Способ подготовки материала для создания биоинженерной конструкции пищевода



Способ подготовки материала для создания биоинженерной конструкции пищевода
Способ подготовки материала для создания биоинженерной конструкции пищевода
G01N1/30 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2662554:

Губарева Елена Александровна (RU)
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный медицинский университет" Минздрава России (ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России) (RU)
Сотниченко Александр Сергеевич (RU)

Изобретение относится к области регенеративной медицины. Предложен способ подготовки матрикса для создания биоинженерной конструкции пищевода в эксперименте. Осуществляют выделение и очищение пищевода экспериментальных животных от окружающей соединительной ткани, канюлирование краниальной и каудальной частей пищевода, децеллюляризацию детергентами и энзимами и отмывание пищевода от децеллюляризирующих растворов. Качество децеллюляризации подтверждают путем иммуногистохимического анализа по наличию коллагенов I и IV типов, ламинина, эластина, фибронектина и отсутствию гладкомышечного актина, тропомиозина, компонентов дыхательной цепи митохондрий, а также по отсутствию выраженной клеточной воспалительной реакции на пробу подкожной имплантации подготовленного матрикса in vivo. Изобретение обеспечивает повышение качества получаемого матрикса. 1 табл., 1 пр.

 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к регенеративной медицине, и может быть использовано в клеточной биологии, молекулярной биологии, торакальной хирургии для создания технологии получения и использования в практических целях биоинженерного органа в качестве трансплантата.

Во всем мире ежегодно более чем у 500000 человек диагностируют рак пищевода [Wheeler J.В. et al., 2012] и по современному прогнозу эта цифра увеличится до 850000 человек к 2030 году [Bloom D. et al., 2012]. Рак пищевода среди злокачественных заболеваний является одним из наиболее агрессивных по течению и неблагоприятных по прогнозу для жизни пациентов. В структуре всех злокачественных заболеваний рак пищевода составляет 3% и занимает 6-е место среди опухолей желудочно-кишечного тракта, 3-е место после рака желудка и прямой кишки. Пик заболеваемости приходится на возраст 50-60 лет [Янкин А.В., 2003]. Около 30% пациентов с раком пищевода, а также пациенты с травматическими и врожденными нарушениями (частота встречаемости от 1:2500 до 1:4500 новорожденных) нуждаются в резекции пищевода. Существуют разнообразные тактики по восстановлению пассажа пищи, в том числе с формированием неопищевода из участка желудка [Poghosyan Т. et al., 2011], толстого и тонкого отделов кишечника [Cowles R.A. et al., 2010]. Однако данные реконструктивные операции очень сложны, связаны со значительным количеством послеоперационных осложнений [Smithers В. et al., 2007], а также высокой летальностью [Stein Н.J. et al., 2005]. В течение двух лет после подобных операций многие пациенты страдают от дисфагии в результате образования стриктур и, как правило, нуждаются в повторных эндоскопических вмешательствах для бужирования пищевода [Teoh A.Y.В. et al., 2011].

Тканевая инженерия позволяет создавать биологические конструкции в лабораторных условиях для замены поврежденного или удаленного органа. Она включает в себя разработку и модификацию биологических (природных) или искусственных каркасов (носителей), а также оценку и поддержание жизнеспособности клеток или тканей, взаимодействующих с ними и в связи с этим обладает огромным потенциалом для создания новых способов лечения и улучшения качества жизни таких больных, которым требуется пересадка пищевода. Кроме того, пациенты, которые сегодня считаются неоперабельными из-за плохого клинического статуса, могут получить шанс на выздоровление. С учетом высокой смертности от рака пищевода весьма актуальной является разработка способа подготовки материала для создания биоинженерной конструкции пищевода.

