Лечение инфекций h. pylori с применением ингибиторов mtan

Изобретение относится к способу лечения инфекций Helicobacter pylori (H. Pylori). Для лечения инфекции Helicobacter pylori (H. pylori) у индивидуума осуществляют введение индивидууму соединения формулы (I) в количестве, эффективном для ингибирования роста H. pylori, где формула (I) представляет собой

(I),

где R представляет собой Q или CH2SQ, где Q представляет собой C1-C9-алкил, арил, гетероарил, аралкил или C4-C7-циклоалкил, и где Q является необязательно замещенным одним или несколькими выбранными из галогена, OH- и/или NH2-групп, или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира. Изобретение позволяет повысить эффективность борьбы с инфекцией. 4 н. и 21 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл.

 

ПРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННУЮ ЗАЯВКУ

[0001] Для настоящей заявки испрашивается приоритет по предварительной патентной заявке США № 61/938755, зарегистрированной 12 февраля 2014 года, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

ЗАЯВЛЕНИЕ О ГОСУДАРСТВЕННОЙ ПОДДЕРЖКЕ

[0002] Настоящее изобретение получено при государственной поддержке по гранту № GM41916, выданному National Institutes of Health, и по гранту Center for Synchrotron Biosciences № P30-EB-009998, выданному National Institute of Biomedical Imaging and Bioengineering (NIBIB). Правительство имеет определенные права на изобретение.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0003] Изобретение относится к лечению инфекций Helicobacter pylori (H. pylori) с применением ингибиторов MTAN (5'-метилтиоаденозиннуклеозидазы) H. pylori, в частности, у индивидуумов, имеющих пептическую язву.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0004] На всем протяжении настоящей заявки различные публикации обозначают с помощью сносок. Полное цитирование для этих ссылок можно найти в конце описания перед формулой изобретения. Таким образом, описания этих публикаций включены в настоящую заявку посредством ссылок в полном объеме для более полного описания уровня техники, к которому относится настоящая заявка.

[0005] H. pylori является грамотрицательной бактерией и существует микроаэрофильно в слизистой оболочке желудка человека-хозяина. Она связана с 85 процентами случаев язвы желудка и 95 процентами случаев язвы двенадцатиперстной кишки1. В клинических изолятах H. pylori преобладает устойчивость к лекарственным средствам. После менее чем тридцати лет специфического лечения антибиотиками становится все труднее осуществлять эрадикацию H. pylori с использованием комбинации двух антибиотиков при двухнедельной терапии2. Для лечения инфекций H. pylori необходимы антибиотики с новыми мишенями и механизмами действия.

[0006] Грамотрицательные бактерии зависят от менахинонов в качестве транспортеров электронов при дыхании и имеют поддерживаемые пути биосинтеза для этих необходимых метаболитов3. В отличие от этого, у людей отсутствует путь синтеза менахинона, и воздействие на путь менахинона представляет собой подход для дизайна антибактериальных лекарственных средств. Недавно представлен путь синтеза менахинона в Campylobacter и Helicobacter, отличающийся от большинства бактерий4,5. В этом пути 6-амино-6-дезоксифуталозин синтезируется с помощью MqnA и расщепляется по N-рибозильной связи с помощью MTAN со специфичностью, также распространяющейся на 5′-метилтиоаденозин и аденозилгомоцистеин, а также 6-амино-6-дезоксифуталозин. HpMTAN превращает 6-амино-6-дезоксифуталозин в аденин и дегипоксантин футалозин, последний из которых служит процессором при синтезе менахинона. Ранние реакции этого пути не существуют в нормальной бактериальной флоре людей, что делает ферменты, катализирующие эти реакции, привлекательными мишенями для лекарственных средств. HpMTAN тесно связана с 5′-метилтиоаденозин/S-аденозилгомоцистеингидролазами (MTAN), обнаруживаемыми у других бактерий. Хорошо изученные MTAN ассоциированы с чувством кворума и круговоротом S-аденозилметионина у большинства видов и не являются необходимыми для бактериального роста6. Разработаны ингибиторы аналогов переходных комплексов с аффинностью от пикомолярной до фемтомолярной для противодействия бактериальным функциям, ассоциированным с чувством кворума6,7.

[0007] Настоящее изобретение направлено на удовлетворение потребности в новых соединениях, избирательно блокирующих рост H. pylori.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0008] Изобретение относится к способам лечения инфекции Helicobacter pylori (H. pylori) у индивидуума, включающим введение индивидууму соединения формулы (I) в количестве, эффективном для ингибирования роста H. pylori, где формула (I) представляет собой

(I)

где R представляет собой Q или CH2SQ, где Q представляет собой C1-C9-алкил, арил, гетероарил, аралкил или C4-C7-циклоалкил, и где Q является необязательно замещенным одним или несколькими из галогена, OH- и/или NH2-групп,

или его фармацевтически приемлемую соль или сложный эфир.

[0009] Изобретение дополнительно относится к соединению, имеющему структуру:

,,,,,,,,,,,,,,или,

или его фармацевтически приемлемой соли или сложному эфиру.

[0010] Фиг. 1 - концентрация гексил-SerMe-иммуциллина A в желудочной слизи мыши относительно времени после введения однократной дозы 10 мг/кг PO.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0011] Изобретение относится к способу лечения инфекции Helicobacter pylori (H. pylori) у индивидуума, включающему введение индивидууму соединения формулы (I) в количестве, эффективном для ингибирования роста H. pylori, где формула (I) представляет собой

(I)

где R представляет собой Q или CH2SQ, где Q представляет собой C1-C9-алкил, арил, гетероарил, аралкил или C4-C7-циклоалкил, и где Q является необязательно замещенным одним или несколькими из галогена, OH- и/или NH2-групп,

или его фармацевтически приемлемой соли или сложному эфиру.

[0012] Предпочтительные соединения включают соединения, имеющие формулу

.

[0013] Q может представлять собой, например, C1-C9-алкил, например, C1-C5-алкил; например, метильную (Me), этильную (Et), пропильную (Pr), бутильную или пентильную группу. Q может представлять собой, например, C4-C7-циклоалкил, т.е. C4-циклоалкил, C5-циклоалкил, C6-циклоалкил или C7-циклоалкил. Q может представлять собой, например, арил. Термин "арил" означает ароматический радикал, содержащий от 4 до 12 атомов углерода. Примеры включают фенил, 1-нафтил и 2-нафтил. "Гетероарил" означает 4-12-членное кольцо, включающее один или несколько атомов N, S, или O в кольце. Примеры включают имидазол-4-ил, имидазол-2-ил, тиазол-2-ил, тиазол-4-ил, тиазол-5-ил, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридин-4-ил и пиразин-2-ил. Предпочтительные арилы и гетероарилы включают те, которые содержат 5 или 6 членов в кольце. Предпочтительно, аралкил включает C1-C3-алкильную группу и 4-6-членное кольцо, которое может включать гетероатомы.

[0014] Q можно замещать одним или несколькими из галогена, гидроксильной или NH2-групп. Предпочтительными галогенами являются Cl, F, Br или I. Хлор и фтор являются более предпочтительными галогенами. Замену можно осуществлять в орто-, мета или пара-положении.

[0015] Предпочтительные соединения включают те, в которых R представляет собой Q или CH2SQ, где Q представляет собой линейный C2-C9-алкил, арил, гетероарил, аралкил или C4-C7-циклоалкил, и где Q является необязательно замещенным одним или несколькими из галоген, OH- и/или NH2-групп. Предпочтительные соединения также включают те, в которых Q представляет собой линейный C3-C9-алкил или гетероарил.

[0016] Предпочтительные соединения включают те, которые выбраны из группы, состоящей из

,,,,,,,,,,,,,и,

или его фармацевтически приемлемой соли или сложному эфиру.

[0017] Настоящее изобретение относится к способу лечения инфекции Helicobacter pylori (H. pylori) у индивидуума, включающему введение индивидууму соединения в количестве, эффективном для ингибирования роста H. pylori, где соединение выбрано из группы, состоящей из:

,,,,,,,,,,,,,,и,

или его фармацевтически приемлемой соли или сложному эфиру.

[0018] Изобретение дополнительно относится к соединению, имеющему структуру:

,,,,,,,,,,,,,или,

или его фармацевтически приемлемой соли или сложному эфиру.

[0019] Термин "фармацевтически приемлемые соли" включает нетоксичные соли, полученные из неорганических или органических кислот, включая, например, следующие кислые соли: ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфаты, бутират, цитрат, камфорат, камфоросульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, формиат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гликолят, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, йодогидрат, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, малонат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, оксалат, пальмоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пикрат, пивалат, пропионат, p-толуолсульфонат, салицилат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат и ундеканоат.

[0020] Предпочтительно, соединение вводят в количестве, эффективном для ингибирования 5'-метилтиоаденозиннуклеозидазы (MTAN) H. pylori.

[0021] Предпочтительно, соединение ингибирует рост H. pylori, но не ингибирует рост одной или нескольких бактерий, выбранных из группы, состоящей из E. coli, V. cholerae, S. aureus, K. pneumoniae, S. flexneri, S. enterica и P. aeruginosa. Более предпочтительно, соединение не ингибирует рост всех из E. coli, V. cholerae, S. aureus, K. pneumoniae, S. flexneri, S. enterica и P. aeruginosa. Предпочтительно, соединение является более эффективным в ингибировании роста H. pylori, чем амоксициллин, метронидазол или тетрациклин.

[0022] Предпочтительно, индивидуум имеет пептическую язву, такую как язва желудка или язва двенадцатиперстной кишки.

[0023] Предпочтительно, соединение вводят перорально. В случае перорального введения, соединение можно составлять в твердых или жидких препаратах, например, таблетках, капсулах, порошках, растворах, суспензиях и дисперсиях. Соединение можно составлять со средствами, такими как, например, лактоза, сахароза, кукурузный крахмал, желатин, картофельный крахмал, альгиновая кислота и/или стеарат магния.

[0024] Соединение также можно вводить индивидууму другими путями, известными в этой области, такими как, например, парентеральный, посредством ингаляции, местный, ректальный, назальный, буккальный или посредством имплантированного резервуара. Соединение можно вводить с помощью средств с замедленным высвобождением.

[0025] Изобретение дополнительно относится к применению соединения, ингибирующего MTAN Helicobacter pylori (H. pylori), для получения лекарственного средства для лечения инфекции H. pylori. Изобретение также относится к соединению, ингибирующему MTAN Helicobacter pylori (H. pylori), для применения в лечении инфекции H. pylori.

[0026] Изобретение дополнительно относится к применению соединения, ингибирующего MTAN Helicobacter pylori (H. pylori), для получения лекарственного средства для лечения пептической язвы. Изобретение также относится к соединению, ингибирующему MTAN Helicobacter pylori (H. pylori), для применения в лечении пептической язвы.

[0027] Способы по настоящему изобретению также можно применять для лечения инфекций другими видами Helicobacter и видами Campylobacter, такими как C. jejuni.

[0028] Изобретение дополнительно относится к фармацевтической композиции, содержащей любое из соединений, представленных в настоящем описании, и фармацевтически приемлемый носитель. Как применяют в настоящем описании, "фармацевтически приемлемый носитель" (i) совместим с другими ингредиентами композиции, не делая композицию неподходящей для предполагаемой цели, и (ii) пригоден для использования в отношении индивидуумов, как представлено в настоящем описании, без чрезмерных побочных эффектов (таких как токсичность, раздражение и аллергический ответ). Побочные эффекты являются "чрезмерными", когда их риск перевешивает пользу, приносимую композицией. Не ограничивающие примеры фармацевтически приемлемых носителей включают любые из стандартных фармацевтических носителей, такие как фосфатно-солевые буферные растворы, вода и эмульсии, такие как эмульсии масла/воды и микроэмульсии.

[0029] Настоящее изобретение будет более понятным с учетом следующих подробностей экспериментов. Однако специалисту в этой области будет понятно, что конкретные способы и обсуждаемые результаты представлены исключительно в целях иллюстрирования изобретения, более подробно описанного в формуле изобретения ниже.

ПОДРОБНОСТИ ЭКСПЕРИМЕНТОВ

ПРИМЕР 1

Материалы и способы

[0030] Материалы. H. pylori (J99 и 43504), K. pneumoniae, S. flexneri, S. enterica, S. aureus и P. aeruginosa приобретали в American Type Culture Collection. Дефибринированную кровь лошади (DHB) получали из Hemostat Laboratories (Dixon, CA). Триптический соевый агар (TSA) приобретали в Becton Dickinson and Company (Sparks, MD). Агар МакКонки получали из Oxoid LTD. (Basingstoke, Hampshire, England). Ксантиноксидазу и 5ʹ-метилтиоаденозин приобретали в Sigma-Aldrich (St Louis, MO). Остальные материалы приобретали с наиболее высокой доступной чистотой.

