Антимикробная комбинация в отношении устойчивых к карбапенемам грамотрицательных бактерий вида klebsiella pneumoniae, продуцирующих металло-β-лактамазу

Изобретение относится к области медицины, в частности к клинической микробиологии, раскрывает антимикробную комбинацию сочетанного применения карбапенемов и бисфосфонатов в отношении устойчивых к карбапенемам грамотрицательных бактерий вида Klebsiella pneumoniae АТСС 70603, продуцирующих металло-β-лактамазу (МβЛ). Антимикробные комбинации характеризуются весовым соотношением компонентов, а именно комбинации имипенем/клодроновая кислота, меропенем/клодроновая кислота, имипенем/этидроновая кислота, меропенем/этидроновая кислота используются в соотношениях 1:1875, 1:15000, 1: 50000, 1: 50000 соответственно. Предложенное техническое решение позволяет моделировать получение штаммов грамотрицательных микроорганизмов с различным уровнем резистентности к карбапенемам и оценить эффективность ингибирования МβЛ и может быть использовано для преодоления устойчивости грамотрицательных бактерий вида Klebsiella pneumoniae, продуцирующих МβЛ, к карбапенемам. 5 табл.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к клинической микробиологии, и может быть использовано для преодоления устойчивости к карбапенемам у грамотрицательных бактерий вида Klebsiella pneumoniae, продуцирующих металло-β-лактамазу (MβЛ).

В настоящее время у пациентов, находящихся на стационарном лечении, увеличивается доля грамотрицательных аэробных бактерий как возбудителей инфекций [1]. Это Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter spp., Klebsiella spp., Stenotrophomonas maltophilia и др. Эти микроорганизмы, как правило, обладают низкой чувствительностью к различным классам антибиотиков, а также способностью приобретать резистентность в процессе лечения, что представляет существенные проблемы при проведении антибактериальной терапии, а именно, резко ограничивает арсенал применяемых для лечения больных антибактериальных препаратов, в том числе карбапенемов. Основным механизмом устойчивости к карбапенемам у грамотрицательных микроорганизмов является продукция металло-β-лактамаз.

Известна композиция и способы лечения, включающие цефтаролин [2], представляющий собой новый парентеральный цефалоспорин с широким спектром активности против клинически важных внебольничных и внутрибольничных грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов. Однако полученный авторами синергидный эффект применения композиции цефтаролина и антимикробных препаратов не описан в отношении резистентных грамотрицательных микроорганизмов, продуцирующих МβЛ.

Известна композиция [3], содержащая халконы в качестве усилителей антимикробных средств, действие которой направлено на предотвращение образования и разрушение сформированных микробных биопленок в полости рта. Синергидный эффект действия композиции халконов и антимикробных агентов авторы оценивали в средствах гигиены полости рта местного действия. Кроме того, авторы не оценивали данный эффект в отношении резистентных грамотрицательных микроорганизмов, продуцирующих МβЛ.

Известно изобретение [4] ингибиторов металло-β-лактамазы на основе малеиновой кислоты, которое демонстрирует эффект подавления МβЛ грамотрицательных бактерий и усиления действия бета-лактамных антибиотиков. В изобретении описаны способы синтеза различных производных малеиновой кислоты, показан их ингибирующий эффект в отношении МβЛ, а также восстановление действия бета-лактамных антибиотиков в отношении устойчивых к ним микроорганизмов. Однако, такие производные малеиновой кислоты и их сочетания с антимикробными агентами не применяются в практической медицине в настоящее время.

Известна лекарственная композиция в отношении Acinetobacter baumannii, наиболее близкая к заявляемому изобретению по достижению технического результата и выбранная в качестве прототипа [5]. Изобретение представляет лекарственную композицию в отношении A. baumannii и ее применение. Лекарственная комбинация состоит из меропенема и сульбактама с весовым соотношением меропенема к сульбактаму 1:2-4. Дизайн исследования воспроизведен методом «шахматной доски». Синергидный антибактериальный эффект комбинированного применения меропенема и сульбактама в отношении карбапенем-чувствительных и лекарственно-устойчивых штаммов A. baumannii определяли методом микроразведений в бульоне. Как показано в результатах исследования, вне зависимости от того, какие были протестированы штаммы, меропенем-лекарственно-устойчивые или меропенем-чувствительные, большинство из них показали синергидный или частично синергидный эффект к комбинированному применению меропенема и сульбактама, и количество штаммов, продемонстрировавших синергидный эффект, насчитывало 25%.