В частности, известен способ децеллюляризации сердца крысы [Патент РФ на изобретение №2550286/ 03.06.14. Бюл. №13. Маккиарини П., Губарева Е.А., Сотниченко А.С., Гилевич И.В., Юнгеблут Ф. Способ моделирования биоинженерного каркаса сердца в эксперименте на крысе.]. Протокол включает в себя канюлирование сердца крысы выше места отхождения основных ветвей дуги аорты с последующей перфузией через аорту очищенной водой, фосфатно-буферным солевым раствором, детергентами и ферментами: растворами, содержащими 4% раствор дезоксихолата натрия в комбинации с 0,002М Na2-ЭДТА, свиную панкреатическую ДНКазу-I 2000 ЕД/200 мл фосфатного буфера с кальцием и магнием и отмывку каркаса фосфатным буфером с добавлением 1% пенициллина-стрептомицина с общей продолжительностью 28 часов, причем жизнеспособность клеток на полученном каркасе определяют по наличию дифференциального окрашивания живых и мертвых клеток, по способности дегидрогеназ живых клеток восстанавливать неокрашенные формы 3-4,5-диметилтиазол-2-ил-2,5-дифенилтераразола до голубого кристаллического фармазана, растворимого в диметилсульфоксиде.

Основным недостатком данного способа является то, что по данному протоколу децеллюляризацию проводят на модели сердца крысы, и это, в связи с физиологическими отличиями животных, не может транслироваться на модель пищевода низшего примата без изменений и дополнений.

За ближайший аналог принят способ проведения децеллюляризации пищевода низшего примата [Губарева Е.А., Сьоквист С., Сотниченко А.С. и др. Децеллюляризация пищевода низших приматов. Гены и клетки. 2014; 9 (4): 64-69], заключающийся в выделении пищевода низшего примата, очищении его от окружающей соединительной ткани, канюлировании краниальной и каудальной части пищевода пластиковыми катетерами, децеллюляризации пищевода детергент-энзиматическим методом в 2 цикла перфузии пищевода со скоростью 150 мл/мин детергентами и энзимами (деионизированная вода - 1 ч; дезоксихолат натрия 4% + 2 mM раствор ЭДТА 1 час; PBS -/- 10 мин; свиная панкреатическая ДНКаза-I 2000 ЕД/200 мл PBS+/+ - 1 ч), отмывании от децеллюляризирующих растворов фосфатным солевым буферным раствором -/- 200 мл - с общей продолжительностью процедур ~ 24 ч. Контроль качества децеллюляризации проводился путем гистологического исследования, анализа морфологической структуры, количественного определения уровня ДНК и механических свойств полученного каркаса.

Основными недостатками данного способа являются однонаправленная перфузия пищевода децеллюляризирующими растворами, приводящая к неравномерному обесклечиванию органа на протяжении, отсутствие обеззараживания матрикса, создающее угрозу бактериальной контаминации и, как следствие, нарушения его структуры, высокая скорость перфузии, приводящая к изменению механических характеристик, не полный контроль качества децеллюляризации.

Задачи: максимальное сохранение гистологической структуры внеклеточного матрикса пищевода, обеспечение щадящего режима обработки биологического материала, снижение вероятности бактериальной контаминации получаемого каркаса, полноценный морфологический и молекулярно-биологический анализ матрикса, т.е. повышение качества получаемого биоинженерного материала и обеспечение контроля его качества.

Сущностью предлагаемого способа подготовки матрикса для создания биоинженерной конструкции пищевода в эксперименте является то, что после выделения пищевода низшего примата и очищения его от окружающей соединительной ткани канюлируют краниальную и каудальную части органа, перфузию для децеллюляризации осуществляют в течение 28 часов со скоростью потока реагентов 100 мл/минуту, при этом перфузию осуществляют в 2 этапа: после перфузии через краниальный конец пищевода в направлении к каудальному направление перфузии изменяют на противоположное - от каудального к краниальному, каждый из двух этапов перфузии включает обработку деионизированной водой в течение 1,5 часов, затем используют 4% раствор дезоксихолата натрия в комбинации с 0,002М Na2-ЭДТА в течение 70 минут, фосфатный буфер - в течение 15 минут, свиную панкреатическую ДНКазу-I 2000 ЕД/200 мл фосфатного буфера с кальцием и магнием - 70 минут, завершают децеллюляризацию промывкой от децеллюляризирующих растворов и дезинфекцией матрикса в 10% растворе хлоргексидина биглюконата в фосфатном буфере со сменой раствора и направления перфузии каждые 5 часов, причем качество децеллюляризации подтверждают путем гистологического окрашивания, определения количественного содержания ДНК, механического тестирования иммуногистохимического анализа по наличию коллагенов I и IV типов, ламинина, эластина, фибронектина и отсутствию гладкомышечного актина, тропомиозина, компонентов дыхательной цепи митохондрий - с помощью ЭПР-спектроскопии; а также по отсутствию выраженной клеточной воспалительной реакции на пробу подкожной имплантации подготовленного матрикса in vivo.