[0031] Очистка HpMTAN. Способ очистки HpMTAN описывали ранее10. В кратком изложении, клетки BL21 (DE3), несущие плазмиду, кодирующую HpMTAN с N-концевой меткой His6, выращивали до оптической плотности 0,7, измеряемой при 595 нм, и вносили IPTG до конечной концентрации 0,5 мМ. Через 15 часов при 22°C клетки собирали посредством центрифугирования. Осадок суспендировали, а затем разрушали с помощью ячейки давления и обработки ультразвуком. Растворимую часть наносили на колонку Ni-NTA и элюировали HpMTAN с использованием градиента концентрации имидазола от 200 до 500 мМ. Белок обессоливали с использованием колонки для гель-фильтрации Superdex G15, затем уравновешивали и концентрировали в 10 мМ Hepes, 30 мМ KCl, pH 7,6. Чистоту подтверждали посредством электрофореза в ПААГ в присутствие SDS.

[0032] Определение Ki. Кинетику HpMTAN определяли с использованием прямого анализа, включающего непрерывное снижение поглощения при 274 нм вследствие образования свободного аденина из 5ʹ-метилтиоаденозина. Значения Ki и Ki* определяли с использованием сопряженных анализов, в которых ксантиноксидазу использовали в качестве присоединяющего фермента, и наблюдали повышение поглощения при 292 нм с превращением продукта аденина в 2,8-дигидроксиаденин. Оба анализа описаны ранее8.

[0033] Выращивание бактерий. H. pylori выращивали в течение 72 часов в микроаэрофильных условиях (5% O2, 10% CO2 и 85% N2) при 37°C на триптическом соевом агаре с 5% кровью лошади. Для определения значений MIC тестируемое вещество добавляли в раствор геля непосредственно перед разливкой. Для сравнения зон ингибирования в центр диска после распространения H. pylori добавляли конкретные антибиотики, а, затем H. pylori позволяли расти в течение 72 часов в микроаэрофильных условиях при 37°C.

[0034] Общий эксперимент для соединений. Все реакции осуществляли в атмосфере аргона. Органические растворы сушили с помощью безводного MgSO4 и выпаривали растворители при пониженном давлении. Безводные и хроматографические растворители получали в коммерческих источниках и использовали без какой-либо дополнительной очистки. Трет-бутоксид калия возгоняли при 220°C/0,1 мм рт.ст. Тонкослойную хроматографию (TLC) осуществляли на стекле или листах алюминия, покрытых силикагелем 60 F254. Органические соединения визуализировали под УФ-излучением и/или погружали в 0,1% нингидрин в EtOH, раствор Эрлиха или молибдат аммония (5% масс.) и сульфат церия (IV)⋅4 H2O (0,2% масс.) в воде. H2SO4 (2 M). Хроматографию (флэш-хроматографию или хроматографию с помощью автоматизированной системы с оборудованием для непрерывного градиента) осуществляли на силикагеле (40-63 мкм). Вращение плоскости поляризации света регистрировали при длине пути 1 дм и выражали в единицах 10-1град см2 г-1; концентрации выражали в г/100 мл. 1H-спектры ЯМР измеряли в CDCl3 или CD3OD (внутренний Me4Si, δ 0) и 13C-спектры ЯМР в CDCl3 (центральная линия, как указано) или CD3OD (центральная линия, как указано). Определение резонансов 1H и 13C основано на экспериментах 2D (1H-1H DQF-COSY, 1H-13C HSQC) и DEPT. Используемые сокращения: с, синглет, д, дублет, т, триплет, к, квартет, ш.с., широкий синглет, ш.т., широкий триплет, дд, дублет дублетов, ддд, дублет дублетов дублетов, дт, дублет триплетов. Массовые спектры с электрораспылением с высоким разрешением (ESI-HRMS) регистрировали с помощью тандемного масс-спектрометра Q-TOF.

[0035] Пример A. Синтез 2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]этан-1-ола (A.1).

[0036] 2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]этан-1-ол (A.1). 2-Аминоэтанол (0,099 мл, 1,64 ммоль), 9-деазааденин (0,220 г, 1,64 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,15 мл, 1,99 ммоль) смешивали в трет-бутаноле (3 мл) при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl3-MeOH-28% водн. NH4OH, 70:25:5). Выпаривали фракции, содержащие продукт, и остаток снова хроматографировали на силикагеле (2-PrOH-28% водн. NH4OH, 92:8) для получения A.1 в виде бесцветного твердого вещества (0,101 г, 30%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 3,95 (с, 2H), 3,68 (т, J=5,6 Гц, 2H), 2,78 (т, J=5,6 Гц, 2H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,9 (CH), 146,6 (C), 129,0 (CH), 115,4 (C), 114,4 (C), 61,6 (CH2), 51,6 (CH2), 43,4 (CH2). ESI-HRMS вычислены для C9H14N5O+, (M+H)+, 208,1193, найдено 208,1192.

[0037] Пример B. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]пропан-1-ола (B.1).

[0038] (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]пропан-1-ол (B.1). (2S)-2-аминопропан-1-ол (0,120 г, 1,60 ммоль), 9-деазааденин (0,179 г, 1,33 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,12 мл, 1,60 ммоль) смешивали в трет-бутаноле (3 мл) при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl3-MeOH-28% водн. NH4OH, 80:18,5:1,5) для получения B.1 в виде бесцветного твердого вещества (0,180 г, 61%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 4,01 (д, J=13,6 Гц, 1H), 3,92 (д, J=13,6 Гц, 1H), 3,54 (дд, J=11,0, 4,8 Гц, 1H), 3,43 (дд, J=11,0, 7,0 Гц, 1H), 2,84 (м, 1H), 1,09 (д, J=6,5 Гц, 3H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,9 (CH), 146,5 (C), 128,9 (CH), 115,4 (C), 114,5 (C), 66,6 (CH2), 54,8 (CH), 41,0 (CH2), 16,5 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C10H16N5O+, (M+H)+, 222,1350, найдено 222,1349.

[0039] Пример C. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]бутан-1-ола (C.1).

[0040] (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]бутан-1-ол (C.1). (2S)-2-аминобутан-1-ол (0,100 г, 1,12 ммоль), 9-деазааденин (0,150 г, 1,12 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,101 мл, 1,35 ммоль) смешивали в трет-бутаноле (3 мл) при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl3-7M NH3/MeOH, 9:1, затем 85:15) для получения C.1 в виде бесцветного твердого вещества (0,133 г, 50%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 3,99 (д, J=13,6 Гц, 1H), 3,95 (д, J=13,6 Гц, 1H), 3,67 (дд, J=11,2, 4,4 Гц, 1H), 3,48 (дд, J=11,2, 6,5 Гц, 1H), 2,61 (м, 1H), 1,62-1,53 (м, 1H), 1,51-1,42 (м, 1H), 0,91 (т, J=7,5 Гц, 3H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 128,9 (CH), 115,4 (C), 114,8 (C), 63,9 (CH2), 60,9 (CH), 41,1 (CH2), 24,6 (CH2), 10,7 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C11H17N5NaO+, (M+Na)+, 258,1326, найдено 258,1321.

[0041] Пример D. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]пентан-1-ола (D.1).

[0042] (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]пентан-1-ол (D.1). (2S)-2-аминопентан-1-ол (0,050 г, 0,48 ммоль), 9-деазааденин (0,065 г, 0,48 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,044 мл, 0,59 ммоль) смешивали в трет-бутаноле (2 мл) при 70°C в течение ночи. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl3-7M NH3/MeOH, 9:1, затем 85:15) для получения D.1 в виде бесцветного твердого вещества (0,073 г, 60%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD):δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 3,99 (д, J=13,7 Гц, 1H), 3,96 (д, J=13,7 Гц, 1H), 3,66 (дд, J=11,3, 4,4 Гц, 1H), 3,48 (дд, J=11,3, 6,6 Гц, 1H), 2,69 (м, 1H), 1,54-1,30 (м, 4H), 0,89 (т, J=7,2 Гц, 3H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 128,9 (CH), 115,4 (C), 114,7 (C), 62,3 (CH2), 59,2 (CH), 41,1 (CH2), 34,3 (CH2), 20,3 (CH2), 14,6 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C12H20N5O+, (M+H)+, 250,1663, найдено 250,1663.

[0043] Пример E. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]гексан-1-ола (E.1).

[0044] (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]гексан-1-ол (E.1). (2S)-2-аминогексан-1-ол (0,100 г, 0,85 ммоль), 9-деазааденин (0,114 г, 0,85 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,077 мл, 1,02 ммоль) смешивали при 70°C в трет-бутаноле (3 мл) в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl3-7M NH3/MeOH, 9:1, затем 85:15) для получения E.1 в виде бесцветного твердого вещества (0,112 г, 50%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 3,97 (с, 2H), 3,65 (дд, J=11,2, 4,4 Гц, 1H), 3,48 (дд, J=11,2, 6,6 Гц, 1H), 2,66 (м, 1H), 1,55-1,38 (м, 2H), 1,32-1,22 (м, 4H), 0,88 (т, J=7,1 Гц, 3H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 128,9 (CH), 115,4 (C), 114,7 (C), 64,4 (CH2), 59,3 (CH), 41,2 (CH2), 31,7 (CH2), 29,3 (CH2), 23,9 (CH2), 14,3 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C13H21N5NaO+, (M+Na)+, 286,1644, найдено 286,1644.

[0045] Пример F. Синтез (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]гексан-1-ола (F.1).

[0046] (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]гексан-1-ол (F.1). (2R)-2-аминогексан-1-ол (0,100 г, 0,85 ммоль), 9-деазааденин (0,114 г, 0,85 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,077 мл, 1,02 ммоль) смешивали при 70°C в трет-бутаноле (3 мл) в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl3-7M NH3/MeOH, 9:1, затем 85:15) для получения F.1 в виде бесцветного твердого вещества (0,108 г, 48%). 1H- и 13C-спектры ЯМР являлись идентичными энантиомеру E.1. ESI-HRMS вычислены для C13H22N5O+ (M+H)+, 264,1819, найдено 264,1717.

[0047] Пример G. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-метилбутан-1-ола (G.1).

[0048] (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-метилбутан-1-ол (G.1). (2S)-2-амино-3-метилбутан-1-ол (0,100 г, 0,97 ммоль) 9-деазааденин (0,130 г, 0,97 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,087 мл, 1,16 ммоль) смешивали в трет-бутаноле (3 мл) при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl3-7M NH3/MeOH, 93:7, затем 85:15) для получения G.1 в виде бесцветного твердого вещества (0,082 г, 34%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 3,99 (д, J=13,6 Гц, 1H), 3,95 (д, J=13,6 Гц, 1H), 3,68 (дд, J=11,3, 4,8 Гц, 1H), 3,54 (дд, J=11,3, 6,5 Гц, 1H), 2,49 (м, 1H), 1,90 (м, 1H), 0,93 (д, J=6,9 Гц, 3H), 0,88 (д, J=6,9 Гц, 3H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,8 (CH), 146,7 (C), 129,0 (CH), 115,4 (C), 115,0 (C), 64,6 (CH2), 62,3 (CH), 41,9 (CH), 29,8 (CH2), 19,2 (CH3), 18,9 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C12H20N5O+ (M+H)+, 250,1663, найдено 250,1661.

[0049] Пример H. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-4-метилпентан-1-ола (H.1).

[0050] (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-4-метилпентан-1-ол (H.1). (2S)-2-амино-4-метил-пентан-1-ол (0,100 г, 0,85 ммоль), 9-деазааденин (0,114 г, 0,85 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,077 мл, 1,02 ммоль) смешивали в трет-бутаноле (3 мл) при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl3-7M NH3/MeOH, 93:7, затем 85:15) для получения H.1 в виде бесцветного твердого вещества (0,102 г, 45%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 3,97 (с, 2H), 3,65 (дд, J=11,3, 4,4 Гц, 1H), 3,47 (дд, J=11,3, 6,5 Гц, 1H), 2,75 (м, 1H), 1,62 (м, 1H), 1,35 (ддд, J=13,7, 7,4, 6,2 Гц, 1H), 1,28 (ддд, J=13,9, 7,2, 7,2 Гц, 1H), 0,88 (д, J=6,6 Гц, 3H), 0,80 (д, J=6,6 Гц, 3H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 129,0 (CH), 115,5 (C), 114,7 (C), 64,6 (CH2), 57,2 (CH), 41,6 (CH2), 41,0 (CH2), 26,0 (CH), 23,3 (CH3), 23,1 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C13H22N5O+, (M+H)+, 264,1819, найдено 264,1820.

[0051] Пример I. Синтез (2S,3S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-метилпентан-1-ола (I.1).