Недостатком такой композиции является использование авторами сульбактама как ингибитора бета-лактамаз только у A. baumannii, так как по данным литературы известно, что сульбактам является ингибитором сериновых бета-лактамаз, но не ингибирует металло-β-лактамазы. При этом авторы изобретения-прототипа тестировали штаммы A. baumannii, не продуцирующие металло-β-лактамазы.

Заявляемое изобретение свободно от указанного недостатка.

Указанный технический результат достигается тем, что клодроновая или этидроновая кислоты из группы бисфосфонатов ингибируют стандартный реактив - металло-β-лактамазу P. aeruginosa рекомбинантную, экспрессированную в Escherichia coli. Достигнутый результат позволяет выявить антимикробный эффект комбинации клодроновой/этидроновой кислот с карбапенемами(имипенемом/меропенемом) в отношении референс-штамма K. pneumoniae ATCC 70603, резистентного к карбапенемам в присутствии стандартного реактива МβЛ, инактивирующего эти антибиотики. Предложенное техническое решение позволяет моделировать получение штаммов грамотрицательных микроорганизмов с различным уровнем резистентности к карбапенемам и оценить эффективность ингибирования МβЛ.

Далее для достижения технического результата оценивают эффективность антимикробной комбинации карбапенемов (имипенема или меропенема) в сочетании с клодроновой/этидроновой кислотами методом «шахматной доски» [6]. В исследованиях используют микроразведения в бульоне в полистироловых 96-луночных планшетах.

В исследовании используют антибиотики имипенем и меропенем, разведенные стандартным титрованием в бульоне Мюллера-Хинтона [7] от 512 мкг/мл до 2 мкг/мл. Для данного исследования исходный концентрат клодроновой кислоты для приготовления раствора для внутривенного введения с содержанием 60 мг/мл разводят в среде Мюллера-Хинтона методом последовательных двукратных разведений. Этидроновую кислоту из исходного 20% концентрата разводят до 2% раствора в стерильной дистиллированной воде, и далее готовят двукратные разведения в среде Мюллера-Хинтона. В ячейки, содержащие по 95 мкл разведения антибиотика, вносят по 95 мкл разведения клодроновой или этидроновой кислоты, таким образом, объем смеси составляет 190 мкл.

Для получения инокулюма тест-штамма K. pneumoniae ATCC 70603 готовят исходную суспензию суточной культуры микроба по стандарту 0,5 McFarland, далее суспензию разводят в 31 раз в бульоне Мюллер-Хинтон, при этом полученная взвесь содержит 5×106 КОЕ/мл. Далее во все ячейки вносят по 10 мкл микробной взвеси. Таким образом, в каждой ячейке конечная микробная нагрузка соответствующего тест-штамма составляет 5×104 КОЕ в 200 мкл. Всегда присутствует контроль тест-культуры и контроль среды.

Значение минимальной подавляющей концентрации (МПК) тестируемого препарата оценивают в первой ячейке, содержимое которой прозрачное, где отсутствует видимый рост тест-штамма.

В таб. 1 представлены результаты инактивации антибиотика в присутствии стандартного реактива МβЛ. Показано, что фермент в ячейках 1-3 полностью инактивирует антибиотик в количестве от 1 мкг/мл до 32 мкг/мл, при этом в ячейках наблюдается рост тест-культуры K. pneumoniae АТСС 70603. Начиная с 4 ячейки, интенсивность инактивации фермента снижается и в 8-ой ячейке отмечается отсутствие роста тест-культуры до уровня референтного значения чувствительности - 2 мкг/мл (EUCAST 2015 г. [8]).

В табл. 2 представлены результаты ингибирования МβЛ клодроновой кислотой в комбинации с имипенемом. В ячейках без клодроновой кислоты отмечается рост тест-культуры K. pneumoniae АТСС 70603 за счет инактивации антибиотика МβЛ. Эффект ингибитора отмечен со 2-й ячейки, где он содержится в количестве 469 мкг. Отмечен эффект инактивации МβЛ и отсутствие роста тест-культуры в ячейке 5 с количеством антибиотика равным референтному значению чувствительности тест-штамма - 2 мкг/мл. Исходя из данных, представленных в таблице 2 ячейка 5, предложена антимикробная комбинация в отношении K. pneumoniae, которая содержит имипенем и ингибитор МβЛ клодроновую кислоту в соотношении 2:3750 (1:1875).