Техническим результатом способа является повышение качества получаемого матрикса. Ранее использовавшиеся протоколы и способы повреждали матрикс пищевода и несли высокий риск развития бактериальной контаминации, что крайне неблагоприятно сказывалось на качестве полученного матрикса пищевода и возможности последующего создания биоинженерного органа. Чередование направления перфузии, снижение ее скорости, применение хлоргексидина биглюконата для дезинфекции матрикса полностью нивелирует негативные эффекты известных способов того же назначения. Кроме того, способ предусматривает качественную оценку состава матрикса, контроль количества остаточных компонентов дыхательной цепи митохондрий и биосовместимости матрикса.

Способ подготовки матрикса для создания биоинженерной конструкции пищевода в эксперименте осуществляют следующим образом: для децеллюляризации используют пищевод низших приматов. Орган очищают от окружающей соединительной ткани. Канюлируют краниальную и каудальную части пищевода пластиковыми катетерами соответствующего диаметра. Для проведения децеллюляризации пищевод помещают в специализированный биореактор ORCA (Harvard Apparatus, США) и начинают ретроградную перфузию жидкости через орган в течение 28 часов при скорости потока реагентов 100 мл/мин. Децеллюляризацию проводят в 2 этапа: на первом растворы перфузируют через краниальный конец пищевода в направлении каудального, на втором этапе направление перфузии меняют на противоположное. Каждый из этапов включает перфузию деионизированной водой - 1,5 часа, дезоксихолатом натрия 4% в комбинации с 0,002М Na2-ЭДТА - 70 минут, фосфатным буфером - 15 минут, свиной панкреатической ДНКазой-I 2000 ЕД/200 мл фосфатного буфера с кальцием и магнием - 70 минут, затем завершают децеллюляризацию отмывкой от децеллюляризирующих растворов и дезинфекцией матрикса в 10% растворе хлоргексидина биглюконата в фосфатном буфере со сменой раствора и направления перфузии каждые 5 часов.

Контроль качества полученного биоинженерного каркаса осуществляют методами гистологического исследования (окрашивание гематоксилином и эозином, флуорофором DAPI) для подтверждения сохранности архитектоники внеклеточного матрикса пищевода и отсутствия клеточных элементов на сердечном каркасе, количественного определения уровня оставшейся ДНК [Badylak S.F. et al., 2011], а также путем определения предельных биомеханических параметров на растяжение каркаса на универсальных испытательных машинах фирмы Инстрон модель 5965 (датчик 50 Н) и на Lloyd LRX (100 N load cell) [Witzenburg С. et al., 2012]. Сохранность белков внеклеточного матрикса - коллагенов I и IV типов, ламинина, эластина, фибронектина и отсутствие внутриклеточных сократительных белков - гладкомышечного актина, тропомиозина определяют при помощи иммуногистохимического исследования [Ott Н.С. et al., 2008]. Проводят ЭПР-спектроскопию образцов матрикса пищевода для содержания определения компонентов дыхательной цепи митохондрий [Е.А. Губарева и др., 2016]. Для определения уровня клеточной воспалительной реакции организма лабораторного животного на получаемый матрикс пищевода ацеллюлярные образцы размером до 5 мм в диаметре имплантируют подкожно лабораторным крысам на срок до 14 дней с последующей гистологической оценкой воспалительного ответа.