[0052] (2S,3S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-метилпентан-1-ол (I.1). (2S,3S)-2-Амино-3-метилпентан-1-ол (0,120 г, 1,02 ммоль), 9-деазааденин (0,137 г, 1,02 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,092 мл, 1,22 ммоль) нагревали и смешивали в трет-бутаноле (3 мл) при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl3-7M NH3/MeOH, 92:8, затем 89:11, затем 85:15) для получения I.1 в виде бесцветного воскообразного твердого вещества (0,120 г, 45%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 3,98 (с, 2H), 3,69 (дд, J=11,3, 4,3 Гц, 1H), 3,51 (дд, J=11,3, 7,1 Гц, 1H), 2,62 (ддд, J=7,0. 4,4, 4,4 Гц, 1H), 1,67 (м, 1H), 1,46 (м, 1H), 1,17 (м, 1H), 0,89-0,85 (м, 6H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,8 (CH), 146,7 (C), 129,0 (CH), 115,4 (C), 114,9 (C), 63,1 (CH), 62,1 (CH2), 41,8 (CH2), 36,7 (CH), 27,2 (CH2), 15,0 (CH3), 12,3 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C13H22N5O+, (M+H)+, 264,1819, найдено 264,1820.

[0053] Пример J. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-2-фенилэтан-1-ола (J.1).

[0054] (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-2-фенилэтан-1-ол (J.1). (2S)-2-амино-2-фенил-этанол (0,150 г, 1,09 ммоль), 9-деазааденин (0,147 г, 1,10 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,098 мл, 1,31 ммоль) смешивали и нагревали в трет-бутаноле (3 мл) при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl3-7M NH3/MeOH, 92:8, затем 89:11, затем 85:15) для получения J.1 в виде бесцветной пены (0,117 г, 38%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,14 (с, 1H), 7,38-7,31 (м, 5H), 7,28-7,24 (м, 1H), 3,88-3,82 (м, 2H), 3,75 (д, J=13,8 Гц, 1H), 3,65 (дд, J=11,0, 4,9 Гц, 1H), 3,60 (дд, J=11,0, 8,4 Гц, 1H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,0 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 141,5 (C), 129,6 (CH), 129,0 (CH), 128,8 (CH), 128,6 (CH), 115,5 (C), 114,7 (C), 67,7 (CH2), 65,4 (CH), 41,7 (CH2). ESI-HRMS вычислены для C15H18N5O+, (M+H)+, 284,1506, найдено 284,1501.

[0055] Пример K. Синтез (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-[(4-хлорфенил)сульфанил]пропан-1-ола (K.3).

[0056] Трет-бутил(4R)-4-{[(4-хлорфенил)сульфанил]метил}-2,2-диметил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат (K.1).

Этап 1. Метансульфонилхлорид (0,40 мл, 5,19 ммоль) по каплям добавляли к перемешанному раствору трет-бутил(4S)-4-(гидроксиметил)-2,2-диметил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилата [полученного, как описано для его энантиомера, Dondoni, et al.13] (1,00 г, 4,32 ммоль) и триэтиламина (1,22 мл, 8,65 ммоль) в CH2Cl2 (15 мл) при 0°C. Смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 20 мин, затем промывали насыщенным NaHCO3 (3×5 мл), сушили и выпаривали растворитель для получения сырого мезилата в виде маслянистого вещества (1,22 г, 3,94 ммоль).

[0057] Этап 2. 4-Хлорбензол-1-тиол (0,351 г, 2,42 ммоль) добавляли к раствору гидрида натрия (60%, 0,089 г, 2,23 ммоль) в DMF (3 мл) при 0°C. Через 20 мин добавляли раствор мезилата из описываемого выше этапа 1 (0,30 г, 0,97 ммоль) в DMF (0,75 мл) и смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 часов. Добавляли воду (2 мл) и смесь экстрагировали с помощью Et2O (60 мл). Экстракт промывали H2O (3×5 мл), водным раствором солей (5 мл), сушили и выпаривали растворитель до получения бесцветного маслянистого вещества, которое хроматографировали на силикагеле (градиент 0-6% EtOAc в гексанах) для получения K.1 в виде бесцветной смолы (0,234 г, 67%). [α]-17,9 (c 1,05, CHCl3). 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 7,40-7,30 (м, 2H), 7,28-7,22 (м, 2H), 4,11-3,98 (м, 1,5H), 3,94-3,89 (м, 1,5H), 3,50 (д, J=13,7 Гц, 0,5H), 3,27 (д, J=13,4 Гц, 0,5H), 2,79 (дд, J=13,5, 10,7 Гц, 1H), 1,63-1,56 (м, 3H), 1,51-1,42 (м, 12H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CDCl3, центральная линия δ 77,0): δ 152,1, 151,4 (C), 134,2, 133,8 (C), 132,5, 131,6 (C), 130,9, 129,3 (CH), 129,1 (CH), 94,5, 93,9 (C), 80,5, 80,3 (C), 66,0 (CH2), 56,6, 56,3 (CH), 35,7, 33,8 (CH2), 28,5, 28,4 (CH3), 27,7, 27,0 (CH3), 24,3, 23,1 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C17H2435ClNNaO3S+, (M+Na)+, 380,1058, найдено 380,1056.

[0058] (2R)-2-амино-3-[(4-хлорфенил)сульфанил]пропан-1-ол гидрохлорид (K.2). Соединение K.1 (0,228 г, 0,64 ммоль) растворяли в MeOH (3 мл), охлаждали до 0°C и добавляли водный раствор соляной кислоты (36%, 2 мл). Перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 16 часов, затем выпаривали растворитель для получения K.2 в виде бесцветного твердого вещества (0,161 г, 99%). [α]-27,7 (c 1,09, MeOH). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 7,47 (д, J=8,6 Гц, 2H), 7,36 (д, J=8,7 Гц, 2H), 3,82 (дд, J=11,7, 3,4 Гц, 1H), 3,74 (дд, J=11,7, 5,0 Гц, 1H), 3,30-3,25 (м, 2H), 3,19 (dd. J=16,3, 9,2 Гц, 1H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 134,31 (C), 134,26 (C), 132,9 (CH), 130,5 (CH), 61,2 (CH2), 53,5 (CH), 34,1 (CH2). ESI-HRMS вычислены для C9H1335ClNOS+, (M-HCl+H)+, 218,0401, найдено 218,0408.

[0059] (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-[(4-хлорфенил)сульфанил]пропан-1-ол (K.3). Соединение K.2 (0,151 г, 0,59 ммоль) растворяли в MeOH (10 мл) и нейтрализовали с помощью смолы Amberlyst A21. Затем смесь пропускали через короткую колонку с той же смолой и элюировали с помощью MeOH для получения свободной амино-формы K.2 в виде желтого маслянистого вещества (129 мг). Его растворяли в трет-бутаноле (3 мл), затем добавляли водный раствор формальдегида (37%, 0,060 мл, 0,80 ммоль) и 9-деазааденин (0,080 г, 0,60 ммоль) и перемешивали смесь при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl3-7M NH3/MeOH, 92:8, затем 85:15) и выпаривали фракции, содержащие продукт. Затем очищали остаток на силикагеле (CHCl3-MeOH-28% водн. NH4OH, 92:8:0,5) для получения K.3 в виде бесцветной пены (0,022 г, 10%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,35 (с, 1H), 7,13-7,08 (м, 4H), 4,02 (д, J=14,0 Гц, 1H), 3,92 (д, J=14,0 Гц, 1H), 3,70 (дд, J=11,3, 5,2 Гц, 1H), 3,66 (дд, J=11,3, 5,2 Гц, 1H), 3,13 (дд, J=13,8, 6,2 Гц, 1H), 2,92 (дд, J=13,8, 6,9 Гц, 1H), 2,75 (м, 1H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,0 (C), 150,8 (CH), 146,5 (C), 135,8 (C), 133,0 (C), 131,8 (CH), 129,8 (CH), 129,1 (CH), 115,5 (C), 114,4 (C), 63,5 (CH2), 57,0 (CH), 41,0 (CH2), 36,1 (CH2). ESI-HRMS вычислены для C16H1835ClN5NaOS+ (M+Na)+, 386,0813, найдено 386,0816.

[0060] Пример L. Синтез (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(бензилсульфанил)пропан-1-ола (L.3).

[0061] Трет-бутил(4R)-4-[(бензилсульфанил)метил]-2,2-диметил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат (L.1). Фенилметантиол (0,285 мл, 2,42 ммоль) добавляли к перемешанному раствору гидрида натрия (60%, 0,089 г, 2,23 ммоль) в DMF (3 мл) при 0°C. Через 20 мин добавляли раствор сырого мезилата (0,3 г, 0,97 ммоль, из этапа 1 получения K.1) в DMF (0,75 мл), затем смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 часов. Добавляли воду (2 мл) и смесь экстрагировали с помощью Et2O (60 мл). Экстракт промывали H2O (3×5 мл), водным раствором солей (5 мл), сушили и выпаривали растворитель до получения бесцветного маслянистого вещества, которое хроматографировали на силикагеле (градиент 0-6% EtOAc в гексанах) для получения L.1 в виде бесцветной смолы (0,166 г, 51%). [α] +61,7 (c 1,12, CHCl3). 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 7,40-7,28 (м, 4H), 7,26-7,20 (м, 1H), 4,09 (д, J=7,1 Гц, 0,5H), 3,99-3,85 (м, 2,5H), 3,76 (с, 2H), 2,86 (м, 1H), 2,51 (к, J=13,0 Гц, 1H), 1,58, 1,53, 1,49, 1,47, 1,46, 1,42 (6×с, 15H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CDCl3, центральная линия δ 77,0): δ 152,0, 151,4 (C), 138,5, 138,1 (C), 129,0, 128,7 (CH), 128,6, 128,4 (CH), 127,2, 126,9 (CH), 94,2, 93,7 (C), 80,3, 79,9 (C), 66,5 (CH2), 57,2, 56,9 (CH), 36,9, 36,4 (CH2), 34,8, 33,6 (CH2), 28,4 (CH3), 27,6, 26,8 (CH3), 24,4, 23,2 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C18H2735ClNNaO3S+ (M+Na)+, 360,1604, найдено 360,1592.

[0062] (2R)-2-амино-3-(бензилсульфанил)пропан-1-ол гидрохлорид (L.2). Соединение L.1 (0,166 г, 0,49 ммоль) растворяли в MeOH (3 мл), охлаждали до 0°C и добавляли водный раствор соляной кислоты (36%, 2 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 1,5 часов, выпаривали растворитель до получения бесцветной смолы, затертой до получения бесцветного твердого вещества (0,115 г, 100%). [α]-52,6 (c 0,91, MeOH). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 7,38-7,35 (м, 2H), 7,34-7,30 (м, 2H), 7,25 (м, 1H), 3,81 (с, 2H), 3,77 (дд, J=11,7, 3,8 Гц, 1H), 3,65 (дд, J=11,7, 5,7, Гц, 1H), 3,27 (м, 1H), 2,74 (дд, J=14,2, 6,7 Гц, 1H), 2,67 (дд, J=14,2, 7,4 Гц, 1H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 139,2 (C), 130,1 (CH), 129,7 (CH), 128,3 (CH), 61,5 (CH2), 53,7 (CH), 37,1 (CH2), 31,2 (CH2). ESI-HRMS вычислены для C10H1635ClNOS+, (M-HCl+H)+, 198,0948, найдено 198,0948.

[0063] (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(бензилсульфанил)пропан-1-ол (L.3). Соединение L.2 (0,170 г, 0,73 ммоль) растворяли в MeOH (10 мл) и нейтрализовали с помощью смолы Amberlyst A21. Затем смесь пропускали через небольшую колонку с той же смолой и элюировали с помощью MeOH для получения свободной амино-формы L.2 в виде желтого маслянистого вещества. Его растворяли в трет-бутаноле (3 мл), затем добавляли водный раствор формальдегида (37%, 0,071 мл, 0,95 ммоль) и 9-деазааденин (0,098 г, 0,73 ммоль) и перемешивали смесь при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl3-MeOH-28% водн. NH4OH, 92:8:0,5). Выпаривали фракции, содержащие продукт, а затем очищали остаток на силикагеле (градиент 2-10% 7M NH3/MeOH-CHCl3) для получения L.3 в виде бесцветного твердого вещества (0,021 г, 8%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,17 (с, 1H), 7,43 (с, 1H), 7,25-7,21 (м, 2H), 7,19-7,15 (м, 3H), 3,99 (д, J=13,8 Гц, 1H), 3,91 (д, J=13,8 Гц, 1H), 3,66 (дд, J=11,2, 4,9 Гц, 1H), 3,57 (дд, J=11,2, 5,5 Гц, 1H), 3,53 (д, J=1,6 Гц, 2H), 2,77 (м, 1H), 2,60 (дд, J=13,6, 6,4 Гц, 1H), 2,49 (дд, J=13,6, 6,9 Гц, 1H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,9 (CH), 146,6 (C), 139,8 (C), 129,9 (CH), 129,4 (CH), 129,1 (CH), 127,9 (CH), 115,5 (C), 114,7 (C), 63,8 (CH2), 57,8 (CH), 41,2 (CH2), 36,9 (CH2), 33,9 (CH2). ESI-HRMS вычислены для C17H21N5NaOS+ (M+Na)+, 366,1360, найдено 366,1362.