В табл. 3 представлены результаты ингибирования МβЛ этидроновой кислотой в комбинации с имипенемом. В ячейках без этидроновой кислоты отмечается рост тест-культуры K. pneumoniae АТСС 70603 за счет инактивации антибиотика МβЛ. Эффект ингибитора отмечен со 2-й ячейки, где он содержится в количестве 1563 мкг. Отмечен эффект инактивации МβЛ и отсутствие роста тест-культуры в ячейке 8 с количеством антибиотика, равным референтному значению чувствительности тест-штамма - 2 мкг/мл. Исходя из данных, представленных в таблице 3, ячейка 8, предложена антимикробная комбинация в отношении K. pneumoniae, которая содержит имипенем и ингибитор МβЛ этидроновую кислоту в соотношении 2:100000 (1:50000).

В табл. 4 представлены результаты ингибирования МβЛ этидроновой кислотой в комбинации с меропенемом. В ячейках без этидроновой кислоты отмечается рост тест-культуры K. pneumoniae АТСС 70603 за счет инактивации антибиотика МβЛ. Эффект ингибитора отмечен со 2-й ячейки, где он содержится в количестве 1563 мкг. Отмечен эффект инактивации МβЛ и отсутствие роста тест-культуры в ячейке 8 с количеством антибиотика, равным референтному значению чувствительности тест-штамма - 2 мкг/мл. Исходя из данных, представленных в таблице 4, ячейка 8, предложена антимикробная комбинация в отношении K. pneumoniae, которая содержит меропенем и ингибитор МβЛ этидроновую кислоту в соотношении 2:100000 (1:50000).

В табл. 5 представлены результаты ингибирования МβЛ клодроновой кислотой в комбинации с меропенемом. В ячейках без клодроновой кислоты отмечается рост тест-культуры K. pneumoniae АТСС 70603 за счет инактивации антибиотика МβЛ. Эффект ингибитора отмечен со 2-й ячейки, где он содержится в количестве 469 мкг. Отмечен эффект инактивации МβЛ и отсутствие роста тест-культуры в ячейке 8 с количеством антибиотика, равным референтному значению чувствительности тест-штамма - 2 мкг/мл. Исходя из данных, представленных в таблице 5, ячейка 8, предложена антимикробная комбинация в отношении K. pneumoniae, которая содержит меропенем и ингибитор МβЛ клодроновую кислоту в соотношении 2:30000 (1:15000).

Результаты ингибирования МβЛ клодроновой кислотой в комбинации с меропенемом в отношении тест-культуры K. pneumoniae ATCC 70603

Дозы бисфосфонатов, представленные в соотношениях с карбапенемами, составляют от 3 до 13% суточной дозы клодроновой кислоты и от 8 до 17% суточной дозы этидроновой кислоты.

Технико-экономическая эффективность заявленной антимикробной комбинации состоит в усилении действия антибиотика до уровня референтного значения чувствительности K. pneumoniae, продуцирующих МβЛ, вызывающих инфекционно-воспалительные заболевания у человека, что может улучшить терапевтический эффект проводимой антимикробной химиотерапии карбапенемами.

Использованные источники информации

1. Шевченко О.В., Эйдельштейн М.В., Степанова М.Н. Металло-β-лактамазы: значение и методы выявления у грамотрицательных неферментирующих бактерий. Клин, микробиол. антимикроб. химиотер. 2007; 9(3): 211-19.

2. Композиции и способы лечения, включающие цефтаролин. Патент RU 2524665 C2.

3. Халконы в качестве усилителей антимикробных средств. Патент RU 2521252 C2.

4. Ингибиторы металло-β-лактамазы. Патент RU 2462450 C2.

5. Anti-Acinetobacterbaumannii drug combination and application thereof. Патент CN 102475703 (прототип).

6. Eliopoulos G.M., and R.C. Moellering. 1991. Antimicrobial combinations, p. 432-492. In V. Lorian (ed.), Antibiotics in laboratory medicine. The Williams & Wilkins Co., Baltimore, MD.

7. Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (Методические указания МУК 4.2.1890-04).