Способ апробирован в течение 1,5 лет на биологическом материале (пищевод) экспериментальных животных (низшие примата - Масаса Mulatta). Результаты полностью подтвердили решаемые задачи. Получены естественные каркасы органов, с сохранным внеклеточным матриксом и отсутствием клеточных структур.

Данный способ подготовки материала для создания биоинженерной конструкции пищевода использован в эксперименте на низших приматах - Масаса Mulatta. Выполнен забор и фиксация в биореакторе пищевода с последующей децеллюляризацией по предлагаемому способу.

Пример: произвели забор пищевода с соблюдением правил проведения работ с использованием экспериментальных животных (протокол локального этического комитета №30/1). Орган очистили от окружающей соединительной ткани, канулировали краниальный и каудальный концы пищевода и фиксировали в биореакторе. Начали децеллюляризацию пищевода путем перфузии со скоростью 100 мл/мин через краниальный конец децеллюляризирующими растворами: деионизированной водой - 1,5 часа, дезоксихолатом натрия 4% в комбинации с 0,002М Na2-ЭДТА - 70 минут, фосфатным буфером - 15 минут, свиной панкреатической ДНКазой-I 2000 ЕД/200 мл фосфатного буфера с кальцием и магнием - 70 минут, затем сменили направление перфузии жидкости на обратное - от каудального конца к краниальному и повторили цикл перфузии децеллюляризирующими растворами. Децеллюляризацию пищевода завершили отмывкой от децеллюляризирующих растворов и дезинфекцией матрикса в 10% растворе хлоргексидина биглюконата в фосфатном буфере со сменой раствора и направления перфузии каждые 5 часов.

Контроль качества полученного биоинженерного каркаса осуществили методами гистологического исследования (окрашиванием гематоксилином и эозином, флуорофором DAPI) для подтверждения сохранности архитектоники внеклеточного матрикса пищевода и отсутствия клеточных элементов на сердечном каркасе, количественного определения уровня оставшейся ДНК, установили предельные биомеханические параметры на растяжение каркаса на универсальных испытательных машинах фирмы Инстрон модель 5965 (датчик 50 Н) и на Lloyd LRX (100 N load cell).

Сохранность белков внеклеточного матрикса (коллагена I и IV типов, ламинина, эластина, фибронектина) и отсутствие внутриклеточных сократительных белков (гладкомышечного актина, тропомиозина) определили при помощи иммуногистохимического исследования, по наличию либо отсутствию специфичной реакции с антителами против данных белков. Провели ЭПР-спектроскопию образцов матрикса пищевода, определив содержание компонентов дыхательной цепи митохондрий. Выполнили подкожную имплантацию образцов размером до 5 мм в диаметре лабораторным крысам на срок до 14 дней, после чего гистологически оценили выраженность воспалительного ответа.

В результате экспериментов по децеллюляризации получен каркас пищевода с сохранением гистологической архитектоники и белков внеклеточного матрикса. Проведено всестороннее изучение свойств ацеллюлярного матрикса.