[0064] Пример P. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(1H-имидазол-4-ил)пропан-1-ола (P.4).

[0065] (4S)-4-{[1-(трифенилметил)-1H-имидазол-4-ил]метил}-1,3-оксазолидин-2-он или (4S)-4-{[1-(трифенилметил)-1H-имидазол-5-ил]метил}-1,3-оксазолидин-2-он (P.1). Следовали модифицированному способу из [Madrigal, et al.14]. (S)-Гистидинол дигидрохлорид (0,500 г, 2,34 ммоль) и диэтилкабонат (2,86 мл, 23,61 ммоль) смешивали в этаноле (24 мл), затем добавляли метоксид натрия в растворе метанола (25%, 1,6 мл, 7,0 ммоль). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 72 часов, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (CHCl3-MeOH-28% водн. NH4OH, 9:1:0,1) для получения (4S)-4-(1H-имидазол-4-илметил)-1,3-оксазолидин-2-она в виде бесцветного твердого вещества (0,26 г, 1,56 ммоль, чистота 90-95%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 7,61 (д, J=1,0 Гц, 1H), 6,93 (с, 1H), 4,45-4,40 (м, 1H), 4,18-4,12 (м, 2H), 2,86 (дд, J=14,7, 4,8 Гц, 1H), 2,80 (дд, J=14,8, 6,1 Гц, 1H). Его растворяли в DMF (4 мл), затем добавляли триэтиламин (0,42 мл, 3,00 ммоль) и трифенилхлорметан (0,489 г, 1,70 ммоль). Перемешивали смесь в течение 60 часов при комнатной температуре, затем разбавляли Et2O (60 мл) и смесь промывали H2O (4×5 мл), водным раствором солей (5 мл), сушили и выпаривали растворитель. Остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-5% MeOH в EtOAc) для получения P.1 в виде бесцветной пены (0,520 г, 54%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 7,41 (д, J=1,4 Гц, 1H), 7,39-7,34 (м, 9H), 7,16-7,11 (м, 6H), 6,82 (м, 1H), 4,39 (т, J=8,4 Гц, 1H), 4,19-4,11 (м, 2H), 2,78 (дд, J=14,6, 4,9 Гц, 1H), 2,73 (дд, J=14,6, 6,1 Гц, 1H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 162,1 (C), 143,6 (C×3), 139,8 (CH), 136,6 (C), 130,9 (CH), 129,32 (CH), 129,27 (CH), 121,6 (CH), 76,9 (C), 70,4 (CH2), 53,4 (CH), 33,9 (CH2). ESI-HRMS вычислены для C26H23N3NaO2+, (M+Na)+, 432,1683, найдено 432,1677.

[0066] (2S)-2-амино-3-[1-(трифенилметил)-1H-имидазол-4-ил]пропан-1-ол или (2S)-2-амино-3-[1-(трифенилметил)-1H-имидазол-5-ил]пропан-1-ол (P.2). Соединение P.1 (0,510 г, 1,25 ммоль) растворяли в 2-пропаноле (7 мл) и добавляли гидроксид калия (2 M, 3 мл, 6 ммоль). Смесь нагревали при 80°C в течение 6 часов, затем для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (CHCl3-MeOH-28% водн. NH4OH, 9:1:0,1) для получения P.2 в виде бесцветной смолы (0,478 г, 100%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 7,40 (д, J=1,4 Гц, 1H), 7,38-7,34 (м, 9H), 7,18-7,13 (м, 6H), 6,75 (м, 1H), 3,52 (дд, J=10,9, 4,5 Гц, 1H), 3,35 (дд, J=10,9. 6,8 Гц, 1H), 3,09-3,03 (м, 1H), 2,65 (дд, J=14,4, 6,0 Гц, 1H), 2,50 (дд, J=14,4, 7,4 Гц, 1H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 143,7 (C), 139,7 (CH), 139,2 (C), 130,8 (CH), 129,3 (CH), 129,2 (CH), 121,0 (CH), 76,8 (C), 66,7 (CH2), 53,8 (CH), 33,0 (CH2). ESI-HRMS вычислены для C25H26N3O+, (M+H)+, 384,2071, найдено 384,2068.

[0067] (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-[1-(трифенилметил)-1H-имидазол-4-ил]пропан-1-ол или (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-[1-(трифенилметил)-1H-имидазол-5-ил]пропан-1-ол (P.3). Соединение P.2 (0,200 г, 0,52 ммоль), 9-деазааденин (0,070 г, 0,52 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,051 мл, 0,68 ммоль) нагревали при 70°C в трет-бутаноле (3 мл) в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (10% 7M NH3/MeOH-CHCl3) для получения P.3 в виде бесцветной пены (0,101 г, 37%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,03 (с, 1H), 7,39 (с, 1H), 7,35 (д, J=1,3 Гц, 1H), 7,33-7,29 (м, 9H), 7,12-7,08 (м, 6H), 6,75 (д, J=1,2 Гц, 1H), 3,96 (д, J=13,7 Гц, 1H), 3,93 (д, J=13,6 Гц, 1H), 3,61 (дд, J=11,3, 4,8 Гц, 1H), 3,49 (дд, J=11,3, 6,1 Гц, 1H), 3,02-2,97 (м, 1H), 2,72 (дд, J=14,5, 6,5 Гц, 1H), 2,69 (дд, J=14,5, 6,7 Гц, 1H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,0 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 143,7 (C×3), 139,5 (CH), 139,2 (C), 130,8 (CH), 129,24 (CH), 129,20 (CH), 128,9 (CH), 121,2 (CH), 115,4 (C), 114,8 (C), 76,8 (C), 64,3 (CH2), 59,4 (CH), 41,3 (CH2), 30,7 (CH2). ESI-HRMS вычислены для C32H32N7O+, (M+H)+, 530,2663, найдено 530,2666.

[0068] (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(1H-имидазол-4-ил)пропан-1-ол (P.4). Трифторуксусную кислоту (0,6 мл, 8 ммоль) добавляли к перемешанному раствору P.3 (0,100 г, 0,19 ммоль) и триэтилсилана (0,090 мл, 0,57 ммоль) в CH2Cl2 (3 мл). Через 2 часа выпаривали растворитель и остаток растворяли в MeOH и выпаривали растворитель (3 раза). Остаток снова растворяли в MeOH, добавляли силикагель и выпаривали растворитель. С помощью флэш-хроматографии на силикагеле (CHCl3-MeOH-28% водн. NH4OH, 7:2,5:0,5) получали P.4 в виде бесцветной смолы, кристаллизовавшейся при выстаивании (0,050 г, 92%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,14 (с, 1H), 7,52 (д, J=0,9 Гц, 1H), 7,42 (с, 1H), 6,80 (с, 1H), 4,01 (д, J=13,6 Гц, 1H), 3,98 (д, J=13,6 Гц, 1H), 3,63 (дд, J=11,3, 4,7 Гц, 1H), 3,50 (дд, J=11,3, 5,9 Гц, 1H), 3,01-2,96 (м, 1H), 2,76 (д, J=6,7 Гц, 2H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,0 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 136,1 (CH), 134,8 (b, C), 129,0 (CH), 119,4 (b, CH), 115,4 (C), 114,3 (C), 64,0 (CH2), 59,3 (CH), 41,3 (CH2), 29,2 (CH2). ESI-HRMS вычислены для C13H18N7O+, (M+H)+, 288,1568, найдено 288,1567.

[0069] Пример Q. Синтез (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(бутилсульфанил)пропан-1-ола (Q.2).

[0070] Трет-бутил(4R)-4-[(бутилсульфанил)метил]-2,2-диметил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат (Q.1). Гидрид натрия (60%, 0,097 г, 2,4 ммоль) частями добавляли к раствору бутан-1-тиола (0,53 мл, 4,85 ммоль) в DMF (5 мл). Через 15 мин добавляли раствор сырого мезилата (0,500 г, 1,62 ммоль, из этапа 1 получения K.1) в DMF (1 мл). Перемешивали смесь в течение 16 часов, затем добавляли H2O (6 мл). После экстракции с помощью Et2O (100 мл) экстракт промывали H2O (4×5 мл), водным раствором солей (5 мл), сушили и выпаривали растворитель. Остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-10% EtOAc в гексанах) для получения Q.1 в виде бесцветного маслянистого вещества (0,429 г, 88%). 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 4,06-3,92 (м, 2,5H), 3,91-3,85 (м, 0,5H), 2,94 (д, J=13,0 Гц, 0,5H), 2,80 (д, J=13,0 Гц, 0,5H), 2,62-2,47 (м, 3H), 1,65-1,53 (м, 5H), 1,50-1,35 (м, 14H), 0,91 (т, J=7,1 Гц, 3H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CDCl3, центральная линия δ 77,0): δ 152,1, 151,4 (C), 94,3, 93,7 (C), 80,2, 79,9 (C), 66,5, 66,3 (CH2), 57,4, 57,2 (CH), 34,6, 33,9 (CH2), 32,0, 31,9, (2×CH2), 28,5, 28,4 (CH3), 27,7, 26,9 (CH3), 24,5, 23,2 (CH3), 21,9 (CH2), 13,6 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C15H29NNaO3S+, (M+Na)+, 326,1761, найдено 326,1760.

[0071] (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(бутилсульфанил)пропан-1-ол (Q.2). Соединение Q.1 (0,400 г, 1,32 ммоль) растворяли в MeOH (4 мл) и добавляли водный раствор соляной кислоты (36%, 1 мл). Через 15 мин выпаривали растворитель, полученную смолу растворяли в MeOH (10 мл) и нейтрализовали с помощью смолы Amberlyst A21, затем пропускали через короткую колонку с той же смолой и элюировали с помощью MeOH. Фракции, содержащие продукт, выпаривали до получения маслянистого остатка, который растворяли в трет-бутаноле (4 мл), затем добавляли 9-деазааденин (0,177 г, 1,32 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,12 мл, 1,60 ммоль) и перемешивали смесь при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 5-15% 7M NH3/MeOH в CHCl3) для получения Q.2 в виде бесцветного твердого вещества (0,131 г, 32%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,49 (с, 1H), 4,06 (д, J=13,8 Гц, 1H), 3,97 (д, J=13,9 Гц, 1H), 3,69 (дд, J=11,2, 5,1 Гц, 1H), 3,63 (дд, J=11,2, 5,4 Гц, 1H), 2,81-2,76 (м, 1H), 2,69 (дд, J=13,5, 6,3 Гц, 1H), 2,53 (дд, J=13,5, 6,9 Гц, 1H), 2,31 (ддд, J=12,5, 8,0, 6,5 Гц, 1H), 2,25 (ддд, J=12,5, 8,1, 6,7 Гц, 1H), 1,45-1,35 (м, 2H), 1,33-1,25 (м, 2H), 0,85 (т, J=7,3 Гц, 3H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,9 (CH), 146,6 (C), 129,1 (CH), 115,5 (C), 114,6 (C), 63,9 (CH2), 57,8 (CH), 41,2 (CH2), 34,5 (CH2), 32,7 (CH2), 32,6 (CH2), 22,9 (CH2), 13,9 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C14H24N5OS+, (M+H)+, 310,1697, найдено 310,1702.

[0072] Пример R. Синтез (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(гептилсульфанил)пропан-1-ола (R.2).

[0073] Трет-бутил(4R)-4-[(гептилсульфанил)метил]-2,2-диметил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат (R.1). Гидрид натрия (60%, 0,162 г, 4,05 ммоль) частями добавляли в раствор гептан-1-тиола (0,641 г, 4,85 ммоль) в DMF (5 мл) при комнатной температуре. Через 15 мин добавляли раствор сырого мезилата (0,500 г, 1,62 ммоль, из этапа 1 получения K.1) в DMF (1 мл). Перемешивали смесь в течение 16 часов, затем добавляли H2O (6 мл). После экстракции с помощью Et2O (100 мл) экстракт промывали H2O (4×5 мл), водным раствором солей (5 мл), сушили и выпаривали до получения маслянистого остатка, который хроматографировали на силикагеле (градиент 0-12% EtOAc в гексанах) для получения R.1 в виде бесцветного маслянистого вещества (0,443 г, 79%). 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 4,05-3,98 (м, 1,5H), 3,97-3,93 (м, 1H), 3,91-3,85 (м, 0,5H), 2,93 (д, J=13,5 Гц, 0,5H), 2,80 (д, J=12,9 Гц, 0,5H), 2,62-2,45 (м, 3H), 1,63-1,53 (м, 5H), 1,51-1,43 (м, 12H), 1,41-1,22 (м, 8H), 0,88 (т, J=6,8 Гц, 3H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CDCl3, центральная линия δ 77,0): δ 152,1, 151,5 (C), 94,3, 93,7 (C), 80,2, 79,9 (C), 66,5, 66,3 (CH2), 57,4, 57,2 (CH), 34,7, 33,8 (CH2), 32,4, 31,7 (2×CH2), 30,0, 29,8 (CH2), 28,9, 28,8, (2×CH2), 28,5, 28,4 (CH3), 27,7, 26,9 (CH3), 24,5, 23,2 (CH3), 22,6 (CH2), 14,0 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C18H35NNaO3S+, (M+Na)+, 368,2230, найдено 368,2227.