8. EUCAST 2015 г. www.eucast.com

Антимикробная комбинация сочетанного применения карбапенемов и бисфосфонатов в отношении устойчивых к карбапенемам грамотрицательных бактерий вида Klebsiella pneumonia АТСС 70603, продуцирующих металло-β-лактамазу (МβЛ), выбранная из группы:

1. Имипенем и клодроновая кислота в весовом соотношении 1:1875;

2. Меропенем и клодроновая кислота в весовом соотношении 1:15000;

3. Имипенем и этидроновая кислота в весовом соотношении 1:50000;

4. Меропенем и этидроновая кислота в весовом соотношении 1:50000, что приводит к инактивации МβЛ.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к области медицины и фармацевтики и раскрывает противоопухолевый препарат в виде стабилизированной лекарственной формы, представляющей собой лиофилизат для приготовления раствора для парентерального введения и способ его получения, раствор для паретнтерального введения и его применение.

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой способ получения терапевтического состава и сам состав для лечения состояний с вовлечением моноцитов и/или макрофагов, где данный состав, содержащий множество липосом, получают следующим образом: (а) смешивание раствора, содержащего бисфосфонат, с раствором, содержащим липиды, содержащие DSPC, DSPG и холестерин в молярном отношении 3:1:2, с образованием везикул, таким образом, что массовое отношение указанного бисфосфоната к липиду составляет от 1:5 до 1:8, (b) экструзия указанных везикул в одну стадию через фильтр, имеющий размер пор 100 нм, и (с) ультрафильтрация везикул.

Изобретение относится к медицине. Описана композиция костного наполнителя, содержащая смесь отверждаемого костного наполнителя на основе фосфата кальция, который образуется из жидкого компонента и порошкового компонента на основе фосфата кальция, и композицию, содержащую бисфосфонат в виде частиц.

Изобретение относится к области медицины, в частности к клинической микробиологии, и описывает антимикробные комбинации сочетанного применения карбапенемов и бисфосфонатов в отношении устойчивых к карбапенемам грамотрицательных бактерий вида Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, продуцирующих металло-β-лактамазу.

Изобретение относится к области фармацевтической промышленности и касается стабильной шипучей композиции бисфосфонатного ингибитора резорбции кости в виде таблетки, не содержащей наполнители, которые могут вступать в реакцию с шипящим органическим кислотным компонентом.

Группа изобретений относится к фармакологии и терапии. Предложены: лекарственное средство, содержащее эффективное количество антагониста рецептора P2Y12 с обратимым действием кангрелора для лечения или предотвращения легочной гипертензии у субъекта; лекарственное средство на его основе для снижения смертности у субъекта с легочной гипертензией; лекарственное средство на его основе для ингибирования АДФ-опосредованной вазоконстрикции легочных артерий и способы получения указанных лекарственных средств (варианты).

Изобретение относится к медицине, и предназначено для лечения и профилактики токсической дисметаболической нефропатии у детей, проживающих в зоне влияния промышленных предприятий в условиях загрязнения атмосферного воздуха кадмием, свинцом, хромом и фенолом.

Изобретение относится к медицине и предназначено для лечения и профилактики гломерулярного и тубулоинтерстициального заболеваний почек у детей, проживающих в зоне влияния промышленных предприятий в условиях загрязнения атмосферного воздуха кадмием, свинцом, хромом и фенолом.

Изобретение относится к композиции, адаптированной для внутривенного введения, которая предназначена для лечения или профилактики патологических процессов кристаллизации и кальцификации у человека, подвергающегося диализу.
Настоящее изобретение относится к области фармацевтики и представляет собой фармацевтическую композицию для профилактики или лечения остеопороза, принимаемую один раз в месяц и содержащую: (a) холекальциферолсодержащие гранулы, в которых (i) холекальциферол в количестве, соответствующем 24000-50000 ME; (ii) один или более компонентов, выбранных из токоферола ацетата, бутилгидрокситолуола и бутилгидроксианизола, в качестве первого стабилизатора; и (iii) связующее адсорбированы на микрокристаллической целлюлозе, (b) маннит в качестве второго стабилизатора, и (c) ризедроновую кислоту или ее соль или ибандроновую кислоту или ее соль.

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой способ лечения Ph+ лейкемии у субъекта, включающий пероральное введение фармацевтической композиции ежедневно один раз в сутки, и саму фармацевтическую композицию в виде капсул, характеризующуюся следующим составом и соотношением компонентов, масс.%: Группа изобретений позволяет получить новую эффективную при лечении Ph+ лейкемии фармацевтическую композицию, обладающую оптимальными характеристиками стабильности и совместимости компонентов.