Способ подготовки матрикса для создания биоинженерной конструкции пищевода в эксперименте, включающий выделение и очищение пищевода экспериментальных животных от окружающей соединительной ткани, канюлирование краниальной и каудальной частей пищевода, децеллюляризацию детергентами и энзимами и отмывание пищевода от децеллюляризирующих растворов, контроль качества матрикса: гистологическое окрашивание, определение количественного содержания ДНК, механическое тестирование, отличающийся тем, что перфузию в течение 28 ч со скоростью 100 мл/мин при канюлировании осуществляют в 2 этапа: после перфузии через краниальный конец пищевода в направлении к каудальному направление перфузии изменяют на противоположное - от каудального к краниальному, каждый из двух этапов перфузии включает обработку деионизированной водой в течение 1,5 ч, затем используют 4% раствор дезоксихолата натрия в комбинации с 0,002 М Na2-ЭДТА в течение 70 мин, фосфатный буфер - в течение 15 мин, свиную панкреатическую ДНКазу-I 2000 ЕД/200 мл фосфатного буфера с кальцием и магнием - 70 мин, завершают децеллюляризацию промывкой от децеллюляризирующих растворов и дезинфекцией матрикса в 10% растворе хлоргексидина биглюконата в фосфатном буфере со сменой раствора и направления перфузии каждые 5 ч, дополнительно качество децеллюляризации подтверждают путем иммуногистохимического анализа по наличию коллагенов I и IV типов, ламинина, эластина, фибронектина и отсутствию гладкомышечного актина, тропомиозина, компонентов дыхательной цепи митохондрий - с помощью ЭПР-спектроскопии, а также по отсутствию выраженной клеточной воспалительной реакции на пробу подкожной имплантации подготовленного матрикса in vivo.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано при производстве радиофармпрепаратов, в стоматологии и косметологии. Способ определения следовых количеств нитрат-ионов в соли SrCl2 характеризуется тем, что из исходного хлорида стронция получают макроциклический комплекс состава КЭ⋅SrCl2, где КЭ - молекула краун-эфира; облучают макроциклический комплекс КЭ⋅SrCl2 при температуре жидкого азота 77 К с целью образования и стабилизации радикальных продуктов радиолиза, при этом макроциклический комплекс КЭ⋅SrCl2 предварительно вакуумируют в стеклянной ампуле; регистрируют спектры ЭПР радикальных продуктов радиолиза, стабилизированных в облученном макроциклическом комплексе КЭ⋅SrCl2, при температуре в диапазоне 77-110 К, определяют концентрацию дианионов NO32- в исходной соли SrCl2.

Изобретение относится к области исследования процессов твердения цементов и может быть использовано для контроля качества бетонных и железобетонных изделий. Образец исходного сухого цемента затворяют водой и подвергают твердению в воздушно-влажных условиях.

Использование: для исследованиях конденсированных материалов и наноструктур методом электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) в различных областях науки. Сущность изобретения заключается в том, что спектрометр ЭПР содержит генератор (1) фиксированной частоты, генератор (2), первый делитель (3) мощности, второй делитель (4) мощности, переключатель (5) каналов, первый смеситель (6), второй смеситель (7), низкочастотный усилитель (8), осциллограф (9), циркулятор (10), первый усилитель (11) низкочастотной мощности, первый умножитель (12) частоты, резонатор (13), магнитная система (14), выходной усилитель (15) постоянного тока, систему (16) регистрации, компьютер (17), первую линию (19) задержки, квадратурный детектор (20), вторую линию (21) задержки, второй усилитель (22) низкочастотной мощности, второй умножитель (23) частоты, фильтр (24), усилитель (25) высокочастотной мощности и аттенюатор (26).

Использование: для регистрации сигналов электронного парамагнитного резонанса. Сущность изобретения заключается в том, что спектрометр ЭПР содержит генератор фиксированной частоты, генератор переменной частоты, первый делитель мощности, второй делитель мощности, переключатель каналов, первый смеситель, второй смеситель, низкочастотный усилитель, осциллограф, циркулятор, первый усилитель низкочастотной мощности, первый умножитель частоты, резонатор, магнитную систему, выходной усилитель постоянного тока, систему регистрации, компьютер, первую линию задержки, квадратурный детектор, вторую линии задержки, второй усилитель низкочастотной мощности, второй умножитель частоты, фильтр, усилитель высокочастотной мощности и аттенюатор, первый ключ, второй ключ и формирователь импульсов.

Изобретение относится к области физико-химических методов анализа, в частности к анализу растворов на предмет количественного определения антиоксидантной активности (АОА).

Изобретение относится к технической физике и может быть использовано при изготовлении спектрометров электронного парамагнитного резонанса (ЭПР). Устройство содержит сигнальный 1 и гетеродинный 2 генераторы СВЧ, измерительный аттенюатор 3, смеситель опорного 4 и сигнального 5 каналов, циркулятор 6, измерительный резонатор 7 с элементом перестройки его резонансной частоты 8, УПЧ опорного 9 и сигнального 10 каналов, фазочастотные дискриминаторы 11 и 12, делители частоты 13 и 14, опорный генератор 15, устройство синтеза частот 16, аналого-цифровой преобразователь 17, устройство селекции выборок 18, дециматоры синфазного 19 и квадратурного 20 каналов, цифро-аналоговый преобразователь 21, усилитель переменного тока 22, импульсный демодулятор 23 и трехпозиционный переключатель 24.