[0074] (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(гептилсульфанил)пропан-1-ол (R.2). Соединение R.1 (0,420 г, 1,22 ммоль) растворяли в MeOH (4 мл) и добавляли водный раствор соляной кислоты (36%, 1 мл). Через 15 мин выпаривали растворитель до получения смолы, которую растворяли в смеси 7:3 MeOH-CHCl3 (10 мл) и нейтрализовали с помощью смолы Amberlyst A21, затем пропускали через короткую колонку с той же смолой и элюировали с помощью смеси 7:3 MeOH-CHCl3. Фракции, содержащие продукт, выпаривали до получения маслянистого остатка, который растворяли в трет-бутаноле (4 мл), затем добавляли 9-деазааденин (0,130 г, 0,97 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,087 мл, 1,16 ммоль) и перемешивали смесь при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 5-15% 7M NH3/MeOH в CHCl3) для получения сырого R.2 (210 мг). Посредством дополнительной хроматографии на силикагеле (градиент 0-5% водн. NH4OH (28%) в 2-PrOH) получали R.2 в виде бесцветного твердого вещества (0,134 г, 34%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,49 (с, 1H), 4,06 (д, J=13,8 Гц, 1H), 3,97 (д, J=13,8 Гц, 1H), 3,69 (дд, J=11,2, 5,1 Гц, 1H), 3,63 (дд, J=11,2, 5,4 Гц, 1H), 2,81-2,76 (м, 1H), 2,69 (дд, J=13,5, 6,3 Гц, 1H), 2,54 (дд, J=13,5, 6,9 Гц, 1H), 2,32 (ддд, J=12,5, 7,9, 6,8 Гц, 1H), 2,26 (ддд, J=12,6, 7,9, 6,9 Гц, 1H), 1,47-1,37 (м, 2H), 1,33-1,20 (м, 8H), 0,88 (т, J=7,1 Гц, 3H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,9 (CH), 146,6 (C), 129,1 (CH), 115,4 (C), 114,6 (C), 63,8 (CH2), 57,9 (CH), 41,2 (CH2), 34,5 (CH2), 32,9 (CH2×2), 30,6 (CH2), 30,0 (CH2), 29,8 (CH2), 26,6 (CH2), 14,4 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C17H30N5OS+, (M+H)+, 352,2166, найдено 352,2157.

[0075] Пример S. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]гепатн-1-ола (S.2).

[0076] Трет-бутил(4S)-2,2-диметил-4-pentyl-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат (S.1). Трет-бутил (4S)-2,2-диметил-4-(3-oxoпропил)-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат [Goswami, et al.15] (0,400 г, 1,55 ммоль, очищенный на силикагеле с градиентом 0-50% EtOAc в гексанах) и бромид этилтрифенилфосфония [Paleček, J. et al.16] (0,866 г, 2,33 ммоль, высушенный с помощью P2O5, затем выпаренный 2 раза из сухого толуола) растворяли в безводном CH2Cl2 (7 мл) и охлаждали при 0°C. Раствор трет-бутоксид калия в THF (1,6 M, 1,5 мл, 2,4 ммоль) добавляли по каплям и перемешивали смесь в течение 20 мин [способ аналогичен описываемому в Ksander, et al.17]. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-5% EtOAc в гексанах для получения продукта реакции Виттига в виде бесцветного маслянистого вещества (0,304 г, 73%). Последний продукт (0,430 г, 1,60 ммоль) и 10% Pd на углероде (60 мг) смешивали в EtOAc (15 мл) в атмосфере водорода в течение 16 часов. Смесь фильтровали через Celite, затем выпаривали фильтрат и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-5% EtOAc в гексанах) для получения S.1 в виде бесцветного маслянистого вещества (0,359 г, 61%). 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 3,93-3,71 (м, 3H), 1,83-1,42 (м, 17H), 1,36-1,20 (м, 6H), 0,93-0,80 (м, 3H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CDCl3, центральная линия δ 77,0): δ 152,1, 151,9 (C), 93,6, 93,0 (C), 79,8, 79,3 (C), 67,1, 66,8 (CH2), 57,8, 57,4 (CH), 33,6, 32,8 (CH2), 31,7 (CH2), 28,5 (CH3), 27,5, 26,7 (CH3), 25,9 (CH2), 24,6, 23,3 (CH3), 22,6 (CH2), 13,9 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C15H29NNaO3+, (M+Na)+, 294,2040, найдено 294,2038.

[0077] (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]heptan-1-ол (S.2). Соединение S.1 (0,358 г, 1,32 ммоль) растворяли в MeOH (4 мл) и добавляли водный раствор соляной кислоты (36%, 1 мл). Через 15 мин выпаривали растворитель до получения бесцветного твердого вещества, которое растворяли в MeOH (10 мл), нейтрализовали с помощью смолы Amberlyst A21, затем пропускали через короткую колонку с той же смолой и элюировали с помощью MeOH. Фракции, содержащие продукт, выпаривали до получения маслянистого остатка, который растворяли в трет-бутаноле (4 мл), затем добавляли 9-деазааденин (0,177 г, 1,32 ммоль) и водный раствор формальдегида (0,12 мл, 1,59 ммоль) и перемешивали смесь при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 5-15% 7M NH3/MeOH в CHCl3) для получения S.2 в виде бесцветного твердого вещества (0,122 г, 33%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 3,64 (дд, J=11,2, 4,5 Гц, 1H), 3,48 (дд, J=11,2, 6,5 Гц, 1H), 2,68-2,64 (м, 1H), 1,52-1,38 (м, 2H), 1,32-1,17 (м, 6H), 0,86 (т, J=7,1 Гц, 3H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 129,0 (CH), 115,4 (C), 114,8 (C), 64,4 (CH2), 59,2 (CH), 41,2 (CH2), 33,1 (CH2), 32,0 (CH2), 26,8 (CH2), 23,6 (CH2), 14,4 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C14H24N5O+, (M+H)+, 278,1976, найдено 278,1974.

[0078] Пример T. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]октан-1-ола (T.2).

[0079] Трет-бутил(4S)-4-гексил-2,2-диметил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат (T.1). Трет-бутил(4S)-2,2-диметил-4-(3-oxoпропил)-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат [Goswami, et al.15] (0,500 г, 1,94 ммоль, очищенный на силикагеле с градиентом 0-50% EtOAc в гексанах) и бромид n-пропилтрифенилфосфония (1,12 г, 2,91 ммоль, высушенный с помощью P2O5, затем выпаренный 2 раза из сухого толуола) растворяли в безводном CH2Cl2 (7 мл) и охлаждали до 0°C. Раствор трет-бутоксида калия в THF (1,6 M, 1,8 мл, 2,90 ммоль) добавляли по каплям и перемешивали смесь в течение 20 мин [способ аналогичен описываемому в Ksander, et al.17]. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-4% EtOAc в гексанах для получения продукта реакции Виттига в виде бесцветного маслянистого вещества (0,361 г, 66%). Последний продукт (0,360 г, 1,27 ммоль) и 10% Pd на углероде (60 мг) смешивали в EtOAc (15 мл) в атмосфере водорода в течение 16 часов. Смесь фильтровали через Celite, затем выпаривали фильтрат и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-5% EtOAc в гексанах) для получения T.1 в виде бесцветного маслянистого вещества (0,342 г, 94%). 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 3,93-3,71 (м, 3H), 1,82-1,42 (м, 17H), 1,36-1,19 (м, 8H), 0,92-0,85 (м, 3H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CDCl3, центральная линия δ 77,0): δ 152,1, 151,9 (C), 93,5, 93,0 (C), 79,8, 79,3 (C), 67,1, 66,7(CH2), 57,8, 57,4 (CH), 33,6, 32,9 (CH2), 31,8 (CH2), 29,1 (CH2), 28,5 (CH3), 27,5, 26,7 (CH3), 26,2 (CH2), 24,6, 23,3 (CH3), 22,5 (CH2), 14,0 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C16H32NO3+, (M+H)+, 286,2377, найдено 286,2375.

[0080] (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]октан-1-ол (T.2). Соединение T.1 (0,320 г, 1,12 ммоль) растворяли в MeOH (4 мл) и добавляли водный раствор соляной кислоты (36%, 1 мл). Через 15 мин выпаривали растворитель до получения бесцветного твердого вещества, которое растворяли в смеси 4:1 MeOH-CHCl3 (10 мл), нейтрализовали с помощью смолы Amberlyst A21, затем пропускали через короткую колонку с той же смолой и элюировали с помощью 4:1 MeOH-CHCl3. Фракции, содержащие продукт, выпаривали до получения желтого твердого вещества, которое растворяли в трет-бутаноле (4 мл), затем добавляли 9-деазааденин (0,150 г, 1,12 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,101 мл, 1,35 ммоль) и перемешивали смесь при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 5-15% 7M NH3/MeOH в CHCl3) для получения T.2 в виде бесцветного твердого вещества (0,148 г, 45%). 1H ЯМР (500 МГц, 1:1 CD3OD-CDCl3): δ 8,20 (с, 1H), 7,40 (с, 1H), 3,98 (д, J=13,7 Гц, 1H), 3,95 (д, J=13,7 Гц, 1H), 3,73 (дд, J=11,4, 4,0 Гц, 1H), 3,50 (дд, J=11,4, 6,6 Гц, 1H), 2,74-2,69 (м, 1H),1,54-1,39 (м, 2H), 1,34-1,22 (м, 8H), 0,88 (т, J=6,9 Гц, 3H). 13C ЯМР (125,7 МГц, 1:1 CD3OD-CDCl3, центральные линии δ 49,0 и δ 78,3): δ 151,2 (C), 150,2 (CH), 146,0 (C), 128,1 (CH), 115,0 (C), 114,2 (C), 63,6 (CH2), 59,0 (CH), 40,7 (CH2), 32,4 (CH2), 31,6 (CH2), 30,0 (CH2), 26,7 (CH2), 23,1 (CH2), 14,3 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C15H25N5NaO+, (M+Na)+, 314,1952, найдено 314,1953.

[0081] Пример U. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]ундекан-1-ола (U.2).

[0082] Трет-бутил (4S)-2,2-диметил-4-нонил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат (U.1). Этап 1. Tрифенилфосфин (3,70 г, 14,11 ммоль) и 1-бромгексан (2,97 мл, 21,16 ммоль) смешивали и нагревали с обратным холодильником в толуоле (10 мл) в течение 16 часов. Полученный бромид n-гексилтрифенилфосфония (3,30 г, 55%) отфильтровывали и сушили с помощью P2O5, затем выпаривали 2 раза из сухого толуола.

[0083] Этап 2. Соль фосфония из этапа 1 (1,30 г, 3,04 ммоль) и трет-бутил(4S)-2,2-диметил-4-(3-оксопропил)-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат [Goswami, et al.15] (0,500 г, 1,94 ммоль, очищенный на силикагеле с градиентом 0-50% EtOAc в гексанах) растворяли в CH2Cl2 (7 мл) и охлаждали до 0°C. Раствор трет-бутоксида калия в THF (1,6 M, 1,9 мл, 3,00 ммоль) добавляли по каплям и перемешивали смесь в течение 20 мин. [способ аналогичен описываемому в Ksander, et al.17]. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-5% EtOAc в гексанах) для получения продукта реакции Виттига в виде бесцветного маслянистого вещества (0,370 г, 59%). Последний продукт (0,340 г, 1,04 ммоль) и 10% Pd на углероде (60 мг) смешивали в EtOAc (15 мл) в атмосфере водорода в течение 16 часов. Смесь фильтровали через Celite и выпаривали фильтрат и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-5% EtOAc в гексанах) для получения U.1 в виде бесцветного маслянистого вещества (0,340 г, 99%). 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 3,93-3,70 (м, 3H), 1,82-1,42 (м, 17H), 1,35-1,82 (м, 14H), 0,88 (т, J=6,9 Гц, 3H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CDCl3, центральная линия δ 77,0): δ 152,2, 151,9 (C), 93,6, 93,0 (C), 79,8, 79,3 (C), 67,1, 66,8 (CH2), 57,8, 57,5 (CH), 33,6, 32,9 (CH2), 31,9 (CH2), 29,6, 29,5, 29,3 (4×CH2), 28,5 (CH3), 27,5, 26,8 (CH3), 26,3 (CH2), 24,6, 23,3 (CH3), 22,6 (CH2), 14,1 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C19H37NNaO3+, (M+Na)+, 350,2666, найдено 350,2663.

