение между ними аллотрансплантата «Аллоплант для пластики век», который фиксируют аллосухожильными нитями к наружной и внутренней связкам века.

Изобретение относится к области металлургии, а именно к магниевым сплавам, и может быть использовано для изготовления биоразлагаемого имплантата. Биоразлагаемый имплантат содержит магниевый сплав, содержащий: Zn в количестве от 3 до 5 мас.
Изобретение относится к производству изделий из корунда медицинского назначения для хирургии, стоматологии, ортопедии, травматологии, изготовления конструкционной керамики, эндопротезов и имплантатов.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ получения биологических имплантатов, характеризующийся тем, что хирургически очищенный и механически фрагментированный исходный биоматериал из костной ткани подвергают двум-трем циклам замораживания-размораживания, проводят очистку в ультразвуковой ванне раствором 0,1 М этилендиаминтетрауксусной кислоты и 0,01 М гидроксида натрия, затем раствором 1М соляной кислоты и 1М хлорида натрия, затем обрабатывают раствором 1М хлорида натрия и 0,1 М фосфатного буфера с промывкой 0,1 М раствором фосфатного буфера до рН 7-8, затем раствором 0,1% Triton х-100 и 1% додецилсульфата натрия, а затем раствором 0,1-1% трипсина и 0,125-0,3% папаина в соотношении 1:1, после чего биоматериал подвергают обработке в ультразвуковой ванне в 3% перекиси водорода, а затем обрабатывают смесью этанол или изопропанол и диэтиловый эфир или хлороформ в соотношении 1:2, затем обработку ведут в сверхкритическом диоксиде углерода в автоклаве при давлении 75-700 атм и температуре 32-50°С с периодическим сбрасыванием давления ниже критической точки, на второй стадии в автоклав вводят дистиллированную воду и диоксид углерода в соотношении 1:(1-3) при давлении 150-350 атм и температуре 15-25°С, а после декомпрессии автоклава биоматериал подвергают лиофилизации и стерилизации.

Изобретение относится к металлургии, а именно к способу обработки поверхности имплантов, предназначенных для имплантации в костную ткань. Способ обработки поверхности металлического имплантата для обеспечения требуемой шероховатости поверхности включает осуществление дробеструйной обработки по меньшей мере части поверхности металлического имплантата частицами одного или более оксидов титана, включающих по меньшей мере один нестехиометрический оксид титана, причем указанные частицы имеют компактную морфологию и размер от 1 до 300 мкм.

Изобретение относится к медицинским протезам и может быть использовано для восполнения дефицита тканей в области удаленного сосково-ареолярного комплекса (САК) у пациенток, перенесших операцию на молочной железе.

Изобретение относится к области косметологии и представляет собой способ получения композиции, содержащей стволовые клетки, полученные из жировой ткани, первичной культуры, выращенные ex-vivo, смешанные с отобранной жировой тканью, включающий: выращивание ASC ex-vivo из выделенной стромальной сосудистой фракции в питательной среде, состоящей из модифицированной по способу Дульбекко среды Игла или альфа-минимальной питательной среды, 1-5 пенициллин-стрептомицина, 1-5 МЕмл гепарина без консервантов и 2-20 объединенного человеческого тромбоцитарного лизата, сбор указанных ASC в первичном пассаже и смешивание указанных ASC с отобранной жировой тканью в соотношении 20×106 - 20×107 ASCмл жира, а также композицию для применения в качестве агента для обогащенного стволовыми клетками липофилинга молочной железы или филинга стволовыми клетками молочной железы, косметический способ обогащенного стволовыми клетками липофилинга молочной железы или филинга стволовыми клетками молочной железы, косметический способ обогащенного стволовыми клетками липофилинга лица или филинга стволовыми клетками лица и косметический способ введения агента в кожу. Изобретение обеспечивает коррекцию объемных дефектов, а также увеличение существующего объема молочной железы и омоложение лица. 6 н.п. ф-лы.

Наверх