Изобретение относится к технической физике и может быть использовано при изготовлении спектрометров электронного парамагнитного резонанса (ЭПР). Спектрометр содержит сигнальный 1 и гетеродинный 2 генераторы СВЧ, измерительный аттенюатор 3, смеситель опорного 4 и сигнального 5 каналов, циркулятор 6, измерительный резонатор 7 с элементом перестройки его резонансной частоты 8, УПЧ опорного 9 и сигнального 10 каналов, фазочастотные дискриминаторы 11 и 12, делители частоты 13 и 14, синхронные детекторы 15 и 16, опорный генератор 17, устройство синтеза частот 18, трехпозиционный переключатель 19, импульсный модулятор фазы 20, усилитель переменного тока 21 и импульсный демодулятор 22.

Изобретение относится к нанотехнологиям и может быть использовано в области разработки материалов на основе алмаза для магнитометрии, квантовой оптики, биомедицины, а также в информационных технологиях, основанных на квантовых свойствах спинов и одиночных фотонов.

Изобретение относится к технической физике и может быть использовано при изготовлении спектрометров электронного парамагнитного резонанса (ЭПР). Когерентный супергетеродинный спектрометр электронного парамагнитного резонанса содержит устройство суммирования напряжений, генератор модуляции, синхронный детектор, фазовращатель сигнала модуляции и двухпозиционный переключатель, а первый фазовращатель выполнен управляемым, причем один из входов устройства суммирования напряжений соединен с общим контактом первой секции двухполюсного переключателя, второй - с общим контактом двухпозиционного переключателя, а выход - с управляющим частотой электродом сигнального генератора СВЧ, выход генератора модуляции соединен с одним из переключаемых контактов двухпозиционного переключателя и со входом фазовращателя сигнала модуляции, выход которого соединен с опорным входом дополнительного синхронного детектора, сигнальный вход которого соединен с выходом второго синхронного детектора, частота сигнала генератора модуляции меньше граничной частоты полосы пропускания петли ФАПЧ гетеродинного генератора, но больше граничной частоты полосы пропускания петли ФАПЧ сигнального генератора.

Использование: для определения позиций примесей соединений азота в гидроксиапатитах. Сущность изобретения заключается в том, что облучают образец гидроксиапатита рентгеновскими, гамма- или электронными лучами с последующей регистрацией методом ЭПР возникших при облучении парамагнитных центров на сертифицированном ЭПР спектрометре, вычисляют спектральные характеристики наблюдаемого спектра ЭПР (число наблюдаемых линий и их положение) с контролем погрешности измерений и сравнивают полученные спектральные характеристики со спектральными характеристиками азотных радикалов, при этом производят дополнительное сравнение полученных ранее спектральных характеристик со спектральными характеристиками азотных радикалов в различных позициях, замещающих функциональные группы OH и(или) PO4 в структуре гидроксиапатита, в частности, с возможностью определения мест(а) внедрения (замещения) примесей соединений азота в структуру гидроксиапатита.

Изобретение относится к области проведения петрографических исследований, а именно к технологии изготовления шлифов из образцов, содержащих различные углеводороды, битумы и асфальтены.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ лечения онкологических заболеваний.

Изобретение относится к иммунологии. Предложено антитело и его антигенсвязывающий фрагмент против эпитопа, расположенного в С-концевой части клаудина 18.2 (CLDN18.2).

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях для стандартизации и контроля качества лекарственных средств.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования риска развития эссенциальной гипертензии. У индивидуумов русской национальности, являющихся жителями Центрального Черноземья, осуществляют выделение ДНК из периферической венозной крови и анализ генетических маркеров матриксных металлопротеиназ.