[0084] (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]ундекан-1-ол (U.2). Соединение U.1 (0,310 г, 0,947 ммоль) растворяли в MeOH (4 мл) и добавляли водный раствор соляной кислоты (36%, 1 мл). Через 15 мин выпаривали растворитель до получения бесцветного твердого вещества, которое растворяли в смеси 4:1 MeOH-CHCl3, нейтрализовали с помощью смолы Amberlyst A21, затем пропускали через короткую колонку с той же смолой и элюировали с помощью 4:1 MeOH-CHCl3. Фракции, содержащие продукт, выпаривали до получения желтого маслянистого вещества, которое растворяли в трет-бутаноле (4 мл), затем добавляли 9-деазааденин (0,127 г, 0,95 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,085 мл, 1,10 ммоль) и перемешивали смесь при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 5-15% 7M NH3/MeOH в CHCl3) для получения U.2 в виде бесцветного твердого вещества (0,135 г, 43%). 1H ЯМР (500 МГц, 1:1 CD3OD-CDCl3): δ 8,20 (с, 1H), 7,40 (с, 1H), 3,96 (с, 1H), 3,73 (дд, J=11,4, 3,9 Гц, 1H), 3,50 (дд, J=11,4, 6,6 Гц, 1H), 2,74-2,69 (м, 1H),1,55-1,39 (м, 2H), 1,35-1,21 (м, 14H), 0,89 (т, J=7,0 Гц, 3H). 13C ЯМР (125,7 МГц, 1:1 CD3OD-CDCl3, центральные линии δ 49,0 и δ 78,3): δ 151,2 (C), 150,2 (CH), 146,0 (C), 128,1 (CH), 115,0 (C), 114,2 (C), 63,6 (CH2), 59,0 (CH), 40,7 (CH2), 32,5 (CH2), 31,6 (CH2), 30,4 (CH2), 30,1 (2×CH2), 29,9 (CH2), 26,8 (CH2), 23,2 (CH2), 14,3 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C18H32N5O+, (M+H)+, 334,2602, найдено 334,2605.

[0085] Пример V. Синтез (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(пиразин-2-илсульфанил)пропан-1-ола (V.2).

[0086] Трет-бутил(4R)-2,2-диметил-4-[(пиразин-2-илсульфанил)метил]-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат (V.1). Этап 1. Тиоацетат калия (0,588 г, 5,05 ммоль)) и мезилат из этапа 1 получения K.1 (0,520 г, 1,68 ммоль,) смешивали в DMF (5 мл) при комнатной температуре в течение 16 часов, затем при 70°C в течение 1 часа. Добавляли воду (5 мл) и экстрагировали смесь с помощью Et2O (100 мл). Экстракт промывали H2O (4×5 мл), водным раствором солей (5 мл), сушили, выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-30% EtOAc в гексанах) для получения трет-бутил(4R)-4-[(ацетилсульфанил)метил]-2,2-диметил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилата в виде бесцветного маслянистого вещества (0,347 г, 71%)

[0087] Этап 2. Метоксид натрия в растворе метанола (25%, 0,27 мл, 1,2 ммоль) добавляли в раствор тиоацетата из этапа 1 (0,340 г, 1,17 ммоль) в MeOH (5 мл)). Через 10 мин выпаривали растворитель и остаток растворяли в DMF (5 мл), затем добавляли 2-хлорпиразин (0,32 мл, 3,6 ммоль) и перемешивали смесь в течение 16 часов. Добавляли воду (5 мл), затем смесь экстрагировали с помощью Et2O (100 мл). Экстракт промывали H2O (4×5 мл), водным раствором солей (5 мл), сушили и выпаривали. Остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-30% EtOAc в гексанах) для получения V.1 в виде бесцветного маслянистого вещества (0,224 г, 59%). 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 8,55, 8,48 (2×ш.с., 1H), 8,36, 8,33 (2×ш.с., 1H), 8,22 (ш.с., 1H), 4,23, 4,14 (2×ш.с., 1H), 4,06-3,93 (м, 2H), 3,76-3,63 (м, 1H), 3,37-3,27 (м, 0,5H), 3,17-3,07 (м, 0,5H), 1,67-1,59 (м, 3H), 1,53-1,45 (м, 12H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CDCl3, центральная линия δ 77,0): δ 156,5, 156,1 (C), 152,2, 151,6 (C), 143,7, 143,6 (2×CH), 139,8, 139,7 (CH), 94,5, 93,9 (C), 80,5, 80,2 (C), 66,4, 66,3 (CH2), 56,9, 56,5 (CH), 31,4, 31,0 (CH2), 28,5 (CH3), 27,5, 26,9 (CH3), 24,4, 23,2 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C15H23N3NaO3S+ (M+Na)+, 348,1353, найдено 348,1350.

[0088] (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(пиразин-2-илсульфанил)пропан-1-ол (V.2). Соединение V.1 (0,220 г, 0,68 ммоль) растворяли в CH2Cl2 (8 мл) и добавляли трифторуксусную кислоту (2 мл). Через 2 часа выпаривали растворитель, остаток растворяли в MeOH (10 мл) и нейтрализовали с помощью смолы Amberlyst A21, затем пропускали через короткую колонку с той же смолой и элюировали с помощью MeOH. Фракции, содержащие продукт, выпаривали до получения желтой смолы, которую растворяли в трет-бутаноле (4 мл), затем добавляли водный раствор формальдегида (37%, 0,061 мл, 0,81 ммоль) и 9-деазааденин (0,091 г, 0,68 ммоль) и нагревали смесь при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 10-15% 7M NH3/MeOH в CHCl3) для получения V.2 в виде бесцветного твердого вещества (0,055 г, 25%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,35 (д, J=1,5 Гц, 1H), 8,28 (дд, J=2,6, 1,7 Гц, 1H), 8,14 (д, J=2,7 Гц, 1H), 8,12 (с, 1H), 7,43 (с, 1H), 4,05 (д, J=13,9 Гц, 1H), 4,02 (д, J=13,8 Гц, 1H), 3,74 (дд, J=11,3, 4,9 Гц, 1H), 3,64 (дд, J=11,3, 5,5 Гц, 1H), 3,39-3,31 (м, 2H+остаточный дейтерированный растворитель), 3,01-2,97 (м, 1H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 158,2 (C), 152,0 (C), 150,8 (CH), 146,5 (C), 145,2 (CH), 144,6 (CH), 140,3 (CH), 129,0 (CH), 115,4 (C), 114,7 (C), 63,7 (CH2), 58,4 (CH), 41,4 (CH2), 31,6 (CH2). ESI-HRMS вычислены для C14H18N7OS+ (M+H)+, 332,1289, найдено 332,1287.

[0089] Пример W. (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(метилсульфанил)пропан-1-ол (W.1).

[0090] Получали, как описано в литературе [Clinch, et al.18].

[0091] Пример X. (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(метилсульфанил)пропан-1-ол (X.1).

[0092] Получали, как описано в литературе [Clinch, et al.18].

[0093] Пример Y. (2R,3S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-4-(метилсульфанил)бутан-1,3-диол (Y.1).

[0094] Получали, как описано в литературе [Clinch, et al.18].

[0095] Пример Z. (2S,3R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-4-(метилсульфанил)бутан-1,3-диол (Z.1).

[0096] Получали, как описано в литературе [Clinch, et al.18].

[0097] Пример AA. Синтез 7-[(октиламино)метил]-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина (AA.1).

[0098] 7-[(Октиламино)метил]-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин (AA.1) Октан-1-амин (0,100 г, 0,77 ммоль), водный раствор формальдегида (37%, 0,076 мл, 1,01 ммоль) и 9-деазааденин (0,105 г, 0,78 ммоль) нагревали в трет-бутаноле (3 мл) при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 5-15% 7 M NH3/MeOH в CHCl3) для получения AA.1 в виде бесцветного твердого вещества (0,132 г, 62%). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,46 (с, 1H), 3,91 (с, 2H), 2,61 (т, J=7,5 Гц, 2H), 1,52 (пент, J=7,4 Гц, 2H), 1,34-1,21 (м, 10H), 0,88 (т, J=7,1 Гц, 3H). 13C ЯМР (125,7 МГц, CD3OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 129,0 (CH), 115,4 (C), 114,5 (C), 49,9 (CH2), 43,7 (CH2), 33,0 (CH2), 30,5 (CH2), 30,4 (CH2), 30,3 (CH2), 28,4 (CH2), 23,7 (CH2), 14,4 (CH3). ESI-HRMS вычислены для C15H26N5+, (M+H)+, 276,2183, найдено 276,2181.

Результаты и обсуждение

[0099] Общеупотребительные антибиотики при инфекциях H. pylori включают амоксициллин, метронидазол и тетрациклин. Эффекты выбранных соединений против H. pylori сравнивали с общеупотребительными антибиотиками.

[00100] У большинства бактерий MTAN экспрессируется и катализирует гидролиз N-рибозильных связей 5'-метилтиоаденозина и S-аденозилгомоцистеина. Две реакции участвуют в бактериальном чувстве кворума, круговороте серы через синтез S-аденозилметионина и полиамина13; однако, большинство бактериальных MTAN не являются необходимыми для пролиферации бактерий, судя по условиям планктонного роста.

[00101] Посредством анализа бактериального генома прогнозируют, что HpMTAN-опосредованный путь биосинтеза менахинона является редким, но также присутствует в видах Campylobacter4. Campylobacter jejuni является основной причиной бактериального гастроэнтерита в мире11.

[00102] У H. pylori быстро развивается устойчивость к лекарственным средствам, и в настоящее время приблизительно 30% инфекций H. pylori являются устойчивыми к лекарственным средствам монотерапии первой линии12. В результате в современном подходе общепринято используют терапию тремя средствами в случае инфекций H. pylori, и он включает два антибиотика с различными механизмами действия. Даже при терапии тремя средствами более 20% инфекций H. pylori не легко подвергнуть эрадикации2. Устойчивость в популяции H. pylori, несомненно, частично является результатом воздействия антибиотиков широкого спектра на H. pylori при лечении других бактериальных инфекций. Кроме того, в случае существующего подхода эрадикации H. pylori необходимо введение антибиотиков в течение двух недель или более и повышается развитие устойчивости, если лечение прерывается. В таблице 1 представлены константы диссоциации в отношении MTAN H. pylori и значения MIC90 в отношении H. pylori в случае конкретных соединений по изобретению. Комбинации лекарственных средств с использованием этих соединений также могут быть направлены на решение существующих проблем устойчивости к антибиотикам.

Таблица 1. Ациклические амины-ингибиторы MTAN Helicobacter pylori и их значения MIC90 в отношении H. pylori.

Ингибирование MTAN H. pylori Ингибирование роста H. pylori
Номер соединения, R1=, R2= Ki (нМ) Ki* (нМ) MIC90 (нг/мл)
(V.2) R1=пиразин-2-илтиометил, R2=H
0,10 ± 0,01 8
(S.2) R1=n-пентил, R2=H
0,10 ± 0,01 8
(T.2) R1=n-гексил, R2=H
0,030 ± 0,003 8
(Q.2) R1=n-бутилтиометил, R2=H
0,11 ± 0,01 16
(E.1), R1=n-бутил, R2=H
0,9 ± 0,2 16
(D.1) R1=n-пропил, R2=H
1,2 ± 0,4 40
(U.2) R1 =H, R2=n-нонил
0,12 ± 0,01 80
(L.3) R1=бензилтиометил, R2=H
0,7 ± 0,1 0,21 ± 0,02 >80
(F.1) R1 =H, R2=n-бутил 0,8 ± 0,1 >80
(K.3) R1=4-хлорфенилтиометил, R2=H
0,9 ± 0,1 >80
(Y.1) R1=(S)-1-гидрокси-2-метилтиоэт-1-ил, R2=H
(синтез в WO 08 030118)
5 ± 2 >80
(B.1) R1=метил, R2=H
13 ± 2 >80
(J.1) R1=фенил, R2=H
13 ± 2 >80
(C.1) R1=этил, R2=H
>5 >80
(Z.1) R1 =H, R2=(R)-1-гидрокси-2-метилтиоэт-1-ил (синтез в WO 08 030118)
>10 >80
(P.4) R1=имидазол-4-илметил, R2=H
>50 >80
(R.2) R1=n-гептилтиометил, R2=H
0,05 ± 0,01 80
(G.1) R1=2-пропил, R2=H
>5 >80
(H.1) R1=2-метилпропил, R2=H
>5 >80
(W.1) R1=метилтиометил, R2=H
>5 >80
(X.1) R1=H, R2=метилтиометил
>5 >80
(I.1) R1=(S)-2-бутил, R2=H
>5 >80

Таблица 2. Другие ациклические амины-ингибиторы MTAN Helicobacter pylori и их значения MIC90 в отношении H. pylori.