Изобретение относится к соединениям, характеризующимся структурной формулой I, в которых кольцо В представляет собой заместитель, выбранный из группы, содержащей 3-ОСН2СН3-4-ОН-фенил и 2-OH-4-Br-фенил, а также к применению указанных соединений, в которых кольцо В представляет собой заместитель, выбранный из группы, содержащей фенил, 4-Br-фенил, 4-NO2-фенил, 3-ОСН3-фенил, 1-нафтил, 2-нафтил, 4-Cl-фенил, 3-ОСН2СН3-4-ОН-фенил и 2-ОН-4-Br-фенил, в лечении рака.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой биологически активную композицию на основе трийодида 1,3-диалкилбензимидазолия общей формулы I, ,где R1 и R3=(C1-С6) алкил, R2=(C1-С6) алкил, водород, характеризующуюся тем, что включает нуклеофильное хелатообразующее средство при соотношении компонентов трийодид 1,3-диалкилбензимидазолия и хелатообразующее средство соответственно 1:1-60 мас./об.

Изобретение относится к соединению формулы I, или его фармацевтически приемлемой соли, также к фармацевтической композиции, способам лечения и модулирования, обусловленным воздействием на рецептор фолликулостимулирующего гормона.

Изобретение относится к соединениям, характеризующимся формулой XII, где значения Ra, Rb, R2, R7 и X определены в формуле изобретения, или к их фармацевтически приемлемой соли.

Изобретение относится к соединениям, характеризующимся формулой XII, где значения Ra, Rb, R2, R7 и X определены в формуле изобретения, или к их фармацевтически приемлемой соли.

Изобретение относится к соединениям, характеризующимся формулой XII, где значения Ra, Rb, R2, R7 и X определены в формуле изобретения, или к их фармацевтически приемлемой соли.

Изобретение относится к соединениям, характеризующимся формулой XII, где значения Ra, Rb, R2, R7 и X определены в формуле изобретения, или к их фармацевтически приемлемой соли.

Изобретение относится к медицине, в частности к фармацевтической композиции, содержащей валсартан и розувастатин кальция, применению композиции для получения препарата для профилактики или лечения сердечно-сосудистого заболевания и гиперлипидемического заболевания, к способу ее изготовления и способу профилактики или лечения сердечно-сосудистого заболевания и гиперлипидемического заболевания.

Группа изобретений относится к комбинации соединения А (R)-4-(6,7-дигидро-5Н-пирроло[1,2-c]имидазол-5-ил)-3-фторбензонитрила и аналога соматостатина пасиреотида, где активные вещества присутствуют в каждом случае в свободной форме, в форме комплекса или в форме фармацевтически приемлемой соли, способу лечения и применению комбинации для получения лекарственного средства для лечения синдрома Кушинга или болезни Кушинга.

Изобретение относится к соединению формулы [I], где n составляет 1 или 2, или к его соответствующим фармацевтически приемлемым солям. Изобретение также относится к соединениям, представленным формулами [II], [IIh] и [III]. Данные соединения являются ингибитором PDHK (PDHK1 и/или PDHK2). Описывается также фармацевтическое применение этих соединений. 10 н. и 5 з.п. ф-лы, 2 ил., 6 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности к клинической микробиологии, раскрывает антимикробную комбинацию сочетанного применения карбапенемов и бисфосфонатов в отношении устойчивых к карбапенемам грамотрицательных бактерий вида Klebsiella pneumoniae АТСС 70603, продуцирующих металло-β-лактамазу. Антимикробные комбинации характеризуются весовым соотношением компонентов, а именно комбинации имипенемклодроновая кислота, меропенемклодроновая кислота, имипенемэтидроновая кислота, меропенемэтидроновая кислота используются в соотношениях 1:1875, 1:15000, 1: 50000, 1: 50000 соответственно. Предложенное техническое решение позволяет моделировать получение штаммов грамотрицательных микроорганизмов с различным уровнем резистентности к карбапенемам и оценить эффективность ингибирования МβЛ и может быть использовано для преодоления устойчивости грамотрицательных бактерий вида Klebsiella pneumoniae, продуцирующих МβЛ, к карбапенемам. 5 табл.

Наверх