Изобретение относится к молекулярной онкологии и представляет собой способ прогнозирования метастазов в регионарные лимфоузлы при аденокарциноме желудка, отличающийся тем, что осуществляют амплификацию фрагментов локусов В2М, NFKB1 и HER2 NFKB1 и HER2 методом ПЦР в реальном времени, рассчитывают относительную копийность генов по формуле rC=rCопухоль/rCнорма=2-ΔCt(опухоль/2-ΔCt(норма), где rC - относительная копийность гена, ΔCt - разность среднего значения сигналов флюоресценции (Ct) по трем повторам для гена мишени и среднего Ct по трем повторам для референсного гена: ΔCt=Ct(ген мишень)-Ct(B2M), осуществляют иммуногистохимическое исследование на срезах парафиновых блоков с помощью моноклональных антител к Ki67 и HER2, и при значениях rCNFKB1<0,8±0,02 и rCHER2<1,1±0,08 в комбинации с уровнем экспрессии в ядрах опухолевых клеток белка Ki67игх<35,6±6,1 и негативной экспрессией HER2игх(-) прогнозируют отсутствие метастазов, а при значениях rCNFKB1>0,9±0,01 и rCHER2>2,0±0,1 в комбинации с уровнем экспрессии в ядрах опухолевых клеток белка Ki67игх>54,2±4,9 и позитивной экспрессией HER2игх (+++) прогнозируют развитие метастазов.

Изобретение относится к области проведения петрографических исследований аргиллитов баженовской свиты и подобных пород и может быть использовано при изготовлении шлифов из мягких слабых и/или трещиноватых образцов осадочных горных пород.

Изобретение относится к измерительной технике и может быть использовано при исследовании процессов массопереноса и для определения коэффициентов диффузии растворителей в изделиях из ортотропных листовых капиллярно-пористых материалов в бумажной, легкой, строительной и других отраслях промышленности.

Группа изобретений относится к области анализа, в частности к аппаратам разжижения и фильтрации для получения раствора для анализа кала. Аппарат для разжижения и фильтрации содержит компонент для отбора проб, верхнюю крышку и корпус пробоотборной трубки.

Изобретение относится к способам изготовления стандартных образцов почвы для оперативного и статистического контроля погрешности результатов измерений. Способ изготовления стандартных образцов массовой доли тяжелых металлов в почве включает отбор почвы в естественных условиях, сушку, измельчение, просеивание и усреднение почвенного материала, приготовление водного раствора солей тяжелых металлов заданной концентрации, смешивание почвы с раствором солей тяжелых металлов, испарение воды при 105°С и аттестацию полученного материала по массовой доле тяжелых металлов, что позволит осуществлять контроль методик выполнения измерений при определении содержания тяжелых металлов в почвах.

Изобретение относится к медицине. Описан биомиметический коллаген-гидроксиапатитный композитный материал, включающий частично волоконный коллагеновый каркас, включающий зрелые природные коллагеновые волокна, которые характеризуются тройной спиральностью по данным спектроскопии кругового дихроизма, причем эти зрелые природные волокна коллагена по крайней мере частично покрыты эпитаксиально выращенными кристаллами нанокристаллического гидроксиапатита и при этом эпитаксиально выращенные нанокристаллы характеризуются морфологией и размерами, аналогичными костному минералу человека, то есть длина составляет от 30 до 50 нм, а ширина от 14 до 25 нм.

Изобретение относится к области регенеративной медицины. Предложен способ подготовки матрикса для создания биоинженерной конструкции пищевода в эксперименте. Осуществляют выделение и очищение пищевода экспериментальных животных от окружающей соединительной ткани, канюлирование краниальной и каудальной частей пищевода, децеллюляризацию детергентами и энзимами и отмывание пищевода от децеллюляризирующих растворов. Качество децеллюляризации подтверждают путем иммуногистохимического анализа по наличию коллагенов I и IV типов, ламинина, эластина, фибронектина и отсутствию гладкомышечного актина, тропомиозина, компонентов дыхательной цепи митохондрий, а также по отсутствию выраженной клеточной воспалительной реакции на пробу подкожной имплантации подготовленного матрикса in vivo. Изобретение обеспечивает повышение качества получаемого матрикса. 1 табл., 1 пр.

Наверх