Номер соединения, R=
Ингибирование MTAN H. pylori Ингибирование роста H. pylori
Ki (нМ) Ki* (нМ) MIC90 (нг/мл)
(AA.1), R=n-октил
0,2 ± 0,04 >80
(A.1), R=2-гидроксиэтил
>5 >80

ПРИМЕР 2

Активность соединения T.2 (гексил-SerMe-иммуциллина A) in vitro

[00103] Следующие эксперименты осуществляли в UNT Health Science Center (руководитель исследования: William J Weiss, Director of Pre-Clinical Services), Fort Worth, TX, USA.

[00104] (a) Получение планшета с образцами: Аликвоты 2-кратного серийного разведения гексил-SerMe-иммуциллина A (62,5-6,25 мкг/мл в DMSO, 0,02 мл) смешивали с отдельными объемами расплавленного агара MHIIb по 2 мл и наливали в отдельные лунки в каждую лунку 12-луночного планшета, позволяли отстаиваться в течение 20-30 минут и сушили в боксе биологической безопасности в течение 10 минут перед инокуляцией.

[00105] (b) Инокуляция: Замороженный сток инокулята штаммов UNT020-1 (Sydney Strain SS1) и UNT189-1 (ATCC43504) H. pylori раздельно наносили полосами на агар Columbia+5% крови овцы и микроаэрофильно инкубировали в течение 72 часов при 37°C. Затем культуры штаммов H. pylori на агаре собирали в 0,9% стерильный физиологический раствор и определяли оптическую плотность суспензии при 530 нм. Оптическую плотность каждой суспензии доводили до 1,5-2,0 посредством разведения в 0,9% стерильном физиологическом растворе. Суспензию UNT020-1 дополнительно разводили 2:5, а суспензию UNT189-1 - нет, и их использовали для инокуляции планшетов с агаром. Образцы суспензий (3 мкл) пятнами наносили в лунки с агаром MHIIb в 12-луночном планшете. Подтверждали количество КОЕ/мл каждого посевного материала, получая 10-кратное серийное разведение каждого посевного материала в 0,9% стерильном физиологическом растворе и нанося пятнами 8 мкл каждого разведения на планшеты с агаром Columbia+5% крови овцы. После того, как пятнам давали высохнуть в течение 10 мин, планшеты помещали в микроаэрофильную камеру и инкубировали при 37°C в течение 72 часов.

[00106] Результаты: Определяли минимальные ингибиторные концентрации (MIC) гексил-SerMe-иммуциллина A в отношении изолятов H. pylori UNT020-1 (штамм Sydney SS1) и UNT189-1 (ATCC43504). Гексил-SerMe-иммуциллин A проявлял исключительную активность в отношении двух штаммов H. pylori с MIC 1,9 нг/мл в каждом случае.

Концентрация соединения T.2 (гексил-SerMe-иммуциллин A) в желудочной слизи мыши после однократной пероральной дозы 10 мг/кг

[00107] Следующие эксперименты осуществляли в UNT Health Science Center (руководитель исследования: William J Weiss, Director of Pre-Clinical Services), Fort Worth, TX, USA.

[00108] (a) Пероральное введение мышам дозы 10 мг/кг гексил-SerMe-иммуциллина A: Самкам мышей C57/BL6 с диапазоном возраста 5-6 недель и массой 18-22 граммов (Harlan Laboratories) вводили гексил-SerMe-иммуциллин A (0,4 мл раствора 0,5 мг/мл в воде для инъекций) посредством гаважа.

[00109] (b) Забор слизи: Мышей (3 мыши/временную точку) умерщвляли посредством ингаляции CO2 через 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 12 и 24 часа, затем слой слизи соскребали с продольно рассеченного желудка с использованием предметного стекла, собирали и взвешивали.

[00110] (c) Получение гомогенатов желудочной слизи: Приблизительно 30 мг слизи мыши взвешивали в пробирке гомогенизатора емкостью 2 мл (предварительно наполненной 3,0 мм i.d. циркониевых бус) и смешивали с 0,2 мл буфера PBS. Это гомогенизировали в течение 3 мин при 4000 об./мин. в гомогенизаторе Beadbug D1030 (Benchmark Scientific).

[00111] (d) Экстракция гомогенатов желудочной слизи: Образцы гомогенатов слизи (50 мкл) и внутренний стандарт (см. ниже) в воде (10 мкл) обрабатывали трихлоруксусной кислотой (30% масс./об., 30 мкл), разводили водой (160 мкл), центрифугировали на центрифуге типа вортекс в течение 10 сек и обрабатывали ультразвуком в течение 10 мин, затем центрифугировали при 14500 об./мин. в течение 5 мин. Образец супернатанта (160 мкл) переносили в сосуды автосемплера. Внутренним стандартом являлся бутилтио-DADMe-иммуциллин-H в концентрации 5,0 и 20,0 мкг/мл.

[00112] (f) Анализ ВЭЖХ-MS-MS: Аликвоты супернатанта (10 мкл) инъецировали для анализа с помощью системы ВЭЖХ Surveyor (Thermo), оборудованной колонкой ACE 3 C18 (50×3 мм, частицы 3 мкм), с элюцией с градиентом при 30°C с подвижной фазой 400 мкл/мин, состоящей из смесей 0,1% трифторуксусной кислоты в воде (A) и метаноле (B), следующим образом: 0-5 мин, A:B 9:1; 5-6,1 мин, A:B 1:9; 6,1-10 мин A:B 9:1. Гексил-SerMe-иммуциллин A элюировали в 4,41±0,003 мин. Детекция представляла собой ESI MS/MS с использованием LCQ Deca (Thermo) в режиме положительного контроля селективных реакций (SRM) с использованием MS/MS с m/z 292,2 → 147,2 и вольтажа ионораспыления 4,5 кВ.

[00113] (г) Результаты: Результаты для гексил-SerMe-иммуциллина A в желудочной слизи после введения 10 мг/кг посредством гаважа у мышей представлены в таблице и на фигуре ниже. В желудочной слизи определяли высокий и пролонгированный уровень гексил-SerMe-иммуциллина A, при этом значение Cmax составляло 65,5 мкг/г, суммарное воздействие [AUC(0-inf)] составляло 78,6 мкг-ч./г, и конечное время полужизни составляло 2,72 ч.

Таблица 3. Концентрация гексил-SerMe-Иммуциллина A в желудочной слизи мыши относительно времени после введения однократной дозы 10 мг/кг PO.

Время (ч.) Гексил-SerMe-иммуциллин A (мкг/г)
Животное-1 Животное-2 Животное-3 Среднее SD SEM
0,25 60,42 64,36 45,91 56,89 9,71 4,34
0,50 46,24 90,18 60,18 65,53 22,46 10,04
1,00 20,39 12,20 12,04 14,88 4,77 2,13
2,00 2,02 1,08 16,24 6,44 8,49 3,80
4,00 0,67* 3,74 0,91 1,77 1,71 0,76
8,00 0,65* 1,62 0,53* 0,93 0,60 0,27
12,0 0,96 0,95 0,33* 0,74 0,36 0,16
24,0 0,54* 0,39* 0,30* 0,41 0,12 0,06
* ниже LLOQ

ССЫЛКИ

1. Kuipers, E. J., Thijs, J.C. & Festen, H. P. Aliment. Pharm. Therap. 9 Suppl 2, 59-69 (1995).

2. Malfertheiner, P. et al. Lancet 377, 905-913 (2011).

3. Popp, J.L., Berliner, C. & Bentley, R. Anal. Biochem. 178, 306-310 (1989).

4. Li, X., Apel, D., Gaynor, E. C. & Tanner, M. E. J. Biol. Chem. 286, 19392-19398 (2011).

5. Dairi, T. J. Antibiot. 62, 347-352 (2009).

6. Gutierrez, J.A. et al. Nature Chem. Biol. 5, 251-257 (2009).

7. Longshaw, A.I., Adanitsch, F., Gutierrez, J.A., Evans, G.B., Tyler, P.C., Schramm, V.L. Design and Synthesis of Potent "Sulfur-Free" Transition State Analogue Inhibitors of 5'-Methylthioadenosine Nucleosidase and 5'-Methylthioadenosine Phosphorylase. J. Med. Chem. 53, 6730-6746 (2010).

8. Singh, V. et al. Femtomolar transition state analogue inhibitors of 5'-methylthioadenosine/S-adenosylhomocysteine nucleosidase from Escherichia coli. J. Biol. Chem. 280, 18265-18273 (2005).

9. Singh, V. & Schramm, V.L. J. Am. Chem. Soc. 129, 2783-2795 (2007).

10. Gutierrez, J. A. et al. Picomolar inhibitors as transition-state probes of 5'-methylthioadenosine nucleosidases. ACS Chem. Biol. 2, 725-734 (2007).

11. Man, S.M. Nat. Rev. Gastroenterol. Hepatol. 8, 669-685 (2011).

12. Vakil, N. Am. J. Gastro. 104, 26-30 (2009).

13. Dondoni, A.; Perrone, D.; Org. Synth., Coll. Vol. 10. 320 (2004); Org. Synth. 77, 64, (2000).

14. Madrigal, B.; Puebla, P.; Caballero, E.; Peláez, R.; Grávalos, D. G.; Medarde, M. Arch. Pharm. Pharm. Med. Chem. 334, 177-179 (2001).

15. Goswami, K.; Paul, S.; Budge, S. T.; Sinha, S. Tetrahedron 68, 280-286 (2012).

16. Paleček, J.; Kvíčala, J.; Paleta, O. J. Fluorine Chem. 113, 177-18 (2002).

17. Ksander, G. M.; de Jesus, R.; Yuan, A.; Ghai, R. D.; Trapani, A; McMartin, C.; Bohacek, R. J. Med. Chem. 40. 495-505 (1997).

18. Clinch, K.; Evans, G. B.; Fröhlich, R. F. G.; Gulab, S. A.; Gutierrez, J. A.; Mason, J. M.; Schramm, V. L.; Tyler, P. C.; Woolhouse, A. D. Bioorg. Med. Chem. Lett. 20, 5181-5187 (2012).

19. Публикация международной патентной заявки PCT № WO 2008/030118, опубликованная 13 марта 2008 г.

1. Способ лечения инфекции Helicobacter pylori (H. pylori) у индивидуума, включающий введение индивидууму соединения формулы (I) в количестве, эффективном для ингибирования роста H. pylori, где формула (I) представляет собой

(I),

где R представляет собой Q или CH2SQ, где Q представляет собой C1-C9-алкил, арил, гетероарил, аралкил или C4-C7-циклоалкил, и где Q является необязательно замещенным одним или несколькими заместителями, выбранными из галогена, OH- и/или NH2-групп,

или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира.

2. Способ по п. 1, где соединение имеет формулу

.

3. Способ по п. 1 или 2, где R является Q.

4. Способ по п. 1 или 2, где R является CH2SQ.

5. Способ по любому из пп. 1-4, где Q представляет собой C1-C9-алкил.

6. Способ по любому из пп. 1-4, где Q представляет собой C4-C7-циклоалкил.

7. Способ по любому из пп. 1-4, где Q представляет собой арил.

8. Способ по любому из пп. 1-4, где Q представляет собой гетероарил.

9. Способ по любому из пп. 1-4, где Q представляет собой аралкил.

10. Способ по любому из пп. 1-4, где Q представляет собой арил, гетероарил или аралкил, замещенный галогеном.

11. Способ по любому из пп. 1-4, где R представляет собой Q или CH2SQ, где Q представляет собой линейный C2-C9-алкил, арил, гетероарил, аралкил или C4-C7-циклоалкил, и где Q является необязательно замещенным одним или несколькими заместителями, выбранными из галогена, OH- и/или NH2-групп.

12. Способ по п. 10 или 11, где галоген находится в орто-, мета- или пара-положении.

13. Способ по любому из пп. 1-12, где галоген является Cl, F, Br или I.

14. Способ по любому из пп. 1-4, где Q представляет собой линейный C3-C9-алкил или гетероарил.

15. Способ по п. 1 или 2, где соединение выбрано из группы, состоящей из

,,,,,,,,,,,,

и,

или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира.

16. Способ лечения инфекции Helicobacter pylori (H. pylori) у индивидуума, включающий введение индивидууму соединения в количестве, эффективном для ингибирования роста H. pylori, где соединение выбрано из группы, состоящей из

,,,,,,,,,,,,

,и,

или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира.

17. Способ по любому из пп. 1-16, где соединение вводят в количестве, эффективном для ингибирования 5'-метилтиоаденозиннуклеозидазы (MTAN) H. pylori.

18. Способ по любому из пп. 1-17, где соединение ингибирует рост H. pylori, но не ингибирует рост одной или нескольких бактерий, выбранных из группы, состоящей из E. coli, V. cholerae, S. aureus, K. pneumoniae, S. flexneri, S. enterica и P. aeruginosa.

19. Способ по п. 18, где соединение не ингибирует рост всех из E. coli, V. cholerae, S. aureus, K. pneumoniae, S. flexneri, S. enterica и P. aeruginosa.

20. Способ по любому из пп. 1-19, где соединение является более эффективным в ингибировании роста H. pylori, чем амоксициллин, метронидазол или тетрациклин.

21. Способ по любому из пп. 1-20, где индивидуум имеет пептическую язву.

22. Способ по любому из пп. 1-21, где индивидуум имеет язву желудка или язву двенадцатиперстной кишки.

23. Способ по любому из пп. 1-22, где соединение вводят перорально.

24. Соединение, имеющее структуру

,,,,,,,,,,,,

,,или,

или его фармацевтически приемлемая соль или сложный эфир.

25. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п. 24 и фармацевтически приемлемый носитель.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, в частности к фармацевтической композиции, содержащей сапроптерина дигидрохлорид и по меньшей мере один антиоксидант, а также к применению данной композиции для лечения ВН4-восприимчивой гиперфенилаланинемии.

Изобретение относится к новому соединению формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, обладающим селективным действием в отношении PDE1. Соединения могут найти применение при лечении заболевания или нарушения, выбранного из группы, включающей множество заболеваний и нарушений, включая когнитивный дефицит, связанный с заболеваниями и нарушениями ЦНС, неврологические нарушения, сердечно-сосудистые нарушения, почечные нарушения, гематологические нарушения, нарушения желудочно-кишечного тракта и печени, раковые нарушения и нейродегенеративные нарушения.

Изобретение относится к новым соединениям 2,4-пиримидиндиамина формулы (I) .Технический результат: получены новые соединения, которые могут применяться в лечении аутоиммунных заболеваний.

Изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемым солям , в которой X представляет собой -СН2- или -О-; Y представляет собой -CH2- или -CF2-; Z представляет собой -СН2- или -С(=O)-; R1 представляет собой член, выбранный из группы, состоящей из: (a) фенила, незамещенного или замещенного одним, двумя или тремя членами Ra; (b) 5-6-членного моноциклического гетероароматического кольца, имеющего один или два гетероатома, независимо выбранные из N, S, О, или 8-10-членного бициклического гетероароматического кольца, имеющего один, два или три гетероатома, независимо выбранные из N, S, О, при этом каждое из которых незамещено или замещено одним, двумя, или тремя членами Rc; и (с) 9-10-членного частично ненасыщенного гетероциклоалкильного кольца, имеющего один или два гетероатома, выбранные из О, при этом указанное кольцо является незамещенным или замещенным одним или более -F или -ОСН3; и R2 представляет собой -C1-6алкил; значения остальных радикалов указаны в формуле изобретения.

Изобретение относится к новому соединению или его фармацевтически приемлемой соли Формулы (A), обладающим свойствами ингибитора NAE (Neddβ активирующий фермент). Соединения могут найти применение в качестве противоопухолевого агента.

Изобретение относится к новому соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, которые обладают свойствами ингибиторов активности киназы Wee-1 и могут быть использованы при лечении или предотвращении онкологического заболевания, опосредованного действием киназы Wee-1.

Изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где Q является группой формулы (Qa), где звездочка (*) показывает точку присоединения к остатку молекулы; X является C-R6; Y является линкерной группой, выбранной из -C(O)N(R7)-; Z является арилом, C3-7 гетероциклоалкилом или гетероарилом, где любая из этих групп может быть необязательно замещена одним или двумя заместителями, независимо выбранными из галогена, циано, С1-6алкила, С1-6алкокси, дифторметокси, С2-6алкилкарбонила и С2-6алкоксикарбонила; A является водородом; R1 является -NRbRc; R2 является водородом или C1-6 алкилом; и R3 является водородом; или R3 является C1-6 алкилом; R4 является водородом или C1-6 алкилом; и R5 является водородом; или R5 является C1-6 алкилом; или R4 и R5, взятые вместе с атомом углерода, к которому они оба присоединены, являются C3-7 циклоалкилом; R6 и R7 независимо являются водородом; Rb и Rc независимо являются водородом, где арильные группы, указанные выше, выбраны из фенила и нафтила; гетероциклоалкильные группы, указанные выше, выбраны из индолинила; и гетероарильные группы, указанные выше, выбраны из тиенила и индолила.

Настоящее изобретение относится к области медицинской химии и, в частности, относится к производным 4-(замещенного пятичленного гетероциклического пиримидин/пиридин)амино-1H-3-пиразолкарбоксамида формулы (I), в которой радикалы и символы определены в формуле изобретения.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой композицию, эффективную для усиления энергетического обмена, содержащую по меньшей мере 0,05 мг ингибитора фосфодиэстеразы 5 (PDE 5) и по меньшей мере 500 мг лейцина и/или по меньшей мере 200 мг метаболита лейцина, где ингибитор PDE 5 содержит силденафил и где указанный метаболит лейцина выбран из группы, состоящей из бета-гидроксиметилбутирата (HMB), кето-изокапроновой кислоты (KIC) и α-гидроксиизокапроновой кислоты.

Изобретение относится к соединению и его фармацевтической приемлемой соли, где соединение представлено следующей общей формулой (II), где –С(О)NHR3 расположен в любом из положений 1-4 нафталинового кольца; R3 выбран из группы, состоящей из С1-С6 алкила, С3-С6 циклоалкила, замещенного или незамещенного фенила и замещенного или незамещенного 5-6-членного гетероарила, содержащего от 1 до 2 гетероатомов, выбранных из N и О; при этом в случае замещения заместитель представляет собой от 1 до 3 заместителей, и каждый заместитель независимо выбран из группы, состоящей из С1-С3 алкила, С1-С3 алкокси, С1-С3 галогеналкила, С1-С3 галогеналкокси, гидрокси, амино, нитро и галогена; R2 представляет собой водород или галоген; Z представляет собой C(R5)=CH, S или О; Y представляет собой NH, NMe, О, СН=С(R6) или CH=N; R5 выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, С1-С3 алкила и С1-С3 алкокси, предпочтительно из группы, состоящей из водорода, F, Cl, Br, метила и метокси; R6 выбран из группы, состоящей из водорода, пиразолила, С1-С3 алкилзамещенного пиразолила и С1-С3 гидроксиалкилзамещенного пиразолила, предпочтительно из группы, состоящей из водорода, пиразолила, метилзамещенного пиразолила и гидроксиэтилзамещенного пиразолила.

Изобретение относится к новым соединениям, а именно к 2-бутил-3-этил-3,7,8,8а-тетрагидро-2Н-оксазоло[3,2-а]пиридину; 2',7',8',8а'-тетрагидроспиро[циклогексан-1,3'-оксазоло[3,2-а]пиридину]; 2-(гептан-3-ил)-3-метил-3,7,8,8а-тетрагидро-2Н-оксазоло[3,2-а]пиридину; 2,3-диметил-3,7,8,8а-тетрагидро-2Н-оксазоло[3,2-а]пиридину; 3,3-диметил-3,7,8,8а-тетрагидро-2Н-оксазоло[3,2-а]пиридину или 2-этил-2,3,4,8,9,9а-гексагидро-1Н-пиридо[1,2-а]пиримидину.

Настоящее изобретение относится к области медицинской химии и, в частности, относится к производным 4-(замещенного пятичленного гетероциклического пиримидин/пиридин)амино-1H-3-пиразолкарбоксамида формулы (I), в которой радикалы и символы определены в формуле изобретения.

Изобретение относится к синергетической микробиоцидной композиции, содержащей два компонента. Первым компонентом является неионогенное поверхностно-активное вещество структуры: R1O(CH2CH(CH3)O)5(CH2CH2O)9H, в которой R1 обозначает С8-алкильную группу.

Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, в частности к химическому средству, повышающему урожайность растений. Предложен 3-амино-4,5,6-триметилтиено[2,3-6]пиридил-2-карбоновой кислоты (фуран-2-ил-метил)-амид в качестве регулятора роста озимой пшеницы и кукурузы.

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Соединение формулы (I): в которой X означает CY; где Y означает водород, галоген, C1-С3-алкил, C1-С3-галогеналкил, С1-С3-алкокси, С1-С3-галогеналкокси, C1-С3-алкилтио или С1-С3-галогеналкилтио; R1 означает OR1', в которой R1' означает Н, С1-С8-алкил или С7-С10-арил алкил; R2 означает галоген, выбранный из F, Cl или Br, С1-С4-алкил, С1-С4-галогеналкил, С2-С4-алкенил, С2-С4-галогеналкенил, С2-С4-алкинил, С2-С4-галогеналкинил, С1-С4-алкокси, С1-С4-галогеналкокси, С1-С4-алкилтио, С1-С4-галогеналкилтио, амино, С1-С4-алкиламино, С2-С4-галогеналкиламино, формил, (С1-С3-алкил) карбонил, (C1-С3-галогеналкил) карбонил или циано, при условии, что R2 не является SCH3; R3 и R4 каждый независимо означают водород, С1-С6-алкил, С1-С6-галогеналкил, С3-С6-алкенил, С3-С6-галогеналкенил, С3-С6-алкинил, гидрокси, C1-С6-алкокси, C1-С6-галогеналкокси, формил, (C1-С3-алкил) карбонил, (С1-С3-галогеналкил)карбонил, (C1-C6-алкокси) карбонил, (C1-С6-алкил) карбамил, C1-С6-алкилсульфонил, три (С1-С6-алкил) силил или ди (C1-С6-алкил) фосфонил, или R3 и R4 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5- или 6-членное насыщенное кольцо, или R3 и R4, взятые вместе, означают =CR3'R4', где R3' и R4' каждый независимо означают водород, C1-С6-алкил, С3-С6-алкенил, С3-С6-алкинил, C1-С6-алкокси или С1-С6-алкиламино, или R3' и R4' вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют 5- или 6-членное насыщенное кольцо; Ar означает Ar2, Ar3, Ar4, Ar5 или Ar6.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к соединению формулы , где А1 означает N(O)p или СН, А2 означает N(O)q, R1 означает трифторметильную группу, атом галогена или атом водорода, R2 означает С1-С3-перфторалкильную группу, р означает 0, q означает 0 или 1, n означает 0, 1 или 2, m означает 0, 1 или 2, при условии, что, когда А2 означает NO, n означает 2, и m означает 2.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для борьбы с сорной растительностью в посевах зерновых культур. Гербицидное средство содержит компоненты, мас.%: диметилалкиламинная соль флорасулама, содержащая по меньшей мере один алкильный радикал с числом атомов углерода не менее 8, - 50-0, диметилалкиламинная соль трибенурон-метила, содержащая по меньшей мере один алкильный радикал с числом атомов углерода не менее 8, - 0-73, сыпучее анионактивное поверхностно-активное вещество или сыпучее синтетическое моющее средство - 27-50.

Изобретение относится к регулятору роста озимой пшеницы и сои, представляющему собой N-[2'-(фенил)этил]амид 3-амино(4,6-диметил-5-хлортиено[2,3-b]пиридин-2-карбоновой кислоты формулы 1: 2 табл., 4 пр..

Группа изобретений относится к средствам защиты растений и может быть использована в сельском хозяйстве для борьбы с однолетними и многолетними сорняками в посевах зерновых культур, в частности кукурузы.
Изобретение относится к сельскому хозяйству. Для борьбы с сорной растительностью в сельскохозяйственной культуре осуществляют нанесение на сорную растительность средней высоты в интервале от 4 дюймов (10,16 см) до 8 дюймов (20,32 см) гербицидно эффективного количества композиции, содержащей (а) флутиацет-метил и (b) ингибитор п-гидроксифенилпируватдиоксигеназы (HPPD).

Изобретение относится к способу лечения инфекций Helicobacter pylori. Для лечения инфекции Helicobacter pylori у индивидуума осуществляют введение индивидууму соединения формулы в количестве, эффективном для ингибирования роста H. pylori, где формула представляет собой ,где R представляет собой Q или CH2SQ, где Q представляет собой C1-C9-алкил, арил, гетероарил, аралкил или C4-C7-циклоалкил, и где Q является необязательно замещенным одним или несколькими выбранными из галогена, OH- иили NH2-групп, или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира. Изобретение позволяет повысить эффективность борьбы с инфекцией. 4 н. и 21 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл.

Наверх